DE69510772T2 - Verfahren zur quantifizierung von lbp in körperflüssigkeiten - Google Patents
Verfahren zur quantifizierung von lbp in körperflüssigkeitenInfo
- Publication number
- DE69510772T2 DE69510772T2 DE69510772T DE69510772T DE69510772T2 DE 69510772 T2 DE69510772 T2 DE 69510772T2 DE 69510772 T DE69510772 T DE 69510772T DE 69510772 T DE69510772 T DE 69510772T DE 69510772 T2 DE69510772 T2 DE 69510772T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- lbp
- concentration
- binding protein
- endotoxin
- lipopolysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 5
- 102000052508 Lipopolysaccharide-binding protein Human genes 0.000 claims description 159
- 108010053632 Lipopolysaccharide-binding protein Proteins 0.000 claims description 159
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 59
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 37
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 22
- 206010048998 Acute phase reaction Diseases 0.000 claims description 12
- 230000004658 acute-phase response Effects 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 2
- 229920004482 WACKER® Polymers 0.000 claims 1
- 238000013500 data storage Methods 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 1
- 102100033735 Bactericidal permeability-increasing protein Human genes 0.000 description 19
- 101000871785 Homo sapiens Bactericidal permeability-increasing protein Proteins 0.000 description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 18
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 18
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 7
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 7
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 7
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 7
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 5
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 5
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 208000024340 acute graft versus host disease Diseases 0.000 description 5
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 5
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 5
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010031801 Lipopolysaccharide Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005482 Lipopolysaccharide Receptors Human genes 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 3
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]hexanoate Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000779819 Syncarpia glomulifera Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003260 anti-sepsis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 108010065183 antilipopolysaccharide antibodies Proteins 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000005008 bacterial sepsis Diseases 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940124645 emergency medicine Drugs 0.000 description 1
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 208000027096 gram-negative bacterial infections Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001739 pinus spp. Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 229940036248 turpentine Drugs 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/821—Chemistry: analytical and immunological testing involving complement factors or complement systems
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur Bestimmung der Anwesenheit von Lipopolysaccharid-bindendem Protein (LBP) in Körperflüssigkeitsproben, einschließlich Blutproben.
- Lipopolysaccharid (LPS) ist ein gewöhnlicher Bestandteil der äußeren Membran von gram- negativen Bakterien und ist für viele der pathologischen Effekte, die mit gram-negativer bakterieller Infektion und Endotoxinämie assoziiert sind, verantwortlich. Wegen des Zusammenhangs zwischen bakterieller Infektion und Sepsis sind Versuche unternommen worden, um Serum/Plasma-Spiegel von Endotoxin mit Krankheit zu korrelieren. Typischerweise sind Endotoxin-Spiegel unter Verwendung des Limulus-Amoebocyt-Lysat (LAL)-Tests gemessen worden, bei dem Endotoxin eine Koagulierungskaskade auslöst, die physisch, turbidimetrisch oder spektrophotometrisch gemessen werden kann. Jedoch sind trotz dieser Versuche keine zuverlässigen Korrelationen zwischen Endotoxin-Spiegeln und Sepsis-Heftigkeit oder -Ergebnis identifiziert worden. Am wahrscheinlichsten ist dies auf der Tatsache begründet, daß (i) Endotoxin-Spiegel bei septischen Patienten sehr niedrig sind (> 10 pg/l), (ii) mehrere Serum-Proteine die proteolytische LAL-Kaskade stören, (iii) Endotoxin, wenn es erst einmal mit Blut in Kontakt ist, durch Wechselwirkung mit einer Vielzahl von Blutbestandteilen "detoxifiziert" werden kann, einschließlich Lipoprotein hoher Dichte (HDL) und Lipoprotein niedriger Dichte (LDL) und (iv) Endotoxin aus verschiedenen gram-negativen Organismen in seiner Fähigkeit, die LAL-Kaskade auszulösen, variiert. So kann es sein, daß die absoluten Endotoxin-Spiegel in einer Patientenprobe nicht den tatsächlichen Konzentrationen von in vivo vorliegendem bioaktiven Endotoxin entsprechen.
- Zwei verwandte Proteine sind bei Menschen und anderen Tieren identifiziert worden, die LPS mit hoher Affinität binden. Diese zwei Proteine, Lipopolysaccharid-bindendes Protein (LBP) und bakterizides/Permeabilität-erhöhendes-Protein (BPI) haben ungefähr dasselbe Molekulargewicht und teilen 45% Aminosäurehomologie, weisen jedoch ausgeprägte physiologische Unterschiede auf. LBP ist ein 60 kD-Glycoprotein, das in der Leber synthetisiert wird, während BPI in den azurophilen Granula der Neutrophilen gefunden wird. LBP wird im Serum normaler Menschen in Konzentrationen von 5-10 ug/ml gefunden, kann aber Konzentrationen von 50-100 ug/ml bei septischen Patienten erreichen. Schumann et al., Science, 249 : 1429 (1990) offenbart die Aminosäurensequenzen und codierende cDNA von sowohl menschli chem als auch Kaninchen-LBP. LBP hat, wie BPI, eine Bindungsstelle für Lipid A und bindet an das LPS von rauh(R-)- und glatt(S-)-Form-Bakterien. LBP hat, nicht so wie BPI, keine signifikante bakterizide Aktivität. Es ist beobachtet worden, daß BPI die Produktion von TNF, welche aus der Wechselwirkung von LBP mit LPS und CD14 an Monocyten und Makrophagen resultiert, neutralisiert und inhibiert. Marra et al., J. Immunol. 148 : 532 (1992), Weiss et al., J. Clin. Invest. 90 : 1122 (1992). Im Gegensatz ist beobachtet worden, daß LBP LPS-induzierte TNF-Produktion verstärkt. Wright et al., Science, 249 : 1131 (1990). So ist erkannt worden, daß LBP, im Gegensatz zu BPI ein immunstimulatorisches Molekül ist. Siehe z. B. Seilhamer, Internationale PCT-Anmeldung WO 93/06228, welche eine variante Form von LBP offenbart, die sie LBP-β nennt. Ebenso von Interesse für die vorliegende Erfindung sind Ulevitch, Internationale PCT-Anmeldung WO 91/01639, die, unter anderen Dingen, anti- LBP-Antikörper als ein therapeutisches Anti-Sepsis-Mittel offenbart, und US-Patent Nr. 5,245,013, welches LBP betrifft und Antikörper offenbart, die mit einem Polypeptid immunreagieren, das Homologie mit LBP hat.
- LBP ist auf dem Gebiet als ein "Akute-Phase-Protein" charakterisiert worden, d. h. eines vieler Plasmaproteine (wie etwa C-reaktives Protein, Fibrinogen und Serum-Amyloid A), die als Antwort auf infektiöse und nicht-infektiöse gewebedestruktive Vorgänge in Konzentration anwachsen. Daher würde es vorhergesagt, daß LBP-Spiegel in Proben aus Patienten, die an einer Zahl von Autoimmunkrankheiten leiden, wie etwa rheumatoider Arthritis und Lupus erythematodes, erhöht sein würden.
- Von Interesse für die vorliegende Erfindung sind Offenbarungen, die sich auf das Testen von BPI-Aktivität in Versuchspersonen beziehen. Von der Mohien et al., Abstract, 13th International Symposium on Intensive Care and Emergency Medicine, Brüssel (März 1993) offenbart die Resultate von Assays auf Serum-Spiegel von BPI bei Patienten mit gram-negativer Sepsis und gesunden Versuchspersonen. Die Zusammenfassung offenbart, daß kein BPI unter den Bedingungen des Assays im Serum von gesunden Versuchspersonen nachweisbar war, während zirkulierendes BPI bei allen septischen Patienten nachgewiesen wurde. Ebenso von Interesse ist die Offenbarung von mit-anhängiger US-Patentanmeldung Ser. Nr. 08/175,276, mit Mitinhaber, eingereicht am 29. Dezember 1993, die eine continuation-in-part von Anmeldung 08/125,677, eingereicht am 22. September 1993, veröffentlicht als WO 95/08773 (Europäische Patentanmeldung Nr. 94928653.8), ist. Diese Patentanmeldungen offenbaren, daß Konzentrationen von BPI in Blutplasmaproben mit der Anwesenheit oder Abwesenheit von Sepsis korrelieren, während Konzentrationen von BPI in Blutserum-Proben dies nicht tun. Die Pa tentanmeldungen lehren, daß Konzentrationen von BPI, das im Serum vorliegt, für endogene extrazelluläre Konzentrationen von BPI in zirkulierendem Blut nicht repräsentativ sind, während Konzentrationen von BPI im Plasma dies sind.
- Ebenso von Interesse für die vorliegende Erfindung sind die Offenbarungen von Leturcq et al., Keystone Tahoe Endotoxin Conference, 1.-7. März, 1992 (Abstract), in denen die Erzeugung von monoklonalen Antikörpern gegenüber menschlichem LBP berichtet wird. Ebenso berichtet wird das Screening von normalen menschlichen Serum-Proben auf die Anwesenheit von LBP. Es wurde berichtet, daß LBP-Konzentrationen für normale Serum-Proben im Bereich von 1 ug/ml bis 24 ug/ml liegen, mit einem Durchschnitt von 7 ug/ml. Weiter von Interesse ist die Offenbarung von Richard Ulevitch am American Society for Microbiology General Meeting in Atlanta, Georgia, 16. - 21. Mai (1993), bei dem Daten über Spiegel von LBP und löslichem CD14 im Serum von septischen und gesunden Individuen präsentiert wurden. Die durchschnittlichen Konzentrationen von löslichem CD14 und LBP im Serum von gesunden Erwachsenen waren 1 ug/ml bzw. 7 ug/ml. Es wurde berichtet, daß die durchschnittlichen Konzentrationen von löslichem CD14 und LBP im Serum von septischen Patienten 2 ug/ml bzw. 55 ug/ml sind.
- Geller et al., Arch. Surg., 128 : 22-28 (1993) offenbaren Experimente, in denen die Induktion von LBP-mRNA in drei Modellen studiert wurde, von denen bekannt ist, daß sie Akute- Phase-Antworten auslösen: (1) LPS-Injektion; (2) Injektion von Corynebacterium parvum; und (3) Injektion von Terpentin. Die Veröffentlichung berichtet, daß LBP-mRNA während Leberentzündung induziert wird und legt nahe, daß LBP ein Akute-Phase-Protein ist, das bei der Regulierung der in vivo-Antwort auf Endotoxin wichtig ist.
- Gallay et al., Infect. Immun., 61 : 378-383 (1993) offenbaren, daß eine Akute-Phase-Antwort bei Mäusen, denen Silbernitrat injiziert wurde, LBP-Synthese induzierte, und daß LBP- Konzentrationen annähernd zehnfach über normale Konzentrationen nach einer Akute-Phase- Antwort anwachsen.
- Auf dem Gebiet gibt es einen Wunsch nach Verfahren zum Bestimmen des Ausgesetztseins von Versuchspersonen gegenüber Endotoxin und zum Unterscheiden der Wirkungen des Ausgesetztseins gegenüber Endotoxin von anderen physiologischen Akute-Phase-Antworten. Ebenso erwünscht sind Verfahren zum Diagnostizieren der Anwesenheit oder der Heftigkeit von gram-negativer Sepsis in einer Versuchsperson und zum Vorhersagen der Prognose einer Versuchsperson, die an Sepsis leidet.
- Die vorliegende Erfindung stellt Verfahren bereit zum Bestimmen des Ausgesetztseins einer Versuchsperson gegenüber Endotoxin, indem auf LBP getestet wird. Die Erfindung stellt weiterhin Verfahren zum Screenen auf Ausgesetztsein gegenüber gram-negativem bakteriellem Endotoxin in einer Akute-Phase-Antwort bei Menschen bereit, indem auf LBP getestet wird. Insbesondere umfaßt das Verfahren die Schritte: Bestimmen der Konzentration von LBP in einer Probe von Körperflüssigkeit von der Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration von LBP mit einem Standard, welcher einen Hinweis auf das Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin gibt. Solche Standards können einen subjektiven Standard für eine gegebene Versuchsperson einschließen, der durch LBP-Spiegel dieser Versuchsperson in einem Vorbehandlungszustand, wie etwa vor einer Operation, bestimmt wird. Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin als eine Konsequenz einer solchen Operation kann bestimmt werden, indem postoperative LBP-Spiegel mit dem Standard verglichen werden, der vor der Operation für diese Versuchsperson festgesetzt wurde. Wo der Zugang zu einer Vorbehandlungs-Standard- Konzentration von LBP für ein gegebenes Individuum nicht erhältlich ist, können objektive Standards, die auf Populations- oder Subpopulations-Durchschnittswerten beruhen, zum Vergleich angewandt werden. Ein solcher Standard kann eine Konzentration sein, die größer als näherungsweise 15 ug/ml in menschlichem Plasma oder Serum ist, wie hierin für LBP-Werte bei Versuchspersonen bestimmt wurde, die an zahlreichen Krankheitszuständen leiden. Versuchspersonen, die LBP-Konzentrationen oberhalb dieses Standards aufweisen, könnten mutmaßlich als an Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin leidend diagnostiziert werden, während diejenigen mit Spiegeln unterhalb dieses Standards dies nicht würden. Es ist klar, daß alternative Standards festgesetzt werden könnten in Abhängigkeit von der erwünschten Empfindlichkeit und Selektivität eines Assay-Verfahrens und von der Subpopulation, in die eine gegebene Versuchsperson fällt. Z. B. könnten Standards bei verschiedenen Konzentrationen festgesetzt werden für verschiedene Alter, Geschlechter, ethnische Herkünfte und zugrundeliegende Gesundheitsbedingungen verschiedener Subpopulationen. Darüberhinaus sollte verstanden werden, daß sich Standard-Konzentrationen entsprechend der Identität der individuellen Körperflüssigkeit, die getestet wird, unterscheiden werden.
- Weiterhin stellt die Erfindung Verfahren zum Diagnostizieren einer Versuchsperson bereit, die die Schritte umfassen: Bestimmen der Konzentration von LBP in einer Probe von Körperflüssigkeit von der Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration von LBP mit einem Standard, der auf die Anwesenheit oder Heftigkeit von Sepsis hinweist. Weiterhin stellt die Erfindung Verfahren zur Vorhersage der Prognose einer Versuchsperson bereit, welche die Schritte umfassen: Bestimmen der Konzentration von LBP in einer Probe von Körperflüssigkeit von der Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration von LBP mit einem Standard, der auf die Prognose einer Versuchsperson hinweist, die an Sepsis leidet.
- Fig. 1 zeigt die Dosis-Anwort-Kurven für rLBP, rLBP&sub2;&sub5;, rBPI und rBPI&sub2;&sub3; bei LBP-Sandwich- Assays;
- Fig. 2 stellt die LBP-Spiegel (Mittelwert ± Standardfehler) im Plasma gesunder menschlicher Versuchspersonen und menschlicher Versuchspersonen, die an verschiedenen Krankheitszuständen leiden, dar;
- Fig. 3 stellt die LBP-Spiegel (Mittelwert ± Standardfehler) bei gesunden Versuchspersonen dar, die mit LPS behandelt wurden;
- Fig. 4 stellt vergleichendes Überleben bei Patienten dar, bei denen eine gram-negative Sepsis vermutet wird, und die klassifiziert worden sind, entweder hohe oder niedrige Spiegel von Plasma-LBP zu haben; und
- Fig. 5a-5c stellen LBP-, C-reaktives Protein(CRP)- und Fibrinogen-Spiegel (Mittelwert ± Standardfehler) bei gesunden, rheumatoid-arthritischen und septischen Versuchspersonen dar.
- Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zum Quantifizieren des Vorhandenseins von LBP in Körperflüssigkeiten, einschließlich Blut. Während der Assay verwendet werden kann, um die Anwesenheit und Quantität von LBP zu bestimmen, das therapeutisch verabreicht worden ist, ist er insbesondere nützlich zum Quantifizieren der Anwesenheit von endogenem LBP in zirkulierendem Blut als ein Hinweis auf das Ausgesetztsein einer Versuchsperson gegenüber Endotoxin. Darüberhinaus wird in Erwägung gezogen, daß Quantifizieren des Vorhandenseins von LBP bei diagnostischen und prognostischen Verfahren zum Bewerten von Patienten mit gram-negativer Sepsis nützlich ist.
- Die vorliegende Erfindung stellt einen Sandwich-ELISA-Assay für menschliches LBP bereit, der hohe Assay-Empfindlichkeit, hohe Spezifität und exzellente Reproduzierbarkeit aufweist. Wie hierin verwendet, schließt "LBP", das gemäß Assay-Verfahren quantifiziert worden ist, natives LBP, rekombinantes LBP, LBP-Fragmente und -Analoge sowie andere LBP-Proteine und -Proteinprodukte ein.
- Die Aminosäuren- und Nukleotid-Sequenz von rekombinantem LBP sind in mit-anhängiger US-Patentanmeldung Ser. Nr. 08/079,510, mit Mitinhaber, eingereicht am 17. Juni 1993, veröffentlicht als WO 95/00641 (PCT/U594/06931), wie in SEQ ID NO: 1 und 2 hierin gezeigt, dargelegt. Ein rekombinantes aminoterminales LBP-Fragment wird durch die Aminosäuresequenz der ersten 197 Aminosäuren des Aminoterminus von LBP charakterisiert, wie in SEQ ID NO: 3 und 4 dargelegt, deren Herstellung in mit-anhängiger US-Patentanmeldung Ser. Nr. 08/079,510, mit Mitinhaber, eingereicht am 17. Juni 1993, veröffentlicht als WO 95/00641 (PCT/US94/06931), beschrieben ist. Solche LBP-Proteinprodukte können leicht quantifiziert werden, wobei Assays, einschließlich immunologischer Assays und Bioassays im Sub- Nanogramm-pro-ml-Bereich verwendet werden. Immunologische Assays, die in der Lage sind, LBP zu quantifizieren, werden bevorzugt mit Enzym-gebundenen immunosorbierenden (ELISA) Sandwich-Assays durchgeführt, aber Kompetitions-Assays und immunologische Assays, die andere Markierungsformate benutzen, können ebenso verwendet werden. Bevorzugte Assays der Erfindung benützen anti-LBP-Antikörper, einschließlich monoklonaler Antikörper und affinitätsgereiniger polyklonaler Kaninchen-Antikörper. Polyklonale Kaninchen- anti-LBP-Antikörper können gemäß konventioneller Methoden unter Verwendung von LBP als ein Immunogen hergestellt werden. Nicht-immunologische Verfahren können ebenso verwendet werden, um auf LBP zu testen. Als ein Beispiel offenbaren Ulevitch et al., US-Patent Nr. 5,245,013 Assay-Verfahren, die Bindung von LBP an LPS und Trennung des Komplexes durch eine Zentrifugations-Dichtegradienten-Methode umfassen. Als ein anderes Beispiel offenbaren Geller et al., Arch. Surg. 128 : 22-28 (1993) LBP-Bioaktivitäts-Assays, bei denen die Hochregulierung von IL-6 und TNF gemessen werden.
- Körperflüssigkeiten, die auf die Anwesenheit von LBP getestet werden können, schließen Vollblut ein, wobei Blutserum und Blutplasma bevorzugt sind. Da LBP ein Serumprotein ist, wird erwogen, daß es ausgeschieden werden könnte, und daß Analyse der LBP-Spiegel im Urin diagnostische und prognostische Nützlichkeit bereitstellen könnte. Die LBP- Immunassays der Erfindung können ebenso verwendet werden, um die Konzentration von LBP in anderen Körperflüssigkeiten zu bestimmen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Lungen-Spülungen, Glaskörperflüssigkeit, Crevicular-Flüssigkeit, Cerebrospinal-Flüssigkeit, Speichel und Synovialflüssigkeit.
- Da LBP als ein "Akute-Phase-Protein" charakterisiert worden ist, würde man erwarten, daß LBP-Spiegel bei Personen, die an Autoimmunkrankheiten leiden, erhöht wären. Als ein Aspekt der vorliegenden Erfindung ist gefunden worden, daß LBP-Konzentrationen im allgemeinen nicht über normal erhöht sind bei Versuchspersonen, die an akuter Lymphoblastenleukämie (ALL), akuter Transplantat-gegen-Empfänger-Reaktion (aGvHD), chronischer Lymphozytenleukämie (CLL), cutanem T-Zell-Lymphom (CTCL), Typ-1-Diabetes, aplastischer Anämie (AA), Crohnscher Krankheit, Psoriasis, rheumatoider Arthritis (RA), Sklerodermie und systemischem Lupus erythematodes (SLE) leiden.
- Gewisse Versuchspersonen, die versuchsweise als an gram-negativer Sepsis leidend identifiziert wurden, letztendlich aber als an gram-positiver Sepsis leidend identifiziert wurden, hatten ebenso erhöhte LBP-Spiegel. Es wird festgestellt, daß Translokation von Bakterien und/oder Endotoxin aus dem Darm in den Blutstrom bei jeder Infektion stattfinden kann. So können Infektionen aufgrund von gram-positiven Bakterien oder Fungi ebenso zur Anwesenheit von Endotoxin oder gram-negativen Bakterien im Blut und deshalb zu erhöhten Konzentrationen an LBP führen.
- Die vorliegende Erfindung basiert teilweise auf der Beobachtung, daß Serum- und Plasma- Spiegel von LBP direkt mit dem Ausgesetztsein einer Versuchsperson gegenüber biologisch aktivem LPS korrelieren. Darüberhinaus scheinen LBP-Spiegel mit dem Überleben bei Patienten mit vermuteter gram-negativer Sepsis zu korrelieren. Z. B. tendierten Versuchspersonen mit Konzentrationen von zirkulierendem LBP unter 27,3 ug/ml (dem Mittelwert für 58 Versuchspersonen, die an gram-negativer Sepsis litten) dazu, einen größeren Überlebenswert über 14 Tage zu haben als diejenigen Versuchspersonen mit Konzentrationen von LBP oberhalb dieses Mittelwerts. Weiterhin hatten, wenn z. B. eine Plasma-LBP-Schwellenkonzentration auf 46 ug/ml gesetzt worden war, diejenigen Versuchspersonen mit einer Vorbehandlungs-LBP- Plasmakonzentration von weniger als 46 ug/ml eine signifikant größere Überlebensrate (p = 0,004) über eine 27-Tage-Periode als diejenigen Versuchspersonen mit einer Vorbehandlungs-Plasma-LBP-Konzentration größer als 46 ug/ml.
- Weiterhin wird von der Erfindung in Erwägung gezogen, daß erhöhte Konzentrationen von LBP aus dem Ausgesetztsein gegenüber größeren Mengen an Endotoxin resultieren können und deshalb diagnostisch für eine größere Infektion und/oder Endotoxinämie-Heftigkeit sein können. Erhöhte Konzentrationen an LBP können ebenso verwendet werden, um die Eignung der Verwendung von gegen gram-negative Bakterien gerichteten Antibiotika oder anderer therapeutischer, direkt gegen Endotoxin, wie etwa BPI, gerichteter Mittel, oder von anti- Endotoxin-Antikörpern, einschließlich des monoklonalen Antikörpers E5, anzuzeigen.
- Andere Gesichtspunkte und Vorteile der vorliegenden Erfindung werden bei Betrachtung der folgenden erläuternden Beispiele verstanden werden. Beispiel 1 betrifft die Herstellung von affinitäts-aufgereinigten Kaninchen-anti-BPI-Antikörpern; Beispiel 2 betrifft die Biotin- Markierung von solchen Antikörpern; und Beispiel 3 betrifft die ELISA-Prozeduren, die solche Antikörper verwenden. Beispiel 4 betrifft die vergleichende Immunreaktivität von rLBP, rLBP&sub2;&sub5;, rBPI und rBPI&sub2;&sub3;. Beispiel 5 betrifft die Messung von rLBP, das vereintem menschlichen Plasma zugegeben wurde; und Beispiel 6 betrifft den Vergleich von LBP-Spiegeln in menschlichem Plasma und Serum. Beispiel 7 betrifft die klinischen Korrelationen von endogener LBP-Immunreaktivität mit Sepsis und anderen Krankheitszuständen im menschlichen Plasma; und Beispiel 8 betrifft die Wirkung von LPS-Verabreichung auf endogene LBP- Spiegel in gesunden Versuchspersonen. Beispiel 9 betrifft klinische Korrelationen zwischen Plasma-LBP-Spiegeln und dem Überleben in Patienten mit vermuteter gram-negativer Sepsis; und Beispiel 10 betrifft klinische Korrelationen von Akute-Phase-Proteinen bei gesunden, rheumatoid-arthritischen und septischen Patienten.
- Gemäß diesem Beispiel wurde affinitäts-aufgereinigter Kaninchen-anti-rLBP-Antikörper hergestellt. Insbesondere wurde rLBP (20 mg), hergestellt gemäß mit-anhängiger US- Patentanmeldung Ser. Nr. 08/079,510, mit Mitinhaber, eingereicht am 17. Juni 1993, veröffentlicht als WO 95/00641 (PCT/US94/06931), an 10 ml Cyanogenbromid-aktivierter Sepharose 4B (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) in 0,2 M Bicarbonat, pH 8,6, das 0,5 NaCl enthielt, gekoppelt. Annähernd 94% des rLBP war an das Harz gekoppelt. Vereinte Antiseren (125 ml) aus zwei Kaninchen, die anfänglich mit rLBP&sub2;&sub5;, das gemäß den Methoden von US- Patentanmeldung Ser. Nr. 08/079,510, eingereicht am 17. Juni 1993, veröffentlicht als WO 95/00641 (PCT/U594/06931) hergestellt war, und danach mit rLBP immunisiert waren, wurden mit einem gleichen Volumen Phosphat-gepufferter Salzlösung, pH 7,2 (PBS), verdünnt. Eine Portion (50 ml) der verdünnten Antiseren wurde über die 10 ml rLBP-Sepharose-Säule geführt; die Säule wurde dann mit PBS gewaschen, und gebundene Antikörper wurden mit 0,1 M Glycin, pH 2,5, eluiert. Gesammelte Fraktionen wurden sofort mit 1 M Phosphat- Puffer, pH 8,0 neutralisiert. Peak-Frakionen wurden durch Messen der Extinktion bei 280 nm gemäß dem Verfahren von Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboatory Press, New York, S. 312 (1988) identifiziert. Nach mehreren sequentiellen Säulen-Zyklen wurde der affinitäts-aufgereinigte Kaninchen-anti-LBP-Antikörper gegen PBS-Azid, pH 7,2, dialysiert.
- In diesem Beispiel wurden 20 mg affinitäts-aufgereinigter Kaninchen-anti-rLBP-Antikörper, hergestellt gemäß dem Verfahren nach Beispiel 1, mit 1 mg Biotinamidocaproat-N- Hydroxysuccinimidester (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) in 11 ml 0,1 M Natriumbicarbonat, pH 8,3 für zwei Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Nicht-konjugiertes Biotin wurde entfernt, und der alkalische Puffer durch Fraktionierung des Reaktionsgemisches auf einer PD-10 Säule (Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NT), die mit PBS äquilibriert worden war, das 0,1% Natriumazid enthielt, ausgetauscht.
- 50 Mikroliter von affinitäts-aufgereinigtem Kaninchen-anti-rLBP-Antikörper (2 ug/ml in PBS) wurden über Nacht bei 2-8ºC inkubiert (oder alternativ eine Stunde bei 37ºC) in den Näpfen von Immulon-2- (Dynatech Laboratories Inc., Chantilly, VA)- Mikrotiterplatten. Die Antikörper-Lösung wurde entfernt, und 200 ul 1% fettfreier Milch in PBS (Blockierungsmittel) wurde allen Näpfen zugegeben. Nach Blockieren der Platten für eine Stunde bei Zimmertemperatur wurden die Näpfe dreimal mit 300 ul Waschpuffer (PBS/0,05% Tween-20) gewaschen.
- Standards, Proben und Kontrollen wurden in dreifacher Ausfertigung mit PBS, das 1% bovines Serumalbumin, 0,05% Tween-20 (PBS-BSA/Tween) und 10 Einheiten/ml Heparin- Natrium (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) enthielt, in separaten Platten mit 96 Näpfen verdünnt. rLBP oder rLBP&sub2;&sub5;-Standard-Lösungen wurden als serielle Zweifach-Verdünnungen von 100 auf 0,012 mg/ml hergestellt. Jedes Replikat und Verdünnung der Standards, Proben und Kontrollen (50 ul) wurde auf die blockierten Mikrotiter-Platten übertragen und für eine Stunde bei 37ºC inkubiert. Nach der Primär-Inkubation wurden die Näpfe dreimal mit Waschpuffer gewaschen. Biotin-markierter Kaninchen-anti-LBP-Antikörper wurde 1/2000 in PBS-BSA/Tween verdünnt, und 50 ul wurde allen Näpfen zugegeben. Die Platten wurden dann für eine Stunde bei 37ºC inkubiert. Darauffolgend wurden alle Näpfe dreimal mit Waschpuffer gewaschen. Mit alkalischer Phosphatase markiertes Streptavidin (Zymed Laboratories Inc., San Francisco, CA) wurde 1/2000 in PBS-BSA/Tween verdünnt, und 50 ul wurde allen Näpfen zugefügt. Nach Inkubation für 15 Minuten bei 37ºC wurden alle Näpfe dreimal mit Waschpuffer gewaschen und dreimal mit entionisiertem Wasser, und das chromogene Substrat p-Nitrophenylphosphat (1 mg/ml) in 10% Diethanolamin-Puffer) wurde in einem Volumen von 50 ul allen Näpfen zugegeben. Farbentwicklung ließ man für eine Stunde bei Zimmertemperatur fortschreiten, wonach 50 uL 1 M NaOH zugegeben wurde, um die Reaktion zu stoppen. Die Extinktion bei 405 nm wurde für alle Näpfe bestimmt, unter Verwendung eines Vmax Plate Reader (Molecular Devices Corp., Menlo Park, CA).
- Die mittlere Extinktion bei 405 nm (A&sub4;&sub0;&sub5;) für alle Proben und Standards (in dreifacher Ausfertigung) wurden auf Hintergrund korrigiert, indem die mittlere A&sub4;&sub0;&sub5; der Näpfe abgezogen wurde, die nur Proben-Verdünnungspuffer (kein LBP) im Primär-Inkubationsschritt empfingen. Eine Standardkurve wurde dann als A&sub4;&sub0;&sub5; gegen ng/ml von rLBP oder rLBP&sub2;&sub5; aufgezeichnet. Der lineare Bereich wurde ausgewählt, eine lineare Regressionsanalyse wurde durchgeführt, und Konzentrationen wurden bestimmt für Proben und Kontrollen durch Interpolierung aus der Standardkurve.
- In diesem Beispiel wurde die Immunreaktivität von rLBP, rLBP&sub2;&sub5;, rBPI und rBPI&sub2;&sub3; in dem BPI-Sandwich-ELISA verglichen, um mögliche immunologische Kreuzreaktivität zu bestimmen. Trotz beträchtlicher Sequenz-Homologie zwischen LBP und PBI (siehe z. B. Schumann et al., Science, 249 : 1429 (1990)), zeigen die in Fig. 1 veranschaulichten Beispiele, daß, auf einer Massen-Basis, rBPI&sub2;&sub3; ein Signal produzierte, das annähernd drei Größenordnungen geringer als das von rLBP&sub2;&sub5; und rLBP war, während rBPI ein Signal produzierte, das annähernd fünf Größenordnungen geringer als das von rLBP und rLPB&sub2;&sub5; war. Z. B. erzeugte eine Konzentration von 100.000 ng/ml (100 ug/ml) rBPI oder 400 ng/ml rBPI&sub2;&sub3; ein Signal, das gleich dem war, welches durch 0,8 ng/ml rLBP oder 0,4 ng/ml rLBP&sub2;&sub5; erzeugt wurde. Diese Resultate demonstrieren minimale Kreuzreaktivität des Antikörpers mit BPI und bestätigen die Spezifität des Assays für LBP.
- In diesem Beispiel wurde die Wiedergewinnung von rLBP in menschlichen Blutflüssigkeiten bewertet, indem vereintes menschliches Plasma, das mit verschiedenen Konzentrationen an rLBP versehen und dann gefroren und vor Messung in dem Sandwich-ELISA aufgetaut wurde, untersucht wurde. Wiedergewinnung des zugesetzten LBP wurde definiert als die Menge von LBP, die in den damit versehenen menschlichen Plasmaproben gemessen wurde, minus der Konzentration in der nicht damit versehenen Kontrolle, geteilt durch die tatsächliche Menge, die der Probe zugesetzt worden war. Der wiedergewonnene Bruchteil wurde mit 100 multipliziert, und die Resultate wurden als Prozent der eingegebenen Konzentration ausgedrückt. Wiedergewinnung verschiedener Konzentrationen von rLBP, das vereinten menschlichen Plasmaproben zugesetzt worden war, war im Durchschnitt 68% und reichte von 59% bei 42 ug/ml zu 78% bei 168 ug/ml. Tabelle I faßt die Wiedergewinnungsdaten für jede Plasmaprobe, der LBP zugesetzt worden war, zusammen. TABELLE I Wiedergewinnung von rLBP, das vereintem, mit Citrat versehenen menschlichen Plasma zugesetzt worden war
- Gemäß diesem Beispiel wurden Konzentrationen von LBP im Serum und Plasma von gesunden Versuchspersonen getestet und verglichen, wobei der Sandwich-ELISA-Assay nach Beispiel 3 benutzt wurde. Es wurde gefunden, daß Plasma-Konzentrationen von LBP im wesentlichen die selben wie die Serum-Konzentrationen für LBP waren, wenn das Plasmavolumen auf Verdünnung korrigiert wurde (Division durch einen Faktor von 0,85), die aus der Zugabe eines Anti-Koagulans resultierte. Es wurde gefunden, daß Plasma-Konzentrationen bei normalen menschlichen Versuchspersonen 3,1 ug/ml (S. D. 0,9 ug/ml) waren oder 3,7 ug/ml (S. D. 1,1 ug/ml) korngiert, verglichen mit 3,7 ug/ml (S. D. 0,9 ug/ml) für Serum.
- In diesem Beispiel wurde endogene LBP-Immunreaktivität in menschlichen Plasma- oder Serumproben gemessen, die aus einer Vielzahl von Versuchspersonen gesammelt worden waren, die an gram-negativer Sepsis und einer Vielzahl von anderen klinischen Zuständen litten. Insbesondere wurden Plasma-Proben gesunder Individuen (30 Versuchspersonen) und Individuen, die mit gram-negativer Sepsis diagnostiziert worden waren (363 Versuchspersonen) auf LBP-Konzentrationen getestet. Serumproben von Individuen mit akuter Lymphoblastenleukämie (ALL) (6 Versuchspersonen); akuter Transplantat-gegen-Empfänger-Reaktion (aGvHD) (8 Versuchspersonen); chronischer Lymphocytenleukämie (CHL) (9 Versuchspersonen); cutanem T-Zell-Lymphom (CTCL) (12 Versuchspersonen); Typ-1-Diabetes (13 Versuchspersonen); aplastischer Anämie (AA (16 Versuchspersonen); Crohnscher Krankheit (8 Versuchspersonen); Psoriasis (13 Versuchspersonen); rheumatoider Arthritis (RA) (86 Versuchspersonen); Sklerodermie (4 Versuchspersonen) und systemischem Lupus erythematodes (SLE) (10 Versuchspersonen) wurden auf LBP-Konzentrationen getestet. Die Resultate sind in Fig. 2 gezeigt.
- Während LBP-Spiegel bei Versuchspersonen, die als an gram-negativer Sepsis leidend diagnostiziert worden waren, erhöht waren, wurde gefunden, daß LBP-Spiegel nicht über normal erhöht waren bei Versuchspersonen, die an akuter Lymphoblastenleukämie, akuter Transplantat-gegen-Empfänger-Reaktion, chronischer Lymphozytenleukämie, cutanem T-Zell- Lymphom, Typ-1-Diabetes, aplastischer Anämie, Crohnscher Krankheit, Psoriasis, rheuma toider Arthritis, Sklerodermie und systemischem Lupus erythematodes (SLE) litten. Entsprechend ist der LBP-Assay der Erfindung wertvoll zum Unterscheiden von Zuständen, die mit Endotoxin assoziiert sind, von anderen Akute-Phase-Zuständen (wie etwa RA, SLE und ähnlichen).
- In diesem Beispiel wurde die Wirkung von LPS-Verabreichung auf endogene LBP- Immunreaktivität bei gesunden menschlichen Versuchspersonen bestimmt. Insbesondere wurden gesunde Versuchspersonen unter Verwendung des LBP-Sandwich-Assays auf Veränderungen der LBP-Plasma-Konzentrationen überwacht zu verschiedenen Zeitpunkten nach intravenöser Verabreichung von 4 ng/kg LPS (16 Versuchspersonen) oder bei Kontroll- Versuchspersonen (2), welche nicht LPS empfingen. Die in Fig. 3 illustrierten Resultate zeigen die Veränderung der mittleren Plasma-LBP-Konzentration mit der Zeit. Für die Versuchspersonen, die mit LPS behandelt worden waren, begannen die LBP-Spiegel ungefähr 6 Stunden nach LPS-Verabreichung anzusteigen. Spitzen-LBP-Plasma-Konzentrationen wurden bei den meisten Versuchspersonen zwischen 10 bis 12 Stunden nach der LPS-Verabreichung beobachtet. Der durchschnittliche Anstieg von Grundlinien- zu Spitzen-LBP-Konzentration war näherungsweise dreifach. Über diese Zeitperiode verblieben die mittleren LBP- Konzentrationen bei den Kontroll-Versuchspersonen innerhalb eines normalen Bereichs (annähernd 5 ug/ml).
- Es wird erwogen, daß zusätzliche Analyse die Korrelation zwischen LBP-Spiegeln in Körperflüssigkeiten mit den Symptomen des Ausgesetztseins gegenüber Endotoxin illustrieren wird, und daß LBP-Spiegel diagnostisch und prognostisch für Krankheitszustände sein werden, die aus dem Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin resultieren.
- Es wird erwogen, daß zusätzliche Analyse die Korrelation von LBP-Spiegeln mit Symptomen von bakteriellen Infektionen, Endotoxinämie und Sepsis, einschließlich Sepsis-assoziierter Zustände, einschließlich disseminierter intravaskulärer Koagulierung (DIC) und akuten Atemnotsyndroms (ARDS) illustrieren wird.
- Korrelationen zwischen Plasma-LBP-Spiegeln und Überleben bei Patienten mit vermuteter gram-negativer Sepsis wurden verglichen unter Verwendung von Daten, die bei den septischen Versuchspersonen, welche in Beispiel 7 beschrieben worden sind, erhalten worden waren. In diesem Fall wurde eine Standard-LBP-Konzentration auf 46 ug/ml festgesetzt, und Patienten mit vermuteter gram-negativer Sepsis wurden klassifiziert als mit entweder hohen (> 46 ug/ml) oder niedrigen (< 46 ug/ml) LBP-Plasma-Spiegeln, wie gemessen in den Vorbehandlungsproben. Wie in den in Fig. 4 präsentierten Daten gezeigt wird, hatten die Versuchspersonen mit niedrigen Vorbehandlungs-Plasma-Spiegeln von LBP eine signifikant größere Überlebensrate (p = 0,004) über eine 27-Tage-Periode als die Versuchspersonen mit einem hohen Vorbehandlungs-Plasma-LBP-Spiegel. Diese Daten zeigen die Nützlichkeit, LBP- Spiegel zu testen und sie mit einem Standard-LBP-Wert zu vergleichen, um die Prognose von Patienten, die an Sepsis leiden, vorherzusagen.
- Plasma-Spiegel von LBP, C-reaktivem Protein (CRP) und Fibrinogen wurden in kleinen Gruppen von gesunden, rheumatoid-arthritischen und septischen Patienten gemessen, mit den Resultaten, die in Fig. 5a (LBP-Spiegel), 5b (CRP-Spiegel) und 5c (Fibrinogen-Spiegel) gezeigt sind. Die Resultate zeigen, daß, bezüglich gesunder Versuchspersonen, mittlere Fibrinogen-Spiegel annähernd 2,5-fach erhöht waren für sowohl rheumatoid-arthritische als auch septische Versuchspersonen. Bezüglich gesunder Versuchspersonen wurde gefunden, daß mittlere CRP-Konzentrationen annähernd 40-fach erhöht waren für rheumatoid-arthritische Versuchspersonen und 200-fach für septische Versuchspersonen. Im Gegensatz hierzu und konsistent mit den Resultaten in Beispiel 7 waren die mittleren LBP-Konzentrationen nur geringfügig erhöht (weniger als 2-fach) für rheumatoid-arthritische Versuchspersonen, während die mittleren LBP-Konzentrationen mehr als 6-fach für septische Versuchspersonen erhöht waren.
- Die Begriffe Sepharose, Immulon und Tween, die hierin verwendet werden, sind alle registrierte Handelsmarken.
- Es wird erwartet, daß zahlreiche Modifikationen und Variationen bei der Ausübung der Erfindung Fachleuten bei Betrachtung der vorhergehenden Beschreibung der gegenwärtig bevorzugten Ausführungsformen einfallen werden. Demzufolge sind die einzigen Beschränkungen, die dem Schutzumfang der vorliegenden Erfindung auferlegt werden sollten, die, welche in den angehängten Ansprüchen erscheinen.
Claims (21)
1. Ein Verfahren zum Diagnostizieren von Ausgesetztsein einer Versuchsperson gegenüber
Endotoxin, welches die Schritte umfaßt: Bestimmen der Konzentration von
Lipopolysaccharid-bindendem Protein (LBP) in einer Probe von Körperflüssigkeit von der
Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration von LBP mit einem Standard, welcher
einen Hinweis auf das Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin gibt, wobei eine LBP-
Konzentration oberhalb des Standards mutmaßlich diagnostisch dafür ist, daß die
Versuchsperson ein Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin erleidet, während eine
Konzentration unterhalb des Standards dies nicht ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Standard eine Konzentration ist, die größer als die
LBP-Konzentration für besagte Versuchsperson ist, die während einer
Vorbehandlungsperiode untersucht wurde.
3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin auf eine
Infektion oder einen Endotoxin-Krankheitszustand hinweist.
4. Verfahren nach Anspruch 3, wobei das Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin auf Sepsis,
einschließlich Sepsis-assoziierter Zustände, hinweist.
5. Verfahren nach Anspruch 3, wobei ein erhöhter Spiegel von Lipopolysaccharid-
bindendem Protein auf stärkere Infektion und/oder Heftigkeit der Endotoxinämie
hinweist.
6. Verfahren nach Anspruch 5, wobei ein erhöhter Spiegel von Lipopolysaccharid-
bindendem Protein verwendet werden kann, um die Eignung der Verwendung von gegen
gram-negative Bakterien gerichteten Antibiotika oder anderer, direkt auf Endotoxin
zielender therapeutischer Mittel anzuzeigen.
7. Verfahren nach Anspruch 3, wobei der Standard eine Konzentration ist, die größer als die
LBP-Konzentration für besagte Versuchsperson ist, die während einer Periode vor
Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin untersucht wurde.
8. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der Standard eine Konzentration ist, die größer als die
LBP-Konzentration für besagte Versuchsperson ist, die während einer Periode vor
Erleiden von Sepsis oder einem anderen Sepsis-assoziierten Zustand untersucht wurde.
9. Ein Verfahren zum Bestimmen der Prognose einer Versuchsperson, welches die Schritte
umfaßt: Bestimmen der Konzentration von Lipopolysaccharid-bindendem Protein in einer
Probe von Körperflüssigkeit von der Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration
von Lipopolysaccharid-bindendem Protein mit einem Standard, der auf einen
Krankheitszustand hinweist, welcher aus dem Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin
resultiert.
10. Verfahren nach Anspruch 9, wobei das Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin auf Sepsis
hinweist, zum Bestimmen der Prognose einer Versuchsperson, welches die Schritte
umfaßt: Bestimmen der Konzentration von Lipopolysaccharid-bindendem Protein in einer
Probe von Körperflüssigkeit von der Versuchsperson und Korrelieren der Konzentration
von Lipopolysaccharid-bindendem Protein mit einem Standard, der auf Sepsis,
einschließlich Sepsis-assoziierter Zustände, hinweist.
11. Verfahren nach Anspruch 9 oder 10, wobei ein erhöhter Spiegel von Lipopolysaccharid-
bindendem Protein auf ungünstige Prognose hinweist.
12. Verfahren nach Anspruch 9, wobei der Standard eine Konzentration ist, die größer als die
LBP-Konzentration für besagte Versuchsperson ist, die während einer Periode vor
Ausgesetztsein gegenüber Endotoxin untersucht wurde.
13. Verfahren nach Anspruch 10, wobei der Standard eine Konzentration ist, die größer als
die LBP-Konzentration für besagte Versuchsperson ist, die während einer Periode vor
Erleiden von Sepsis oder einem anderen Sepsis-assoziierten Zustand untersucht wurde.
14. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei besagte Probe eine Blutprobe
ist.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 13, wobei besagte Probe eine Plasma- oder
Serumprobe ist.
16. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Konzentration von
Lipopolysaccharid-bindendem Protein mittels eines Immunassays bestimmt wird.
17. Verfahren nach Anspruch 16, wobei der Immunassay ein Sandwich-Immunassay ist.
18. Ein Verfahren zum Screenen auf Ausgesetztsein gegenüber gram-negativem bakteriellem
Endotoxin in einer Akute-Phase-Antwort bei Menschen, welches umfaßt:
(a) Messen des Spiegels von Lipopolysaccharid-bindendem Protein im Blutkreislauf einer
menschlichen Versuchsperson, und
(b) Vergleichen des Spiegels von Lipopolysaccharid-bindendem Protein, der in Schritt (a)
bestimmt worden ist, mit Spiegeln von Lipopolysaccharid-bindendem Protein im
Blutkreislauf bei normalen Versuchspersonen, wobei erhöhte Spiegel von
Lipopolysaccharid-bindendem Protein auf eine Akute-Phase-Antwort hinweisen,
welche gram-negatives bakterielles Endotoxin einbezieht.
19. Verfahren nach Anspruch 18, wobei die Akute-Phase-Antwort mit Sepsis assoziiert ist.
20. Ein Verfahren zum Screenen auf Beteiligung von gram-negativem bakteriellem Endotoxin
an einer Akute-Phase-Antwort bei Menschen, welches umfaßt:
(a) In-Kontakt-Bringen einer Blutprobe von einer Versuchsperson, die eine Akute-Phase-
Antwort aufweist, mit einem spezifischen Bindungspartner für Lipopolysaccharid-
bindendes Protein,
(b) Bestimmen des Spiegels von Lipopolysaccharid-bindendem Protein in besagter
Blutprobe, und
(c) Vergleichen des Spiegels von Lipopolysaccharid-bindendem Protein, der in Schritt (b)
bestimmt worden ist, mit Spiegeln von Lipopolysaccharid-bindendem Protein im
Kreislauf bei normalen Versuchspersonen, wobei erhöhte Spiegel von
Lipopolysaccharid-bindendem Protein auf eine Akute-Phase-Antwort hinweisen,
welche gram-negatives bakterielles Endotoxin einbezieht.
21. Verfahren nach Anspruch 20, wobei die Akute-Phase-Antwort mit Sepsis assoziiert ist.
SEQUENZPROTOKOLL
(1) ALLGEMEINE ANGABEN:
(i) ANMELDER: XOMA CORPORATION
(ii) BEZEICHNUNG DER ERFINDUNG: Verfahren zur Quantifizierung von LBP in
Körperflüssigkeiten
(iii) ANZAHL DER SEQUENZEN: 4
(iv) KORRESPONDENZANSCHRIFT:
(A) EMPFÄNGER: Marshall, O'Toole, Gerstein, Murray & Borun
(B) STRASSE: 6300 Sears Tower, 233 South Wacker Drive
(C) ORT: Chicago
(D) STAAT: Illinois
(E) LAND: USA
(F) POSTLEITZAHL: 60606-6402
(v) COMPUTERLESBARE FASSUNG:
(A) DATENTRÄGER: Floppy-Diskette
(B) COMPUTER: IBM-PC-kompatibel
(C) BETRIEBSSYSTEM: PC-DOS/MS-DOS
(D) SOFTWARE: PatentIn Release 1.0, Version 1.25
(vi) DATEN DER JETZIGEN ANMELDUNG:
(A) ANMELDENUMMER:
(B) ANMELDETAG:
(C) KLASSIFIKATION:
(viii) INFORMATION ZUM ANWALT:
(A) NAME: Sharp, Jeffrey S.
(B) REGISTRIERNUMMER: 31,879
(C) REFERENZ/AKTENZEICHEN: 27129/31843
(ix) INFORMATION ZUR TELEKOMMUNIKATION:
(A) TELEFON: 312/474-6300
(B) TELEFAX: 312/474-0448
(C) TELEX: 25-3856
(2) ANGABEN ZU SEQ ID NO: 1:
(i) SEQUENZKENNZEICHEN:
(A) LÄNGE: 1443 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzelstrang
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNA
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 1..1443
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: mat_pepfide
(B) LAGE: 76..1443
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: misc_feature
(D) SONSTIGE ANGABEN: "rLBP"
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 1:
(2) ANGABEN ZU SEQ ID NO: 2:
(i) SEQUENZKENNZEICHEN:
(A) LÄNGE: 481 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: misc_feature
(D) SONSTIGE ANGABEN: "rLBP"
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 2:
(2) ANGABEN ZU SEQ ID NO: 3:
(i) SEQUENZKENNZEICHEN:
(A) LÄNGE: 591 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzelstrang
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNA
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 1..591
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: misc_feature
(D) SONSTIGE ANGABEN: "rLBP25"
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 3:
(2) ANGABEN ZU SEQ ID NO: 4:
(i) SEQUENZKENNZEICHEN:
(A) LÄNGE: 197 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(ix) MERKMAL:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: misc_feature
(D) SONSTIGE ANGABEN: "rLBP25"
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 4:
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/186,811 US5484705A (en) | 1994-01-24 | 1994-01-24 | Method for quantifying lipopolysaccharide binding protein |
| PCT/US1995/000982 WO1995020163A1 (en) | 1994-01-24 | 1995-01-24 | Method for quantifying lbp in body fluids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE69510772D1 DE69510772D1 (de) | 1999-08-19 |
| DE69510772T2 true DE69510772T2 (de) | 1999-11-11 |
Family
ID=22686373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE69510772T Expired - Lifetime DE69510772T2 (de) | 1994-01-24 | 1995-01-24 | Verfahren zur quantifizierung von lbp in körperflüssigkeiten |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5484705A (de) |
| EP (1) | EP0741870B1 (de) |
| JP (1) | JP3554331B2 (de) |
| CN (1) | CN1132013C (de) |
| AT (1) | ATE182216T1 (de) |
| AU (1) | AU701710B2 (de) |
| DE (1) | DE69510772T2 (de) |
| DK (1) | DK0741870T3 (de) |
| ES (1) | ES2133738T3 (de) |
| GR (1) | GR3031303T3 (de) |
| HK (1) | HK1015174A1 (de) |
| MX (1) | MX9602688A (de) |
| WO (1) | WO1995020163A1 (de) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5652332A (en) * | 1993-03-12 | 1997-07-29 | Xoma | Biologically active peptides from functional domains of bactericidal/permeability-increasing protein and uses thereof |
| US5891618A (en) * | 1994-01-24 | 1999-04-06 | Xoma Corporation | Method for quantifying LBP in body fluids |
| US5484705A (en) * | 1994-01-24 | 1996-01-16 | Xoma Corporation | Method for quantifying lipopolysaccharide binding protein |
| US5932536A (en) * | 1994-06-14 | 1999-08-03 | The Rockefeller University | Compositions for neutralization of lipopolysaccharides |
| JP2001520631A (ja) * | 1995-07-20 | 2001-10-30 | ゾーマ コーポレイション | 抗真菌性ペプチド |
| DK0914144T3 (da) | 1996-05-10 | 2001-04-09 | Univ Texas | Terapeutiske anvendelser af BPI-protein-produkter til human meningokokæmi |
| AU736096B2 (en) * | 1996-05-23 | 2001-07-26 | Xoma Corporation | Therapeutic uses of BPI protein products in humans with hemorrhage due to trauma |
| US5888973A (en) * | 1996-08-09 | 1999-03-30 | Xoma Corporation | Anti-chlamydial uses of BPI protein products |
| US6482796B2 (en) | 1996-11-01 | 2002-11-19 | Xoma Corporation | Therapeutic uses of N-terminal BPI protein products in ANCA-positive patients |
| US6093573A (en) * | 1997-06-20 | 2000-07-25 | Xoma | Three-dimensional structure of bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) |
| US5990082A (en) * | 1997-10-22 | 1999-11-23 | Xoma Corporation | Uses of lipopolysaccharide binding protein |
| US6013631A (en) * | 1998-06-19 | 2000-01-11 | Xoma Corporation | Bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) deletion analogs |
| US7465555B2 (en) * | 2002-04-02 | 2008-12-16 | Becton, Dickinson And Company | Early detection of sepsis |
| US20040096917A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-05-20 | Becton, Dickinson And Company | Diagnosis of sepsis or SIRS using biomarker profiles |
| US7645573B2 (en) * | 2002-11-12 | 2010-01-12 | Becton, Dickinson And Company | Diagnosis of sepsis or SIRS using biomarker profiles |
| EP1565570A4 (de) * | 2002-11-12 | 2005-12-28 | Becton Dickinson Co | Sepsis- oder sirs-diagnose mittels biomarkerprofilen |
| US7191068B2 (en) * | 2003-03-25 | 2007-03-13 | Proteogenix, Inc. | Proteomic analysis of biological fluids |
| US8068990B2 (en) * | 2003-03-25 | 2011-11-29 | Hologic, Inc. | Diagnosis of intra-uterine infection by proteomic analysis of cervical-vaginal fluids |
| US20060157647A1 (en) * | 2005-01-18 | 2006-07-20 | Becton, Dickinson And Company | Multidimensional liquid chromatography/spectrometry |
| BRPI0609302A2 (pt) | 2005-04-15 | 2011-10-11 | Becton Dickinson Co | métodos para prever o desenvolvimento de sepse e para diagnosticar sepse em um indivìduo a ser testado, microarranjo, kit para prever o desenvolvimento de sepse em um indivìduo a ser testado, produto de programa de computador, computador, sistema de computador para determinar se um indivìduo é susceptìvel de desenvolver sepse, sinal digital embutido em uma onda portadora, e, interface gráfica de usuário para determinar se um indivìduo é susceptìvel de desenvolver sepse |
| US8290624B2 (en) * | 2007-04-26 | 2012-10-16 | Adept Technology, Inc. | Uniform lighting and gripper positioning system for robotic picking operations |
| WO2009123737A2 (en) | 2008-04-03 | 2009-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Advanced detection of sepsis |
| US7846678B2 (en) * | 2008-08-18 | 2010-12-07 | BioDtech, Inc. | Enhancing endotoxin detection |
| ES2429315T3 (es) * | 2008-09-04 | 2013-11-14 | Beckman Coulter, Inc. | Activación de la pan-quinasa y evaluación de las vías de señalización |
| CN104407156B (zh) * | 2014-12-05 | 2016-03-16 | 重庆中元生物技术有限公司 | 检测多糖结合蛋白(lbp)的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法 |
| CN109507323A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-22 | 上海浩港生物技术有限公司 | 一种用质谱仪检测人类血液中lbp含量的试剂盒 |
| CN109507127A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-22 | 上海浩港生物技术有限公司 | 一种用于检测人类血液中lbp含量的试剂盒 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986006279A1 (en) * | 1985-04-30 | 1986-11-06 | Scripps Clinic And Research Foundation | Acute phase protein modulating endotoxic activity of lipopolysaccharides, compositions and methods |
| US5245013A (en) * | 1985-04-30 | 1993-09-14 | Richard Ulevitch | Acute phase protein modulating endotoxic activity of lipopolysaccharides, assay methods and polypeptides |
| US5310879A (en) * | 1985-04-30 | 1994-05-10 | The Scripps Research Institute | Antibodies which immunoreact with lapine lipopolysaccharide binding protein (LBP) |
| AU645515B2 (en) * | 1989-08-01 | 1994-01-20 | Rockefeller University, The | Methods and compositions for ameliorating the symptoms of sepsis |
| WO1993006228A1 (en) * | 1991-09-26 | 1993-04-01 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | A new form of liposaccharide binding protein (lbp) |
| WO1994021280A1 (en) * | 1993-03-22 | 1994-09-29 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Use of bactericidal/permeability increasing protein and lipopolysaccharide binding protein levels and ratios thereof in diagnosis |
| EP0760849A1 (de) * | 1993-04-30 | 1997-03-12 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Rekombinante, aud bpi und lbp basierende proteine, die für sie kodierenden nukleinsäuren, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| WO1995000641A1 (en) * | 1993-06-17 | 1995-01-05 | Xoma Corporation | Lipopolysaccharide binding protein derivatives |
| AU7330994A (en) * | 1993-07-14 | 1995-02-13 | Xoma Corporation | Method for potentiating bpi protein product bactericidal activity by administration of lbp protein products |
| US5484705A (en) * | 1994-01-24 | 1996-01-16 | Xoma Corporation | Method for quantifying lipopolysaccharide binding protein |
-
1994
- 1994-01-24 US US08/186,811 patent/US5484705A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-01-24 DK DK95909325T patent/DK0741870T3/da active
- 1995-01-24 JP JP51974195A patent/JP3554331B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-24 EP EP95909325A patent/EP0741870B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-24 US US08/377,391 patent/US5804367A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-24 ES ES95909325T patent/ES2133738T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-24 AU AU17321/95A patent/AU701710B2/en not_active Ceased
- 1995-01-24 CN CN95191324A patent/CN1132013C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-24 AT AT95909325T patent/ATE182216T1/de active
- 1995-01-24 DE DE69510772T patent/DE69510772T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-24 WO PCT/US1995/000982 patent/WO1995020163A1/en active IP Right Grant
- 1995-01-24 MX MX9602688A patent/MX9602688A/es unknown
-
1998
- 1998-09-03 US US09/146,620 patent/US6274328B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-24 HK HK98115463A patent/HK1015174A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-09-22 GR GR990402403T patent/GR3031303T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3554331B2 (ja) | 2004-08-18 |
| CN1139485A (zh) | 1997-01-01 |
| ATE182216T1 (de) | 1999-07-15 |
| MX9602688A (es) | 1997-05-31 |
| AU1732195A (en) | 1995-08-08 |
| US5484705A (en) | 1996-01-16 |
| HK1015174A1 (en) | 1999-10-08 |
| US6274328B1 (en) | 2001-08-14 |
| ES2133738T3 (es) | 1999-09-16 |
| US5804367A (en) | 1998-09-08 |
| JPH09508465A (ja) | 1997-08-26 |
| DE69510772D1 (de) | 1999-08-19 |
| EP0741870A1 (de) | 1996-11-13 |
| DK0741870T3 (da) | 1999-12-13 |
| AU701710B2 (en) | 1999-02-04 |
| WO1995020163A1 (en) | 1995-07-27 |
| GR3031303T3 (en) | 1999-12-31 |
| CN1132013C (zh) | 2003-12-24 |
| EP0741870B1 (de) | 1999-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69510772T2 (de) | Verfahren zur quantifizierung von lbp in körperflüssigkeiten | |
| EP0143209B1 (de) | Verfahren zur immunologischen Bestimmung von extrazellulären Matrixproteinen in Körperflüssigkeiten, unter Verwendung monovalenter Antikörperfragmente | |
| Hijmans et al. | Levels of the serum amyloid A protein (SAA) in normal persons of different age groups. | |
| DE69737870T2 (de) | Medikamente für die diagnostik von autoimmunerkrankungen | |
| EP1318405B1 (de) | Verfahren zur Diagnose von Sepsis unter Bestimmung löslicher Cytokeratinfragmente | |
| EP0840126B1 (de) | Marker und immunologisches Reagens für Dialyse verbundenen Amyloidosis, Diabetes Mellitus und Diabetes Mellitus-Komplikationen | |
| US5466581A (en) | Method for quantifying BPI in body fluids | |
| DE69033511T2 (de) | Verfahren zum Nachweis von Knochen- und anderen Bindegewebeerkrankungen in Menschen und Tieren | |
| DE69414871T2 (de) | Verfahren zur bestimmung der quantität extrazellulärer bpi in körperflüssigkeiten | |
| AT407580B (de) | Indikatorpeptid zur diagnose und/oder vorhersage von cardiovasculären und/oder endothelialen erkrankungen, antikörperzusammensetzung und immunoassay | |
| EP1318402B1 (de) | Verfahren zur Diagnose von Sepsis unter Bestimmung von CA 125 | |
| Kutteh et al. | Multiples of the median: an alternative method for reporting antiphospholipid antibodies in women with recurrent pregnancy loss | |
| DE69129365T2 (de) | Testagens für endotoxin | |
| US7081334B2 (en) | Method for quantifying LBP in body fluids | |
| DE69021631T2 (de) | Diagnostische Zusammenstellung zum Nachweis von rheumatischer Arthritis. | |
| DE69712899T2 (de) | Diagnose von präe-eklampsie | |
| KR100586567B1 (ko) | 체액내lbp의정량방법 | |
| CA2181815C (en) | Method for quantifying lbp in body fluids | |
| US6759203B1 (en) | Method for quantifying BPI in body fluids | |
| EP0565903B1 (de) | Verfahren zur immunologischen Bestimmung eines oder mehrerer Analyten | |
| Gressner | Aminoterminal propeptides of type III procollagen in human cerebrospinal fluid | |
| EP0746768A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von c-reaktivem protein in der milch zur diagnostizierung von entzündlichen erkankungen der milchdrüse und/oder prüfung der qualität der milch und/oder milchprodukte und mittel zu seiner durchführung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: XOMA TECHNOLOGY LTD., BERKELEY, CALIF., US |