DE69024936T2

DE69024936T2 - Vorrichtung zur Bestimmung und semiquantitativen Messung von Komponenten

Info

Publication number: DE69024936T2
Application number: DE69024936T
Authority: DE
Inventors: Beth Atwood; Philippe Pouletty; David Rammler
Original assignee: Sangstat Medical Corp
Current assignee: Sangstat Medical Corp
Priority date: 1989-12-01
Filing date: 1990-11-23
Publication date: 1996-08-14
Anticipated expiration: 2010-11-24
Also published as: EP0439917A1; CA2031073A1; DK0439917T3; ES2084670T3; EP0439917B1; JPH03233360A; DE69024936D1; JP3007410B2; ATE133260T1; GR3019180T3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft einen Mehrnapf-Stat-Test. Insbesondere betrifft die Erfindung Assayvorrichtungen, bei denen ein immobilisiertes Element eines spezifischen Bindungspaars zum Sammeln, Verdünnen und Abgeben klinischer Proben verwendet wird.
Viele Immunassay-Verfahren wurden zum Zwecke des Nachweises bestimmter Analyten entwickelt. Solche Assays fanden als medizinische Instrumente eine Vielzahl an Anwendungen. Analytenspezifische Assays dienten dazu, Antikörper, die als Reaktion auf Infektion gebildet werden, Komponenten von Krankheitserregern, Arzneimittelmengen, Hormone und Enzyme usw. zu bestimmen. Zusätzlich zum medizinischen Bereich fanden Immunassays und andere verwandte Untersuchungen auch in zahlreichen Bereichen der Fertigungsindustrie, z.B. beim Nachweis von kontaminierenden Stoffen in Nahrungsmitteln, Anwendung.
Heterogene Immunassays verwenden üblicherweise einen Liganden oder Antikörper, der an einen festen Träger immobilisiert ist. Eine den interessierenden Analyten enthaltende Probe wird über das immobilisierte Immunreagens geschickt und die Menge des gebildeten Antikörper-Ligand-Komplexes gemessen. Bei heterogenen Assays umfassen die essentiellen Elemente das Verankern eines Elements eines spezifischen Bindungspaars an einem festen Träger und Mittel zum direkten oder indirekten Nachweis eines am Träger gebundenen Markers.
Die Leichtigkeit der Durchführung eines Assayverfahrens ist immer eine wichtige Überlegung. Die meisten Assays sehen die Zugabe mehrerer Reagentien vor und erfordern Waschschritte. Im Idealfall ist ein Assay einfach und erfordert nicht die Verwendung komplexer Ausrüstung wie z.B. von Mikrotiterplatten-Waschern und ELISA-Ablesevorrichtungen. Immunassays, die in einer Arztpraxis, zuhause oder an Ort und Stelle eingesetzt werden können, sind von besonderem Interesse und müssen entwickelt werden, um ohne Verwendung spezieller Geräte durchführbar zu sein.
Es gibt zahlreiche Immunassays, bei denen die Ergebnisse durch die Bildung eines Farbflecks sichtbar gemacht werden. Die Intensität des Farbflecks ist üblicherweise proportional zur Konzentration des Analyten in der Probe und erfordert Instrumente, um die Farbintensität mit der Analytenkonzentration in Zusammenhang zu setzen. Ansonsten kann der visuelle Vergleich der Farbintensität von Flecken, die durch unterschiedliche Proben erzeugt werden, eine beunruhigend subjektive Aufgabe sein. Selbst bei semiquantitativen Assays kann man Unterschiede nur mit Schwierigkeiten auseinanderhalten. Außerdem ist die Analyse von Testergebnissen, die ausschließlich auf Farbveränderungen beruhen, möglicherweise äußerst schwierig, wenn schwach positive Ergebnisse erzielt werden. Es besteht daher das Interesse, semiquantitative Assays bereitzustellen, die einfache: Arbeitsvorschriften besitzen und die subjektiven Fehler, die bei der Bestimmung eines positiven Ergebnisses und der Analytenmenge vorkommen, einschränken.
Die US-Psen 4.727.019 und 4.632.901 betreffen Immunassay-Vorrichtungen mit immobilisierten Phasen, die einen Farbfleck erzeugen, wenn sie mit einer Probe kontaktiert werden, die einen zur Bestimmung geeigneten Analyten enthält.
WO85/05451 offenbart eine Vorrichtung zur Durchführung von Ligand-Rezeptor- Assays, die eine poröse Membran aufweist, an der Antikörper für den Zielanalyten gebunden ist.
Valkirs et al. berichten in Clinical Chemistry Band 31(9) 1985, S. 1427-1431, über eine Vorrichtung zur Durchführung eines Immunassays mit einer Nylonmembran, die in einem im Mittelpunkt befindlichen kreisrunden Bereich darauf immobilisierte Antikörper besitzt.
EP 0339787 offenbart eine Vorrichtung zur Bestimmung der Gegenwart eines Analyten in einer Probe, worin ein Bindungspartner an einem porösen Träger immobilisiert ist.
EP 0342586 offenbart eine Vorrichtung zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe, bis ein kontinuierlicher Konzentrationsgradient des Antikörpers für den interessierenden Analyten vorgesehen ist.
WO88/04431 offenbart eine Vorrichtung für einen Festphasen-Immundiffusionsassay, der eine Einfangmembran besitzt, worin man eine Ligand-Rezeptor-Reaktion nachweisen kann.
Verfahren und Vorrichtungen zum Messen eines Analyten werden bereitgestellt, der ein Mitglied eines spezifischen Bindungspaars ist, wobei eine Markierung zur Messung verwendet wird, die für ein visuelles nachweisbares Signal sorgt und worin die Vorrichtung ein Gehäuse mit einem oberen Behälterabschnitt und einem unteren Cehäuseabschnitt zum Halten zumindest einer Schicht umfaßt und im Gehäuse im Flußrichtung weiters folgendes vorgesehen ist: ein poröser reaktiver Filter als Boden der Behälterkomponente, umfassend einen Meßkreis aus einem Element eines spezifischen Bindungspaars, das am Filter in einem radialen, nichtl inearen Konzentrationsgradienten immobilisiert ist, der einen inneren Kreis mit einer erhöhten Konzentration und einen äußeren angrenzenden Kreis mit einer deutlich niedrigeren Konzentration umfaßt; und fluidaufnehmende Mittel zur Aufnahme von Fluid aus dem porösen reaktiven Filter. Die Vorrichtung kann auch eine poröse Trennschicht, eine nichtporöse Flußsteuerschicht und eine Aufsaugschicht zur Aufnahme von Abfallfluid umfassen. Ein runder oder ringförmiger Fleck bildet sich auf dem porösen reaktiven Filter, wobei ein Fleck mit geringem Durchmesser eine Analytenkonzentration unterhalb eines vorbestimmten Werts anzeigt.
Die Erfindung wird unter Bezugnahme auf die folgende ausführliche Beschreibung spezifischer Ausführungsformen in Zusammenhang mit den Abbildungen, die einen Teil der Beschreibung bilden, näher erläutert. Diese Ausführungsformen sind nur veranschaulichend und schränken den Schutzbereich der Erfindung nicht ein. Die Abbildungen und die Beschreibuiig beziehen sich auf eine Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung, die in Verbindung mit dem Diagnosegerät verwendet werden kann. Die Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung ist in diesem Fall nicht Gegenstand der Ansprüche. Es zeigen:
Fig. 1 eine schräg position ierte perspektivische Ansicht einer Assayvorrichtung;
Fig.2 eine Draufsicht auf dem porösen reaktiven Filter der Vorrichtung von Fig.1;
Fig.3 eine Vorderschnittansicht der Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung; und
Fig.4 eine Vorderschnittansicht einer alternativen Ausführungsform der Sammler- Verdünner-Abgabevorrichtung von Fig.3.
Das erfindungsgemäße System umfaßt eine Vorrichtung zum Bestimmen der Gegenwart eines interessierenden Analyten. Sie betrifft auch, wie aus den Figuren 3 und 4 hervorgeht, eine Vorrichtung zum Verdünnung einer Probe und zur Abgabe der verdünnten Probe. Die zweite Komponente kann zur Aufbringung der verdünnten Probe auf die Assayvorrichtung dienen.
Die Assayvorrichtung von Fig.1 wird dazu verwendet, die Gegenwart eines Analyten in einer Probe nachzuweisen. Die Assayvorrichtung kann die Menge des in der Probe befindlichen Analyten semiquantitativ messen. Zum Nachweis in der Assayvorrichtung geeignete Analyten sind Mitglieder spezifischer Bindungspaarelemente. Diese sind als zwei nichtidentische Moleküle definiert, die zur spezifischen und üblicherweise nichtkovalenten Bindung aneinander in Lösung fähig sind, um stabile Komplexe zu bilden, die entweder direkt oder indirekt nachweisbar sind. Nicht ausschließliche Beispiele allgemeiner Klassen an spezifischen Bindungpaar-Wechselwirkungen sind Ligand-Rezeptor-Wechselwirkungen die hauptsächlich durch Antikörper-Hapten- oder Antikörper-Antigen-Wechselwirkungen exempl ifiziert werden. Liganden sind größtenteils nicht-proteinhältige, nalürlich vorkommende oder synthetische organische Moleküle von etwa 125 bis 5000 Dal, sowie Peptide und Proteine. Rezeptoren, die durch die vorliegende Vorrichtung nachgewiesen werden können, sind größtenteils Proteine, wie z.B. Immunoglobuline, deren Fragmente, insbesondere einwertige Fragmente von Immunoglobulinen, z.B. Fab, Fv usw, Enzyme, natürlich vorkommende Rezeptoren, z.B. T-Zellen-Rezeptoren, Hormon rezeptoren, Oberflächen membran- Rezeptoren, Lectine usw. Andere spezifische B indungspaare umfassen Nukleinsäuren, z.B. DNA und RNA. Für eine Offenbarung spezifischer Liganden und Rezeptoren siehe US PS 3.996.345, Spalten 10-17.
Ergebnisse von Assays, die mit der vorliegenden Vorrichtung durchgeführt werden, werden als ringförmiger oder runder Fleck auf einem Filter sichtbar gemacht. Der ein positives Ergebnis anzeigende Fleck besitzt einen dunklen Mittelbereich und einen heileren Außen bereich. Konzentrationsunterschiede können durch das Vorhandensein eines dunklen Mittelrings oder sowohl des dunklen Mittelrings als auch des gefärbten Außenrings festgestellt werden. [)ie durch die vorliegende Erfindung ermittelte Korrelation zwischen dem Durchniesser des Ergebnis- und Indikatorflecks und der Analytenkonzentration bietet große Vorteile. Durch das Vorsehen eines kleinen Flecks hoher Intensität für einen Analyten innerhalb einer vorbestimmten Konzentration und eines größeren, weniger intensiven Flecks oberhalb eines solchen Konzentrationswerts kann die visuelle Bestimmung eine zufriedenstellende Schätzung der Analytenmenge ergeben, insbesondere ob sie sich unterhalb oder oberhalb eines Schwellenwerts befindet.
Die Korrelation zwischen dem Durchmesser des Indikatorflecks und der Analyten konzentration wird durch Immobil isieren eines Bindungspaarelements am porösen Filter in einem nichtlinearen, radialen Konzentrationsgradienten erzielt; es kann sich dabei um die gleichen Verbindungen wie der Analyt, eine kreuzreaktive Verbindung oder ein reziprokes Bindungspaarelement handeln. Der Ausdruck "reziprokes Bindungspaarelement" bezieht sich hier auf das Element eines spezifischen Bindungspaars, das mit dem gekennzeichneten Element komplexiert, häufig unter Bezugnahme auf den Analyten als gekennzeichnetes Element. Der radiale Konzentrationsgradient ist so angeordnet, daß die höchste Konzentration des spezifischen Bindungspaarelements im Innenbereich eines Rings anzutreffen ist, der einen relativ kleinen Durchmesser im Vergleich zu einem zweiten konzentrischen Ring aufweist, der eine niedrigere Konzentration pro Flächeneinheit des gleichen Bindungspaarelements umfaßt. Üblicherweise besitzt der Mittering einen Durchmesser im Bereich von 0,1 bis 0,5 : 1, üblichererweise 0,1 bis 0,3 : 1 im Vergleich zum Durchmesser des Außenrings.
Wie aus Fig.1 ersichtlich, enthält die Assayvorrichtung mehrere Schichten, die in einer bestimmten Ordnung angeordnet sind und durch ein Gehäuse 7 ausgerichtet zusammengehalten werden. Die Assayvorrichtung besitzt vier Hauptschichten. Die Schichten weisen üblicherweise im wesentlichen die gleichen Umfangsdimensionen, d.h. Länge und Breite, auf, können aber hinsichtlich der Dicke in bezug aufeinander variieren. Die Hauptschichten sind in absteigender Reihenfolge wie folgt. Die oberste Schicht ist ein poröser reaktiver Filter 3, der durch eine nichtporöse Trenneinrichtung, z.B. das Band 9, in Bereiche eingeteilt sein kann; zumindest einer der Bereiche, üblicherweise alle oder die meisten Bereiche, enthalten zumindest einen spezifischen Bindungspaarmitgliedsring 10, der auf den Analyten bezogene Komplexe bilden kann. Unterhalb der Filterschicht und diese berührend befindet sich eine poröse Trennschicht 4. Unterhalb der porösen Stützschicht ist eine Flußratensteuerschicht 5 angeordnet. Die unterste Schicht ist ein Abfallfluid aufnehmendes Aufsaugkissen. Die poröse Trennschicht 4, die Flußratensteuerschicht 5 und das Abfallfluid aufnehmende Kissen 6 können fehlen, doch normalerweise sind sie vorhanden.
Unter "reaktiv" in Zusammenhang mit dem porösen reaktiven Filter ist gemeint, daß ein spezifsiches Bindungspaarelement an diesem Filter immobilisiert ist und den Analyten oder sein reziprokes Bindungselement binden kann. Der poröse reaktive Filter kann aus Papier, Zellulose, Clasfaser, Nylon, PVDF o.dgl. bestehen. Im Handel erhältliche Beispiele solcher Filter sind Immobilon (Millipore), Memtest-Membran (Memtek), Biodyne (Pall), Immunodyne (Pall) und Ultrabind (Gelman Sciences). Die Poren im porösen reaktiven Filter weisen einen durchschnittlichen Durchmesser im Bereich von etwa 0,1 bis 10µm, üblicherweise im Bereich von etwa 1 bis 7µm, auf.
Der poröse reaktive Filter 3 kann in eine Vielzahl an Bereiche, geeigneterweise durch nichtporöse Trennvorrichtungen, z.B das Band 9, unterteilt sein. Die verschiedenen Bereiche können unterschiedliche Funktionen erfüllen - sie bieten z.B. unterschiedliche Konzentrationsbereiche des oder der spezifischen Bindungspaarelemente für Rei henversuch-Anwendung. Ein Vergleichsbereich kann eine vorbestimmte Markierungsmenge aufweisen oder frei von jedem Bindungspaarelement o.dgl. sein. Der gesamte oder ein Teil des Bereichs kann das spezifische Bindungspaarelement enthalten. Die Bereiche liegen geeigneterweise im Bereich von etwa 3 bis 50 mm², üblicherweise 4 bis 14 mm². Das iichtporöse Band kann einen Farbkontrast zu den Bereichen bieten und vorzugsweise weiß oder gelb sein, um die Farbanzeige eines positiven Ergebnisses zu verstärken. Die Trennung zwischen den Bereichen durch das Band beträgt im allgemeinen 0,2 bis 15, üblicherweise 1 bis 4 mm.
Ein Element des spezifischen Bindungspaars, das entweder direkt an den Analyten bindet oder mit diesem kreuzreaktiv ist, wird aufgebracht und wird nicht diffundierend an einen porösen Filter gebunden ocer immobilisiert, um einen runden Fleck oder Ring mit einem nichtlinearen radialen Konzentrationsgradienten zu bilden, der in einer relativ kurzen Entfernung vom Mittelpunkt des Rings einen beträchtlichen Konzentrationsabfall aufweist, cier im allgemeinen ausgehend von der durchschnittlichen Konzentration des Mittelbereichs innerhalb einer Bandbreite von etwa 0,5 mm zumindest etwa 25% heträgt. Das verwendete Filtermaterial ist günstiger-, aber nicht notwendigerweise chemisch reaktiv, sodaß es das spezifische Bindungspaarelement kovalent bindet. Durch geeignetes Aufbringen der Bindungspaarelement-Lösung kann man eine hohe Konzentration eines Bindungspaarelements in einem geringen Radius vom Mittelpunkt erzielen, der von einem angrenzenden konzentrischen Außenkreis mit größerem Radius und deutlich niedrigerer Konzentration umgeben ist.
Die aufgebrachte Lösung ist normalerweise eine Pufferlösung mit einem pH-Wert im Bereich von etwa 4 bis 10, wobei die Konzentration des spezifischen Bindungspaarelements bei etwa 10 µg/ml bis 5 mg/ml liegt. Andere gelöste Produkte können Salz mit einer Konzentration im Bereich von etwa 10 µM bis 1 M umfassen. Durch Senken oder Erhöhen der Pufterkonzentration oder Zugabe anderer nichtreaktiver gelöster Produkte, z.B. Glykole, kann die Diffusionsrate des spezifischen Bindungspaarelements modifiziert werden, um den Durchmesser des Bereichs hoher Konzentration zu vergrößern oder zu verkleinern.
Der Bereich hoher Konzentration wird durch die hohe Reaktivität des porösen Filters, der Verdichtung im Bereich um die Aufbringungsstelle der Lösung herum und die Abreichung des spezifischen Bindungspaarelements aus der Lösung im Mittebereich erzielt.
Der Fortsatz des Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung kann bei einem Druck, der die Porosität der Membran im niedergedrückten Bereich modifiziert, auf den porösen Filter aufgebracht werden, sodaß dies ausreicht, um einen Ring eines Bindungspaarelements um einen ungefärbten Mittelpunkt herum, und nicht einen vollständig gefüllten Kreis zu bilden.
Unterschiedliche Bindungspaarelemente können in verschiedene Bereiche aufgebracht werden, sodaß die Gegenwart mehrerer Analyten in einer einzigen Probe gleichzeitig analysiert werden kann. Die gleichen Bindungspaarelemente in verschiedenen Konzentrationen können in unterschiedliche Bereiche aufgebracht werden, sodaß die quantitative Bestimmung der Analytenkonzentration unterstützt wird, und um für einen breiteren Bereich nachweisbarer Analytenkonzentrationen auf einem einzelnen und unterteilten porösen reaktiven Filter zu sorgen; die einzelnen Bereich können auch unabhängige Filterelemente sein. Einer oder mehrere Flecken des gleichen Bindungspaarelements können pro Bereich - normalerweise bei gleicher Konzentration aufgebracht werden. Wenn mehr als ein Bindungspaarelement-Fleck in einem einzelnen Bereich vorhanden ist, können die Flecken einander überlappen. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind zwei Bindungspaarelement-Flecke in jedem Meßbereich vorhanden. Ein oder mehrere Bereiche enthalten möglicherweise kein Bindungspaarelement, um einen negativen Vergleich zu bieten. Positive Vergleiche können auch für den Analyten bereitgestellt werden, indem für die Gegenwart einer vorbestimmten Markierungsmenge gesorgt wird.
Eine poröse Trennschicht 4 befindet sich unmittelbar unterhalb der porösen reaktiven Filterschicht 3 der Assayvorrichtung, kontaktiert diese direkt und ist mit ihr ausgerichtet. Die poröse Trennschicht 4 steht in Kontakt mit der unteren Oberfläche des porösen reaktiven Filters 3. Die poröse Trennschicht dient dazu, den porösen reaktiven Filter abzustützen und den gleichmäßigen Fluß von Reagentien von der obersten Schicht hinunter zu den unteren Schichten der Assayvorrichtung zu ermöglichen. Die poröse Trennschicht kann aus jedem beliebigen starren oder halbstarren porösen Material bestehen, das die in Zusammenhang mit der Erfindung verwendeten Reagentien im wesentlichen weder bindet noch mit ihnen zusammenwirkt. Beispiele der Materialien für die poröse Trennschichten sind Faserglas, Papier, hydrophiles Polypropylen und Zellulose, wobei die poröse Trennschicht vorzugsweise aus H-HDC (Pall) besteht. Die poröse Trennschicht weist im wesentlichen die gleichen Umfangsdimensionen bzw. die gleiche Form auf wie die poröse reaktive Filterschicht oder deren Elemente. Die Dicke der porösen Trennschicht liegt im allgemeinen im Bereich von etwa 0,1 bis 1 mm.
Unmittelbar unterhalb der porösen Trennschicht 4 und diese kontaktierend ist die Flußratensteuerschicht 5. Geeigneterweise enthält die Flußratensteuerstützschicht 5 eine Vielzahl kleiner, gleichmäßig position ierter, linear oder wahllos angeordneter Perforationen (im allgemeinen in einer oder zwei Linien), wobei die Perforationen sich vorzugsweise unterhalb jedes Bereichs befinden. Die Flußratensteuerschicht dient dazu, den Reagentienfluß durch den porösen reaktiven Filter sowohl zu verlangsamen als auch zu lenken. Die Flußratensteuerschicht 5 kann aus jedem beliebigen nichtporösen und benetzbaren Material bestehen, das gegenüber den bei der Durchführung eines Assays verwendeten Reagentien im wesentlichen inert ist. Die Flußratensteuerschicht weist im wesentlichen die gleichen Umfangsdimensionen oder die gleiche Form auf wie die Filterschicht. Die genaue Dicke der Flußratensteuerschicht ist für die Funktionsweise der vorliegenden Erfindung nicht entscheidend und reicht im allgemeinen von etwa 0,0508 bis 0,254 mm.
Die Perforationen weisen eine Größe und Anzahl auf, die dazu geeignet sind, den Fluß flüssiger Reagentien durch die Vorrichtung zu behindern. Allgemein läßt sich sagen: je länger die erwünschte Kontaktzeit zwischen dem porösen Filter und den Reagentien, desto kleiner die Querschnittsfläche der Perforationen. Die Form der einzelnen Perforationen ist nicht entscheidend. Die einzelnen Perforationen besitzen üblicherweise eine Querschnittsfläche im Bereich von ewta 0,0025 bis 0,025 mm², üblichererweise 0,0033 bis 0,0076 mm², wobei die Anzahl der Perforationen entlang der Länge der Flußratensteuerschiclit etwa 1 bis 10 pro cm ist. Die Löcher können gleichmäßig verteilt sein, um einen gleichmäßigen Fluß der Reagentien durch die unterschiedlichen porösen Bereiche der porösen reaktiven Filterschicht 3 zu ermöglichen. Es ist vorzuziehen - jedoch nicht entscheidend -, daß die Perforationen in der Flußratensteuerschicht unterhalb der bandfreien Bereiche des porösen reaktiven Filters 3 angeordnet sind.
Unterhalb der Flußratensteuerschicht 5 und diese direkt kontaktierend befindet sich eine Abfallfluid aufnehmende Schicht 6. Reagenslösungen, die durch Perforationen in der Flußratensteuerschicht hindurchfließen, dringen direkt in die Abfallfluid aufnehmene Schicht ein. Diese zieht Reagenslösungen weg von den anderen Schichten der Assayvorrichtung. Das Absorptionsvolumen der Abfallfluid aufnehmenden Schicht ist deutlich größer als das Gesamtvolumen der Reagentien, die zur Durchführung eines bestimmten Assays in die Assayvorrichtung eingebracht werden müssen. Die Abfallfluid aufnehmende Schicht kann aus edem beliebigen geeigneten Material wie z.B. Baumwolle, Löschpapier, Polyesterfasern, Zelluloseacetat o.dgl. bestehen.
Die verschiedenen Schichten der Assayvorrichtung werden in einem Vorrichtungsgehäuse 7 zusammengehalten. Das Gehäuse besteht aus einem inerten Material, das geeigneterweise einer einer Vielzahl an im Handel erhältlichen Kunststoffen ist, die geformt werden können, z.B. Polyethylen, Polypropylen, Styrol, ABS, Polyacrylat, Polystyrol o.dgl.
Fig.1 zeigt eine mögliche Ausführungsform eines solchen Gehäuses. Das Gehäuse kann die Schichten zusammendrücken, um einen dauerhaften und gleichmäßigen Kontakt zwischen den Schichten der Vorrichtung aufrechtzuhalten, sodaß die durch die Vorrichtung fließende Flüssigkeit gleichmäßig durch den porösen reaktiven Filter 3 fließt. Das Gehäuse kann aus einem oder mehreren Stücken bestehen. Vorzugsweise besteht es aus zwei Stücken, einem oberen Behälter 1 und einem unteren Gehäuse 7. Der Behälter 1 ist der obere Abschnitt des Gehäuses und kann eine Innenlippe aufweisen, um die Schichten zusammengedrückt zu halten. Aus praktischen Gründen kann der Behälter vom Rest des Gehäuses trennbar sein.
Der Behälter kann teilweise oder ganz mit der verdünnten Probe gefüllt sein, sodaß diese über die Filteroberfläche gleichmäßig verteilt wird. Der Behälter kann Markierungslinien aufweisen, die die Menge der hinzugefügten Lösung anzeigen. Der Behälter besitzt einen offenen Boden 2 und ist am Boden vom porösen reaktiven Filter 3 eingeschlossen. Die Vorrichtung kann markiert sein, um ein Ende der Vorrichtung vom anderen zu unterscheiden. Die Markierungen können in der Form des Gehäuses inhärent sein, indem es entlang zumindest einer Achse asymmetrisch gestaltet wird, oder die Polaritätsmarkierungen können als auf dem Gehäuse vorhandene Symbole vorhanden sein.
Die genauen Dimensionen des Gehäuses sind für die Funktionsweise der Assayvorrichtung nicht entscheidend, doch im allgemeinen besitzt die Vorrichtung eine Größe, die für den Transport, die Handhabung und den Zusammenbau geeignet ist. Das Gehäuse weist im allgemeinen eine Länge im Bereich von etwa 0,5 bis 5 cm, vorzugsweise im Bereich von etwa 2 bis 5 cm auf. Die Breite liegt im Bereich von etwa 0,3 bis 3 cm, vorzugsweise im Bereich von etwa 0,5 bis 1 cm. Vorzugsweise beträgt die Breite etwa 9 mm, um einen Chargentest unter Verwendung eines standardmäßigen Labor-Mehrkanalpipettierers zu ermöglichen. Die Höhe des Gehäuses liegt im Bereich von etwa 0,5 bis 5 cm, vorzugsweise von etwa 1 bis 3,5 cm.
Eine in Figuren 3 und 4 dargestellte Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung kann entweder in Verbindung mit oder unabhängig von der ersten Komponente der vorliegenden Erfindung, der Assayvorrichtung (Fig.1), verwendet werden. Die Sammler- Verdünner-Abgabevorrichtung umfaßt fünf Hauptbestandteile: einen hydrophilen Fortsatz 11, eine Kappe 14 zum Verhindern, daß der Fortsatz aus der Sammler- Verdünner-Abgabevorrichtung fällt, einen flexiblen rohrförmigen Behälter 15, der durch eine Kappe 14 eingeschlossen ist, flüssiges Medium 17 und eine zerbrechliche Schranke 16, die den Fluß des flüssigen Medillms einschränkt und den Fortsatz abstützt, um nicht ins flüssige Medium zu fallen, während sich der Fortsatz 11 durch eine Öffnung 18 in der Kappe 14 hindurch erstreckt.
Die Verwendung der Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung läßt sich wie folgt beschreiben. Eine flüssige Probe wird mit dem Fortsatz 11 der Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung in Kontakt gebracht. Sobald die Probe durch den Fortsatz absorbiert wurde, wird diese aus der Probenquelle zurückgezogen, und das Fortsatzende der Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung zeigt nach oben. Die zerbrechliche Schranke 16 innerhalb der Vorrichtung wird zerbrochen, und das Brechen der Schranke 16 ermöglicht es, daß der die Probe enthaltenden Fortsatz 11 in das flüssige Medium 17 fällt, wo die Probe aus dem Fortsatz 11 gelöst und in das flüssige Medium 17 abgegeben wird. Der Fortsatz kann Moleküle Teilchen, z.B. Virusteilchen, Zellen usw., absorbieren und dispergiert sie wirkungsvoll ins flüssige Medium. Nach dem Vermischen des flüssigen Mediums und der Probe, wodurch die Probe verdünnt wird, wird die Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung als Tropfer verwendet, um die verdünnte Probe in die zuvor beschriebene Assayvorrichtung abzugeben. Die Sammler- Verdünner-Abgabevorrichtung kann als Tropfer verwendet werden, da das Hauptrohr 15 aus einem flexiblen Material besteht, das sich unter Druck verformt, wobei die verdünnte Probe ungehindert durch eine Öffnung 18 in der Kappe fließen kann, durch die sich der Fortsatz 11 zuvor erstreckte.
Der Fortsatz 11 erfüllt verschiedene Funktionen. Er kann die Probe absorbieren und die absorbierte Probe auch in das flüssige Medium 17 abgeben. Der Fortsatz kann auch Proteine und Zellen zur Freisetzung in das flüssige Medium 17 absorbieren. Weiters besitzt der Fortsatz eine Meßfunktion. Im wesentlichen identische Fortsätze können reproduzierbare Probemengen aufnehmen und freisetzen, sodaß vorbestimmte Verdünnungsverhältnisse reproduzierbar erzielt werden können.
Der Fortsatz 11 kann durch das Vorsehen verschiedener Reagentien auch eine aktive Rolle spielen. Der Fortsatz 11 kann in entwässerter Form mit der Probe oder dem Analyten reaktive Verbindungen enthalten, z.B. Antikoagulantien (EDTA, Citrat, Heparin), Detergentien usw. Der Fortsatz 11 kann auch befestigte Liganden in entwässerter Form enthalten, sodaß er als Festphasenträger für Liganden-Analyten- Wechselwirkungen dienen kann.
Sobald der Fortsatz 11 zum Sammeln der Probe verwendet wurde, kann die Probe auf dem Fortsatz 11 vor der Abgabe der Probe in das flüssige Medium trocknen, oder der die Probe enthaltende Fortsatz karin mit dem flüssigen Medium vermischt werden, bevor wesentliches Trocknen stattfinden kann.
Der Fortsatz 11 besteht üblicherweise aus einem hydrophilen, relativ verformbaren, widerstandsfähigen Material, das gegenüber dem interessierenden Analyten im wesentlichen inert ist. Der Fortsatz besteht aus einem hydrophilen Material, sodaß eine wäßrige Probe durch den Fortsatz aufgezogen wird, wenn der Fortsatz mit einer Fluidprobe in Kontakt kommt. Beispiele von Materialien, die für den Fortsatz geeignet sind, sind unter anderem Nylon, Polyethylen oder Polypropylen. Vorzugsweise ist das Fortsatzmaterial Nylon. Vorzugsweise sind die Fortsätze Nib 99356, hergestellt durch American Filtrona. Der Fortsatz ist im wesentlichen zylindrisch geformt, wobei das freiliegende Ende des Fortsatzes zugespitzt ist. Das zugespitzte Ende 12 des Fortsatzes wird mit der zu analysierenden Probe in Kontakt gebracht. Das gegenüberliegende Ende des Fortsatzes besitzt eine kugelförmige Gestalt 13 mit einem Durchmesser, der etwas größer als der Durchmesser der Öffnung 18 der Kappe 14 ist.
Der Fortsatz weist üblicherweise je nach zu verwendender Probengröße eine Länge von etwa 3 mm bis 4 cm und einen Durchmesser von etwa 0,2 bis 3 mm auf.
Die Kappe 14 ist auf einem flexiblen Röhrchen 15 montiert, das an einem Ende 19 abgedichtet ist. Das flexible Röhrchen besteht aus einem Material, das sich beim Zusammendrücken leicht verformt. Beispiel von Materialien für das Röhrchen sind Kunststoffe wie Polyethylen, Polypmpylen oder andere inerte Elastomermaterial ien. Die genauen Dimensionen des Röhrchens sind nicht entscheidend, wobei es günstigerweise ein Volumen von etwa 1 bis 5 ml besitzt.
Die Schranke 16 besteht aus einem zerbrechlichen Material, vorzugsweise Glas oder Kunststoff und besitzt eine solche Dicke, daß sie unter Handdruck leicht bricht. Das Material sollte sowohl gegenüber dem flüssigen Medium als auch der Probe inert sein. Es gibt viele mögliche Konfigurationen der Schranke 16, die es ihr ermöglichen, sowohl den Fortsatz zu stützen als auch den Fluß des flüssigen Mediums einzuschränken. In Figuren 3 und 4 sind zwei mögliche Konfigurationen dargestellt. In Fig.3 ist die Schranke 16 der Oberteil einer das flüssige Medium enthaltenden Ampulle. In Fig.4 ist die Schranke 16 eine Scheibe, die sich vollständig quer über das flexible Röhrchen erstreckt.
Die Zusammensetzung des flüssigen Mediums variiert je nach den Erfordernissen spezifischer Assays. Im allgemeinen ist das flüssige Medium eine wäßrige Lösung. Das flüssige Medium 17 kann auch Verbindungen enthalten, die im Assay andere Funktionen erfüllen als das Verdünnen der Probe. Beispielsweise kann das flüssige Medium Puffer und/oder nichtspezifische B indungsblockiermittel enthalten, z.B. Rinder- Serumalbumin, Casein, Serum usw. Das flüssige Medium 17 kann auch ein spezifisches Bindungspaarelement enthalten, das sich an einen in der Probe enthaltenen Analyten oder ein chromogenes Reagens binden kann.
Die vorliegende Erfindung kann in etablierten Immunassayverfahren zum Einsatz kommen, die die Verwendung einer immobilisierten Phase erfordern. Der Ausdruck "Immunassay" bezieht sich hierin sowohl auf Immunassays als auch auf Assays ähnlicher Struktur, die immobilisierte spezifische Bindungspaarelemente enthalten, obwohl keines der Elemente des Bindungspaars ein Antikörper oder Fragment davon ist. Diese Verfahren beinhalten die Zugabe einer Vielzahl an Reagentien, um die Bildung bestimmter Bindungspaarkomplexe nachzuweisen. Die Bildung von Bindungspaarkomplexen wird üblicherweise durch Gegenwart eines Farbstoffs oder Fluorophors nachgewiesen werden, der bzw. das geeigneterweise als Produkt einer enzymvermittelten Reaktion erzeugt wird. Das markierte Reagens kann sich an auf dem Filter immobilisierte Bindungspaarkomplexe binden. Die Zugabe geeigneter chromogener Reagentien ermöglicht es der Enzymmarkierung, den Standort der immobilisierten Bindungspaarkomplexe durch Färben des porösen reaktiven Filters anzuzeigen.
Die Menge der Probe und der Assayreagentien, die der Assayvorrichtung über den Behälter zugegeben werden, variiert je nach Ausführungsform der vorliegenden Erfindung. Der Behälter kann bis oben hin oder auch in geringeren Mengen mit verdünnter Probe und Reagentien gefüllt werden. Im allgemeinen wird bei einer bestimmten Ausführungsform eine vorbestimmte und reproduzierbare Menge einer verdünnten Probe hinzugefügt, während Reagentien im Normalfall in Überschuß vorhanden sind. Das Volumen der verdünnten Probe kann in Tropfen aus einer Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtling oder durch eine Markierung im Behälter gemessen werden. Ein oder mehrere Tropfen verdünnter Probe können auf jeden bandfeien Bereich aufgebracht werden, oder der Behälter kann teilweise oder vollständig gefüllt werden. Vorzugsweise wird der Behälter mit verdünnter Probe und Reagentien gefüllt, sodaß ein gleichmäßiger Kontakt zwischen der Lösung und den Meßbereichen aufrechterhalten wird Ein Erhöhen der Menge der verdünnten Probe und des Reagens, die dem Behälter zugegeben werden, erhöht die Kontaktzeit zwischen der hinzugefügten Lösung und dem porösen reaktiven Filter sowie die Menge des spezifischen Bindungspaarelements, das sich an die Oberfläche bindet.
Es folgt ein Beispiel der Anwendung der vorliegenden Erfindung beim der Blutuntersuchung hinsichtlich der Gegenwart von Antikörper gegen HTLV-1. Die Menge des verwendeten Reagens hängt voii der Größe der Vorrichtung ab. Ein Tropfen Blut, der durch Fingerstich bei einem Patienten gewonnen wird, wird auf ein Glasplättchen aufgebracht. Die Spitze des Fortsatzes 11 auf der Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung wird mit dem Bluttropfen auf dem Plättchen (oder eventuell direkt mit dem gestochenen Finger) in Kontakt gebracht und Blut durch den Fortsatz aufgezogen. Wenn dieser gesättigt ist, wird die Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung aufrecht hingestellt, sodaß die Kappe 14 oben ist. Die zerbrechliche Schranke 16 wird durch Druckausübung auf die Wände der Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung zerbrochen. Der Fortsatz fällt in das flüssige Medium 17, und die Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung wird dann geschüttelt, um ein gründliches Vermischen zu gewährleisten.
Mehrere Tropfen der verdünnten Probe werden dann in den Behälter oben an der Assayvorrichtung eingebracht, um den reaktiven Filter 3 abzudecken. Der poröse reaktive Filter enthält Flecken des HTLV-1-Hüllenantigens in einem nichtlinearen, radialen Konzentrationsgradienten, der an eine oder mehrere Meßbereiche gebunden ist; positive und negative Vergleichsbereiche sind auch vorhanden, wo eine bekannte Menge an Markierung bzw. keine Markierung vorhanden ist. Unmittelbar vor der Zugabe der verdünnten Probe zum Behälter wird eine Lösung eines Blockiermittels in den Behälter gefüllt, der dann entleert wird. Unter Blockiermittel ist eine Lösung zu verstehen, die eine oder mehrere Verbindungen, z.B. Rinder-Serumalbumin oder Casein, enthält, die jegliche nichtspezifische Bindungsstellen blockieren, die auf dem porösen reaktiven Filter vorhanden sind. Nach der Zugabe der verdünnten Probe läßt man diese abfließen. Eine Lösutig von biotinylierten Ziegen-Antimenschen-IgG- Antikörpern wird dann in den Behälter gefüllt und das Abließen der Lösung ermöglicht. Eine Lösung aus mit Streptadivin korijugierter alkalischer Phosphatase wird dann in den Behälter gefüllt und das Abließen der der Lösung ermöglicht. Ein Waschlösungspuffer wird dann in den Behälter gefüllt und das Abfließen des Puffers ermöglicht. Eine Lösung enthaltend chromogenes, alkalische-Phosphatasesubstrat wird dann in den Behälter gefüllt und das Abfließen der Lösung ermöglicht. Nach der Entwicklung der Farbe wird eine Reaktionsabbruchlösung (0,2 M Phosphat, pH 6) hinzugefügt, um die Enzymreaktion abzubrechen.
Es ist aus der obigen Beschreibung ersichtlich, daß die vorliegende Erfindung Vorrichtungen und Verfahen zur Durchführung einer Vielzahl an Assays bereitstellt, die sich zur Bestimmung und Messunge von Analyten in vielen Probetypen eignen. Die Gegenwart eines Analyten wir durch die Bildung eines gefärbten Flecks angezeigt. Sobald die Analytenkonzentration in einer Probe oberhalb einer vorbestimmten Schwelle liegt, nimmt der Durchmesser des Farbflecks zu, um einen Kreis mit größerem Durchmesser zu definieren. Die Korrelation zwischen Analytenkonzentration und Fleckdurchmesser stellt einen bedeutenden Vorteil gegenüber Immunassays dar, in denen Ergebnisse lediglich durch Äiiderungen der Farbintensität angezeigt werden. Ein weiterer Vorteil der vorliegenden Erfindung ist die Bildung eines Ringmusters, wobei die Kombination der Ringmusterbildung und der Farbbildung viel leichter zu erkennen ist als nur die Bildung eines einfacher Farbflecks; dieser Vorteil kommt vor allem dann zum Tragen, wenn die Farbe eine geringe Intensität aufweist. Die Auswertung der Änderungen der Farbintensität erfordert komplexe optische Instrumente - oder man verläßt sich auf grobe Schätzungen. Da die vorliegende Erfindung keine komplexen Geräte notwendig macht, können Assays in Umgebungen wie einer Arztpraxis oder an Ort und Stelle durchgeführt werden, wodurch man beträchtliche Kosten- und Zeiteinsparungen erzielt.
Die Erfindung betrifft auch eine Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtung, die eine Probenmenge genau auf ein vorbestimmtes Verhältnis verdünnt und es der verdünnten Probe erlaubt, in die Assayvorrichtung abgegeben zu werden. Die Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung minimiert die Ausrüstung und die Schritte, die zur Vorbereitung einer verdünnten Probe auf das Testen erforderlich sind. Somit kann die Sammler- Verdünner-Abgabevorrichtung das gesamte Assayverfah ren beschleunigen und das Fehlerrisiko einschränken.
Das folgende Beispiel dient der Veranschaulichung und ist nicht einschränkend.

BEISPIEL

HTLV-1/2 STAT-Test

Ein diagnostischer Test unter Verwendung der vorliegenden Erfindung ist in einer Kassettenform namens HTLV-1/2 STAT-Test bereitgestellt. Die Kassetten sind in einer Setform bereitgestellt; dazu gehören alle Reagentien, die zur Durchführung eines Assays erforderlich sind, Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtungen und eine Schale zum Halten mehrerer Kassetten.
Der HTLV-1/2 STAT-Test ist ein rascher qualitativer Immunassay zur Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen HTLV-1 und HTLV-2 in menschlichem Serum, Plasma oder Vollblut. Der Test ist vor allem zur Verwendung mit frischen Proben geeignet.

Prinzip des Assays

Der HTLV-1/2 STAT-Test ist ein leicht zu verwendender Plattentest, der den Nachweis von Anti-HTLV-1- und Anti-HTLV-2-Antikörpern im Vergleich mit eingebauten positiven und negativen Kontrollen an einer einzelnen klinischen Probe ermöglicht.
Mehrere reaktive Membranbereiche, die durch nichtporöse Trenneinrichtungen ("Mininäpfe") voneinander getrennt sind, sind auf einer Test-Kassette aufgeteilt vorgesehen.
Diese Mininäpfe bestehen von oben nach unten aus den positiven und negativen Verfahrenskontrollen und einem viralen HTLV-1/HTLV-2-Lysatantigen-Kreis und einem synthetischen HTLV-1/HTLV-2-Peptidkreis. Der erste Mininapf ist vom zweiten Mininapf durch eine rote, nichtporöse Trenuemrichtung getrennt. Der zweite und der dritte Mininapf sind durch eine gelbe Trenneinrichtung voneinanderer getrennt. Der dritte und der vierte Mininapf sind durch eine weiße Trenneinrichtung voneinander getrennt.
Eine einzelne Verdünnung einer klinischen Probe wird in die Kassette gefüllt. Gebundener IgG wird mittels einer immunenzymatischen Reaktion (einschließlich eines Amplifizierungsschritts zur Erzielung einer hohen Empfindlichkeit) nachgewiesen, wobei dies zur Entwicklung einer stabilen blauen Farbe auf der Membran führt.
Ein deutliches Doppelringmuster sorgt für eine leichte und empfindliche Ablesung der Versuchsergebnisse. Die positive Verfahrenskontrolle verifiziert, daß die klinische Probe nicht fehlte, daß alle Reagentien aktiv waren und der Test korrekt durchgeführt wurde.
Die negative Verfahrenskontrolle erlaubt eine einfache Differenzierung zwischen niederpositiven Proben und negativen Proben.
Zur Durchführung oder Auswertung des Versuchs sind keine speziellen Geräte erforderlich. Man erhält die Ergebnisse innerhalb weniger Minuten. Das Testformat eignet sich sowohl für Einfach- als auch für Chargenversuche mittels einer Standard- Mehrkanalpipette.

Setkomponenten

1. Einsatzbereite HTLV-STAT Kassetten
2. LYOPHILISIERTES REAGENS (A) (0,1 M PBS pH 7,4 mit 10/0 Casein (w/v), 0,10/0 Tween 20 v/v)
3. Sammler-Verdünner-Abgabevorrichtungen
4. LYOPHILISIERTES REAGENS (C) (Antimenschliches IgG-Biotinkonjugat, 1:100 in 0,1 M PBS pH 7,4 mit 1% Casein (w/v) verdünnt)
5. LYOPHILISIERTES REAGENS (D) (Alkalische Phosphatasestreptavidin-Konjugat, 1:100 in 0,1 M Borat pH 8 mit 10/0 BSA, w/v verdünnt)
6. WASCHLÖSUNG/PUFFERVERDÜNNER (E) (0,05 M Borat pH 8 mit 0,01 0/0 Thimerosal w/v)
7. CHROMOGENES SUBSTRAT (F) Bromchlorindoxylphosphat-Lösung
8. ABBRUCHLÖSUNG (G) 0,2 M Phosphat pH6
9. ANTI-HTLV-1-POSITIVES SERUM (INAKTIVIERT) (I)
10. SCHALE ZUM HALTEN DER STAT-TEST-EINHEIT
(Unter Verwendung eines Nylonfilters und eines Nylonfortsatzes (Nib 99356) wird eine Lösung von HTLV-1-Peptid mit 1 mg/ml DMSO 1:40 in 0,1 M Acetat, pH 4, verdünnt. Der Fortsatz wird an einem Behälter befestigt und der Fortsatz auf den Nylonfilter hinuntergedrückt, bis die Flüssigkeit diffundiert, um den Mininapf abzudecken. Zwei Fortsätze können zur Bildung zweier Kreise pro Mininapf verwendet werden.)
Richtlinien zur Durchführung des Assays sind wie folgt:

Vorbereitung von Reagentien

Vor der Verwendung sind die Reagentien auf Raumtemperatur zu bringen. Die lyophilisierten Reagentien A, C und D sind mit 7 ml Lösung E zu rekonstituieren. Die Reagentien werden vorsichtig geschüttelt, bis sie vermischt sind und dann einige Minuten lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Die Reagensbehälter sind Flaschen mit Tropfer-Oberteilen. Die Tropfer besitzen Meßlinien zum Hinzufügen vorbestimmter Reagensmengen zum Assay. Wenn ein Chargenversuch stattfinden soll, kann man anstelle von Tropfern herkömmliche Mehrkanal- (8 oder 12) Mikropipetten verwenden.

Assay-Vorgangsweise

- Markierung der notwendigen Anzahl an HTLV-STAT-Kassetten (eine für jede Probe). Setzen der Kassetten (1 bis 12) auf die Vorrichtungsschale.
- Zugabe von 400 µl des rekonstituierten Reagens A (unter Verwendung des Tropfers A, bis zur Meßlinie gefüllt) in die HTLV-STAT-Kassette. Vollständiges Abfließenlassen.
- Sammeln und Verdünnen der Probe mittels einer Sammler-Verdünner- Abgabevorrichtung (CDD). (Die CDD besitzt einen Fortsatz mit einem Fassungsvermögen von etwa 30 µm und ein Fläschchen mit 1 ml 0,1 m Carbonat/Bicarbonatpuffer, 1% Casein, 0,1% Tween -20,0,01% Thimerosal, pH 9,5.)
- Verwendung der CDD, Zugabe von 8 Tropfren verdünnter Probe zur Kassette. 3 bis 5 Minuten Wartezeit.
- Zugabe von 200 µl des rekonstituierten Reagens C zur Kassette. Vollständiges Abfließenlassen.
- Zugabe von 200 µl des rekonstituierten Reagens D zur Kassette. Vollständiges Abfließenlassen.
- Zugabe von 1 ml Waschlösung E zur Kassette. Vollständiges Abfließenlassen.
- Zugabe von 200 µl (8 Tropfen) des chromogenen Substrats F zur Kassette.
3 Minuten Wartezeit. Ablesen der Ergebnisse.
- Wahlweise: neuerliche Ablesung der Ergebnisse 5 bis 10 Minuten später. Zugabe von 200 µl der Abbruchlösung G zur Kassette.

Auswertung der Ergebnisse

- Testvalidierung: blaue Ringe sind im ersten Mininapf (positive Verfahrenskontrolle) unterhalb der roten Trenneinrichtung zu sehen. Der zweite Mininapf (zweiter Mininapf, unterhalb der ersten gelben Trenneinrichtung) zeigt entweder nichts oder hellblaue Ringe.
- Blaue Ringe im dritten und vierten Mininapf (zwischen der gelben und der weißen Trenneinrichtung), die dünkler als im zweiten Mininapf sind, zeigen ein positives Ergebnis für Anti-HTLV-1- oder Anti-HTLV-2-Antikörper an.
- Blaue Farbentwicklung in allen Mininäpfen zeigt eine Fehifunktion des Tests an.
- Blaue Ringe im dritten Mininapf ohne blaue Ringe im vierten Mininapf oder umgekehrt sollten erneut getestet und durch andere Versuche bestätigt werden.
- Gebrauchte Kassetten können nach dem Abbruch der Reaktion im getrockneten Zustand aufbewahrt werden, um als dauerhafte Aufzeichnung zu dienen.

Claims

1. Diagnosevorrichtung zur Messung eines Analyten, der ein Element eines spezifischen Bindungspaars ist, worin eine Markierung zur Messung verwendet wird, welche Markierung für ein visuelles, nachweisbares Signal sorgt, wobei die Vorrichtung folgendes umfaßt:

ein Gehäuse, umfassend einen oberen Behälterabschnitt und einen unteren Gehäuseabschnitt zum Halten zumindest einer Schicht;

im Gehäuse in Flußrichtung:

einen porösen reaktiven Filter als Boden der Behälterkomponente, umfassend einen Meßkreis eines Elements eines spezifischen Bindungspaars, das mit einem radialen, nichtlinearen Konzentrationsgradienten am Filter immobilisiert ist, wobei der Gradient einen inneren Kreis mit einer erhöhten Konzentration und einen angrenzenden äußeren Kreis mit einer deutlich geringeren Konzentration aufweist; und

ein fluidaufnehmendes Mittel zur Aufnahme von Fluid aus dem porösen reaktiven Filter.

2. Vorrichtung nach Anspruch 1, worin das fluidaufnehmende Mittel folgendes umfaßt:

eine poröse Trennschicht;

eine Fließratensteuerschicht zur Verringerung der Fließrate; und

eine Abfallfluid aufnehmende saugfähige Schicht.

3. Diagnosevorrichtung zur Messung eines Analyten, umfassend einen porösen reaktiven Filter, der zumindest einen Bereich und in zumindest einem der Bereiche einen Meßkreis eines Element eines spezifischen Bindungspaars umfaßt, das mit einem radialen, nichtlinearen Konzentrationsgradienten am Filter immobilisiert ist, wobei der Gradient einen inneren Kreis mit einer erhöhten Konzentration und einen angrenzenden äußeren Kreis mit einer deutlich geringeren Konzentration aufweist.

4. Diagnosevorrichtung nach Anspruch 3, worin die Vorrichtung zumindest zwei Bereiche umfaßt, die durch eine nichtporöse Trenneinrichtung voneinander getrennt sind.

5. Diagnosevorrichtung nach Anspruch 3, worin zumindest einer der Bereiche zumindest zwei Meßkreise mit dem gleichen spezifischen Bindungspaarelement umfaßt.

6. Set zur Durchführung eines diagnostischen Assays, wobei das Set eine Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 und Reagentien zur Durchführung des Assays umfaßt.

7. Verfahren zum Nachweis des Vorliegens eines Analyten in einer Probe, wobei das Verfahren ein Reagenssystem einsetzt, das ein visuelles Signal zur Bestimmung der Bildung spezifischer Bindungspaarelement-Komplexe erzeugt, wobei das Verfahren folgendes umfaßt:

das Kombinieren der Probe mit flüssigem Medium, das wahlweise zumindest ein Reagenssystem umfaßt;

das Zugeben des Mediums zum Behälter einer Diagnosevorrichtung zur Messung eines Analyten, der ein Element eines spezifischen Bindungspaars ist, wobei die Vorrichtung folgendes umfaßt:

im Gehäuse in Flußrichtung:

einen porösen reaktiven Filter als Boden der Behälterkomponente, umfassend einen Meßkreis eines Elements eines spezifischen Bindungspaars, das mit einem radialen, nichtlinearen Konzentrationsgradienten am Filter immobilisiert ist, wobei der Gradient einen inneren Kreis mit einer erhöhten Konzentration und einen angrenzenden äußeren Kreis bei einer deutlich geringeren Konzentration aufweist; und

ein fluidaufnehmendes Mittel zur Aufnahme von Fluid aus dem porösen reaktiven Filter;

das Hindurchschicken des Mediums durch den porösen reaktiven Filter in das fluidaufnehmende Mittel;

das Zugeben beliebiger zusätzlicher Reagentien des Reagenssystems zum porösen reaktiven Filter; und

das Nachweisen des Vorliegens des visuellen Signals im Verhältnis zu einem visuellen Signal, das mit einer Probe mit einer bekannten Analytenmenge erzielt wird.