DE60030429T2

DE60030429T2 - Neuronale, die exozytose hemmende peptide und diese enthaltende kosmetische und pharmazeutische zusammensetzungen

Info

Publication number: DE60030429T2
Application number: DE60030429T
Authority: DE
Inventors: M Clara Blanes Mira; M Mercedes Llobregat Hernandez; Ana Isabel Gil Tebar; Gregorio Joaquin Fernandez Ballester; Rosa M Planell Cases; Antonio Vicente Ferrer Montiel; Salvador Viniegra Bover; Luis Miguel Gutierrez Perez; Teresa Carbonell Castell; Enrique Perez Paya
Original assignee: Lipotec SA
Current assignee: Lipotec SA
Priority date: 1999-04-23
Filing date: 2000-02-18
Publication date: 2007-10-31
Anticipated expiration: 2020-02-19
Also published as: US7473679B2; BRPI0011152B8; BRPI0011152B1; JP4363556B2; JP4892037B2; AU2672900A; DE60030429T3; BR0011152A; ES2160485A1; JP2009221223A; CA2370289A1; EP1180524B2; US7015192B1; PT1180524E; CA2370289C; WO2000064932A1; EP1180524B1; ATE338062T1; JP2002542777A; DE60030429D1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Diese Erfindung bezieht sich auf aus dem Amino-Ende des Proteins SNAP-25 gewonnene, als neuronale Exozytose-Inhibitoren nützliche Peptide und auf ihren Gebrauch in kosmetischen und/oder therapeutischen Applikationen, zusammen (optional) mit einem aus dem Carboxyl-Ende des Proteins SNAP-25 gewonnen Peptid.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die Basis oder der Mechanismus für die Bildung von Gesichtsfalten ist die Anspannung der Muskeln der Epidermis, die die Haut nach innen ziehen. Diese muskuläre Spannung resultiert aus der Hyperaktivität der die Gesichtsmuskeln anregenden Nerven. Nervenhyperaktivität wird charakterisiert durch die unkontrollierte und übermäßige Freisetzung von muskelfaserreizenden Neurotransmittern. Aus diesem Grund tragen Moleküle, die neuronale Exozythose kontrollieren, zur Muskelentspannung und folglich zur Entfernung von Falten bei.
Botulinumtoxine sind eine Familie bakterieller Neurotoxine, produziert durch Clostridium Botulinum (1) [siehe Abschnitt zur BIBLIOGRAPHIE]. Man kennt 7 verschiedene Serotypen (Serotypen A, B, C, D, E, F und G) mit einem durchschnittlichen molekularen Gewicht von 150 kDa. Diese Gifte hemmen Acetylcholin-Exocytose in der neuromuskulären Verbindungsstelle (Nerven-Muskel Synapse) des Skelettmuskels (1).
Auf einer molekularen Ebene, sind Botulinumtoxine Proteasen, die im Exozytose-Mechanismus enthaltene neuronale Proteine, aktiviert durch das Kalziumion, abbauen (1-3). Das [wegen seiner Anwendung bei der Entfernung von Gesichtsfalten und -asymmetrie und der Linderung der Symptomatologie spastischer Krankheiten] klinisch und kosmetisch meistbenutzte Botulinumtoxin A zum Beispiel spaltet das neuronale Protein SNAP-25. Dieses Protein (SNAP-25) spielt eine Schlüsselrolle bei der Neurosekretion, weil es an der Bildung eines Protein-Komplexes (bekannt als SNARE Komplex oder Fusionskomplex) beteiligt ist, der die Freisetzung von in Blasen angesammeltem Acetylcholin steuert und kontrolliert. Der Zellkern dieses Fusionskomplexes ist gebildet aus den Proteinen SNAP-25 und Syntaxin, gelegen in der präsynaptischen Plasmamembran, und aus dem Protein Synaptobrevin (oder VAMP), gelegen in der blasenförmigen Plasmamembran (4, 5). Die Hauptfunktion des Fusionskomplexes ist es, das mit Neurotransmitter beladene Bläschen (Acetylcholin) der präsynaptischen Plasmamembran anzunähern und es mit ihr in Kontakt zu bringen (4, 5). Auf diese Weise wird als Reaktion auf eine erhöhte Konzentration von Kalzium die Fusion beider Plasmamembrane gefördert, die somit die Freisetzung des Neurotransmitters hervorruft. Deshalb ist besagter Bläschen anlegende und fusionierende Proteinkomplex (SNARE) ein Schlüsselziel bei der Kontrolle von Neurosekretion. Die Spaltung jeglicher Proteine, die den Fusionskomplex bilden, verhindert seinen Zusammenbau, und hemmt daher die Bläschenfreisetzung und neuronale Exozytose.
Die Stärke der Botulinumtoxine, und besonders des Serotyps A (BOTOX^®), Neurosekretion zu hemmen, sowie auch ihre neuronale Selektivität (sie richten sich nur nach Neuronen), wird in weiten Kreisen therapeutisch zur Korrektur spastischer Leiden wie Tonusstörungen, Strabismus, Tics, Blepharospasmen, Gesichtsskoliose u.s.w. genutzt (6-13). Botulinumtoxin A (Botulinum A) ist, darüber hinaus, ein effektiver Wirkstoff zur Beseitigung von Gesichtsfalten und Gesichtsasymmetrie. In der Tat ist die Verabreichung von BOTOX^® die erste effektive nicht-chirurgische Therapie zur Beseitigung der Zeichen des Alterns (6, 7).
Die therapeutische und kosmetische Behandlung mit BOTOX^® besteht aus einer lokalisierten Injektion verdünnter pharmazeutischer Präparate (Botulinum A-Hämagglutininkomplex, 500 kDa) in den Zonen, wo Muskelanspannung lokalisiert wird. Die lähmenden Wirkungen des Toxins sind umkehrbar mit einer durchschnittlichen Dauer von 6 Monaten (6, 7). Die Behandlung erfordert daher wiederholte Injektionen von BOTOX^®. Das Hauptproblem dieser Behandlung ist die Möglichkeit, dass sie eine Immunreaktion gegen das pharmazeutische Präparat auslöst, und zwar aufgrund der Tatsache, dass es, wegen seiner molekularen Größe, vom Immunsystem des Patienten erkannt werden könnte. Das Auftreten von Antikörpern gegen Botulinum A ist ein ernsthaftes Problem, da es zu einer klaren Verminderung der Effektivität der Behandlung beiträgt (6-13). Dieser Verlust an Effektivität in der Behandlung mit BOTOX^® bedeutet die Notwendigkeit, den Konzentrationsgrad des Präparats in späteren Behandlungen zu erhöhen, was seinerseits eine Potenzierung der Immunreaktion produziert. Als Alternative wurde die Anwendung verschiedener Botulinumtoxin (BoTox) Serotypen diskutiert, wie etwa BoTox B, BoTox F and BoTox E. Dennoch kann die Anwendung pharmazeutischer Präparate mit verschiedenen Serotypen nicht als Lösung des Problems betrachtet werden, weil die Immunreaktion früher oder später wieder auftreten könnte. Hinzu kommt, dass die Behandlung mit Botulinumtoxinen teuer ist, hauptsächlich wegen der Labilität und Instabilität der sie enthaltenden pharmazeutischen Präparate.
Deshalb besteht die dringende Notwendigkeit, Moleküle zu entwickeln, die die lahmlegenden Effekte der Botulinumtoxine imitieren, aber mit viel einfacheren und stabileren molekularen Strukturen, die keine Immunreaktionen hervorrufen, und deren Herstellungskosten billig sind. Moleküle vom Peptid-Typ erfüllen diese Eigenschaften.
Aminosäureketten, die neuronale Exozytose hemmen, sind beschrieben worden. Spezifisch wurde bewiesen, dass Peptide mit mehr als 20 Aminosäuren, die von der Carboxyl-Ende-Sequenz des SNAP-25 herrühren, die Freisetzung von Katecholaminen von durchlässig gemachten chromaffinen Zellen (14). Zusätzlich offenbart WO 97/34620 das SNAP-25 Protein und dessen Fragmente, die die Absonderung der Neurotransmitter von synaptischen Bläschen hemmen; besagte Fragmente müssen in ihrer Primärstruktur Peptiden entsprechen, die als bindende Domänen für den Zusammenbau eines dreistoffigen Proteinkomplexes dienen, und, für optimale Aktivität, eine minimale Länge von ungefähr 20 Aminosäuren und eine maximale Länge von 28 Aminosäuren haben müssen. In gleicher Weise wurden Peptide beschrieben, die von den Aminosäureketten der Proteine Syntaxin und VAMP herrühren, die den Prozess der Exozytose auch beeinflussen können (15). Obwohl diese Peptide biologische Aktivität zeigen, ist keine spätere Entwicklung als kosmetische und/oder therapeutische Wirkstoffe eingetreten, höchstwahrscheinlich wegen ihrer Größe, weil diese ihre Entwicklung als nutzvolle therapeutische Wirkstoffe kompliziert und sie kostenträchtiger macht. Deshalb besteht die Notwendigkeit, Moleküle von kleinerer Größe zu finden, die in der Kosmetik und in der Medizin angewendet werden können.
Diese Erfindung liefert eine Lösung für die bestehenden Erfordernisse, die die Entdeckung kleinerer Aminosäureketten, zwischen 3 und 30 vom Amino-Ende (N-Terminus-Domäne) des Proteins SNAP-25 herrührende Aminosäuren, umfasst, welche neuronale Exozytose hemmen. Darüber hinaus wurde entdeckt, dass die simultane Anwendung der vom Amino-Ende und der vom Carboxyl-Ende (C-Terminus-Domäne) vom SNAP-25 herrührenden Peptide einen bemerkenswerten Anstieg ihrer hemmenden Aktivität erzeugt, zum Beispiel gibt es eine Potenzierung ihrer Aktivität verglichen mit der singulärer Peptide.
Deshalb ist ein Gegenstand dieser Erfindung ein neuronale Exozytose hemmendes Peptid, das eine aus 3 bis 30 angrenzenden, am Amino-Ende des Proteins SNAP-25 enthaltenen Aminosäuren gebildete Kette besitzt.
Ein weiterer Gegenstand dieser Erfindung ist eine Nukleinsäure, die im wesentlichen eines der mit dieser Erfindung gelieferten Peptide enkodiert. Die Plasmide und Vektoren, die besagte Nukleinsäure enthalten (auch als Konstruktoren identifiziert), so wie auch die mit den besagten Plasmiden oder Vektoren transformierten Zellen, die ein Peptid dieser Erfindung ausdrücken, stellen zusätzliche Gegenstände dieser Erfindung dar.
Ein anderer zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist eine Mischung von mindestens einem der von dieser Erfindung gelieferten Peptide und mindestens einem Peptid, das eine aus 3 bis 30 angrenzenden, am Carboxyl-Ende des Proteins SNAP-25 enthaltenen Aminosäuren gebildete Kette besitzt,
Ein anderer zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist eine kosmetische Zusammensetzung, die mindestens ein von dieser Erfindung geliefertes Peptid enthält. Die Anwendung der von dieser Erfindung gelieferten Peptide bei der Zubereitung der besagten kosmetischen Zusammensetzung, so wie auch die Methode der kosmetischen Behandlung, die die Anwendung besagter kosmetischer Zusammensetzung umfasst, stellen zusätzliche Gegenstände dieser Erfindung dar.
Ein anderer zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die mindestens ein von dieser Erfindung geliefertes Peptid enthält, oder alternativ, einen Vektor enthält, der eine Nukleinsäure umfasst, die ein Peptid dieser Erfindung enkodiert. Die Anwendung der von dieser Erfindung gelieferten Peptide und Vektoren (Konstruktionen) bei der Zubereitung der besagten pharmazeutischen Zusammensetzungen, so wie auch die Methode der Behandlung von Menschen oder Tieren, die die Anwendung besagter Zusammensetzungen umschließt, stellen zusätzliche Gegenstände dieser Erfindung dar.
Ein anderer zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist eine Kombination von Drogen, die mindestens eines der von dieser Erfindung gelieferten Peptide enthält, zusammen mit mindestens einer Droge für ein zweites therapeutisches Ziel, welches gleich mit oder verschieden von dem therapeutischen Ziel ist, auf welches das von dieser Erfindung gelieferte Peptid gerichtet ist.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Diese Erfindung liefert ein Peptid, welches vom Amino-Ende des Proteins SNAP-25 herrührt. Spezifischer gesagt, liefert die Erfindung ein Peptid, von nun an das Peptid der Erfindung genannt, welches eine Kette von 3 bis 30 angrenzenden Aminosäuren aufweist, die in SEQ.ID.Nr.1 enthalten sind [siehe im Abschnitt LISTE DER KETTEN].
Die Erfindung umfasst auch Peptide, die stofflich homolog zu den Peptiden der Erfindung sind. Im Sinne dieser Beschreibung meint der Ausdruck „stofflich homolog", dass das fragliche Peptid, soweit Aminosäuren betroffen sind, einen Ähnlichkeitsgrad von mindestens 60%, und vorzugsweise von mindestens 80%, und noch vorzugsweiser, von mindestens 95% hat.
Die Erfindung umfasst auch Peptide, die funktional äquivalent zu den Peptiden der Erfindung sind. Im Sinne dieser Beschreibung meint der Ausdruck „funktional äquivalent", dass das fragliche Peptid mindestens eine der biologischen Aktivitäten des Peptids der Erfindung aufweist, wie etwa, zum Beispiel, die Fähigkeit, neuronale Exozytose wenigstens teilweise zu hemmen.
In einer bestimmten Ausführungsform hat das Peptid der Erfindung eine Länge von 3 bis 20 Aminosäuren, und vorzugsweise von 6 bis 19 Aminosäuren.
Die Aminosäuren, die die strukturellen Einheiten der Peptide der Erfindung bilden, können D- oder L-Konfiguration haben. Die Aminosäure vom Amino-Ende kann eine azetylierte Amino-Endgruppe haben, und die Aminosäure am Carboxyl-Ende kann eine amidierte Carboxyl-Endgruppe haben. Deshalb umfasst diese Erfindung auch Derivative des Peptids der Erfindung, in denen das Amino-Ende azetyliert ist, und/oder in denen das Carboxyl-Ende amidiert ist.
Bestimmte Beispiele von Peptiden der Erfindung sind die Peptide, die in SEQ.ID Nr.2 und SEQ.ID Nr.3 aufgezeigte Aminosäureketten haben.
Im Rahmen dieser Erfindung befinden sich kosmetisch und/oder pharmazeutisch akzeptable Salze des Peptids der Erfindung. Die Bezeichnung „kosmetisch oder pharmazeutisch akzeptable Salze" enthält gewöhnlich für die Bildung von Metallsalzen benutzte Salze oder durch Zusatz von freien Säuren oder Basen gebildete Salze. Die Natur des Salzes ist nicht entscheidend, solange es kosmetisch oder pharmazeutisch akzeptabel ist. Der Erhalt kosmetischer und/oder pharmazeutisch akzeptabler Salze des Peptids der Erfindung erfolgt aus Säuren oder Basen, organisch oder unorganisch, mittels Reaktion der geeigneten Säure oder Base mit dem Peptid der Erfindung.
Zusätzlich kann das Peptid der Erfindung umkehrbare chemische Modifikationen durchmachen, um seine Bio-Verfügbarkeit (einschließlich Stabilität und Fettlöslichkeit) und die Leichtigkeit beim Durchqueren der Blut-Hirn-Schranke und des Epithelgewebes zu erhöhen. Beispiele solcher umkehrbarer chemischer Modifikationen schließen die Veresterung der Carboxylatgruppen von Glutamin- und Aspartin-Aminosäuren mit einer Acetyl-Methyl-Gruppe ein, durch die die negative Ladung der Aminosäure beseitigt und ihr wasserabweisendes Verhalten erhöht wird. Diese Esterbildung ist umkehrbar, weil die formierte Esterverbindung von intrazellulären Esterasen erkannt wird, welche sie hydrolisieren, die Ladung zurückgebend an die aspartischen und glutamischen Rückstände. Die Nutzwirkung ist eine Ansammlung von intrazellulären Peptiden, da das verinnerlichte, ent-esterte Peptid die Zellmembran nicht überqueren kann.
Das Peptid der Erfindung kann durch konventionelle Methoden für fest-phasige chemische Peptid-Synthese gewonnen werden, folgend der Fmoc und/oder Boc-gestützten Methodenlehre (16).
Alternativ kann das Peptid der Erfindung durch konventionelle Methoden gestützt auf rekombinante DNA Technologie, z.B. durch eine Methode, die, kurz gesagt, die Einsetzung der das Peptid der Erfindung enkodierenden Nukleinsäurekette in ein geeignetes Plasmid oder einen geeigneten Vektor, die Umwandlung leistungsfähiger Zellen für besagtes Plasmid oder besagten Vektor, und die Entwicklung besagter Zellen unter Bedingungen, die die Ausprägestufe des Peptids der Erfindung erlauben, und, falls erwünscht, die Isolierung und (optional) die Reinigung des Peptids der Erfindung durch solche den Experten auf diesem Gebiet bekannte konventionelle Methoden, umfasst. Die das Peptid der Erfindung enkodierende Nukleinsäurekette kann einfach abgeleitet werden aus der Übereinstimmung, die zwischen den Aminosäuren und den diese Aminosäuren enkodierenden Nukleotid-Kodonen existiert. In diesem Fall ist zusätzlicher Gegenstand der Erfindung eine isolierte Nukleinsäurekette, die das Peptid der Erfindung enkodiert. In einer bestimmten Ausführungsform wird besagte Nukleinsäure unter einzel-faser DNA, doppel-faser DNA, und RNA ausgewählt. Zusätzliche Gegenstände dieser Erfindung sind die Plasmide und Expressions-Vektoren, die besagte, das Peptid der Erfindung enkodierende Nukleinsäureketten sowie auch das Peptid der Erfindung ausprägende prokaryotische oder eukaryote Zellen enthalten. Einen Überblick über die Prinzipien der rekombinanten DNA Technologie kann zum Beispiel im Textbuch mit dem Titel „Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering", R.W. Old & S.B. Primrose, veröffentlicht in Blackwell Scientific Publications, 4. Auflage (1989), gefunden werden.
Das Peptid der Erfindung ist fähig, zumindest teilweise neuronale Exozytose zu hemmen, wahrscheinlich durch einen Mechanismus, der den Eingriff in den Zusammenbau des Fusionsproteinkomplexes (SNARE) und/oder seiner thermalen Destabilisierung mit sich bringt.
Die Fähigkeit der Peptide der Erfindung, neuronale Exozytose (Neurosekretion) zu hemmen, wurde offenbar durch einen Test, der die Kraft besagter Peptide bezüglich der Hemmung der Freisetzung von Katecholaminen, veranlasst durch Kalzium in chromaffinen Zellen, durchlässig gemacht mit einem Reinigungsmittel [siehe Beispiel 1.2.1]. In Kürze, die chromaffinen Zellkulturen sind mit Tritium-haltigem Epinephrin und Norepinephrin eingelagert, mit Digitonin durchlässig gemacht, mit Kalzium angereizt, und gemessen wird die Menge an Radioaktivität, die von den Zellen an das extrazelluläre Medium freigesetzt wird, welche eine Wiederspiegelung der Exozytose der besagten Tritium-haltigen Katecholaminen ist.
Das Hexapeptid der Erfindung [SEQ.ID.Nr.2], bei einer Konzentration von 1 mM, blockierte ungefähr 20% der Freisetzung von Katecholaminen (Epinephrin und Norepinephrin) in den durchlässig gemachten chromaffinen Zellen, während das Peptid mit 13 Aminosäuren [SEQ.ID.Nr.3], bei einer Konzentration von 1 mM, ungefähr 35% der Freisetzung von Katecholaminen in den durchlässig gemachten chromaffinen Zellen hemmte.
Die Peptide dargestellt in SEQ.ID.Nr.5 und SEQ.ID.Nr.6, vom Carboxyl-Ende des SNAP-25 [SEQ.ID.Nr.4] hemmten die Sekretion veranlasst von Ca²+ in mit Digitonin durchlässig gemachten Chromaffinzellen um ungefähr 40%, wenn sie in einer Konzentration von 1 mM benutzt wurden.
Paralleltests führten eine Benutzung von, vereint, mindestens einem Peptid vom Amino-Ende des SNAP-25, zum Beispiel das Peptid von SEQ.ID.Nr.2 oder von SEQ.ID.Nr.3, und mindestens einem Peptid vom Carboxyl-Ende des SNAP-25, zum Beispiel das Peptid von SEQ.ID.Nr.5 oder von SEQ.ID.Nr.6, durch und offenbarten, dass die kombinierte Benutzung mindestens eines Peptids vom Amino-Ende des SNAP-25 und mindestens eines Peptids vom Carboxyl-Ende des SNAP-25 die biologische Aktivität, die für jedes der Peptide bei separater Testung beobachtet wurde, stärkt.
In einem bestimmten Fall wurden Mischungen von Peptiden, die aus einem der in SEQ.ID.Nr.2 oder in SEQ.ID.Nr.3 und aus einem der in SEQ.ID.Nr.5 oder in SEQ.ID.Nr.6 aufgezeigten Peptide bestanden, bei einer Konzentration von 0,5 mM für jedes von ihnen, getestet, und eine Hemmungsrate von 55% bei der Freisetzung von Katecholaminen in durchlässig gemachten chromaffinen Zellen wurde erreicht.
Alles zusammen genommen weisen diese Resultate darauf hin, dass beide Peptid-Typen, nämlich die vom Amino-Ende und die vom Carboxyl-Ende, Katecholamine Exozytose hemmen, und dass die kombinierte Benutzung von Peptiden des Amino-Endes und des Carboxyl-Endes die biologische Aktivität stärken, die für jedes der Peptide separat beobachtet wurde.
Deshalb liefert die Erfindung auch eine Mischung von Peptiden, die umfasst:

(a) mindestens ein Peptid der Erfindung, und
(b) mindestens ein Peptid mit einer Kette von 3 bis 30 angrenzenden Aminosäuren enthalten in SEQ.ID.No.4 (von nun an, (COOH) Peptid um auf seine Verbindung zum Carboxyl-Ende des SNAP-25 hinzuweisen].

In einer bestimmten Ausführungsform ist die besagte Mischung von Peptiden gebildet aus mindestens einem Peptid, das aus der von den in SEQ.ID.Nr.2 und in SEQ.ID.Nr.3 gezeigten Peptiden geformten Gruppe ausgewählt wurde, und mindestens einem Peptid, das aus der von den in SEQ.ID.Nr.5 und in SEQ.ID.Nr.6 gezeigten Peptiden geformten Gruppe ausgewählt wurde.
Die Fähigkeit der Peptide der Erfindung, in den Aufbau und die Stabilität des Fusionskomplexes (SNARE) einzugreifen, wurde offenbar durch die Durchführung von Reagenzglastests zur Wiederherstellung vom Fusionsproteinkomplex mit rekombinanten Proteinen siehe Beispiel 1.2.2]. In Kürze erklärt, wurde Protein SNAP-25 unbeweglich gemacht in 96-well plates Microplättchen, Proteine VAMP und Syntaxin wurden unter An- und/oder Abwesenheit der Peptide der Erfindung hinzugefügt, und der Aufbau des Fusionsproteinkomplexes (SNARE) wurde bewertet. Die Ortung des Komplexes wurde durch Benutzung eines Antikörpers gegen Syntaxin (Anti-Syntaxin) durchgeführt, gefolgt von einem zweiten, angehängten Antikörper, der den Anti-Syntaxin Antikörper erkennt. Die gewonnenen Daten scheinen anzuzeigen, dass die Anwesenheit der Peptide der Erfindung während des Zusammenbaus des Fusionskomplexes eine bedeutende Abnahme desselben bewirkten. Deshalb scheint der Mechanismus der die neuronale Exozytose hemmenden Aktion zu implizieren, dass die Peptide der Erfindung in dem Aufbau und/oder der Stabilität des Fusionsproteinkomplexes (SNARE) eingreifen.
Die mit den besagten Tests erzielten Ergebnisse geben vor, dass die Peptide der Erfindung, Peptide, die von kleiner Größe sind, zwischen 3 und 30 Aminosäuren, herrührend von der Aminosäurekette vom Amino-Ende des SNAP-25, zusammen mit (optional) Peptiden vom Carboxyl-Ende des SNAP-25, als neuronale Exozytose-Inhibitoren agieren. Gesetzt, dass diese Peptide die Ketten von an Exozytose beteiligten neuronalen Proteinen imitieren, ist ihre Aktivität spezifisch, da sie nur mit den entsprechenden neuronalen Proteinen interagieren, ohne andere Zellkomponenten zu beeinträchtigen.
Der Aktionsmechanismus der Peptide der Erfindung scheint dem der Botulinumtoxine ähnlich zu sein, so den Aufbau und/oder die Stabilität des Fusionsproteinkomplexes beeinflussend; so können die Peptide der Erfindung als solche betrachtet werden, die ähnliche kosmetische/therapeutische Applikationen haben wie die für Botulinumtoxin beschriebenen. Deshalb können die Peptide der Erfindung wirksame, stabile, sichere und preiswerte Ersatzmittel für Botulinumtoxine werden, sowohl bei der Behandlung von Gesichtsfalten und/oder Gesichtsasymmetrie als auch bei der Behandlung der Symptomatik von spastischen Krankheiten und der Benutzung als Neuroprotektoren bei der Behandlung von neurologischen Störungen und neurodegenerativen Krankheiten.
Die von den Anmeldern getätigten Studien legen darüber hinaus das innovative Konzept des gleichzeitigen Gebrauchs von Peptiden der Domänen des Amino-Endes und des Carboxyl-Endes des SNAP-25 als neuronale Exozytose-Regulierer nahe.
Nimmt man alles zusammen, geben die mit den Peptiden der Erfindung erzielten Resultate, zusammen mit ihrer Stabilität und strukturellen Einfachheit und der chemischen Mannigfaltigkeit, die erhalten werden kann, nicht vergessend die Komposition der Amino- und Carboxyl-Enden des SNAP-25, den Peptiden der Erfindung großes kosmetisches und/oder therapeutisches Potenzial.
Die Peptide der Erfindung können für kosmetische und/oder therapeutische Zwecke genutzt werden, die durch pathologische neuronale Exozytose vermittelt sind.
Unter den kosmetischen Applikationen der Peptide der Erfindung finden sich die Behandlung und totale oder partielle Beseitigung von Gesichtsfalten und/oder Gesichtsasymmetrie von Menschen.
Die Erfindung liefert eine kosmetische Zusammensetzung, die eine kosmetisch wirksame Menge von mindestens einem Peptid der Erfindung, zusammen mit mindestens einer kosmetisch akzeptablen Hilfssubstanz. Zusätzlich und optional kann die besagte kosmetische Zusammensetzung eines der Peptide enthalten, welche als (COOH) Peptid identifiziert wurden.
Für kosmetische Applikationen können die Peptide der Erfindung durch jedes Medium angewendet werden, welches Kontakt zwischen dem Peptid und dem Ort in einem Säugetier, in dem es agieren soll, vorzugsweise in Menschen.
Die kosmetische wirksame Menge zu verwendender Peptide, so wie die Dosierung der Peptide und und/oder der kosmetischen Kompositionen der Erfindung für die Behandlung von Gesichtsfalten und/oder Gesichtsasymmetrie wird von zahlreichen Faktoren abhängen, einschließlich des Alters und des Zustands der die Behandlung wünschenden Person, der Heftigkeit der Falten und/oder Gesichtsasymmetrie, der Methode und Häufigkeit der Anwendung und der einzelnen zu verwendenden Peptide.
Die Überreichung der die Peptide der Erfindung enthaltenden kosmetischen Zusammensetzung kann in jeglicher Form erfolgen, die zur Anwendung geeignet ist, z.B. fest, flüssig oder halbfest, wie in Cremes, Salben, als Gel oder Lösungen, und die Applikation dieser Zusammensetzungen kann durch jegliches geeignete Mittel erfolgen, vorzugsweise lokal, so werden sie die kosmetisch akzeptable Hilfssubstanz enthalten, die zum Erhalt der jeweiligen gewünschten Form der Handhabung erforderlich ist. In einer bevorzugten und besonderen Ausführungsform sind die Peptide der Erfindung eingekapselt in Liposome, zusammen mit (optional) einem anderen oder anderen (COOH) Peptid(en), die den anderen Komponenten des kosmetischen Präparats hinzugesetzt werden. Einen Überblick über die verschiedenen kosmetischen Formen zur Anwendung aktiver Verbindungen und über die für ihren Erhalt erforderlichen Hilfssubstanzen kann zum Beispiel im Textbuch „Cosmetologia de Harry" (Harry's Cosmetology), Wilkinson & Moore, Ed. Diaz de Santos (1990) gefunden werden.
Deshalb ist ein zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung der Gebrauch der Peptide der Erfindung bei der Zubereitung kosmetischer Kompositionen für die Behandlung von Gesichtsfalten und/oder Gesichtsasymmetrie.
Die Erfindung liefert auch eine Methode für die kosmetische Behandlung von Gesichtsfalten und/oder -asymmetrie bei Säugetieren, vorzugsweise Menschen, die daraus besteht, eine kosmetisch wirksame Menge von mindestens einem Peptid der Erfindung beim Säugetier mit Gesichtsfalten und/oder -asymmetrie anzuwenden, zusammen mit (optional) einem oder mehreren (COOH) Peptiden, vorzugsweise in der Form einer sie enthaltenden kosmetischen Zusammensetzung.
Zusätzlich sind die Peptide der Erfindung tauglich für die Behandlung von spastischen Krankheiten, zum Beispiel Tonusstörungen, Strabismus, Blepharospasmen, Gesichtsskoliose, Tics, us.w.; und/oder als Neuroprotektoren bei der Behandlung von neurologischen Störungen und/oder neurodegenerativen Krankheiten.
Unter den besagten neurologischen Störungen gibt es akute neurologische Krankheiten, zum Beispiel solche, die in den ersten Stadien von zerebraler Ischämie stattfinden. Es ist eine bekannte Tatsache, dass während eines ischämischen Prozesses eine unkontrollierte Freisetzung von dem Neurotransmitter Glutamat in der betroffenen Zone stattfindet. Dieser Neurotransmitter interagiert mit spezifischen neuronalen Membranrezeptoren, wobei ein massives Einströmen von Kalziumionen in das Neuron bewirkt wird. Das intrazelluläre Kalzium führt zur Freisetzung von mehr Glutamat, so eine Kettenreaktion hervorrufend. Darüber hinaus bewirkt der massive, verlängerte Zufluss von Kalzium in die Neuronen deren Tod, welcher sich in den Aufbau von nekrotischem Gewebe in der ischämischen Zone übersetzt. Das Fortschreiten des ischämischen Schadens kann klar gestoppt werden, zumindest teilweise, wenn die unkontrollierte Glutamatexozytose kontrolliert wird. Die Peptide der Erfindung können daher aufgrund ihrer Fähigkeit, Exozytose zu hemmen, geeignet sein, dem neuronalen Tod vorzubeugen und/oder den neuronalen Tod zu verlangsamen, der charakteristisch für den ischämischen Prozess ist, und würden auf diese Weise nützlich sein bei der Behandlung von Neuropathologien, die aufgrund exzessiver Glutamatexozytose auftreten, wie etwa, zum Beispiel, senile Demenz, Alzheimer-bezogene Demenz, AIDS-bezogene Demenz, Epilepsie, amiotrophe Sklerose, multiple/laterale Sklerose, us.w. In diesem Fall würde die Anwendung bei der Behandlung neurologischer Krankheiten ähnlich der für Botulinumtoxin A beschriebenen sein (18).
Die Peptide der Erfindung könnten daher Teil einer kombinierten Therapie (mit mehreren therapeutischen Zielen) sein, welche zum Gegenstand hat, Neurodegeneration effektiver zu stoppen.
Ein zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einem Peptid der Erfindung enthält, zusammen mit mindestens einem therapeutisch akzeptablen Bindemittel. In einer bestimmten Ausführungsform enthält besagte pharmazeutische Zusammensetzung auch ein oder mehrere (COOH) Peptide. Alternativ könnte die pharmazeutische Zusammensetzung der Erfindung eine therapeutisch effektive Menge eines Vektors enthalten, der mindestens aus einer Nukleinsäurenkette besteht, die ein Peptid der Erfindung enkodiert, zusammen mit mindestens einer Hilfssubstanz und/oder einem pharmazeutisch akzeptablen Bindemittel. Besagter Vektor kann in Gentherapie angewendet werden.
Die aktiven Produkte der Erfindung (Peptide oder Vektoren) können bei der Behandlung von pathologischer neuronaler Exozytose gehandhabt werden, die zum Beispiel in spastischen Krankheiten, neurologischen Störungen oder neurodegenerativen Krankheiten manifestiert werden, und zwar durch jegliches Medium, das Kontakt zwischen den Peptiden und dem Ort herstellt, an dem es im Säugetier, vorzugsweise im Menschen, wirken soll.
Die einzugebende therapeutische wirksame Menge des aktiven Produkts der Erfindung [Peptide oder Vektoren (Konstruktionen)], so wie auch die Dosierung für die Behandlung eines pathologischen Zustands mit den Peptiden und/oder der pharmazeutischen Zusammensetzung der Erfindung wird von zahlreichen Faktoren abhängen, einschließlich des Alters und des Zustands des Patienten, der Heftigkeit der Störung oder Krankheit, der Methode und Häufigkeit der Eingabe und der einzelnen Peptide, die benutzt werden sollen.
Die Überreichung der die Peptide oder Vektoren (Konstruktionen) der Erfindung enthaltenden pharmazeutischen Zusammensetzung, kann in jeglicher geeigneten Form der Eingabe sein, z.B. fest, flüssig oder halbfest, so wie Cremes, Salben, als Gel oder in Lösungen, und diese Zusammensetzung kann mit jeglichen geeigneten Mitteln eingegeben werden, zum Beispiel mündlich, parenteral oder lokal, so werden sie die pharmazeutisch akzeptablen Bindemittel enthalten, die zum Erhalt der gewünschten Eingabeform erforderlich sind. Einen Überblick über die verschiedenen pharmazeutischen Formen zur Eingabe von Medizin und über die für ihren Erhalt notwendigen Arzneiträger können zum Beispiel in „Tratado de Farmarcia Galénica" (Treatise on Galenic Pharmacy), C. Faulí i Trillo, 1993, Luzán 5, S.A. Ediciones, Madrid, gefunden werden.
Wie zuvor erwähnt wurde, könnten die Peptide der Erfindung Teil einer kombinierten Therapie zum Zweck der wirksameren Aufhaltung von Neurodegeneration bilden. In diesem Fall liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die mindestens ein Peptid der Erfindung enthält, zusammen mit (optional) einer anderen oder anderen die neuronale Exozytose hemmenden Verbindung(en), und zusammen mit mindestens einer für ein anderes therapeutisches Ziel intendierten Droge, ausgewählt aus der von einem neuronalen Glutamatrezeptor-Blocker, einer Kalzium chelatbildenden Verbindung, einem Anti-Oxidanten, einem Freie-Radikale-Zerstörer und deren Kombinationen gebildeten Gruppe.
In einer bestimmten Ausführungsform kann die besagte Zusammensetzung, die in kombinierter Therapie nützlich ist, mindestens ein Peptid der Erfindung enthalten, zusammen mit (optional) einer anderen oder anderen neuronale Exozytose hemmenden Verbindung(en) und einem neuronalen Glutamatrezeptor-Blocker. In einer anderen Ausführungsform dieser Erfindung könnte besagte Zusammensetzung mindestens ein Peptid dieser Erfindung enthalten, zusammen mit (optional) einer anderen oder anderen neuronale Exozytose hemmenden Verbindung(en), einem neuronalen Glutamatrezeptor-Blocker, einer Kalzium chelatbildenden Verbindung, einem Anti-Oxidanten und/oder einem Freie-Radikale-Zerstörer. Unter den neuronale Exozytose hemmenden Verbindungen sind Peptide vom Carboxyl-Ende des SNAP-25, identifiziert als (COOH) Peptide. Viele andere Beispiele für Zusammensetzungen können vorgeschlagen werden, die alle die Notwendigkeit gemeinsam haben, Neurotransmitter-Exozytose zu kontrollieren.
Ein zusätzlicher Gegenstand dieser Erfindung ist die Benutzung von Peptiden der Erfindung oder von Vektoren, die mindestens eine Kette besitzen, die ein Peptid der Erfindung enkodiert, in der Vorbereitung einer Medizin für die Behandlung von pathologischen Krankheiten und Störungen, die durch pathologische neuronale Exozytose vermittelt werden, wie etwa spastische Krankheiten, neurologische Störungen und/oder neurodegenerative Krankheiten.
Zusätzlich liefert die Erfindung eine Methode für die Behandlung von pathologischen Krankheiten und Störungen in Säugetieren, die durch pathologische neuronale Exozytose vermittelt werden, wie zum Beispiel spastische Krankheiten, neurologische Störungen und/oder neurodegenerative Krankheiten, welche darin besteht, besagtem, an der vorbezeichneten pathologischen Krankheit oder Störung leidenden Säugetier eine therapeutisch effektive Menge von mindestens einem Peptid der Erfindung, oder von einem Vektor, der mindestens eine DNA Kette enthält, die das Peptid der Erfindung enkodiert, einzugeben, vorzugsweise in Form einer sie enthaltenden pharmazeutischen Zusammensetzung. In einer bestimmten Ausführungsform dieser Erfindung enthält besagte pharmazeutische Zusammensetzung, zusätzlich zu dem Peptid oder den Peptiden der Erfindung, ein oder mehrere (COOH) Peptide.
Die folgenden Beispiele dienen zur Veranschaulichung der Natur dieser Erfindung und sollten nicht in einem einschränkenden Sinn hinsichtlich dieser Erfindung betrachtet werden.
BEISPIEL 1
Neurotransmitter-Exozytose-hemmende Peptide
1.1 Peptid-Synthese
Die in SEQ.ID.Nr.2, SEQ.ID.Nr.3, SEQ.ID.Nr.5 und SEQ.ID.Nr.6 aufgezeigten Peptide wurden zusammengefügt mit konventionellen Methoden für festphasige chemische Peptidsythese, Fmoc und/oder Boc-gestützte sythetische Methodologie nutzend (16). Die resultierenden Peptide wurden gereinigt durch eine Hochleistungs-Flüssig-Chromatographie (HPCL) und wurden analysiert durch Massenspektrometrie.
1.2 Bewertung der biologischen Aktivität
Zur Bewertung der biologischen Aktivität der in Beispiel 1.1 erhaltenen Peptide wurde ein Test entwickelt, der die Stärke besagter Peptide bezüglich der Hemmung der Freisetzung von Katecholaminen, verursacht durch Kalzium in chromaffinen Zellen, bewertet, so wie auch ein Wiederherstellungstest im Hinblick auf den Fusionskomplex (SNARE), im Reagenzglas.
1.2.1 Hemmung der Freisetzung von Katecholaminen
Dieser Test wurde durchgeführt, um die neuronale Exozytose hemmenden Fähigkeiten der in Beispiel 1 zusammengesetzten Peptide zu verifizieren. In diesem Test wird die Stärke besagter Peptide bei der Hemmung der Freisetzung von Katecholaminen (Norepinephrin und Epinephrin), verursacht durch Kalzium in chromaffinen Zellen (von suprarenalen Ochsendrüsen erhalten), durchlässig gemacht mit dem Reinigungsmittel Digitonin, übereinstimmend mit der Methode beschrieben von Gutiérrez et al. (1995 und 1997).
Kurz gesagt, die chromaffinen Zellkulturen werden mit [³H]-Epinephrin und [³H]-Norepinephrin eingelegt, mit 20 μM Digitonin durchlässig gemacht, und mit Kalzium (10 μM) stimuliert in Anwesenheit der Peptide, die es zu testen gilt (getrennt oder gemischt), und gemessen wird die Menge an Radioaktivität, die von den Zellen zu dem extrazellulären Medium freigesetzt wird, und welche eine Reflektion der Exozytose von [³H]-Epinephrin und [³H] Norepinephrin ist.
Die gewonnenen Resultate hinsichtlich der Hemmung der Freisetzung von Katecholaminen in durchlässig gemachten chromaffinen Zellen waren folgende:

a) Das Peptid in SEQ.ID.Nr.2, vom Amino-Ende des SNAP-25, bei einer Konzentration von 1 mM, blockierte ungefähr 20 % der Freisetzung von Katecholaminen in durchlässig gemachten Chromaffinzellen.
b) Das Peptid in SEQ.ID.Nr.3, vom Amino-Ende des SNAP-25, bei einer Konzentration von 1 mM, hemmte ungefähr 35 % der Freisetzung von Katecholaminen in durchlässig gemachten Chromaffinzellen.
c) Die Peptide in SEQ.ID.Nr.5 und SEQ.ID.Nr.6, vom Carboxyl-Ende des SNAP-25, bei einer Konzentration von 1 mM, hemmten die Sekretion veranlasst durch Ca²+ in Chromaffinzellen durchlässig gemacht mit Digitonin zu ungefähr 40 %; und
d) Mischungen von aus einem der in SEQ.ID.Nr.2 oder SEQ.ID.Nr.3 und einem der in SEQ.ID.Nr.5 oder in SEQ.ID.Nr.6 aufgezeigten Peptide, bei einer Konzentration von 0,5 mM für jedes von ihnen, hemmten die Freisetzung von Katecholaminen in durchlässig gemachten Chromaffinzellen um ungefähr 55 %.

Nimmt man alles zusammen, zeigen diese Resultate, dass beide Typen von Peptiden, die vom Amino-Ende und die vom Carboxyl-Ende, Katecholamin-Exozytose hemmen, und dass die kombinierte Nutzung von Peptiden vom Amino-Ende und vom Carboxyl-Ende die biologische Aktivität stärken, die für jeden Peptidtyp getrennt zu beobachten war.
1.2.2 In vitro Wiederherstellung
Dieser Test wurde durchgeführt, um die Fähigkeit der in Beispiel 1.1 erhaltenen Peptide, in den Aufbau und die Stabilität des Fusionskomplexes (SNARE) einzugreifen, näher zu bestimmen. Der Test besteht daraus, den Wiederaufbau des Fusionsproteinkomplexes mit in Escherichia coli produzierten, rekombinanten Proteinen im Reagenzglas zu bewerten. Die Wiederaufbautests, gestützt auf ELISA (Enzym-verbundene Immun-Erprobungs-) Methoden, enthalten die Immobilisierung des Proteins SNAP-25 in 96-well plates Microplättchen, und den nachträglichen Aufbau des Fusionskomplexes durch Hinzufügung des Proteins VAMP und Syntaxin unter An- und/oder Abwesenheit der Peptide der Erfindung. Die Ermittlung des Komplexes wurde durch Gebrauch eines Antikörpers gegen Protein Syntaxin (Anti-Syntaxin) durchgeführt, gefolgt von einem Antikörper, der den Anti-Syntaxin Antikörper erkennt, kovalent angehangen eine Peroxidase. Die Menge an Fusionsproteinkomplex wurde ermittelt durch Hinzufügen von 1,2-phenylenediamine Dichloride, deren Reaktion mit der Peroxidase ein Produkt mit einer orange-gelben Farbe erzeugt, das 492 nm in einem sauren Medium absorbiert.
Die erhaltenen Daten zeigen, dass die Anwesenheit der in Beispiel 1.1 aufgezeigten Peptide während des Zusammenbaus des Fusionskomplexes diesen in bedeutender Weise vermindern. Der Mechanismus der Aktion besagter Peptide scheint daher zu implizieren, dass besagte Peptide den Aufbau und die Stabilität des Fusionsproteinkomplexes (SNARE) störend beeinflussen.
BIBLIOGRAPHIE

1. Schiavo, G., Rossetto, O. and Montecucco, C. Bases Moleculares del tétanos y del botulinmo (Molecular bases of tetanus and botulism). Investigación y Ciencia 234, 46-55.
2. Montecucco, C. and Schiavo, G. (1994). Mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins. Mol. Microbiol. 13, 1-8.
3. Schiavo, G., Rosetto, O., Benfenati, F., Poulain, B. und Montecucco, C. (1994). Tetanus and botulinum neurotoxins are zinc proteases specific for components of the neuroexocytosis apparatus. Ann. NY Acad. Sci. 710, 65-75.
4. Calakos, N. und Scheller, R.H. (1996). Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description. Physiol. Rev. 76, 1-29.
5. Sutton, R.B., Fasshauer, D., Jahn, R. und Brunger, A.T. (1998). Crystal structure of a SNARE complex involvedin synaptic exocytosis at 2.4A resolution Nature 395, 347-353.
6. Jankovic, J. und Brin, F.M. (1991). Therapeutic uses of botulinum toxin. New Engl. J. Med 324, 1186-1194.
7. Jankovic, J. (1994). Botulinum toxin in movement disorders. Curr. Opin. Neurol. 6, 358-366.
8. Jankovic, J. and Brin, M.F. (1997). Botulinum toxin: historical perspective and potential new indications. Muscle Nerve Suppl. 6, S129-S145.
9. Davis, L.E. (1993). Botulinum toxin -from poison to medicine. West J. Med, 128, 25-28.
10. Hughes, A.J. (1994). Botulinum toxin in clinical practise. Drugs 48, 888-893.
11. Hambleton, P. (1992). Clostridium botulinum toxins: a general review of involvement in disease, structure, mode of action and preparation for clinical use. J. Neurol. 239, 16-20.
12. Borodic, G.E. and Pearces, L.B. (1994). New concepts in botulinum toxin therapy. Drug Safety 11, 145-152.
13. Brin, M.F., Blitzer, A., Stewart, C., Pine, Z., Borg-Stein, J., Miller, J., Nagalapura, N.S., und Rosenfeld, D.B. (1993). Disorders with excessive muscle contraction: Candidates for treatment with intramuscular botulinum toxin ("Bo Tox"). Botulinum and Tetanus Neurotoxins (Ed. B.R. DasGupata), 559-576.
14. Gutiérrez, L.M., Viniegra, S., Rueda, J., Ferrer-Montiel, A.V., Reig, J.A., Montal, M., and Viniegra, S. (1995). A peptide that mimics the carboxy terminal domain of SNAP-25 blocks Ca²+ dependent exocytosis in chromaffin cells. FEBS Lett 372, 39-43.
15. Augine, G.J., Burns, M.E., DeBello, W.M. and Schweizer, F.E. (1996). Exocytosis: Proteins and perturbations. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 36, 659-701.
16. Pennington, M.W. and Dunn, B.N. (1994). Peptide synthesis protocols. Humana Press, Totowa.
17. Gutiérrez, L.M., Viniegra, S., Rueda, J., Ferrer-Montiel, A.V., Canaves, J.M. und Montal, M. (1997). A peptide that mimics the C-terminal sequence of SNAP-25 inhibits secretory vesicle docking in chromaffin cells. J. Biol. Chem. 272, 2634-2639.
18. Clarke, C.E. (1992). Therapeutic potential of botulinum toxin in neurological disorders. Quart. J. Med. 299, 197-205.

LISTE DER KETTEN

Claims

Ein Peptid, bestehend aus einer Aminosäurenkette, die aus der Aminosäurenkette von SEQ.ID.NO.2 oder der Aminosäurenkette von SEQ.ID.NO.3 ausgewählt wurde.
Peptid entsprechend Anspruch 1, bei dem die Aminosäuren des besagten Peptids D-Aminosäuren oder L-Aminosäuren sind.
Peptid entsprechend Anspruch 1, bei dem die Aminosäure am N-Terminus des Peptids azetyliert ist.
Peptid entsprechend Anspruch 1, bei dem die Aminosäure am C-Terminus des Peptids amidiert ist.
Peptid entsprechend Anspruch 1, bei dem das Peptid außerdem eine reversible chemische Modifikation enthält, die die Bioverfügbarkeit erhöht und die Durchdringung der Bluthimbarriere und des Epithelgewebes erleichtert.
Eine isolierte Nukleinsäurenkette, die ein Peptid entsprechend einem der Ansprüche 1 bis 5 enkodiert.
Nukleinsäurenkette entsprechend Anspruch 6, bei der die besagte Nukleinsäure aus zweikettigem DNA, einkettigem DNA und RNA ausgewählt wird.
Ein Plasmid, das eine Nukleinsäurenkette gemäß Anspruch 6 umfasst.
Ein Expressionsvektor, der die Nukleinsäurenkette gemäß Anspruch 6 umfasst.
Eine Wirtszelle, die ein Peptid entsprechend einem der Ansprüche 1-5 ausdrückt.
Eine Mischung von Peptiden, die Folgendes umfasst: a) mindestens ein Peptid entsprechend einem der Ansprüche 1 bis 5; und b) mindestens ein Peptid mit einer Aminosäurenkette, die aus der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO.5 oder der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO 6.
Eine kosmetische Zusammensetzung, die eine kosmetisch wirksame Menge von mindestens einem der Peptide der Ansprüche 1 bis 5 umfasst, und zwar zusammen mit mindestens einem kosmetisch akzeptablen Hilfsstoff.
Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 12, die außerdem optional ein oder mehrere Peptide mit einer Aminosäurenkette enthält, die aus der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO.5 oder der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO 6 ausgewählt wurden.
Verwendung eines Peptids gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 5, zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung zur Behandlung von Gesichtsfalten und/oder Asymmetrien des Gesichts.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge von mindestens einem Peptid gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 5 zusammen mit mindestens einem pharmazeutisch akzeptablen Arzneiträger enthält.
Pharmazeutische Zusammensetzung entsprechend Anspruch 15, die zusätzlich optional ein oder mehrere Peptide mit einer Aminosäurenkette enthält, die aus der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO.5 oder der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO 6 ausgewählt wurde.
Pharmazeutische Zusammensetzung entsprechend Anspruch 15, die zusätzlich optional ein Medikament enthält, das aus der Gruppe bestehend aus einem neuronalen Glutamatrezeptorblocker, einem Chelat bildenden Kalziumagenten, einem Antioxidant, einem Freie-Radikale-Fänger und Mischungen derselben besteht, und, optional einen oder mehr zusätzliche neuronale Exozythose-Inhibitoren.
Pharmazeutische Zusammensetzung entsprechend Anspruch 17, die außerdem optional ein oder mehrere Peptide mit einer Aminosäurenkette enthält, die aus der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO.5 oder der Aminosäurenkette der SEQ.ID.NO 6 ausgewählt wurde.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge eines Vektors mit mindestens einer Nukleinsäurenkette entsprechend Anspruch 6 enthält, kodierend für ein Peptid entsprechend einem der Ansprüche von 1 bis 5, zusammen mit mindestens einem Hilfsstoff und/oder einem pharmazeutisch akzeptablen Arzneiträger.
Verwendung eines Peptids entsprechend einem der Ansprüche 1 bis 5 für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung neurologischer Störungen und neuro-degenerativer Krankheiten.
Verwendung eines Peptids entsprechend Anspruch 20, bei der die genannten neurologischen Störungen spastische Krankheiten aus der Gruppe der Tonusstörungen, Blepharospasmen, Strabismus, Gesichtsskoliose und Tics sind.
Verwendung eines Peptids entsprechend Anspruch 20, bei der die genannten neuro-degenerativen Krankheiten aus der Gruppe der zerebralen Ischämie, senilen Demenz, durch Alzheimer verursachte Demenz, durch AIDS verursachte Demenz, Epilepsie, amiothrophe Sklerose und multiple/laterale Sklerose ist.
Verwendung eines Vektors, der mindestens eine Nukleinsäurekette gemäß Anspruch 6 enthält, kodierend für ein Peptid entsprechend einem beliebigen der Ansprüche 1 bis 5, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung für die Behandlung neurologischer Störungen und neuro-degenerativer Krankheiten.
Verwendung eines Vektors gemäß Anspruch 23, bei dem die besagten neurologischen Störungen spastische Krankheiten aus der Gruppe Tonusstörungen, Blepharospasmen, Strabismus, Gesichtsskoliose und Tics sind.
Verwendung eines Vektors gemäß Anspruch 23, bei dem die neurodegenerative Krankheit aus der Gruppe zerebrale Ischämie, senile Demenz, durch Alzheimer verursachte Demenz, durch AIDS verursachte Demenz, Epilepsie, amiothrophe Sklerose und multiple/laterale Sklerose ausgewählt wurde.