DE69632365T2

DE69632365T2 - HIV-Protease Inhibitoren

Info

Publication number: DE69632365T2
Application number: DE69632365T
Authority: DE
Inventors: Ryohei Toda-shi Kato; Tsutomu Toda-shi Mimoto; Tominaga Toda-shi Fukazawa; Naoko Toda-shi Morohashi; Yoshiaki Ibaraki-shi Kiso
Original assignee: Japan Energy Corp
Current assignee: Eneos Corp
Priority date: 1995-06-30
Filing date: 1996-06-28
Publication date: 2005-05-04
Anticipated expiration: 2016-06-29
Also published as: EP0751145B1; DK0751145T3; AU5628596A; EP0751145A2; NO962748L; EP0751145A3; CA2179935A1; US5932550A; AU705193B2; DE69632365D1; NO962748D0; ES2220963T3; CA2179935C; US5962640A; ATE266039T1; NO314730B1

Description

Bereich der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft eine neuartige Dipeptidverbindung mit einer Hemmwirkung gegen enzymatische Aktivität von Protease, die vom HIV-Virus abstammt. Im Spezielleren betrifft sie eine neuartige Dipeptidverbindung mit einer Acylgruppe einer monozyklischen Carbonsäureverbindung, die sich an eine N-terminale Aminogruppe des Dipeptids bindet.
Darüber hinaus betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Medikaments, das eine Hemmwirkung einer neuartigen Dipeptidverbindung gegen eine Protease nutzt, die vom HIV-Virus abstammt, und die Proliferation des HIV-Virus in vivo unterdrückt.
Hintergrund der Erfindung
Das humane Immundefizienzvirus (nachfolgend als HIV bezeichnet), das AIDS verursacht, erzeugt ein Gag-Protein umfassendes Vorläuferprotein, das zur Bildung der genannten Viruspartikel und Umkehrtranskriptase in Wirtszellen verwendet wird. Dieses Vorläuferprotein wird durch eine Protease (nachfolgend als HIV-Protease bezeichnet), die von dem Virus abstammt, in eine bestimmte Größe gespalten, um seine Funktion zu erfüllen. Folglich weist ein HIV-Protease-Inhibitor antivirale Aktivität auf, indem er eine enzymatische Aktivität von HIV-Protease hemmt, um die Entstehung und Reifung infektiöser Viruspartikel zu blockieren. Es wurde bereits über mehrere Arten von HIV-Protease-Inhibitoren berichtet, einschließlich einer synthetischen peptidartigen Verbindung, die als Übergangszustandsnachahmer bezeichnet wird (T. Robins, J. Plattner, J. Acquir. Immun. Defic. Syndr. 6, 162 (1993)). Es wurde berichtet, dass Hydroxyethylaminderivate wie Ro 31-8959, die ein Phenylala ninΨ[CH(OH)CH₂N]decahydroisochinolin-carbonsäuregerüst ähnlich der Aminosäuresequenz -Tyr...Pro- oder -Phe...Pro- als Spaltstelle der HIV-Protease umfassen (N. A. Roberts et al., Science 248, 358–361 (1990)), und Hydroxymethylcarboxamidderivate wie Peptidderivate, die ein Norstatingerüst-PhenylalaninΨ[CH(OH)C(O)N]prolin umfassen, als HIV-Protease-Inhibitor nützlich sind (T. F. Tam et al., Med. Chem. 35, 1318–1320 (1992)).
Die Autoren der vorliegenden Erfindung stellten außerdem fest, dass eine Gruppe synthetischer Peptide, die Übergangszustandsnachahmer waren und einen 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoylrest als ihre Gerüststruktur umfassten, HIV-Proteaseaktivität stark inhibierten und als Anti-AIDS-Mittel von Nutzen waren, und schlugen sie als HIV-Protease-Inhibitoren vor (japanische Offenlegungspatentschrift Nr. 170722/1993).
Diese Übergangszustandsnachahmer werden als die vielversprechendsten Anti-AIDS-Mittel der nächsten Generation nach Umkehrtranskriptase-Inhibitoren von Nucleinsäurederivaten, wie AZT (Azidthymidin), DDC (Didesoxycytidin), DDI (Didesoxyinosin), angesehen, die klinisch bereits als Anti-AIDS-Mittel eingesetzt werden, und klinische Anwendungen, klinische Tests und Untersuchungen sind bereits im Gange. Das heißt, man versucht, durch die klinische Anwendung von HIV-Protease-Inhibitoren, die Bildung von Viruspartikeln in der Wirtszelle zu unterdrücken und die Proliferation von und Infektion mit HIV zu verhindern, was dazu führt, dass der Ausbruch von AIDS verhindert wird (Nakajima et al., Gekkan-Yakuji, Bd. 35, 2983–2989 (1993)).
Unter diesen peptidartigen Verbindungen haben konventionelle Verbindungen, die zu Hydroxymethylcarboxamidderivaten gehören, die eine ausgezeichnete HIV-Protease-Hemmungsaktivität aufweisen, jedoch eine hydrophobe Acylgruppe an der N-terminalen Aminogruppe der Tripeptidkette. Oft wird daher über Probleme wie (1) ihre Unlöslichkeit in Wasser, (2) ihre Instabilität in vivo, (3) ihr geringes orales Absorptionsvermögen berichtet (Hiroaki Mitsuya, Kagaku, Bd. 64, Nr. 7, S. 462–470 (1994)). Da Anti-AIDS-Mittel fortlaufend über längere Zeiträume verabreicht werden, ist die Entwicklung einer Verbindung mit höherer Bioverfügbarkeit, d. h. leichte Absorptionsfähigkeit und In-vivo-Stabilität, insbesondere bei der oralen Verabreichung erwünscht. Erwünscht ist die Entwicklung einer Peptidverbindung mit ausgezeichneter HIV-Protease-Hemmungsaktivität und mit geringer relativer Molekülmasse und Beständigkeit gegen den Abbau durch verschiedene Arten von Verdauungsenzymen oder proteolytischen Enzymen. Im Spezielleren ist die Entwicklung einer neuartigen Peptidverbindung mit kleiner Acylgruppe, die an die N-terminale Aminogruppe gebunden ist, die eine Dipeptidstruktur mit nur geringer relativer Molekülmasse umfasst, als Übergangszustandsnachahmer gewünscht.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine neuartige Dipeptidverbindung bereitzustellen, die fast die gleiche Anti-HIV-Protease-Hemmungsaktivität hat wie eine Übergangszustandsnachahmungs-Peptidverbindung mit einer Tripeptidkette und die eine geringere relative Molekülmasse als diese hat. Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine neuartige Dipeptidverbindung bereitzustellen, die sich von verschiedenen Arten von Hydroxymethylcarboxamid-Tripeptidverbindungen, die als konventionelle HIV-Protease-Inhibitoren entwickelt wurden, hinsichtlich der Peptidkettenlänge unterscheiden und eine ausgezeichnete HIV-Protease-Hemmungsaktivität oder Unterdrückungswirkung gegen eine Proliferation des HIV-Virus aufweisen. Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein Mittel zur Unterdrückung der Proliferation des HIV-Virus bereitzustellen, das eine neuartige Dipeptidverbindung als Wirkstoff enthält.
Die Autoren der vorliegenden Erfindung haben intensive Untersuchungen durchgeführt, um eine neuartige Dipeptidverbindung zu entwickeln und herzustellen, deren Struktur sich eindeutig von der einer konventionellen Hydroxymethylcarboxamid-Peptidverbindung unterscheidet. Die Autoren der vorliegenden Erfindung untersuchten, ob diese entwickelten Dipeptidverbindungen eine HIV-Protease-Hemmungsaktivität aufwiesen oder nicht und fanden, dass sie ausgezeichnete Aktivitäten aufwiesen, so dass es zu der vorliegenden Erfindung kam.
Zusammenfassung der Erfindung
Demzufolge stellt die vorliegende Erfindung eine neuartige Dipeptidverbindung mit einer unter den folgenden Punkten (1)–(6) beschriebenen chemischen Struktur und einer Unterdrückungswirkung auf die In-vivo-Proliferation des HIV-Virus bereit.

(1) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel (I), oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel (I)
(wobei R₁ eine 5-gliedrige oder 6-gliedrige monozyklische Kohlenwasserstoffgruppe oder heterozyklische Gruppe repräsentiert, wobei mehr als ein Kohlenstoffatom des genannten monozyklischen Kohlenwasserstoffs durch Heteroatome substituiert sein kann, umfassend 3 oder weniger substituierte Gruppen in der genannten zyklischen Gruppe, X eine Methylengruppe (-CH₂-), Chlormethylengruppe (-CH(Cl)-), ein Sauerstoffatom, ein Schwefelatom oder eine Sulfonylgruppe (-SO₂-) repräsentiert, R₂₁ und R₂₂ jeweils ein Wasserstoffatom oder einen aliphatischen Kohlenwasser stoff mit 1–6 Kohlenstoffatomen repräsentieren, der linear oder verzweigt sein kann. R₃ repräsentiert eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann, oder eine einwertige Gruppe, die von aromatischem monozyklischem Kohlenwasserstoff abgeleitet ist, wobei die Summe der Kohlenstoffzahl 12 oder weniger beträgt und Halogenatome im aromatischen Ring der genannten aromatischen monozyklischen Kohlenwasserstoffgruppe substituiert sein können.)
(2) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel II, oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel II
(wobei X, R₂₁, R₂₂ und R₃ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie in der obigen allgemeinen Formel (I). R₁₁ repräsentiert ein Wasserstoffatom, eine Aminogruppe oder eine Hydroxylgruppe. R₁₂ repräsentiert ein Wasserstoffatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann.)
(3) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel (III), oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel III
(wobei X, R₂₁ und R₂₂ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie in der obigen allgemeinen Formel (I) und R₁₁ und R₁₂ dieselbe Gruppe wie in der obigen allgemeinen Formel (II) repräsentieren.)
(4) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel (IV), oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel IV
(wobei X, R₂₁ und R₂₂ dieselbe Gruppe repräsentieren wie in der obigen allgemeinen Formel (I) und R₁₁ und R₁₂ dieselbe Gruppe repräsentieren wie in der obigen allgemeinen Formel (II). R₃₁, R₃₂ und R₃₃ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder einen aliphatischen Kohlenwasserstoff mit 1–4 Kohlenstoffatomen, der linear oder verzweigt sein kann.)
(5) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel V, oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel V
(wobei R₁₁ eine Aminogruppe oder eine Hydroxylgruppe repräsentiert. R₁₂ repräsentiert eine Methylgruppe oder Ethylgruppe. R₂₁ und R₂₂ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe.)
(6) Eine neuartige Dipeptidverbindung, repräsentiert durch die allgemeine Formel VI, oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon. Allgemeine Formel VI
(wobei R₁₁ eine Aminogruppe oder eine Hydroxylgruppe repräsentiert. R₁₂ repräsentiert ein Wasserstoffatom, eine Methylgruppe oder eine Ethylgruppe. R₂₁ und R₂₂ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe. R₃₁, R₃₂ und R₃₃ repräsentieren jeweils ein Halogenatom oder eine Methylgruppe.)

Ferner stellt die vorliegende Erfindung ein Anti-AIDS-Mittel bereit, das die unter den obigen Punkten (1)–(6) beschriebene neuartige Dipeptidverbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon als Wirkstoff enthält.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung und bevorzugter Ausgestaltungen
Die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung umfasst α-Aminocarboxamid mit einer zyklischen Gruppe, die an einen 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-Rest als Übergangszustandsnachahmer, der für eine HIV-Protease-Hemmungsaktivität wesentlich ist, durch eine Amidbindung gebunden ist und als Hydroxymethylcarboxamidderivat bezeichnet werden kann. In der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung ist die sterische Konfiguration des Gerüsts des 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-Rests vorzugsweise ein (2S,3S) Epimer und im α-Aminocarboxamid, das eine 5-gliedrige zyklische Gruppe mit X umfasst, kann vorzugsweise ein (L) Epimer der entsprechenden zyklischen α-Aminosäure verwendet werden.
R₃, das die N-Atom-Carbamoylgruppe des genannten α-Aminocarboxamids substituiert, kann eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen oder eine einwertige Gruppe sein, die von einem aromatischen monozyklischen Kohlenwasserstoff mit 12 oder weniger Kohlenstoffatomen abgeleitet ist, wobei eine Kohlenwasserstoffkette in einer aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppe oder die in einer aromatischen Kohlenwasserstoffgruppe linear oder verzweigt sein kann. Die genannte einwertige Gruppe, die von einem aromatischen monozyklischen Kohlenwasserstoff abgeleitet ist, umfasst sowohl eine Gruppe mit einer Bindungsstelle in einem aromatischen monozyklischen Ring als auch eine Gruppe mit einer Bindungsstelle in einer aromatischen Seitenkette. Darüber hinaus kann ein Halogenatom einen Wasserstoff auf einem aromatischen zyklischen Kohlenwasserstoff substituieren. Das heißt, die genannte substituierte Carbamoylgruppe kann verwendet werden, solange sie durch die Reaktion der entsprechenden Carboxygruppe mit dem Primäramin, das die genannte R₃-Gruppe umfasst, gebildet werden kann.
Eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, die in dieser R₃-Gruppe verwendet wird, kann vorzugsweise eine Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, sec-Butyl-, tert-Butyl-, Pentyl-, Hexylgruppe usw., bevorzugter eine verzweigte Alkylgruppe mit 3–5 Kohlenstoffatomen und am meisten bevorzugt eine tert-Butylgruppe sein. Als aromatische monozyklische Kohlenwasserstoffgruppe mit 12 oder weniger Kohlenstoffatomen können andererseits eine Phenylgruppe mit einer freien Valenz auf dem Ring, eine kohlenwasserstoffsubstituierte Phenylgruppe mit einer Seitenkette einer Kettenkohlenwasserstoffgruppe, eine Benzylgruppe mit einer freien Valenz in der Seitenkette und eine kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe mit einer Seitenkette im Ring, wie die 2-Methylbenzylgruppe, 2,6-Dimethylbenzylgruppe und 2,4,6-Trimethylbenzylgruppe, genannt werden. Ferner können als Halogenatom ein Chloratom, Bromatom oder Fluoratom genannt werden, wobei ein Chloratom bevorzugt wird. Von diesen aromatischen monozyklischen Kohlenwasserstoffgruppen werden eine Benzyl- oder Phenethylgruppe mit einer freien Valenz in der Seitenkette oder eine kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe mit einer Seitenkette im Ring bevorzugt, wobei eine kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe mit einer Seitenkette im Ring stärker bevorzugt wird. Ferner wird eine Benzylgruppe oder eine kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe mit einer Seitenkette an irgendeiner ortho-Position, wie Position 2 oder 6, oder para-Posi tion, d. h. Position 4, insbesondere die 2-Methylbenzylgruppe, 2,6-Dimethylbenzylgruppe oder 2,4,6-Trimethylbenzylgruppe stärker bevorzugt.
In einer kohlenwasserstoffsubstituierten Benzylgruppe mit einer Seitenkette an einer der Positionen 2, 4 oder 6 sowie den obigen Benzylgruppen ist eine Seitenkette vorzugsweise eine Alkylgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen. Die 2-Methylbenzylgruppe, 2,6-Methylbenzylgruppe oder 2,4,6-Trimethylbenzylgruppe wird stärker bevorzugt. Von diesen wird die mono- oder disubstituierte Benzylgruppe mit einer oder zwei Alkylgruppen mit 1–4 Kohlenstoffatomen, insbesondere die Methylgruppe, an der ortho-Position, d. h. Position 2 oder 6 an der Seitenkette bevorzugt. Insbesondere wird die 2-Methylbenzylgruppe oder 2,6-Dimethylbenzylgruppe stärker bevorzugt. Darüber hinaus wird eine halogensubstituierte Benzylgruppe an der ortho-Position, d. h. Position 2 oder 6, oder an der para-Position, d. h. Position 4, bevorzugt, wobei die chlorsubstituierte 2-Chlorbenzylgruppe von halogensubstituierten Benzylgruppen stärker bevorzugt wird. Insbesondere wird die Monohalogen- oder Dihalogen-substituierte Benzylgruppe an einer oder beiden ortho-Positionen, d. h. Position 2 und 6, insbesondere die 2-Chlorbenzylgruppe, substituiert durch ein Chloratom als Halogenatom stärker bevorzugt.
Das X in einem 5-gliedrigen Ring, der das genannte α-Aminocarboxamid bildet, kann eine Methylengruppe (-CH₂-), Chlormethylengruppe (-CH(Cl)-), ein Sauerstoffatom oder Schwefelatom sein, einschließlich einer Sulfinylgruppe oder Sulfonylgruppe, mit Ausnahme einer Thiogruppe. Das heißt, wenn sowohl R₂₁ als auch R₂₂ Wasserstoffatome sind, dann ist eine entsprechende α-Aminosäure in einem 5-gliedrigen Ring Prolin im Falle einer Methylengruppe (-CH₂), 4-Chlorpyrrolidin-2-carbonsäure im Falle einer Chlormethylengruppe, 1,3-Oxazolidin-4-carbonsäure im Falle eines Sauerstoffatoms, 1,3-Thiazolidin-4-carbonsäure im Falle eines Schwefelatoms, 1,3-Thiazolidin-1,1-dioxid-4-carbonsäure im Falle ei ner Sulfonylgruppe, usw. R₂₁ und R₂₂ in dem genannten 5-gliedrigen Ring können ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus einem Wasserstoffatom und aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen mit 1–6 Kohlenstoffatomen, wobei die aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe linear oder verzweigt sein kann. R₂₁ und R₂₂ jeder Gruppe ist vorzugsweise ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen, bevorzugter ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe.
1,3-Thiazolidin-4-carbonsäure mit einem Schwefelatom als X, 1,3-Thiazolidin-1,1-dioxid-4-carbonsäure mit einer Sulfonylgruppe, 4-Chlorpyrrolidin-2-carbonsäure mit einer Chlormethylgruppe oder 5,5-Dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carbonsäure mit einem Wasserstoffatom oder einer Methylgruppe als R₂₁ und R₂₂ wird stärker bevorzugt. Die genannte Mono-Ring-R₁-Gruppe in einer Acylgruppe R₁-CO-, die die N-terminale Aminogruppe im 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoylgerüst substituiert und die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung kennzeichnet, kann ein 5-gliedriger Ring, 6-gliedriger Ring, eine zyklische Kohlenwasserstoffgruppe oder eine heterozyklische Gruppe sein, wobei mehr als ein Kohlenstoffatom in der genannten zyklischen Kohlenwasserstoffgruppe durch Heteroatome substituiert sein können. Das genannte Heteroatom bedeutet ein Stickstoffatom, Schwefelatom oder Sauerstoffatom, und das Schwefelatom kann eine Sulfinylgruppe oder Sulfonylgruppe, mit Ausnahme einer Thiogruppe, sein. Des Weiteren kann eine Carbonylgruppe, bei der eines der Kohlenstoffatome durch Oxosauerstoff substituiert ist, eingeschlossen sein.
Darüber hinaus kann die genannte zyklische Gruppe R₁ 3 oder weniger andere substituierte Gruppen haben. Die genannte zyklische Gruppe R₁ kann wie folgt exemplifiziert werden:
als 6-gliedriger Ring der genannten zyklischen Gruppe R₁ können eine Phenylgruppe als zyklische aromatische Gruppe, 4-Pyridylgruppe, 2-Pyridylgruppe, 3-Pyridylgruppe, 2-Pyrimidinylgruppe, 4-Pyrimidinylgruppe, 5-Pyrimidinylgruppe als eine ent sprechende stickstoffsubstituierte heteroaromatische Gruppe, Cyclohexylgruppe als eine cycloaliphatische Gruppe, 4-Piperidinylgruppe oder 2-Morpholinylgruppe als entsprechende heterozyklische und zyklische Gruppe des obigen 6-gliedrigen Rings, substituiert durch 3 oder weniger substituierte Gruppen, wie z. B. eine Alkylgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, Carboxylgruppe, Carbamoylgruppe, Hydroxylgruppe, Aminogruppe, Nitrogruppe, Alkylaminogruppe oder Alkoxycarbonylgruppe usw. genannt werden. Als spezifische Beispiele sind eine Tolylgruppe, Xylylgruppe, Cumenylgruppe oder Mesitylgruppe als Phenylgruppe, die durch 1–3 Alkylgruppen mit 1–6 Kohlenstoffatomen substituiert ist, 4-Carboxyphenylgruppe, 2-Carboxyphenylgruppe oder 3-Carboxyphenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Carboxylgruppe substituiert ist, 4-Carbamoylphenylgruppe, 2-Carbamoylphenylgruppe oder 3-Carbamoylphenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Carbamoylgruppe substituiert ist, 4-Hydroxyphenylgruppe, 2-Hydroxyphenylgruppe, 3-Hydroxyphenylgruppe, 3-Hydroxy-2-methylphenylgruppe oder 2-Ethyl-3-hydroxyphenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Hydroxylgruppe substituiert ist, 4-Aminophenylgruppe, 2-Aminophenylgruppe oder 3-Aminophenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Aminogruppe substituiert ist, 3,5-Dinitrophenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Nitrogruppe substituiert ist, 3-Methylaminophenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Alkylamingruppe substituiert ist, 4-Methoxycarbonylphenylgruppe, 2-Methoxycarbonylphenylgruppe oder 3-Methoxycarbonylphenylgruppe als Phenylgruppe, die durch eine Alkoxycarbonylgruppe substituiert ist, usw. zu nennen.
Als 5-gliedriger Ring der genannten zyklischen Gruppe R₁ können eine heterozyklische aromatische Gruppe wie eine 2-Furylgruppe, 3-Furylgruppe, 2-Thienylgruppe, 2-Pyrrolyl, 3-Pyrrolyl usw. oder eine zyklische aliphatische Gruppe wie eine Cyclopentylgruppe, 2-Cyclopenten-1-yl-Gruppe usw., die entsprechende heterozyklische Gruppe wie eine Pyrrolidin-2-yl-Gruppe, Pyrrolin- 2-yl-Gruppe, 2-Tetrahydrofurylgruppe, 2-Tetrahydrothienylgruppe usw. oder eine zyklische Gruppe des obigen 5-gliedrigen Rings, substituiert durch 3 oder weniger substituierte Gruppen, wie eine Alkylgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, Carboxygruppe, Carbamoylgruppe, Hydroxygruppe, Aminogruppe, Nitrogruppe, Alkylaminogruppe, Alkoxycarbonylgruppe usw. genannt werden.
Die genannte zyklische Gruppe R₁ in den erfindungsgemäßen Peptidverbindungen ist vorzugsweise eine zyklische aromatische Gruppe oder eine heterozyklische aromatische Gruppe mit 3 oder weniger substituierten Gruppen. Eine zyklische aromatische Gruppe mit 6-gliedrigem Ring oder eine heterozyklische aromatische Gruppe wird stärker bevorzugt. Von diesen wird eine Phenylgruppe, die durch 1 oder 2 substituierte Gruppen an Position 2 und Position 3 in der Phenylgruppe substituiert ist, stärker bevorzugt, im Speziellen wird eine disubstituierte Phenylgruppe, die durch die folgende allgemeine Formel (VII) repräsentiert ist, stärker bevorzugt: Allgemeine Formel VII
(wobei R₁₁ eine Aminogruppe oder Hydroxylgruppe repräsentiert, R₁₂ eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen repräsentiert, die linear oder verzweigt sein kann). Ferner sind R₁₁ in der disubstituierten Phenylgruppe und R₁₂ bevorzugter eine Hydroxylgruppe und Methylgruppe oder Ethylgruppe.
Werden wenigstens zwei von R₁, R₂ und X der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung aus bevorzugten Gruppen ausgewählt, dann kann sie eine bevorzugtere Dipeptidverbindung sein. Zum Beispiel kann ein Dipeptid, das durch eine disubstituierte Phenylgruppe, repräsentiert durch die obige allgemeine Formel (VII), zu R₁ und durch eine tert-Butylgruppe zu R₃ substituiert ist, d. h. das durch die folgende allgemeine Formel (III) repräsentierte Dipeptid, stärker bevorzugt werden: Allgemeine Formel III
(wobei X dasselbe wie X in der allgemeinen Formel (I) repräsentiert. R₁₁ repräsentiert eine Aminogruppe oder Hydroxylgruppe und R₁₂ repräsentiert eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann. R₂₁ und R₂₂ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann.)
Oder es kann ein Dipeptid, bei dem R₁ eine disubstituierte Phenylgruppe ist, repräsentiert durch die obige allgemeine Formel (VII), und R₃ eine kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe mit einer Seitenkette an einer beliebigen ortho-Position, d. h. Position 2 oder 6, oder an einer para-Position, d. h. Position 4, oder eine Benzylgruppe oder kohlenwasserstoffsubstituierte Benzylgruppe ist, die ferner durch ein Halogenatom an einer ortho-Position, d. h. Position 2 oder 6, oder an para-Position 4 substituiert ist, repräsentiert durch die folgende allgemeine Formel (VIII), wobei die kohlenstoffsubstituierte Benzylgruppe höchstens 12 Kohlenstoffatome hat, bevorzugt werden: Allgemeine Formel VIII
(wobei R₃₁, R₃₂ und R₃₃ jeweils ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen repräsentieren, die linear oder verzweigt sein kann.)
Das heißt, die durch die folgende allgemeine Formel (IV) repräsentierte Dipeptidverbindung kann stärker bevorzugt sein. Ein Chloratom wird als Halogenatom stärker bevorzugt. Allgemeine Formel IV
(wobei X dasselbe wie X in der obigen allgemeinen Formel (I) repräsentiert. R₁₁ repräsentiert eine Aminogruppe oder Hydroxylgruppe und R₁₂ repräsentiert eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann.
R₂₁ und R₂₂ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann. R₃₁, R₃₂ und R₃₃ repräsentieren jeweils ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen, die linear oder verzweigt sein kann.) Als Halogenatom kann bevorzugter ein Chloratom ausgewählt werden. In der zuvor erwähnten allgemeinen Formel (IV) kann bevorzugter eine monosubstituierte oder disubstituierte Benzylgruppe an einer oder beiden ortho-Positionen, d. h. Position 2 und 6, als substituierte Gruppe am C-Terminus ausgewählt werden.
Das durch die zuvor erwähnte allgemeine Formel (V) oder (VI) repräsentierte Dipeptid, das aus solchen mit bevorzugtem X ausgewählt wird, repräsentiert durch die obige allgemeine Formel (III) oder (IV), wird stärker bevorzugt. Als ein Beispiel für diese Verbindungen in der allgemeinen Formel (V) oder (VI) können die Folgenden genannt werden:
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-ethyl-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-ethylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-ethyl-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-ethylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-ethyl-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-ethylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-ethyl-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-ethylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(2S,4S)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-4-chlorpyrrolidin-2-carboxamid,
(R)-N-(2,6-Dimethylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Chlorbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid,
(R)-N-(2-Chlorbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid, usw.
Pharmazeutisch akzeptable Salze der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung umfassen zum Beispiel einen 5–7-gliedrigen Ring der R₁ Gruppe in der genannten Verbindung, eine substituierte Gruppe darin, oder im Falle eines anderen 5–7-gliedrigen Rings mit Basisstickstoff, Salze des genannten Stickstoffs mit verschiedenen pharmazeutisch akzeptablen Säuren, insbesondere pharmazeutisch akzeptable Salze wie Hydrochloridsalz, Essigsäuresalz, Methansulfonsäuresalz usw. Pharmazeutisch akzeptable Salze umfassen außerdem Salze einwertiger Kationen mit substituierter Carboxylgruppe oder Phenolhydroxylgruppe in der R₁ Gruppe, insbesondere Natriumsalz oder Ammoniumsalz, usw.
Eine Gruppe von Dipeptidverbindungen, die in der obigen allgemeinen Formel (I) repräsentiert sind, kann mit der nachfolgend beschriebenen Herstellungsmethode hergestellt werden. Es wird der N-Acylierungsprozess zusammengefasst. Eine durch die allgemeine Formel (IX) repräsentierte Verbindung, d. h. ein Hydroxymethylcarboxamiddipeptid ohne Substitution am N-Terminal kann als Intermediat verwendet werden, um schließlich das N-Acylprodukt zu gewinnen. Allgemeine Formel IX
(wobei X, R₃, R₂₁ und R₂₂ jeweils dasselbe wie X, R₃, R₂₁ und R₂₂ in der obigen Formel (I) repräsentieren).
Ein Verfahren zur Herstellung der in der allgemeinen Formel (I) repräsentierten N-Acyl-Dipeptidverbindung.
Prozess [1] Herstellung der in der allgemeinen Formel (IX) repräsentierten Zwischenverbindung.
Sie entspricht dem Intermediat in der Herstellung des HIV-Protease-Inhibitors des Hydroxymethylcarboxamidtyps, über den bereits in verschiedenen Publikationen berichtet wurde (Yoshiaki Kiso, Yuuki-gosei-kyoukaishi, Bd. 52, 403–412 (1994) usw.). Zum Beispiel, Kondensierung des durch die folgende allgemeine Formel (X) repräsentierten α-Aminocarboxamidderivats: Allgemeine Formel X
(wobei X, R₃, R₂₁ und R₂₂ dasselbe wie X, R₃, R₂₁ und R₂₂ in der zuvor erwähnten allgemeinen Formel (I) repräsentieren) mit einer N-geschützten Derivat-(2S,3S)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbuttersäure, die durch die folgende allgemeine Formel (XI) repräsentiert ist: Allgemeine Formel XI
(wobei B eine Schutzgruppe der Aminogruppe repräsentiert, die mit Säure entschützt werden kann).
Durch die Verwendung von Carbodiimid-Reagenzien wie DCC(N,N-Dicyclohexylcarbodiimid), EDC(1-Ethyl-3-(3-N,N-dimethyl-aminopropyl)carbodiimid, usw. und einer Additionsverbindung wie HONB(N-Hydroxynorbornen-2,3-dicarboxyimid), HOBt(N-Hydroxybenztriazol) zur Bildung einer Peptidbindung werden die N-geschützten Dipeptid-Derivate, repräsentiert durch die allgemeine Formel (XII), erhalten: Allgemeine Formel XII
(wobei B dasselbe wie B in der allgemeinen Formel (XI) repräsentiert und X, R₃, R₂₁ und R₂₂ jeweils dasselbe wie X, R₃, R₂₁ und R₂₂ in der allgemeinen Formel (I) repräsentieren).
Im nächsten Schritt kann das genannte N-geschützte Dipeptid mit Säure, wie zum Beispiel Chlorwasserstoffsäure in Dioxan, entschützt werden, um ein Intermediat vom Hydroxymethylcarboxamiddipeptid zu erhalten, repräsentiert durch die allgemeine Formel (IX). Als Schutzgruppe einer Aminogruppe ist B vorzugsweise eine Schutzgruppe, die in der Peptidsynthese häufig zum Schutz der α-Aminogruppe eingesetzt wird, wie z. B. eine tert-Butyloxycarbonylgruppe. Prozess [2] N-Acylierung Reaktion von Carbonsäure, repräsentiert durch die allgemeine Formel (XIII) Allgemeine Formel XIII
(wobei R₁ dasselbe wie R₁ in der zuvor erwähnten allgemeinen Formel (I) repräsentiert).
Mit einem Carbodiimid-Reagens wie EDC und einer Additionsverbindung wie HOBt, um einen aktiven Ester der genannten Carbonsäure zu erhalten, oder mit Säurechlorid von Chlorameisensäureester wie Isobutylchlorameisensäureester usw., um ein Mischsäureanhydrid zu erhalten. Das heißt, die genannte Carbonsäure wird zuerst in voraktivierte Derivate umgewandelt, die durch die folgende allgemeine Formel (XIV) repräsentiert sind, wobei Y von der genannten Additionsverbindung oder dem Säurechlorid stammt: Allgemeine Formel XIV
(wobei R₁ dasselbe wie R₁ in der zuvor erwähnten allgemeinen Formel (I) repräsentiert.)
Durch die Reaktion des genannten Carbonsäurederivats, repräsentiert durch die allgemeine Formel (XI), mit einem Intermediat, das durch die zuvor erwähnte allgemeine Formel (XIV) repräsentiert ist, in einem Lösungsmittel wie N,N-Dimethylformamid usw. wird das gewünschte acylierte Hydroxymethylcarboxamidderivat erhalten, das durch die allgemeine Formel (I) repräsentiert ist.
Wird ein Carbodiimidreagens verwendet, dann können die Aktivierung der genannten Carbonsäure und ihre N-Acylierung natürlich in demselben Reaktionsgemisch zur selben Zeit stattfinden. Kommt es bei einer N-Acylierung unter Verwendung dieser Säureanhydride zu unnötigen Nebenreaktionen auf der in der R₁-Gruppe vorliegenden substituierten Gruppe, wie der Aminogruppe, Hydroxylgruppe, Carboxylgruppe, usw., dann kann die Reaktion selbstverständlich nach dem Schutz mit einer häufig verwendeten Schutzgruppe stattfinden, woraufhin eine Schutzaufhebung folgt.
Das gemäß dem obigen Prozess hergestellte Hydroxymethylcarboxamidderivat, das durch die allgemeine Formel (I) repräsentiert ist, kann bei Bedarf durch Rekristallisation und/oder Säulenchromatographie usw. gereinigt und als HIV-Protease-Inhibitor verwendet werden.
Da die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung von einem Intermediat, das durch die allgemeine Formel (IX) repräsentiert ist, und einem aktivierten Carbonsäurederivat, das durch die allgemeine Formel (XIV) repräsentiert ist, hergestellt wird, ist eine Identifizierung ihrer Molekülstruktur ohne weiteres durch konventionelle Spektrofotometrie wie kernmagnetische Resonanz und/oder Infrarotabsorptionsspektrometrie und/oder durch eine konventionelle Fragmentanalyse der Massenspektroskopie möglich, die sich auf die Molekülstruktur des ursprünglichen Rohstoffs bezieht.
Die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung umfasst α-Aminocarboxamid mit einer zyklischen Gruppe, die durch eine Amidbindung an den 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-Rest als Übergangszustandsnachahmer gebunden ist, der für eine HIV-Protease-Inhibitionsaktivität wesentlich ist, und kann als Hydroxymethylcarboxamidderivat bezeichnet werden, über das bereits berichtet wurde, und kann ein HIV-Protease-Inhibitor wie die Tripeptidverbindung sein. Wie später in dem Beispiel beschrieben wird, bedeutet dies, dass die Verbindung eine antivirale Aktivität aufweist, indem sie die Bildung und Reifung infektiöser HIV-Viruspartikel in T-Lymphozyten unter Anwendung ihrer HIV-Protease-Inhibitionsaktivität blockiert. Demzufolge ist sie aufgrund ihres Unterdrückungs effekts auf die Bildung und Reifung infektiöser Viruspartikel in der Medizin als Anti-AIDS-Mittel einsetzbar.
Im Rahmen der klinischen Anwendung der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung kann diese gemäß konventionellen Methoden als Pharmazeutikum unter Verwendung konventioneller Träger und Füllstoffe verabreicht werden. Im Allgemeinen kann die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung intravenös oder intramuskulär als Injektionspräparat, parenteral als Spray oder Suppositorium oder oral als Körnchen, Kapseln oder Tabletten gemäß konventionellen Methoden verabreicht werden. Die Bioverfügbarkeit der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung ist durch den Verdauungstrakt ausgezeichnet, so dass eine orale Verabreichung als Körnchen oder Kapseln, in denen die genannte Verbindung als Feststoff vorliegt, sehr geeignet ist. Die Verabreichungsdosis wird unter Berücksichtigung der Symptome des Patienten, dem therapeutischen Ziel, wie z. B. Verhindern des Ausbruchs von AIDS oder Unterdrücken des Fortschreitens von AIDS, dem Alter, Geschlecht usw. festgelegt und liegt für eine erwachsene Person gewöhnlich bei 10 mg bis 1 g, die 1 bis 4 Mal pro Tag verabreicht werden. Als orales Verabreichungspräparat kann jedes beliebige pharmazeutische Präparat verwendet werden, das für eine orale Verabreichung verschiedener synthetischer Peptide geeignet ist, die bereits als HIV-Protease-Inhibitoren vorgeschlagen wurden (ungeprüfte japanische Offenlegungspatentschrift Nr. 170722/1993, usw.).
Die erfindungsgemäße neuartige Dipeptidverbindung und ihr pharmazeutisch akzeptables Salz ist aufgrund ihrer guten Absorption durch den Verdauungstrakt und einer verringerten Gallenexkretion infolge ihrer Dipeptidylstruktur von geringerer relativer Molekülmasse, bei der sich die Acylgruppe direkt an die N-terminale Aminogruppe des Teils des Dipeptidgerüsts bindet, das für die HIV-Protease-Hemmungsaktivität wesentlich ist, sowie aufgrund ihrer spezifischen und hohen HIV-Protease-Hemmungsaktivität von Vorteil. Demzufolge kann mit ihr vorteilhaft die orale Dosis ge senkt werden, die notwendig ist, um das erwartete Blutkonzentrationsniveau der genannten peptidartigen Verbindung als Wirkstoff zu erreichen, um eine pharmazeutische Wirkung nach ihrer klinischen Anwendung als orales Anti-AIDS-Mittel zu erzielen. Weiterhin ist die erfindungsgemäße Peptidverbindung nicht nur eine Verbindung von geringer relativer Molekülmasse, sondern auch eine Peptidnachahmungsverbindung, ohne Peptidbindung natürlicher Aminosäuren, deren In-vivo-Stabilität ausgezeichnet ist. Das erfindungsgemäße Dipeptid und sein Verfahren werden im Folgenden ausführlicher erläutert. Zusätzlich werden auch die Merkmale der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung beschrieben, die für eine medizinische Anwendung geeignet sind, wie z. B. die hohe HIV-Protease-Hemmungsaktivität, d. h. die ausgezeichnete Anti-HIV-Aktivität, und geringe Zytotoxizität.
In den nachfolgend beschriebenen Beispielen wurden Intermediate wie (2S,3S)-H-AHPBA-Pro-NH-tBu(1-[(2S,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-N'-tert-butyl-L-prolinamid), (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu((R)-3-[(2S,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-N'-tert-butylcarboxamid), (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NH-tBu((R)3-[(2S,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-N'-tert-butylcarboxamid von (2S,3S)-H-AHPBA((2S,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbuttersäure, Pro(L-Prolin), Thz((R)-1,3-thiazolidin-4-carbonsäure), Dmt ((R)-5,5-Dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carbonsäure), NH₂-tBu (tert-Butylamin) usw. als N-geschützte Derivate des genannten Dipeptids zuvor gemäß Verfahren hergestellt, über die in Publikationen bereits berichtet wurde, und anschließend die Aminogruppe entschützt.
1. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[benzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Benzoesäure (122 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (1 Ethyl-3-(3-N,N-dimethylaminopropyl) carbodiimidhydrochloridsalz (192 mg) und HOBt·H₂O (N-Hydroxybenzotriazol/153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das Produkt wurde gereinigt und mit dem nachfolgend beschriebenen Verfahren aus dem erhaltenen Rest gewonnen. Der erhaltene Rest wurde in 25 ml Ethylacetat gelöst, nacheinander mit 10% wässriger Zitronensäurelösung, 5% wässriger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Der durch Konzentration unter reduziertem Druck erhaltene Rest wurde durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/Methanol) und anschließend durch Rekristallisation von Ethylacetat/n-Hexan gereinigt, um die oben erwähnte Verbindung gereinigt zu erhalten (296 mg). Die HPLC-Retentionszeit der genannten Verbindung unter den nachfolgend beschriebenen Bedingungen betrug 19,55 min. und die relative Molekülmasse lag im Rahmen einer Flugzeit-Massenspektrometrie bei 469, so dass sie als die gewünschte Verbindung identifiziert wurde.
HPLC-Retentionszeit: 19,55 min.
HPLC-Bedingungen
Säule: YMC AM302 Säule, ∅ 4,6 × 150 mm
Elutionsvehikel: 0,1% TFA (Trifluoressigsäure)/H₂O-CH₃CN
Elutionsbedingungen: 0%–100%, Gradient: 30 min.
Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min.
TOF-MASS (Flugzeit-Massenspektrometrie): [M + H] + 470
2. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und o-Toluylsäure (136 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben erwähnte Produkt (295 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,95 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 484
3. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und M-Toluylsäure (136 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben genannte Produkt (406 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,36 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 484
4. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[4-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und p-Toluylsäure (136 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben erwähnte Produkt (406 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,27 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 484
5. Beispiel
(R)-N-tert-butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Salicylsäure (138 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben genannte Produkt (202 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 23,89 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 486
6. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und m-Hydroxybenzoesäure (138 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben genannte Produkt (418 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,69 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 486
7. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[4-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und p-Hydroxybenzoesäure (138 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Das oben genannte Produkt (392 mg) wurde durch die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel beschrieben erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,35 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 486
8. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-aminobenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg), 2-(t-Butyloxycarbonylamino)benzoesäure (237 mg) und HOBt (135 mg) in DMF (3 ml) wurde EDC·HCl (210 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Dem Reaktionsgemisch wurden Dichlormethan und 3% wässrige Natriumcarbonatlösung beigemischt und die organische Lage wurde aufgenommen. Anschließend wurde die t-Butyloxycarbonylgruppe entschützt und das Produkt wurde wie nachfolgend beschrieben gewonnen. Die aufgenommene organische Lage wurde nacheinander mit 3% wässriger Natriumcarbonatlösung, 1 N-HCl (zweimal) und 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Lösungsmittel verdampft. Zu dem Rest wurden Dichlormethan (5 ml) und 4 N HCl/Dioxanlösung (5 ml) gegeben und eine weitere Stunde bei Raumtemperatur verrührt.
Das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser, 3% wässriger Natriumcarbonatlösung, 5% Salzlake gewaschen, über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und wieder unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/Methanol) gereinigt. Es wurde das oben genannte Produkt (184 mg) erhalten. Durch Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
TOF-MASS: [M + H]+ 485
9. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-aminobenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg), 3-(t-Butyloxycarbonylamino)benzoesäure (237 mg) und HOBt (135 mg) in DMF (3 ml) wurde EDC·HCl (210 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Dem Reaktionsgemisch wurden Dichlormethan und 3% wässrige Natriumcarbonatlösung beigemischt und die organische Lage wurde aufgenommen. Anschließend wurden eine Schutzaufhebung der t-Butyloxycarbonylgruppe und Reinigung in der gleichen Weise wie im 8. Beispiel beschrieben durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (74 mg) erhalten. Durch Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
TOF-MASS: [M + H]+ 485
10. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[4-aminobenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg), 4-(t-Butyloxycarbonylamino)benzoesäure (237 mg) und HOBt (135 mg) in DMF (3 ml) wurde EDC·HCl (210 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Dem Reaktionsgemisch wurden Dichlormethan und 3% wässrige Natriumcarbonatlösung beigemischt und die organische Lage aufgenommen. Die aufgenommene organische Lage wurde nacheinander mit 3% wässriger Natriumcarbonatlösung, 1 N-HCl (zweimal) und 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Lösungsmittel verdampft. Zu dem Rest wurden Dichlormethan (5 ml) und 4 N HCl/Dioxanlösung (5 ml) gegeben und eine Stunde lang bei Raumtemperatur verrührt. Anschließend wurde zum Reaktionsgemisch Wasser gegeben und die Wasserlage wurde aufgenommen, um das entschützte Produkt zu gewinnen. Die Wasserlage wurde durch die Zugabe von Natriumcarbonat auf einen pH-Wert von 8–9 eingestellt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Lage wurde mit 5% Salzlake gewaschen, über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und wieder unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Dichlor methan/Methanol) und anschließender Rekristallisation von Ethylactat/n-Hexan gereinigt. Es wurde das oben genannte Produkt. (330 mg) erhalten. Durch Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
TOF-MASS: [M + H]+ 485
11. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-carboxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Phthalsäureanhydrid (146 mg) in DMF (3 ml) wurde Pyridin (0,5 ml) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte. Der erhaltene Rest wurde in Ethylacetat (25 ml) gelöst. Diese Lösung wurde mit 10% wässriger Zitronensäurelösung und gesättigter Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und anschließend unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/Methanol) und anschließender Rekristallisation von Ethylacetat/n-Hexan gereinigt. Es wurde das oben genannte Produkt (498 mg) gewonnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 17,96 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 514
12. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-carboxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Isophthalsäure (166 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raum temperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte. Der erhaltene Rest wurde in Ethylacetat (25 ml) gelöst. Diese Lösung wurde mit 10% wässriger Zitronensäurelösung und gesättigter Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte. Der erhaltene Rest wurde weiter durch präparative HPLC gereinigt. Es wurde das oben erwähnte Produkt erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identizifiert.
Bedingungen der präparativen HPLC

Säule: YMC-Pack ODS, ∅ 20 × 250 mm
Elutionsvehikel: 0,1% TFA H₂O-CH₃CN
Elutionsbedingungen: 0%–50% Gradient; 60 min., anschließend 50% isokratisch
Fließgeschwindigkeit: 5 ml/min.
Elutionszeit: 67–70 min.
HPLC-Retentionszeit: 17,69 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 514

13. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[4-carboxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Monomethylterephthalat (180 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte. Der erhaltene Rest wurde in Ethylacetat (25 ml) gelöst. Diese Lösung wurde nacheinander mit 10% wässriger Zitronensäurelösung, 5% wässriger Natriumcarbonatlösung und gesättigter Salzlake gewaschen, über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und anschließend unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/Methanol) gereinigt, um Methylester der oben genannten Verbindung (289 mg) zu erhalten, der in Methanol (5 ml) gelöst und nach Zugabe von wässriger 1 N-Natriumhydroxidlösung (5 ml) 1 Stunde lang bei Raumtemperatur verrührt wurde. Im Anschluss an die Esterhydrolyse wurde das Reaktionsgemisch durch Zugabe von konz. Hydrochlorid auf einen pH-Wert von etwa 3 eingestellt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Lage wurde über Natriumsulfatanhydrid getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde von Ethylacetat/n-Hexan rekristallisiert. Es wurde das oben genannte Produkt (220 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert. HPLC-Retentionszeit: 20,35 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 514
14. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-pyridylcarbonyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Pikolinsäure (123 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Der erhaltene Rest wurde in Ethylacetat (25 ml) gelöst. Diese Lösung wurde mit 5% wässriger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Salzlake gewaschen, über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rest wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/Methanol) und anschließender Rekristallisation von Ethylacetat/n-Hexan gereinigt. Es wurde das oben genannte Produkt (364 mg) erhalten.
Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,18 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 471
15. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-pyridylcarbonyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Nicotinsäure (123 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 14. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (312 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 15,36 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 471
16. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[4-pyridylcarbonyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und Isonicotinsäure (123 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 14. Beispiel durchgeführt.
Es wurde das oben genannte Produkt (305 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 16,70 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 471
17. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-thienylcarbonyl] amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 2-Thiophencarbonsäure (128 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (361 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,14 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 476
18. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-thienylcarbonyl] amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 3-Thiophencarbonsäure (128 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (390 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 18,90 min. (Die Bedingungen waren die Bleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 476
19. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-furylcarbonyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 2-Furancarbonsäure (112 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (372 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 18,16 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 460
20. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-furylcarbonyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 3-Furancarbonsäure (112 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (331 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 18,36 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 460
21. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (152 mg) in DMF (3 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu. erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (380 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse, Flugzeit-Massenspektrometrie und ¹H-NMR wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 17,67 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 500
FAB-MASS: [M + H]+ 500
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 1,26 (s; 9H), 1,82 (s; 3H), 2,74 (m; 2H), 3,02 (m; 1H), 3,32 (m; 1H), 4,35 (bs; 1H), 4,58 (bs; 1H), 4,78 (m; 2H), 5,09 (d; 1H), 5,21 (d; 1H), 6,56 (d; 1H), 6,77 (d; 1H), 6,94 (t; 1H), 7,15 (t; 1H), 7,23 (t; 2H), 7,38 (d; 2H), 7,64 (s; 1H), 8,22 (d; 1H), 9,38 (s; 1H)
22. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NH-tBu (197 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (76,1 mg) in DMF (1,5 ml) wur den EDC·HCl (96 mg) und HOBt·H₂O (76,5 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (174 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse, Flugzeit-Massenspektrometrie und ¹H-NMR wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 18,97 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 528
FAB-MASS: [M + H]+ 528
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 1,27 (s; 9H), 1,40 (s; 3H), 1,49 (s; 3H), 1,80 (s; 3H), 2,75 (m; 2H), 3,2–3,4 (m; 1H), 4,35 (bs; 1H), 4,52 (bs und s; 2H), 4,98 (d; 1H), 5,18 (d; 1H), 5,27 (d; 1H), 6,55 (d; 1H), 6,76 (d; 1H), 6,94 (t; 1H), 7,13 (t; 1H), 7,23 (t; 2H), 7,36 (d; 2H), 7,63 (s; 1H), 8,22 (d; 1H), 9,3 (s; 1H)
23. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-carbamoylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Lösung aus (R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-carboxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid (145 mg), gelöst in DMF (2 ml), wurden EDC·HCl (54,3 mg) und HOBt·H₂O (43,3 mg) gegeben und 1 Stunde lang bei Raumtemperatur verrührt. Nach der Reaktion wurde zum Reaktionsgemisch 25% wässrige Ammoniumlösung (19,2 μl) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (122 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 16,38 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 513
24. Beispiel
N-tert-Butyl-1-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-N-[3-hydroxy-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-L-prolinamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Pro-NH-tBu (347 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (152 mg) in DMF (5 ml) wurden EDC·HCl (192 mg) und HOBt·H₂O (135 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (276 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 16,80 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 482
25. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-((2S,3S)-2-hydroxy-3-[3-amino-2-methylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 3-Amino-2-methylbenzoesäure (151 mg) in DMF (4 ml) wurden EDC·HCl (211 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde das oben genannte Produkt (153 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 14,57 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 499
26. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2,3-dimethylbenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 2,3-Dimethylbenzoesäure (150 mg) in DMF (4 ml) wurden EDC·HCl (201 mg) und HOBt·H₂O (153 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde die oben genannte Verbindung (280 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,77 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 498
27. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[2-amino-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 2-Amino-3-hydroxybenzoesäure (168 mg) in DMF (4 ml) wurden EDC·HCl (211 mg) und HOBt·H₂O (168 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde die oben genannte Verbindung (130 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 15,55 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 501
28. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-1,1-dioxid-4-carboxamid
1. Prozess
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(tert-butoxycarbonyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-1,1-dioxid-4-carboxamid
Zu einem Gemisch aus Boc-AHPBA-Thz-NH-tBu (1,40 g; 3,0 mmol), MeOH (24 ml): H₂O (12 ml) wurde OXONE (2,17 g; 3,6 mmol) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde nach Zugabe von Dichlormethan und Wasser extrahiert. Die getrennte organische Lage wurde mit 5% Salzlake gewaschen, über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und anschließend unter reduziertem Druck konzentriert. Der durch Rekristallisation des Rests von Toluol/n-Hexan gewonnene Kristall wurde weiter durch Kieselgelchromatographie (Ethylacetat/n-Hexan) gereinigt. Der erhaltene Rest wurde noch einmal durch Rekristallisation von Toluol/n-Hexan gereinigt. Es wurde die oben genannte Verbindung (0,25 g, Ausbeute 17%) gewonnen.
2. Prozess
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3-hydroxybenzoyl]amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-1,1-dioxid-4-carboxamid
Zu dem im 1. Prozess erzeugten Boc-AHPBA-Thz(O₂)-NH-tBu (200 mg) wurde 1,4 N-HCl/Dioxanlösung (2 ml) gegeben, und das Gemisch wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, gefolgt von einer Konzentration zur Gewinnung eines Rests, der in DMF (6 ml) gelöst und mit Triethylamin (0,06 ml) neutralisiert wurde. Hierzu wurden 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (64 mg), EDC·HCl (84 mg) und HOBt·H₂O (64 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde die oben genannte Verbindung (60 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 16,52 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 532
29. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(3,5-dihydroxybenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-tBu (365 mg) und 3,5-Dihydroxybenzoesäure (170 mg) in DMF (5 ml) wurden EDC-HCl (211 mg) und HOBt-H₂O (168 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf eine Konzentration unter reduziertem Druck folgte, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt. Es wurde die oben genannte Verbindung (70 mg) erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 15,68 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 502
30. Beispiel
(4S,5R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-5-methyl-1,3-oxazolidin-4-carboxamid
1. Prozess
(4S,5R)-3-tert-Butoxycarbonyl-4-N-tert-butylcarbamoyl-5-methyl-1,3-oxazolidin
Ein Gemisch aus (4S,5R)-3-tert-Butoxycarbonyl-5-methyl-1,3-oxazolidin-4-carbonsäure, Boc-Oxz(Me)-OH (4,13 g), HOSu (2,06 g) und EDC·HCl (3,76 g), gelöst in 100 ml Dichlormethan, wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, worauf 3,75 ml tert-Butylamin zugegeben wurden und ein weiterer 3-stündiger Rührvorgang folgte. Das Reaktionsgemisch wurde nacheinander mit 3% wässriger Na₂CO₃-Lösung, 1 N-HCl und 5% wässriger NaCl-Lösung gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Nach der Verdampfung des Lösungsmittels folgte eine Rekristallisation des gewonnenen Rests von n-Hexan, um 3,94 g der oben genannten Verbindung (Ausbeute 77%) zu erhalten. Durch eine ¹H-NMR-Spektroskopie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ ppm: 1,26 (s, 9H), 1,39 (s, 9H), 3,7–3,8 (br, 1H), 4,1–4,2 (br, 2H), 4,72 (br, 1H), 4,82 (br, 1H), 7,53 (br, 1H).
2. Prozess
(2S,3S)-3-tert-Butoxycarbonylamino-2-hydroxy-4-phenylbuttersäurebenzylester
Ein Gemisch aus Boc-AHPBA-OH·DCHA (4,76 g) und 1,19 ml Benzylbromid, gelöst in 20 ml DMF, wurde über Nacht (etwa 14 Stunden) bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat wurde konzentriert. Der erhaltene Rest wurde in Ethylacetat gelöst und nacheinander mit 5% wässriger Zitronensäurelösung, 3% Dinatriumcarbonatlösung und 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet.
Eine Rekristallisation des Rests von n-Hexan brachte 3,11 g der gewünschten Verbindung hervor (Ausbeute 81%).
3. Prozess
(2S,3S)-3-(2-Methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbuttersäurebenzylester
Eine Lösung aus Boc-AHPBA-OBzl (1,15 g), die im 2. Prozess erhalten wurde, und 4 N-HCl/Dioxan (20 ml) in 20 ml Dichlormethan wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt.
Das Reaktionsgemisch wurde konzentriert und der erhaltene Rest wurde in 30 ml DMF gelöst und mit 0,42 ml Et₃N neutralisiert, worauf 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (0,46 g), HOBt·H₂O (0,46 g) und EDC·HCl (0,63 g) zugegeben und über Nacht (etwa 14 Stunden) bei Raumtemperatur verrührt wurden. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch nach Zugabe von Dichlormethan und 5% wässriger Natriumbicarbonatlösung gerührt. Die organische Lage (Dichlormethanlage) wurde getrennt und nacheinander mit 5% wässriger Natriumbicarbonatlösung, 1 N-HCl und 5% Salzlake gewaschen. Während dieses Vorgangs wurde ein kristallines Präzipitat von der organischen Lage durch Filtration gewonnen. Das Filtrat wurde über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und konzentriert, um den Rest zu erhalten, der ebenfalls gewonnen wurde. Durch eine Rekristallisation des präzipitierten Kristalls in Kombination mit dem Rest wurden 0,71 g der gewünschten Verbindung erhalten (Ausbeute 56%).
4. Prozess
(2S,3S)-3-(2-Methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbuttersäure
Zu einer Lösung aus im 3. Prozess erzeugtem (3-Hydroxy-2-methylbenzoyl)-AHPBA-OBzl (0,64 g) in 20 ml Methanol wurde Wasserstoffgas in Anwesenheit von 10% Pd/C (30 mg) über Nacht (etwa 14 Stunden) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat wurde konzentriert. Eine Rekristallisation des Rests von Aceton/n-Hexan brachte 0,56 g der oben genannten Verbindung hervor (Ausbeute 100%). Durch ¹H-NMR-Spektroskopie und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
TOF-MASS: [M + H]+ 330
¹H-NMR (CDCl₃) δ ppm: 1,98 (s; 3H), 2,91 (d; 2H, J = 7,5 Hz), 4,34 (d; 1H, J = 3,6 Hz), 4,74 (m; 1H), 6,60 (d; 1H, J = 7,5 Hz), 6,91 (dd; 1H, J = 7,5 Hz, 7,5 Hz), 7,1–7,3 (m; 5H), 7,62 (s; 1H), 8,8–9,0 (br; 1H)
5. Prozess
(4S,5R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-5-methyl-1,3-oxazolidin-4-carboxamid
Ein Gemisch aus Boc-OXz (Me)-NHtBu (286 mg) und 4 N-HCl/Dioxan (2,5 ml) wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde der erhaltene Rest in 4 ml DMF gelöst und mit Et₃N (0,14 ml) neutralisiert, worauf (3-Hydroxy-2-methylbenzoyl)-AHPBA-OH (362 mg), HOBt·H₂O (164 mg), EDC·HCl (211 mg) zugegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt wurden. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (210 mg) zu erhalten. Durch HPLC-Analyse, ¹H-NMR-Spektroskopie und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die erhaltene Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 15,55 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 501
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 1,27 (s; 9H), 1,32 (d; 3H, J = 5,1 Hz), 1,60 (s; 3H), 4,00 (m; 3H), 4,28 (br; 3H), 5,06 (d; 1H, J = 5,4 Hz), 5,43 (d; 1H, J = 3,6 Hz), 5,55 (d; 1H, J = 6,4 Hz), 6,57 (d; 1H, J = 8,9 Hz), 6,78 (d; 1H, J = 8,9 Hz), 6,94 (dd; 1H, J = 7,9 Hz, 7,9 Hz), 7,16 (d; 1H, J = 7,5 Hz), 7,24 (t; 2H, J = 7,5 Hz, 7,5 Hz), 7,33 (d; 2H, J = 7,5 Hz), 7,74 (s; 1H), 8,15 (d; 1H, J = 7,9 Hz), 9,34 (s; 1H)
31. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NHtBu (365 mg) und 2-Ethyl-3-hydroxybenzoesäure (183 mg) wurden EDC·HCl (211 mg) und HOBt·H₂O (168 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt.
Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um den produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (319 mg) zu erhalten. Durch HPLC-Analyse, ¹H-NMR-Spektroskopie und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 17,28 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOP-MASS: [M + H]+ 514
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 0,85 (t; 3H, J = 7,5 Hz, 7,5 Hz), 1,25 (s; 9H), 2,35 (m; 2H), 2,74 (m; 2H), 3,00 (m; 1H), 3,20–3,40 (m; 1H), 4,35 (br; 1H), 4,55 (br; 1H), 4,77 (m; 2H), 5,05 (d; 1H, J = 9,3 Hz), 5,25 (d; 1H, J = 7,1 Hz), 6,5 (d; 1H, J = 7,1 Hz), 6,78 (d; 1H, J = 8,6 Hz), 6,94 (dd; 1H, J = 7,9 Hz, 9 Hz), 7,18 (d; 1H, J = 6,6 Hz), 7,22 (t; 2H, J = 7,1 Hz, 7,1 Hz), 7,38 (d; 2H, J = 7,5Hz), 7,63 (s; 1H), 8,21 (d; 1H, J = 7,9 Hz), 9,31 (s; 1H)
32. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(3-hydroxy-2-propylbenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NHtBu (365 mg) und 3-Hydroxy-2-propylbenzoesäure (168 mg) in 4 ml DMF wurden EDC·HCl (211 mg) und HOBt·H₂O (168 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um den produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die gewünschte Verbindung (130 mg) zu erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die oben erwähnte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 18,04 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 528
33. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(3,5-diamino-2-methylbenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
1. Prozess
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3,5-dinitrobenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NHtBu (1,10 g) und 2-Methyl-3,5-dinitrobenzoesäure (3,5-Dinitro-o-toluylsäure/0,75 g) in 15 ml DMF wurden EDC·HCl (0,63 g) und HOBt·H₂O (0,45 g) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um den produkthaltigen Rest zu erhalten. Es wurde die gleiche Reinigung wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (1,08 g) zu erhalten. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,42 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 574
2. Prozess
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(3,5-diamino-2-methylbenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(2-methyl-3,5-dinitrobenzoyl)amino-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid (287 mg) wurde in Ethanol (10 ml) und Eisenpulver (279 mg) gelöst und 10% wässrige Essigsäurelösung (15 ml) wurde tropfenweise zugegeben, woraufhin 1 Stunde lang bei 50°C gerührt wurde, 5 ml 1 N-HCl und 40 ml von 5% wässriger Bicarbonatlösung zugegeben wurden und der pH-Wert auf 7,5 eingestellt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde mit Dichlormethan (40 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Der Rest wurde durch Kieselgelchromatographie gereinigt, um 30 mg Rohprodukt zu erhalten, das durch präparative HPLC weiter gereinigt wurde, um die oben genannte Verbindung (15 mg) zu erhalten. Durch HPLC und Flugzeit-Spektrometrie wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 13,45 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: [M + H]+ 514
34. Beispiel
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
1. Prozess
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-1,3-thiazolidin-4-carboxamid(H-Thz-NH-Bz 1(2-Me))
Zu einer Lösung aus Boc-Thz-OH (6,99 g) und HOBt·H₂O (4,05 g) in 100 ml CH₂Cl₂ wurde EDC·HCl (6,30 g) gegeben und 3 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt, worauf 2-Methylbenzylamin (4,46 ml) zugegeben und über Nacht (etwa 14 Stunden) verrührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde nacheinander mit 3% wässriger Natriumcarbonatlösung, 1 N-HCl und 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhyrdid getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde der Rest wieder in 100 ml Dichlormethan gelöst, woraufhin Methansulfansäure (5,86 ml) zugegeben und 1 Stunde lang bei Raumtemperatur verrührt wurde.
Anschließend wurden 150 ml Wasser zugegeben und verrührt und die Wasserlagen wurden getrennt. Die getrennte Wasserlage wurde mit 100 ml Dichlormethan bei einem mit Natriumcarbonat eingestellten pH-Wert von 8 extrahiert. Die getrennte Dichlormethanlage wurde mit 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels folgte eine Rekristallisation des erhaltenen Rests von Ethylacetat/n-Hexan, um 6,04 g der oben genannten Verbindung (Ausbeute 85%) zu gewinnen.
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 2,56 (s, 3H), 2,85–3,05 (m, 3H), 3,2–3,4 (m, 1H), 3,86 (m, 1H), 4,0–4,2 (m, 2H), 4,2–4,3 (br, 2H), 7,0–7,2 (br, 4H), 8,34 (br, 1H)
2. Prozess
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid((2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-Bzl(2-Me))
Zu einer Lösung aus H-Thz-NH-Hzl(2-Me) (5,83 g), Boc-AHPBA-OH (7,29 g) und HOBt·H₂O (3,34 g) in 100 ml CH₂Cl₂ wurde EDC·HCl (5,19 g) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde nacheinander mit 3% wässriger Natriumcarbonatlösung, 1 N-HCl und 5% Salzlake gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde der Rest wieder in 150 ml Dichlormethan gelöst, woraufhin Methansulfonsäure (4,82 ml) zugegeben und 1 Stunde lang bei Raumtemperatur verrührt wurde.
Anschließend wurden 150 ml Wasser und 14,8 ml wässrige 5 N-NaOH-Lösung zugegeben und verrührt und zwei Lagen wurden getrennt. Die Dichlormethanlage wurde mit 5% Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfatanhydrid getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde der Rest in 150 ml heißem Ethylacetat gelöst und die unlösliche Substanz wurde durch Filtration entfernt, woraufhin das Lösungsmittel verdampft wurde, um Rohproduktpulver (7,00 g) zu erhalten. 2,00 g des Pulvers wurden durch Kieselgelchromatographie (Dichlormethan/MeOH) gereinigt, um grob gereinigtes Produkt zu erhalten. Eine Rekristallisation des erhaltenen grob gereinigten Produkts von Ethylacetat/n-Hexan brachte 1,48 g der oben genannten Verbindung hervor (Ausbeute 52%).
¹H-NMR (CDCl₃) δ ppm: 0,2–1,4 (br, 2H), 2,20 (s, 3H), 2,2–2,4 (m, 1H), 2,4–2,6 (m, 1H), 3,14 (d, 2H, J = 16,8 Hz), 3,21 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 3,48 (d; 1H, J = 9,6 Hz), 3,94 (d; 1H, J = 9,6 Hz), 4,1–4,3 (m, 1H), 4,3–4,5 (m, 1H), 4,55 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,8–7,1 (m, 6H), 7,1–7,4 (m, 3H), 7,9–8,1 (br, 1H)
3. Prozess
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Zu einer Suspension aus (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-Bzl(2-Me) (414 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (167 mg) in 4 ml DMF wurden EDC (211 mg) und HOBt (149 mg) gegeben und 14 Stunden lang bei Raumtemperatur verrührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen produkthaltigen Rest zu erhalten. Die Reinigung wurde in der gleichen Art und Weise wie im 1. Beispiel beschrieben durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (500 mg) zu erhalten. Durch ¹H-NMR und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,34 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel).
TOF-MASS: (M + H]+ 548
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ ppm: 1,83 (s; 3H), 2,23 (s; 3H), 2,78 (m; 2H), 3,10 (m; 1H), 3,20–3,40 (m; 1H), 4,18 (d; 1H, J = 6,0 Hz), 4,30 (d; 1H, J = 7,1 Hz), 4,38 (m; 2H), 4,78 (d; 1H, J = 8,7 Hz), 4,87 (t; 1H, J = 6,4 Hz, 6,4 Hz), 5,03 (d; 1H, J = 10,0 Hz), 5,45 (d; 1H, J = 6,4 Hz), 6,55 (d; 1H, J = 7,2 Hz), 6,77 (d; 1H, J = 8,1 Hz), 6,93 (dd; 1H, J = 6,4 Hz, 6,4 Hz), 7,12 (bs; 4H), 7,23 (bs; 3H), 7,32 (d; 2H, J = 6,0 Hz), 8,15 (d; 1H, J = 7,9 Hz), 8,35 (br; 1H), 9,37 (s; 1H)
35. Beispiel
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-Bzl(2-Me) (414 mg) und 2-Ethyl-3-hydroxybenzoesäure (167 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (500 mg) zu gewinnen. Durch HPLC und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,61 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 562
36. Beispiel
(R)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NHtBu (414 mg) und 2-Ethyl-3-hydroxybenzoesäure (167 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchge führt, um die oben genannte Verbindung (500 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,61 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 542
37. Beispiel
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NH-Bzl(2-Me) (414 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (167 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (500 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,89 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 576
38. Beispiel
(R)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NH-Bzl(2-Me) (414 mg) und 2-Ethyl-3-Hydroxybenzoesäure (167 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (500 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 19,61 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 590
39. Beispiel
(R)-N-n-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Thz-NH-nBu (183 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (76 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (160 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 17,24 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 500
40. Beispiel
(2S,4S)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(2-methyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]4-chlorpyrrolidin-2-carboxamid
Unter Verwendung von Boc-Pro[4(S)-Cl]-NHtBu (152 mg) und (2S,3S)-(3-Hydroxy-2-methylbenzoyl-AHPBA-OH) (173 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 30. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (240 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 17,95 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 517
41. Beispiel
(2S,4S)-N-(2-Methylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-4-chlorpyrrolidin-2-carboxamid
Unter Verwendung von Boc-Pro[4(S)-Cl]-NHBzl(2-Me) (171 mg) und (3-Hydroxy-2-methylbenzoyl-AHPBA-OH (168 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 30. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (230 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,44 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 564
42. Beispiel
(R)-N-(2-Chlorbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von Boc-AHPBA-Thz-NHBzl(2-Cl) (276 mg) und 2-Methyl-3-hydroxybenzoesäure (83 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 30. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (160 mg) zu gewinnen. Durch HPLC-Analyse und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,06 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: (M + H]+ 569
43. Beispiel
(2S,4S)-N-tert-Butyl-3-[(2S,3S)-3-(2-ethyl-3-hydroxybenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-4-chlorpyrolidin-2-carboxamid
Unter Verwendung von Boc-AHPBA-Pro[4(S)Cl]-NHtBu (429 mg) und 2-Ethyl-3-hydroxybenzoesäure (155 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 32. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (328 mg) zu gewinnen. Durch HPLC und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,33 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]⁺ 531
44. Beispiel
(R)-N-(2,6-Dimethylbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (3-Hydroxy-2-methylbenzoyl)-AHPBA-OH, das aus 173 mg 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure in der gleichen Weise wie im 30. Beispiel hergestellt wurde, und H-Thz-NHBzl(2,6-Me) (125 mg) wurde eine Kondensierung und Reinigung durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (234 mg) zu gewinnen. Durch HPLC und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,69 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]⁺ 562
45. Beispiel
(R)-N-(2-Chlorbenzyl)-3-[(2S,3S)-3-(3-hydroxy-2-methylbenzoyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]5,5-dimethylthiazolidin-4-carboxamid
Unter Verwendung von (2S,3S)-H-AHPBA-Dmt-NH-Bzl(2-Cl) (138 mg) und 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure (50 mg) wurden eine Kondensierung und Reinigung in der gleichen Weise wie im 1. Beispiel durchgeführt, um die oben genannte Verbindung (100 mg) zu gewinnen. Durch HPLC und Flugzeit-Massenspektrometrie, wie nachfolgend beschrieben, wurde die genannte Verbindung als die gewünschte identifiziert.
HPLC-Retentionszeit: 20,91 min. (Die Bedingungen waren die gleichen wie im 1. Beispiel)
TOF-MASS: [M + H]+ 597
Zur Bestätigung, dass die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung Eigenschaften hat, die für den medizinischen Einsatz geeignet sind, wie z. B. eine ausgezeichnete HIV-Protease-Hemmungsaktivität und geringere Zytotoxizität usw., fanden die folgenden Tests statt.
[1. Testbeispiel] HIV-Protease-Hemmungsaktivität
Gemäß einem Verfahren, über das bereits in Publikationen berichtet wurde (Yoshiaki Kiso, Yuuki-gosei-kagaku-kyokai-shi, Bd. 52, 403–412 (1994), japanische Offenlegungspatentschrift Nr. 170722 (1993), usw.), wurden die Verbindungen der Beispiele 1 bis 42 beurteilt, um eine hohe HIV-Protease-Hemmungsaktivität der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung zu verifizieren. Für einen Vergleich wurde außerdem KNI-272 als positive Kontrolle beurteilt, das Berichten zufolge eine hohe HIV-Protease-Hemmungsaktivität aufweist (Yoshiaki Kiso, Yuuki-gosei-kagaku-kyokai-shi, Bd. 52, 403–412 (1994)).
Testverfahren
Zum Testen der Proteaseaktivität wurden rekombinante HIV-Protease (Biochemistry, 250 (9), 264 (1990)) und synthetisches Hepta-Peptid (H-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-OH/Trifluoressigsäuresalz) verwendet. Das Peptidfragment H-Pro-Ile-Val-OH, das durch Spaltung zwischen -Tyr...Pro des genannten Substrats nach einer 60-minütigen Reaktion in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen der Testverbindung bei 37°C gebildet wurde, wurde durch Umkehrphasen-HPLC bestimmt und die Hemmungsrate wurde berechnet (mit Bezug auf die ungeprüfte japanische Offenlegungspatentschrift Nr. 170722/1993).
Einige Beispiele für die Ergebnisse der Beurteilung der HIV-Protease-Hemmungsaktivität der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung gemäß dem oben genannten Verfahren sind in Tabelle 1 aufgeführt, die außerdem die Beurteilungsergebnisse für KNI-272[(R)-3-[(2S,3S)-3-(N-(isochinolin-5-yloxy)acetylmethylthio-L-alanyl)amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl]1,3-thiazolidin-4-N'-t-butylcarboxamid als eine weitere positive Kontrolle enthält, die ein Hydroxymethylcarboxamidtripeptid ist, das der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung ähnlich ist und einen (2S,3S)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-Rest hat. Gemäß den Beurteilungsergebnissen wiesen alle erfindungsgemäßen Peptidverbindungen eine hohe HIV-Protease-Hemmungsaktivität auf. Die Konzentration der Testverbindung stellt ihre Endkonzentration im Reaktionsgemisch dar.
Tabelle 1
[2. Testbeispiel] Anti-HIV-Aktivität und Zytotoxizität
Die Anti-HIV-Aktivität der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindung wurde wie nachfolgend beschrieben beurteilt. Das heißt, die Hemmwirkung der Verbindung auf die Entstehung von HIV-Viruspartikeln, die T-Lymphozyten infizieren, wurde anhand des Potenzials zur Verhinderung von T-Lymphozytentod, der mit der genannten Virusinfektion einhergeht, beurteilt.
Testverfahren für Anti-HIV-Aktivität und Zytotoxizität Gemäß einem Testverfahren, über das bereits in Publikationen berichtet wurde (H. Nakashima et al., Antimicrob. Agents Chemother. 36, 1249–1255 (1992), usw.), wurde die Anti-HIV-Aktivität unter Verwendung der MT-4 Zelllinie und des HTLV-IIIB Virus beurteilt. Mit dem genannten HTLV-IIB Virus kurz vor der Zugabe infizierte MT-4 Zellen (2,5 × 10⁴ Well, MOI : 001) wurden in eine 96-Well-Mikrotiterplatte, wobei jedes Well verschiedene Konzentrationen der Testverbindung enthielt. Zur Untersuchung der Zytotoxizität der Testverbindungen gegenüber der MT-4 Zelllinie wurde gleichzeitig eine nicht infizierte MT4 Zelllinie in Anwesenheit verschiedener Arten der Testverbindung kultiviert. Nach einer 5-tägigen Kultivierung bei 37°C in einem CO₂-Inkubator wurde die Anzahl von Ampullenzellen anhand des MTT-Verfahrens bestimmt.
Die Anti-HIV-Aktivität wurde durch die Konzentration ausgedrückt, bei der sie gegen 50% Zytotoxizität durch HIV-Infektion schützt (EC₅₀, 50% effektive Konzentration): die Zytotoxizität wurde durch die Konzentration ausgedrückt, bei der die Testverbindung 50% Zytotoxizität aufweist (CC₅₀, 50% zytotoxische Konzentration). Es wurde ein Virus mit einem infektiösen Wert von 3,8 × 10⁴ TCID 50/ml verwendet.
Beurteilungsbeispiele für den EC₅₀ der Anti-HIV-Aktivität und den CC₅₀ der Zytotoxizität sind in Tabelle 2 enthalten, die außerdem die Beurteilungsergebnisse für KNI-272 als positive Kontrolle enthält. Anhand der Ergebnisse ist erkennbar, dass die erfindungsgemäßen Peptidverbindungen Anti-HIV-Aktivität aufwiesen. Außerdem war es klar, dass sie eine geringere Zytotoxizität aufwiesen. Das heißt, die Konzentration zur Preisgabe von Zytotoxizität ist weit höher als die Konzentration zur effektiven Vermeidung einer HIV-Virusinfektion.
[Tabelle 2]
[3. Testbeispiel] Pharmakokinetik
Die metabolischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Dipeptidverbindungen wurden unter Verwendung von Ratten beurteilt. Die Testverbindungen wurden in einem Trägerstoff gelöst intraduodenal oder intravenös verabreicht. Nach der Verabreichung wurde Blut entnommen und die Konzentration restlicher Testverbindung im Plasma analysiert. Die Dosierung der Testverbindung ist in Tabelle 3 aufgeführt. In Tabelle 3 sind außerdem pharmakokinetische Daten wie AUC (Fläche unter der Kurve), MRT (mittlere Verweilzeit), t_1/2(λ) (Halbwertzeit) und Parameter F (Bioverfügbarkeit nach intraduodenaler Verabreichung) sowie die Ergebnisse des Tripeptid-Derivats KNI-272 als Kontrolle enthalten.
Tabelle 3
Anhand der Ergebnisse ist erkennbar, dass ein hoher Plasmawert des erfindungsgemäßen Dipeptids aufgrund seiner In-vivo-Stabilität über einen längeren Zeitraum als die Kontrolle KNI-272 aufrecht gehalten werden konnte.
43. Beispiel
Pharmazeutisches Präparat
Die erfindungsgemäße Dipeptidverbindung kann gemäß der nachfolgend beschriebenen Verordnung zum Beispiel in Form von Kapseln oral verabreicht werden. Ein die Verbindung aus dem 21. Beispiel als Wirkstoff enthaltendes pharmazeutisches Präparat kann zum Beispiel in Form von Kapseln hergestellt werden, indem feinpulvrige Lactose, Magnesiumstearat in eine Gelatinekapsel gefüllt werden, deren Zusammensetzung in Tabelle 4 beschrieben ist. Die in einer Kapsel enthaltende Menge der genannten peptidartigen Verbindung kann je nach dem Verabreichungsweg oder der Dosierungsdauer ausgewählt werden.
Tabelle 4

Claims

Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (I) Allgemeine Formel I]
wobei R₁ eine 5-gliedrige oder 6-gliedrige monozyklische Kohlenwasserstoffgruppe oder heterozyklische Gruppe repräsentiert, wobei mehr als ein Kohlenstoffatom der genannten monozyklischen Kohlenwasserstoffgruppe durch ein Heteroatom substituiert ist und 3 oder weniger Gruppen in der genannten zyklischen Gruppe substituiert sein können, X eine Methylengruppe (-CH₂-), Chlormethylengruppe (-CH(Cl)-), ein Sauerstoffatom oder Schwefelatom oder eine Sulfonylgruppe (SO₂-) repräsentiert, R₂₁ und R₂₂ jeweils ein Wasserstoffatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen repräsentieren, die linear oder verzweigt sein können, R₃ eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–6 Kohlenstoffatomen oder eine einwertige Gruppe repräsentiert, die von aromatischem monozyklischem Kohlenwasserstoff mit insgesamt 12 oder weniger Kohlenstoffatomen abgeleitet ist, wobei eine ein Kohlenstoffkettengerüst bildende Kohlenwasserstoffgruppe linear oder verzweigt sein kann oder ein Halogenatom im aromatischen Ring der genannten aromatischen monozyklischen Kohlenwasserstoffgruppe substituiert sein kann.
Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (II) Allgemeine Formel II
wobei X, R₂₁, R₂₂ und R₃ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie die in der oben erwähnten allgemeinen Formel (I), R₁₁ ein Wasserstoffatom, eine Aminogruppe oder eine Hydroxylgruppe repräsentiert und R₁₂ ein Wasserstoffatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen repräsentiert, die linear oder verzweigt sein können.
Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (III) Allgemeine Formel III
wobei X, R₂₁ und R₂₂ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie X, R₂₁ und R₂₂ in der oben erwähnten Formel (I) und wobei R₁₁ und R₁₂ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie R₁₁ und R₁₂ in der oben erwähnten allgemeinen Formel (II).
Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (IV) Allgemeine Formel IV
wobei X, R₂₁ und R₂₂ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie die in der oben erwähnten allgemeinen Formel (I) und wobei R₁₁ und R₁₂ jeweils dieselbe Gruppe repräsentieren wie R₁₁ und R₁₂ in der oben erwähnten allgemeinen Formel (II), wobei R₃₁, R₃₂ und R₃₃ jeweils ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen repräsentieren, die linear oder verzweigt sein können.
Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (V) Allgemeine Formel V
wobei R₁₁ eine Aminogruppe oder Hydroxylgruppe repräsentiert, R₁₂ eine Methylgruppe oder Ethylgruppe repräsentiert und wobei R₂₁ und R₂₂ jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe repräsentieren.
Neuartige Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon, repräsentiert durch die allgemeine Formel (VI): Allgemeine Formel VI
wobei R₁₁ eine Aminogruppe oder eine Hydroxylgruppe repräsentiert, R₁₂ eine Methylgruppe oder eine Ethylgruppe repräsentiert, R₂₁ und R₂₂ jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe repräsentieren, R₃₁, R₃₂ und R₃₃ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe repräsentieren.
Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch äquivalentes Salz davon nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei X ein Schwefelatom ist.
Dipeptidverbindung oder pharmazeutisch äquivalentes Salz davon nach Anspruch 4, wobei X ein Schwefelatom ist, R₂₁, R₂₂, R₃₁ und R₁₂ jeweils eine Methylgruppe repräsentieren; R₃₂ und R₃₃ jeweils ein Wasserstoffatom repräsentieren; und R₁₁ eine Hydroxylgruppe repräsentiert.
Anti-AIDS-Mittel, umfassend als Wirkstoff die neuartige Dipeptidverbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon nach Anspruch 1–8.
Verfahren zur Herstellung einer Dipeptidverbindung nach Anspruch 1, umfassend den Schritt einer N-Acylierungsreaktion zwischen einer Verbindung der allgemeinen Formel (IX): Allgemeine Formel IX
und einer Karbonsäure der allgemeinen Formel (XIII) Allgemeine Formel XIII
wobei X, R₁, R₃, R₂₁ und R₂₂ jeweils dasselbe repräsentieren wie X, R₁, R₃, R₂₁ und R₂₂ in der obigen allgemeinen Formel (I).
Verfahren nach Anspruch 10, bei dem X ein Schwefelatom ist.
Verwendung einer Dipeptidverbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von AIDS durch Unterdrücken von HIV-Virusproliferation.