DE60211917T2

DE60211917T2 - Alle somatostatinrezeptorsubtypen-bindende somatostatinanaloge und deren verwendung

Info

Publication number: DE60211917T2
Application number: DE60211917T
Authority: DE
Inventors: Robert Helmut MAECKE; Claude Jean REUBI; Hans Rink; Klaus-Peter Eisenwiener
Original assignee: Universitaet Bern; Universitaetsspital Basel USB
Current assignee: Universitaet Bern; Universitaetsspital Basel USB
Priority date: 2001-08-10
Filing date: 2002-08-07
Publication date: 2007-01-18
Anticipated expiration: 2022-08-08
Also published as: JP2005508886A; US7541018B2; EP1419178B1; DK1419178T3; US20040242842A1; WO2003014158A1; ATE328005T1; EP1419178A1; US7192570B2; CA2456881A1; PT1419178E; ES2266616T3; EP1283216A1; US20070154392A1; CY1105177T1; AU2002333396B2; DE60211917D1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Somatostatinanaloge und ihre Verwendung in der Diagnose und Therapie. Die Erfindung betrifft ferner pharmazeutische Verbindungen, die die neuen Analoge umfassen.
Somatostatin (Somatotropin Release Inhibiting Factor) wurde ursprünglich als hypothalamisches Neurohormon entdeckt, welches die Sekretion von Wachstumshormonen hemmt. Es ist sowohl im zentralen als auch im peripheren Nervensystem ein weit verbreitetes Peptid und auch in peripheren Geweben wie dem endokrinen Pankreas-, Darm-, Schilddrüsen-, Nebennieren- und Nierengewebe anwesend. Ferner wird Somatostatin von Entzündungszellen und Immunzellen sowie vielen Krebszellen produziert.
Bei Säugetieren findet man zwei Formen bioaktiver Peptide, das Somatostatin 14 und Somatostatin 28. Sie werden mittels gewebespezifischer proteolytischer Umsetzung eines üblichen Vorläufers produziert. Die natürlichen Somatostatinpeptide weisen eine kurze Halbwertszeit auf, daher wurden viele Somatostatinanaloge synthetisch hergestellt. Unter anderem sind Octreotide, Lanreotide und Vapreotide intensiv untersucht worden, und werden klinisch eingesetzt für die medizinische Behandlung von Akromegalie und neuroendokrinen Tumoren. Diese Octapeptide halten die Aminosäurereste (oder Substituenten), welche bei der biologischen Wirkung des Peptids (Phe⁷ oder Tyr⁷, D-Trp⁸, Lys⁹ und Thr¹⁰ oder Val¹⁰) eine Rolle spielen und deutlich erhöhte Stabilität aufweisen, in einem cyclischen Peptidgerüst zurück.
Die biologischen Effekte von Somatostatin werden durch spezifische Plasmamembranrezeptoren vermittelt, die in normalen und neuroplastischen Geweben durch Bindungsuntersuchungen und mittels Rezeptor-autoradiografischer Technologien identifiziert wurden. Es wurden fünf Somatostatinrezeptorgene aus Human- und Säugetiergenbanken geklont und als sst1 bis sst5-Rezeptoren bezeichnet. Die sst-Subtypen gehören zu der Familie der G-Protein gekoppelten Rezeptoren mit sieben membranspannenden Domänen und zeigen einen hohen Grad an Sequenzidentität (39–57%). Die Sequenzunterschiede liegen in den extra- und intrazellulären Domänen und sind möglicherweise für ihre Signalspezifität verantwortlich.
Alle Somatostatinrezeptoren binden Somatostatin 14 und Somatostatin 28 mit hoher Affinität (nM-Bereich), allerdings mit einer leicht höheren Affinität für Somastatin 14. Die Rezeptoren zeigen jedoch bedeutende Unterschiede in ihrer Affinität für Peptidanaloge. Heute bekannte Analoge zeigen eine geringe Affinität für sst1 und sst4, wohingegen sie den sst2- und sst5-Rezeptor mit hoher Affinität binden, welche vergleichbar mit der von Somatostatin 14 ist, und binden den sst3-Rezeptor mit mäßiger Affinität.
Zusätzlich zu seinem Effekt auf die Sekretion und Intestinalmotilität hemmt Somatostatin die Proliferation sowohl von normalen als auch von Tumorzellen. Die antiproliferative Wirkung von Somatostatin kann über die fünf sst-Rezeptoren signalisiert werden, welche Pertussistoxin-sensitiven G-Protein-abhängigen Stillstand oder Apoptose des Zellwachstums initiieren, je nach Rezeptor-Subtypen und Zielzellen.
In CHO-Zellen exprimiert hemmen ligandenaktivierte sst1-, sst2A-, sst4- und sst5-Rezeptoren das mitogene Signal von Serum oder Wachstumsfaktoren als Folge der Hypophosphorylierung des Retinoblastom-Genproduktes (Rb) und G₁-Zellzyklusarrest.
Jedoch sind je nach Rezeptor-Untereinheit ausgeprägte Signaltransduktionswege am Somatostatin-induzierten G₁-Zellzyklusstillstand beteiligt. Der sst1-Rezeptor vermittelt den Zellwachstumsstillstand durch die Stimulation der Tyrosinphosphatase SHP-2, Aktivierung des Ras/MAP-Kinase ERK-Wegs und Induktion des cyclin-abhängigen Kinaseinhibitors p21^Wa ^f1/Cip1, wohingegen der sst5-Rezeptor durch einen Mechanismus agiert, der eine Dephosphorylierungs-Kaskade umfasst, welche zur Hemmung der Guanylatcyclase, cGMP-abhängiger Proteinkinase G und MAP-Kinase ERK 1/2 führt.
Der durch den sst2-Rezeptor vermittelte antiproliferiative Effekt resultiert aus der Aktivierung der Tyrosinphosphatase SHP-1 und der Dephosphorylierung von aktivierten Wachstumsfaktor-Rezeptoren und führt so zu der negativen Regulation der Wachstumsfaktorinduzierten mitogenen Signalgebung.
Zudem induziert somatostatinaktiviertes SHP-1 einen G₁-Zellzyklusstillstand, upreguliert den cyclin-abhängigen Kinaseinhibitor p²⁷ ^Kip1 und führt so zur Akkumulation des hypophosphorylierten Rb.
Die antiproliferative Wirkung des Somatostatins kann auch aus Apoptose resultieren. Apoptose wird durch sst3 als Folge der Induktion von p53 und Bax induziert. In humanen Pankreaskrebszellen, die mutiertes p53 expimieren und keinen endogenen sst-2-Rezeptor aufweisen, verursacht die Korrektur des Defizits durch Expression des sst2-Rezeptors vermehrten Zelltod, was darauf hindeutet, dass Somatostatin die Apoptose durch p53-abhängige und p53-unabhängige Mechanismen induzieren kann.
Die antiproliferativen Effekte von Somatostatin resultieren aus seinen Wirkungen über den endokrinen Weg, aber es gibt Anzeichen, dass Somatostatin auch über einen autokrinen/parakrinen Weg agieren kann. Immunoreaktives Somatostatin ist in Somatostatin-Rezeptor-positiven normalen und Tumorzelltypen gefunden worden, wie endokrinen Zellen, Lymphzellen, Makrophagen, Brustkrebszellen, Darmtumorzellen, und darüber hinaus wird Somatostatin mRNA in einer Vielzahl neuroendokriner Tumoren, die für ihre Somatostatin-Rezeptoren-Expression bekannt sind, gefunden. Die Korrektur des sst2-Rezeptor-Mangels in humanen Pankreaskrebszellen mittels sst2-Rezeptor-Expression induziert bei Abwesenheit von exogenen Liganden einen negativen autokrinen Wachstumsloop, der auf sst2-Rezeptorinduzierte Expression und Sekretion von endogenen sst2-Liganden (Somatostatin 14 und Somatostatin 28) zurückzuführen ist. Dies führt zur Inhibierung der Krebszellenproliferation und Umkehr der Zelltumorigenizität in vitro und in vivo nach Xenotransplantaten bei Nacktmäusen.
Die Somatostatinwirkung auf das Tumorwachstum kann Folge indirekter Effekte des Peptides sein, die aus der Inhibierung der Sekretion der wachstumsfördernden Hormone und den das Tumorwachstum spezifisch regulierenden Wachstumsfaktoren resultiert. So wird z.B. die Sekretion des insulinartigen Wachstumsfaktoren 1 (IGF-1), der durch Hepatocyten mittels GH-abhängiger und -unabhängiger Mechanismen hergestellt wird, durch Octreotide negativ kontrolliert als Resultat eines Effektes auf die GH-Sekretion, und es wurde dargelegt, dass die sst2- und sst5-Rezeptoren mit dieser Wirkung in Zusammenhang zu bringen sind. Ferner kann Somatostatin die IGF-Genexpression reduzieren. Somatostatin inhibiert auch die Angiogenese. Bei humanen peritumoralen kolorektalen Karzinomen, kleinzelligem Lungenkarzinom, Brustkrebs, Nierenzellenkarzinom und malignen Lymphomen wurde bereits von Überexpression peritumoraler vaskulärer Somatostatin-Rezeptoren mit hoher Affinität für Somatostatin und Octreotide berichtet. Diese Expression scheint unabhängig von der Rezeptorexpression in dem Tumor zu sein. Dies kann die Anwesenheit von sst-Rezeptoren in den venösen glatten Muskelzellen sowie den Endothelzellen reflektieren und eine Vasokonstriktion ermöglichen, die zu lokaler Hypoxie des Tumors oder Inhibierung des endothelialen Zellwachstums und Monozytenmigration führt. Sst2-, sst3- oder sst5-Rezeptoren können bei diesen Effekten eine Rolle spielen.
Obwohl die biologische Rolle und zelluläre Verteilung jeder Rezeptor-Subtypen noch nicht vollständig verstanden ist, ist evident, dass die Entwicklung von Analogen, die an alle Somatostatin-Rezeptor-Subtypen binden, sogenanntes Pansomatostatin, ein hohes Potenzial besitzt.
Es ist daher Aufgabe der vorliegenden Erfindung solche neuen Somatostatinanaloge zur Verfügung zu stellen, die an alle fünf Somatostatinrezeptoren binden und eine längere Halbwertzeit (hohe Stoffwechselstabilität) als Somatostatin selbst aufweisen.
Dies wird erfindungsgemäß erreicht durch Somatostatinanaloge der allgemeinen Formel:
in der Z abwesend oder anwesend sein kann, und bei Anwesenheit ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Chelatoren auf der Basis von DOTA und DTPA, Chelatoren auf der Basis von NOTA, Carbonylverbindungen, 2Hydrazino-Nicotinamid (Hynic), N₄-Chelatoren, Desferrioxamin, N_xS_y-Chelatoren, alle optional mit einem Radioisotop komplexiert, Tyrosin (Tyr) zur Halogenierung, ein Fluoreszenzfarbstoff oder Biotin;
L abwesend oder anwesend sein kann und ein Linker-Molekül ist;
X1 eine symmetrische oder asymmetrische Diaminosäure ist, enthaltend 3 oder 4 aufeinanderfolgende C-Atome mit einem Linker an den Chelatbildner, zum Beispiel D/L-Diamino-Buttersäure (D/L-Dab) für einen basischeren Charakter oder D/L-Glu zur Verknüpfung an primäre und sekundäre Aminogruppen;
X2 eine positiv geladene, natürliche oder nicht natürliche Aminosäure oder ein Arginin-Imitator oder Citrullin oder eine neutrale Aminosäure, wie Asn, ist;
X3 Phenylalanin (Phe), Ala-[3-(2-Thienyl)] oder α-, β-Naphthylalanin ist;
X4 eine aromatische, optional halogenierte, insbesondere mit Cl, Br, I oder ¹⁸F, Aminosäure ist;
X5 Threonin (Thr) oder Serin (Ser) ist; und
X6 Phenylalanin (Phe), Ala-[3-(2-Thienyl)] oder α-, β-Naphthylalanin ist.
Vorzugsweise ist X1 Diaminopropionsäure oder Diaminobuttersäure.
Vorzugsweise ist X2 ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Lysin (Lys), Homolysin,
I-Amp Ornithin und
L/D-Phg (4-Amidino) und Derivaten.
Wenn X2 ein Arginin-Imitator ist, ist es vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus
(R/S)-Gly/Ala-4-Pip(N-amidino)
D/L-Phe [4-Guanidino) und deren Derivate
(R/S)-2-amino-4-[4-(2-amino)-Pyrimidinyl]-Butansäure (n = 2) und Derivate sowie quartären Ammoniumderviaten (NR₃ ⁺).
X4 ist vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus aus Tyrosin (Tyr), halogeniertem Tyrosin, insbesondere iodiertem Tyrosin (I-Tyr), Dimethyltyrosin (diMe-Tyr), α-, β-Naphthylalanin, halogeniertem Phenylalanin, insbesondere iodiertem Phenylalanin (I-Phe). Ist X4 halogeniert, so vorzugsweise mit Cl, Br oder I.
Ist ein Linker L anwesend, so kann er ausgewählt sein aus der Guppe, bestehend aus Tyrosin, Lysin, Diaminobuttersäure, Diaminopropionsäure, Polyethylenglykol, Fettsäuren und deren Derivate, β-Alanin, 5-Aminovaleriansäure, Sarkosin, Glutarsäure.
Alternativ kann die Linkerfunktion durch X1 übernommen werden.
Ein Beispiel eines symmetrischen Linkers ist
Diaminosäuren, wie Diaminobuttersäure oder 4,8 Diaminooctansäure und symmetrische Moleküle, wie N,N-bis (N'-3-Aminopropyl)Glycin.
Wenn Z mit einem Radioisotop komplexiert ist, kann das Isotop ausgewählt sein aus der Gruppe, bestehend aus ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ^103mRh, ^195mPt, ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ²¹³Bi, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹³¹I und ²¹¹At.
Bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sind Somatostatinanaloge der Formel I, wobei X2 Arginin oder wobei X3 ist Phenylalanin oder wobei X4 Phenylalanin oder wobei X4 Tyrosin oder wobei X5 Threonin oder wobei X6 Phenylalanin oder wobei X1 Diaminobuttersäure ist.
Die Erfindung betrifft ferner Analoge, bei denen ein oder mehrere der oben genannten Substituenten kombiniert sind. Bei solchen Analogen sind die Gruppen, die keine der oben genannten Substituenten aufweisen, definiert wie für die obige allgemeine Formel I.
Wenn alle oben genannten Substituenten kombiniert sind, resultiert ein Analogon mit der allgemeinen Formel:
in der Z anwesend oder abwesend sein kann und die oben genannte Definition aufweist. In bevorzugten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung ist Z DOTA, DOTAGA oder Tyrosin.
Wenn X1 D/L-Glu ist, stellt L amin-endende Moleküle wie D/L-Lys dar, und Z sind Chelatoren wie p-NH₂-Bz-DOTA (2-p-Aminobenzyl-1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10- Tetraessigsäure), DOTA-p-NH₂-Anilid (1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-Tetraessigsäure-Mono (p-Aminoanilid) und MeO-NH₂ -Ph-DOTA (5-Amino-2-Methoxyphenyl-1,4,7,10-Tetraazacyclododecan-1,4,7,10-Tetraessigsäure).
Z kann mit einem Radioisotop komplexiert oder an einen Fluoreszenzfarbstoff oder Biotin gekoppelt sein. Für den Einsatz bei der Diagnose kann das Analogon mit einem radioaktiven Metallisotop, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113mIn, ¹²³I, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn, ⁵¹Cr, ¹²⁴I und ¹⁸F markiert sein,
Geeignete Fluoreszenzfarbstoffe sind Cyaninfarbstoffe. Derartige Farbstoffe können eingesetzt werden, wenn die Analoge bei der in vitro- und der in vivo-Diagnose angewandt werden. Biotin ist als Marker in der Histologie geeignet.
Die erfindungsgemäßen Somatostatinanaloge können als Medikament bei der Behandlung von Krankheiten, die durch eine Überexpression eines oder mehrerer Somatostatinrezeptoren gekennzeichnet sind, verwendet werden, insbesondere kann sich die Behandlung auf Tumoren richten, die einen oder mehrere Somatostatinrezeptoren tragen. Beispiele solcher Tumoren sind neuroendokrine Tumore, Astrozytome, Lungenkrebs, Lymphome, Mammakarzinome, Pankreastumore, Schilddrüsenkrebs, Dickdarmkrebs, SCLC, Nierenzellenkrebs.
Für die Therapie können die erfindungsgemäßen Somatostatinanaloge mit einem Radioisotop, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ^159mPt, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ^103mRh, ¹¹¹Ag, ¹²⁴I, ¹³¹I und ²¹¹AT markiert sein.
Die Erfindung betrifft ebenfalls die Verwendung der Somatostatinanaloge zur Herstellung einer pharmazeutischen Verbindung zur Behandlung oder Diagnose.
Wenn die pharmazeutische Verbindung eine diagnostische Verbindung ist, ist/sind das/die Somatostatinanalog/e mit einem radioaktiven Metallisotop markiert, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113mIn, ¹²³I, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn und ⁵¹Cr.
Wenn die pharmazeutische Verbindung eine therapeutische Verbindung ist, ist/sind das/die Somatostatinanaloge mit einem Radioisotop markiert, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ^103mRh, ^195mPt, ¹¹¹Ag, ¹²⁴I, ¹³¹I und ²¹¹At.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin eine pharmazeutische Verbindung, umfassend einen geeigneten Hilfsstoff und einen oder mehrere der Somatostatinanaloge.
Die vorliegende Erfindung wird in den folgenden, lediglich veranschaulichenden Beispielen, welche die vorliegende Erfindung in keiner Weise beschränken, näher erläutert.
BEISPIELE
BEISPIEL 1
Allgemeines Verfahren zur Synthese der erfindungsgemäßen Chelator-Somatostatinanaloge
Die Synthese zu den linearen Peptidzwischenprodukten wird mittels bekannter Festphasen-Verfahren durchgeführt, mit Fmoc als flüchtiger Aminoschutzgruppe, TFA-labilen Seitenkettenschutzgruppen als Pbf für Arg, BOC für Trp und Lys sowie tBu für Thr. Für eine Beschreibung des Verfahrens, siehe "Fluorenylmethoxycarbonylpolyamide solid phase synthesis – A practical approach", E. Atherton und R.C. Sheppard, Information Press Ltd., Oxford, England (1989). Die Festphasen-Peptidsynthese wird auf einer halbautomatischen Peptid-Syntheseapparatur durchgeführt.
Die Diaminobuttersäure wird mit Fmoc als γ-Aminoschutzgruppe, Z als α-Aminoschutzgruppe eingesetzt. Kopplungsreaktionen werden mit in-situ hergestellten Hydroxybenzotriazolestern mit DIC durchgeführt, aber es kann jedes andere Kopplungsreagenz eingesetzt werden, z.B. die gut eingeführten Isoharnstoffderivate (HATU, etc.). Die erste Aminosäure (Fmoc-Phe-OH) wird zu einem säure-labilen Super-Linker (Trialkoxybenzhydryl oder Chlortrityl) auf dem Harz verestert. Nach der Synthese werden die Peptide routinemäßig mit 20%iger Essigsäure in Dichlormethan schonend vom Harz abgespalten. Coevaporation mit Toluol wird zweimal durchgeführt, wodurch die Seitenkettenschutzgruppen intakt blieben und so die anschließende Cyclisierung über Carboxamidbildung ermöglichen, wobei 10 Äquivalente Dicyclohexylcarbodiimid/Hydroxybenzotriazol in DMF in starker Verdünnung eingesetzt wurden.
Das Rohprodukt wurde dreimal zwischen Ethylacetat und einer 5%-igen wässrigen Oxalsäurelösung extrahiert, und die organische Schicht zur Trockne konzentriert. Die Z-Schutzgruppe wird danach selektiv durch katalytische Hydrogenolyse mit Pd/C als Katalysator in Methanol entfernt, ohne das Indolsystem signifikant zu beeinflussen. Die Produkte wurden mit einem SepPak Filtereinsatz C₁₈ (Macherey-Nagel, Düren, Deutschland) gefiltert und gereinigt, wobei Wasser und Methanol als Elutionsmittel eingesetzt wurden. Die daraus resultierende freie Aminosäurengruppe dient als Anlagerungspunkt für ein carbonsäurefunktionalisiertes Chelatorderivat, das einen geeigneten Spacer enthalten kann. Nach der Koppelung an einen Prochelator wird das Peptid-Konjugat mit einer Lösung aus Trifluoressigsäure/Phenol/Thioanisol/Wasser 85:5:5:5 über 2–5 Stunden entschützt. Das Endprodukt wurde in Isopropylether/Petrolether 1:1 ausgefällt und mittels C₁₈ Umkehrphasenchromatographie (Metrohm LC CaDi 22-14, Säule: Macherey-Nagel, Düren, Deutschland) mit einer Reinheit von > 98% gereinigt.
BEISPIEL 2
Synthese von γ-9-Fluorenylmethyloxycarbonyl-α-Benzyloxycarbonyl-D-Diaminobuttersäure (Z-Dab(Fmoc)-OH)
α-Benzyloxycarbonyl-D-Diaminobuttersäure (Z-Dab-OH) ist im Handel erhältlich (Bachem, Bubendorf, Schweiz). Dieses Ausgangsmaterial wurde in Aceton/Wasser 1:1 gelöst, Natriumcarbonat wurde bis zu einem End-pH-Wert von 9–10 zugegeben und mit 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl-N-Hydroxysuccinimide (Fmoc-OSu) behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde 18 Stunden bei RT gerührt und auf 5°C gekühlt; Ethylacetat wurde zugegeben, danach mit 6 N HCl sauer eingestellt. Die organische Phase wurde 4 mal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Das Produkt wurde aus Ethylacetat/Petrolether rekristallisiert.
BEISPIEL 3
Chelator Kopplung
Drei Äquivalente Prochelator (z.B. DOTAGA (tBU)₄(1-(1-Carboxy-3-Carbotertbutoxypropyl)-4,7,10-(Carbotertbutoxymethyl)-1,4,7,10-Tetraazacyclododecan), DOTA (tBu)₃(1,4,7-tris(Carbotertbutoxymethyl)-10-Carboxymethyl-1,4,7,10-Tetraazacyclododecan), DTPA (tBu)₄(1,1,7,7,-Tetrakis(Carbotertbutoxymethyl)-4-Carboxy-1,4,7-Triazapentan) wurden mit drei Äquivalenten HATU (O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorphosphat) in DMF (Di methylformamid) 30 Min. inkubiert. Die Z-entschützten Diaminosäuren (siehe oben) wurden mit dieser Lösung 4 Stunden bei RT behandelt.
Nach der Konzentration wurde die Mischung in Ethylacetat gelöst und drei mal zwischen 5%-iger Natriumhydrogencarbonatlösung und Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde zur Trockne eingedampft und das Rohprodukt entschützt (siehe oben).
Eine typische Markierung mit ¹¹¹In und ⁹⁰Y erfolgt wie folgt. "PanSomatostatin" ist eines der erfindungsgemäßen Somatostatinanaloge.
Es wird eine Pufferlösung hergestellt, indem 328 mg Natriumacetat und 370 mg Gentisinsäure in 10 ml Wasser suprarein gelöst und der pH-Wert auf pH 5 mit 1 M Natriumhydroxid eingestellt werden.
10 μg Peptid (DOTA-PanSomatostatin), 100 μl Puffer und 120 μl Yttrium-90-Chlorid (2,9 GBq/ml, 0,05 M HCl) wurden bei 95°C 40 Min. inkubiert, auf Raumtemperatur gekühlt, und die Markierungsausbeute und die radiochemische Reinheit wurden innerhalb von 30 Min mittels RP HPLC mit Hilfe einer Nucleosil-C₁₈-Säule von Macherey-Nagel und eines linearen Gradienten von 5% Acetonitril/0,1% Trifluoressigsäure bis 60% Acetonitril/0,1% Trifluoressigsäure bestimmt. Die Markierungsausbeute beträgt > 98%.
10 μg Peptid (DOTA-PanSomatostatin), 100 μl Puffer und 100 μl Indium-111-Chlorid (370 MBq/ml, 0,05 M HCl) wurden bei 95°C 40 Min. inkubiert, auf Raumtemperatur gekühlt, und die Markierungsausbeute und die radiochemische Reinheit wurden innerhalb von 30 Min mittels RP-HPLC unter Verwendung einer Nucleosil-C₁₈-Säule von Macherey-Nagel und eines linearen Gradienten von 5% Acetonitril/0,1% Trifluoressigsäure bis 60% Acetonitril/0,1% Triofluoressigsäure bestimmt. Die Markierungsausbeute beträgt > 98%. Die Stabilität beträgt > 87% nach einer Woche in 10.000-fachem Überschuss an DTPA und 76% in frisch hergestelltem Serum nach einer Woche, geprüft mittels HPLC. Die Serumproteine wurden mit Methanol ausgefällt, zentrifugiert und die Methanol-Phase wurde mit dem gleichen Gradienten wie oben beschrieben injiziert.
10 μg Peptid (DOTAGA-PanSomatostatin), 100 μl Puffer und 20 μl Yttrium-90-Chlorid (1,8 GBq/ml, 0,05 M HCl) wurden bei 95°C 40 Min. inkubiert, auf Raumtemperatur gekühlt, und die Markierungsausbeute und die radiochemische Reinheit wurden innerhalb von 30 Min mittels RP-HPLC mit Hilfe einer Nucleosil-C₁₈-Säule von Macherey-Nagel und eines linearen Gradienten von 5% Acetonitril/0,1% Trifluoressigsäure bis 60% Acetonitril/0,1% Trifluoressigsäure bestimmt. Die Markierungsausbeute beträgt > 98%. Die radiochemische Reinheit beträgt > 97% nach 72 Stunden. Die Stabilität beträgt > 87% nach 72 Stunden und > 74% nach einer Woche in 10.000-fachem Überschuss an DTPA. Erwärmung auf 95°C über 45 Min. beeinträchtigte das Radiopeptid nicht.
BEISPIEL 4
Analyse der Affinitätsprofile verschiedener Analoge für Somatostatinrezeptoren sst1–sst5
Zellkulturen von CHO-K1-Zellen mit stabiler Expression humaner sst1 und sst5 wurden freundlicherweise von Dres. T. Reisine und G. Singh (University of Pennsylvania, Philadelphia, PA) und von CCL39-Zellen mit stabiler Expression humaner sst2, sst3 und sst4 freundlicherweise von Dr. D. Hoyer (Novartis Pharma, Basel, Schweiz) zur Verfügung gestellt.
CHO-K1 Zellen wurden in Ham's F-12 Medium und CCL39-Zellen in Dulbecco's modifiziertem Eagle's Medium/Ham's F-12 (1:1)-Mischung gezüchtet, ergänzt mit 10% fötalem bovinem Serum, 100 U/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin in Feuchtluft, enthaltend 5% CO₂ bei 37°C. Wo notwendig wurde Geneticin (G418-Sulfat, Gibco, USA) verwendet, um den ausgewählten Druck auf einer Endkonzentration von 400 μg/ml für sst2 bis sst4- und 285 μg/ml für sst5-exprimierende Zellen zu halten, wie dies bereits früher beschrieben wurde. [Rens-Domiano S & Reisine T. Biochemical and functional properties of somatostatin receptors. J. Neurochem. 58: 1987–1996 (1992); OCaroll A et al., Characterization of cloned human somatostatin receptor SSTR5. Molec. Pharmacol. 46: 291–298 (1994); Siehler S. et al., [¹²⁵I]Tyr¹⁰-cortistatin₁₄ labels all five somatostatin receptors. Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 357: 483–489 (1998)].
Alle Kulturreagenzien wurden von Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, geliefert.
BEISPIEL 5
In situ-Hybridisierung Histochemie
Um die Eignung des Zellmaterials zu kontrollieren, wurde eine in situ-Hybridisierung für humane mRNAs an CHO-K1- und CCL39-Zellen mit Expression der verschiedenen sst-Rezeptor-Subtypen durchgeführt.
Die Zellen wurden durch Waschen mit Puck's Saline A und kurze Inkubation mit Trypsin (0,5 mg/ml)/EDTA (0,2 mg/ml) aus den Kulturflaschen entfernt, durch Zentrifugieren gesammelt, in Phosphat-gepufferter Salzlösung bei einer finalen Zelldichte von ungefähr 6 × 10⁴ Zellen/μl wieder suspendiert. 25 μl Aliquote der Zellsuspension wurden auf mikroskopische Scheiben platziert, luftgetrocknet und bei –20°C gelagert.
Danach wurden sie mit 4% Formaldehyd fixiert, mit Phosphat-gepufferter Salzlösung gewaschen, luftgetrocknet und bei 4°C unter trockenen Bedingungen gelagert. Danach wurden Zellabstriche zum Nachweis der sst1, sst2, sst3, sst4 und sst5 mRNA durch in situ-Hybridisierung eingesetzt. Das daraus folgende Protokoll entsprach im dem früher im Detail beschriebenen [Reubi JC et al., Expression and localization of somatostatin receptor SSTR1, SSTR2 and SSTR3 mRNAs in primary human tumors using in situ hybridization. Cancer Res. 54: 3455–3459 (1994)].
Oligonucleotid-Sonden komplementär zu sst1, sst2, sst3 [Reubi 1994, supra], sst4 und sst5 [Thoss VS et al., Expresson of five somatostatin receptor mRNAs in the human brain and pituitary. Naunyn-Schmiedebergs's Arch. Pharmacol. 354: 411–419 (1996)] mRNAs werden synthetisiert und auf einem 20%-igen Polyacrylamid – 8 M Harnstoff Sequenzierungsgel (Microsynth, Balgach, Schweiz) gereinigt. Sie wurden am 3'-Ende unter Verwendung von [α³²P]dATP (> 3000 Ci/mmol; NEN Life Science Products, Boston, MA) und terminaler Desoxynucleotidyl-Transferase (Boehringer, Mannheim, Deutschland) auf spezifische Aktivitäten von 33,3–74 GBq/mmol markiert. Mit den in der vorliegenden Studie eingesetzten Sonden wurden Kontrollversuche durchgeführt, um die Spezifität des erhaltenden Hybridisierungssignals, wie bereits früher beschrieben [Reubi 1994, supra], zu bestimmen.
Diese Kontrolluntersuchungen der in situ-Hybridisierung bestätigten, dass die für die Untersuchung eingesetzten fünf Zelllinien die korrekte sst-mRNA-Expression aufwiesen.
BEISPIEL 6
Rezeptor-Autoradiographie
Es wurden Zellen zwei Mal mit eisgekühltem 0,05 M Tris-HCl (pH 7,4) gewaschen und in dieses hineingeschabt, durch Zentrifugieren gesammelt, und unter Verwendung eines Rotor/Stator-Dispergiersystems (Polytron, Kinematica Inc., Littau, Schweiz) im selben Puffer homogenisiert. Nach dem Zentrifugieren bei 120 g über 5 Min. bei 4°C wurde der Überstand gesammelt und nochmals bei 48.000 g über 30 Min. bei 4°C zentrifugiert. Das resultierende Pellet wurde wieder in eiskaltem Tris-Puffer suspendiert, in ein Mikrofuge-Röhrchen überführt und bei 20.000 g über 15 Min. bei 4°C zentrifugiert. Nach Abzug des Überstandes wurde das Membran-Pellet bei –80°C gelagert.
Die Rezeptor-Autoradiographie wurde an 20 μm dicken Cryostat (Leitz 1720, Rockleigh, NJ)-Schnitten der Membran-Pellets, aufgebracht auf Mikroskopscheiben, durchgeführt und danach bei –20°C gelagert. Für jede der getesteten Verbindungen wurden vollständige Verdrängungsuntersuchungen durchgeführt unter Verwendung des universellen Somatostatin-Radioliganden ¹²⁵I-[Leu⁸, D-Trp²², Tyr²⁵]-Somatostatin 28 – mit steigenden Konzentrationen des unmarkierten Peptids von 0,1 bis 1.000 nM. Das unmarkierte universelle Somatostatin 28 wurde als Kontrolle parallel laufen gelassen, wobei dieselben steigenden Konzentrationen verwendet wurden.
Nach der Quantifizierung der Daten mit Hilfe eines computergestützten Bildverarbeitungssystems, wir bereits früher beschrieben [Reubi JC et al., Detection of somatostatin receptors in surgical and percutaneous needle biopsy samples of carcinoids and islet cell carcinomas. Cancer Res. 50: 5969–5977 (1990)] wurden die IC₅₀-Werte berechnet. Gewebestandards (Autoradiographic [¹²⁵I] microscales, Amersham), die bekannte Mengen an Isotop enthalten, querkalibriert auf gewebeäquivalente Ligandenkonzentrationen, wurden für die Quantifizierung eingesetzt [Reubi JC. In vitro identifcation of vasoactive intestinal peptide receptors in human tumors: Implications for tumor imaging. J. Nucl. Med. 36: 1846–1853 (1995)]. Die Vorteile des vorliegenden Verfahrens unter Verwendung der Rezeptor-Autoradiographie mit Schnitten von Zell-Pellets im Vergleich zum Binden an Zellhomogenate sind, zusätzlich zum wirtschaftlicheren Umgang mit Zellen und der größeren Flexibilität, die höhere Inter-Assay Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit, da dasselbe eingebettete Pellet für aufeinanderfolgende Untersuchungen verwendet werden kann. Als kleiner Nachteil steht, dass die IC₅₀-Werte etwas höher ausfallen als beim Test mit Homogenat-Bindung.
Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt.
Die getestete Verbindung ist A:
in der Z variiert wird.
worin ab Aminobuttersäure ist.
Es wird erfindungsgemäß bevorzugt, dass die IC₅₀-Werte von 1 bis 10 nM reichen. Aus der oben angeführten Tabelle ergibt sich, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen einen IC₅₀-Wert aufweisen, der in den beanspruchten Bereich der meisten oder aller Rezeptor-Subtypen fällt.

Claims

Somatostatinanaloge der allgemeinen Formel:
in der Z abwesend oder anwesend sein kann, und bei Anwesenheit ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Chelatoren auf der Basis von DOTA und DTPA, Chelatoren auf der Basis von NOTA, Carbonylverbindungen, Hydrazino-Nicotinamid (Hynic), N₄-Chelatoren, Desferrioxamin, N_xS_y-Chelatoren, alle optional mit einem Radioisotop komplexiert oder markiert, Tyrosin (Tyr) zur Halogenierung, ein Fluoreszenzfarbstoff oder Biotin; L abwesend oder anwesend sein kann und ein Linker-Molekül ist; X1 eine symmetrische oder asymmetrische Diaminosäure ist, enthaltend 3 oder 4 aufeinanderfolgende C-Atome mit einem Linker an den Chelatbildner, zum Beispiel D/L-Diamino-Buttersäure (D/L-Dab) für einen basischeren Charakter oder D/L-Glu zur Verknüpfung an primäre und sekundäre Aminogruppen; X2 eine positiv geladene, natürliche oder nicht natürliche Aminosäure oder ein Arginin-Imitator oder Citrullin oder eine neutrale Aminosäure, wie Asn, ist; X3 Phenylalanin (Phe), Ala-[3-(2-Thienyl)] oder α-, β-Naphthylalanin ist; X4 eine aromatische, optional halogenierte, insbesondere mit Cl, Br, I oder ¹⁸F, Aminosäure ist; X5 Threonin (Thr) oder Serin (Ser) ist; und X6 Phenylalanin (Phe), Ala-[3-(2-Thienyl)] oder α-, β-Naphthylalanin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Anspruch 1, wobei X2 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Diaminopropionsäure und Diaminobuttersäure.
Somatostatinanaloge gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei X2 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Lysin (Lys), I-Amp, Ornithin und L/D-Phg (4-Amino).
Somatostatinanaloge gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei X2 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus den Arginin-Imitatoren (R/S)-Gly-Ala-4-Pip (N-Amino), D/L-Phe[4-Guanidino], (R/S)-2-amino-4-[4-(2-amino)Pyrimidinyl]-Butansäure und quartären Ammoniumderviaten (NR₃ ⁺).
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 4, wobei X4 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Tyrosin (Tyr), halogeniertem Tyrosin, insbesondere iodiertem Tyrosin (I-Tyr), Dimethyltyrosin (diMe-Tyr), α-, β-Naphthylalanin, halogeniertem Phenylalanin, insbesondere iodiertem Phenylalanin (I-Phe).
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 5, wobei L ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Tyrosin, Lysin, β-Alanin, Sarkosin, Bernsteinsäure, Glutarsäure.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 6, wobei das mit Z komplexierte Radioisotop ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ²⁰³Bi Und ^103mRh.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 7, wobei X2 Arginin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 8, wobei X3 Phenylalanin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 9, wobei X4 Phenylalanin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 9, wobei X4 Tyrosin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 11, wobei X5 Threonin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 12, wobei X6 Phenylalanin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 13, wobei X1 Diaminobuttersäure ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 14 mit der allgemeinen Formel
in der Z die Definition aus Anspruch 1 aufweist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 15, wobei Z DOTA ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 15, wobei Z DOTAGA ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 15, wobei Z Tyrosin ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 18, wobei L abwesend ist.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 19 zur Verwendung bei der Therapie oder Diagnose.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 19 zur Verwendung bei der Diagnose und markiert mit einem radioaktiven (Metall)Isotope, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113mIn, ¹²³I, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁷Ru, ⁵²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn, ⁵¹Cr, ¹²⁴I und ¹⁸F.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 1 bis 19 zur Verwendung als Medikament bei der Behandlung von Krankheiten, die durch eine Überexpression eines oder mehrerer Somatostatinrezeptoren gekennzeichnet sind.
Somatostatinanaloge gemäß Anspruch 22, wobei sich die Behandlung auf Tumore richtet, die einen oder mehrere Somatostatinrezeptoren tragen.
Somatostatinanaloge gemäß Ansprüchen 22 oder 23, markiert mit einem Radioisotope ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ^195mPt, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ^103mRh, ¹¹¹Ag, ¹²⁴I, ¹³¹I, und ²¹¹At.
Verwendung von Somatostatinanalogen gemäß Ansprüchen 1 bis 19 zur Herstellung einer pharmazeutischen Verbindung zur Behandlung oder Diagnose.
Verwendung gemäß Anspruch 25, wobei die pharmazeutische Verbindung eine diagnostische Verbindung ist und das/die Somatostatinanaloge mit einem radioaktiven (Metall)Isotop markiert ist/sind, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113mIn, ¹²³I, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn und ⁵¹Cr.
Verwendung nach Anspruch 25, wobei die Behandlung sich auf solche Krankheiten bezieht, die durch eine Überexpression eines oder mehrerer Somatostatinrezeptoren gekennzeichnet sind.
Verwendung nach Anspruch 27, wobei sich die Behandlung auf Tumore richtet, die einen oder mehrere Somatostatinrezeptoren tragen.
Verwendung nach Ansprüchen 27 und 28, bei der die pharmazeutische Verbindung eine therapeutische Verbindung ist und das/die Somatostatinanaloge mit einem Radioisotop markiert ist/sind, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹²⁴I und ¹³¹I.
Pharmazeutische Verbindung, umfassend einen geeigneten Hilfsstoff und einen oder mehrere Somatostatinanaloge gemäß den Ansprüchen 1 bis 19.
Pharmazeutische Verbindung gemäß Anspruch 30, wobei die Verbindung zur Verwendung bei der Diagnose eingesetzt wird und das/die Somatostatinanaloge mit einem radioaktiven Metallisotopen markiert ist/sind, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113mIn, ¹²³I, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn und ⁵¹Cr.
Pharmazeutische Verbindung gemäß Anspruch 30, wobei der Verbindung für die Behandlung von Krankheiten eingesetzt wird, die durch eine Überexpression eines oder mehrerer Somatostatinrezeptoren gekennzeichnet sind.
Pharmazeutische Verbindung gemäß Anspruch 32, wobei sich die Behandlung auf Tumore richtet, die einen oder mehrere Somatostatinrezeptoren tragen.
Pharmazeutische Verbindung nach Ansprüchen 32 und 33, wobei die pharmazeutische Verbindung eine therapeutische Verbindung ist und das/die Somatostatinanaloge mit einem Radioisotop markiert ist/sind, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹²⁴I und ¹³¹I.