DE629808C

DE629808C - Process for the enrichment and purification of gonad hormones

Info

Publication number: DE629808C
Application number: DESCH103414D
Authority: DE
Original assignee: Schering Kahlbaum AG
Current assignee: Schering Kahlbaum AG
Priority date: 1934-02-10
Filing date: 1934-02-10
Publication date: 1936-05-13

Description

Verfahren zur Anreicherung und Reindarstellung von Keimdrüsenhormonen Von den verschiedenen zur Anreicherung und Reindarstellung von Keimdrüsenhormo= . nen benutzten Verfahren haben sich technisch diejenigen als besonders brauchbar erwiesen, die es gestatten, die Hormone unter Nutzbarmachung ihrer chemischen Eigenschaften von ihren Begleitstoffen abzutrennen. So werden nach dem in der Patentschrift 584211 beschriebenen Verfahren native keim drüsenhormonhaltige Extrakte z. B. durch Verschmelzen mit Phthalsäureanhydrid verestert. Durch Verteilung des Reaktionsproduktes zwischen Äther und Sodalösung wird eine Aufteilung des- Ausgangsmaterials in salzbildende und nichtsalzbildende Fraktionen und damit verbanden eine Anreicherung der darin enthaltenen Hormone ermöglicht.Process for the enrichment and purification of gonadal hormones From the various to the enrichment and purification of the gonad hormone = . Technically, those methods used have proven to be particularly useful proven to allow the hormones to utilize their chemical properties to separate them from their accompanying substances. According to the patent specification 584211 described method native germ gland hormone-containing extracts z. B. by merging Esterified with phthalic anhydride. By distributing the reaction product between Ether and soda solution is a division of the starting material into salt-forming and non-salt-forming fractions and an enrichment associated with it contained hormones.

Während das vorstehend erwähnte Verfahren. in gleicher Weise zur Aufbereitung männlicher und weiblicher Keimdrüsenhormonextrakte verwendet werden kann, ist die von . D o i s y und Mitarbeitern ausgeführte Extraktion des Follikelhormons aus verdünnten wäßrigalkalischen Lösungen mittels Äther auf dieses Hormon beschränkt. Immerhin gelingt es mit dieser Methode, Follikelhormon in kristallisierter Form darzustellen, wenn die alkalische Ätherextraktion genügend oft wiederholt wird.While the aforementioned procedure. in the same way for processing male and female gonadal hormone extracts can be used is the from . D o i s y et al. Carried out extraction of the follicular hormone diluted aqueous alkaline solutions are limited to this hormone by means of ether. After all, this method succeeds in producing follicular hormone in crystallized form when the alkaline ether extraction is repeated enough often.

Es wurde nun gefunden, daß eine in geeigneter Weise durchgeführte Kombination dieser beiden Methoden gegenüber den Einzelverfahren beträchtliche technische Vorteile bietet. Zerlegt man nämlich Keimdrüsenhormonrohextrakte zunächst durch Verschmelzen mit Phthalsäureanhydrid in einen sauren, sodalöslichen und einen neutralen, ätherlöslichen Anteil und extrahiert nach der alkalischen Verseifung dieser beiden Fraktionen die Verseifungsflüssigkeiten z. B. nacheinander verdünnt alkalisch, hicarbonatalkalisch und schließlich sauer mit Äther oder anderen mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmitteln<, dann wird auf diese Weise eine Aufteilung des ursprünglichen Ausgangsmaterials in sechs Fraktionen bewirkt, deren jede einzelne Substanzen ähnlicher chemischer Eigenschaften enthält. Die beiden durch alkalische Ätherextraktion der Verseifungsflüssigkeiten erhaltenen Fraktionen lassen sich ihrerseits durch eine Verteilung zwischen konzentriertem Alkali und einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel nochmals unterteilen in je einen schwach .phenolischen und einen neutralen Anteil.It has now been found that one can be carried out in a suitable manner Combination of these two methods compared to the individual process is considerable technical Offers advantages. First of all, raw gonadal hormone extracts are broken down Merging with phthalic anhydride into an acidic, soda-soluble and a neutral one, ether-soluble portion and extracted after the alkaline saponification of these two Fractions the saponification liquids z. B. successively diluted alkaline, hicarbonatalkalisch and finally acidic with ether or other water-immiscible solvents <, then in this way a division of the original starting material into causes six fractions, each of which has individual substances of similar chemical properties contains. The two by alkaline ether extraction of the saponification liquids obtained fractions can in turn by a distribution between concentrated Alkali and a water-immiscible organic solvent again divided into a weakly phenolic and a neutral part.

Bei dieser weitgehenden Unterteilung der Hormonrohpräparate werden die darin enthaltenen Keimdrüsenhormone je nach Art der ihnen:. eigentümlichen chemischen Eigenschaften in den entsprechenden Fraktionen angereichert und vorn physiologisch unwirksamen Begleitstoffen sowie chemisch anders gearteten Hormonen abgetrennt. So findet sich z. B. das Testikelbormon auf Grund seiner Alkoholnatur in den neutralen Anteilen der saurenPhthalsäureesterfraktion, das Pollikelhormon der Formel C18 H.. 02 hingegen bei den schwachen Phenolen der sogenannten anveresterten -Anteile der Phthalsäureänhydridschmelze. Das in Schwangerenharnextrakten enthaltene Follikelhormonhydrat der Formel C18 H24 03 ist stärker phenolisch als das Follikelhormon und besitzt außerdem zwei. alkoholische Hydroxylgruppen. Es wird dem» zufolge bei den starken Phenolen der sauren Phthalsäureesterfraktion gefunden.With this extensive subdivision of the hormone raw preparations the gonadal hormones it contains depending on the type of them :. peculiar chemical Properties enriched in the appropriate fractions and physiologically in front ineffective accompanying substances and chemically different hormones are separated. So there is z. B. the testicular hormone due to its alcoholic nature in the neutral Portions of the acidic phthalic acid ester fraction, the pollicle hormone of the formula C18 H .. 02, on the other hand, is the case with the weak phenols, the so-called anesterified ones Shares the phthalic anhydride melt. The follicular hormone hydrate contained in pregnancy urine extracts of the formula C18 H24 03 is more phenolic than the follicle hormone and has also two. alcoholic hydroxyl groups. According to this, it will be “among the strong Phenols of the acidic phthalic acid ester fraction found.

Das beschriebene Verfahren wirkt alsoaußerordentlich selektiv und gestattet neben der Trennung des männlichen Keimdrüsenhormons vom weiblichen auch eine Scheidung der verschiedenen weiblichen Keimdrüsenhormone. Ein weiterer Vorzug dieses Kombinationsverfahrens besteht darin, daß es zu Hormonpräparaten von beträchtlicher Reinheit führt. Insbesondere werden die weiblichen Keimdrüsenhormone mit seiner Hilfe direkt in reinem kristallisiertem Zustand erhalten, was z. B. nach dem Doisyschen Verfahren erst nach einer Vielzahl. von Ätherextraktionen des Follikelhormons aus alkalischer Lösung der Fall ist.The method described is therefore extremely selective and allows in addition to the separation of the male gonad hormone from the female too a divorce of the various female gonadal hormones. Another advantage this combination process consists in the fact that it results in hormone preparations of considerable Purity leads. In particular, the female gonadal hormones with his Help received directly in a pure crystallized state, which z. B. after Doisyschen Procedure only after a large number. from ether extractions of the follicular hormone alkaline solution is the case.

Beispiel: Ein nach bekannten -Verfahren aus dem Harn trächtiger Stuten gewonnenes Rohprodukt von etwa 30ö: 000 M. E.fg wird nach der in der Patentschrift 58-q.211 in Beispiel :2 beschriebenen Methode mit Phtbalsäureanhydrid- verschmolzen und durch Verteilung des Schmelzgutes zwischen Äther und wäßriger Sodalösung in zwei Fraktionen zerlegt. Example: A crude product of about 306: 000 MEfg obtained from the urine of pregnant mares by known processes is fused with phthalic anhydride according to the method described in patent specification 58-q.211 in example: 2 and by distributing the molten material between ether and aqueous Soda solution divided into two fractions.

Der Ätherextrakt wird nach dem Verjagen des Lösungsmittels mit 5°/oiger methylalkoholischer Kalilauge verseift. Nach denn. Erkalten, wird: die methylalkoholische Verseifungslange stark mit Wasser auf einen Alkaligehalt von etwa o,5 0% verdünnt. und: gründlichst in einem Extraktionsapparat mit, .Äther ausgezogen. rDer -gewonnene Ätherextrakt wird nun wiederholt mit 1o bis z5°/oiger wäßriger Kalilauge so lange ausgeschüttelt, bis beim Ansäuern einer Probe des letzten Alkaliauszuges. keine Fällung mehr erfolgt. Beim Ansäuern der vereinigtem Alkaliauszüge scheidet sich das Follikelhormon in fein. kristalliner Form ab und kann durch Filtration- oder Aufnehmen in Äther isoliert werden.The ether extract is after driving off the solvent with 5% saponified methyl alcoholic potassium hydroxide solution. After then. Will cool down: the methyl alcoholic Saponification long strongly diluted with water to an alkali content of about 0.50%. and: thoroughly pulled out in an extraction apparatus with, ether. rThe won The ether extract is then repeated with 10 to z5% aqueous potassium hydroxide solution for so long Shaken out until a sample of the last alkali extract is acidified. no Precipitation takes place more. When the combined alkali extracts are acidified, it separates the follicular hormone in fine. crystalline form and can by filtration or Absorb in ether to be isolated.

Der dien sauren Phthalsäureester enthaltende, aus der Schmelze gewonnene Sodaauszug wird- nach Zugabe von festem Kaliumhydroxyd bis zu einem;Gehalt von 5 1/0 durch Erhitzen auf 9o- bis zoo° verseift. Die Verseifungslauge wird nach dem- Erkalten stark mit Wasser verdünnt und gründlichst mit Äther extrahiert. Der Ätherextrakt wird dann wiederholt -mit 1o_ bis. z5°foiger Kalilauge ausgezogen, bis das gesamte alkalilösliche Material aus -der Ätherlösung entfernt ist. Nach dem Ansäuern der vereinigten Alkaliauszüge fällt ein Harz aus, das durch Aufnehmen in Äther isoliert werden kann und das ö-Follikelhormon nach Schwenk ud''-; H i 1 d e b r a n d t in hochkonzentrierter ms enthält. ei;: der Verwendung von Harn schwan- hdrr,Frauen bzw. Männerharn werden P re- g n ä n d i o 1 (vgl. Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft, 193o, Bd.63, S.659ff. und 1934 Bd.6q., S.2529ff.) und Testikelhormon bzw. Testikelhormon auf Grund ihrer Alkoholnatur durch Auschütteln des Ätherextraktes aus der verseiften Phthalsäureesterfraktion mit konzentrierter Alkalilauge von dem phenolischen Anteil abgetrennt.The soda extract, which contains the acidic phthalic acid ester and is obtained from the melt, is saponified - after adding solid potassium hydroxide up to a content of 5 1/0 - by heating to 90 to zoo °. After cooling, the saponification liquor is strongly diluted with water and extracted very thoroughly with ether. The ether extract is then repeated -with 1o_ bis. Z5 ° of potassium hydroxide solution is extracted until all the alkali-soluble material has been removed from the ether solution. After the combined alkali extracts have been acidified, a resin precipitates which can be isolated by being taken up in ether and the ö-follicular hormone according to Schwenk ud ''-; H i 1 debrandt in highly concentrated ms contains. ei ;: the use of urine fluctuates hdrr, women or men urine will be P re gn ändio 1 (see reports of the German Chemical Society, 193o, vol. 63, p.659ff. and 1934 vol. 6q., p.2529ff.) and testicle hormone or testicle hormone due to their alcoholic nature by shaking out the ether extract from the saponified phthalic acid ester fraction separated from the phenolic fraction with concentrated alkali lye.

Aus den nach Alltrennung der Hormone verbleibenden, mit Äther extrahierten verdünnt alkalischen- Lösungen können durch Einleiten von CO, weitere, größtenteils kristallisierte Produkte ausgefällt und durch Aufnehmen in Äther isoliert werden.From the hormones remaining after the separation of the hormones, extracted with ether Diluted alkaline solutions can be largely removed by introducing CO, further crystallized products are precipitated and isolated by taking up in ether.

Als Ausgangsmaterialien kann man auch Rohpräparate ariderer Herkunft verwenden-, wie Extrakte aus Plazenta, Ovarien und anderen Organen, ferner aus hormonhaltigen pflanzlichen Materialien, wie Palrnkernöl u. dgl., oder auch Auszüge aus Kohle, Mineralölen und ähnlichen Stoffen sowie auf synthetischem Wege erhaltene Gemische, die neben Substanzen mit Hormoncharakter von diesen chemisch verschiedene physiologisch unwirksame Begleitstoffe enthalten.Raw preparations of different origins can also be used as starting materials use, such as extracts from placenta, ovaries and other organs, and also from hormone-containing extracts vegetable materials such as palm kernel oil and the like, or extracts from coal, Mineral oils and similar substances as well as synthetically obtained mixtures, which, in addition to substances with hormonal character, are chemically different from these physiologically contain ineffective accompanying substances.

Claims

PATENT CLAIM: Process for enrichment and leg representation of Gonadal hormones, characterized in that raw hormone preparations are first used according to the process of patent 584211 and additional patent 627 329 with connections, which, in addition to the group used for condensation, also enabled another group to form salts Group or a group which can be converted into it, condensed, the obtained Separates reaction product into a salt-forming and a non-salt-forming part and these are saponified and according to the chemical constitution of that contained in them Hormones by treatment with aqueous alkaline solutions of different pH values in the presence of water-immiscible solvents further into the individual Fractions containing hormones are broken down.