DE60035779T2

DE60035779T2 - Alpha v integrin-rezeptor antagonisten

Info

Publication number: DE60035779T2
Application number: DE60035779T
Authority: DE
Inventors: Paul J. Rahway COLEMAN; Mark E. Rahway DUGGAN; Wasyl Rahway HALCZENKO; George D. Rahway HARTMAN; John H. Rahway HUTCHINSON; Robert S. Rahway MEISSNER; Michael A. Rahway PATANE; James J. Rahway PERKINS; Jiabing Rahway WANG; Michael J. Rahway BRESLIN
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1999-06-02
Filing date: 2000-05-30
Publication date: 2008-04-30
Anticipated expiration: 2020-05-31
Also published as: EP1187592B1; JP2006232844A; KR20020021380A; CZ20014308A3; WO2000072801A3; ATE368462T1; CN1589145A; IS6157A; JP2006206604A; DK1187592T3; BR0011108A; IL146378A0; PT1187592E; AU749351B2; NO20015858L; JP3808707B2; NO20015858D0; HUP0302468A2; NO323906B1; CY1107746T1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft Nonansäurederivate, deren Synthese und deren Verwendung als αv-Integrinrezeptorantagonisten. Speziell sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung Antagonisten der Integrinrezeptoren αvβ3, αvβ5 und von αv-Integrinrezeptoren, die mit anderen β-Untereinheiten assoziiert sind, und sie eignen sich zur Inhibierung von Knochenresorption, zur Behandlung und Prävention von Osteoporose und zur Inhibierung von vaskulärer Restenose, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Angiogenese, Atherosklerose, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Man nimmt an, dass eine große Vielfalt an Erkrankungsstadien und -zuständen durch die Wirkung auf Integrinrezeptoren vermittelt werden kann und dass Integrinrezeptorantagonisten eine geeignete Klasse von Arzneistoffen darstellen. Integrinrezeptoren sind heterodimere Transmembranrezeptoren, durch die sich Zellen an extrazelluläre Matrizen und andere Zellen binden und damit kommunizieren. (Siehe S.B. Rodan und G.A. Rodan, "Integrin Function In Osteoclasts", Journal of Endocrinology, 154, S47–S56 (1997), das hierin durch Bezugnahme in seiner Gesamtheit aufgenommen ist).
In einem Aspekt der vorliegenden Erfindung eignen sich die Verbindungen hierin zur Inhibierung von Knochenresorption. Die Knochenresorption wird durch die Wirkung von als Osteoklasten bekannten Zellen vermittelt. Osteoklasten sind große multinukleäre Zellen mit einem Durchmesser von bis zu etwa 400 mm, die mineralisiertes Gewebe, hauptsächlich Calciumcarbonat und Calciumphosphat, in Wirbeltieren resorbieren. Osteoklasten sind aktiv bewegliche Zellen, die entlang der Knochenoberfläche wandern und sich an Knochen binden können, notwendige Säuren und Proteasen absondern und dadurch die wirkliche Resorption von mineralisiertem Gewebe aus dem Knochen herbeiführen. Insbesondere nimmt man an, dass Osteoklasten in wenigstens zwei physiologischen Zuständen existieren, nämlich im sekretorischen Zustand und im wandernden oder beweglichen Zustand. Im sekretorischen Zustand sind Osteoklasten flach, sie binden sich über eine feste Bindungszone (Verschmelzungszone) an die Knochenmatrix, werden stark polarisiert, bilden einen gekräuselten Rand und sondern Lysosomalenzyme und Protonen ab, um Knochen zu resorbieren. Die Haftung von Osteoklasten an Knochenoberflächen ist ein wichtiger erster Schritt bei der Knochenresorption. Im wandernden oder beweglichen Zustand wandern die Osteoklasten über die Knochenmatrix und nehmen an der Resorption solange nicht teil, bis sie sich wieder an den Knochen binden.
Integrine sind bei der Osteoklastenbindung, -aktivierung und -wanderung beteiligt. Das häufigste Integrin auf Osteoklasten, z.B. auf Osteoklasten von Ratten, Hühnern, Mäusen und Menschen, ist ein als αvβ3 bekannter Integrinrezeptor, von dem angenommen wird, dass er im Knochen mit Matrixproteinen wechselwirkt, welche die RGD-Sequenz enthalten. αvβ3-Antikörper blockieren die Knochenresorption in vitro, was zeigt, dass dieses Integrin eine Schlüsselrolle bei dem Resorptionsverfahren spielt. Es gibt immer mehr Gründe, die dafür sprechen, dass αvβ3-Liganden wirksam zur Inhibierung von osteoklastenvermittelter Knochenresorption in vivo bei Säugern verwendet werden können.
Die Knochenerkrankungen, die derzeit am stärksten im öffentlichen Interesse stehen, sind Osteoporose, Hyperkalzämie durch Malignität, Osteopenie aufgrund von Knochenmetastasen, periodontale Erkrankung, Hyperparathyreoidismus, periartikuläre Erosionen bei rheumatoider Arthritis, Paget-Krankheit, durch Immobilisierung hervorgerufene Osteopenie und durch Glukokortikoid induzierte Osteoporose. Alle diese Zustände sind durch Knochenschwund gekennzeichnet, welcher von einem Ungleichgewicht zwischen Knochenresorption, d.h. Knochenabbau, und Knochenbildung herrührt, das sich im Verlauf des Lebens mit einer Rate von durchschnittlich etwa 14% pro Jahr fortsetzt. Die Knochen-Turnover-Rate ist jedoch von Ort zu Ort verschieden; zum Beispiel ist sie im Trabekelknochen der Wirbel und im Alveolarknochen im Kiefer höher als in den Kortizes der Langknochen. Das Potential für Knochenschwund steht in direkter Beziehung mit dem Turnover und kann sich in den Wirbeln unmittelbar nach der Menopause auf über 5% pro Jahr summieren, ein Zustand, der zu erhöhtem Bruchrisiko führt.
Es gibt in den Vereinigten Staaten derzeit etwa 20 Millionen Personen mit nachweisbaren Wirbelfrakturen aufgrund von Osteoporose. Zusätzlich gibt es etwa 250000 Hüftfrakturen pro Jahr, die der Osteoporose zuzuschreiben sind. Diese klinische Situation ist verbunden mit einer 12%igen Sterberate innerhalb der ersten zwei Jahre, wobei 30% der Patienten nach der Fraktur eine Pflegeheimbetreuung benötigen.
Personen, die an allen oben aufgeführten Zuständen leiden, würden von der Behandlung mit Mitteln, welche die Knochenresorption inhibieren, einen Nutzen ziehen.
Ferner erwiesen sich αvβ3-Liganden bei der Behandlung und/oder Inhibierung von Restenose (d.h. dem erneuten Auftreten von Stenose nach einer Korrekturoperation an der Herzklappe), Atherosklerose, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration und Angiogenese (d.h. der Bildung neuer Blutgefäße) und bei der Inhibierung einer Viruserkrankung als geeignet. Darüber hinaus wurde postuliert, dass das Tumorwachstum von einer ausreichenden Biutzufuhr abhängig ist, die wiederum vom Wachstum neuer Gefäße in den Tumor abhängt; daher kann die Inhibierung der Angiogenese in Tiermodellen eine Tumorregression bewirken. (Siehe Harrison's Principles of Internal Medicine, 12. Aufl., 1991, das in seiner Gesamtheit hierin durch Bezugnahme aufgenommen ist). αvβ3-Antagonisten, die die Angiogenese inhibieren, können daher bei der Behandlung von Krebs durch Inhibierung von Tumorwachstum geeignet sein. (Siehe z.B. Brooks et al, Cell, 79:1157–1164 (1994), das in seiner Gesamtheit hierin durch Bezugnahme aufgenommen ist).
Es wurden auch Beweise vorgelegt, die darauf schließen lassen, dass die Angiogenese ein zentraler Faktor bei der Initiierung und Persistenz einer arthritischen Erkrankung ist und dass das Gefäßintegrin αvβ3 ein bevorzugtes Ziel bei der entzündlichen Arthritis ist. Daher können αvβ3-Antagonisten, die die Angiogenese inhibieren, einen neuen therapeutischen Weg zur Behandlung einer arthritischen Erkrankung, wie z.B. rheumatoider Arthritis, darstellen (siehe C.M. Storgard et al., "Decreased angiogenesis and arthritic disease in rabbits treated with an αvβ3 antagonist", J. Clin. Invest., 103:47–54 (1999), das hierin in seiner Gesamtheit durch Bezugnahme aufgenommen ist).
Darüber hinaus können die Verbindungen dieser Erfindung durch Wirkung als Antagonisten des Integrinrezeptors αvβ5 auch die Neovaskularisierung inhibieren. Es wurde gezeigt, dass ein monoklonaler Antikörper für αvβ5 die VEGF-induzierte Angiogenese in der Kaninchen-Kornea und dem Hühner-Chorioallontorismembran-Modell induziert (siehe M.C. Friedlander et al., Science 270, 1500–1502 (1995), das in seiner Gesamtheit hierin durch Bezugnahme aufgenommen ist). Daher eignen sich Verbindungen, welche αvβ5 antagonisieren, zur Behandlung und Prävention von Makuladegeneration, diabetischer Retinopathie, Viruserkrankung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
Zusätzlich können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die Angiogenese und Entzündung inhibieren, indem sie als Antagonist von αv-Integrinrezeptoren, die mit anderen β-Untereinheiten assoziiert sind, wie z.B. αvβ6 und αvβ8, wirken (siehe zum Beispiel Melpo Christofidou-Solomidou et al., "Expression and Function of Endothelial Cell αv Integrin Receptors in Wound-Induced Human Angiogenesis in Human Skin/SCID Mice Chimeras", American Journal of Pathology, 151: 975–983 (1997), und Xiao-Zhu Huang et al., "Inactivation of the Integrin β6 Subunit Gene Reveals a Role of Epithelial Integrins in Regulating Inflammation in the Lungs and Skin, "Journal of Cell Biology, 133: 921–928, die in ihrer Gesamtheit hierin durch Bezugnahme aufgenommen sind).
Zusätzlich können bestimmte Verbindungen dieser Erfindung sowohl die αvβ3- als auch die αvβ5-Rezeptoren antagonisieren. Diese Verbindungen, die als "duale αvβ3/αvβ5-Antagonisten" bezeichnet werden, eignen sich zur Inhibierung von Knochenresorption, zur Behandlung und Prävention von Osteoporose und zur Inhibierung von vaskulärer Restenose, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Angiogenese, Atherosklerose, Entzündung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
Peptidyl- sowie peptidomimetische Antagonisten des αvβ3-Integrinrezeptors wurden sowohl in der wissenschaftlichen als auch in der Patentliteratur beschrieben. Zum Beispiel wird verwiesen auf W.J. Hoekstra und B.L. Poulter, Curr. Med. Chem. 5: 195–204 (1998) und die darin zitierte Literatur; WO 95/32710 ; WO 95/37655 ; WO 97/01540 ; WO 97/37655 ; WO 98/08840 ; WO 98/18460 ; WO 98/18461 ; WO 98/25892 ; WO 98/31359 ; WO 98/30542 ; WO 99/15506 ; WO 99/15507 ; WO 99/31061 ; WO 00/06169 ; EP 853084 ; EP 854140 ; EP 854145 ; US-Patent Nr. 5780426 und US-Patent Nr. 6048861 . Einen Hinweis auf die Fähigkeit von αvβ3-Integrinrezeptorantagonisten zur Prävention von Knochenresorption in vitro und in vivo wurde vorgelegt (siehe V.W. Engleman et al., "A Peptidomimetic Antagonist of the αvβ3 Integrin Inhibits Bone Resorption In Vitro and Prevents Osteoporosis In Vivo," J. Clin. Invest. 99: 2284–2292 (1997); S.B. Rodan et al., "A High Affinity Non-Peptide αvβ3 Ligand Inhibits Osteoclast Activity In Vitro and In Vivo," J. Bone Miner. Res. 11: S289 (1996); J.F. Gourvest et al., "Prevention of OVX-Induced Bone Loss With a Non-peptidic Ligand of the αvβ3 Vitronectin Receptor," Bone 23: S612 (1998); M.W. Lark et al., "An Orally Active Vitronectin Receptor αvβ3 Antagonist Prevents Bone Resorption In Vitro and In Vivo in the Ovariectomized Rat," Bone 23: S219 (1998)).
Der αvβ3-Integrinrezeptor erkennt die Arg-Gly-Asp-(RGD)-Tripeptidsequenz in ihrer zugehörigen Matrix und in ihren zugehörigen Zelloberflächenglycoproteinen (siehe J. Samanen et al., "Vascular Indications for Integrin αv Antagonists," Curr. Pharmaceut. Design 3: 545–584 (1997)). Ein Benzazepinkern wurde neben anderen von Genentech und SmithKline Beecham als in der Konformation eingeschränktes Gly-Asp-Mimetikum zur Elaborierung von nichtpeptidischen αvβ3-Integrinrezeptorantagonisten, die am N-Terminus mit heterocyclischen Arginin-Mimetika substituiert sind, eingesetzt (siehe R.M. Keenan et al., "Discovery of Potent Nonpeptide Vitronectin Receptor (αvβ3) Antagonists," J. Med. Chem. 40: 2289–2292 (1997); R.M. Keenan et al., "Benzimidazole Derivatives As Arginine Mimetics in 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (αvβ3) Antagonists," Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3165–3170 (1998); und R.M. Keenan et al., "Discovery of an Imidazopyridine-Containing 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (αvβ3) Antagonist With Efficacy in a Restenosis Model," Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3171–3176 (1998). An SmithKline Beecham übertragene Patente, die solche Benzazepin- sowie verwandte Benzodiazepin- und Benzocyclohepten-αvβ3-Integrinrezeptorantagonisten offenbaren, sind u.a. WO 96/00574 , WO 96/00730 , WO 96/06087 , WO 96/26190 , WO 97/24119 , WO 97/24122 , WO 97/24124 , WO 98/15278 , WO 99/05107 , WO 99/06049 , WO 99/15170 und WO 99/15178 , und an Genetech übertragene Patente sind u.a. WO 97/34865 . Der Dibenzocyclohepten- sowie der Dibenzoxazipin-Kern wurden auch als Gly-Asp-Mimetikum eingesetzt, um αvβ3-Antagonisten zu ergeben (siehe WO 97/01540 , WO 98/30542 , WO 99/11626 und WO 99/15508 , alle übertragen an SmithKline Beecham).
Andere Integrinrezeptorantagonisten, die in der Hauptkette Ring-Konformationseinschränkungen enthalten, wurden in WO 98/08840 ; WO 99/30709 ; WO 99/30713 ; WO 99/31099 ; WO 00/09503 ; US-Patent Nr. 5919792 ; US-Patent Nr. 5925655 ; US-Patent Nr. 5981546 und US-Patent 6017926 beschrieben.
Es bleibt jedoch noch immer ein Bedarf an kleinmolekularen nichtpeptidischen selektiven αv-Integrinrezeptorantagonisten, die eine verbesserte Wirksamkeit, eine bessere Pharmakodynamik und verbesserte pharmakokinetische Eigenschaften aufweisen, wie z.B. orale Bioverfügbarkeit und Wirkungsdauer, verglichen mit bereits beschriebenen Verbindungen. Solche Verbindungen würden eine Verbesserung bei der Behandlung, Prävention oder Unterdrückung von verschiedenen Pathologien ergeben, die oben aufgezählt wurden und die durch αv-Integrinrezeptorbindung- und -zelladhäsion und -aktivierung vermittelt werden.
In US-Patent Nr. 6048861 (11. April 2000) offenbarten wir unter anderem eine Reihe von 3-substituierten nichtanionischen Säurederivaten, die wirksame αvβ3-Integrinrezeptorantagonisten sind. In der vorliegenden Erfindung beschreiben wir analoge Alkansäurederivate, die in der C-S-Position der aliphatischen Kette mit einer Sauerstoff-Funktionalität, nämlich Keto, substituiert sind und an C-3 mit einer gegebenenfalls substituierten Arylgruppe substituiert sind. Verglichen mit den Stammverbindungen sind die an der Kette oxygenierten Verbindungen der vorliegenden Erfindung weniger hydrophob, sie weisen eine verringerte Bindung an Plasmaproteine auf und weisen bessere pharmakokinetische und/oder pharmakodynamische Eigenschaften in vivo auf.
Es ist daher ein Ziel der vorliegenden Erfindung, neue nichtanionische Säurederivate, die an der C-5-Position der aliphatischen Kette oxygeniert sind, zur Verfügung zu stellen, die sich als αv-Integrinrezeptorantagonisten eignen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, neue nichtanionische Säurederivate, die an der C-5-Position der aliphatischen Kette oxygeniert sind, zur Verfügung zu stellen, die sich als αvβ3-Rezeptorantagonisten eignen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, neue nichtanionische Säurederivate, die an der C-S-Position der aliphatischen Kette oxygeniert sind, zur Verfügung zu stellen, die sich als αvβ5-Rezeptorantagonisten eignen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, neue nichtanionische Säurederivate, die an der C-S-Position der aliphatischen Kette oxygeniert sind, zur Verfügung zu stellen, die sich als duale αvβ3/αvβ5-Rezeptorantagonisten eignen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung zu stellen, die Integrinrezeptorantagonisten enthalten.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verfahren zur Herstellung der pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung zur Verfügung zu stellen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verfahren zur Herbeiführung einer integrinrezeptorantagonisierenden Wirkung in einem Säuger, der diese benötigt, durch Verabreichung der Verbindungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung zur Verfügung zu stellen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung zu stellen, die sich zur Inhibierung von Knochenresorption, Restenose, Atherosklerose, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Angiogenese, Krebs und metastatischem Tumorwachstum eignen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, die zur Behandlung von Osteoporose geeignet sind.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verfahren zur Inhibierung von Knochenresorption, Restenose, Atherosklerose, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Angiogenese, Krebs und metastatischem Tumorwachstum zur Verfügung zu stellen.
Es ist ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung, Verfahren zur Behandlung von Osteoporose zur Verfügung zu stellen.
Diese und andere Ziele werden aus der folgenden detaillierten Beschreibung leicht ersichtlich sein.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Verbindungen, wie sie in Anspruch 1 beschrieben sind.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung eignen sich als αv-Integrinrezeptorantagonisten.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Verbindungen der vorliegenden Erfindung und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthalten.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung der pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft neue nichtanionische Säurederivate, die durch die Strukturformel (IV) beschrieben werden
oder ein pharmazeutisches Salz davon, wobei X ist
R² ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus
Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl,
C_3-8-Cycloheteroalkyl, C_3-8-Cycloalkyl-C_1-6-alkyl,
C_3-8-Cycloheteroalkyl-C_1-6-alkyl, Aryl, Aryl-C_1-6-alkyl, Amino,
Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl,
(C_1-6-Alkyl)_1-2-amino, C_3-6-Cycloalkyl-C_0-2-amino,
(C_1-6-Alkyl)_1-2-amino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkoxy, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl,
Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl,
C_1-3-Alkoxycarbonyl-C_1-6-alkyl, Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl,
Nitro, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Trifluorethoxy,
C_1-8-Alkyl-S(O)_0-2, (C_1-8-Alkyl)_0-2-aminocarbonyl,
C_1-8-Alkyloxycarbonylamino, (C_1-8-Alkyl)_1-2-aminocarbonyloxy,
(Aryl-C_1-3-alkyl)_1-2-amino, (Aryl)_1-2-amino,
Aryl-C_1-3-alkylsulfonylamino und C_1-8-Alkylsulfonylamino,
R⁷ Aryl ist, wobei die Arylgruppe ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus

(1) Phenyl,
(2) Naphthyl,
(3) Pyridyl,
(4) Furyl,
(5) Thienyl,
(6) Pyrrolyl,
(7) Oxazolyl,
(8) Thiazolyl,
(9) Imidazolyl,
(10) Pyrazolyl,
(11) Isoxazolyl,
(12) Isothiazolyl,
(13) Pyrimidinyl,
(14) Pyrazinyl,
(15) Pyridazinyl,
(16) Tetrazolyl,
(17) Chinolyl,
(18) Isochinolyl,
(19) Benzimidazolyl,
(20) Benzofuryl,
(21) Benzothienyl,
(22) Indolyl,
(23) Benzthiazolyl,
(24) Benzoxazolyl,
(25) Dihydrobenzofuryl,
(26) Benzo(1,3)dioxolanyl,
(27) Benzo(1,4)dioxanyl,
(28) Chinazolyl,
(29) Chinoxalyl und
(30) 3,4-Dihydro-2H-1,4-dioxa-5-azanaphthalinyl,

_1-6

_1-8

_3-8

_1-3

_1-6

_1-3

_1-6

_1-4

_1-6

_1-5

_1-3

_1-6

_1-5

_1-3

²

⁸

_1-3

Bei einer Ausführungsform ist R⁷ Aryl, wobei die Arylgruppe ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Phenyl, Pyridyl, Chinolyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Pyridazinyl, Pyrazolyl, Benzofuryl, Dihydrobenzofuryl und 3,4-Dihydro-2H-1,4-dioxa-5-azanaphthalinyl, wobei die Arylgruppe unsubstituiert oder substituiert ist mit ein bis zwei Substituenten, wie sie oben definiert sind.
In einer weiteren Klasse dieser Ausführungsform ist R⁷ Chinolyl, Pyridyl oder Pyrimidinyl, unsubstituiert oder substituiert mit ein bis zwei Substituenten, unabhängig ausgewählt aus Halogen, Phenyl, C_1-4-Alkyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_1-3-Alkoxy, Amino, C_1-3-Alkylamino, Di(C_1-3)alkylamino, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, 1,1,1-Trifluorethyl, Trifluormethoxy und Trifluorethoxy.
In einer Unterklasse dieser Klasse ist R² ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus
Wasserstoff,
Halogen,
Amino,
C_1-4-Alkylamino,
C_3-6-Cycloalkyl-C_0-2-alkylamino,
Cyano,
C_1-4-Alkyl,
Cyclopropyl,
Aryl-C_1-3-alkyl,
C_1-4-Acylamino,
C_1-4-Alkoxy,
C_1-4-Alkylthio,
Aminocarbonyl,
(C_1-6-Alkyl)_1-2-aminocarbonyl,
C_1-4-Alkoxycarbonyl,
Trifluormethyl und
Trifluormethoxy.
In einer weiteren Unterklasse dieser Klasse ist R² ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus
Wasserstoff,
Halogen,
Amino,
C_1-3-Alkylamino,
C_3-6-Cycloalkylmethylamino,
C_1-4-Alkyl,
Cyclopropyl,
Trifluormethyl und
Trifluormethoxy.
Eine weitere Ausführungsform betrifft Verbindungen der Strukturformel (IV):
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei X ist:
R² Wasserstoff, C_1-4-Alkyl oder Cyclopropyl ist,
R⁷ Chinolyl, Pyridyl oder Pyrimidinyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem Substituenten, ausgewählt aus C_1-4-Alkyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_1-3-Alkoxy, Amino, C_1-3-Alkylamino, Di(C_1-3)alkylamino, Cyano, Trifluormethyl oder Trifluormethoxy, und
R⁸ Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl ist.
Weitere Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung betreffen Verbindungen der Formel IV, wobei R⁸ Wasserstoff ist.
Veranschaulichende, jedoch nicht limitierende Beispiele für Verbindungen der vorliegenden Erfindung, die sich als αv-Integrinrezeptorantagonisten eignen, sind folgende:
3-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(S)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(R)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(S)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(R)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(S)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(R)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
3(S)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Zur medizinischen Verwendung sind die Salze der Verbindungen dieser Erfindung nichttoxische "pharmazeutisch annehmbare Salze". Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen oder ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze können jedoch auch andere Salze geeignet sein. Salze, die von der Bezeichnung "pharmazeutisch annehmbare Salze" umfasst sind, sind nichttoxische Salze der Verbindungen dieser Erfindung, die im Allgemeinen durch Umsetzung der freien Base mit einer geeigneten organischen oder anorganischen Säure hergestellt werden. Repräsentative Salze sind u.a. die folgenden: Acetat, Benzolsulfonat, Benzoat, Hydrogencarbonat, Hydrogensulfat, Hydrogentartrat, Borat, Bromid, Calcium, Camsylat, Carbonat, Chlorid, Clavulanat, Citrat, Dihydrochlorid, Edetat, Edisylat, Estolat, Esylat, Fumarat, Gluceptat, Gluconat, Glutamat, Glycolylarsanilat, Hexylresorcinat, Hydrabamin, Hydrobromid, Hydrochlorid, Hydroxynaphthoat, Iodid, Isothionat, Lactat, Lactobionat, Laurat, Malst, Malest, Mandelat, Mesylat, Methylbromid, Methylnitrat, Methylsulfat, Mucat, Napsylat, Nitrat, N-Methylglucaminammoniumsalz, Oleat, Oxalat, Pamoat (Embonat), Palmitat, Pantothenat, Phosphat/Diphosphat, Polygalacturonat, Salicylat, Stearat, Sulfat, Subacetat, Succinat, Tannat, Tartrat, Teoclat, Tosylat, Triethiodid und Valerat. Wenn die Verbindungen der Erfindung einen sauren Rest tragen, können darüber hinaus geeignete pharmazeutisch annehmbare Salze davon u.a. Alkalimetallsalze, z.B. Natrium- oder Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze, z.B. Calcium- oder Magnesiumsalze, und Salze, die mit geeigneten organischen Liganden gebildet werden, z.B. quaternäre Ammoniumsalze, sein.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können Chiralitätszentren besitzen und somit als Racemate, racemische Mischungen, einzelne Enantiomere, Diastereomerenmischungen und einzelne Diastereomere auftreten, wobei alle isomeren Formen von der vorliegenden Erfindung umfasst sind. Daher sind, wenn eine Verbindung chiral ist, die aufgetrennten Enantiomere oder Diastereomere, die im Wesentlichen frei voneinander sind, vom Umfang der Erfindung umfasst; ferner umfasst sind alle Mischungen aus den beiden Enantiomeren.
Einige der hierin beschriebenen Verbindungen enthalten olefinische Doppelbindungen, und sofern nichts anderes angegeben ist, sollen sowohl E- als auch Z-Strukturisomere umfasst sein.
Einige der hierin beschriebenen Verbindungen können mit verschiedenen Wasserstoff-Verknüpfungspunkten existieren, was als Tautomere bezeichnet wird. Ein solches Beispiel kann ein Keton und dessen Enol-Form sein, bekannt als Keto-Enol-Tautomere. Die einzelnen Tautomere sowie Mischungen davon sind von den Verbindungen der vorliegenden Erfindung umfasst.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können zum Beispiel durch fraktionierte Kristallisation aus einem geeigneten Lösungsmittel, zum Beispiel Methanol oder Ethylacetat oder einer Mischungen davon, in diastereoisomere Enantiomerenpaare aufgetrennt werden. Das so erhaltene Enantiomerenpaar kann durch herkömmliche Mittel, zum Beispiel durch die Verwendung einer optisch aktiven Säure als Auftrennmittel oder durch HPLC unter Verwendung einer chiralen stationären Phase in einzelne Stereoisomere aufgetrennt werden. Alternativ kann jedes beliebige Enantiomer einer Verbindung der vorliegenden Erfindung durch stereospezifische Synthese unter Verwendung optisch reiner Ausgangsmaterialien oder Reagenzien mit bekannter Konfiguration erhalten werden.
Ebenfalls vom Umfang der Erfindung umfasst sind Polymorphe und Hydrate der Verbindungen der vorliegenden Erfindung.
Vom Umfang der vorliegenden Erfindung umfasst sind Prodrugs der Verbindungen dieser Erfindung. Im Allgemeinen werden solche Prodrugs funktionelle Derivate der Verbindungen dieser Erfindung sein, welche leicht in vivo in die benötigte Verbindung umgewandelt werden können. Daher soll bei den Behandlungsverfahren der vorliegenden Erfindung die Bezeichnung "Verabreichen" die Behandlung der verschiedenen beschriebenen Zustände mit der speziellen offenbarten Verbindung oder mit einer Verbindung, die nicht speziell offenbart ist, die sich aber nach der Verabreichung an den Patienten in vivo in die angegebene Verbindung umwandelt, umfassen. Herkömmliche Verfahren zur Auswahl und Herstellung geeigneter Prodrug-Derivate sind zum Beispiel in "Design of Prodrugs", Hrsg. H. Bundgaard, Elsevier, 1985, beschrieben, das hierin in seiner Gesamtheit durch Bezugnahme umfasst ist. Metaboliten dieser Verbindungen sind u.a. wirksame Spezies, die bei der Einführung der Verbindungen dieser Erfindung in das biologische Milieu erzeugt werden.
Die Bezeichnung "therapeutisch wirksame Menge" soll die Menge eines Arzneistoffs oder eines pharmazeutischen Mittels bedeuten, welche die biologische oder medizinische Reaktion eines Gewebes, Systems, Tieres oder Menschen, die von einem Forscher oder Kliniker erwünscht wird, hervorruft.
Die Bezeichnung "Integrinrezeptorantagonist", wie sie hier verwendet wird, bedeutet eine Verbindung, die sich entweder an den αvβ3-Rezeptor oder den αvβ5-Rezeptor bindet oder diesen antagonisiert, oder eine Verbindung, die sich an Kombinationen aus diesen Rezeptoren bindet und diese antagonisiert (zum Beispiel einen dualen αvβ3/αvβ5-Rezeptorantagonist).
Die Bezeichnung "Knochenresorption", wie sie hier verwendet wird, bedeutet das Verfahren, durch das Osteoklasten Knochen abbauen.
Die Bezeichnung "Alkyl" soll gerad- oder verzweigtkettige Alkane mit insgesamt ein bis zehn Kohlenstoffatomen oder einer beliebigen Zahl innerhalb dieses Bereichs bedeuten (d.h. Methyl, Ethyl, 1-Propyl, 2-Propyl, n-Butyl, s-Butyl, s-Butyl, t-Butyl usw.).
Die Bezeichnung "Alkenyl" soll gerad- oder verzweigtkettige Alkene mit insgesamt zwei bis zehn Kohlenstoffatomen oder einer beliebigen Zahl innerhalb dieses Bereichs bedeuten.
Die Bezeichnung "Alkinyl" soll gerad- oder verzweigtkettige Alkine mit insgesamt zwei bis zehn Kohlenstoffatomen oder einer beliebigen Zahl innerhalb dieses Bereichs bedeuten.
Die Bezeichnung "Cycloalkyl" soll cyclische Ringe aus Alkanen mit insgesamt drei bis acht Kohlenstoffatomen oder einer beliebigen Zahl innerhalb dieses Bereichs bedeuten (d.h. Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl oder Cyclooctyl).
Die Bezeichnung "Cycloheteroalkyl", wie sie hier verwendet wird, soll einen 3- bis 8-gliedrigen, vollständig gesättigten heterocyclischen Ring mit einem oder zwei Heteroatomen, ausgewählt aus N, O oder S, bedeuten. Beispiele für Cycloheteroalkylgruppen sind u.a., ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, Piperidinyl, Pyrrolidinyl, Azetidinyl, Morpholinyl, Piperazinyl.
Die Bezeichnung "Alkoxy", wie sie hier verwendet wird, bedeutet gerad- oder verzweigtkettige Alkoxide mit der angegebenen Zahl von Kohlenstoffatomen (z.B. C_1-5-Alkoxy) oder einer beliebigen Zahl innerhalb dieses Bereichs (d.h. Methoxy, Ethoxy usw.).
Die Bezeichnung "Aryl", so wie sie hierin verwendet wird, bedeutet ein monocyclisches oder bicyclisches System, das wenigstens einen aromatischen Ring umfasst, wobei das monocyclische oder bicyclische System 0, 1, 2, 3 oder 4 Heteroatome, ausgewählt aus N, O oder S, enthält, und wobei das monocyclische oder bicyclische System entweder unsubstituiert oder substituiert ist mit einer oder mehreren Gruppen, unabhängig ausgewählt aus Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, Aryl, Aryl-C_1-3-alkyl, Amino, Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylamino, C_1-6-Alkylamino-C_1-6-alkyl, Di(C_1-6)alkylamino, Di(C_1-6)alkylamino-C_1-6-alkyl, C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkylthio, C_1-4-Alkylsulfinyl, C_1-4-Alkylsulfonyl, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkoxycarbonyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyloxy, Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Oxo und C_1-5-Alkylcarbonyloxy. Beispiele für Aryl sind u.a., ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Pyrrolyl, Pyrazolyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl, Imidazolyl, Benzimidazolyl, Benzthiazolyl, Benzoxazolyl, Chinolyl, Isochinolyl, Chinazolyl, Chinoxalyl, indolyl, Thienyl, Furyl, Benzofuryl, Dihydrobenzofuryl, Benzothienyl, Benzo(1,3)dioxolanyl, Benzo(1,4)dioxanyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Thiazolyl, Isothiazolyl und Tetrazolyl, die entweder unsubstituiert oder substituiert sind mit einer oder mehreren Gruppen, unabhängig ausgewählt aus Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, Aryl, Aryl-C_1-3-alkyl, Amino, Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylamino, C_1-6-Alkylamino-C_1-6-alkyl, Di(C_1-6)alkylamino, Di(C_1-6)-alkylamino-C_1-6-alkyl, C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkylthio, C_1-4-Alkylsulfinyl, C_1-4-Alkylsulfonyl, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkoxycarbonyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyloxy, Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Oxo und C_1-5-Alkylcarbonyloxy. Vorzugsweise ist die Arylgruppe unsubstituiert, mono-, di- oder trisubstituiert mit ein bis drei der oben genannten Substituenten; besonders bevorzugt ist die Arylgruppe unsubstituiert, mono- oder disubstituiert mit ein bis zwei der oben genannten Substituenten.
Immer wenn die Bezeichnung "Alkyl" oder "Aryl" oder irgendeiner ihrer voranstehenden Wortstämme in einem Namen eines Substituenten vorkommen (z.B. Aryl-C_0-8-alkyl), soll dies so interpretiert werden, dass die oben für "Alkyl" und "Aryl" angegebenen Einschränkungen umfasst sind. Die angegebenen Zahlen für Kohlenstoffatome (z.B. C_1-8) sollen unabhängig die Anzahl der Kohlenstoffatome in einem Alkyl- oder cyclischen Alkylrest oder in dem Alkylteil eines größeren Substituenten, in dem das Alkyl als voranstehender Wortstamm vorkommt, bedeuten.
Die Bezeichnungen "Arylalkyl" und "Alkylaryl" umfassen einen Alkylteil, wobei Alkyl wie oben definiert ist, und einen Arylteil, wobei Aryl wie oben definiert ist. Beispiele für Arylalkyl sind u.a., ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, Benzyl, Fluorbenzyl, Chlorbenzyl, Phenylethyl, Phenylpropyl, Fluorphenylethyl, Chlorphenylethyl, Thienylmethyl, Thienylethyl und Thienylpropyl. Beispiele für Alkylaryl sind u.a., ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, Toluol, Ethylbenzol, Propylbenzol, Methylpyridin, Ethylpyridin, Propylpyridin und Butylpyridin.
Bei den Verbindungen der vorliegenden Erfindung können zwei R²-Substituenten, wenn sie sich am selben Kohlenstoffatom befinden, mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden, zusammengefasst werden, um eine Carbonylgruppe zu bilden.
Die Bezeichnung "Halogen" soll Iod, Brom, Chlor und Fluor umfassen.
Die Bezeichnung "Oxy" bedeutet ein Sauerstoff(O)-Atom. Die Bezeichnung "Thio" bedeutet ein Schwefel(S)-Atom. Die Bezeichnung "Oxo" bedeutet "=O". Die Bezeichnung "Carbonyl" bedeutet "C=O".
Die Bezeichnung "substituiert" soll als mehrere Grade einer Substitution durch einen genannten Substituenten umfassend aufgefasst werden. Wenn mehrere Substituentenreste offenbart oder beansprucht sind, kann die substituierte Verbindung unabhängig durch einen oder mehrere der offenbarten oder beanspruchten Substituentenreste, einzeln oder mehrfach, substituiert sein. Mit unabhängig substituiert ist gemeint, dass die (zwei oder mehreren) Substituenten gleich oder verschieden sein können.
Unter der innerhalb dieser gesamten Offenbarung verwendeten Standard-Nomenklatur wird der endständige Teil der bezeichneten Seitenkette zuerst beschrieben, gefolgt von der benachbarten Funktionalität, ausgehend vom Verknüpfungspunkt. Zum Beispiel entspricht ein C_1-5-Alkylcarbonylamino-C_1-6-alkylsubstituent
Bei der Wahl der Verbindungen der vorliegenden Erfindung wird der Durchschnittsfachmann erkennen, dass die verschiedenen Substituenten, d.h. X, R², R⁷ und R⁸, in Übereinstimmung mit gut bekannten Prinzipien der Zusammensetzung chemischer Strukturen auszuwählen sind.
Repräsentative Verbindungen der vorliegenden Erfindung weisen typischerweise eine submikromolare Affinität für die αv-Integrinrezeptoren, insbesondere die αvβ3- und αvβ5-Rezeptoren, auf. Die Verbindungen dieser Erfindung eignen sich daher zur Behandlung von Säugern, die an einem Knochenzustand leiden, der durch erhöhte Knochenresorption verursacht oder vermittelt wird, und die eine solche Behandlung benötigen. Pharmakologisch wirksame Mengen der Verbindungen, einschließlich pharmazeutisch annehmbarer Salze davon, werden dem Säuger verabreicht, um die Wirkung von Säuger-Osteoklasten zu inhibieren.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden in Dosen verabreicht, welche die Antagonisierung des αvβ3-Rezeptors bewirken, wenn eine solche Behandlung benötigt wird, zum Beispiel zur Prävention oder Behandlung von Osteoporose.
Die Erfindung wird durch das Verfahren veranschaulicht, bei dem die αv-Integrinrezeptorantagonisierungswirkung eine αvβ3-Antagonisierungswirkung ist. Insbesondere ist die αvβ3-Antagonisierungswirkung ausgewählt aus der Inhibierung von: Knochenresorption, Restenose, Angiogenese, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum. Bei einer Ausführungsform des Verfahrens ist die αvβ3-Antagonisierungswirkung die Inhibierung von Knochenresorption.
Ein weiteres Beispiel der Erfindung ist das Verfahren, bei dem die αv-Integrinrezeptorantagonisierungswirkung eine αvβ5-Antagonisierungswirkung ist. Speziell ist die αvβ5-Antagonisierungswirkung ausgewählt aus der Inhibierung von Restenose, Angiogenese, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
Die Erfindung weiter veranschaulichend ist das Verfahren, bei dem die αv-Integrinrezeptorantagonisierungswirkung eine duale αvβ3/αvβ5-Antagonisierungswirkung ist. Speziell ist die duale αvβ3/αvβ5-Antagonisierungswirkung ausgewählt aus der Inhibierung von: Knochenresorption, Restenose, Angiogenese, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
Die Erfindung speziell veranschaulichend ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die irgendeine der oben beschriebenen Verbindungen und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält. Ein weiteres Beispiel für die Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die durch Kombination von irgendeiner der oben beschriebenen Verbindungen und einem pharmazeutisch annehmbaren Träger hergestellt wird. Eine weitere Veranschaulichung der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutisch annehmbaren Zusammensetzung, das die Kombination von irgendeiner der oben beschriebenen Verbindungen und einem pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.
Den Nutzen der Erfindung weiter veranschaulichend ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention eines Zustandes, der durch den Antagonismus eines αv-Integrinrezeptors vermittelt wird, bei einem Säuger, der diese benötigt, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge von irgendeiner der oben beschriebenen Verbindungen an einen Säuger. Vorzugsweise ist der Zustand ausgewählt aus Knochenresorption, Osteoporose, Restenose, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Angiogenese, Atherosklerose, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, Krebs, Tumorwachstum und Metastase. Besonders bevorzugt ist der Zustand ausgewählt aus Osteoporose und Krebs. Ganz besonders bevorzugt ist der Zustand Osteoporose.
Ein spezielleres Beispiel für den Nutzen der Erfindung ist ein Verfahren zur Herbeiführung einer Integrinantagonisierungswirkung bei einem Säuger, der diese benötigt, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge von irgendeiner der Verbindungen oder irgendeiner der pharmazeutischen Zusammensetzungen, die oben beschrieben wurden, an einen Säuger. Vorzugsweise ist die Integrinantagonisierungswirkung eine αvβ3-Antagonisierungswirkung; speziell ist die αvβ3- Antagonisierungswirkung ausgewählt aus der Inhibierung von Knochenresorption, Inhibierung von Restenose, Inhibierung von Atherosklerose, Inhibierung von Angiogenese, Inhibierung von diabetischer Retinopathie, Inhibierung von Makuladegeneration, Inhibierung von Entzündung, Inhibierung einer Viruserkrankung und Inhibierung von Krebs oder metastatischem Tumorwachstum. Besonders bevorzugt ist die αvβ3-Antagonisierungswirkung die Inhibierung von Knochenresorption. Alternativ ist die Integrinantagonisierungswirkung eine αvβ5-Antagonisierungswirkung oder eine duale αvβ3/αvβ5-Antagonisierungswirkung. Beispiele für αvβ5-Antagonisierungswirkungen sind die Inhibierung von Restenose, Atherosklerose, Angiogenese, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, Viruserkrankung und metastatischem Tumorwachstum.
Zusätzliche Beispiele für den Nutzen der Erfindung sind Verfahren zur Inhibierung von Knochenresorption und zur Behandlung und/oder Prävention von Osteoporose bei einem Säuger, der diese benötigt, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge von irgendeiner der Verbindungen oder irgendeiner der pharmazeutischen Zusammensetzungen, die oben beschrieben wurden, an einen Säuger.
Zusätzliche Veranschaulichungen für den Nutzen der Erfindung sind Verfahren zur Behandlung von Hyperkalzämie durch Malignität, Osteopenie aufgrund von Knochenmetastasen, periodontaler Erkrankung, Hyperparathyreoidismus, periartikulären Erosionen bei rheumatoider Arthritis, Paget-Krankheit, durch Immobilisierung hervorgerufener Osteopenie und Glukokortikoidbehandlung bei einem Säuger, der diese benötigt, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge von irgendeiner der Verbindungen oder irgendeiner der pharmazeutischen Zusammensetzungen, die oben beschrieben wurden, an einen Säuger.
Ein spezielleres Beispiel für die Erfindung ist die Verwendung von irgendeiner der oben beschriebenen Verbindungen bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention von Osteoporose bei einem Säuger, der diese benötigt. Noch ein weiteres Beispiel für die Erfindung ist die Verwendung von irgendeiner der oben beschriebenen Verbindungen bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention von Knochenresorption, metastatischem Tumorwachstum, Krebs, Restenose, Atherosklerose, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung und/oder Angiogenese.
Ebenfalls beispielhaft für die Erfindung sind Zusammensetzungen, die ferner einen Wirkstoff enthalten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus

a) einem organischen Bisphosphonat oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz oder Ester davon,
b) einem Östrogenrezeptormodulator,
c) einem Androgenrezeptormodulator,
d) einem zytotoxischen/antiproliferativen Mittel,
e) einem Matrixmetalloproteinaseinhibitor,
f) einem Inhibitor der epidermalen, Fibroblasten- oder Thrombozyten-Wachstumsfaktoren,
g) einem VEGF-Inhibitor,
h) einem Antikörper zu einem Wachstumsfaktor oder einem Wachstumsfaktorrezeptor,
i) einem Flk-1/KDR-, Fit-1-, Tck/Tie-2- oder Tie-1-Inhibitor,
j) einem Kathepsin-K-Inhibitor,
k) einem Wachstumshormonsekretagogum,
l) einem Osteoklasten-Protonen-ATPase-Inhibitor,
m) einem Urokinaseplasminogenaktivator (u-PA),
n) einem tumorspezifischen Antikörper-Interleukin2-Fusionsprotein,
o) einem HMG-CoA-Reduktaseinhibitor und
p) einem Prenylierungsinhibitor, wie z.B. einem Famesyltransferaseinhibitor oder einem Geranylgeranyltransferaseinhibitor oder einem doppelten Farnesyl/Geranylgeranyl-Transferaseinhibitor

Vorzugsweise ist der Wirkstoff ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:

a) einem organischen Bisphosphonat oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz oder Ester davon,
b) einem Östrogenrezeptormodulator,
c) einem Androgenrezeptormodulator,
d) einem Osteoklasten-Protonen-ATPase-Inhibitor,
e) einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor und
f) einem Kathepsin-K-Inhibitor

Nichtlimitierende Beispiele für solche Bisphosphonate sind u.a. Alendronat, Etidronat, Pamidronat, Risedronat, Ibandronat und pharmazeutisch annehmbare Salze und Ester davon. Ein besonders bevorzugtes Bisphosphonat ist Alendronat, insbesondere Alendronat-Mononatriumtrihydrat.
Nichtlimitierende Beispiele für Östrogenrezeptormodulatoren sind u.a. Östrogen, Progesterin, Östradiol, Droloxifen, Raloxifen und Tamoxifen.
Nichtlimitierende Beispiele für zytotoxische/antiproliferative Mittel sind Taxol, Vincristin, Vinblastin und Doxorubicin.
Kathepsin K, früher als Kathepsin O2 bekannt, ist eine Cysteinprotease und ist in der Internationalen PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer WO 96/13523 , veröffentlicht am 9. Mai 1996; dem US-Patent Nr. 5501969 , ausgegeben am 3. März 1996; und dem US-Patent Nr. 5736357 , ausgegeben am 7. April 1998, die alle in ihrer Gesamtheit durch Bezugnahme hierin aufgenommen sind, beschrieben. Cysteinproteasen, insbesondere Kathepsine, sind mit einer Reihe von Erkrankungszuständen verbunden, wie z.B. Tumormetastasen, Entzündung, Arthritis und Knochenremodellierung. Bei sauren pH-Werten können Kathepsine Typ-1-Kollagen abbauen. Kathepsinproteaseinhibitoren können die osteoklastische Knochenresorption durch Inhibierung des Kollagenfaserabbaus inhibieren und eignen sich daher zur Behandlung von Knochenresorptionserkrankungen, wie z.B. Osteoporose.
Es wurde festgestellt, dass Elemente aus der Klasse von HMG-CoA-Reduktaseinhibitoren, die als "Stative" bekannt sind, das Wachstum neuer Knochen auslösen, wobei als Folge von Osteoporose verlorene Knochenmasse ersetzt wird (siehe The Wall Street Journal, Freitag, 3. Dezember 1999, Seite B1). Daher sind die Statine zur Behandlung von Knochenresorption viel versprechend. Nichtlimitierende Beispiele für Stative sind Lovastatin, Simvastatin, Atorvastatin und Pravastatin.
Ein Beweis für die äußerst wichtige Rolle des Urokinase-Urokinase-Rezeptors (u-PA-u-PAR) bei Angiogenese, Tumorinvasion, Entzündung und Matrix Remodellierung während der Wundheilung und Entwicklung wurde vorgelegt [siehe Y. Koshelnick et al., "Mechanisms of signaling through Urokinase Receptor and the Cellular Response," Thrombosis and Haemostasis 82: 305–311 (1999) und F. Blasi, "Proteolysis, Cell Adhesion, Chemotaxis, and Invasiveness Are Regulated by the u-PA-u-PAR-PAI-1 System," Thrombosis and Haemostatis 82: 298–304 (1999)]. Somit inhibieren spezifische Antagonisten für die Bindung von u-PA an u-PAR die Zelloberflächenplasminogenaktivierung, das Tumorwachstum und die Angiogenese sowohl bei In-vitro als auch bei In-vivo-Modellen.
H.N. Lode und Mitarbeiter beobachteten in PNAS USA 96:1591–1596 (1999) synergistische Effekte zwischen einem antiangiogenen αv-Integrinantagonisten und einem tumorspezifischen Antikörper-Cytokin(Interleukin 2)-Fusionsprotein bei der Beseitigung spontaner Tumormetastasen. Ihre Ergebnisse legen nahe, dass diese Kombination ein Potential zur Behandlung von Krebs und metastatischem Tumorwachstum besitzt.
Es wurde berichtet, dass die Protonen-ATPase, die auf der apikalen Membran des Osteoklasten vorkommt, eine bedeutende Rolle beim Knochenresorptionsverfahren spielt. Daher stellt diese Protonenpumpe ein attraktives Ziel für die Entwicklung von Knochenresorptionsinhibitoren dar, welche zur Behandlung und Prävention von Osteoporose und verwandten metabolischen Erkrankungen potentiell geeignet sind (siehe C. Farins et al., "Selective inhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel bone antiresorptive agents, "DDT, 4: 163–172 (1999)).
Es wurde ein Beweis dafür erbracht, dass androgene Steroide eine physiologische Rolle bei der Entwicklung von Knochenmasse bei Männern und Frauen spielen und dass Androgene direkt auf den Knochen wirken. Androgenrezeptoren wurden in menschlichen osteoblastenartigen Zell-Linien nachgewiesen, und es wurde gezeigt, dass Androgene direkt die Knochenzellenproliferation und -differenzierung stimulieren. Für eine Diskussion darüber siehe S.R. Davis, "The therapeutic use of androgens in women, "J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 69: 177–184 (1999) und K.A. Hansen und S.P.T. Tho, "Androgens and Bone Health," Seminars in Reproductive Endocrinology," 16: 129–134 (1998). Daher könnten Androgenrezeptormodulatoren bei der Behandlung und Prävention von Knochenschwund bei Frauen von Nutzen sein.
Aktivatoren des Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptors γ (PPARγ), wie z.B. die Thiazolidindione (TZD's), inhibieren die Bildung von osteoklastenartigen Zellen und die Knochenresorption in vitro. Die von R. Okazaki et al. in Endocrinology, 140, S. 5060–5065 (1999), vorgelegten Ergebnisse weisen auf einen lokalen Mechanismus auf Knochenmarkszellen sowie auf einen systemischen Mechanismus auf den Glucosemetabolismus hin. Nichtlimitierende Beispiele für PPARγ-Aktivatoren sind u.a. Troglitazon, Pioglitazon, Rosiglitazon und BRL 49653.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Kombinationen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung mit ein oder mehreren Mitteln, die sich zur Prävention oder Behandlung von Osteoporose eignen. Zum Beispiel können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung wirkungsvoll in Kombination mit wirksamen Mengen anderer Mittel, wie z.B. einem organischen Bisphosphonat, einem Östrogenrezeptormodulator, einem Androgenrezeptormodulator, einem Wachstumshormonsekretagogum, einem Kathepsin-K-Inhibitor, einem HMG-CoA-Reduktaseinhibitor, einem PPARγ-Aktivator oder einem Inhibitor der Osteoklasten-Protonen-ATPase, verabreicht werden.
Weitere Veranschaulichungen der Erfindung sind Verfahren zur Behandlung von Tumorwachstum oder Metastasen bei einem Säuger, der diese benötigt, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer oben beschriebenen Verbindung und eines oder mehrerer Mittel, von denen man weiß, dass sie zytotoxisch/antiproliferativ ist/sind, an einen Säuger. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch in Kombination mit einer Strahlentherapie zur Behandlung von Krebs und metastatischem Tumorwachstum verabreicht werden.
Zusätzlich können die Integrin-αvβ3-Antagonist-Verbindungen der vorliegenden Erfindung wirksam in Kombination mit einem Wachstumshormonsekretagogum bei der therapeutischen oder prophylaktischen Behandlung von Störungen im Calcium- oder Phosphat-Stoffwechsel und bei damit verbundenen Erkrankungen verabreicht werden. Diese Erkrankungen umfassen u.a. Zustände, die von einer Verringerung der Knochenresorption profitieren können. Eine Verringerung der Knochenresorption sollte das Gleichgewicht zwischen Resorption und Bildung verbessern, den Knochenschwund verringern oder zu einer Knochenzunahme führen. Eine Verringerung der Knochenresorption kann den mit osteolytischen Läsionen verbundenen Schmerz lindem und das Auftreten und/oder das Wachstum dieser Läsionen verringern. Diese Erkrankungen sind u.a.: Osteoporose (einschließlich Östrogenmangel, Immobilisation, durch Glukokortikoid induziert und senil), Osteodystrophie, Paget-Krankheit, Myositis ossificans, Bechterew-Krankheit, maligne Hyperkalzämie, metastatische Knochenerkrankung, periodontale Erkrankung, Cholelithiasis, Nephrolithiasis, Urolithiasis, Blasenstein, Arterienverhärtung (Sklerose), Arthritis, Bursitis, Neuritis und Tetanie. Eine erhöhte Knochenresorption kann von pathologisch hohen Calcium- und Phosphatkonzentrationen im Plasma begleitet werden, die durch diese Behandlung verringert werden würden. Ähnlich würde die vorliegende Erfindung bei der Zunahme der Knochenmasse bei Patienten mit Wachstumshormonmangel geeignet sein. Daher sind bevorzugte Kombinationen gleichzeitige oder abwechselnde Behandlungen mit einem αvβ3-Rezeptorantagonisten der vorliegenden Erfindung und einem Wachstumshormonsekretagogum, gegebenenfalls zusammen mit einer dritten Komponente, die ein organisches Bisphosphonat umfasst, vorzugsweise Alendronat-Mononatriumtrihydrat.
Gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung können die einzelnen Komponenten der Kombination getrennt zu verschiedenen Zeiten während des Verlaufs der Therapie oder gleichzeitig in geteilten oder einzelnen Kombinationsformen verabreicht werden. Die vorliegende Erfindung soll daher so verstanden werden, dass sie alle solchen Regime mit gleichzeitiger oder abwechselnder Behandlung umfasst, und die Bezeichnung "Verabreichen" soll dementsprechend interpretiert werden. Es ist zu verstehen, dass der Umfang der Kombinationen der Verbindungen dieser Erfindung mit anderen Mitteln, die zur Behandlung von integrinvermittelten Zuständen geeignet sind, im Prinzip jede beliebige Kombination mit einer beliebigen, zur Behandlung von Osteoporose geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzung umfasst.
So wie hier verwendet, soll die Bezeichnung "Zusammensetzung" ein Produkt umfassen, das die angegebenen Bestandteile in den angegebenen Mengen enthält, sowie ein beliebiges Produkt, das direkt oder indirekt aus der Kombination der angegebenen Bestandteile in den angegebenen Mengen entsteht.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in oralen Dosisformen wie Tabletten, Kapseln (jeweils einschließlich Formulierungen mit verzögerter oder zeitlich festgelegter Freisetzung), Pillen, Pulver, Körnchen, Elixiere, Tinkturen, Suspensionen, Sirupe und Emulsionen verabreicht werden. Genauso können sie auch in intravenöser (Bolus oder Infusion), intraperitonealer, topischer (z.B. Augentropfen), subkutaner, intramuskulärer oder transdermaler (z.B. Pflaster) Form verabreicht werden, wobei alle Anwendungsformen den Durchschnittsfachleuten auf den pharmazeutischen Gebieten gut bekannt sind. Eine wirksame, jedoch nichttoxische Menge der erwünschten Verbindung kann als ein αvβ3-Antagonist eingesetzt werden.
Das Dosisregime, das die Verbindungen der vorliegenden Erfindung einsetzt, wird gemäß einer Vielzahl von Faktoren ausgewählt, einschließlich Typ, Spezies, Alter, Gewicht, Geschlecht und medizinischem Zustand des Patienten, der Schwere des zu behandelnden Zustandes, des Verabreichungsweges, der Nieren- und Leberfunktion des Patienten und der verwendeten speziellen Verbindung oder des verwendeten speziellen Salzes davon. Ein Arzt, Tierarzt oder Kliniker mit durchschnittlichen fachlichen Fähigkeiten kann leicht die wirksame Menge des Arzneistoffes, die benötigt wird, um das Fortschreiten des Zustandes zu verhindern, zu bekämpfen oder aufzuhalten, ermitteln und verschreiben.
Orale Dosen der vorliegenden Erfindung werden, wenn sie für die angegebenen Wirkungen verwendet werden, zwischen etwa 0,01 mg pro kg Körpergewicht pro Tag (mg/kg/Tag) bis etwa 100 mg/kg/Tag, vorzugsweise 0,01 bis 10 mg/kg/Tag und besonders bevorzugt 0,1 bis 5,0 mg/kg/Tag liegen. Zur oralen Verabreichung werden die Zusammensetzungen vorzugsweise in der Form von Tabletten mit 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100 und 500 Milligramm des Wirkstoffs zur symptomatischen Einstellung der Dosis auf den zu behandelnden Patienten bereitgestellt. Ein Medikament enthält typischerweise etwa 0,01 mg bis etwa 500 mg des Wirkstoffs, vorzugsweise etwa 1 mg bis etwa 100 mg Wirkstoff. Intravenös werden die bevorzugtesten Dosen von etwa 0,1 bis etwa 10 mg/kg/Minute während einer Infusion mit konstanter Rate reichen. Vorteilhafterweise können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in einer einzelnen Tagesdosis verabreicht werden, oder die gesamte Tagesdosis kann in geteilten Dosen zwei-, drei- oder viermal am Tag verabreicht werden. Bevorzugte Verbindungen der vorliegenden Erfindung können ferner in intranasaler Form durch topische Verwendung geeigneter Intranasalvehikel oder auf transdermalen Wegen verabreicht werden, wobei jene Formen transdermaler Hautpflaster verwendet werden, die den Durchschnittsfachleuten gut bekannt sind. Zur Verabreichung in der Form eines transdermalen Abgabesystems wird die Dosisverabreichung während des Dosisregimes natürlich kontinuierlich anstatt intermittierend sein.
Bei den Verfahren der vorliegenden Erfindung können die hier im Detail beschriebenen Verbindungen den Wirkstoff bilden und wird typischerweise mit geeigneten pharmazeutischen Verdünnungsmitteln, Hilfsstoffen oder Trägern (hierin gemeinsam als "Träger"-Materialien bezeichnet) vermischt verabreicht, welche im Hinblick auf die vorgesehene Verabreichungsform, d.h. Oraltabletten, Kapseln, Elixiere, Sirupe und dergleichen, und in Übereinstimmung mit herkömmlichen pharmazeutischen Praktiken geeignet ausgewählt werden.
Zum Beispiel kann zur oralen Verabreichung in Form einer Tablette oder Kapsel die wirksame Arzneistoffkomponente mit einem oralen, nichttoxischen, pharmazeutisch annehmbaren inerten Träger, wie z.B. Lactose, Stärke, Saccharose, Glucose, Methylcellulose, Magnesiumstearat, Dicalciumphosphat, Calciumsulfat, Mannit, Sorbit und dergleichen, kombiniert werden; zur oralen Verabreichung in flüssiger Form können die oralen Arzneistoffkomponenten mit einem beliebigen oralen nichttoxischen pharmazeutisch annehmbaren inerten Träger, wie z.B. Ethanol, Glycerin, Wasser und dergleichen, kombiniert werden. Darüber hinaus können, falls erwünscht oder notwendig, auch geeignete Bindemittel, Gleitmittel, Sprengmittel und Farbmittel in die Mischung eingebracht werden. Geeignete Bindemittel sind u.a. Stärke, Gelatine, natürliche Zucker, wie z.B. Glukose oder beta-Lactose, Maissüßmittel, natürliche und synthetische Gummen, wie z.B. Akazien-, Tragantgummi oder Natriumalginat, Carboxymethylcellulose, Polyethylenglycol, Wachse und dergleichen. Gleitmittel, die in diesen Dosisformen verwendet werden, sind u.a. Natriumoleat, Natriumstearat, Magnesiumstearat, Natriumbenzoat, Natriumacetat, Natriumchlorid und dergleichen. Sprengmittel sind u.a., ohne Beschränkung, Stärke, Methylcellulose, Agar, Bentonit, Xanthangummi und dergleichen.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch in Form von Liposomabgabesystemen, wie z.B. kleinen einlamellaren Vesikeln, großen einlamellaren Vesikeln und multilamellaren Vesikeln, verabreicht werden. Liposome können aus einer Vielzahl von Phospholipiden, wie z.B. Cholesterin, Stearylamin oder Phosphatidylcholinen, gebildet werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch durch die Verwendung monoklonaler Antikörper als einzelne Träger, an die die Verbindungsmoleküle gekoppelt sind, zugeführt werden. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch mit löslichen Polymeren als auf ein Ziel ausrichtbare Arzneistoffträger gekoppelt sein. Solche Polymere können u.a. Polyvinylpyrrolidon, Pyrancopolymer, Polyhydroxypropylmethacrylamidphenol, Polyhydroxyethylaspartamidphenol oder mit Palmitoylresten substituiertes Polyethylenoxidpolylysin sein. Darüber hinaus können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung an eine Klasse biologisch abbaubarer Polymere gekoppelt sein, die geeignet sind, eine gesteuerte Arzneistoffabgabe zu erzielen, zum Beispiel Polymilchsäure, Polyglycolsäure, Copolymere aus Polymilch- und Polyglycolsäure, Poly-epsilon-caprolacton, Polyhydroxybuttersäure, Polyorthoester, Polyacetale, Polydihydropyrane, Polycyanoacrylate und vernetzte oder amphipatische Blockcopolymere von Hydrogelen.
In den nachstehenden Schemata und Beispielen haben die verschiedenen Reagenziensymbole und Abkürzungen die folgenden Bedeutungen:

AcOH:: Essigsäure
BH₃·DMS:: Boran·Dimethylsulfid
BOC(Boc):: t-Butyloxycarbonyl
BOP:: Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorphosphat
CBZ(Cbz):: Carbobenzyloxy oder Benzyloxycarbonyl
CDI:: Carbonyldiimidazol
CH₂Cl₂:: Methylenchlorid
CH₃CN:: Acetonitril
CHCl₃:: Chloroform
DEAD:: Diethylazodicarboxylat
DIAD:: Diisopropylazodicarboxylat
DIBAH: oder
DIBAL-H:: Diisobutylaluminiumhydrid
DIPEA:: Diisopropylethylamin
DMAP:: 4-Dimethylaminopyridin
DME:: 1,2-Dimethoxyethan
DMF:: N,N-Dimethylformamid
DMSO:: Dimethylsulfoxid
DPFN:: 3,5-Dimethyl-1-pyrazolylformamidinnitrat
EDC:: 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid·HCl
EtOAc:: Ethylacetat
EtOH:: Ethanol
HOAc:: Essigsäure
HORT:: 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol
HOBT:: 1-Hydroxybenzotriazol
HPLC:: Hochleistungs-Flüssigchromatographie
IBCF:: Isobutylchlorformiat
LDA:: Lithiumdiisopropylamid
MeOH:: Methanol
MMNG:: 1,1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidin
NEt₃:: Triethylamin
NMM:: N-Methylmorpholin
PCA·HCl:: Pyrazolcarboxamidin-Hydrochlorid
Pd/C:: Palladium-auf-Aktivkohle-Katalysator
Ph:: Phenyl
pTSA:: p-Toluolsulfonsäure
TEA:: Triethylamin
TFA:: Trifluoressigsäure
THF:: Tetrahydrofuran
DC:: Dünnschichtchromatographie
TMEDA:: N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin
TMS:: Trimethylsilyl

Die neuen Verbindungen der vorliegenden Erfindung können gemäß den Verfahren der folgenden Reaktionsschemata und Beispiele oder Modifizierungen davon hergestellt werden, wobei leicht erhältliche Ausgangsmaterialien, Reagenzien und, wo passend, herkömmliche Syntheseverfahren verwendet werden. Bei diesen Verfahren ist es auch möglich, von Varianten Gebrauch zu machen, die ihrerseits den Durchschnittsfachleuten auf dem Gebiet der organischen Synthese bekannt sind, die jedoch nicht detaillierter genannt sind. Zum Beispiel ergibt der Austausch von 5-Formyl-2-methylpyrimidin (1-6a) in Schema 1 gegen das passend substituierte Aryl-CHO die entsprechende Verbindung, bei der die Arylgruppe R⁷ anders als 2-Methylpyrimidin-5-yl ist. Die Auftrennung der racemischen Mischung aus (R)- und (S)-Ketodiestern 1-8 kann durch HPLC-Chromatographie auf einem chiralen festen Träger, wie z.B. auf Chiralcel-AD- oder Chiralcel-OD-Säulen, erfolgen. Auf diese Weise werden die einzelnen (R)- und (S)-Enantiomere, wie z.B. 1-8a und 1-8b, im Wesentlichen frei von dem anderen Enantiomer isoliert. Die fertigen aufgetrennten 3(R)- und 3(S)-Produkte, wie z.B. 1-11a und 1-11b werden in einer dreistufigen Abfolge aus Hydrolyse, Decarboxylierung und Hydrolyse aus den Ketodiester-Vorläufern hergeleitet.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen weitere bevorzugte Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Sie sollen jedoch nicht als die einzige Gattung bildend, die als die Erfindung betrachtet wird, aufgefasst werden. Die Beispiele veranschaulichen nähere Details zur Herstellung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Die Fachleute werden sofort erkennen, dass bekannte Variationen der Bedingungen und Verfahren der folgenden präparativen Schritte verwendet werden können, um diese Verbindungen herzustellen. Sofern nichts anderes angegeben ist, wurden alle Schritte bei Raum- oder Umgebungstemperatur durchgeführt, und alle Temperaturangaben sind in Grad Celsius.
SCHEMA 1
SCHEMA 1 (Forts.)
BEISPIEL 1 (Referenz)
3(S oder R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)nonansäure (1-11a)
Schritt A: 6-Oxoheptansäuremethylester (1-2)
Zu einer kräftig gerührten Mischung aus Diethylether (175 ml) und 40%igem KOH (52 ml) bei 0°C wurde MNNG (15,4 g, 105 mmol) zugegeben. Die Mischung wurde 10 Minuten gerührt. Die etherische Schicht wurde in eine Lösung von 6-Oxoheptansäure 1-1 (5,0 g, 34,68 mmol) und CH₂Cl₂ bei 0°C überführt. Die Lösung wurde 30 Minuten mit Argon gespült und anschließend eingeengt. Die Flashchromatographie (Silica, 30% bis 50% EtOAc/Hexane) ergab den Ester 1-2 als ein klares Öl.
DC R_f = 0,88 (Silica, EtOAc)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃). 3,67 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,62 (m, 4H).
Schritt B: 5-[1‚8]-Naphthyridin-2-ylpentansäuremethylester (1-4)
Eine Mischung aus 1-2 (1,4 g, 9,04 mmol), 1-3, 2-Amino-3-formylpyridin (552 mg, 4,52 mmol) (für die Herstellung siehe: J. Org. Chem., 1983, 48, 3401) und Prolin (260 mg, 2,26 mmol) in absolutem Ethanol (23 ml) wurde 18 Stunden zum Rückfluss erhitzt. Nach der Entfernung des Lösungsmittels durch Abdampfen wurde der Rückstand chromatographiert (Kieselgel, 80% Ethylacetat/Hexan, dann Ethylacetat), um den Ester 1-4 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,38 (Silica, EtOAc)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃). 9,08 (m, 1H), 8,16 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,08 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (m, 2H).
Schritt C: 5-(5,6,7,8-Tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)pentansäuremethylester (1-5)
Eine Mischung aus 1-4 (630 mg, 2,58 mmol) und 10% Pd/Kohle (95 mg) in EtOH (25 ml) wurde unter einem Wasserstoffballon 72 Stunden gerührt. Nach der Filtration und dem Entfernen des Lösungsmittels durch Abdampfen wurde der Rückstand chromatographiert (Kieselgel, 70% Ethylacetat/Hexane), um 1-5 als ein farbloses Öl zu ergeben.
DC R_f = 0,58 (Silica, Ethylacetat).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃). 7,05 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 2,69 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,53 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,66 (m, 4H).
Schritt D: 2-Oxo-6-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)hexylphosphonsäuredimethylester (1-6)
Eine Lösung von Dimethylmethylphosphonat (13,20 g, 106,5 mmol) in wasserfreiem THF (165 ml) wurde auf –78°C abgekühlt und tropfenweise mit 2,5 M n-BuLi (42,3 ml) behandelt. Nach 45 minütigem Rühren bei –78°C wurde eine Lösung von Ester 1-5 (6,6 g, 26,6 mmol) in THF (35 ml) tropfenweise zugegeben und die resultierende Lösung 30 Minuten bei –78°C gerührt, mit gesätt. NH₄Cl (100 ml) gequencht, dann mit Ethylacetat (3 × 150 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Extrakte wurden getrocknet (MgSO₄), filtriert und eingeengt, um ein gelbes Öl zu ergeben. Die Chromatographie auf Kieselgel (5% MeOH/CH₂Cl₂) ergab 1-6 als ein gelbes Öl.
R_f (Silica, 5% MeOH/CH₂Cl₂) = 0,20.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃). 7,05 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 4,80 (br. s, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,4 (m, 2H), 3,08 (d, J = 22,7 Hz), 2,7-2,5 (m, 6H), 1,91 (m, 2H), 1,68 (m, 4H).
Schritt E: 1-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-7-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)hept-1-en-3-on (1-7)
Zu einer Lösung von 1-6 (5,5 g, 16,2 mmol), 5-Formyl-2-methylpyrimidin (1-6a, 1,8 g, 14,7 mmol; für die Herstellung siehe J. Heterocyclic Chem., 28, 1281 (1991)) in 40 ml DMF wurde K₂CO₃ (4,07 g, 32 mmol) zugegeben. Die Mischung wurde 15 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt und zu einer Paste eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser verdünnt, mit Ethylacetat extrahiert und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen wurde der Rückstand auf Kieselgel (70 Chloroform/25 Ethylacetat/5 Methanol) chromatographiert, um 1-7 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
R_f = 0,20 (Silica, 70 Chloroform/20 Ethylacetat/10 Methanol).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8,80 (s, 2H), 7,44 (d, 1H, J = 16 Hz), 7,05 (d, 114, J = 7 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 16 Hz), 6,35 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,72 (br. s, 1H), 3,39 (m, 214), 2,69 (s, 314), 2,64 (m, 4H), 2,58 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,74 (m, 4H).
Schritt F: 2-[1(S oder R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-3-oxo-7-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)heptyl]malonsäurediethylester (1-8a)
Zu einer Lösung von 1-7 (1,0 g, 2,97 mmol) und Diethylmalonat (0,717 ml, 4,5 mmol) in Ethanol (20 ml) und THF (20 ml) wurde Natriumethoxid (0,1 ml einer 30%igen (Gew./Gew.) Lösung in Ethanol) zugegeben. Nach 4 Stunden wurde die Mischung (1-8) eingeengt und der Rückstand auf einer 5 × 50 cm Chiralcel AD-Säule (Fluss = 80 ml/Minute, A:B = 30:70) (A = 0,1% Diethylamin/Hexan, B = 2-Propanol) gereinigt. Das Produkt 1-8a eluierte bei 15 Minuten, sein Enantiomer 1-8b eluierte bei 26 Minuten.
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8,53 (s, 2H), 7,02 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,28 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,07 (br. s, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,02 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,72 (m, 2H), 3,39 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,26 (m, 414), 1,19 (t, 3H, J = 3 Hz).
Schritt G: 3(S oder R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)nonansäureethylester (1-10a)
Zu einer Lösung von 1-8a (0,530 g, 1,07 mmol) in Ethanol (5 ml) wurde NaOH (1,12 ml einer 1N Lösung in Wasser, 1,12 mmol) zugegeben. Nach 30-minütigem Rühren bei 40°C wurde die Mischung mit HCl (1,12 ml einer 1N Lösung in Wasser, 1,12 mmol) behandelt und eingeengt. Der Rückstand wurde in Toluol (20 ml) suspendiert und zum Rückfluss erhitzt. Nach 1 Stunde ergab das Eindampfen der Lösungsmittel 1-10a als ein gelbes Öl.
R_f = 0,32 (Silica, 70 Chloroform/20 Ethylacetat/10 Methanol).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8,54 (s, 2H), 7,04 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,31 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,86 (br. s, 1H), 4,04 (q, 2H, J = 3 Hz), 3,63 (m, 1H), 3,40 (m, 2H), 2,94-2,48 (m, 9H), 2,37 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 4H), 1,19 (t, 3H, J = 3 Hz).
Schritt H: 3(S oder R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)nonansäure (1-11a)
Zu einer Lösung von 1-10a (0,15 g, 0,353 mmol) in Ethanol (1 ml) wurde NaOH (0,39 ml einer 1N Lösung in Wasser, 0,39 mmol) zugegeben. Nach 30 Minuten wurde die Mischung eingeengt und der Rückstand auf Kieselgel (20:10:1:1 bis 10:10:1:1 Ethylacetat/Ethanol/NH₄OH/Wasser) chromatographiert, um 1-11a als einen weißen Feststoff zu ergeben.
R_f = 0,21 (Silica, 10:10:1:1 Ethylacetat/Ethanol/NH₄OH/Wasser).
¹H-NMR (400 MHz, CH₃OD) δ 8,62 (s, 2H), 7,43 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,68 (m, 1H), 3,43 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,80 (m, 3H), 2,59 (m, 10H), 1,91 (m, 2H), 1,60 (m, 3H).
SCHEMA 11
BEISPIEL 16
3(R)- und 3(S)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure (11-11a und 11-11b)
Schritt A: 5-(5-Brompyridin-2-yl)pentansäureethylester (11-2)
Zu einer gerührten Lösung von Ethyl-1-pentensäure (10 g, 78 mmol) in entgastem THF (80 ml) bei 0°C wurde tropfenweise eine Lösung von 9-BBN (187 ml einer 0,5 M Lösung in THF, 94 mmol) zugegeben und die Mischung 18 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt, um 11-1 zu erzeugen. K₂CO₃ (18,4 g, 133 mmol) und 2,5-Dibrompyridin (18,5 g, 78 mmol) wurden zugegeben, gefolgt von einer vorvermischten und gealterten (30 Minuten bei 70°C) Suspension von Pd(OAc)₂ (2,0 g, 8,9 mmol) und DPPF (5,4 g, 9,8 mmol) in entgastem DMF (80 ml). Die resultierende Mischung wurde 18 Stunden bei 70°C gerührt, abgekühlt, mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingeengt. Zu dem resultierenden Rückstand, der in THF (400 ml) gelöst wurde, wurden Wasser (150 ml) und NaHCO₃ (33 g) zugegeben, und nach 10 Minuten NaBO₃·H₂O (48 g). Nach 30-minütigem kräftigem Rühren wurde die Mischung mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel chromatographiert (10–20% EtOAc/Hexan), um 11-2 als ein farbloses Öl zu ergeben.
DC R_f = 0,75 (Silica, 40% EtOAc/Hexan).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8,57 (s, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,05 (d, 1H, J = 8 Hz), 4,15 (q, 2H, J = 6 Hz), 2,77 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,34 (t, 2H, J = 7 Hz), 1,7 (m, 4H), 1,26 (t, 3H, J = 6 Hz).
Schritt B: 2-But-3-enylisoindol-1,3-dion (11-5)
Zu einer gerührten Lösung von 4-Brom-1-buten (11-3, 20 g, 148 mmol) in DMF (150 ml) wurde Kaliumphthalimid (11-4, 25 g, 133 mmol) zugegeben und die Mischung 18 Stunden bei 70°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf RT wurde die Mischung mit Ether verdünnt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingeengt, um 11-5 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7,85 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,08 (m, 2H), 3,77 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,44 (m, 2H).
Schritt C: 5-{5-[4-(1,3-Dioxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)butyl]pyridin-2-yl}pentansäureethylester (11-6)
Zu einer gerührten Lösung von 11-5 (4,23 g, 21 mmol) in entgastem THF (20 ml) bei 0°C wurde tropfenweise eine Lösung von 9-BBN (50,4 ml einer 0,5 M Lösung in THF, 25,2 mmol) zugegeben und die Mischung 18 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. K₂CO₃ (5,0 g, 35,8 mmol) und 11-2 (5,0 g, 17,4 mmol) wurden zugegeben, gefolgt von einer vorvermischten und gealterten (30 Minuten bei 70°C) Suspension von Pd(OAc)₂ (0,54 g, 2,4 mmol) und DPPF (1,45 g, 2,6 mmol) in entgastem DMF (20 ml). Die resultierende Mischung wurde 18 Stunden bei 70°C gerührt, abgekühlt, mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingeengt. Zu dem in THF (200 ml) gelösten gerührten Feststoff wurden Wasser (75 ml) und NaHCO₃ (16,5 g) und nach 10 Minuten NaBO₃·H₂O (24 g) zugegeben. Nach 30-minütigem kräftigem Rühren wurde die Mischung mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel (20–40% EtOAc/Hexan) chromatographiert, um 11-6 als einen gelben Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,31 (Silica, 50% EtOAc/Hexan).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8,37 (s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 4,12 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,71 (m, 2H), 2,78 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,61 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,33 (t, 2H, J = 7 Hz), 1,64 (m, 8H), 1,23 (t, 3H, J = 6 Hz).
Schritt D: 5-[5-(4-Aminobutyl)pyridin-2-yl]pentansäuremethylamid (11-7)
Eine Mischung aus 11-6 (45 g, 110 mmol) und einer gesättigten Lösung von Methylamin in Methanol (300 ml) in einem verschlossenen Rohr wurde 12 Stunden auf 70°C erwärmt. Die Mischung wurde abgekühlt und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel (10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O) chromatographiert, um 11-7 als ein gelbes Öl zu ergeben.
DC R_f = 0,16 (Silica, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8,32 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 2,74 (m, 7H), 2,59 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,21 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,69 (m, 6H), 1,48 (m, 2H).
Schritt E: 5-(6,7,8,9-Tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)pentansäuremethylamid (11-8)
Eine Mischung aus 11-7 (24 g, 91,2 mmol) und NaH (10,9 g einer 60 gew.-%igen Dispersion in Mineralöl, 273 mmol) in Xylol (500 ml) wurde 30 Minuten mit Argon gespült und anschließend 72 Stunden zum Rückfluss erhitzt. Die Mischung wurde abgekühlt, mit Ethanol gequencht, mit 10%igem wässrigem Kaliumcarbonat verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Bestandteile wurden über MgSO₄ getrocknet und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel (70:25:5 CHCl₃/EtOAc/MeOH/H₂O) chromatographiert, um 11-8 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,15 (Silica, 70:25:5 CHCl₃/EtOAc/MeOH).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7,24 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,53 (d, 1H, J = 7 Hz), 5,43 (br. s, 1H), 4,62 (br. s, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,79 (d, 3H, J = 5 Hz), 2,63 (m, 4H), 2,18 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,68 (m, 6Hz).
Schritt F: 5-(6,7,8,9-Tetrahydro-5H-pyrido[2,3-blazepin-2-yl)pentansäureethylester (11-9)
Eine Mischung aus 11-8 (3 g, 11,5 mmol) und 6M HCl (100 ml) in einem geschlossenen Rohr wurde 12 Stunden auf 70°C erwärmt. Die Mischung wurde abgekühlt und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde aus Ethanol (50 ml) zweimal azeotrop destilliert, dann in 4M HCl in Ethanol (100 ml) gelöst und 1 Stunde auf 70°C erwärmt. Die Mischung wurde abgekühlt und zu einem Öl eingeengt. Der Rückstand wurde mit Ethylacetat verdünnt, mit 10%igem wässrigem Kaliumcarbonat und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingeengt, um 11-9 als ein braunes Öl zu ergeben.
DC R_f = 0,44 (Silica, 70:25:5 CHCl₃/EtOAc/MeOH).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7,22 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,53 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,63 (br. s, 1H), 4,11 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,12 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,62 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,33 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,70 (m, 2H), 1,63 (m, 6H), 1,27 (t, 3H, J = 7 Hz).
Schritt G: 3(R)- und 3(S)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure (11-11a und 11-11b)
Durch Anwendung der Verfahren zur Umwandlung von 1-5 in 1-11a und 11-b wurde 11-9 über 11-10 in 11-11a und 11-11b umgewandelt. Die Auftrennung der Enantiomere erfolgte durch chirale Chromatographie des Ketodiester-Zwischenprodukts, das 1-8 entspricht, auf einer Chiralcel-AD-Säule (10 cm × 50 cm) unter Verwendung von 70% A/30% B (A = 2-Propanol; B = 0,1% Diethylamin in Hexanen) bei einer Fließgeschwindigkeit von 250 ml/Minute.
DC R_f = 0,21 (Silica, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8,63 (s, 2H), 7,42 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,55 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,64 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,77 (m, 2H), 2,58 (m, 9H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H).
Schema 12
BEISPIEL 17
3(R)- und 3(S)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure (12-2a und 12-2b)
Durch Anwendung der Verfahren zur Umwandlung von 1-5 in 1-11a und 1-11b, wurden 11-9 und 2-Methoxypyrimidin-5-carbaldehyd (12-1, für die Herstellung siehe J. Heterocycl. Chem. (1991), 28, 1281) in 12-2a und 12-2b umgewandelt. Die Auftrennung der Enantiomere erfolgte durch chirale Chromatographie des Ketodiester-Zwischenprodukts, das 1-8 entspricht, auf einer Chiralcel-AD-Säule (10 cm × 50 cm) unter Verwendung von 70% A/30% B (A = 2-Propanol; B = 0,1% Diethylamin in Hexane) bei einer Fließgeschwindigkeit von 250 ml/Minute.
DC R_f = 0,21 (Silica, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH(H₂O).
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8,48 (s, 2H), 7,42 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,56 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,94 (s, 3H), 3,62 (m, 1H), 3,29 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,79 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H).
Schema 17
BEISPIEL 23
3(R)- und 3(S)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure (17-2a und 17-2b)
Durch Anwendung der Verfahren zur Umwandlung von 1-6 in 1-11a und 1-11b wurden 11-10 und 2-Ethoxypyrimidin-5-carbaldehyd in 17-2a und 17-2b umgewandelt. Die Auftrennung der Enantiomere erfolgte durch chirale Chromatographie des Ketodiester-Zwischenprodukts, das 1-8 entspricht.
DC R_f = 0,24 (Silica, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O). ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,48 (s, 2H), 7,43 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,55 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,38 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,63 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,79 (m, 3H), 2,55 (m, 6H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H), 1,38 (t, 3H, J = 7 Hz).
SCHEMA A Synthese des Radioligands für den SPAV3-Test
SCHEMA A. Forts.
SCHEMA A, Forts.
N-(4-Iodphenylsulfonylamino)-L-asparagin (A-2)
Zu einer gerührten Lösung von Säure A-1 (4,39 g, 33,2 mmol), NaOH (1,49 g, 37,2 mmol), Dioxan (30 ml) und H₂O (30 ml) bei 0°C wurde Pipsylchlorid (10,34 g, 34,2 mmol) zugegeben. Nach ~ 5 Minuten wurde in 15 ml H₂O gelöstes NaOH (1,49, 37,2 mmol) zugegeben, gefolgt von der Entfernung des Kühlbades. Nach 2,0 Stunden wurde die Reaktionsmischung eingeengt. Der Rückstand wurde in H₂O (300 ml) gelöst und anschließend mit EtOAc gewaschen. Der wässrige Teil wurde auf 0°C abgekühlt und dann mit konzentrierter HCl angesäuert. Der Feststoff wurde gesammelt und anschließend mit Et₂O gewaschen, um die Säure A-2 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,86 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8 Hz), 3,70 (m, 1H), 2,39 (m, 2H).
2(S)-(4-Iodphenylsulfonylamino)-β-alanin (A-3)
Zu einer gerührten Lösung von NaOH (7,14 g, 181,8 mmol) und H₂O (40 ml) bei 0°C wurde Br₂ (1,30 ml, 24,9 mmol) tropfenweise innerhalb eines Zeitraums von zehn Minuten zugegeben. Nach ~ 5 Minuten wurden Säure A-2 (9,9 g, 24,9 mmol), NaOH (2,00 g, 49,8 mmol) und H₂O (35 ml) vereint, auf 0°C abgekühlt und anschließend in einer einzigen Portion zu der Reaktion zugegeben. Nach 20-minütigem Rühren bei 0°C wurde die Reaktion 30 Minuten lang auf 90°C erwärmt und dann wieder auf 0°C abgekült. Der pH-Wert wurde durch tropfenweise Zugabe von konzentrierter HCl auf ~ 7 eingestellt. Der Feststoff wurde gesammelt, mit EtOAc gewaschen und dann im Vakuum getrocknet, um die Säure A-3 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (300 MHz, D₂O). 8,02 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,36 (m, 1H), 3,51 (dd, 1H, J = 5 Hz, 13 Hz), 3,21 (m, 1H).
Ethyl-2(S)-(4-iodphenylsulfonylamino)-β-alanin-Hydrochlorid (A-4)
HCl-Gas wurde 10 Minuten lang schnell durch eine Suspension aus Säure A-3 (4,0 g, 10,81 mmol) in EtOH (50 ml) bei 0°C geleitet. Das Kühlbad wurde entfernt und die Reaktion auf 60°C erwärmt. Nach 18 Stunden wurde die Reaktion eingeengt, um Ester A-4 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD). 7,98 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,25 (q, 1H, J = 5 Hz), 3,92 (m, 2H), 3,33 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 1,01 (t, 3H, J = 7 Hz).
Ethyl-4-[2-(2-aminopyridin-6-yl)ethyl]benzoat (A-5a)
Eine Mischung aus Ester A-5 (700 mg, 2,63 mmol)(für die Herstellung siehe: Schema 29 der PCT International Application Publication Nr. WO 95/32710 , veröffentlicht am 7. Dezember 1995), 10% Pd/C (350 mg) und EtOH wurde unter 1 atm H₂ gerührt. Nach 20 Stunden wurde die Reaktion durch ein Celitekissen filtriert und anschließend eingeengt, um Ester A-5a als ein braunes Öl zu ergeben.
DC R_f = 0,23 (Silica, 40% EtOAc/Hexane)
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,95 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,26 (m, 3H), 6,43 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,35 (d, 1H, J = 8 Hz), 4,37 (m, 4H), 3,05 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 1,39 (t, 3H, J = 7 Hz).
4-[2-(2-Aminopyridin-6-yl)ethyl]benzoesäure-Hydrochlorid (A-6)
Eine Suspension von Ester A-5a (625 mg, 2,31 mmol) in 6N HCl (12 ml) wurde auf 60°C erwärmt. Nach -20 Stunden wurde die Reaktion eingeengt, um Säure A-6 als einen gelbbraunen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,96 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,80 (m, 1H), 7,33 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,84 (d, 1H, J = 9 Hz), 6,69 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,09 (m, 4H).
Ethyl-4-[2-(2-aminopyridin-6-yl)ethyl]benzoyl-2 (S)-(4-iodphenylsulfonylamino)-β-alanin (A-7)
Eine Lösung von Säure 15-6 (400 mg, 1,43 mmol), Amin A-4 (686 mg, 1,57 mmol), EDC (358 mg, 1,86 mmol), HOBT (252 mg, 1,86 mmol), NMM (632 μl, 5,72 mmol) in DMF (10 ml) wurde ~ 20 Stunden gerührt. Die Reaktion wurde mit EtOAc verdünnt und anschließend mit gesätt. NaHCO₃, Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingeengt. Die Flashchromatographie (Silica, EtOAc, dann 5% Isopropanol/EtOAc) ergab das Amid A-7 als einen weißen Feststoff.
DC R_f = 0,4 (Silica, 10% Isopropanol/EtOAc).
¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,79 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,52 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,20 (m, 1H), 3,95 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,66 (dd, 1H, J = 6 Hz, 14 Hz), 3,49 (dd, 1H, J = 8 Hz, 13 Hz), 3,01 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 1,08 (t, 3H, 3 = 7 Hz).
4-[2-(2-Aminopyridin-6-yl)ethyl]benzoyl-2(S)-(4-iodphenylsulfonylamino)-β-alanin (A-8)
Eine Lösung von Ester A-7 (200 mg, 0,3213 mmol) und 6N HCl (30 ml) wurde auf 60°C erwärmt. Nach ~ 20 Stunden wurde die Reaktionsmischung eingeengt. Die Flashchromatographie (Silica, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O) ergab Säure A-8 als einen weißen Feststoff.
DC R_f = 0,45 (Silica, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O).
¹H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,40 (m, 1H), 8,14 (br. s, 1H), 7,81 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,62 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (m, 3H), 6,34 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,25 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,85 (br. s, 2H), 3,89 (br. s, 1H), 3,35 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,79 (m, 2H).
4-[2-(2-Aminopyridin-6-yl)ethylbenzoyl-2(S)-(4-trimethylstannylphenylsulfonylamino-β-alanin (A-9)
Eine Lösung von Iodid A-8 (70 mg, 0,1178 mmol), [(CH₃)₃Sn]₂ (49 μl, 0,2356 mmol), Pd(PPh₃)₄ (5 mg) und Dioxan (7 ml) wurde auf 90°C erwärmt. Nach 2 Stunden wurde die Reaktion eingeengt und anschließend durch präparative HPLC (Delta-Pak C₁₈ 15 μM 100A°, 40 × 100 mm; 95:5, dann 5:95 H₂O/CH₃CN) gereinigt, um das Trifluoracetatsalz zu ergeben. Das Salz wurde in H₂O (10 ml) suspendiert, mit NH₄OH (5 Tropfen) behandelt und anschließend gefriergetrocknet, um das Amid A-9 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
¹H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,40 (m, 1H), 8,18 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,67 (m, 5H), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,29 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,95-7,52 (m, 2H), 6,45 (br. s, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,97 (m, 2H), 2,86 (m, 2H).
4-[2-(2-Aminopyridin-6-yl)ethyl]benzoyl-2(S)-4-¹²⁵iodphenylsulfonylamino-β-alanin (A-10)
Ein Iodobead (Pierce) wurde zu einer im Handel verwendeten Ampulle mit 5 mCi Na¹²⁵I (Amersham, IMS30) zugegeben und fünf Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Eine Lösung von 0,1 mg A-9 in 0,05 ml 10% H₂SO₄/MeOH wurde hergestellt und sofort zu der Na¹²⁵I/Iodobead-Ampulle gegeben. Nach dreiminütigem Rühren bei Raumtemperatur wurden etwa 0,04-0,05 ml NH₄OH zugegeben, so dass die Reaktionsmischung einen pH-Wert von 6–7 hatte. Die gesamte Reaktionsmischung wurde zur Reinigung auf die HPLC-Vorrichtung [Vydac-Peptid-Protein-C-18-Säule, 4,6 × 250 mm, linearer Gradient von 10% Acetonitril (0,1% (TFA):H₂O (0,1% TFA) bis 90% Acetonitril (0,1% TFA):H₂O (0,1% TFA) innerhalb von 30 Minuten, 1 ml/min] gespritzt. Die Retentionszeit von A-10 beträgt unter diesen Bedingungen 17 Minuten. Die Fraktionen, die den Großteil der Radioaktivität enthielten, wurden gesammelt, gefriergetrocknet und mit Ethanol verdünnt, um etwa 1 mCi A-10 zu ergeben, welches bei der HPLC-Analyse mit einer authentischen Probe von A-8 gemeinsam eluierte.
SCHEMA B Synthese des Radioliganden für den SPAV5-Test
2(S)-(4-Iodbenzolsulfonylamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)ethyl]-benzoylamino}propionsäureethylester (B-2)
Eine Mischung aus B-1 (0,23 g, 0,72 mmol; zur Herstellung siehe US-Patent Nr. 5741796 ), A-4 (0,343 g, 0,792 mmol), EDC (0,179 g, 0,93 mmol), HOBT (0,126 g, 0,93 mmol), NMM (0,316 ml, 2,86 mmol) in Acetonitril (3 ml) und DMF (3 ml) wurde 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt, dann mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser, gesättigtem wässrigem NaHCO₃ und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel (70:25:5 CHCl₃/EtOAc/MeOH) chromatographiert, um B-2 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,22 (Silica, 70:25:5 CHCl₃/EtOAc/MeOH).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7,79 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,04 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,60 (m, 1H), 6,29 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,83 (br. s, 1H), 4,09 (m, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 3,01 (m, 4H), 2,86 (m, 4H), 2,69 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,88 (m, 2H).
2(S)-(4-Iodbenzolsulfonylamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)ethyl]-benzoylamino}propionsäure (B-3)
Eine Mischung aus B-2 (0,38 g, 0,573 mmol) und 6N HCl (50 ml) wurde 14 Stunden bei 60°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung eingeengt und der Rückstand auf Kieselgel chromatographiert (25:10:1:1 bis 15:15:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O), um B-3 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,43 (Silica, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O).
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,42 (m, 1H), 7,79 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,58 (br. s, 1H), 6,32 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,96 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,30 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H).
HRMS: Für C₂₆H₂₇IN₄O₅S, erwartet 635,0818, gefunden 635,0831.
3-{4-[2-(5,6,7,8-Tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)ethyl]benzoylamino}-2(S)-(4-trimethylstannanylbenzolsulfonylamino)propionsäure (B-4)
Eine Mischung aus B-3 (0,10 g, 0,16 mmol), Hexamethyldistannan (0,065 ml, 0,32 mmol), Pd(PPh₃)₄ und Dioxan (10 ml) wurde eine Stunde bei 90°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung eingeengt und der Rückstand auf Kieselgel chromatographiert (50:10:1:1 bis 25:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH₄OH/H₂O), um B-4 als einen weißen Feststoff zu ergeben.
DC R_f = 0,48 (Silica, 15:10:1:1 EtOAc(EtOH/NH₄OH/H₂O).
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,38 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 7,63 (m, 4H), 7,28 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,50 (br. s, 1H), 6,28 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,96 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,31 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 0,28 (s, 9H).
Hochauflösendes Massenspektrum: Für C₂₉H₃₆N₄O₅SSn, erwartet 665,1533 (¹¹²Sn) und 673,1507 (¹²⁰Sn), gefunden 665,1510 und 673,1505.
2(S)-(4-¹²⁵Iodbenzolsulfonylamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-[1,8]naphthyridin-2-yl)ethyl]-benzoylamino}propionsäure (B-5)
Ein Rührstab, Methanol (0,05 ml) und ein Iodobead (Pierce) wurden zu einer im Handel verwendeten Ampulle mit Na¹²⁵I (10 mCi, Amersham, IMS300) zugegeben und fünf Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Eine Lösung von B-4 (~ 0,1 mg) in Methanol (0,04 ml) wurde hergestellt, und ein Teil davon (0,02 ml) wurde zu einer Mischung aus H₂SO₄ (0,005 ml) in Methanol (0,025 ml) gegeben und diese Lösung sofort zu der Na¹²⁵I/Iodobead-Ampulle zugegeben. Nach zweiminütigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktion mit NH₄OH (0,04–0,05 ml) gequencht und die gesamte Reaktionsmischung zur Reinigung auf die HPLC-Vorrichtung [Vydac-Peptid-Protein-C-18-Säule, 4,6 × 250 mm, linearer Gradient von 10% Acetonitril:H₂O (0,1% TFA) bis 90% Acetonitril:H₂O (0,1% TFA) innerhalb von 20 Minuten, 1 ml/min] gespritzt. Die Retentionszeit von B-5 beträgt unter diesen Bedingungen 16 Minuten. Die Fraktionen, die den Großteil der Radioaktivität enthielten, wurden gesammelt, gefriergetrocknet und mit Ethanol verdünnt, um etwa 1 mCi zu ergeben, welches bei der HPLC-Analyse mit einer authentischen Probe von B-3 gemeinsam eluierte.
Geräte: Die analytische und präparative HPLC wurde mit einem Waters 600E Powerline Multi Solvent Delivery System mit 0,1-ml-Köpfen mit einem Rheodyne-7125-Injektor und einem Waters 990 Photodiode Array Detector mit einem Gilson-FC203-Microfraction-Sammler durchgeführt. Für die analytische und präparative HPLC wurde eine Vydac-Peptid-Protein-C-18-Säule, 4,6 × 250 mm, mit einer C-18-Brownlee-Modular-Guard-Säule verwendet. Das für die HPLC-Analysen verwendete Acetonitril hatte Fisher-Optima-Qualität. Der verwendete HPLC-Radiodetektor war ein Beckmann-170-Radioisotope-Detektor. Eine Vydac-C-18-Protein-und-Peptid-Säule, 3,9 × 250 mm, wurde für die analytische und präparative HPLC verwendet. Radioaktivitätslösungen wurden unter Verwendung einer Speedvac-Vakuumzentrifuge konzentriert. Die Eichkurven und die chemischen Konzentrationen wurden mit einem Hewlett Packard Model 8452A UV/Vis Diode Array Spectrophotometer ermittelt. Die Radioaktivitäten der Proben wurden in einem Packard-A5530-Gammazähler ermittelt.
Die zur Messung der αvβ3- und αvβ5-Bindung und der Knochenresorptionsinhibierungswirkung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung verwendeten Testverfahren sind nachstehend beschrieben.
KNOCHENRESORPTIONSGRUBENTEST
Wenn Osteoklasten Knochenresorption betreiben, können sie die Bildung von Gruben in der Knochenoberfläche, auf die sie einwirken, bewirken. Daher ist es nützlich, beim Test der Verbindungen auf ihre Fähigkeit zur Osteoklasteninhibierung die Fähigkeit von Osteoklasten, diese Resorptionsgruben auszuheben, wenn die inhibierende Verbindung vorhanden ist, zu messen.
Fortlaufende 200 Mikron dicke Querschnitte aus einem 6-mm-Zylinder boviner Femur-Diaphyse werden mit einer langsam laufenden Diamantsäge (Isomet, Beuler, Ltd., Lake Bluff, Il) geschnitten. Die Knochenschnitte werden gesammelt, in eine 10%ige Ethanollösung gegeben und bis zur Weiterverwendung im Kühlschrank aufbewahrt.
Vor dem Experiment werden die Knochenschnitte zweimal jeweils 20 Minuten in H₂O mit Ultraschall behandelt. Die gereinigten Schnitte werden in Platten mit 96 Vertiefungen gegeben, so dass zwei Kontrollbahnen und eine Bahn für jede Arzneistoffdosis zur Verfügung stehen. Jede Bahn stellt entweder dreifache oder vierfache Kulturen dar. Die Knochenschnitte in den Platten mit den 96 Vertiefungen werden durch UV-Bestrahlung sterilisiert. Vor der Inkubation mit Osteoklasten werden die Knochenschnitte durch die Zugabe von 0,1 ml αMEM, pH 6,9, das 5% fötales Rinderserum und 1% Penicillin/Streptomycin enthält, hydratisiert.
Langknochen von 7 bis 14 Tage alten Kaninchen (New Zealand White Hare) werden seziert, von Weichgewebe befreit und in αMEM, das 20 mM HEPES enthält, gelegt. Die Knochen werden mit Scheren zerkleinert, bis die Stücke < 1 mm groß sind, und in ein 50-ml-Röhrchen in ein Volumen von 25 ml überführt. Das Röhrchen wird 60 Mal leicht mit der Hand geschüttelt, das Gewebe lässt man 1 Minute absitzen, und der Überstand wird entfernt. Weitere 25 ml Medium werden zu dem Gewebe zugegeben, und man schüttelt erneut. Der zweite Überstand wird mit dem ersten Überstand vereint. Die Anzahl der Zellen wird gezählt, wobei Erythrozyten ausgeschlossen werden (typischerweise ~ 2 × 10⁷ Zellen/ml). Eine Zellsuspension, bestehend aus 5 × 10⁶/ml in αMEM, das 5% fötales Rinderserum, 10 nM 1,25 (OH)₂D₃ und Penicillin-Streptomycin enthält, wird hergestellt. 200-ml-Aliquote werden zu den Rinderknochenschnitten (200 mm × 6 mm) gegeben und 2 Stunden bei 37°C in einer befeuchteten 5%-CO₂-Atmosphäre inkubiert. Das Medium wird mit einer Mikropipettiervorrichtung entfernt, und frisches Medium, das Testverbindungen enthält, wird zugegeben. Die Kulturen werden 48 Stunden inkubiert und auf c-Telopeptid (Fragmente der a1-Kette von Kollagen vom Typ I) mittels Crosslaps für Kulturmedium (Herlev, Dänemark) untersucht.
Rinderknochenschnitte werden 20–24 Stunden lang Osteoklasten ausgesetzt und zum Färben aufbereitet. Von jedem Knochenschnitt wird das Gewebekulturmedium entfernt. Jede Vertiefung wird mit 200 ml H₂O gewaschen, und die Knochenschnitte werden anschließend 20 Minuten in 2,5%igem Glutaraldehyd, 0,1 M Cacodylat, pH 7,4, fixiert. Nach der Fixierung werden sämtliche verbliebenen Zelltrümmer durch 2 minütige Ultraschallbehandlung in Gegenwart von 0,25 M NH₄OH, gefolgt von 2 × 15 minütiger Ultraschallbehandlung in H₂O, entfernt. Die Knochenschnitte werden sofort 6–8 Minuten mit filtriertem 1%igem Toluidin-Blau und 1%igem Borax gefärbt.
Nachdem die Knochenschnitte getrocknet sind, werden die Resorptionsgruben in den Test- und Kontrollschnitten gezählt. Die Resorptionsgruben werden in einem Microphot-Fx(Nikon)-Fluoreszenzmikroskop unter Verwendung eines polarisierenden Nikon-IGS-Filterkubus betrachtet. Die Testdosierungsergebnisse werden mit den Kontrollen verglichen und die resultierenden IC₅₀-Werte für jede getestete Verbindung ermittelt.
Die Eignung der Extrapolierung von Daten aus diesem Test für Erkrankungszustände von Säugern (einschließlich Menschen) wird von der bei Sato, M., et al., Journal of Bone and Mineral Research, Band 5, Nr. 1, S. 31–40, 1990, zu findenden Lehre gestützt, welche hierin in ihrer Gesamtheit durch Bezugnahme aufgenommen ist. Dieser Artikel lehrt, dass bestimmte Bisphosphonate klinisch verwendet wurden und bei der Behandlung von Paget-Krankheit, Hyperkalzämie durch Malignität, durch Knochenmetastasen erzeugten osteolytischen Läsionen und Knochenschwund aufgrund von Immobilisierung oder Sexualhormonmangel wirksam zu sein scheinen. Die gleichen Bisphosphonate werden dann in dem oben beschriebenen Resorptionsgrubentest getestet, um eine Korrelation zwischen ihrem bekannten Nutzen und einer positiven Leistung in dem Test zu bestätigen.
EIB-TEST
Duong et al., J. Bone Miner. Res., 8:S378 (1993), beschreiben ein System für die Expression des menschlichen Integrin αvβ3. Es wurde vermutet, dass das Integrin die Bindung von Osteoklasten an die Knochenmatrix stimuliert, da Antikörper gegen das Integrin oder RGD-haltige Moleküle, wie z.B. Echistatin ( Europäisches Patent 382451 ), die Knochenresorption wirksam blockieren können.
Reaktionsmischung:

1. 175 μl TBS-Puffer (50 mM Tris·HCl pH 7,2, 150 mM NaCl, 1% BSA, 1 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂).
2. 25 ml Zellextrakt (verdünnt mit 100 mM Octylglucosid-Puffer, um 2000 cpm/25 μl zu ergeben).
3. ¹²⁵I-Echistatin (25 μl/50000 cpm) (siehe EP 382451 ).
4. 25 μl Puffer (Gesamtbindung) oder unmarkiertes Echistatin (unspezifische Bindung).

Die Reaktionsmischung wurde anschießend 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Das ungebundene und das gebundene αvβ3 wurden durch Filtration mit einem Skatron-Zellernter getrennt. Die Filter (10 Minuten lang vorbenetzt in 1,5%igem Polyethylenimin) wurden anschließend mit dem Waschpuffer (50 mM Tris HCl, 1 mM CaCl₂/MgCl₂, pH 7,2) gewaschen. Das Filter wurde anschließend in einem Gammazähler gezählt.
SPAV3-TEST
MATERIALIEN:

1. Weizenkeim-Agglutinin-Szintillation-Proximity-Beads (SPA): Amersham
2. Octylglucopyranosid: Calbiochem
3. HEPES: Calbiochem
4. NaCl: Fisher
5. CaCl₂: Fisher
6. MgCl₂: SIGMA
7. Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF): SIGMA
8. Optiplate: PACKARD
9. Verbindung A-10 (spezifische Aktivität 500–1000 Ci/mmol)
10. Testverbindung
11. Gereinigter Integrin-Rezeptor: αvβ3 wurde aus 293-Zellen, die αvβ3 überexprimieren (Duong et al., J. Bone Min. Res., 8:S378, 1993) gemäß Pytela (Methods in Enzymology, 144:475, 1987) gereinigt.
12. Bindungspuffer: 50 mM HEPES, pH 7,8, 100 mM NaCl, 1 mM Ca²⁺/Mg²⁺, 0,5 mM PMSF
13. 50 mM Octylglucosid in Bindungspuffer: 50-OG-Puffer

VERFAHREN:

1. Vorbehandlung der SPA-Beads: 500 mg gefriergetrocknete SPA-Beads wurden zunächst viermal mit 200 ml 50-OG-Puffer und einmal mit 100 ml Bindungspuffer gewaschen und anschließend in 12,5 ml Bindungspuffer erneut suspendiert.
2. Herstellung der Mischung aus SPA-Beads und Rezeptor In jedes Teströhrchen wurden 2,5 μl (40 mg/ml) vorbehandelte Beads in 97,5 μl Bindungspuffer und 20 ml 50-OG-Puffer suspendiert. 5 ml (~ 30 ng/μl) gereinigter Rezeptor wurde zu den Beads in der Suspension zugegeben, wobei 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt wurde. Die Mischung wurde anschließend bei 2500 U/Minute in einer Beckman-GPR-Benchtop-Zentrifuge 10 Minuten bei 4°C zentrifugiert. Die Pellets wurden anschließend in 50 μl Bindungspuffer und 25 μl 50-OG-Puffer erneut suspendiert.
3. Reaktion Folgendes wurde der Reihe nach zu Optiplate in den entsprechenden Vertiefungen zugegeben: (i) Rezeptor/Beads-Mischung (75 μl) (ii) jeweils 25 μl der folgenden Stoffe: zu testende Verbindung, Bindungspuffer zur vollständigen Bindung oder A-8 zur nichtspezifischen Bindung (Endkonzentration 1 μM) (iii) A-10 in Bindungspuffer (25 μl, Endkonzentration 40 pM) (iv) Bindungspuffer (125 μl) (v) Jede Platte wurde mit Plattenversiegelung von PACKARD versiegelt und über Nacht unter Schütteln bei 4°C inkubiert.
4. Die Platten wurden mit PACKARD TOPCOUNT gezählt
5. Die %-Inhibierung wurde wie folgt berechnet: A = Zählungen insgesamt B = nichtspezifische Zählungen C = Proben-Zählungen %-Inhibierung = [{(A-B)-(C-B)}/(A-B)]/(A-B) × 100

Repräsentative Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden getestet, und es wurde gefunden, dass sie an menschliches αvβ3-Integrin binden. Für diese Verbindungen wurden im Allgemeinen IC₅₀-Werte von weniger als etwa 100 nM im SPAV3-Test gefunden.
OCFORM-TEST
Osteoblastenartige Zellen (1.8-Zellen), die ursprünglich von Mäuseschädeldecken stammten, wurden in CORNING-Gewebekulturplatten mit 24 Vertiefungen in einem αMEM-Medium, das Ribo- und Desoxyribonukleoside, 10%iges fötales Rinderserum und Penicillin-Streptomycin enthielt, plattiert. Die Zellen wurden am Morgen mit 40000/Vertiefung angesetzt. Am Nachmittag wurden Knochenmarkszellen aus sechs Wochen alten männlichen Balb/C-Mäusen wie folgt hergestellt:
Die Mäuse wurden getötet, die Tibiae wurden entfernt und in das obige Medium gelegt. Die Enden wurden abgeschnitten und das Mark mit einer 1-ml-Spritze mit einer 27,5-Gange-Nadel aus dem Hohlraum in ein Röhrchen gespült. Das Mark wurde durch Auf- und Abpipettieren suspendiert. Die Suspension wurde durch ein > 100 mm Nylon-Zellfilter geleitet. Die resultierende Suspension wurde sieben Minuten bei 350 × g zentrifugiert. Das Pellet wurde erneut suspendiert, und eine Probe wurde in 2%iger Essigsäure verdünnt, um die roten Blutkörperchen zu lysieren. Die restlichen Zellen wurden in einem Hämozytometer gezählt. Die Zellen wurden pelletisiert und mit 1 × 10⁶ Zellen/ml erneut suspendiert. 50 μl wurden zu jeder Vertiefung mit 1.8-Zellen zugegeben, um 50000 Zellen/Vertiefung zu ergeben, und 1,25-Dihydroxyvitamin D₃ (D₃) wurde zu jeder Vertiefung bis zu einer Endkonzentration von 10 nM zugegeben. Die Kulturen wurden bei 37°C in einer befeuchteten 5%-CO₂-Atmosphäre inkubiert. Nach 48 Stunden wurde das Medium gewechselt. 72 Stunden nach der Zugabe von Knochenmark wurden die Testverbindungen mit frischem Medium, das D₃ enthielt, zu vierfachen Vertiefungen zugegeben. Nach 48 Stunden wurden die Verbindungen erneut mit D₃-haltigem frischem Medium versetzt. Nach weiteren 48 Stunden wurde das Medium entfernt, die Zellen wurden mit 10%igem Formaldehyd in phosphatgepufferter Kochsalzlösung 10 Minuten bei Raumtemperatur fixiert, gefolgt von einer 1–2 minütigen Behandlung mit Ethanol:Aceton (1:1), und luftgetrocknet. Die Zellen wurden dann wie folgt für tartratresistente saure Phosphatase gefärbt:
Die Zellen wurden 10–15 Minuten bei Raumtemperatur mit 50 mM Acetatpuffer, pH 5,0, der 30 mM Natriumtartrat, 0,3 mg/ml Fast Red Violet LB Salz und 0,1 mg/ml Naphthol AS-MX Phosphat enthielt, gefärbt. Nach dem Färben wurden die Platten ausgiebig mit entionisiertem Wasser gewaschen und luftgetrocknet. Die Anzahl an multinukleierten positiv-färbenden Zellen wurde in jeder Vertiefung gezählt.
SPAV5-TEST
MATERIALIEN:

1. Weizenkeim-Agglutinin-Szintillation-Proximity-Beads (SPA): Amersham
2. Octylglucopyranosid und Phorbo-12-myristat-13-acetat (PMA): Calbiochem
3. Tris-HCl, NaCl und CaCl₂: Fisher
4. Minimum Essential Media (MEM): Gibco/BRL
5. Fötales Rinderserum (FBS): Hyclone
6. MgCl₂, MnCl₂ und Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF): SIGMA
7. Proteaseinhibitorcocktailtabletten: Boehringer Mannheim
8. Optiplate-96-Well-Platten: PACKARD
9. B-5 wurde als radiomarkierter Ligand (spezifische Aktivität 500–1000 Ci/mmol) verwendet, und B-3 (2,5 μM) wurde verwendet, um eine 100%ige Inhibierung zu erzielen.
10. Testverbindung
11. HEK293-Zellen, die α_vβ₅-Integrine überexprimieren (Simon et al., J. Biol. Chem. 272, 29380–29389, 1997), werden in 150-mm-Schalen in 10% FBS/MEM-Medium (Gibco/BRL) kultiviert.
12. Lysepuffer: 100 mM Octylglucopyranosid, 50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂, 0,5 mM PMSF und Proteaseinhibitoren (1 Tablette/50 ml Puffer).
13. Bindungspuffer: 50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂ und 1 mM MnCl₂.
14. 50 mM Octylglucopyranosid in Bindungspuffer: 50-OG-Puffer

VERFAHREN:

1. α_vβ₅-Zell-Lysate: HEK-293-Zellen, die α_vβ₅-Integrine exprimieren, wurden bis zur Konfluenz kultiviert. Anschließend ließ man die Zellen über Nacht in Medium, das 0,5% FBS enthält, hungern, gefolgt von der 20 minütigen Behandlung mit 100 nM PMA. Die Zellen wurden 2 mal mit kalter phosphatgepufferter Kochsalzlösung (4°C) gewaschen und in Lysepuffer 30 Minuten auf Eis löslich gemacht. Die Lysate wurden unter Verwendung einer Beckman JA-20 bei 20000 xg geklärt. Die Proteinkonzentration der geklärten Lysate wurde durch Verwendung eines Mikro-BCA-Kits (Pierce) ermittelt, und diese wurden in Aliquoten bei 80°C aufbewahrt.
2. Vorbehandlung der SPA-Beads: 500 mg gefriergetrocknete SPA-Beads wurden zunächst viermal mit 200 ml 50-OG-Puffer und einmal mit 100 ml Bindungspuffer gewaschen und anschließend in 12,5 ml Bindungspuffer erneut suspendiert.
3. Herstellung der SPAV5-Bindungsreaktion Zu jeder Testvertiefung wurden der Reihe nach folgende Stoffe in Optiplate-Platten zugegeben: (i) Bindungspuffer, um ein Endvolumen von 125 μl pro Vertiefung zu ergeben. (ii) 3 μl (120 μl/Vertiefung) vorbehandelte Beads, verdünnt mit 22 μl 50-OG-Puffer. (iii) 15 μg α_vβ₅-Zell-Lysat-Proteine. (iv) B-5 mit 50000 cpm. (v) 25 μl abgestufte Konzentrationen der Testverbindung. (vi) Jede Platte wurde mit Plattenversiegelung von PACKARD versiegelt und über Nacht unter Schütteln bei 4°C inkubiert.
4. Die Platten wurden mit einem PACKARD TOPCOUNT-Mikroplattenszintillationszähler gezählt.
5. Die %-Inhibierung wurde wie folgt berechnet: A = Zählungen insgesamt (Bindung von Rezeptor an B-5) B = nichtspezifische Zählungen (Bindung von Rezeptor an B-5 in Gegenwart von 2,5 μM kaltem Liganden) C = Zählungen von Rezeptorbindung an Testverbindung %-Inhibierung = [{(A-B)-(C-B)}/(A-B)]/(A-B) × 100

Der IC₅₀-Wert der Testverbindung wurde als 50%ige Inhibierung berechnet.
Repräsentative Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden getestet, und es wurde gefunden, dass sie im Allgemeinen IC₅₀-Werte von weniger als 1 μM im SPAV5-Test besitzen.
BEISPIEL FÜR EINE PHARMAZEUTISCHE FORMULIERUNG
Als eine spezielle Ausführungsform einer oralen Zusammensetzung werden 100 mg der Verbindung der vorliegenden Erfindung mit ausreichend feinteiliger Lactose formuliert, um eine Gesamtmenge von 580 bis 590 mg zu ergeben, die in eine Hartgelatinekapsel der Größe 0 gefüllt wird.
Obwohl die Erfindung in Bezug auf bestimmte bevorzugte Ausführungsformen davon beschrieben und veranschaulicht wurde, werden die Fachleute erkennen, dass verschiedene Änderungen, Modifizierungen und Substitutionen daran vorgenommen werden können. Zum Beispiel können wirksame Dosen, die anders sind als die oben genannten bevorzugten Dosen, als Folge von Variationen beim Ansprechverhalten des Säugers, der gegen schwere, durch Resorption hervorgerufene Knochenstörungen oder gegen andere Indikationen behandelt wird, auf die oben angegebenen Verbindungen der Erfindung, zur Anwendung gelangen. Ähnlich können die beobachteten speziellen pharmakologischen Reaktionen variieren, gemäß und abhängig von der speziell ausgewählten Wirkverbindung oder dem Vorliegen pharmazeutischer Träger sowie der Art der Formulierung und des eingesetzten Verabreichungsmodus, und solche erwarteten Variationen oder Unterschiede bei den Ergebnissen sind von den Zielen und Praktiken der vorliegenden Erfindung umfasst.

Claims

Eine Verbindung mit der Formel (IV):
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei X ist
R² ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, C_3-8-Cycloheteroalkyl, C_3-8-Cycloalkyl-C_1-6-alkyl, C_3-8-Cycloheteroalkyl-C_1-6-alkyl, Aryl, Aryl-C_1-6-alkyl, Amino, Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl, (C_1-6-Alkyl)_1-2-amino, C_3-6-Cycloalkyl-_0-2-amino, (C_1-6-Alkyl)_1-2-amino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkoxy, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl-C_1-6-alkyl, Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Nitro, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Trifluorethoxy, C_1-8-Alkyl-S(O)_0-2, (C_1-8-Alkyl)_0-2-aminocarbonyl, C_1-8-Alkyloxycarbonylamino, (C_1-8-Alkyl)_1-2-aminocarbonyloxy, (Aryl-C_1-3-alkyl)_1-2-amino, (Aryl)_1-2-amino, Aryl-C_1-3-alkylsulfonylamino und C_1-8-Alkylsulfonylamino, R⁷ Aryl ist, wobei die Arylgruppe ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus (1) Phenyl, (2) Naphthyl, (3) Pyridyl, (4) Furyl, (5) Thienyl, (6) Pyrrolyl, (7) Oxazolyl, (8) Thiazolyl, (9) Imidazolyl, (10) Pyrazolyl, (11) Isoxazolyl, (12) Isothiazolyl, (13) Pyrimidinyl, (14) Pyrazinyl, (15) Pyridazinyl, (16) Tetrazolyl, (17) Chinolyl, (18) Isochinolyl, (19) Benzimidazolyl, (20) Benzofuryl, (21) Benzothienyl, (22) Indolyl, (23) Benzthiazolyl, (24) Benzoxazolyl, (25) Dihydrobenzofuryl, (26) Benzo(1,3)dioxolanyl, (27) Benzo(1,4)dioxanyl, (28) Chinazolyl, (29) Chinoxalyl und (30) 3,4-Dihydro-2H-1,4-dioxa-5-azanaphthalinyl, wobei die Arylgruppe, wie sie oben in den Positionen (1) bis (30) definiert ist, unsubstituiert oder substituiert ist mit ein bis drei Substituenten, unabhängig ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, Aryl, Aryl-C_1-3-alkyl, Amino, Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylamino, Di(C_1-6)alkylamino, C_1-6-Alkylamino-C_1-6-alkyl, Di(C_1-6)alkylamino-C_1-6-alkyl, C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkylthio, C_1-4-Alkylsulfinyl, C_1-4-Alkylsulfonyl, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkoxycarbonyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl- C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkylcarbonyloxy, Cyano, Trifluormethyl, 1,1,1-Trifluorethyl, Trifluormethoxy, Trifluorethoxy und Nitro, oder sich zwei benachbarte Substituenten zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, verbinden, um einen fünf- oder sechsgliedrigen gesättigten oder ungesättigten Ring zu bilden, der 1 oder 2 Heteroatome, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus N, O und S, enthält, wobei dessen Ring-Kohlenstoffatome substituiert sein können mit Oxo oder C_1-3-Alkyl, und R⁸ Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl ist.
Die Verbindung nach Anspruch 1, wobei R⁷ Aryl ist, wobei die Arylgruppe ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Phenyl, Pyridyl, Chinolyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Pyridazinyl, Benzofuryl, Dihydrobenzofuryl und 3,4-Dihydro-2H-1,4-dioxa-5-azanaphthalinyl, wobei die Arylgruppe unsubstituiert oder substituiert ist mit ein bis zwei Substituenten, unabhängig ausgewählt aus Hydroxy, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Halogen, C_1-8-Alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, Aryl, Aryl-C_1-3-alkyl, Amino, Amino-C_1-6-alkyl, C_1-3-Acylamino, C_1-3-Acylamino-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylamino, Di(C_1-6)alkylamino, C_1-6-Alkylamino-C_1-6-alkyl, Di(C_1-6)-alkylamino-C_1-6-alkyl, C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkylthio, C_1-4-Alkylsulfinyl, C_1-4-Alkylsulfonyl, C_1-4-Alkoxy-C_1-6-alkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkoxycarbonyl, C_1-3-Alkoxycarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-5-Alkylcarbonyloxy, Cyano, Trifluormethyl, 1,1,1-Trifluorethyl, Trifluormethoxy, Trifluorethoxy und Nitro, oder sich zwei benachbarte Substituenten zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, verbinden, um einen fünf- oder sechsgliedrigen gesättigten oder ungesättigten Ring zu bilden, der 1 oder 2 Heteroatome, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus N, O und S, enthält, wobei dessen Ring-Kohlenstoffatome substituiert sein können mit Oxo oder C_1-3-Alkyl.
Die Verbindung nach Anspruch 2, wobei R⁷ Chinolyl, Pyridyl oder Pyrimidinyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit ein bis zwei Substituenten, unabhängig ausgewählt aus Halogen, Phenyl, C_1-4-Alkyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_1-3-Alkoxy, Amino, C_1-3-Alkylamino, Di(C_1-3)-alkylamino, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, 1,1,1-Trifluorethyl, Trifluormethoxy und Trifluorethoxy.
Die Verbindung nach Anspruch 3, wobei R² ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Amino, C_1-4-Alkylamino, C_3-6-Cycloalkyl-C_0-2-alkylamino, Cyano, C_1-4-Alkyl, Cyclopropyl, Aryl-C_1-3-alkyl, C_1-4-Acylamino, C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkylthio, Aminocarbonyl, (C_1-6-Alkyl)_1-2-aminocarbonyl, C_1-4-Alkoxycarbonyl, Trifluormethyl und Trifluormethoxy.
Die Verbindung nach Anspruch 4, wobei R² ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Amino, C_1-3-Alkylamino, C_3-6-Cycloalkylmethylamino, C_1-4-Alkyl, Cyclopropyl, Trifluormethyl und Trifluormethoxy.
Die Verbindung nach Anspruch 1, wobei R² Wasserstoff, C_1-4-Alkyl oder Cyclopropyl ist, R⁷ Chinolyl, Pyridyl oder Pyrimidinyl ist, unsubstituiert oder substituiert mit einem Substituenten, ausgewählt aus C_1-4-Alkyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_1-3-Alkoxy, Amino, C_1-3-Alkylamino, Di(C_1-3)alkylamino, Cyano, Trifluormethyl und Trifluormethoxy, und R⁸ Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl ist.
Die Verbindung nach Anspruch 1, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus: 3-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(R)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(S)-(2-Methylpyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(R)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(S)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(R)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(S)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(R)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, 3(S)-(2-Ethoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Die Verbindung nach Anspruch 7, die ist: 3(S)-(2-Methoxypyrimidin-5-yl)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahydro-5H-pyrido[2,3-b]azepin-2-yl)nonansäure, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß irgendeinem vorhergehenden Anspruch und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 9, die ferner einen Wirkstoff enthält, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus a) einem organischen Bisphosphonat oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz oder Ester davon, b) einem Östrogenrezeptormodulator, c) einem Androgenrezeptormodulator, d) einem zytotoxischen/antiproliferativen Mittel, e) einem Matrixmetalloproteinaseinhibitor, f) einem Inhibitor der epidermalen, Fibroblasten- oder Thrombozyten-Wachstumsfaktoren, g) einem VEGF-Inhibitor, h) einem Antikörper für einen Wachstumsfaktor oder einen Wachstumsfaktorrezeptor, i) einem Flk-1/KDR-, Fit-1-, Tck/Tie-2- oder Tie-1-Inhibitor, j) einem Kathepsin-K-Inhibitor, k) einen Wachstumshormon-Sekretagogum, l) einem Osteoklasten-Protonen-ATPase-Inhibitor, m) einem Inhibitor des Urokinase-Plasminogen-Aktivators, n) einem tumorspezifischen Antikörper-Interleukin-2-Fusionsprotein, o) einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor und p) einem Farnesyltransferaseinhibitor oder einem Geranylgeranyltransferaseinhibitor oder einem dualen Farnesyl/Geranylgeranyl-Transferaseinhibitor und Mischungen davon.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 10, wobei der Wirkstoff ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus a) einem organischen Bisphosphonat oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz oder Ester davon, b) einem Östrogenrezeptormodulator, c) einem Androgenrezeptormodulator, d) einem Kathepsin-K-Inhibitor, e) einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor und f) einem Osteoklasten-Protonen-ATPase-Inhibitor, und Mischungen davon.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 11, wobei das organische Bisphosphonat oder das pharmazeutisch annehmbare Salz oder der pharmazeutisch annehmbare Ester davon Alendronat-Mononatriumtrihydrat ist.
Die Verwendung einer Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1–8 zur Herstellung eines Medikaments zur Herbeiführung einer αv-Integrinrezeptorantagonisierungswirkung.
Die wie in Anspruch 13 beanspruchte Verwendung, wobei die αv-Integrinrezeptorantagonisierungswirkung eine αvβ3-Antagonisierungswirkung ist.
Die wie in Anspruch 14 beanspruchte Verwendung, wobei die αvβ3-Antagonisierungwirkung ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus der Inhibierung von Knochenresorption, Restenose, Angiogenese, diabetischer Retinopathie, Makuladegeneration, Entzündung, entzündlicher Arthritis, Viruserkrankung, Krebs und metastatischem Tumorwachstum.
Die wie in Anspruch 15 beanspruchte Verwendung, wobei die αvβ3-Antagonisierungswirkung die Inhibierung von Knochenresorption ist.
Die Verwendung einer Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1–8 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prävention von Osteoporose.
Die Verwendung einer Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1–8 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Tumorwachstum in Kombination mit Strahlentherapie.