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Gebiet der
Erfindung
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Die
vorliegende Erfindung betrifft eine endermale Salbe, welche, indem
sie Equisetum gigantum-Extrakt enthält, die Produktion von Melanin
unterdrückt
und bei der Verhinderung und der Verbesserung von Zuständen wirksam
ist, einschließlich
Pigmentablagerungen, Chloasma, Sommersprossen und Leberflecken nach
einem Sonnenbrand.
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Hintergrund
der Erfindung
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Man
glaubt im allgemeinen, obwohl es einige unbekannte Details gibt,
daß der
Mechanismus der Entwicklung von Chloasma und dergleichen auf der
Haut die Bildung von Melaninpigment ist, aufgrund von hormonellen
Abnormaltitäten
oder einer Stimulation durch ultraviolettes Licht aus Sonnenlicht,
gefolgt von einer abnormalen Ablagerung dieses Pigments in der Haut.
Dieses Melaninpigment, welches die Färbung der Haut verursacht,
wird in melaninerzeugenden Granula (Melanosomen) in Melaninzellen
(Melanozyten) zwischen der Epidermis und dem Corium erzeugt. Auf
diese Weise erzeugtes Melanin diffundiert dann mittels Osmose zu
benachbarten Zellen. Man spekuliert, daß die biochemischen Reaktionen
in den Melanozyten wie nachstehend beschrieben sind.
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Das
heißt,
daß der
Herstellungsprozeß des
Melaninpigmentes wie folgt ist: Tyrosin, eine der essentiellen Aminosäuren wird
zu Dopachinon durch die Wirkung eines Enzyms Tyrosinase, und dieses
wird dann zu einem roten Pigment, zu einem farblosen Pigment und
schließlich
zu Melanin verändert,
welches schwarz ist, durch enzymatische sowie nicht-enzymatische
Oxidation.
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Daher
ist es wichtig, um die Herstellung von Melanin zu unterdrücken, das
erste Stadium der Reaktionen zu unterdrücken, d. h. die Wirkung von
Tyrosinase.
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Verbindungen,
welche die Wirkungen von Tyrosinase unterdrücken, außer was Nydrochinon betrifft, arbeiten
jedoch sehr langsam und ergeben keine hinreichende Verbesserung
bei der Ablagerung von Pigment in der Haut. Andererseits hat Hydrochinon,
obwohl seine Wirkungen bekannt sind, das Problem einer Sensibilisierung
und dessen Verwendungen sind daher im allgemeinen beschränkt. Zum
Zweck einer Verbesserung von dessen Sicherheit, wurden Versuche
unternommen, um es in einen Monoester einer höheren Fettsäure, einen Alkyl-monoether
und dergleichen umzuwandeln (japanische nicht geprüfte Patentveröffentlichung
Tokkai Sho 58-154507). Ester werden jedoch durch hydrolytische Enzyme
im Körper
zersetzt und sind daher nicht notwendigerweise sicher. Hinreichend
sichere Ether wurden bisher ebenfalls noch nicht erhalten.
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Zum
Zweck der Lösung
dieser Probleme haben die Erfinder eine breite Vielfalt von Substanzen
bezüglich
einer die Melaninproduktion unterdrückenden Wirkung untersucht
und gefunden, daß Pinon-Negro (wissenschaftlicher
Name: Jatropha curcas L.)-Extrakt und Piri-Piri (wissenschaftlicher Name: Cyperas
spacelatus Rottb (C. articulatus L.)) – Extrakt die Wirkungen hat,
die Melaninproduktion zu unterdrücken,
und die Tyrosinase zu hemmen. Es hat keinen Bericht über die
Wirkungen der Unterdrückung
der Melaninproduktion dieser Substanzen oder ihre Anwendung als
bleichende bzw. weiß machende
Mittel gegeben.
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JP-A-7025762
und FR-A-2578422 offenbaren topische Zusammensetzungen zur Entfernung
von Sommersprossen und Flecken auf der menschlichen Haut, wobei
diese Zusammensetzungen Equisetum arvense-Extrakt enthalten können.
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Zusammenfassung
der Erfindung
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In
der vorliegenden Erfindung wird eine endermale Salbe bereitgestellt,
welche charakteristischerweise Equisetum giganteum (cola de caballo)-Extrakt
enthält.
Die endermale Salbe der vorliegenden Erfindung weist überlegene
hypochrome Wirkungen und bleichende Wirkungen auf eine Pigmentablagerung,
auf Chloasma, auf Sommersprossen, Leberflecken etc. nach einem Sonnenbrand
auf, und ist bezüglich
der Sicherheit überlegen.
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Detailierte Beschreibung
der Erfindung
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Die
Cola de caballo-Extrakte, die in der vorliegenden Erfindung verwendet
werden, sind Pflanzen, welche auf trockenen grasigen Ebenen und
Weiden in Südamerika
gefunden werden, insbesondere in den Anden. Das in der vorliegenden
Erfindung verwendete Extraktions-Lösemittel kann jedwedes Lösemittel
sein, welches normalerweise für
eine Extraktion verwendet wird. Beispiele schließen Alkohole wie Methanol und
Ethanol ein, hydrierte Alkohole und organische Lösemittel wie Aceton und Ethylacetat,
und sie können
entweder unabhängig
von einander oder in Kombination verwendet werden.
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In
der vorliegenden Erfindung ist der Gehalt an Cola de caballo-Extrakt
auf Trockenbasis 0,005 bis 20 Gew.-%, bevorzugtermaßen 0,01
bis zu 10,0 Gew.-% der gesamten endermalen Salbe. Falls er weniger
ist als 0,005 Gew.-%, dann können
die Wirkungen der vorliegenden Erfindung nicht in einer hinreichenden
Weise erreicht werden, und falls er höher als 20,0 Gew.-% ist, dann
wird eine pharmazeutische Präparation
schwierig. Daher ist keiner von beiden Fällen zu bevorzugen. Kein signifikanter
Anstieg der Wirkung wird beobachtet, wenn mehr als 10 Gew.-% verwendet
werden.
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Zusätzlich zu
den wesentlichen, vorausstehend beschriebenen Inhaltsstoffen, kann
die endermale Salbe der vorliegenden Erfindung diejenigen Inhaltsstoffe
enthalten, wie notwendig, welche normalerweise in Kosmetika, Arzneimitteln
etc. in der Form einer endermalen Salbe enthalten sind, einschließlich von
anderen bleichenden Mitteln, Feuchthaltemitteln, Antioxidationsmitteln,
auf Öl
basierenden Inhaltsstoffen, Absorptionsmitteln für ultraviolettes Licht, Tenside,
Verdickungsmittel, Alkohole, Pulver-Inhaltsstoffe, Farbstoffe, auf
Wasser basierende Inhaltsstoffe, Wasser und verschiedenartige Nährstoffe
für die
Haut.
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Des
weiteren können
komplexbildende Mittel einschließlich Di-Natrium-edetat, Tri-Natrium-edetat, Natriumcitrat,
Natriumpolyphosphat, Natriummethaphosphat und Gluconsäure, Arzneistoffe
einschließlich
Coffein, Tannin, Verapamil, Tranexaminsäure und ihre Derivate, Glycyrrhiza-Extrakt,
Glabridin, verschiedenartige rohe Arzneistoffe, Tocopherolacetat,
Glycyrrhizinsäure
und ihre Derivate oder ihre Salze, Bleichmittel, einschießlich von
Vitamin C, Ascorbinsäuremagnesiumphosphat,
Ascorbinsäureglucosid,
Arbutin und Kojisäure und
Zucker, einschließlich
Glucose, Fructose, Mannose, Sucrose und Trehalose ebenfalls hinzugefügt werden.
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Die
endermale Salbe der vorliegenden Erfindung kann in jedweder Form
sein, welche gewöhnlicher weise
für eine
endermale Salbe verwendet wird, einschließlich einer Salbe, Creme, Emulsion,
Lotion, von Gesichtspackungen und Badezusätzen. Die vorliegende Erfindung
wird im Detail nachstehend unter Bezug auf Beispiele beschrieben.
Die vorliegende Erfindung ist nicht auf diese Beispiele beschränkt. Die
Mischungsverhältnisse
sind in Einheiten von Gewichtsprozent. Bevor die Beispiele erklärt werden,
werden die Testverfahren und die Ergebnisse der Melanin unterdrückenden
Wirkung, der hemmenden Wirkung auf die Tyrosinaseaktivität und die
bleichende Wirkung der Pflanzenextrakte der vorliegenden Erfindung
beschrieben.
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Cola de caballo-Extrakte
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1. Probenherstellung
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50
g von Teilen des Stamms und der Äste
von Cola de caballo wurden in Ethanol bei Raum temperatur eine Woche
lang untergetaucht. Die Extraktionslösung wurde dann konzentriert,
um 2,4 g eines Ethanolextraktes zu erhalten. Dieser Extrakt wurde
in DMSO gelöst,
um eine 1%-ige Lösung
zu erhalten, und diese Lösung wurde
verdünnt,
um die Konzentration für
die folgenden Experimente einzustellen.
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2. Zellkultur
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B16-Melanom-Kulturzellen
von Mäusen
wurden verwendet. Eine Kultur wurde in einem CO2-Inkubator (95%
Luft und 5% Kohlendioxid) bei 37°C
unter Verwendung von Eagle's
Medium durchgeführt,
welches 10% FBS und Theophyllin (0,09 mg/ml) enthielt. Nach 24 Stunden
der Kultivierung wurde die Probenlösung so hinzugegeben, daß die Endkonzentration
(im Trockenextrakt) 10–2 bis 10–5 Gew.-%
war. Die Kultur wurde drei weitere Tage fortgesetzt, und die Melaninproduktion
wurde visuell bewertet, und die hemmende Wirkung auf die Tyrosinase-Aktivitäten wurde
gemessen.
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3. Visuelle
Bewertung der Menge an Melanin
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Eine
Diffusionsplatte wurde auf den Deckel der Platte mit den Vertiefungen
gesetzt, und die Menge an Melanin in den Zellen wurde unter Verwendung
eines Inversionsmikroskops bewertet. Die Bewertung wurde mit derjenigen
einer Probe ohne zugegebenen Cola de caballo-Extrakt verglichen
(Kontrollprobe). Die Ergebnisse sind in der Tabelle 1 gezeigt.
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Als
Referenz wurde derselbe Test an Nepeta japonica Maxim. (Lamium album
L. Unterfamilie, Perilla Familie)-Extrakt durchgeführt, von
dem bereits bekannt war, daß er
die Melaninproduktion unterdrückt.
Diese Ergebnisse sind ebenfalls in der Tabelle 1 gezeigt. In der
Tabelle bedeutet „Toxizität", daß es eine
Zelltoxizität gibt.
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Kriterien:
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- O:
- Weiß (Menge
an Melanin)
- Δ:
- Etwas weiß (Menge
an Melanin)
- x:
- Kontrolle (Menge an
Melanin)
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4. Messung
der Tyrosinase-Aktivität
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Vor
der Messung wurde das Medium entfernt, gefolgt von zweimaligem Waschen
mit 100 Mikroliter von PBS. 45 Mikroliter 1% Triton-X (Tensid von
Rohm & Haas)
enthaltendes PBS wurde dann zu jeder Vertiefung hinzu gegeben. Die
Platte ließ man
1 Minute schütteln,
um die Zellmembranen gründlich
zu zerstören
und die Absorption bei 475 nm wurde unter Verwendung eines Mikroplattenlesegerätes gemessen,
welche als die Absorption zum Zeitpunkt 0 Minuten definiert wurde.
Schnell danach wurden 5 Mikroliter von 10 mM L-Dopalösung hinzugegeben und die Platte
wurde in einem Inkubator verbracht, der bei 37°C gehalten wurde, um während 60
Minuten zu reagieren. Die Platte wurde 1 Minute lang geschüttelt und
die Absorption (475 nm) zum Zeitpunkt 60 Minuten wurde gemessen.
Das Inhibitionsverhältnis
(%) der Tyrosinaseaktivität
wurde definiert als die Abnahme in der Absorptionsdifferenz zwischen
dem Zeitpunkt 0 Minuten und dem Zeitpunkt 60 Minuten für die Probe
zu welcher Cola de caballo-Extrakt hinzu gegeben worden war, im
Vergleich zu der Absorptionsdifferenz zwischen dem Zeitpunkt 0 Minuten
und dem Zeitpunkt 60 Minuten für
die Probe, zu welcher kein Cola de caballo-Extrakt zugeben worden
war. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 1 gezeigt.
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Als
Referenz wurde derselbe Test an Extrakt von Nepeta japonica Maxim.
durchgeführt,
von dem bereits bekannt war, daß er
die Aktivität
von Tyrosinase hemmt. Diese Ergebnisse sind ebenfalls in der Tabelle
1 gezeigt. In der Tabelle bedeutet „Toxizität", daß es eine Zelltoxizität gibt und „-„ zeigt
an, daß kein
signifikanter Unterschied im Vergleich mit der Kontrolle innerhalb
eines 5%-Signifikanzniveaus beobachtet wurde.
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5. Testen
der Bleichwirkung
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Testverfahren
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40
Testpersonen wurden Sommersonnenlicht während 4 Stunden ausgesetzt
(2 Stunden am Tag während
2 Tagen) und die Haut des inneren lateralen Anteils ihres Oberarms
wurde als das Objekts des Tests verwendet. Beginnend nach fünf Tagen
ab dem Tag, an welchem sie dem Sonnenlicht ausgesetzt waren, wurde jede
Probe auf dieser Haut einmal am Morgen und einmal am Nachmittag
während
4 Wochen angewendet. Das Panel wurde in 5 Gruppen mit 8 Personen
in jeder Gruppe unterteilt. Das Testen wurde unter Verwendung der
folgenden Formulierungen durchgeführt. Alkoholphase
| 95%
Ethylalkohol | 55
Gew.-% |
| Polyoxyethylen
(25-molar) gehärteter
Castorölether | 2,0 |
| Antioxidationsmittel/Konservierungsmittel | geeignete
Menge |
| Duftstoff | geeignete
Menge |
| Wirkstoff | in
der Tabelle 2 spezifisch angegeben |
Wasserphase
| Glycerin | 5,0 |
| Natriumhexamethaphosphat | geeignete
Menge |
| Ionenausgetauschtes
Wasser | Rest |
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Herstellungsverfahren:
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Die
Wasser-Phase und die Alkohol-Phase wurden getrennt hergestellt und
dann gemischt und solubilisiert.
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Bewertungsverfahren:
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Die
hypochrome Wirkung nach der Anwendung wurde basierend auf den nachstehenden
Kriterien bewertet.
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Kriterien:
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- ⦾:
- sehr wirksam oder
wirksam bei 80% oder mehr der Testpersonen.
- O:
- sehr wirksam oder
wirksam bei 50% bis weniger als 80% der Testpersonen.
- Δ:
- sehr wirksam oder
wirksam bei 30% bis weniger als 50% der Testpersonen.
- X:
- sehr wirksam oder
wirksam bei weniger als 30% der Testpersonen.
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Die
Proben wurden mit den Misch-Zusammensetzungen, welche in dem zuvor
erwähnten
Testverfahren beschrieben worden waren, hergestellt und die Wirkstoffe,
welche in der Tabelle 2 aufgelistet sind, wurden verwendet, um die
Bleichwirkung zu vergleichen. Die Ergebnisse sind in der Tabelle
2 gezeigt.
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Die
Cola de caballo-Extrakte in der Tabelle 2 wurden durch die Wärmereduktion
der gesamten Pflanze von Cola de caballo in Ethanol, gefolgt von
Filtrieren und Konzentration/Trocknen erhalten.
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Wie
in der Tabelle 2 in klarer Weise gezeigt wurde, ist bestätigt worden,
daß die
Proben mit Cola de caballo-Extrakt übermäßige Ablagerungen des Melaninpigments
wirksamer verhinderten und auf diese Weise ein Dunkeln der Haut
verhinderten. Beispiel
1: Cremeformel
| Stearinsäure | 5,0
Gew.-% |
| Stearylalkohol | 4,0 |
| Isopropylmyristat | 18,0 |
| Glycerinmonostearinsäureester | 3,0 |
| Propylenglycol | 10,0 |
| Cola
de caballo-Methanol-Extrakt | 0,01 |
| Ätzkali | 0,2 |
| Natriumhydrogensulfit | 0,01 |
| Konservierungsmittel | geeignete
Menge |
| Duftstoff | geeignete
Menge |
| Ionenausgetauschtes
Wasser | Rest |
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Herstellungsverfahren:
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Propylenglycol,
der Cola de caballo-Extrakt und Ätzkali
wurden zu dem ionenausgetauschten Wasser hinzugeben und die Mischung
wurde auf 70°C
erwärmt
und dabei gehalten (Wasserphase). Die anderen Inhaltsstoffe wurden
gemischt, dann unter Wärme
geschmolzen und die Temperatur wurde bei 70°C gehalten (Ölphase). Die Ölphase wurde
nach und nach zu der Wasserphase hinzu gegeben und nachdem alles
davon hinzu gegeben worden war, wurde die Temperatur bei dieser
Temperatur gehalten, um es der Mischung zu gestatteten zu reagieren.
Schließlich
wurde die Mischung in homogener Weise mit einem Homo-Mischer emulgiert
und auf 30°C
abgekühlt,
während
sie gründlich
gerührt
wurde.
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Herstellungsverfahren
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Propylenglycol
wurde zu dem ionenausgetauschten Wasser hinzu gegeben, und die Mischung wurde auf
70°C (Wasserphase)
erwärmt
und dabei gehalten. Die anderen Inhaltsstoffe wurden gemischt, dann
unter Wärme
geschmolzen und die Temperatur wurde bei 70°C (Ölphase) gehalten. Die Ölphase wurde
zu der Wasserphase hinzu gegeben und nach einer Voremulgierung wurde
die Mischung in einer homogenen Weise mit einem Homo-Mischer emulgiert
und auf 30°C
abgekühlt,
während
sie gründlich
gerührt
wurde.
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Beispiel
3: Creme-Formel:
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Herstellungverfahren:
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Das
Seifenpulver und das Borax wurden zu dem ionenausgetauschten Wasser
hinzu gegeben und die Mischung wurde auf 70°C erwärmt (Wasserphase) und dabei
gehalten. Die anderen Inhaltsstoffe wurden gemischt, dann unter
Wärme geschmolzen
und die Temperatur wurde bei 70°C
(Ölphase)
gehalten. Die Ölphase wurde
nach und nach zu der Wasserphase hinzu gegeben, während Rühren ausgeführt wurde,
um die Reaktion auftreten zu lassen. Als die Reaktion vollständig durchgeführt war,
wurde die Mischung in einer homogenen Weise mit einem Homo-Mischer
emulgiert und dann auf 30°C
abgekühlt,
während
sie gründlich
gerührt wurde.
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Beispiel
4: Emulsionsformel
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Herstellungsverfahren
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Das
Carboxyvinylpolymer wurde in einer kleinen Menge des ionenausgetauschten
Wassers gelöst (A-Phase).
Polyethylenglycol 1500 und Triethanolamin wurden zu dem Rest des
ionenausgetauschten Wassers hinzu gegeben und darin unter Wärme gelöst, und
die Temperatur wurde bei 70°C
(Wasserphase) gehalten. Die anderen Inhaltsstoffe wurden gemischt,
dann unter Wärme
geschmolzen, und die Temperatur wurde bei 70°C (Ölphase) gehalten. Die Ölphase wurde
zu der Wasserphase hinzu gegeben und nach einer Voremulgierung wurde
die A-Phase hinzu gegeben und die Mischung wurde in einer homogenen
Weise mit einem Homo-Mischer emulgiert und auf 30°C abgekühlt, während sie
gründlich
gerührt
wurde.
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Beispiel
5: Emulsionsformel
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Herstellungsverfahren:
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Das
Propylenglycol wurde zu dem ionenausgetauschten Wasser hinzu gegeben
und die Mischung wurde auf 70°C
(Wasserphase) erwärmt
und dabei gehalten. Die anderen Inhaltsstoffe wurden gemischt, dann unter
Wärme geschmolzen
und die Temperatur wurde bei 70°C
(Ölphase)
gehalten. Die Ölphase
wurde nach und nach zu der Wasserphase hinzu gegeben, während Rühren ausgeführt wurde,
und die Mischung wurde in einer homogenen Weise mit einem Homo-Mischer
emulgiert und dann auf 30°C
abgekühlt,
während
sie gründlich
gerührt
wurde.
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Herstellungsverfahren
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Das
Carbomer 940 wurde in einer homogenen Weise in dem ionenausgetauschten
Wasser gelöst.
Der Cola de caballo-Extrakt in 50%-iger wäßriger Ethanol-Lösung und
der Polyoxyethylen (50-molar)-Oleylalkoholether wurden in 95%-igem
Ethanol gelöst
und diese Mischung wurde zu der Wasserphase hinzu gegeben. Die anderen
Inhaltsstoffe wurden dann hinzu gegeben, und die Mischung wurde
mit Ätznatron
und L-Arginin neutralisiert und eingedickt.
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Beispiel
7: Essenz-Formel: A-Phase
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Herstellungsverfahren:
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Die
A-Phase und die C-Phase wurden unabhängig von einander in einer
homogenen Weise gelöst
und dann wurde die A-Phase zu der C-Phase hinzugefügt und solubilisiert.
Die B-Phase wurde dann hinzu gegeben und schließlich wurden Behältnisse
gefüllt.
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Beispiel
8: Gesichtspackungsformel A-Phase
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Herstellungsverfahren
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Die
A-, B- und C-Phasen wurden unabhängig
von einander in einer homogenen Weise gelöst und dann wurde die B-Phase
zu der A-Phase hinzu gegeben und solubilisiert. Die C-Phase wurde
dann hierzu hinzu gegeben und schließlich wurden Behältnisse
gefüllt.
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Beispiel
9: Formel einer festen Grundlage
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Herstellungsverfahren
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Die
Pulver-Inhaltsstoffe, d. h. vom dem Talk bis zu dem schwarzen Eisenoxid,
wurde gründlich
durch einen Mischer gemischt, und die auf Öl basierenden Inhaltsstoffe,
d. h. von Squalen bis zu Isocetyloctat, der Cola de caballo-Ethanol-Extrakt,
das Konservierungsmittel und der Duftstoff wurden zu diesem hinzu
gegeben. Nach einem gründlichen
Kneten wurde das Produkt in ein Behältnis gefüllt und formgepreßt.
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Beispiel
10: Formel einer emulgierten Grundlage (Cremetyp) Pulveranteil
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Herstellungsverfahren
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Nach
dem Erwärmen
und Rühren
der Wasserphase wurde der gründlich
gemischte und zerkleinerte Pulveranteil zu dieser hinzu gegeben,
und die Mischung wurde mit einem Homo-Mischer behandelt. Die unter Wärme gemischte Ölphase wurde
dann zu dieser Mischung hinzu gegeben und die resultierende Mischung wurde
mit einem Homo-Mischer behandelt. Schließlich wurde der Duftstoff hinzu
gegeben, während
die Mischung gerührt
wurde, und die Temperatur wurde auf Raumtemperatur erniedrigt.
