DE60017757T2

DE60017757T2 - Humanisierte biomaterialien enthaltend monozyten oder makrophagen, ein verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendungen

Info

Publication number: DE60017757T2
Application number: DE60017757T
Authority: DE
Inventors: Jacques Bartholeyns
Original assignee: IDM Immuno Designed Molecules
Current assignee: IDM Immuno Designed Molecules
Priority date: 1999-08-30
Filing date: 2000-08-22
Publication date: 2006-01-12
Anticipated expiration: 2020-08-23
Also published as: EP1207919B1; AU776260B2; AU7278600A; DE60017757D1; ES2237452T3; US6881413B1; ATE287736T1; CA2378755A1; WO2001015753A1; EP1207919A1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf neue humanisierte Biomaterialien, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Anwendungen.
Gewebeerneuerung ist nach schweren Knochenfrakturen, Knorpelschwund oder allgemein zunehmender Gebrechlichkeit während des Alterns erforderlich.
Künstliche metallische oder sogar keramische Prothesen werden nicht wirklich gut in das Wirtsgewebe integriert und oft ist ein Austausch durch einen erneuten chirugischen Eingriff nach einigen Jahren nötig. Das ist ein grosses Problem und ein Nachteil für ältere Personen.
Autologe Knochen- oder Knorpelgewebetransplantationen sind sehr schwierig und kostspielig. Mittels neuer Technologien werden poröse Matrizen entwickelt, die als Stützprothesen implantiert werden.
Diese Matrizen können letztendlich mit Wachstumsfaktoren für die Gewebe-Regeneration oder sogar mit Knochenmark-Stammzellen gefüllt werden.
Die Fixierung von Zellen oder Faktoren in die porösen Matrizen ist jedoch mit einer sehr langsamen und anhaltenden Abgabe von Wachstumsfaktoren sehr schwierig zu verwirklichen. Die ideale Mischung und die Konzentration der Faktoren, die erforderlich sind, sind unbekannt.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, ein homogenes humanisiertes, bioaktives Biomaterial (zum Beispiel poröse Keramik) bereitzustellen, welches für Implantationszwecke verwendet werden kann und welches nicht die Probleme der Langzeitbiokompatibilität des Standes der Technik aufweist.
Ein weiteres Ziel der Erfindung ist es, ein bioaktives Biomaterial bereitzustellen, welches Gewebewuchs (zum Beispiel Knochen und Knorpel) in seinem porösen Raum ermöglicht und die Integrierung von transplantiertem Biomaterial in die umliegenden Gewebe (lebensfähigen Knochen) sichert.
Ein weiteres Ziel der Erfindung ist, langlebige Prothesen bereitzustellen und somit die Notwendigkeit eines Austausches der biomateriellen Prothesen nach 10 Jahren, welche bis heute oft nötig ist, zu vermeiden.
Diese Ziele werden durch die vorliegende Erfindung erreicht. Die Erfindung betrifft humanisiertes Biomaterial umfassend ein poröses biokompatibles Kompositmaterial, welches spezifisch angepasst ist und mit von Monozyten abstammenden Zellen, vorzugsweise mit Makrophagen, implantiert wird.
Der Ausdruck "humanisiert" bedeutet, dass das poröse Biomaterial mit menschlichen Zellen, welche von Blutmonozyten abstammen, besiedelt wurde.
Der Ausdruck "biokompatibles Kompositmaterial" bedeutet ein Material, welches sich aus einem oder mehreren der folgenden Materialien zusammensetzt, die nachgewiesener Maßen nicht giftig für menschliches Gewebe sind (Kohlenstofffasern, Keramik, Kalziumphosphate, Metalloxide, Kollagenpolymere ...)
Der Ausdruck "porös" bedeutet, dass das Biomaterial und vorzugsweise die Keramik, Poren von etwa 100 zu 2000 Mikrometer Durchmesser aufweisen.
Der Ausdruck "spezifisches und implantiertes" Material bedeutet, dass die Form und Grösse des Biomaterials speziell für einen Patienten und eine Implantationsstelle ausgelegt wurden.
Dem Ausdruck "von Monozyten abstammende Zellen" entsprechen humane mononukleare Zellen, die aus dem Blut isoliert, mit Monozyten angereichert und bei 37 Grad Celcius in einem geeignetem Medium für 5 bis 10 Tage kultiviert wurden, um Gewebetypmakrophagen zu erhalten.
Die von Monozyten abstammenden Zellen, die in der Erfindung eingesetzt werden, sind zum Beispiel solche, die in PCT/EP 93/01232, WO 99/13054, EP 96/901848.0-2107, WO 97/44441 beschrieben werden.
In einer bestimmten Ausführungsform der Erfindung enthalten die oben beschriebenen von Monozyten abstammenden Zellen, exogene Präparate wie zum Beispiel Pharmazeutika, Proteine, Wachstumsfaktoren von Interesse.
In einer anderen Ausführungsform enthalten die oben beschriebenen von Monozyten abstammenden Zellen exogene, für ein bestimmtes Protein kodierende, Desoxyribonukleinsäuren in ihrem Zytoplasma.
Die im Wesentlichen irreversible Humanisierung der Matrizen, die, wie in der vorliegenden Erfindung beschrieben, aus biokompatibel zusammengesetzten Material bestehen, ermöglichen ein physiologisches Zusammenspiel zwischen den aus einem biomedizinischen Gemisch hergestellten und eingepflanzten Prothesen und den Wirtszellen im Körper. Dieses Zusammenwirken mit wirtseigenen Gewebszellen und der extrazellulären Matrix erlaubt die Rekonstitution epithelialer Zellschichten und eines Netzwerkes aus Kappilaren in das implantierte Biomaterial durch örtliche Vermehrung und Sprossung von Endothelzellen.
Die von Monozyten abstammenden Zellen, im Besonderen die Makrophagen, die verwendent werden, um das poröse Material in der Erfindung in vitro zu humanisieren, sind besonders angemessen, um die Integration und die in in vivo Lebensdauer der biokompatiblen Prothesen zu erhöhen.
Vorteilhafter Weise ist das humanisierte Biomaterial der Erfindung homogen.
Gemäß einer vorteilhaften Ausführungsform des humanisierten Biomaterials der Erfindung wird das biokompatible zusammengesetzte Material unter den folgenden Materialien ausgewählt: Mikrofasern, keramisches Material, Metalloxide, wie zum Beispiel Aluminiumoxid, Kalziumphosphatkeramik, Glas- oder Karbonfasern, Hydroxylapatit, Siliciumkarbid oder Siliciumnitrid, Kollagenpolymere oder eine Mischung aus diesen verschiedenen Materialen.
Gemäß einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform des humanisierten Biomaterials der Erfindung müssen die menschlichen Makrophagen durch ex vivo Differenzierung von Blutmonozyten, die zu lebenden Makrophagen führt, gewonnen werden. Sie werden zusammen mit dem porösen Biomaterial unter Bedingungen kultiviert, zum Beispiel einige Stunden bei 37 Grad Celcius, durch welche das Eindringen und das Anhaften in und an das Biomaterial möglich gemacht wird. Ausserdem ermöglichen diese Bedingungen die wichtige unumkehrbare Bindung der lebenden Makrophagen an das Biomaterial, welches nun mit Makrophagen des Patienten humanisiert und für die Implantation bereit ist.
Der Ausdruck "im Wesentlichen unumkehrbare Bindung" bedeutet, dass die Makrophagen durch zahlreiche Kontakte fest an das Material gebunden sind und durch physiologische Bedingungen nicht wieder von diesem abgelöst werden können.
Die Erfindung bezieht sich auch auf ein den lebenden Körper stützendes Implantat, gekennzeichnet durch die Tatsache, dass es humanisierte Biomaterialen, wie oben festgelegt, beinhaltet oder aus ihnen besteht. Es ist vorzugsweise als Gerüstform, gewebestützende Schwämme, Knochen oder Knorpel strukturiert.
Der Ausdruck "den lebenden Körper stützendes Implantat" bezeichnet ein Implantat, welches zum Beispiel die physikalische Form und die Robustheit eines Knochens, welcher ersetzt werden muss, besitzt.
Der Ausdruck "Gerüst" bezeichnet eine physikalische, letztendlich metallische Konstruktion, welche das Biomaterial (Keramik oder andere) in der zweckmäßigen Form aufrechterhält.
Der Ausdruck "gewebestützende Schwämme" bezeichnet ein weiches Implantat, zum Beispiel aus Kollagen geformt, welches mit Makrophagen humanisiert wird, bevor es in den Körper eingesetzt wird.
Die Erfindung bezieht sich auch auf den Einsatz eines humanisieren Biomaterials gemäß der Erfindung oder auf ein den lebenden Körper stützendes Implantat gemäß der Erfindung für die Herstellung eines Gewebeimplantats, welches für das Ersetzen oder das Reparieren von defektem Gewebe, wie defekte Knochen, Knorpel, Zahngewebe, fasriges Gewebe, faserknorpel stützendes Gewebe, bestimmt ist.
Der Ausdruck "fasriges Gewebe" bezeichnet organumgebende Gewebe, welche das Organ stützen und welche die Form dieses Körperteils aufrechterhalten. Sie sind hauptsächlich durch Epithelschichten geformt.
Gemäß einer anderen vorteilhaften Ausführungsform bezieht sich die Erfindung auf den Einsatz bei der Herstellung eines Medikamentes aus einem humanisierten Biomaterial gemäß der Erfindung oder aus einem den lebenden Körper stützendes Implantat der Erfindung, wobei die von Monozyten abstammenden Zellen oder Makrophagen in Bezug auf die Gewebe, die ersetzt oder repariert werden müssen, autolog sind und somit das Biomaterial oder das den lebenden Körper stützende Implantat als selbst erkannt wird.
Der Ausdruck "Implantat wird als selbst erkannt" bedeutet, dass es Zellen (zum Beispiel Makrophagen) vom Patienten, in welchen es eingepflanzt wird, enthält und darum autolog zum Wirt ist.
Ein Verfahren für die Herstellung eines humanisierten Biomaterials gemäß der Erfindung umfasst die folgenden Schritte:

– die Zubereitung des porösen Biomaterials strukturiert in Knochenform oder als Knorpel
– die Gewinnung der Makrophagen aus Blutmonozyten
– das Eintauchen des Biomaterials in eine für die Makrophagenkultur geeignete physiologische Lösung, zu der anschliessend die Makrophagen zugegeben werden (zum Beispiel phosphatgepufferte Salzlösung, Medium wie RPMI, IMDM, AIMV)
– die Zugabe der Makrophagen zu der Lösung unter Bedingungen, die die Bindung an das Biomaterial ermöglicht, vorzugsweise für 1 bis 20 h bei 37 Grad Celsius, 5% CO₂ und 95% Luft
– das Waschen des Biomaterials und dessen Konservierung in physiologischem Medium bis zu seiner Benutzung

Ein Prozess für die Bereitstellung eines den lebenden Körper stützenden Implantats gemäß der Erfindung umfasst folgende Schritte:

– die Herstellung eines spezifisch angepassten porösen Implantats oder Gerüstes, bestehend aus biokompatiblen Material wie oben definiert
– die Gewinnung der Makrophagen aus Blutmonozyten des Patienten, welcher das spezifisch angepasste Biomaterialimplantat benötigt
– die Ko-Kultivierung der Makrophagencokulturen und des Implantats in geeignetem Medium unter Bedingungen, die die Durchdringung und das Anhaften an das Biomaterial ermöglichen, vorzugsweise bei 37 Grad Celsius, 5% CO₂ in wasserabstoßenden Beuteln oder Containern bis zum Einpflanzen des Implantats.

Die Erfindung bezieht sich auch auf die Verwendung bei der Herstellung eines Medikamentes des humanisieren Biomaterials oder eines den lebenden Körper stützenden Implantats, welches in ein Gewebe eingepflanzt werden kann, für die in vitro, in vivo oder ex vivo Zustellung von Faktoren, ausgewählt aus der Gruppe der Chemokine und/oder Monokine, und/oder Cytokine und/oder Wachstumsfaktoren. Die abgegebenen Faktoren sind nützlich für die lokale Rekrutierung von Zellen, die für Gewebewachstum (wie zum Beispiel Osteoblasten, Chondrozyten, Fibroblasten, epitheliale Zellen ....), und/oder für die Neovaskularisierung um das eingepflanzte Biomaterial herum, und/oder für die Abgabe von Wachstumsfaktoren, die die Proliferation von Zellen und/oder das Wachstum von neuem Gewebe stärken.
In der Tat erhalten die Makrophagen die Gewebehomöostase aufrecht. Sie ermöglichen dies durch die Absonderung von mindestens 80 Wachstumsfaktoren oder Monokinen, welche wiederum die Vermehrung von mesenchymalen Zellen (Fibroblasten, ....), Endothelzellen, Chondrozyten, Osteoblasten, epithelialen Zellen .... kontrollieren und in Gang setzen.
Sie sondern auch Enzyme und Vermittler ab, welche das Wachstum und die Erneuerung der umliegenden Zellen und Gewebe ermöglichen.
Die Schlüsselfaktoren, die von Makrophagen abgesondert werden und die die Gewebeintegration, die Regenerierung und das Wachstum von mesenchymalen Zellen unterstützen, sind: IGF1 und TGFs, aber auch PDGF, bFGF, MDGF, GM-CSF, NAF, IL-8, TNF, Angiogenin und angiogene Faktoren. Diese Wachstumsfaktoren ermöglichen ausserdem den Ablauf aller Schritte, die für die Angiogenese nötig sind. Weiterhin ermöglichen sie die Gefäßneubildung und die Wiederherstellung von Blutmikrokapillaren, die das eingepflanzte Biomaterial umgeben.
In diesem Aspekt synthetisieren die Makrophagen 10 mal mehr Proteine, viel mehr Wachstumsfaktoren und weniger entzündungsverursachende Vermittler als die Monozyten.
Tabelle 1
Gemäß einer vorteilhaften Darstellungsform der Erfindung wandern die Makrophagen zunächst in das poröse Biomaterial ein und verbinden sich durch sehr starkes Anhaften und Ausbreiten irreversibel mit dieser Prothese. Wenn sie unter physiologischen Bedingungen aufbewahrt werden, sind die Makrophagen sehr lang lebende Zellen. Sie können einige Monate bis hin zu etlichen Jahren nach der Implantation am Leben bleiben. Während dieser Zeit werden die Makrophagen weiterhin Wachstumsfaktoren und Zytokine an ihre Umgebung abgeben. Diese Faktoren werden in sehr geringen Konzentrationen (10^–10 M) auf die umliegenden Zellen und Gewebe wirken.
Weiterhin präsentieren die Makrophagen Rezeptoren für Zytokine, Hormone und Zucker auf ihren Membranen, die es möglich machen, auf die Bedürfnisse ihrer lokalen Mikroumgebung einzugehen, und deren Abgabe an die nähere Umgebung dem Zustand um das Biomaterial herum zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Einpflanzung anzupassen.
Die Wachstumsfaktoren, die von den Makrophagen abgegeben werden, liefern die allgemeinen Erfordernisse für die Gewebeerneuerung, die Differenzierung und die lokale Angiogense. Die Chemokine, welche fortlaufend in einem Konzentrationsgradienten um das Implantat herum abgegeben werden, werden in und um die Prothese herum Zellen herbeilocken, die für die Rekolonisierung und die Integrierung des Biomaterials benötigt werden. Darum stellen die neuen spezifischen porösen Biomaterialien, die mit Wirtsmakrophagen besiedelt wurden, eine neuartige Biotoleranz und eine Dauerhaftigkeit adäquater Leistung bereit, die weit über diejenige von Prothesen hinausgeht, welche in Abwesenheit autologer Makrophagen verwendet werden. Die Anwendungsbereiche sind sehr weit im Bereich fester und knorpelartiger Prothesen, wie sie für Knochen- und Knorpelersatz gebraucht werden.
Gemäß einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform bezieht sich die Erfindung auf den Einsatz bei der Herstellung eines Medikaments des humanisierten Biomaterials oder des den Körper stützenden Implantats, welches als Ersatz von Stützgewebe wie zum Beispiel Knochen, Knorpel, Zahngewebe, Epithelialschichten und Unterhaut-Gewebematrix gebraucht wird.
Beispiel 1
Eine poröse Keramik aus Kalziumphosphat mit Poren von 200 bis 2000 Mikrometern (Porösität > 20% und < 80%) ist auf einer hydrophoben Halterung (Ethylen Vinylacetat) in Anwesenheit von 50 ml AIMV Kulturmedium (life-cell Gibco, Paisley GB) plaziert. Die Makrophagen werden zu diesem Präparat in einer Konzentration von 5·10⁶ Zellen pro Milliliter zugegeben. Sie werden nach sieben Tagen der Differenzierung von kultivierten Blutmonozyten gemäß des veröffentlichen Standes der Technik in Publikationen und Patenten (PCT/EP 93/01232, WO 99/13054, EP 96/901848.0-2107, WO 97/44441) gewonnen; ein Kontrollpräparat wird in Abwesenheit von Makrophagen mitgeführt. Das Präparat wird über Nacht bei 37 Grad Celsius, 5 proz. CO₂, 95 proz. Luft inkubiert, um das Festsetzen der Makrophagen an der Keramik zu ermöglichen.
Die poröse Keramik wird gespült und in der Anwesenheit von Fibroblasten und/oder in der Anwesenheit von Chondrozyten kultiviert, in beiden Fällen ist die Zellvermehrung für die poröse Keramik, welche mit Makrophagen besiedelt wurde, um 2 bis 10 mal höher verglichen zu der Kontrollkeramik.
Beispiel 2
Ein kleines Fragment der porösen Mikrokeramik wird in eine Kaninchenhornhaut eingepflanzt. Das inaktive Mikrokeramikstück ruft eine sehr kleine bis mäßige Entzündung und nur peripheres Wachstum von neuen Blutgefäßen vom Aussenring der Hornhaut ausgehend, hervor.
Im Gegensatz dazu ruft mit Makrophagen bedeckte Mikrokeramik, wie im Beispiel 1 beschrieben, eine grosse Gefäßneubildung in Richtung des Hornhautmittelpunktes hervor. Die Hornhaut wird vaskularisiert durch eine Einwanderung von endothelialen Zellen, welche aus dem Aussenring, der reich an Blutversorgung ist, entstehen und sie sprießen in Richtung des implantierten Biomaterials.
Hydroxyapatitfragmente (Endobon^®, Merck) von 100 +/– 20 mg und Stücke von einem Quadratzentimeter eines Propylengerüstes werden vorbereitet. Frische nicht aktive Makrophagen werden nach sieben Tagen durch die Differenzierung von Blutmonozyten in Kultur entsprechend des veröffentlichten Patentantrags (WO 94/26875, WO 99/13054, WO 96/22781, WO 97/44441) in IMDM (Iscove Modified Dulbecco Medium) Kulturmedium mit 2,5·10⁶ Zellen pro Milliliter suspendiert. Jedes Biomaterialfragment wird in einem Milliliter der Makrophagenlösung in sterilen Polypropylentubes für vier Stunden bei Raumtemperatur inkubiert.
Um die Bindung der Makrophagen an das Biomaterial zu überprüfen, werden die Zellen im Überstand nach der Inkubation gezählt. Nach der Inkubation mit Endobon^®, waren 12 bis 17% der zugegebenen Zellen im Überstand vorhanden (drei Experimente). Das zeigt, dass mehr als 2·10⁶ Makrophagen an 100 mg der porösen Keramik angelagert wurden. Nach der Inkubation mit dem Polypropylengerüst waren 23 bis 55% der anfangs zugegebenen Zellen im Überstand vorhanden. Das zeigt, dass eine Anlagerung von 1 zu 2·10⁶ Makrophagen pro Quadratzenitmeter des Gerüstes erfolgt ist.
In Nacktmäuse wird das Biomaterial eingepflanzt. Jede Maus erhält zwei Implantate des gleichen Typs, eines in jeder Flanke.
Die Mäuse werden nach 21 Tagen getötet. Die makroskopische Untersuchung zeigt keine großen Unterschiede zwischen den Biomaterialimplantaten ohne Makrophagen und den Biomaterialimplantaten, die mit Makrophagen besiedelt wurden.
Die mikroskopische Untersuchung der Gewebeproben in Paraffin zeigt, dass im Vergleich zu Biomaterialimplantaten ohne Makrophagen, die mit Makrophagen kolonisierten Biomaterialimplantate zuerst eine Entzündungserscheinung hervorrufen. Dies ist ein wichtiger Schritt um die Migration und das homing der kompetenten Zellen für die Gewebeerneuerung in Gang zu setzen. Ausserdem wurde die noch wichtigere Gefäßneubildung an der Implantationsstelle des mit Makrophagen kolonisierten Biomaterials beobachtet.
Die histologische Analyse des Gewebes in Harz bestätigt die Zunahme der Gefäßneubildung bei Mäusen, denen mit Makrophagen besiedeltes Biomaterial eingepflanzt wurde im Vergleich zu den Mäusen, denen das makrophagenfreies Biomaterial implantiert wurde.
Die therapeutischen Anwendungen für die Gewebeerneuerung wurden im Mensch, der nicht heilende Geschwüre trägt, bestätigt. Die Geschwüre wurden mit Gerüstmaterial, welches autologe Makrophagen aufwies, bedeckt und zeigen eine bessere Vernarbung, gemessen an Detersion und Größe des Geschwürs.

Claims

Humanisiertes Biomaterial, die ein poröses, angepasstes und implantiertes bioverträgliches Verbundmaterial enthält, mit Zellen die aus Monozyten ableiten, und zwar vorzugsweise Makrophagen, worin die aus Monozyten ableitenden Zellen mit demselben Biomaterial praktisch irreversibel gebunden sind, als einziger Zelltyp.
Humanisiertes Biomaterial nach Anspruch 1, worin das bioverträgliche Verbundmaterial unter den folgenden Materialien: Mikrofiber, Keramikmaterialien, Metalloxide wie Aluminiumoxid, Kalziumphosphakeramik, Glas- oder Kohlenfiber. Hydroxylapatit, Siliziumnitrid oder -carbid, Kollagenpolymere oder eine Mischung dieser verschiedenen Materialien gewählt wird.
Humanisiertes Biomaterial nach Anspruch 1 oder 2, worin die menschlichen Makrophagen durch ex vivo Differenzierung aus Blutmonozyten, die zu lebenden Makrophagen leiten, erhalten werden können, und unter Bedingungen, die ihr Eindringen und Adhäsion in das Biomaterial erlauben, gezüchtet werden, zum Beispiel während einigen Stunden bei 37 Grad, mit dem porösen Biomaterial, welches das Eindringen des Biomaterials sowie eine fast irreversible Bindung der lebenden Makrophagen zum Biomaterial erlaubt, das mit den Makrophagen des Patienten humanisiert und zur Implantation bereit ist.
Implantat für die Stützung eines lebenden Körpers, dadurch gekennzeichnet, dass es das nach Ansprüchen 1–3 humanisierte Biomaterial enthält, oder aus diesem Material besteht, und vorzugsweise als Gerüst, Gewebestützungsschwamm, Knochen oder Knorpel strukturiert ist.
Verwendung eines Biomaterials nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis oder eines Stützimplantats für einen lebenden Körper nach Anspruch 4, für die Herstellung eines Gewebeimplantats zum Ersatz oder Reparatur von einem defekten Gewebe, wie einem defekten Knochen, einem Knorpel, einem Dentalgewebe, einem fibrösen Gewebe oder einem fibrokartilaginösen Stützgewebe.
Verwendung eines humanisierten Biomaterials nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, oder eines Stützimplantats eines lebenden Körpers nach Anspruch 4, worin die aus Monozyten ableitenden Zellen oder die Makrophagen autolog in bezug auf das zu ersetzende oder zu reparierende Gewebe sind, welches die Erkennung des Biomaterials oder des Stützimplantats eines lebenden Körpers als selbst erlaubt.
Verfahren für die Herstellung eines humanisierten Biomaterials nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, das die folgenden Schritte enthält: – die Herstellung des strukturierten porösen Biomaterials als Knochen oder Knorpel, – die Herstellung von Makrophagen aus Blutmonozyten, – das Eintauchen des Biomaterials in eine für die Züchtung von nachher hinzugefügten Makrophagen angepasste physiologische Standardlösung (z. B. Phosphatpuffersalzlösung, Nährboden wie RPMI, IMDM, AIMV), – die Hinzufügung der Makrophagen der Lösung unter Bedingungen, die eine Bindung mit dem Biomaterial erlaubt, und zwar besonders während 1–20 Std. bei 37 Grad, 5 proz. CO₂ und 95 proz. Luft, – die Reinigung des Biomaterials und die Bewahrung bis zur Benutzung in einer physiologischen Umgebung.
Verfahren für die Herstellung eines Implantats als Stützung für einen lebenden Körper nach Anspruch 4, das die folgenden Schritte einschliesst – die Herstellung eines porösen Implantats oder eines angepassten Gerüstes, das aus bioverträglichem Material gebildet ist, nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3; – die Herstellung von Makrophagen aus Blutmonozyten des einen angepassten Biomaterial-Implantat brauchenden Patienten, – die Mitzüchtung von Makrophagen und vom Implantat in einem angepassten Nährboden, und zwar unter Bedingungen, die die Eindringung und die Anhaftung an das Biomaterial erlauben, wie besonders 37 Grad, 5 proz. CO2 in hydrophobischen Beuteln oder Behälter, bis zur Transplantation des Implantats.
Verwendung des humanisierten Biomaterials nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, oder eines Implantats zur Stützung eines lebenden Körpers nach Anspruch 4, für die Herstellung eines Implantats, welches Implantat in ein Gewebe implantiert werden kann, und zwar für die in vitro, in vivo oder ex vivo Lieferung von Faktoren, die aus der Gruppe des Chemokinen und/oder der Monokinen und/oder der Zytokinen und/oder der Wachstumfaktoren gewählt werden, worin die freigesetzten Faktoren für die lokale Anziehung von nötigen Zellen für das Zellwachstum (wie etwa Osteoblaste, Chondrozyte, Fibroblaste, Epithelzellen ...) und/oder für die Neovaskularisierung um das implantierte Biomaterial, und/oder für die Freisetzung von Wachstumsfaktoren, die die Zellproliferation und/oder das Wachstum von neuen Geweben unterhalten nützlich sind.
Verwendung des humanisierten Biomaterials nach irgendwelchem Anspruch 1 bis 3, oder eines Implantats für das Stützen eines lebenden Körpers nach Anspruch 4, für die Vorbereitung dieser Transplantierung, welche für den Ersatz von Stützgeweben wie etwa Knochen, Knorpeln, Dentalgeweben, Epithelialleiste und subkutane Gewebematrize benutzt werden kann.