DE69015437T2

DE69015437T2 - Amino-substituierte Heterocyclen als Renininhibitoren.

Info

Publication number: DE69015437T2
Application number: DE69015437T
Authority: DE
Inventors: Cleo Conolly; Annette Marian Doherty; Harriet Wall Hamilton; William Chester Patt; Ila Sircar
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 1989-05-26
Filing date: 1990-05-25
Publication date: 1995-05-04
Anticipated expiration: 2010-05-26
Also published as: EP0399556A1; US5238923A; AU625354B2; AU5590890A; GR3015497T3; NZ233811A; US5643879A; JPH0386870A; ATE116331T1; US5453488A; KR900018140A; DE69015437D1; FI902557A0; DK0399556T3; EP0399556B1; NO902318L; FI902557A7; JP2980129B2; ES2066905T3; NO902318D0

Description

Hintergrund der Erfindung

Renin ist ein natürliches Enzym, das von der Niere in das Blut freigesetzt wird. Es spaltet sein natürliches Substrat Angiotensinogen, wobei Decapeptid, nämlich Angiotensin I, freigesetzt wird. Dieses wird wiederum gespalten, indem das Enzym in Lungen-, Nieren- und anderem Gewebe in ein Octapeptid, nämlich Angiotensin II, umgewandelt wird. Angiotensin II erhöht den Blutdruck sowohl direkt, indem es eine Verengung der Arteriolen hervorruft, als auch indirekt, indem es die Ausschüttung des Natrium-zurückhaltenden Hormons Aldosteron aus der Nebenniere stimuliert, wodurch ein Anstieg im extracellularen Flüssigkeitsvolumen verursacht wird. Renininhibitoren sollen als Mittel zur Bekämpfung von Hypertonie, kongestivem Herzversagen und Hyperaldosteronismus eingesetzt werden.
Die europaische Patentanmeldung Nr. EP-29667 befaßt sich mit Renin-inhibierenden Peptidyl-Aminodiolen der Formel
wobei A ein Substituent ist, W C=O oder CHOH ist, U CH&sub2; oder NR&sub2; ist, R&sub1; ein niederer Alkylrest, Cycloalkylmethyl, Benzyl, 4-Methoxybenzyl, Halobenzyl, (1-Naphthyl)methyl, (2- Naphthyl)methyl, (4-Imidazoyl)methyl, α,α-dimethylbenzyl, 1- Benzyloxyethyl, Phenethyl, eine Phenoxy-, Thiophenoxy- oder Anilino-Gruppe ist, R&sub3; ein niederer Alkylrest, [(Alkoxy)alkoxy]alkylrest, (Thioalkoxy)alkylrest, ein niederer Alkenylrest, Benzylrest oder eine mit einem heterocyclischen Ring substituierte Methylgruppe ist, R&sub4; ein niederer Alkylrest, Cycloalkylmethyl oder Benzylrest ist, R&sub5; Vinyl, Formyl, Hydroxymethyl oder ein Wasserstoffatom ist, R&sub7; ein Wasserstoffatom oder ein niederer Alkylrest ist, R&sub8; und R&sub9; unabhängig voneinander aus OH und NH&sub2; ausgewählt sind, und R&sub6; ein Wasserstoffatom, ein niederer Alkylrest, Vinyl oder Arylalkyl ist.
Die europäische Anmeldung Nr. 186,977 betrifft spezielle Renin-inhibierende Peptide der Formel
wobei m 0 oder 1 ist und R¹ bis R³ verschiedene organische Gruppen sind. R³ umfaßt viele Gruppen.
Strukturell können die Positionen der verschiedenen Aminosäuren (Aminosäuresimulatoren) der erfindungsgemäßen Verbindungen unter Bezugnahme auf das Octapeptid, welches die kleinste, von Renin gespaltene Angiotensinogensequenz ist, folgendermaßen bezeichnet werden: leicht spaltbare Bindung
Eine Bezeichnung für die erfindungsgemäßen Verbindungen ist im folgenden angegeben. Es wird angenommen, daß CAD die Positionen P&sub1;-P&sub1;, einnimmt, zum Beispiel:
Die vorliegende Erfindung betrifft neuartige Renininhibierende Verbindungen. Sie betrifft außerdem pharmakologische Zusammensetzungen, die diese neuartigen Peptide enthalten, Verfahren zur Behandlung von Reninabhängiger Hypertonie, kongestivem Herzversagen, Glaukomen und Hyperaldosteronismus, sowie die Verwendung der Verbindungen als diagnostische Mittel, und die Verfahren zur Herstellung der Verbindungen.
Da HIV-Protease wie Renin eine Aspartyl-Protease ist, können diese Verbindungen auch zur Behandlung von Krankheiten verwendet werden, die durch Retroviren, einschließlich HTLV-I und -III, hervorgerufen werden.

Zusammenfassung der Erfindung

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neuartige Verbindungen der Formel
sowie deren pharmakologisch verträglichen Säureadditionssalze, wobei A, B, C, D, E, n, X und Y im folgenden definiert werden.
Die Erfindung umfaßt auch pharmakologische Verbindungen, die eine wirksame Menge der oben erwähnten Verbindung der Formel I zusammen mit einem pharmakologisch verträglichen Träger aufweisen, sowie ein Verfahren zur Verwendung der obengenannten Verbindungen nach Formel I für die Herstellung von pharmakologischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Patienten mit Renin-abhängiger Hypertonie.
Desweiteren umfaßt die Erfindung eine pharmakologische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge einer Verbindung der obengenannten Formel (I) zusammen mit einem pharmakologisch verträglichen Träger aufweist, sowie ein Verfahren zur Verwendung der obengenannten Verbindungen nach Formel (I) für die Herstellung von pharmakologischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Patienten, die unter Hyperaldosteronismus leiden.
Desweiteren umfaßt die Erfindung eine pharmakologische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge einer Verbindung der obengenannten Formel (I) zusammen mit einem pharmakologisch verträglichen Träger aufweist, sowie ein Verfahren zur Verwendung der obengenannten Verbindungen nach Formel (I) für die Herstellung von pharmakologischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Patienten mit kongestivem Herzversagen.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch die Verwendung von Verbindungen der Formel I für die Herstellung von pharmakologischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Krankheiten, die durch Retroviren verursacht werden.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch die Verwendung von Verbindungen der Formel I für die Herstellung von diagnostischen Mitteln zum Identifizieren von Fällen von Hypertonie, die durch einen Reninüberschuß verursacht wird.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch die Verwendung von Verbindungen der Formel I für die Herstellung von pharmakologischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Glaukomen.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der obengenannten Formel (I).

Detaillierte Beschreibung

In der folgenden Tabelle ist die in der Beschreibung der Erfindung verwendete Terminologie enzyklopädisch aufgeführt. Tabelle I Abgekürzte Bezeichnung Aminosäure L-Glutaminsäure L-Asparaginsäure L-Phenylalanin O-Methyl-L-Tyrosin L-Tyrosin L-Histidin 2-(2'-Amino-4'-Thiazolyl)-Glycin 3-(2'-Amino-4'-Thiazolyl)-Alanin 4-(2-Amino-4'-Imidazolyl)-Ethylglycin 3-(2'-Amino-4'-Imidazoyl)-Alanin 4-(2'-Amino-4'-Imidazoyl)-Ethylglycin C-Endgruppe Verschiedene Gruppen Benzyloxycarbonyl Tert-Butyloxycarbonyl Acetyl Formyl Gemischte Gruppen 2-Benzyl-3-(t-butylsulfonyl) propionyl Benzylester Lösungsmittel und Reagenzien Diethylether Chloroform N,N-Dimethylformamid Dimethylsulfoxid Hydroxybenzotriazol N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid Essigsäure Triethylamin Tetrahydrofuran Dichlormethan Methanol Ethylacetat 4-(N,N-Dimethylamino)pyridin
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden mit der folgenden Formel dargestellt:
oder einem pharmakologisch verträglichen Säureadditionssalz davon, wobei A H, BOC, BBSP, Z,
oder
ist, wobei R und R&sub1; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, welcher unsubstituiert oder mit einer oder zwei Hydroxygruppen, einer oder zwei Aminogruppen oder
substituiert ist, wobei dies ein gesättigter Ring mit zwei bis fünf Kohlenstoffatoinen ist, wobei Q CH&sub2;, O, S oder NR ist,
B fehlt, PHE, TYR oder TYR(OMe) ist, mit der Maßgabe, daß B fehlt, wenn A BBSP ist,
C CST, FCS, FCO, CAD oder STA ist,
D fehlt, OH, oder NR&sub2;R&sub3; ist, wobei R&sub2; und R&sub3; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, oder wenn R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, R&sub3; auch (CH&sub2;)mX sein kann, wobei m eine ganze Zahl von 0 bis 8 ist, sowie X -OH,
wie oben definiert-, OR&sub4;, NR&sub5;R&sub6; ist, wobei R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, welcher unsubstituiert oder mit einer oder zwei Hydroxy- oder Aminogruppen substituiert ist, mit der Maßgabe, daß D fehlt, wenn C CAD ist,
E ein Wasserstoffatom, Z, BOC oder ein niederer Alkanoylrest ist,
n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist,
X und Y unabhängig voneinander O,S,N oder NH sind, und zumindest eines davon N ist.
Bevorzugt sind folgende Verbindungen der Formel I gemäß der vorliegenden Erfindung, bei denen
A BOC, BBSP,
oder
ist,
B fehlt, PHE oder TYR(OMe) ist,
C CST, FCO, FCS oder CAD ist,
D fehlt oder
ist, mit der Maßgabe, daß D fehlt, wenn C CAD ist,
E ein Wasserstoffatom oder ein niederer Alkanoylrest ist, und n 1 ist.
Noch bevorzugter sind folgende Verbindungen der Formel I gemäß der vorliegenden Erfindung, bei denen
oder
ist, und
B PHE oder TYR(OMe) ist.
Besonders bevorzugt sind folgende Verbindungen der Formel I gemäß der vorliegenden Erfindung, bei denen
ist,
B PHE ist,
C CST oder CAD ist, und
E ein Wasserstoffatom ist.
Ganz besonders bevorzugte Verbindungen, die unter den Umfang der vorliegenden Erfindung fallen, umfassen die im folgenden angeführten Verbindungen, deren Isomere und pharmakologisch verträglichen Säureadditionssalze:
Die am meisten bevorzugten Verbindungen sind:
Das P&sub2; der vorliegenden Erfindung kann einen Substituenten (E) haben: E=(Z), (AC) oder (CHO), dargestellt durch die folgende Abkürzung: ATM(E). Der Substituent sitzt auf dem exocyclischen Stickstoff wie folgt:
Die Verbindungen umfassen Solvate und Hydrate sowie pharmakologisch verträgliche Säureadditionssalze der Grundverbindungen der oben angeführten Formel I.
Der Ausdruck "pharmakologisch verträgliches Säureadditionssalz" bezeichnet ein relativ untoxisches Säureadditionssalz aus inorganischen oder organischen Säuren, z.B. Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Zitronensäure, Oxalsäure, Malonsäure, Salicylsäure, Apfelsäure, Benzoesäure, Gluconsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Ascorbinsäure, Maleinsäure, Weinsäure, Methansulfonsäure und ähnlichem. Die Salze werden hergestellt, indem die freie Basenform mit einer ausreichenden Menge an gewünschter Säure in Berührung gebracht wird, um ein Salz auf herkömmliche Art zu erzeugen. Die freien Basenformen können wiederhergestellt werden, indem die Salzform mit einer Base behandelt wird.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besitzen ein oder mehrere chirale Zentren; jedes Zentrum kann in der R(D)- oder S(L)-Form vorliegen. Die vorliegende Erfindung schließt alle enantiomorphen, epimeren und tautomeren Formen sowie deren geeignete Mischungen ein.
Besonders bevorzugt ist das S-Isomer an der Position P&sub2;.
Einige der oben angeführten neuartigen Verbindungen können nach bekannten Verfahren zur Herstellung von Verbindungen aus ihren Aminosäuren erzeugt werden. Andere erfindungsgemäße neuartige Verbindungen werden in einem schrittweisen Verfahren oder in einem Fragmentverknüpfungsverfahren hergestellt, je nachdem welches Endprodukt erhalten werden soll.
Ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I weist folgende Schritte auf:
a) Umsetzen einer N-geschützten Aminosäure bzw. eines reaktiven Derivats derselben mit einem gewünschten Amin, um das entsprechende Amid zu erzeugen;
b) Entfernen der N-Schutzgruppe des Amids und Verknüpfung desselben mit einer gewünschten Säure, um ein Dipeptidylähnliches Amid zu erzeugen, und
c) Entfernen der Seitenkettenfunktionen an dem Amid, um die gewünschte Verbindung nach Formel I zu erhalten und sie, falls gewünscht, in ein pharmakologisch verträgliches Salz umzuwandeln.
Ein anderer Vorgang zur Herstellung einer Verbindung nach Formel I, bei der C FCS oder FCO ist, weist folgende Schritte auf:
a) Umsetzen eines Aminosäureesters mit TROC-Schutz auf der Seitenkette mit einer N-geschützten Aminosäure, um ein Dipeptidester zu erzeugen, das anschließend zu der entsprechenden Dipeptidsäure hydrolisiert wird;
b) Verknüpfen des Produkts von Schritt a) mit einem Amin, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus FCS oder FCO, um die TROC-geschützte Verbindung nach Anspruch 1 zu erzeugen, und
c) weiteres Entfernen, falls gewünscht, um eine Verbindung nach Anspruch 1 zu erzeugen, die, wenn es gewünscht wird, in ein pharmakologisch verträgliches Salz umgewandelt wird.
Dies ist im folgenden in Schema II dargestellt.
Die folgenden Schemata zeigen neuartige Verfahren zur Herstellung bestimmter Verbindungen der vorliegenden Erfindung.
Gemäß Schema I wird α-BOC, (2'-(Z)-amino-4'-thiazolyl)alanin (I) mit CST-AEM (2) zur Reaktion gebracht, um ein Amid (3) zu bilden. Die Reaktion läuft in einem inerten Lösungsmittel, wie z.B. CH&sub2;Cl&sub2; oder DMF mit HOBT und DCC bei Temperaturen von -20 bis 30ºC ab. Die BOC-Schutzgruppe von (3) wird mit HCl-Gas oder TFA in einem inerten Lösungsmittel, wie z.B. CH&sub2;Cl&sub2;, entfernt, um das Amin (4) zu erzeugen. Das Amin (4) wird mit SMO-PHE (5) in einem inerten Lösungsmittel, wie z.B. CH&sub2;Cl&sub2; oder DMF mit HOBT und DCC bei Temperaturen von -20 bis 30ºC gekoppelt, um (6), eine Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung, zu erzeugen. Desweiteren wird mittels Hydrogenolyse von (6) (Beseitigung von Z) durch Umrühren in Methanol in einer Wasserstoffatmosphäre in Anwesenheit von 10-20% Palladium auf einem Kohlenstoffkatalysator mit oder ohne p-Toluolsulfonsäure eine Verbindung (7) der vorliegenden Erfindung gebildet.
Schema I kann dahingehend abgeändert werden, daß es die (TROC)-Schutzgruppe anstelle von (Z) enthält, um die Synthese zu verbessern und die Herstellung von Verbindungen, die FCO und FCS enthalten, zu ermöglichen. Die TROC-Schutzgruppe ist insofern nützlich, als sie von Schritt 6 nach Schritt 7 leichter zu entfernen ist. Die FCO- bzw. FCS-Gruppe ist in dieser Situation stabiler. Schema I Schema II Säure (P3) (P1-P1')amin
Die Strategie der Peptidkettenzusammensetzung sowie der Auswahl und Entfernung von Schutzgruppen ist in "The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology" von E. Gross und J. Meienhofer, Hrsg., Academic Press, New York, NY, 1979, Band 1, Seiten 42-44, Kapitel 1, "The Peptide Bond", erläutert.
Die DCC/HOBT-Verknüpfungsmethode ist dem Fachmann wohlbekannt; sie ist in "The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology" von E. Gross und J. Meienhofer, Hrsg., Academic Press, New York, NY, 1979, Band 1, Seiten 241-261, Kapitel 5, "The Carbodiimide Method" von D.H. Rich und J. Singh, erläutert.
Die Peptidverknüpfung basiert auf der Aktivierung des Carboxyendes der Amino-geschützten Aminosäure und der Kondensierung desselben mit einem anderen Peptid, das ein freies Aminoende enthält. Zusätzlich zur oben beschriebenen DCC-Verknüpfungsmethode gibt es noch weitere Verfahren zur Aktivierung der Carboxylgruppe einer geschützten Aminosäure, nämlich
1) das Azid-Verfahren - beschrieben in Kapitel 4 der oben zitierten Veröffentlichung
2) das Mischanhydridverfahren - beschrieben in Kapitel 6 der oben zitierten Veröffentlichung
3) das Aktivesterverfahren - beschrieben in Kapitel 3 der oben zitierten Veröffentlichung.
Der Begriff "niederer Alkylrest" bezieht sich auf gerad- oder verzweigtkettige Alkylradikale mit ein bis sechs Kohlenstoffatomen, die Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n- Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl, 2-Methylhexyl, n-Pentyl, 1- Methylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 2-Methylpentyl, 2,2- Dimethylpropyl, n-Hexyl und ähnliches enthalten, jedoch nicht darauf beschränkt sind.
Der Ausdruck "niederes Alkanoyl" bezieht sich auf Alkanoylgruppen mit einem bis zu vier Kohlenstoffatomen.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind von Nutzen bei der Behandlung von Renin-abhängiger Hypertonie, kongestivem Herzversagen, Hyperaldosteronismus und anderen verwandten Krankheiten. Sie sind auch nützliche Mittel zur Behandlung von Glaukomen und werden als diagnostische Mittel zur Bestimmung von Renin-abhängiger Hypertonie oder Hyperaldosteronismus verwendet.
Pharmakologische Zusammensetzungen, die eine wirksame Menge der Verbindung zusammen mit einem pharmakologisch verträglichen Träger umfassen, sind Teil der vorliegenden Erfindung. Ein wesentlicher Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung von Renin-abhängiger Hypertonie in einem Säugetier, bei dem diesem eine pharmakologische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung enthält, in Kombination mit einem pharmakologisch verträglichen Träger verabreicht wird.
Ein anderer, ebenso wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung von Hyperaldosteronismus in einem Säugetier, bei dem diesem eine pharmakologische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung enthält, in Kombination mit einem pharmakologisch verträglichen Träger verabreicht wird.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung von kongestivem Herzversagen in einem Säugetier, bei dem diesem eine pharmakologische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung enthält, in Kombination mit einem pharmakologisch verträglichen Träger verabreicht wird.
Ein zusätzlicher Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1.
Die Wirksamkeit der oben angeführten Verbindungen wird in einem Versuch betreffend die Renin-inhibierende Aktivität in vitro bestimmt. Diese Aktivität wird durch einen Standard- Radioimmunotest für Angiotensin I bestimmt. In diesem Test erzeugt das Enzym Renin, das zwei Stunden lang in Gegenwart eines Substrats, nämlich Angiotensinogen, im Brutofen bei 37ºC gehalten wurde, das Produkt Angiotensin I. Testverbindungen werden dem Inkubationsgemisch zugegeben. Die relative Aktivität wird mit IC&sub5;&sub0; angegeben, was der molaren Konzentration der Testverbindung entspricht, die eine 50%-ige Inhibierung der Reninaktivität verursacht.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen weisen die Vorteile einer erhöhten Stabilität gegenüber der Chymotrypsin-Hydrolyse auf, beschrieben in J Med Chem, Band 31, Nr. 2, Seite 292, 1988. Diese Eigenschaft erhöht die Stabilität der Verbindungen in vivo; daher ist ihre In-vivo-Aktivität von längerer Dauer.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen auch eine In-vivo- Aktivität, und zwar eine Verringerung des Blutdrucks bei sich bei Bewußtsein befindenden Affen. Die In-vivo-Wirksamkeit wird anhand ihrer Wirkung auf den Blutdruck von nicht anästhesierten, natriumverarmten Rhesus- oder Cynomolgusaffen mit normalem Blutdruck bestimmt.
Im folgenden wird dieser Versuch beschrieben. Affen wurden an eine natriumarme Diät gewöhnt und so abgerichtet, daß sie ruhig in einer Haltevorrichtung blieben. Danach wurden ihnen operativ Gefäßzugänge zur intravenösen Verabreichung von Testverbindungen und zur direkten Messung des Blutdrucks gelegt. Die Affen hatten mindestens eine Woche Zeit, sich von dem operativen Eingriff zu erholen, bevor ihr Natriumhaushalt durch eine Gabe von Furosemid (1 mg/kg/Tag, IM) an vier aufeinander folgenden Tagen erschöpft war. Am siebten Tag wurden die Tiere aus ihrem angestammten Käfig genommen und in die Haltevorrichtung gebracht. Nach einer 20- bis 30- minütigen Gewöhnungsphase wurde ihnen eine Kontrollblutprobe (arteriell) zur Bestimmung der Plasmareninaktivität (PRA) entnommen. Als nächstes wurde den Tieren eine Trägersubstanz (wasserfreies Ethanol, 0,2 ml/kg) oder die Testverbindung (5 mg/kg) über einen Zeitraum von 10 Minuten intravenös verabreicht.
Der Blutdruck wurde kontinuierlich in der gesamten Zeit vor und nach der Verabreichung gemessen. Blutproben wurden in der Mitte der Infusionsperiode sowie 0, 15, 30 und 60 Minuten nach der Infusion entnommen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben auch den Vorteil einer erhöhten Selektivität in bezug auf das Reninenzym gegenüber anderen Aspartylprotease-Enzymen. Tabelle II In-Vitro-Renininhibierung Verbindung (unreine Probe) Isomer IC&sub5;&sub0; (nM, oder % Inhibierung bei folgender Konzentration) Isomer Tabelle III In-Vitro-Chymotrypsin-Stabilität Prozent Stamm verblieben (3 Std.) nur Puffer Puffer + Chymotrypsin (Isomer A) Tabelle IV In-Vivo-Blutdrucksenkung durch Renin-Inhibitoren SMO-PHE-(S)ATM-CAD (mm Hg-Abfall bei durchschnittlichem Blutdruck) PO-Dosis
Wie den oben aufgeführten Tabellen entnommen werden kann, üben die erfindungsgemäßen Verbindungen eine deutliche Wirkung auf die Reninaktivität aus und sind daher für die Behandlung von Hypertonie, Hyperaldosteronismus und kongestivem Herzversagen von Nutzen.
Aufgrund von Tests, in denen die Wirkung auf den intraokularen Druck bei Kaninchen gemessen wurde, siehe Tinjum, A.M., Acta Ophthalmologica 50, 677 (1972), wird erwartet, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Antiglaukom-Aktivität hemmen [sic.].
Zur Herstellung pharmakologischer Zusammensetzungen aus den in dieser Erfindung beschriebenen Verbindungen können inerte, pharmakologisch verträgliche Träger in fester oder flüssiger Form verwendet werden. Feste Präparate sind beispielsweise Pulver, Tabletten, dispersible Körnchen, Kapseln, Kachets und Zäpfchen. Bei einem festen Träger kann es sich um eine oder mehrere Substanzen handeln, die auch als Verdünnungsmittel, Aromastoffe, Lösungsvermittler, Gleitmittel, Suspensionsmittel, Bindemittel oder Tablettenauflösungsmittel dienen können; es kann sich auch um ein Einkapselungsmaterial handeln. In Pulvern ist der Träger ein feinverteilter Feststoff, der mit der feinverteilten Verbindung vermischt ist. In der Tablette ist die aktive Verbindung mit einem Träger vermischt, der die notwendigen Bindeeigenschaften in passenden Anteilen aufweist und in der gewünschten Form und Größe verdichtet ist. Pulver und Tabletten enthalten vorzugsweise zwischen 5 bis 10 und etwa 70 % des aktiven Bestandteils. Geeignete feste Träger sind Magnesiumcarbonat, Magnesiumstearat, Talkum, Zucker, Tragant, Methylcellulose, ein niedrigschmelzendes Wachs, Kakaobutter und ähnliches. Der Ausdruck "Präparat" beinhaltet die Formulierung der aktiven Verbindung mit Einkapselungsmaterial als Trägersubstanz, wobei eine Kapsel zur Verfügung gestellt wird, in der die aktive Komponente (mit oder ohne weitere Träger) von einer Trägersubstanz umgeben ist, die somit mit ihr in Verbindung ist. Gleichermaßen fallen auch Kachets darunter. Tabletten, Pulver, Kachets und Kapseln können als feste Dosierungsformen, die für die orale Verabreichung geeignet sind, angewendet werden.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann oral, buccal, parenteral, mittels Inhalationsspray, rektal oder äußerlich in Dosiseinheitformulierungen verabreicht werden, die herkömmliche, nicht-toxische, pharmakologisch verträgliche Träger und Adjuvanzien wie gewünscht enthalten. Der Begriff "parenteral" umfaßt in diesem Zusammenhang subcutane Injektionen, intravenöse, intramuskuläre, intrasternale Injektions- oder Infusionsmethoden.
Bei der Zubereitung von Zäpfchen wird zuerst ein niedrigschmelzendes Wachs, wie z.B. ein Gemisch aus Fettsäureglyceriden oder Kakaobutter geschmolzen und der aktive Bestandteil durch Umrühren darin homogen dispergiert. Die geschmolzene homogene Mischung wird dann in Formen von geeigneter Größe gegossen, wo sie abkühlt und sich verfestigt.
Bei den Flüssigpräparaten handelt es sich um Lösungen, Suspensionen und Emulsionen. Ein Beispiel dafür sind Wasser- oder Wasser-/Propylenglycollösungen zur parenteralen Injektion. Flüssigpräparate können auch in Lösung in wäßriger Polyethylenglycollösung zubereitet werden. Wäßrige Suspensionen für die orale Anwendung können durch Dispersion der fein verteilten aktiven Komponente in Wasser mit einem zähflüssigen Material, z.B. Natur- oder Synthesegummi, Harzen, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose, sowie anderen bekannten Suspensionsmitteln, hergestellt werden.
Desweiteren fallen auch Feststoffpräparate darunter, die kurz vor Gebrauch in Flüssigpräparate zur oralen oder parenteralen Anwendung umgewandelt werden. Bei den Flüssigformen handelt es sich um Lösungen, Suspensionen und Emulsionen. Solche speziellen Feststoffpräparate werden am geeignetsten in Einheitsdosierungen hergestellt und werden als solche eingesetzt, um einzelne flüssige Dosierungseinheiten zur Verfügung zu stellen. Alternativ kann auch eine ausreichend große Menge an fester Substanz bereitgestellt werden, so daß nach der Umwandlung in die flüssige Form mehrere individuelle Flüssigkeitsdosierungen durch Abmessen vorgegebener Volumen des Flüssigpräparats mittels Spritzen, Teelöffel oder anderer Meßbehältnisse erhalten werden. Wird auf diese Weise eine Vielzahl flüssiger Dosen hergestellt, wird vorzugsweise der noch nicht verwendete Teil davon bei niedriger Temperatur, d.h. im Kühlschrank, aufbewahrt, um einer eventuellen Zersetzung vorzubeugen. Die zur Umwandlung in flüssige Substanzen vorgesehenen Feststoffpräparate können zusätzlich zu dem Wirkstoff Aromastoffe, Farbstoffe, Stabilisatoren, Puffer, künstliche und natürliche Süßstoffe, Dispergiermittel, Verdickungszusätze, Lösungsvermittler und ähnliches enthalten. Bei der für die Zubereitung der Flüssigpräparate verwendeten Flüssigkeit kann es sich um Wasser, isotonisches Wasser, Ethanol, Glycerin, Propylenglycol und ähnliches, sowie um deren Gemische handeln. Natürlich wird die jeweilige Flüssigkeit unter Berücksichtigung der beabsichtigen Verabreichungsform ausgewählt; Flüssigpräparate mit einem hohen Ethanolgehalt zum Beispiel eignen sich nicht für parenterale Anwendung.
Vorzugsweise liegt das pharmakologische Präparat in Form von Dosierungseinheiten vor. In dieser Form ist das Präparat in einheitliche Dosen unterteilt, die geeignete Mengen des Wirkstoffs enthalten. Es kann sich dabei um abgepackte Präparate handeln, wobei jede Packung das Präparat in einzelnen Mengen enthält, beispielsweise abgepackte Tabletten, Kapseln und Pulver in Phiolen oder Ampullen. Die Dosierungseinheit kann eine Kapsel, ein Kachet oder eine Tablette selbst bzw. eine geeignete Zahl derselben in abgepackter Form sein.
Die Wirkstoffmenge in einer Dosierungseinheit des Präparats kann variiert oder angepaßt werden, und zwar von 1 mg bis 500 mg, vorzugsweise 5 mg bis 100 mg, je nach der speziellen Anwendung und Potenz des Wirkstoffs. Auf Wunsch können die Zusammensetzungen auch andere, kompatible Heilsubstanzen enthalten.
Bei der therapeutischen Anwendung als Renininhibitoren liegt die Dosierung für Säuger bei einem 70 Kilogramm schweren Patienten zwischen 1 mg und 2500 mg pro Tag, vorzugsweise 25 und 750 mg, und wird wahlweise in Portionen aufgeteilt verabreicht. Die Tagesdosierungen können jedoch je nach den Bedürfnissen des Patienten, der Schwere der zu behandelnden Krankheit und der eingesetzten Verbindung variieren. Die für eine spezielle Situation geeignete Dosis vermag der zuständige Fachmann zu bestimmen. Im allgemeinen wird eine Behandlung mit kleineren Dosierungen, die unter der optimalen Dosis der jeweiligen Verbindung liegen, begonnen. Anschließend wird die Dosierung in kleinen Schritten erhöht, bis die optimale Wirkung unter den jeweiligen Umständen erzielt wird. Der Bequemlichkeit halber kann die Tagesgesamtdosis unterteilt und in einzelnen Portionen über den Tag verteilt verabreicht werden, falls dies gewünscht wird.
Bei der Verwendung als Behandlungsmittel von Glaukomen kann die Verbindung auch als Lösung zur lokalen Anwendung auf der Kornea verabreicht werden, wobei der Wirkstoffgehalt der Lösung dem Fachmann bekannt ist.
Die vorliegende Erfindung umfaßt Kombinationen neuartiger Renin-inhibierender Verbindungen nach der Formel I mit einer oder mehreren antihypertonischen Substanzen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Diuretika, α- und/oder β-adrenergen Blockern, Calciumkanalblockern, ZNS-wirksamen Mitteln, adrenergen Neuronenblockern, Vasodilatoren, Angiotensinkonvertierenden Enzyminhibitoren und anderen antihypertonischen Substanzen.
Die folgenden Beispiele sollen es dem Fachmann ermöglichen, die vorliegende Erfindung in der Praxis anzuwenden. Sie stellen keinerlei Beschränkung des Umfangs der Erfindung dar, sondern dienen zur Illustration derselben.

BEISPIEL 1

SMO-PHE-ATM(Z)-CAD

Ein Gemisch aus SMO-PHE (0,786 g), HOBT (0,339 g) und DCC (0,516 g) wurde bei 0ºC umgerührt und mit ATM(Z)-CAD (1,4 g) behandelt. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Aus dem Reaktionsgemisch wurde der Niederschlag herausgefiltert und das Filtrat im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat (100 ml) aufgelöst und nacheinander mit 1M Zitronensäure (100 ml), gesättigtem NaHCO&sub3; (100 ml) und gesättigter Salzlösung (100 ml) ausgewaschen. Die organischen Substanzen wurden über MgSO&sub4; getrocknet und unter Bildung eines gelben Schaums im Vakuum verdampft. Der Schaum wurde über Kieselgel chromatographiert und ergab 1,5 g des gewünschten Produkts als Gemisch zweier Diastereomere; Schmelzpunkt: 95-97ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub1;H&sub5;&sub8;N&sub6;O&sub9;S&sub2; 0,5 CHCl&sub3;
Errechnet: C, 55,82; H, 6,61; N 9,43
Gefunden: C, 56,06; H, 6,68; N, 9,15.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 2

SMO-TYR(OME)-ATM(Z)-CAD

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-TYR(OME) (0,860 g), HOBT (0,338 g), DCC (0,516 g) und ATM(Z)-CAD (1,4 g). Das Ergebnis waren 1,3 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch, Schmelzpunkt 101-107ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub2;H&sub5;&sub6;N&sub6;O&sub9;S&sub2; 0,5 Ether:
Errechnet: C, 58,06; H, 7,21; N, 9,23
Gefunden: C, 58,39; H, 6,93, N, 9,05.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 3

BOC-PHE-ATM(Z)-CST-AEM

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-PHE (0,451 g), HOBT (0,230 g), DCC (0,351 g) und ATM(Z)-CST-AEM (1,2 g). Das Ergebnis waren 1,2 g des Produkts. Dieses Material wurde zur Herstellung des Produkts nach Beispiel 4 verwendet. Der Aufbau wurde in einer NMR- Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 4

BOC-PHE-ATM-CST-AEM

BOC-PHE-ATM(Z)-CST-AEM (1,05 g) wurde mit 20% Pd/C (0,3 g) und p-Toluolsulfonsäure (0,476 g) in Methanol (25 ml) unter einer Wasserstoffatmosphäre aufgeschlämmt. Das Gemisch wurde zwei Stunden lang gerührt, der Katalysator wurde herausgefiltert, und anschließend wurde das Gemisch im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat (75 ml) aufgelöst. Die organische Phase wurde mit Natriumcarbonat (75 ml) und Natriumchlorid (50 ml) ausgewaschen, anschließend über MgSO&sub4; getrocknet und im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde einmal mit Methanol (10 ml) zusammen verdampft und ergab 0,63 g des Produkts in Form von weißem Schaum als Diastereomergemisch, Schmelzpunkt 95-103ºc.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub7;H&sub5;&sub7;N&sub7;O&sub7;S 0,9 MeOH:
Errechnet: C, 58,90; H, 7,90; N, 12,69.
Gefunden: C, 59,15; H, 8,05; N, 12,37.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 5 und 6

SMO-PHE-ATM(Z)-CST-AEM

Isomer A (5) und Isomer B (6)

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE (0,817 g), HOBT (0,351 g), DCC (0,536 g) und ATM(Z)-CST-AEM (1,7 g). Das Ergebnis waren 2,0 g des Produkts als Gemisch von Diastereomeren, die mittels Chromatographie über Kieselgel getrennt wurden. Das schnell eluierende Isomer ist das Isomer A.
Isomer A (5) (0,64 g), Schmelzpunkt 102-110ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub4;H&sub6;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub0;S&sub2; 0,4 CHCl&sub3;:
Errechnet: C, 54,70; H, 6,45; N, 11,49.
Gefunden: C, 54,66; H, 6,64; N, 11,37.
Isomer B (6) (0,63 g), Schmelzpunkt 105-110ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub4;H&sub6;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub0;S&sub2; 0,4 CHCl&sub3;
Errechnet: C, 54,70; H, 6,45; N, 11,49.
Gefunden: C, 54,46; H, 6,58; N, 11,56.
Beide Isomere zeigen beständige NMR- und Massenspektren.

BEISPIEL 7

SMO-PHE-ATM-CST-AEM (Isomer A)

Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATM(Z)-CST-AEM (Isomer A) (0,717 g), p- Toluolsulfonsäure (0,366 g) und 20% Pd/C (0,3 g). Das Ergebnis waren 0,427 g des Produkts in Form eines weißen Feststoffs, Schmelzpunkt 109-119ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub2;&sub6;H&sub5;&sub6;N&sub8;O&sub8;S&sub2;
Errechnet: C, 53,80; H, 7,35; N, 13,53.
Gefunden: C, 53,70; H, 7,33; N, 13,48.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 8

SMO-PHE-ATM-CST-AEM (Isomer B)

Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATM(Z)-CST-AEM (Isomer B) (0,883 g), p- Toluolsulfonsäure (0,453 g) und 20% Pd/C (0,4 g). Das Ergebnis waren 0,544 g des Produkts in Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 100-113ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub6;N&sub8;O&sub8;S&sub2; 1,3 MeOH
Errechnet: C, 53,67; H, 7,39; N, 13,43.
Gefunden: C, 54,01; H, 7,40; N, 13,19.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 9 und 10

SMO-PHE-ATM-CAD (Verfahren A)

Isomer A, schnell eluierend (9);
Isomer B, langsam eluierend (10).
Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATM(Z)-CAD (4,8 g), p-Toluolsulfonsäure (2,182 g) und 20% Pd/C (0,4 g). Das Ergebnis waren 0,91 g eines Gemisches von Diastereomeren in Form eines weißen Schaums, die durch Chromatographie über Kieselgel getrennt wurden.
Isomer A (1,50 g), Schmelzpunkt 104-112ºC
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub3;H&sub5;&sub2;N&sub6;O&sub7;S&sub2; 0,1 CH&sub2;Cl&sub2; 0,4 EtOAc
Errechnet: C, 55,37; H, 7,42; N, 11,17.
Gefunden: C, 55,40; H, 7,28; N, 10,94.
Isomer B (1,30 g), Schmelzpunkt 109-122ºC
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub3;H&sub5;&sub2;N&sub6;O&sub7;S&sub2; 0,1 CH&sub2;Cl&sub2; 0,4 EtOAc
Errechnet: C, 55,37; H, 7,42; N, 11,17
Gefunden: C, 55,09; H, 7,25; N, 10,86.
Beide Isomere zeigten beständige NMR- und Massenspektren.

BEISPIEL 9 (Verfahren B)

SMO-PHE-ATM-CAD, Isomer A oder SMO-PHE-(S)ATM-CAD

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE (0,628 g), Et,N: (0,505 g), HOBT (0,270 g), DCC (0,413 g) und (S)-ATM-CAD 2HCl (1,1 g). Das Rohprodukt wurde über Kieselgel chromatographiert; das Ergebnis waren 0,375 g der reinen Verbindung als einzelnes Diastereomer, Schmelzpunkt 106-113ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub3;H&sub5;&sub2;N&sub6;O&sub7;S&sub2; 0,3 EtOAc:
Errechnet: C, 55,86; H, 7,46; N, 11,43.
Gefunden: C, 55,51; H, 7,50; N, 11,37.
Die Verbindung wies beständige NMR- und Massenspektren auf.

BEISPIEL 9 (Verfahren C)

SMO-PHE-(S)ATM-CAD

Eine Lösung aus 10,60 g SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-CAD (12,0 mmol) wurde in 250 ml THF (frisch destilliert)/MeOH, die im Verhältnis 4:1 vorlagen, in einem 500 ml-Rundkolben bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre gelöst. Dazu wurden 6,41 g Ammoniumchlorid, 10 Äquivalente, und 1,57 g Zinkstaub, 2 Äquivalente, hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Umgebungstemperatur heftig umgerührt. Nach zwei Stunden wurden zwei weitere Zinkäquivalente zugesetzt. Nach weiteren zwei Stunden wurden weitere 2 Äquivalente hinzugefügt, was eine Gesamtmenge von 6 Zinkäquivalenten ergab. Nach 5,5 Stunden wurde das Reaktionsgemisch gefiltert und so konzentriert, daß 10,96 g weißer Schaum erhalten wurden. Das Reaktionsgemisch wurde chromatographiert (SiO&sub2;, Ethylacetat/CH&sub2; im Verhältnis 1:1). 1,02 g Feststoff wurden vor dem Einführen in die Säule aus der Probe gefiltert. 6,47 g des Produkts wurden isoliert. Massenspektrum M/e = 709,2.

BEISPIEL 11 und 12

SMO-TYR(OME)-ATM-CAD

Isomer A, schnell eluierend (11),
Isomer B, langsam eluierend (12).
Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-TYR(OME)-ATM(Z)-CAD (1,4 g), p- Toluolsulfonsäure (0,610 g) und 20% Pd/C (0,25 g). Das Ergebnis waren 1,1 g eines Gemisches aus Diastereomeren in Form eines weißen Schaums. Die Isomere wurden mittels Chromatographie über Kieselgel getrennt.
Isomer A (0,330 g), Schmelzpunkt 110-120ºC
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;N&sub6;O&sub8;S&sub2; MeOH H&sub2;0:
Errechnet: C, 53,28; H, 7,66; N, 10,65.
Gefunden: C, 53,39; H, 7,23; N, 10,41.
Isomer B (0,240 g), Schmelzpunkt 106-116ºC
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;N&sub6;O&sub8;S&sub7; 1,5 MeOH:
Errechnet: C, 54,17; H, 7,68; N, 10,68.
Gefunden: C, 54,24; H, 7,36; N, 10,67.
Beide Isomere zeigten beständige NMR- und Massenspektren.

BEISPIEL 13

SMO-PHE-ATM(Z)-STA-MBA

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 aus SMO-PHE (0,517 g), HOBT (0,222 g), DCC (0,339 g) und ATM(Z)-STA-MBA (0,90 g) gebildet. Dies ergab 1,1 g des Produkts als Diastereomerengemisch in der Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 97-103ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub0;H&sub5;&sub7;N&sub7;O&sub9;S&sub2; 1,5 MeOH H&sub2;0:
Errechnet: C, 55,87; H, 7,11; N, 10,99.
Gefunden: C, 55,51; H, 6,71; N, 10,83.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 14

SMO-PHE-ATM-STA-MBA

Das Produkt wurde synthetisch hergestellt wie in Beispiel 4, und zwar aus SMO-PHE-ATM(Z)-STA-MBA (1,0 g), p- Toluolsulfonsäure (0,228 g) und 20% Pd/C (0,3 g). Dies ergab 0,399 g des Produkts als Diastereomerengemisch, Schmelzpunkt 97-108ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub2;H&sub5;&sub1;N&sub7;O&sub7;S&sub2; 0,65 Et&sub2;0:
Errechnet: C, 54,82; H, 7,65; N, 12,94.
Gefunden: C, 54,73; H, 7,57; N, 12,97.
Die Struktur wurde durch NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie bestätigt.

BEISPIEL 15

BOC-PHE-ATG(Z)-STA-MBA

Das Produkt wurde synthetisch hergestellt wie in Beispiel 1, und zwar aus ATG(Z)-STA-MBA (1,6 g), HOBT (0,419 g), DCC (0,640 g) und BOC-PHE(0,796 g). Dies ergab 1,6 g des Produkts als Diastereomerengemisch in der Form eines leicht gelben Schaums, Schmelzpunkt 108-118ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub0;H&sub5;&sub6;N&sub6;O&sub8;S (99%):
Errechnet: C, 60,89; H, 7,16; N, 10,65.
Gefunden: C, 60,98; H, 7,19; N, 10,55.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 16

BOC-PHE-ATG(Z)-STA-MBA

Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-PHE-ATG(Z)-STA-MBA (1,5 g), p- Toluolsulfonsäure (0,38 g)und 10% Pd/C. Dies ergab 0,31 g des Produkts als Diastereomerengemisch in der Form eines weißen Feststoffs, Schmelzpunkt 174-176ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub2;H&sub5;&sub0;N&sub6;O&sub6;S (99%):
Errechnet: C, 59,79; H, 7,72; N, 12,87.
Gefunden: C, 59,97; H, 7,99; N, 13,06.
Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 17

TROC-SPI-PHE-(S)ATM(TROC)-CAD

Eine Lösung aus 2,10 g (TROC)-SPI-PHE (4,30 mmol) in 30 ml DMF wurde mit 0,89 g DCC (4,30 mmol) und 0,58 g HOBT (4,30 mmol) behandelt. Die Materialien wurden 30 Minuten lang bei 15ºC gerührt. Danach wurden 2,50 g (S)ATM(TROC)-CAD (4,25 mmol) in 10 ml MDF hinzugefügt, und das Eisbad wurde entfernt. Das Gemisch wurde weiter bei Raumtemperatur 48 Stunden umgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde gefiltert und im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde in CH&sub2;Cl&sub2; aufgenommen und mit 5%-igem Na&sub2;CO&sub3; und gesättigtem NaCl ausgewaschen. Die organische Schicht wurde über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft. Die Chromatographie auf Kieselgel, das mit einem Gradienten von reinem CHCl&sub3; zu 2% MeOH in CHCl&sub3; eluierte, ergab 3,95 g des Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung nachgewiesen.

BEISPIEL 18

SPI-PHE-(S)ATM-CAD

Eine Lösung aus 2,00 g TROC-SPI-PHE-(S)ATM-(TROC)-CAD (1,89 mmol) in 40 ml einer Mischung aus HOAc und MeOH im Verhältnis 1:1 wurde mit 3,50 g Zinkstaub behandelt. Diese Materialien wurden bei einer Umgebungsbadtemperatur unter einer N&sub2;- Atmosphäre 7 Stunden lang beschallt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Et&sub2;O verdünnt, gefiltert und verdampft. Der Rückstand wurde in EtOAc aufgenommen und zweimal mit gesättigtem NaHCO&sub3; ausgewaschen. Die organische Schicht wurde über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft. Die Chromatographie auf Kieselgel, das mit einem Gradienten von 2- bis 8% MeOH in CHCl&sub3; eluierte, ergab 0,47 g des Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub3;H&sub5;&sub3;N&sub7;S&sub2;O&sub6; 1,0 CH&sub2;Cl&sub2; (MW 792,89)
Errechnet: C, 51,54; H, 6,99; N, 12,37.
Gefunden: C, 51,21; H, 6,77; N, 12,26.

BEISPIEL 19

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-CDH

Eine Lösung aus 0,89 g (BOC)-(S)ATM(TROC)-CDH wurde in CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und in einem Eisbad gekühlt. Man ließ 10 Minuten lang HCI hindurchperlen; das Reaktionsgemisch wurde weitere 30 Minuten umgerührt, anschließend so konzentriert, daß 0,91 g nicht reinweißer Schaum erhalten wurde. Dieser wurde wieder in CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und gekühlt; 0,42 g SMO-PHE, 0,27 g DCC, 0,18 g HOBT und 0,48 g DMAP wurden zugesetzt. Nachdem das Reaktionsgemisch über Nacht Umgebungstemperatur erreicht hatte, wurde es gefiltert und in Folge mit 5%-iger Zitronensäure, gesättigtem NaHCO&sub3; und gesättigtem NaCl ausgewaschen und anschließend konzentriert. Die resultierenden 1,12 g Feststoff wurden chromatographiert (SiO&sub2;, EtOAc); als Resultat erhielt man 0,71 g des gewünschten Produkts. Massenspektrum m/e = 872.

BEISPIEL 20

SMO-PHE-(S)ATM-CDH

Eine Verbindung aus 0,68 SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-CDH wurde in THF/MeOH, das im Verhältnis 4:1 vorlag, gelöst. 0,35 g Ammoniumchlorid und 0,10 g Zinkstaub wurden zugesetzt; das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur umgerührt. Nach 1 Stunde wurden weitere 0,10 g Zink hinzugefügt, und nach weiteren 2 Stunden nochmals 0,10 g. Nach 5 Stunden wurde das Reaktionsgemisch gefiltert und konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol gelöst; es wurden 10 ml HOAc und 0,30 g Zink zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde erwärmt; nach 45 Minuten wurden weitere 0,30 g Zink zugesetzt, und das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde lang umgerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Gemisch gefiltert, mit Et&sub2;O verdünnt und in NaHCO&sub3;-Lösung gegossen. Die Schichten wurden getrennt, die wäßrige Schicht mit zusätzlichem Ether ausgewaschen, und die kombinierten organischen Phasen konzentriert, so daß etwa 1,3 g Glas [sic.] erhalten wurden. Diese Säuresequenz wurde wiederholt und durch Konzentrierung des Filtrats, Lösen desselben in EtOAc und Waschen in NaHCO&sub3; aufgearbeitet. Eine Konzentration der organischen Phasen ergab 0,41 g Feststoff, der chromatographiert wurde (SiO&sub2;, 95% CHCl&sub3;, 5% MeOH). 0,32 g des Produkts wurden erhalten. Massenspektrum m/e = 695.

BEISPIEL 21

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-CAD

Eine Lösung aus 32,93 g (BOC)-(S)ATM(TROC)-CAD (47,8 mmol) in gemahlenem Zustand wurde in Ether/Methanol (300 ml/20 ml) suspendiert und in einem Eiswasserbad gekühlt. Man ließ HCl 20 Minuten lang hindurchperlen. Ein ursprünglich weißer Niederschlag ging während dieser Zeit wieder in Lösung. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht im Kühlschrank aufbewahrt. Es wurde konzentriert, der Schaum heftig mit Ether verrührt, der resultierende weiße Feststoff wurde gefiltert und getrocknet und ergab 27,5 g Pulver (44,0 mmol, 92% als Aminhydrochlorid; die folgenden Berechnungen gehen von diesem Wert aus). Das Material wurde ohne weitere Reinigung verwendet. Das Amin wurde in 500 ml CH&sub2;Cl&sub2; suspendiert, der Kolben in einem Eiswasserbad gekühlt, und 13,83 g SMO-PHE, 5,96 g HOBT, 5,83 g DMAP und 9,06 g DCC zugesetzt. Das Gemisch erreichte über Nacht Umgebungstemperatur. Es wurde gefiltert, das Filtrat nacheinander mit Wasser, 5%-iger Zitronensäure, gesättigtem NaHCO&sub3; und gesättigtem NaCl ausgewaschen, danach über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und konzentriert, so daß 31,23 g weißer Schaum erhalten wurden. Dieses Material wurde in zwei Schüben chromatographiert (SiO&sub2;, eluierend mit Ethylacetat/Hexan im Verhältnis 2:1). Eine Gesamtmenge von 11,38 g des gewünschten Produkts wurde isoliert.
Massenspektrum m/e = 885.

BEISPIEL 22

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCS-AEM

Dem SMO-PHE (0,87 g, 2,46 mmol) und HOBT (0,37 g, 2,76 mmol) in nichtwäßrigem DMF (20 ml) wurde bei 0ºC DCC (0,57 g, 2,76 mmol) in DMF (5 ml), gefolgt von (S)ATM(TROC)-FCS-AEM (1,95 g, 2,76 mmol) in DMF (5 ml) zugesetzt. Nachdem das Reaktionsgemisch 2 Stunden lang umgerührt worden war, ließ man es Raumtemperatur annehmen und rührte dann für weitere 16 Stunden. Der ausgefällte Dicyclohexyl-Harnstoff wurde durch Filtrierung entfernt und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck verdampft. Der Rohrückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen und mit gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat, gefolgt von Salzlösung, ausgewaschen. Nach Trocknung (Na&sub2;SO&sub4;), Filtration und Verdampfung des Lösungsmittels wurde das Rohprodukt auf Kieselgel, das mit 5% Methanol in Dichlormethan eluiert, chromatographiert. Der Aufbau des als weißer Schaum erhaltenen Hauptprodukts (1,35 g, 49%) wurde durch eine NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen; MS (FAB); MH&spplus; 1005,3; (HPLC - 98% Reinheit).
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub9;H&sub5;&sub5;N&sub8;O&sub1;&sub0;S&sub2;O&sub3;F&sub2; 0,2 CH&sub2;Cl&sub2;:
Errechnet: C, 46,09; H, 5,42; N, 10,97; S, 6,28
Gefunden: C, 45,77; H, 5,55; N, 10,82; S, 6,09.

BEISPIEL 23

SMO-PHE-(S)ATM-FCO-AEM

Dem SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCS-AEM (1,95 g, 1,94 mmol) in nichtwäßrigem CH&sub2;Cl&sub2; (40 ml) wurde bei 0ºC Dichloressigsäure (0,23 ml, 2,91 mmol), gefolgt von DCC (4,002 g, 19,4 mmol) in CH&sub2;Cl&sub2; (5 ml) und schließlich nichtwäßriges DMSO (3,2 ml, 19,4 mmol) zugesetzt. Nach 2 Stunden bei 0ºC ließ man sich das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte dann für weitere 16 Stunden. Nachdem es wieder auf 0ºC abgekühlt worden war, wurde eine Lösung aus Oxalsäure (3,05 g) in Methanol (30 ml) tröpfchenweise zu dem Reaktionsgemisch gegeben. Nach 20-minütigem Umrühren wurde die Suspension gefiltert und unter reduziertem Druck verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen und nochmals gefiltert. Nach dem Verdampfen wurde dieser Vorgang noch einmal wiederholt. Das Verdampfen unter reduziertem Druck ergab SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCO-AEM in Form eines zähflüssigen gelben Öls.
Dieses wurde in einem Gemisch aus Methanol und THF (Verhältnis 1:4, Gesamtmenge 30 ml) gelöst. Aktivierter Zinkstaub (Siebnummer 325) (0,27 g, 3,86 mmol) und überschüssiges festes Ammoniumchlorid (2 g) wurden zugesetzt und die Suspension 30 Stunden lang schnell umgerührt. Nach 15 Stunden wurde weiterer Zinkstaub (0,27 g) hinzugefügt. Es wurde Diethylether (30 ml) zugesetzt, und das Reaktionsgemisch wurde gefiltert und unter reduziertem Druck verdampft, was einen weißen Schaum ergab. Der Schaum wurde in einem Gemisch aus H&sub2;O und H&sub3;PO&sub4; (200 ml), vorliegend im Verhältnis 4:1, gelöst und zweimal mit Ethylacetatmengen (50 ml) ausgewaschen. Die kombinierte organische Lösung wurde einmal mit 20%-igem wäßrigem H&sub3;PO&sub4; (100 ml) extrahiert. Die kombinierten wäßrigen Extrakte wurden noch einmal mit Ethylacetat (50 ml) ausgewaschen und anschließend auf 0ºC gekühlt und durch sorgfältige Zugabe von Ammoniumhydroxid auf einen pH von 4,5 (mit einem pH-Meßgerät verfolgt) gebracht. Die Lösung wurde danach mehrere Male mit Ethylacetat extrahiert und getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;). Nach Verdampfung unter reduziertem Druck wurde das Rohprodukt in Form eines gelben Schaums (1,20 g) erhalten. Durch Säulenchromatographie, eluierend mit einem 5- bis > 10%-igen Gradienten von Methanol in Ethylacetat auf Kieselgel wurde ein gereinigtes Produkt erhalten. Eine Kombination der relevanten Fraktionen ergab ein Hauptdiastereoisomer (0,50 g) [angegeben durch HPLC von > 95%-iger Reinheit als Mischung von 98:2 in Form von Isomeren]. Die Struktur wurde durch eine NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen. Die Verbindung wurde in Methansulfonsäuresalz umgewandelt:
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub2;N&sub8;O&sub8;F&sub2;S&sub2; CH&sub3;SO&sub3;H 3,2 H&sub2;O:
Errechnet: C, 45,31; H, 6,41; N, 11,42; S, 9,81
Gefunden: C, 45,31; H, 6,46; N, 11,18; S, 9,49.
MH&spplus;; 827,0.

BEISPIEL 24

SMO-PHE-ATG(Z)-CAD

Eine Lösung aus 1,41 g (4,4 mmol) SMO-PHE, 0,53 g (4,4 mmol) ET&sub3;N, 0,62 g (4,4 mmol) HOBT und 2,5 g (4,4 mmol) ATG(Z)- CAD HCl in einem Gemisch aus 40 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 5 ml DMF wurde in Eis gekühlt und mit 0,97 g (4,4 mmol) DCC in 5 ml CH&sub2;Cl&sub2; behandelt. Nach 0,5 Stunden bei einer Temperatur von 0ºC wurde das Gemisch 48 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Der Harnstoff wurde herausgefiltert und der Rückstand mit CH&sub2;Cl&sub2; ausgewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeit wurden kombiniert und nacheinander mit Wasser, gesättigtem NaHCO&sub3; und Salzlösung ausgewaschen. Nach dem Trocknen und Entfernen des Lösungsmittels unter reduziertem Druck erhielt man das Rohprodukt. Dieses wurde mittels Chromatographie (SiO&sub2;, cH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH 5%) gereinigt und ergab 3,4 g des gewünschten Produkts. Die Struktur wurde durch eine NMR- Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen. (M + 1 Ionenspitze bei 829).

BEISPIEL 25

SMO-PHE-ATG-CAD

Eine Lösung aus 2 g SMO-PHE-ATG(Z)-CAD in MeOH (75 ml) mit einem Gehalt von 0,87 g p-Toluolsulfonsäure und 0,5 g 20% Pd/c wurde mit Wasserstoff gesättigt. Methanol wurde gestrippt und der Rückstand in EtOAc aufgenommen. Die Lösung wurde mit NaHCO&sub3; und anschließend mit Salzlösung ausgewaschen, getrocknet und gestrippt und ergab einen Schaum (1,6 g). Dieser wurde chromatographiert (SiO&sub2; 70 g; CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH 5%) und ergab 1,1 g des gewünschten Produkts. Das Massenspektrum zeigte eine (M + 1)-Ionenspitze bei 695. Die NMR-Untersuchung bestätigte das gewünschte Produkt.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub2;H&sub5;&sub0;N&sub6;O&sub7;S&sub2; 0,5 H&sub2;O:
Errechnet: C, 54,60; H, 7,25; N, 11,94;
Gefunden: C, 54,60; H, 7,36; N, 12,17.

BEISPIEL 26

SMO-PHE-(S)ATE(Z)-CAD

BOC-(S)ATE(Z)-CAD (2,38 g) wurde bei 0ºC zu mit HCl gesättigtem CH&sub2;Cl&sub2; hinzugegeben und eine Stunde lang umgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde konzentriert, so daß es 2,3 g blaßgelben Schaum ergab, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde. Das Aminhydrochlorid wurde bei 0ºC in CH&sub2;Cl&sub2; gelöst; ihm wurden 1,13 g SMO-PHE, 0,74 g DCC, 0,49 g HOBT (jeweils 1 Äquivalent) und 1,00 g DMAP (2,27 Äquivalente) zugesetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch über Nacht Umgebungstemperatur annehmen, danach wurde es gefiltert und in Folge mit 5%-iger wäßriger Zitronensäure, gesättigtem NaHCO&sub3; und wäßrigem gesättigtem NaCl ausgewaschen und getrocknet (MgSO&sub4;). Danach wurde es konzentriert, und der Rückstand wurde chromatographiert (SiO&sub2;, 95% CHCl&sub3; 5% MeOH); man erhielt 2,27 g des gewünschten Produkts. Massenspektrum m/e = 857.

BEISPIEL 27

SMO-PHE-(S)ATE-CAD

SMO-PHE-(S)ATE(Z)-CAD (2,05 g) wurde in Methanol gelöst, dem 0,40 g 20% Pd/C und 1,18 g Tosylsäure zugesetzt wurden. Anschließend kam es unter eine Wasserstoffatmosphäre, wurde 15 Stunden lang gerührt, danach gefiltert und konzentriert; man erhielt 1,21 g nicht reinweißen Schaum. Dieser wurde chromatographiert (SiO&sub2;, EtOAc), und 0,51 g des gewünschten Produkts wurden isoliert. Massenspektrum m/e = 723,3.

BEISPIEL 28

SMO-PHE-(S)ATM(Z)-FCS-AEM

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus 2,8 g SMO-PHE-(S)ATM(Z), 0,554 g HOBT, 0,846 g DCC und 1,5 g FCS-AEM. Die Chromatographie (Kieselgel) mit einem MeOH-Gradienten von 0 bis > 10% in CH&sub2;Cl&sub2; ergab 2,0 g des gewünschten Produkts. Schmelzpunkt: 96-109ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub4;&sub4;H&sub6;&sub0;F&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub0;S&sub2; 0,9 CH&sub3;OH:
Errechnet: C, 54,36; H, 6,46; N, 11,30;
Gefunden: C, 54,06; H, 6,38; N, 11,33.

BEISPIEL 29

SMO-PHE-(S)ATM-FCS-AEM

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus 1,6 g SMO-PHE-(S)ATM(Z)-FCS-AEM und 20% Pd/C (0,4 g). Die Kieselgelchromatographie mit einem Methanolgradienten von 5 bis 10% in CHCl&sub3; ergab 0,561 g des gewünschten Produkts. Schmelzpunkt: 103-115ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub4;F&sub2;N&sub8;O&sub8;S&sub2; 0,6 CHCl&sub3;:
Errechnet: C, 48,81; H, 6,11; N, 12,44;
Gefunden: C, 48,74; H, 6,25; N, 12,23.

BEISPIEL 30

SMO-PHE-(S)ATM(Z)-CST-BHEAEA

BOC-ATM(Z)-CST-BHEAEA (3,2 g) in 60 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 10 ml Methanol wurde 10 Minuten lang HCL (g) zugesetzt. Die Lösung wurde im Vakuum bis zur Trockne verdampft. Der Rückstand wurde in DMF gelöst und mit Diisopropylethylamin behandelt, bis er basisch war, um den Lackmus zu benetzen. Die neue Lösung wurde mit SMO-PHE (1,34 g), HOBT (0,61 g) und DCC (0,94 g) behandelt. Das Gemisch wurde gefiltert und verdampft und ergab 4,61 g Rohmaterial. Das Produkt wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt. Die Eluierung mit CH&sub2;Cl&sub2;:MeOH im Verhältnis 19:1 ergab 1,18 g des Rohprodukts MS (FAB) M&spplus; = 945,4. Die Struktur wurde durch eine IR-, NMR- Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 31

SMO-PHE-(S)ATM-CST-BHEAEA

Das Produkt wurde wie in Beispiel 4 hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATM(Z)-CST-BHEAEA (1,06 g), P-TsOH (0,6 g) und 20% Pd/C (0,6 g) in MeOH (40 ml). Nach der Kieselgelchromatographie (CH&sub2;Cl&sub2;:MeOH = 19:1) ergab dies 0,34 g des gewünschten Produkts. Schmelzpunkt = 93-96ºC.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub8;N&sub8;O&sub9;S&sub2; 0,85 CHCl&sub3;:
Errechnet: C, 48,50; H, 6,50; N, 12,28;
Gefunden: C, 48,56; H, 6,65; N, 12,07.
Die Struktur wurde durch IR-, NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

BEISPIEL 32

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCS-OET

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE (0,993 g), HOBT (0,43 g), DCC (0,65 g) und (S)ATM(TROC)-FCS-OET (1,97 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie (EtOAc:Hexan = 6:4) 1,53 g des gewünschten Produkts in Form eines weißen Schaums. MS, M&spplus; = 921.
Analyse:
Errechnet: C, 45,68; H 5,15; N, 9,13;
Gefunden: C, 45,92; H, 5,26; N, 8,99.
NMR- und IR-Spektra stimmten mit den zugeordneten Strukturen überein.

BEISPIEL 33

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCO-OET

Die Verbindung wurde wie in der ersten Hälfte von Beispiel 23 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-(S)ATM(TROC)- FCS-OET (1,56 g), DMSO (3,5 ml), Dichloressigsäure (0,073 ml) und DCC (3,65 g). Nach einer Kieselgelchromatographie (EtOAc:Hexan) ergab dies 1,4 g des gewünschten Produkts in Form eines weißen Schaums. MS, M&spplus; = 919. Die vorgeschlagene Struktur wird durch eine NMR-Untersuchung nachgewiesen.

BEISPIEL 34

SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCO-OET

Die Verbindung wurde wie in der zweiten Hälfte von Beispiel 23 hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-(S)ATM(TROC)-FCO-OET (1,32 g), Ammoniumchlorid (0,7 g) und Zinkstaub (0,4 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie (EtOAC:Hexan = 1:1) 0,7 g des gewünschten Produkts in Form eines weißen Schaums. NMR-, IR- und Massenspektra stimmten alle mit der Struktur überein.
Analyse:
Errechnet: C, 51,68; H, 5,98; N, 11,30.
Gefunden: C, 51,39; H, 6,05; N, 10,89.

BEISPIEL 35

SMO-PHE-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer A

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE (0,74 g), HOBT (0,32 g), DCC (0,5 g) und ATG(Z)-FCS-AEM, Tsomer A, (1,5 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie (3-10% MeOH in EtOAC:CH&sub2;Cl&sub2; = 1:1) 1,26 g des gewünschten Produkts in Form eines Schaums.
Analysiert in bezug auf 0,2 CH&sub2;Cl&sub2;:
Errechnet: C, 53,72; H, 6,05; N, 11,49.
Gefunden: C, 53,38; H, 6,03; N, 11,49.

BEISPIEL 36

SMO-PHE-ATG-FCS-AEN, Isomer A

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer A, (1,0 g), 20% Pd/c (0,25 g) und p-Toluolsulfonsäurehydrat (0,6 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie (5% MeOH in EtOAC:CH&sub2;Cl&sub2; = 1:1) 0,1 g des gewünschten Produkts.
Analysiert in bezug auf H&sub2;O:
Errechnet: C, 50,51; H, 6,50; N, 13,45.
Gefunden: C, 50,46; H, 6,55; N, 12,82.
Die NMR- und IR-Spektra stimmten mit der Struktur überein. MS, M&spplus; = 815.

BEISPIEL 37

SMO-PHE-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer B

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE (0,84 g), HOBT (0,36 g), DCC (0,57 g) und ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer B, (1,7 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie (3-10% MeOH in EtOAC:CH&sub2;Cl&sub2; = 1:1) 1,8 g des gewünschten Produkts in Form eines Schaums.
Analysiert in bezug auf 0,2 CH&sub2;Cl&sub2;:
Errechnet: C, 53,72; H, 6,05; N, 11,60.
Gefunden: C, 53,41; H, 6,19; N, 11,32.
Die NMR- und IR-Spektra stimmten mit der Struktur überein.

BEISPIEL 38

SMO-PHE-ATG-FCS-AEM, Isomer B

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 4 synthetisch hergestellt, und zwar aus SMO-PHE-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer B, (2,5 g), 20% Pd/C (0,5 g) und p-Toluolsulfonsäure (1,5 g). Dies ergab nach einer Kieselgelchromatographie 1,0 g des gewünschten Produkts in der Form eines Schaums.
Analyse:
Errechnet: C, 51,62; H, 6,38; N, 13,76.
Gefunden: C, 51,39; H, 6,56; N, 12,85.
Die NMR- und IR-Spektra stimmten mit der Struktur überein. MS, M+ = 815.

ZWISCHENSTUFEN FÜR DIE BEISPIELE 1-38

A

DMSA-PHE

Eine Lösung aus PHE (3,3 g) in 1 N NaOH (20 ml) wurde mit einer Lösung aus N,N-dimethylsulfamylchlorid (2,3 ml) in THF (20 ml) behandelt und 3 Stunden lang bei 25ºC heftig gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend nochmals mit 1 N NaOH (20 ml) und N,N-dimethylsulfamylchlorid (2,3 ml) behandelt und 3 Stunden lang bei 25ºC gerührt. Schließlich wurden 1 N NaOH (20 ml) und Diethylether (80 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde geschüttelt, die wäßrige Schicht wurde abgetrennt und durch Zugabe von 1 N HCl (25 ml) azidifiziert, bis ein pH von 1 erreicht war. Das Produkt wurde in Ethylacetat extrahiert, die Lösung über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft; man erhielt ein Gummi, das sich langsam verfestigte (4,0 g). Die Struktur wurde durch NMR-Spektroskopie nachgewiesen.

B

SMO-PHE

Zubereitung wie oben beschrieben, wobei N,N- dimethylsulfamylchlorid durch Morpholinosulfamylchlorid (hergestellt nach dem Verfahren von R. Wegler und K. Bodenbrenner, Annalen der Chemie, 624, 25 (1959)) ersetzt wurde. Das Produkt ist ein Feststoff, Schmelzpunkt = 151- 153ºC.

C

DMSA-TYR(OME)

Zubereitung wie oben beschrieben, wobei PHE durch TYR(OME) ersetzt wurde. Das Produkt wurde als Dicyclohexylaminsalz isoliert, Schmelzpunkt 157-159ºC.

D

DMSA-TYR(OME)

Zubereitung wie oben, wobei PHE durch TYR(OME) ersetzt wurde. Die Struktur wurde in einer NMR-Untersuchung nachgewiesen.

E

BOC-ATG(Z)

Zubereitung wie in der Druckschrift J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, S. 1227 (1984) beschrieben.
Einer Lösung von Ethyl-2-aminothiazol-4-ylacetat (27,4 g) in Wasser (200 ml) wurde K&sub2;CO&sub3; zugesetzt, bis ein PH von 9 erreicht wurde (nasser Lackmus). BOC&sub2;O (26,0 g) in THF (150 ml) wurden hinzugefügt und der pH mit K&sub2;CO&sub3; kontinuierlich auf 9 eingestellt. Das Gemisch wurde 24 Stunden lang umgerührt. Die basische Lösung wurde anschließend mit Ethylacetat (2 x 400 ml) extrahiert. Die organischen Substanzen wurden mit Salzlösung (3090 ml) ausgewaschen und über MgSO&sub4; getrocknet. Nach der Verdampfung erhielt man ein braunes Öl, das aus Ethylacetat (100 ml) und Petroleumether (600 ml) wieder auskristallisiert wurde. Das ergab 23,5 g eines beigen Feststoffs (Ethyl-N-BOC-2-aminothiazol-4- ylacetat). Dieses Ester (15,07 g) wurde anschließend in einem Gemisch aus THF (65 ml), CH&sub2;Cl&sub2; (100 ml) und gesättigter NaHCO&sub3;-Lösung (700 ml) gelöst. Man gab Benzylchloroformiat (21,3 g) hinzu und rührte das Gemisch 18 Stunden lang heftig durch. Die Lösung wurde mit Wasser (100 ml) und Ethylacetat (150 ml) verdünnt. Die organischen Substanzen wurden abgetrennt, mit Wasser (2 x 400 ml) ausgewaschen und bei reduziertem Druck verdampft; man erhielt ein Öl, das in EtOH (150 ml) gelöst und mit einer Kaliumhydroxidlösung (14 g) in Wasser (100 ml) behandelt wurde. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden lang verrührt und mit Wasser (350 ml) verdünnt. Die Lösung wurde mit Ether (2 x 250 ml) ausgewaschen und die ätherische Lösung abgeschieden. Die wäßrige Lösung wurde mit Zitronensäure angesäuert (pH = 3; nasser Lackmus) und zur Ausfällung abgekühlt. Der aufgefangene Feststoff ergab 16,8 g des gewünschten Produkts.

F

BOC-ATM(Z)

Die Herstellung erfolgt auf ähnliche Weise wie die des BOC- ATG(Z) aus ATM 2HCl, das wie in der Veröffentlichung Chem. Ber., Band 97, S. 1767 (1964) zubereitet wurde. Natriummetall (0,64 g) wurde in Ethanol (75 ml) aufgelöst und die Lösung mit Diethylacetamidomalonat (6,08 g) versetzt und eine halbe Stunde lang umgerührt. Danach wurde sie mit 2- Acetamidothiazol-4-yl-1-chlormethan (5,3 g) und Natriumiodid (4,17 g) versetzt. Das Gemisch wurde unter Stickstoff 24 Stunden lang umgerührt. Feststoffe wurden aus der Lösung herausgefiltert. Die Feststoffe wurden mit Wasser (150 ml) pulverisiert. Das Gemisch wurde wieder gefiltert, um die Feststoffe zu sammeln, und mit Wasser (2 x 150 ml) ausgewaschen. Der Feststoff (2,75 g) wurde in konzentrierter Salzsäure (40 ml) aufgelöst und 3 Stunden lang zur Erzeugung eines Rückflusses erwärmt. Die Lösung wurde im Vakuum eingedampft und mit Ethanol (2 x 50 ml) zusammen verdampft. Der resultierende Feststoff wurde mit Ether (100 ml) pulverisiert und filtriert und ergab 1,91 g des gewünschten Produkts in der Form eines weißen Feststoffs.

G

BOC-ATM(Z)-CAD

Die Verbindung wurde hergestellt wie in Beispiel 1, und zwar aus BOC-ATM(Z) (6,3 g), HOBT (2,02 g), DCC (3,1 g) CAD HCl (4,19 g) und Et&sub3;N (1,5 g). Dies ergab 5,7 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 95-100ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

H

ATM(Z)-CAD

Die Verbindung wurde durch Sättigung einer Lösung aus BOC- ATM(Z)-CAD (5,35 g) in CH&sub2;Cl&sub2; (70 ml) und MeOH (10 ml) mit HCl-Gas hergestellt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 2 Stunden lang umgerührt und danach im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in EtOAc (75 ml) aufgelöst und nacheinander mit gesättigtem NaHCO&sub3; (2 x 100 ml) und gesättigter Salzlösung (100 ml) ausgewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingedampft; das Ergebnis waren 3,8 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines leicht gelben Schaums, Schmelzpunkt 84-91ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR- Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

I

BOC-ATM(Z)-CST-AEM

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATM(Z) (4,21 g), HOBT (1,35 g), DCC (2, 06 g) und CST-AEM (3,27 g). Dies ergab 4,6 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 97-100ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

J

ATM(Z)-CST-AEM

Die Verbindung wurde wie im Falle von ATM(Z)-CAD aus BOC- ATM(Z)-CST-AEM (4,4 g) hergestellt. Dies ergab 3,78 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 80-83ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

K

BOC-ATM(Z)-STA-MBA

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATM(Z) (1,0 g), HOBT (0,338 g), DCC (0,516 g) und STA-MBA (0,733 g). Dies ergab 1,25 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines weißen Schaums. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

L

ATM(Z)-STA-MBA

Die Verbindung wurde wie oben im Fall von ATM(Z)-CAD synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATM(Z)-STA-MBA (1,25 g). Dies ergab 0,9 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines leicht gelben Schaums. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

M

BOC-ATG(Z)-STA-MBA

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATG(Z) (6,1 g), HOBT (2,16 g), DCC (3,3 g) und STA-MBA (3,7 g). Dies ergab 8,8 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines weißen Schaums, Schmelzpunkt 86-91ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

N

ATG(Z)-STA-MBA

Die Verbindung wurde wie im Fall von ATM(Z)-CAD hergestellt, und zwar aus BOC-ATG(Z)-STA-MBA (3,17 g). Dies ergab 2,2 g des gewünschten Produkts als Diastereomergemisch in Form eines leicht gelben Schaums, Schmelzpunkt 76-83ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

O

BOC-(S)ATM-OBZL HCL

N-BOC-Asparaginsäure, α-benzylester (40 g, 0,124 mol) in EtOAc (1 l) wurde bei 0ºC mit N-Methylmorpholin (13,8 g, 0,136 mol) und Isobutylchlorformiat (18,6 g, 0,136 mol) versetzt. Das Gemisch wurde 3 Stunden lang bei 0-10ºC umgerührt. Aus dem Gemisch wurde der Niederschlag herausgefiltert und das Gemisch mit einer Diazomethanlösung [( 0,175 mol), frisch aus Diazald (53 g)] in Ether ( 500 ml) destilliert) behandelt. Das Gemisch wurde 16 Stunden lang unter einem N&sub2;-Strom umgerührt. Die Lösung wurde mit gesättigter Salzlösung (500 ml) ausgewaschen und im Vakuum eingedampft; man erhielt Diazoketon als dunkles Öl. Das Öl wurde in Äther (400 ml) aufgelöst und sorgfältig mit HCl-Gas behandelt. Die Gasbehandlung hörte auf, als der pH der Lösung 2 erreichte (nasser Lackmus), etwa zwei bis acht Minuten. Die Lösung wurde anschließend sofort mit einer Lösung aus gesättigtem Natriumbicarbonat (600 ml) behandelt. Die organischen Substanzen wurden mit gesättigter Salzlösung (200 ml) ausgewaschen und über MgSO&sub4; getrocknet. Die organischen Substanzen wurden im Vakuum eingedampft und ergaben 44,4 g Chlorketon in Form eines lohfarbenen Feststoffs. Dieser wurde in Aceton (225 ml) aufgelöst und portionsweise mit Thioharnstoff (7,6 g, 0,1 mol) versetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 24 Stunden lang umgerührt. Das Gemisch wurde gefiltert, um den Feststoff zu erhalten; dieser wurde mit Aceton (2 x 75 ml) ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhielt 20,6 g des gewünschten Produkts in der Form eines weißen Feststoffs, Schmelzpunkt 144-146ºC. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

P

BOC-(S)ATM(Z)

Die Herstellung erfolgte auf ähnliche Weise wie im Falle von BOC-ATM(Z), und zwar aus BOC-(S)ATM-OBZL HCl wie in der Veröffentlichung Chem. Ber., Band 97, S. 1767 (1964).

Q

BOC-(S)ATM(Z)-CAD

Zu BOC-(S)ATM(Z)-OBZL HCl (2,06 g) in Methanol (35 ml) wurde eine NaOH-Lösung (0,6 g) in Wasser (10 ml) hinzugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 4 Stunden lang umgerührt und dann mit 1 N HCl auf einen pH von 6 (nasser Lackmus) gebracht. Die Lösung wurde im Vakuum eingedampft und in DMF (20 mL) aufgelöst. Diese Lösung wurde bei 0ºC nacheinander mit Et&sub3;N (1,51 g), HOBT (0,667 g), DCC (1,03 g) und CAD (1,22 g) behandelt. Das Gemisch wurde 72 Stunden lang umgerührt. Danach wurden die Feststoffe aus dem Gemisch herausgefiltert und das Lösungsmittel im Vakuum verdampft. Der Verdampfungsrückstand wurde in EtOAc (100 ml) aufgelöst und nacheinander mit gesättigtem Natriumbicarbonat (100 ml) und gesättigter Salzlösung ausgewaschen. Die organischen Phasen wurden über MgSO&sub4; getrocknet und im Vakuum verdampft, so daß ein gelber Schaum entstand. Der Schaum wurde über Kieselgel chromatographiert und ergab das gewünschte Produkt in Form eines weißen Feststoffs in einer Menge von 1,2 g. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

R

(S)ATM(Z)-CAD 2HCl

Zu BOC-(S)ATM(Z)-CAD (1,1 g) in einem Gemisch aus CH&sub2;Cl&sub2; (75 ml) und MeOH (15 ml) wurde HCl (Gas) hinzugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 3 Stunden lang umgerührt und im Vakuum eingedampft. Man erhielt das gewünschte Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

S

BOC-(S)ATE-OBZL

Die Verbindung wurde wie im Falle des Zwischenprodukts O, BOC-(S)-ATM-OBZL, synthetisch hergestellt, und zwar aus 42,2 g N-BOC-GLU-OBZL, 18,6 g i-Butylchlorformiat, 13,8 g N- Methylmorpholin und überschüssigem Diazomethan. Durch Kieselgelchromatographie erhielt man 15,2 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung sowie einer IR- und Massenspektroskopie nachgewiesen.

T

BOC-(S)ATE(Z)-OBZL

Die Verbindung wurde wie im Falle des Zwischenprodukts BOC- (S)ATM-OBZL synthetisch hergestellt, und zwar aus 14,17 g BOC-(S)ATE-OBZL und 15,4 g Z-Cl. Die Aufarbeitung mittels Extraktion mit EtOAc ergab nach der Verdampfung 18,9 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR- Untersuchung nachgewiesen.

U

BOC-(S)ATE(Z)

Ein Gemisch aus 18,9 g BOC-(S)-ATE(Z)-OBZL und 7 g NaOH wurde in einem Gemisch aus 100 ml Methanol und 20 ml Wasser 6 Stunden lang umgerührt. Das Gemisch wurde eingedampft und mit 100 ml 1N NaOH behandelt, anschließend mit 100 ml Diethylether ausgewaschen. Die wäßrige Lösung wurde mit 6N HCl angesäuert und mit Ethylacetat (2 x 150 ml) extrahiert. Nach der Trocknung über MgSO&sub4; und der Verdampfung erhielt man 9,3 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde mittels Spektroskopie nachgewiesen.

V

BOC-(S)ATE(Z)-CAD

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus 9,3 g BOC-(S)ATE(Z), 2,7 g HOBT, 4,12 g DCC und 4,9 g CAD. Kieselgelchromatographie mit Ethylacetat ergab 7,6 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung und Massenspektroskopie nachgewiesen.

W

TROC-PIP HCl

Eine Lösung aus 2,37 ml Cl&sub3;CCH&sub2;OCOCl (17,22 mmol) in 65 ml CH&sub2;Cl&sub2; wurde tröpfchenweise zu einer gekühlten Lösung aus 15,00 g Piperazin (174,13 mmol, 10-facher Überschuß) in 75 ml MeOH unter einer N&sub2;-Atmosphäre hinzugegeben und bei Raumtemperatur 3 Stunden lang umgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit MeOH verdünnt und zu einem nassen Festkörper eingedampft. Der Rückstand wurde in H&sub2;O aufgenommen und mit EtOAc extrahiert. Die organische Schicht wurde über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft. Das resultierende Öl wurde in 40 ml Et&sub2;O aufgelöst und tröpfchenweise mit einer 1,0 M HCl-Lösung in 40 ml Et&sub2;O unter einer N&sub2;-Atmosphäre behandelt, um 2,45 g des gewunschten Produkts in Form eines weißen Feststoffs zu ergeben. Schmelzpunkt 209-213ºC.

X

TROC-SPI-Cl

Eine Lösung aus 9,75 g TROC-PIP-Hydrochlorid (32,72 mmol) in 20 ml H&sub2;O wurde mit 40 ml CH&sub2;Cl&sub2; gemischt und in Eis gekühlt, tröpfchenweise mit einer Lösung aus 48,60 g 5,25%-igem NaOCl (34,03 mmol) in H&sub2;O behandelt und auf Eis 50 Minuten lang umgerührt. Die organische Schicht wurde abgetrennt und über MgSO&sub4; getrocknet. Die resultierende Lösung wurde zu einer Lösung von -78ºC aus 30,00 g 502 in 20 ml CH&sub2;Cl&sub2; hinzugegeben, und eine katalytische Menge Cl&sub2; (6 Tropfen) wurde unter einer N&sub2;-Atmosphäre in ein Reaktionsgemisch kondensiert. Man ließ sich das Reaktionsgemisch über 24 Stunden auf Raumtemperatur erwärmen. Das Lösungsmittel wurde verdampft, und der Rückstand wurde zwischen CH&sub2;Cl&sub2; und 0,25 M K&sub2;PO&sub4; aufgeteilt, Puffer mit einem pH von 7, und mit 10%-igem Na&sub2;S&sub2;O&sub3; ausgewaschen. Die organische Schicht wurde über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft. Man erhielt 8,02 g des gewünschten Produkts in der Form eines goldbraunen Feststoffs. Der Aufbau wurde in einer NMR-Spektroskopie nachgewiesen.

Y

BOC-ATG(Z)-CAD

Eine Lösung aus 2,2 g (8 mmol) CAD-Hydrochlorid, 1 g (10 mmol) Et&sub3;N, 1,1 g (8 mmol) HOBT und 3,3 g (8 mmol) BOC-ATG(Z) in 45 ml DMF wurde in Eis gekühlt und mit 1,7 g (8 mmol) DCC in 10 ml DMF behandelt. Nach einer halben Stunde bei 0ºC wurde das Gemisch bei Raumtemperatur 48 Stunden lang umgerührt. DMF wurde destilliert, und der Rückstand wurde mit EtOAc behandelt. Der Harnstoff wurde herausgefiltert und der Rückstand mit zusätzlichen EtOAc-Mengen ausgewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeit wurden kombiniert und nacheinander mit Wasser, gesättigtem NaHCO&sub3; und Salzlösung ausgewaschen. Nach der Trocknung und der Entfernung des Lösungsmittels unter reduziertem Druck erhielt man das Rohprodukt. Dieses wurde mittels Chromatographie (SiO&sub2;, CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH 10%) gereinigt und ergab 6 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Spektroskopie nachgewiesen.

Z

ATG(Z)-CAD HCl

Eine Lösung aus 6 g BOC-ATG(Z)-CAD in 60 ml CH&sub2;Cl&sub2; wurde mit HCl (g) gesättigt und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen gelassen. Die Lösung wurde unter Bildung eines Schaums eingedampft. Der Aufbau wurde in einem ¹H NMR- und Massenspektrum (M + 1 Spitze bei 533) nachgewiesen. Dieses Material wurde so, wie es war, zum Verknüpfen verwendet.

AA

BOC-(S)ATM(TR0C)-FCS-AEM

Zu BOC-(S)ATM(TROC) (2,60 g, 5,63 mmol) und HOBT (0,76 g, 5,63 mmol) in nichtwäßrigem DMF (30 ml) wurde bei 0ºC DCC (1,16 g, 5,63 mmol) in DMF (10 ml), gefolgt von FCS-AEM (2,04 g, 5,63 mmol) in DMF (10 ml) hinzugegeben; das Reaktionsgemisch wurde bei 0ºC 2 Stunden lang umgerührt, bevor es sich auf Raumtemperatur erwärmte. Nach 16 Stunden wurde das Reaktionsgemisch gefiltert und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat (50 ml) aufgenommen und jeweils mit gesättigter wäßriger Natriumbicarbonat-Lösung, Wasser und Salzlösung ausgewaschen. Nach der Trocknung (Na&sub2;SO&sub4;) wurde das Lösungsmittel verdampft und das Rohmaterial auf Kieselgel, eluierend mit einem Gradienten von 3 bis > 5% Methanol in CH&sub2;Cl&sub2; chromatographiert. Das Produkt lag in Form eines weißen Schaums vor (3,0 g, 66%); der Aufbau wurde in einer NMR- und Massenspektroskopie nachgewiesen; MS(FAB):MH&spplus; 807,2.

BB

(S)ATM(TROC)-FCS-AEM

BOC-(S)ATM(TROC)-FCS-AEM (2,20 g, 0,27 mmol), vorliegend in einem Gemisch aus CH&sub2;Cl&sub2; (30 ml) und Methanol (10 ml), wurde 15 Minuten lang bei Raumtemperatur einem HCl-Gasstrom ausgesetzt. Nachdem es weitere 20 Minuten lang umgerührt worden war, wurde das Lösungsmittel verdampft und der Rückstand in Chloroform aufgenommen und rückverdampft. Dieser Vorgang wurde noch zweimal wiederholt, bevor Ethylacetat zu dem Rohprodukt hinzugegeben wurde. Die Lösung wurde mit einer gesättigten wäßrigen Bicarbonatlösung ausgewaschen, um die freie Base zu erzeugen. Die wäßrige Schicht wurde abgetrennt und zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Salzlösung ausgewaschen und getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;). Nach Verdampfung des Lösungsmittels wurde das freie Amin als weißer Schaum (1,90 g, 99%) erhalten. Der Aufbau wurde in einer NMR- und Massenspektroskopie nachgewiesen; MS(FAB)M&spplus; 707,0.

CC

BOC-FCS-AEM

Zu BOC-FCS (4,10 g, 12,0 mmol) und H0BT (1,58 g, 12,0 mmol) in DMF (100 ml) wurde bei 0ºC DCC (2,41 g, 12,0 mmol) in DMF (20 ml) hinzugegeben. Nach 5 Minuten wurde AEM (1,53 ml) in DMF (10 ul) hinzugegeben und das Reaktionsgemisch 2 Stunden lang umgerührt, bevor es sich auf Raumtemperatur erwärmte und weitere 16 Stunden umgerührt wurde. Das Gemisch wurde gefiltert und das Lösungsmittel unter Hochvakuum verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen und jeweils mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung, Wasser und Salzlösung ausgewaschen. Nach der Trocknung (Na&sub2;SO&sub4;) wurde das Lösungsmittel verdampft und das Rohprodukt mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel, eluierend mit 5- bis 7%igem Methanol in Dichlormethan, gereinigt. Das Produkt lag als weißer Schaum (3,38 g, 63%) vor; der Aufbau wurde in einer NMR- und Massenspektroskopie nachgewiesen; MS(FAB)MH&spplus; 464.

DD

BOC-(S)ATM(TROC)-OBZL

Eine Lösung aus 9,56 g (25 mmol) BOC-(S)ATM-OBZL wurde in CH&sub2;Cl&sub2; suspendiert und in einem Aceton/Eisbad gekühlt. 7,74 g DMAP (2,5 Äquivalente) wurden hinzugegeben und gingen in Lösung. 8,40 ml (12, 34 g, 2,3 Äquivalente) TROC-Cl wurden tröpfchenweise hinzugegeben. Nach 4 Stunden wurde die Lösung nacheinander mit Wasser, 0,1 N HCl und gesättigtem wäßrigem Nacl ausgewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;), anschließend konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (400 g SiO&sub2;, eluierend Hexan/Ethylacetat im Verhältnis 1:1. Das Produkt wurde als farbloser Schaum (12,80 g) isoliert. Massenspektrum m/e = 552.

EE

BOC-(S)ATM(TROC)

3,60 g (17,6 mmol) BOC-(S)ATM(TROC)-OBZL wurden in 100 ml Methanol bei Raumtemperatur aufgelöst. KOH (1,16 g) (85%, 2,7 Äquivalente) wurde in 10 ml Wasser aufgelöst und der Lösung zugesetzt. Diese wurde 3,5 Stunden lang umgerührt. Weitere 50 ml Wasser wurden hinzugegeben, das Reaktionsgemisch wurde teilweise konzentriert, anschließend mit EtOAc extrahiert. Diese organischen Substanzen wurden abgeschieden. Die wäßrige Lösung wurde anschließend angesäuert (6N HCl, bildet einen Niederschlag) und wieder mit EtOAc extrahiert. Diese organischen Substanzen wurden mit gesättigtem wäßrigen NaCl ausgewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und konzentriert; man erhielt 2,54 g des gewünschten Produkts in der Form eines wachsartigen weißen Feststoffs. Massenspektrum m/e = 462.

FF

BOC-(S)ATM(TROC)-CAD

27,25 g (58,9 mmol) BOC-(S)ATM(TR0C) wurden in EtOAc aufgelöst und im Eisbad gekühlt. CAD (14,33 g, 58,9 mmol) wurde hinzugefügt, was zu einer Suspension führte. Zu dieser wurden 7,98 g HOBT und 12,13 g DCC (jeweils 1 Äquivalent) hinzugegeben, und das Reaktionsgemisch ließ man über Nacht Umgebungstemperatur annehmen. Das Reaktionsgemisch wurde gefiltert und das Filtrat nacheinander mit 5%-iger Zitronensäure, gesättigtem NaHCO&sub3; und gesättigtem NaCl ausgewaschen, danach getrocknet (MgSO&sub4;) und konzentriert, um 31,0 g des gewünschten Produkts zu liefern. Dieses wurde in 150 ml siedendem EtOAc umkristallisiert. Bei dem ersten Ertrag handelte es sich um 20,25 g, beim zweiten Ertrag um 2,43 g des gewünschten Produkts. Zusätzliche 6,59 g des Produkts erhielt man, indem der ursprüngliche Filterkuchen mit Aceton ausgewaschen und das Filtrat konzentriert wurde. Massenspektrum m/e = 689.

GG

BOC-(S)ATM(TROC)-CDH

BOC-(S)ATM(TROC) (2,50 g, 5,4 mmol) wurde in Methylenchlorid aufgelöst und die Lösung in einem Eisbad gekühlt. CDH (1,25 g, 0,95 Äquivalente) wurde hinzugegeben, gefolgt von 0,70 g H0BT, 1,06 g DCC und 1,26 g DMAP. Man ließ das Gemisch über Nacht Umgebungstemperatur annehmen, anschließend wurde es gefiltert und das Filtrat nacheinander mit 1N HCl, gesättigtem NaHCO&sub3; und gesättigtem NaCl ausgewaschen und getrocknet (MgSO&sub4;). Nach der Konzentrierung wurde der Rückstand chromatographiert (SiO&sub2;, EtOAc) und ergab 0,76 g des gewünschten Produkts. Dieses wurde ohne weitere Reinigung in der nächsten Reaktion eingesetzt.

HH

SMO-PHE-(S)ATM(Z)

SMO-PHE-(S)ATM(Z) (5,6 g) und 0,64 g NaOH wurden in einer Mischung aus 70 ml Methanol und 15 ml Wasser 5 Stunden lang umgerührt. Das Gemisch wurde im Vakuum eingedampft und der Rückstand zwischen 100 ml EtOAc und 100 ml 2N HCl aufgeteilt. Die organischen Phasen wurden abgetrennt und über MgSO&sub4; getrocknet. Die Verdampfung der Lösungsmittel ergab 4,5 g des gewünschten Produkts.

II

(S)ATM(Z)-OBZL HCl

BOC-(S)ATM(Z)-OBZL (10,8 g) wurde in 8 ml MeOH und 50 ml CH&sub2;Cl&sub2; aufgelöst und mit HCl (g) bei Raumtemperatur 3 Stunden lang behandelt. Die Verdampfung ergab 8,8 g des gewünschten Produkts als HCl-Salz. Der Aufbau wurde in einer NMR-, IR- und Massenspektroskopie nachgewiesen.

JJ

SMO-PHE-(S)ATM(Z)-OBZL

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus 3,14 g SMO-PHE, 1,35 g HOBT, 2,06 g DCC, 2,02 g Et&sub3;N und 4,3 g (S)ATM(Z)-OBZL. Chromatographie auf dem Waters Prep 500A unter Verwendung von 5%-igem Methanol/CH&sub2;Cl&sub2; ergab das gewünschte Produkt in Form eines gelben Feststoffs, der so, wie er war, verwendet wurde

KK

TROC-SPI-PHE

Zu einer Lösung aus 5,09 g PHE (30,81 mmol) in 20 ml MeOH wurden 12,97 ml 5%-iges Me&sub4;NOH/MeOH (30,81 mmol) hinzugegeben, und das Gemisch wurde so lange umgerührt, bis eine Lösung entstand. Das Gemisch wurde mit Toluol verdünnt, zu einem Schaum eingedampft und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur bei 0,05 mm getrocknet. Zu einer Suspension des Schaums in 30 ml trockenem THF wurden 60 ml trockenes i- PrOH und 5,49 g TROC-SPI-Cl hinzugegeben. Das Gemisch wurde 16 Stunden lang bei Raumtemperatur unter einer N&sub2;-Atmosphäre umgerührt. Das Lösungsmittel wurde eingedampft und der Rückstand zwischen CH&sub2;Cl&sub2; und 1N HCl getrennt und mit 1N HCl ausgewaschen. Das Produkt wurde aus der organischen Schicht in 0,3 N NaOH extrahiert, welches sofort mit konzentriertem HCl auf einen pH von 1 angesäuert und mit EtOAc wieder extrahiert wurde. Die EtOAc-Schichten wurden mit 1N HCl und gesättigtem NaCl ausgewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet und verdampft, so daß 3,59 g des gewünschten Produkts als goldbrauner Feststoff erhalten wurden. Der Aufbau wurde in einer NMR-Spektroskopie nachgewiesen.

LL

FCS-AEM

Zu BOC-FCS-AEM (5,17 g) in trockenem CH&sub2;Cl&sub2; (100 ml) wurden 6 ml TFA bei Raumtemperatur hinzugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 6 Stunden lang umgerührt. Nach der Konzentrierung wurde der Rückstand mit gesättigter NaHCO&sub3;- Lösung behandelt und das Produkt in Ethylacetat extrahiert, mit Salzlösung ausgewaschen und getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;). Nach Trocknung unter Hochvakuum über mehrere Stunden erhielt man das gewünschte Produkt in der Form eines weißen Schaums in einer Menge von 3,65 g. Die Verbindung wurde durch NMR- Spektroskopie nachgewiesen.

MM

BOC-(S)ATM(Z)-CYSTA-BHEAEA

Das Produkt wurde wie in Beispiel 1 hergestellt, und zwar aus BOC-(S)ATM(Z) (5 g), HOBT (1,68 g), DCC (2,6 g) und CST- BHEAEA (4,1 g) in DMF (25 ml). Nach einer Kieselgel- Chromatographie (CH&sub2;Cl&sub2;:MeOH = 19:1)ergab dies 3,26 g des gewünschten Produkts.
Analysiert in bezug auf C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub6;N&sub6;O&sub9;S 0,8 CHCl&sub3;:
Errechnet: C, 52,34; H, 6,78; N, 9,95;
Gefunden: C, 52,52; H, 6,91; N, 9,91.

NN

BOC-FCS-OET

Zu einer Suspension aus Zinkstaub (15,3 g) in THF (300 ml) wurde ein I&sub2;-Kristall hinzugegeben und das Gemisch zum Rückfluß gebracht. Nacheinander wurden Bromdifluorethylacetat (0,2 ml) und ein Gemisch desselben Esters (25,3 g) und (S)- BOC-Cyclohexylalanol (20 g) in THF (100 ml) hinzugegeben. Aus dem Gemisch wurde unlösliches Material herausgefiltert und die Lösungsmittel bei reduziertem Druck verdampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgelöst und der pH mit 1M KHSO&sub4;-Lösung eingestellt, bis er 2 betrug. Aus dieser Lösung wurden Feststoffe herausgefiltert und die organischen Substanzen von dem Filtrat getrennt. Die wäßrige Lösung wurde mit Ethylacetat (2X) extrahiert, die kombinierten organischen Schichten mit Salzlösung ausgewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft; das Ergebnis war ein gelber Feststoff. Dieser Feststoff wurde mit 20%-igem Ethylacetat in Hexan pulverisiert und führte zu dem gewünschten Produkt in Form eines weißen Feststoffs in einer Menge von 6,5 g. Der Aufbau wurde in NMR- und IR- Untersuchungen nachgewiesen.

OO

FCS-OET HCl

Zu BOC-FCS-OET (5,3 g) in Methanol (250 ml) wurde HCl-Gas (Begasungsröhrchen) hinzugegeben, bis die Lösung gesättigt war. Die Lösung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur umgerührt und bei reduziertem Druck verdampft; das Ergebnis waren 4,5 g des gewünschten Produkts in Form eines weißen Feststoffs. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung nachgewiesen.

PP

BOC-(S)ATM(TROC)-FCS-OET

Die Verbindung wurde wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-(S)ATM(TROC) (5,90 g), HOBT (1,73 g), DCC (2,64 g), Et&sub3;N (1,43 ml) und FCS-OET HCl (4,03 g). Nach Kieselgel-Chromatographie (4% MeOH/CH&sub2;Cl&sub2;) erhielt man 2,55 g des gewünschten Produkts. Der Aufbau wurde in einer NMR-Untersuchung nachgewiesen.

QQ

(S)ATM(TROC)-FCS-OET

Zu BOC-(S)ATM(TROC)-FCS-OET (2,54 g) in EtOH (25 inl) wurde CH&sub2;Cl&sub2; (200 ml) hinzugegeben und die Lösung mit HCl-Gas gesättigt. Das Gemisch wurde über Nacht stehen gelassen und dann bei reduziertem Druck eingedampft. Der Feststoff wurde zwischen EtOAc (250 ml) und gesättigter NaHCO&sub3;-Lösung (200 ml) geteilt. Die organische Phase wurde mit Salzlösung ausgewaschen und über MgSO&sub4; getrocknet. Die Verdampfung der Lösungsmittel ergab 1,97 g des gewünschten Produkts.
Analyse:
Errechnet: C, 40,01 H, 4,88; N, 8,48;
Gefunden: C, 38,03; H, 4,94; N, 8,50.

RR und SS

BOC-ATG(Z)-FCS-AEM (Isomer A) RR

BOC-ATG(Z)-FCS-AEM (Isomer B) SS

Die Verbindungen wurden wie in Beispiel 1 synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATG(Z) (3,3 g), H0BT (1,1 g), DCC (1,7 g) und FCS-AEM (2,9 g). Nach einer Kieselgel- Chromatographie (3-5% MeOH/CH&sub2;Cl&sub2;) erhielt man 1,9 g des Isomers A (schnell eluierend) und 1,9 g des Isomers B (langsam eluierend). Beide Verbindungen wurden in NMR-, IR- und Massenspektroskopie nachgewiesen.

TT

ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer A

Die Verbindung wurde wie in Zwischenstufe H synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer A (1,9 g). Man erhielt 1,5 g einer freien Base, die so, wie sie war, verwendet wurde.

UU

ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer B

Die Verbindung wurde wie in Zwischenstufe H synthetisch hergestellt, und zwar aus BOC-ATG(Z)-FCS-AEM, Isomer B (1,9 g). Man erhielt 1,7 g einer freien Base, die so, wie sie war, verwendet wurde.

Claims

1. Verbindung der Formel

oder ein pharmakologisch verträgliches Säureadditionssalz derselben,

wobei A H, BOC, BBSP, Z,

oder

ist, wobei R und R&sub1; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, welcher unsubstituiert oder mit einer oder zwei Hydroxygruppen, einer oder zwei Aminogruppen oder

substituiert ist, wobei dies ein gesättigter Ring mit zwei bis fünf Kohlenstoffatomen ist, wobei Q CH&sub2;, O, S oder NR ist, wobei R wie oben beschrieben ist,

B fehlt, PHE, TYR oder TYR(OMe) ist, mit der Maßgabe, daß B fehlt, wenn A BBSP ist,

C CST, FCS, FCO, CAD, CDH oder STA ist,

D fehlt, OH, oder NR&sub2;R&sub3; ist, wobei R&sub2; und R&sub3; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, oder wenn R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, R&sub3; auch (CH&sub2;)mX sein kann, wobei m eine ganze Zahl von 0 bis 8 ist, sowie X -OH,

- wie oben definiert-, OR&sub4;, NR&sub5;R&sub6; ist, wobei R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder ein geradkettiger oder verzweigtkettiger niederer Alkylrest sind, welcher unsubstituiert oder mit einer oder zwei Hydroxy- oder Aminogruppen substituiert ist, mit der Maßgabe, daß D fehlt, wenn C CAD ist,

E ein Wasserstoffatom, Z, BOC, TROC oder ein niederer Alkanoylrest ist,

n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist,

X und Y unabhängig voneinander O,S,N oder NH sind, und zumindest eines von X und Y N sein muß.

2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei

A BOC, BBSP,

oder

ist,

B fehlt, PHE oder TYR(OMe) ist,

C CST, FCO, FCS oder CAD ist,

D fehlt

oder

ist;

E ein Wasserstoffatom oder ein niederer Alkanoylrest ist, mit der Maßgabe, daß D fehlt, wenn C CAD ist, und n 1 ist.

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei A

oder

und B PHE oder TYR(OMe) ist.

4. Verbindung nach Anspruch 1-3, wobei

A

ist,

B PHE ist,

C CST oder CAD ist,

D fehlt,

oder

und E ein Wasserstoffatom ist.

5. Verbindung nach Anspruch 1-4, wobei das Peptid aus der Gruppe bestehend aus (Isomer B)

ausgewählt ist.

6. Verbindung nach Anspruch 1 mit der Bezeichnung SMO-PHE- (S)ATM-CAD (Isomer A).

7. Pharmakologische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6 zusammen mit einem pharmakologisch verträglichen Träger aufweist.

8. Diagnostisches Mittel zur Bestimmung von Renin-bedingter Hypertonie, welches eine Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6 zusammen mit einem verträglichen Träger aufweist.

9. Verwendung einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6 zur Herstellung eines für die Bestimmung von Renin-bedingter Hypertonie bei einem Patienten nützlichen diagnostischen Mittels, indem diesem Patienten eine Verbindung nach Anspruch 1 in einer hypotensiven Dosierung und in Form einer einzelnen Dosis verabreicht und anschließend der Blutdruck des Patienten überwacht wird.

10. Verwendung einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6 zur Herstellung einer pharmakologischen Zusammensetzung zur Behandlung von Hypertonie, Hyperaldosteronismus, kongestivem Herzversagen, Krankheiten, die durch Retroviren, einschließlich HTLV-I, -II, III, hervorgerufen werden, oder Glaukomen.

11. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6, das folgende Schritte umfaßt:

a) Umsetzen einer N-geschützten Aminosäure mit einem gewünschten Amin, um das entsprechende Amid zu erzeugen;

b) Entfernung der N-Schutzgruppe des Amids und Verknüpfen desselben mit einer gewünschten Säure, um ein Dipeptidylähnliches Amid zu erzeugen, und

c) Entfernen der Seitenkettenfunktionen an dein Amid, um die gewünschte Verbindung nach Formel I zu erzeugen und sie, falls gewünscht, in ein pharmakologisch verträgliches Salz umzuwandeln.

12. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 6, wobei C FCS oder FCO ist, welches folgendes aufweist:

a) Umsetzen eines Aminosäureesters mit TROC-Schutz an der Seitenkette mit einer N-geschützten Aminosäure, um ein Dipeptidester zu erzeugen, das anschließend zu der entsprechenden Dipeptidsäure hydrolisiert wird;

b) verknüpfen des Produkts von Schritt a) mit einem Amin, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus FCS oder FCO, um die TROC-geschützte Verbindung nach Anspruch 1 zu erzeugen, und

c) weiteres Entfernen, falls gewünscht, um eine Verbindung nach Anspruch 1 zu erzeugen, die, wenn es gewünscht wird, in ein pharmakologisch verträgliches Salz umgewandelt wird.

13. Verbindung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: (Isomer A) (Isomer B)