DE60118924T2

DE60118924T2 - Verwendung des riluzols oder dessen salzen zur phophylaxe und behandlung der adrenoleukodystrophie

Info

Publication number: DE60118924T2
Application number: DE60118924T
Authority: DE
Inventors: Patrick Aubourg; Michel Dib; Jean-Marie Stutzmann
Original assignee: Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Aventis Pharma SA
Current assignee: Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Aventis Pharma SA
Priority date: 2000-06-05
Filing date: 2001-06-05
Publication date: 2007-01-11
Anticipated expiration: 2021-06-06
Also published as: FR2809620A1; DE60118924D1; CA2409379A1; AU7419501A; ES2260230T3; IL152989A0; PT1299102E; EP1299102A2; EP1299102B1; FR2809620B1; WO2001093802A2; CY1107048T1; CA2409379C; MXPA02011810A; JP2003535113A; AU2001274195B2; DK1299102T3; ATE323486T1; IL152989A; JP4848117B2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch annehmbaren Salze zur Prophylaxe und Behandlung der Adrenoleukodystrophie.
Riluzol (2-Amino-6-trifluormethoxybenzothiazol) wird für die Behandlung von amyotropher Lateralsklerose vermarktet (Rilutek^R). Diese Verbindung eignet sich auch zur Verwendung als Antikonvulsivum, Anxiolytikum oder Hypnotikum ( EP 50551 ), bei der Behandlung von Schizophrenie ( EP 305276 ), bei der Behandlung von Schlafstörungen und Depression ( EP 305277 ), bei der Behandlung von zerebrovaskulären Erkrankungen und als Anästhetikum ( EP 282971 ), bei der Behandlung von Wirbelsäulen-, Hirn- oder Hirn-Wirbelsäulen-Trauma (WO 94/13288), als Mittel zur Behandlung von Strahlenschäden (WO 94/15600), bei der Behandlung der Parkinsonschen Krankheit (WO 94/15601), bei der Behandlung von Neuro-AIDS (WO 94/20103) und bei der Behandlung von mitochondrialen Erkrankungen (WO 95/19170).
Die X-gebundene Adrenoleukodystrophie (ALD) ist die häufigste genetische Erkrankung des Myelins, die durch progressive Demyelinisierung des Zentralnervensystems, Nebenniereninsuffizienz und moderate Akkumulation (3- bis 5fach) von sehr langkettigen Fettsäuren (VLCFA, very long chain fatty acids) in den meisten Geweben einschließlich des Gehirns und des Rückenmarks gekennzeichnet ist. Diese VLCFA-Akkumulation ergibt sich aus einer Defizienz ihrer peroxisomalen β-Oxidation.
Die Mechanismen, die bei ALD zu einer Demyelinisierung und einem Verlust der Oligodendrozyten führen, werden noch nicht gut verstanden. Eine Möglichkeit besteht darin, daß die VLCFA-Akkumulation zu einer Destabilisierung der Myelinmembranen oder einer Funktionsstörung der Rezeptoren an der Oberfläche der Oligodendrozyten, die gegenüber Signalen für den programmierten Zelltod (Apoptose) empfindlicher werden, führt. Der Tod der Oligodendrozyten könnte auch von der Produktion von Zytokinen (insbesondere TNF-α) durch aktivierte Makrophagen, die in entzündlichen Hirnläsionen der ALD vorliegen, herrühren.
Bei einer DNA-Fragmentierungsstudie nach der TUNEL-Methode und durch Expression von Caspase-3 zeigten 50% der Oligodendrozyten aus dem Gehirn von ALD-Patienten Anzeichen von Zelltod durch Apoptose, und die Intensität der Apoptose-Phänomene steht in Korrelation mit der Intensität der Demyelinisierung.
Der Oligodendrozyten-Zelltod durch Apoptose ist kürzlich in 2 anderen Mausmodellen der genetischen Erkrankung des Myelins nachgewiesen worden: der Twitcher-Maus (Modell der Krabbe-Krankheit) und verschiedenen PLP-defizienten (PLP = Proteolipid-Protein) Modellen (Jimpy-Maus, msd-Maus, md-Ratte).
Es wurde nun gefunden, daß Riluzol, gegebenenfalls in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, den Kainat-induzierten Oligodendrozyten-Tod durch Apoptose verringert und daher bei der Prophylaxe und Behandlung von Adrenoleukodystrophie verwendet werden kann.
Es wird nach der folgenden Vorschrift verfahren:
Mit Oligodendrozyten angereicherte Kulturen
Oligodendrozyten werden nach der leicht abgeänderten Methode von Saneto et al. (Neuchemistry, a practical approach, IRL Press, Oxford-Washington DC, S. 27–63 (1987)) aus primären Gliakulturen von Rückenmark erhalten. Das Rückenmark von 1 Tag alten Wistar-Ratten wird unter sterilen Bedingungen disseziert und von den Meningen befreit. Das Rückenmark von fünf bis zehn Tieren wird in PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung: NaCl 137 mM, KCl 2,68 mM, Na₂HPO₄ 6,45 mM, KH₂PO₄ 1,47 mM) mit 0,25% Trypsin überführt. Die Enzymbehandlung wird durch Zugabe von Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) gestoppt. Nach Durchführung eines weiteren Trennschritts mit Hilfe einer 1-ml-Pipette wird die Zellsuspension filtriert. Die Zellen werden durch Zentrifugation gesammelt und in einer Dichte von 1,5–2 × 10⁶ Zellen/cm² Kulturmedium in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) mit 10% fötalem Rinderserum ausplattiert. Nach 3 Tagen in vitro werden die Kulturen jeden Tag gefüttert. Nach Erhalt einer sichtbaren Monoschicht werden die Kulturen 2 Stunden bei 37°C mit 250 U/min bewegt, wonach das Kulturmedium entnommen wird und die Fläschchen noch 22 Stunden bewegt werden. Das die Zellen enthaltende Medium wird in Petri-Schalen 1 Stunde bei 37°C inkubiert, damit die Mikroglia sich an den Kunststoff anheften können. Die Oligodendrozyten werden durch Zentrifugation gesammelt, in einer Dichte von 1,6 × 10⁶/cm² ausplattiert und 1 oder 2 Tage in DMEM mit 10% FBS gehalten. Dann wird das Medium durch L15-Medium mit Natriumhydrogencarbonat (22 mM), Conalbumin (0,1 mg/ml), Putrescin (0,1 mM), Insulin (5 ug/ml), Natriumselenit (31 nM), Glucose (20 mM), Progesteron (21 nM), Penicillin (100 IU/ml), Streptomycin (100 μg/ml) und Pferdeserum (2%) ersetzt. Die Oligodendrozyten differenzieren sich schnell innerhalb von 24 bis 48 Stunden in einen reifen und einen unreifen Phänotyp. Diese Kulturen zeigen eine durch Immunreaktivität gegenüber Galactocerebrosid-C (Gal-C) und saurem fibrillärem Gliaprotein (GFPA) bestimmte Reinheit von ungefähr 95%.
Diese Kulturen werden dann mit einer Lösung von Kainat in PBS in verschiedenen Konzentrationen (0,01 mM bis 1 mM), 0,9%iger Lösung von Riluzol in NaCl und 0,001 N HCl in verschiedenen Konzentrationen (0,01 mM bis 10 mM) bzw. Lösungsmittel versetzt. 48 Stunden nach Beginn der Behandlung werden die lebenden Oligodendrozyten gezählt.
Zellzählung
Gegenüber Gal-C immunreaktive und verzweigte Fortsätze mit einer Länge von mehr als dem Durchmesser von 2 Zellen aufweisende Zellen werden insgesamt als unreife oder reife Oligodendrozyten erachtet. Die Zahl der Gal-C-(+)-Oligodendrozyten wird auf 2 separate Zählungen der markierten Zellen in mindestens 12 Feldern mit einer Größe von 0,63 mm² unter einem auf 400fache Vergrößerung eingestellten Mikroskop verteilt. Die Werte werden als Zellzahl pro m² oder als Prozentanteil gegenüber der Kontrolle angegeben.
Die statistischen Analysen werden mit dem Student-Test (t-Test) durchgeführt.
Dabei werden folgende Ergebnisse erhalten: Versuch 1: Wirkung von Kainat auf die Oligodendrozytenkulturen Einwirkung von Kainatkonzentrationen von 0,1 bis 1 mM auf die Oligodendrozytenkulturen über einen Zeitraum von 48 Stunden.
Diese Ergebnisse zeigen, daß Kainat in Dosen von 0,1 bis 1 mM eine starke Induktion des Tods der Oligodendrozyten durch Apoptose bewirkt. Versuch 2: Untersuchung der toxischen Wirkung von Riluzol alleine auf Oligodendrozytenkulturen
Diese Ergebnisse zeigen, daß Riluzol in Dosen von 0,01 bis 10 mM keine toxische Wirkung auf das Überleben der Oligodendrozyten hat und bei der Dosis von 10 mM eine schwache toxische Wirkung beobachtet wird. Versuch 3: Schutzwirkung von Riluzol gegenüber dem Kainat-induzierten Oligozyten-Tod Einwirkung von Kainat in einer Dosis von 1 mM und Riluzol in Dosen von 0,01 bis 10 mM auf die Oligodendrozyten.
Diese Ergebnisse zeigen, daß Riluzol eindeutig den Kainat-induzierten Oligodendrozyten-Tod durch Apoptose verringert, und zwar auch bei der Dosis, bei der eine schwache toxische Wirkung von Riluzol alleine beobachtet wurde, und daher bei der Prophylaxe und Behandlung von Adrenoleukodystrophie verwendet werden kann.
Als pharmazeutisch annehmbare Salze von Riluzol seien insbesondere Additionssalze mit anorganischen Säuren, wie Hydrochlorid, Sulfat, Nitrat und Phosphat, oder organischen Säuren, wie Acetat, Propionat, Succinat, Oxalat, Benzoat, Fumarat, Maleat, Methansulfonat, Isethionat, Theophyllinacetat, Salicylat, Phenolphthalinat, Methylen-bis-β-oxynaphthoat oder substituierte Derivate dieser Derivate, genannt.
Die Arzneimittel bestehen aus mindestens Riluzol in freier Form oder in Form eines Additionssalzes mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure in reinem Zustand oder in Form einer Zusammensetzung, in der es mit einem beliebigen anderen pharmazeutisch verträglichen Produkt, das inert oder physiologisch aktiv sein kann, kombiniert ist. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können auf oralem, parenteralem oder rektalem Wege verwendet werden.
Als feste Zusammensetzungen zur oralen Verabreichung können Tabletten, Pillen, Pulver (Gelatinekapseln, Oblatenkapseln) oder Granulate verwendet werden. In diesen Zusammensetzungen wird der erfindungsgemäße Wirkstoff unter Argonstrom mit einem oder mehreren inerten Verdünnungsmitteln, wie Stärke, Cellulose, Saccharose, Lactose oder Siliciumdioxid, gemischt. Diese Zusammensetzungen können auch noch andere Sub stanzen enthalten, wie Verdünnungsmittel, beispielsweise ein oder mehrere Gleitmittel, wie Magnesiumstearat oder Talk, ein Farbmittel, einen Überzug (Dragees) oder einen Lack.
Als flüssige Zusammensetzungen zur oralen Verabreichung kann man pharmazeutisch annehmbare Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Sirupe und Elixiere verwenden, die inerte Verdünnungsmittel, wie Wasser, Ethanol, Glycerin, Pflanzenöle oder Paraffinöl, enthalten. Diese Zusammensetzungen können weitere Substanzen enthalten, wie Verdünnungsmittel, beispielsweise benetzend, süßend, verdickend, aromatisierend oder stabilisierend wirkende Produkte.
Bei den sterilen Zusammensetzungen zur parenteralen Verabreichung kann es sich vorzugsweise um wäßrige oder nichtwäßrige Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen handeln. Als Lösungsmittel oder Träger kann man Wasser, Propylenglykol, Polyethylenglykol, Pflanzenöle, insbesondere Olivenöl, injizierbare organische Ester, zum Beispiel Ethyloleat, oder andere zweckmäßige organische Lösungsmittel einsetzen. Diese Zusammensetzungen können außerdem auch noch Adjuvantien, insbesondere Benetzungsmittel, Isotonisierungsmittel, Emulgatoren, Dispergiermittel und Stabilisatoren, enthalten. Die Sterilisation kann auf unterschiedliche Weise, beispielsweise durch aseptische Filtration, durch Einarbeitung von Sterilisationsmitteln in die Zusammensetzung, durch Bestrahlung oder Erhitzen, erfolgen. Sie können auch in Form von sterilen festen Zusammensetzungen hergestellt werden, die zum Anwendungszeitpunkt in sterilem Wasser oder anderen injizierbaren sterilen Medien gelöst werden können.
Bei den Zusammensetzungen zur rektalen Verabreichung handelt es sich um Suppositorien oder Rektalkapseln, die neben dem Wirkstoff Hilfsstoffe enthalten, wie Kakaobutter, halbsynthetische Glyceride oder Polyethylenglykole.
Die Dosen hängen von der erwünschten Wirkung, der Behandlungsdauer und dem verwendeten Verabreichungsweg ab; sie liegen bei oraler Verabreichung für einen Erwachsenen im allgemeinen zwischen 50 und 400 mg pro Tag mit Dosierungseinheiten mit 25 bis 200 mg Wirkstoff.
Im allgemeinen wird die geeignete Dosierung je nach Alter, Gewicht und allen anderen für den zu behandelnden Patienten spezifischen Faktoren vom Arzt bestimmt.
Die folgenden Beispiele illustrieren erfindungsgemäße Arzneimittel.
Beispiel A

Nach der üblichen Technik werden Tabletten mit einer Wirkstoffdosis von 50 mg und der folgenden Zusammensetzung hergestellt:

– Riluzol	50 mg
– Mannit	64 mg
– mikrokristalline Cellulose	50 mg
– Polyvidon-Hilfsstoff	12 mg
– Natriumcarboxymethylstärke	16 mg
– Talk	4 mg
– Magnesiumstearat	2 mg
– wasserfreies kolloidales Siliciumdioxid	2 mg
– Mischung von Methylhydroxypropylcellulose, Polyethylenglykol 6000 und Titandioxid (72-3, 5-24, 5) q.s. ad 1 Tablette mit einem Gewicht von 245 mg

Beispiel B
Nach der üblichen Technik werden Gelatinekapseln mit einer Wirkstoffdosis von 50 mg und der folgenden Zusammensetzung hergestellt:

– Riluzol 50 mg

– Cellulose 18 mg

– Lactose 55 mg

– kolloidales Siliciumdioxid 1 mg

– Natriumcarboxymethylstärke 10 mg

– Talk 10 mg

– Magnesiumstearat 1 mg
Beispiel C

Es wird eine Injektionslösung mit einer Wirkstoffdosis von 10 mg und der folgenden Zusammensetzung hergestellt:

– Riluzol	10 mg
– Benzoesäure	80 mg
– Benzylalkohol	0,06 cm³
– Natriumbenzoat	80 mg
– 95%iges Ethanol	0,4 cm³
– Natriumhydroxid	24 mg
– Propylenglykol	1,6 cm³
– Wasser q.s. ad	4 cm³

Die Erfindung betrifft auch die Verwendung von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch annehmbaren Salze zur Herstellung eines Arzneimittels für die Prophylaxe und die Behandlung der Adrenoleukodystrophie.
Die Erfindung betrifft auch das Verfahren zur Herstellung von Arzneimitteln, die zur Verwendung bei der Prophylaxe und Behandlung der Adrenoleukodystrophie geeignet sind, bei dem man Riluzol oder die pharmazeutisch annehmbaren Salze dieser Verbindung mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren und verträglichen Verdünnungsmitteln und/oder Adjuvantien mischt.

Claims

Verwendung von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch annehmbaren Salze zur Herstellung eines Arzneimittels für die Prophylaxe und die Behandlung der Adrenoleukodystrophie.
Verwendung gemäß Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels, das 25 bis 200 mg Riluzol enthält.