DE60005947T2

DE60005947T2 - Zusammensetzungen zur modulierung der immunantwort und zur behandlung entzündlicher krankheiten

Info

Publication number: DE60005947T2
Application number: DE60005947T
Authority: DE
Inventors: V. Roger KENDALL; John Lawson
Original assignee: FoodScience Corp
Current assignee: FoodScience Corp
Priority date: 1999-05-21
Filing date: 2000-05-18
Publication date: 2004-07-29
Anticipated expiration: 2020-05-19
Also published as: ES2208330T3; US20020018787A1; CA2381441A1; WO2000071140A3; DK1183037T3; US20030180288A1; AU5022300A; WO2000071140A2; DE60005947D1; US7229646B2; JP2003500362A; ATE251910T1; EP1183037B1; EP1183037A2; AU777971B2; MXPA01011924A

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Diese Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von N,N-Dimethylglycin (DMG) in Kombination mit mindestens einer Komponente, die von Perna canaliculus abgeleitet ist, zur Herstellung eines Medikaments, welches Immunantworten moduliert, zur Behandlung von Entzündungserkrankungen im Menschen oder in Tieren.
N,N-Dimethylglycin (DMG), welches eine tertiäre Aminosäure ist, ist ein intermediärer Metabolit, der in geringen Mengen in vielen Nahrungsmitteln gefunden wird. Im Körper wird es aus Cholin gebildet, und es wurde als Nährstoff ohne Brennwert verwendet. Die physiologischen und potentiellen therapeutischen Wirkungen von N,N-Dimethylglycin wurden in den letzten Jahren untersucht. Literaturstellen, die N,N-Dimethylglycin und sein Potential betreffen, schließen die folgenden ein: Graber et al., 1981, J. of Infectious Diseases 143:101–105 (DMG-Stimulierung von sowohl der humoralen als auch der zellulären Immunität); Kendall und Graben, US-Patent-Nummer 4,385,068 (darin wird die DMG-Linderung der Wirkungen von übermäßiger Bestrahlung auf das Immunsystem diskutiert); Pacific Slope Biochemical Konferenz 1980, eine Veröffentlichung mit dem Titel "Decrease of Lactic Acid Concentration in Blood of Animals Given N,N-Dimethylglycine"; Ausgabe März 1982 von Equine Practice, ein Artikel mit dem Titel "Effect of a Nutritional Supplement Containing N,N-Dimethylglycine (DMG) on the Racing Standardbred" (DMG erhöhte die Sauerstoffverwertung und verringerte dadurch die Milchsäurelevel in Tieren unter extremem Stress); November bis Dezember 1982 Ausgabe von Canine Practice, ein Artikel mit dem Titel "A Clinical Evaluation of N,N-Dimethylglycine (DMG) and Diisopropylammonium Dichloroacetate (DIPA) on the Performance of Racing Greyhounds"; Februar, 1987 Ausgabe des Let's Live-Magazins, ein Artikel mit dem Titel "Dimethylglycine Update, New Studies Confirm DMG Improves Health" (DMG als immunomodulierendes Mittel); Februar, 1987 Ausgabe von Health Consciousness, ein Artikel mit dem Titel "N,N-Dimethylglycine and the Immune Response" (DMG als immunomodulierendes Mittel); 1987 jährliche ASM Konferenz, eine Veröffentlichung mit dem Titel "The Effect of DMG on the Immune Response of Rabbits" (DMG als immunomodulierendes Mittel); 27. Juni 1987 Ausgabe von The Blood Horse, ein Artikel mit dem Titel "DMG, Properties and Proprieties" (in Menschen stimulierte DMG B-Zellen, um stärkere Antikörper-Reaktionen zu erzeugen, und DMG verstärkte die Aktivität von T-Zellen und Makrophagen); Kendall et al., US-Patent-Nummer 4,994,492 (Behandlung von Melanom unter Verwendung von DMG); Kendall und Lawson, US-Patent-Nummer 5,026,728 (Behandlung von Arthritis und Entzündungen unter Verwendung von DMG); Kendall und Lawson, US-Patent-Nummer 5,118,618 (Verwendung von DMG zur Verstärkung der Antikörperproduktion).
Die Verwendung von Präparationen, die aus Pema canaliculus hergestellt werden, für eine therapeutische Wirkung, geht auf die letzten 25 Jahre seit Mitte der 70er Jahre zurück. Von den Ernährungseigenschaften und therapeutischen Eigenschaften von gefriergetrockneter Perna canaliculus bei der Linderung der Symptome von Arthritis wurde in Croft, 1979, Relief from Arthritis (Thorsons Publishing Group, Rochester, Vermont) berichtet. Untersuchungen bei Tier- und Menschenversuchen haben verschiedene Ergebnisse ergeben, zeigen aber alle, dass bestimmte Komponenten in den Muscheln potentiell hilfreich waren, um mit Arthritis im Zusammenhang stehende Entzündungen und Schmerz zu lindern. Bestimmte dieser Studien sind die folgenden: McFarlane, Juni 1975, New Zealand Medical Journal, Seite 569 (es werden Ergebnisse einer Studie dargelegt, in der die Wirkungen eines Perna canaliculus-Produktes, das "Seatone" genannt wird, auf eine kleine Gruppe von arthritischen Individuen untersucht wurden); Rainsford und Whitehouse, 1980, Arzneim-Forsch, Seiten 2128–2131 (eine gefriergetrocknete gepulverte Präparation ganzer Muschel, welche Ratten oral verabreicht worden war, zeigte eine mäßige entzündungshemmende Aktivität in einem Modell induzierter rheumatoider Arthritis); Miller und Ormrod, 1980, The New Zealand Medical Journal 92:187 (eine rohe Fraktion von Pema canaliculus wies eine deutliche entzündungshemmende Wirkung auf, wenn sie durch intraperitoneale Injektion an Ratten verabreicht wurde); Couch et al., 1982, The New Zealand Medical Journal 95:803 (eine Protein-enthaltende Fraktion von Pema canaliculus wies eine entzündungshemmende Wirkung auf); Caughey et al., 1983, European Journal of Rheumatology and Inflammation 6:197 (in einer Untersuchung an Menschen, an welcher 47 Patienten mit rheumatoider Arthritis teilnahmen, wurde keine Verbesserung bei Patienten beobachtet, denen Muschelextrakt verabreicht wurde, verglichen mit Patienten, die den entzündungshemmenden Wirkstoff Naproxen genommen hatten); Gibson et al., 1980, Practitioner 224:955 (93:111 (in Versuchen an Menschen für sowohl Osteoarthritis als auch rheumatoide Arthritis wurden beträchtliche Vorteile nach 3 Monaten mit einer Pema canaliculus-Präparation erreicht, einschließlich verringerten Schmerzes und Steifheit und einer Verbesserung bei Funktionstests); Audeval und Bouchart, 1986, Gazette Medicale 93:111 (in Osteoarthritis-Versuchen an Menschen zeigten 40 % der Patienten eine beträchtliche Verbesserung nach der Behandlung mit einer Pema canaliculus-Präparation); Miller et al., 1993, Agents Actions 38:139 (eine wässrige Fraktion von Pema canaliculus inhibierte experimentell induzierte Entzündung in Ratten); Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology (ein Lipidextrakt von Pema canaliculus zeigte eine Dosis-abhängige entzündungshemmende Aktivität).
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Gemäß dieser Erfindung wurde gefunden, dass eine Kombination von N,N-Dimethylglycin (DMG) und einer von Pema canaliculus abgeleiteten Komponente (hierin als Pema canaliculus-Extrakt (PCE) bezeichnet) einen synergistischen Effekt bei der Behandlung von Entzündungskrankheiten besitzt. Insbesondere wurde festgestellt, dass die Kombination eine synergistische Wirkung bei der Behandlung von Autoimmunkrankheiten, einschließlich Lupus erythematosus und bei der Modulierung von Immunreaktionen auf Entzündungskrankheiten besitzt. Gemäß dieser Erfindung wurde auch festgestellt, dass die anormalen Immunantwortprofile in Menschen mit rheumatoider Arthritis oder Osteoarthritis vorteilhaft durch die Verabreichung einer Kombination von DMG und PCE verändert werden können.
Behandlung, wie hierin verwendet, betrifft die therapeutische Verabreichung der Verbindungen der Erfindung zur Vorbeugung, Verbesserung oder Heilung der Krankheit.
Entzündungserkrankungen, die gemäß dieser Erfindung behandelt werden können, schließen systemische Autoimmunkrankheiten wie z.B. Lupus erythematosus, rheumatoide Arthritis und Multiple Sklerose, und organspezifische Autoimmunkrankheiten wie z.B. Myasthenia gravis, Grave-Krankheit, Hashimoto-Thyroiditis, Crohn'sche Krankheit, hämolytische Autoimmunanämie, insulinabhängiger Diabetes mellitus, Glomerulonephritis und rheumatisches Fieber ein. Weitere Entzündungskrankheiten, die gemäß dieser Erfindung behandelt werden können, schließen andere entzündliche arthritische Bedingungen wie Osteoarthritis und Lichtarthritis sowie andere entzündliche Bedingungen wie Konjunktivitis, Dermatitis, Bronchitis, Rhinitis etc. ein, welche durch Verletzung, Allergien, Infektionen, Mikroorganismen, Traumata oder physikalische oder chemische Mittel verursacht werden können. Zusätzlich ist auch die Behandlung von entzündlichen Aspekten von Asthma als Teil dieser Erfindung umfasst.
Ein Aspekt dieser Erfindung ist eine Zusammensetzung umfassend eine Kombination einer DMG-Komponente und mindestens einer PCE-Komponente. Die PCE-Komponente kann jede therapeutisch wirksame Komponente sein, die von dem Fleisch der Muschel oder ihren Organen, welche zur Verwendung bei der Präparation von Nahrungsergänzungsmitteln oder pharmazeutischen Präparationen geeignet sind, abgeleitet ist. Die Endung umfasst die Verwendung von ungereinigten Komponenten der Muschel, wie die ganze Muschel, oder beliebige therapeutisch wirksame Extrakte davon. Wie es hierin verwendet wird, ist eine therapeutisch wirksame PCE-Komponente gemäß dieser Erfindung eine Komponente, die bei der Verringerung von Entzündung in Tieren oder Menschen wirksam ist, oder welche in Menschen oder Tieren immunomodulierende Wirkungen besitzt. Z.B. können mehrere Tiermodelle für Arthritis, welche im Fachgebiet wohl bekannt sind, verwendet werden, um die therapeutische Wirksamkeit einer PCE-Komponente zu bestimmen. Solche Modelle schließen z.B. Kollagen-induzierte Arthritis in Ratten oder Mäusen, Carrageenan-induziertes entzündliches Ödem in Ratten, wie es in Miller et al., 1980, New Zealand Medical Journal, 92:667 beschrieben ist, und durch die Injektion von Hilfsmitteln, die von getrocknetem Mycobactenum tuberculosis hergestellt sind, induzierte Arthritis in Ratten und Mäusen, wie es in Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology 5:237-246 beschrieben ist, ein. Die therapeutische Wirksamkeit einer PCE-Komponente kann auch bestimmt werden, indem bewertet wird, ob die PCE-Komponente wirksam ist, um antinukleäre Antikörper, insbesondere anti-ssDNA-Antikörper oder anti-dsDNA-Antikörper in Menschen mit SLE oder in dem Mausmodell für SLE zu verringern, wie es in den Beispielen beschrieben ist. Insbesondere kann das PCE eine Präparation der ganzen Muschel sein, welche gefriergetrocknet und gemahlen wurde, wie z.B. das von FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont erhältliche Sea Mussel-Produkt oder das von DaVinci Laboratories, Essex Junction, Vermont erhältliche Pema-Produkt. Zusätzlich können auch therapeutisch wirksame Extrakte von Pema canaliculus verwendet werden. Solche therapeutisch wirksamen Extrakte wurden wie folgt beschrieben: Macrides und Kalafatis, PCT/AU95/00485, WO 96/05164 (ein aufgereinigtes Lipidextrakt); Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology 5:237-246 (ein aufgereinigtes Lipidextrakt); Kosuge und Sugiyama, US-Patent-Nummer 4,801,453 (stabilisiertes Muschelextrakt); Couch et al., 1982, The New Zealand Medical Journal 95:803 (eine Proteinfraktion); Miller et al., 1993, Agents Actions 38:139 (eine wässrige Fraktion).
Die DMG-Komponente kann N,N-Dimethylglycin oder ein pharmakologisch annehmbares Salz davon sein. Eine Zusammensetzung, die sowohl DMG als auch PCE enthält, kann als pharmazeutischer oder diätetischer Zusatz unter Verwendung von im Fachgebiet wohl bekannter Techniken formuliert werden. Eine bevorzugte Formulierung der Zusammensetzung ist eine Formulierung zur oralen Verabreichung.
Ein weiterer Aspekt dieser Erfindung ist die Verwendung einer DMG-Komponente und mindestens einer therapeutisch wirksamen PCE-Komponente zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer entzündlichen Krankheit, umfassend die Verabreichung einer Kombination von sowohl einer DMG-Komponente als auch mindestens einer PCE-Komponente an ein Tier. Wie es hierin verwendet wird, bedeutet der Ausdruck Tier Säugetiere, ist aber nicht darauf beschränkt. Bevorzugte Säugetiere schließen Menschen, Pferde, Nutztiere und Haustiere ein. Die DMG- und PCE-Komponenten können über die gleiche Route verabreicht werden oder sie können über verschiedene Routen verabreicht werden. Z.B. können DMG und PCE beide oral verabreicht werden, entweder gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten. Eine bevorzugte Route für die Verabreichung von PCE, insbesondere gemahlener ganzer Muschel, ist über die orale Verabreichung. Eine bevorzugte Route für die Verabreichung von DMG ist über die orale Verabreichung, insbesondere als Mischung mit Wasser. DMG oder PCE können auch über eine intramuskuläre Injektion, intraperitoneale Injektion, parenterale Verabreichung etc. verabreicht werden.
Die in dieser Erfindung verwendeten DMG und PCE können als Mischung mit konventionellen Hilfsmitteln, d.h. pharmazeutisch annehmbaren organischen oder anorganischen Trägersubstanzen, die für eine parenterale, enterale (z.B. orale) Anwendung geeignet sind, welche den Wirkstoff nicht nachteilig beeinflussen, verwendet werden. Geeignete pharmazeutisch annehmbare Träger schließen Wasser, Salzlösungen, Alkohole, Gummiarabicum, pflanzliche Öle, Benzylalkohole, Polyethylenglycole, Gelatine, Kohlenhydrate wie Lactose, Amylose oder Stärke, Magnesiumstearat, Talg, Kieselsäure, viskoses Paraffin, Parfümöl, Fettsäuremonoglyceride und Diglyceride, Pentaerythritylfettsäureester, Hydroxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon etc. ein, sind aber nicht darauf beschränkt. Die pharmazeutischen Präparationen können sterilisiert werden und, wenn erwünscht, mit Hilfsmitteln wie z.B. Gleitmitteln, Konservierungsmitteln, Stabilisatoren, Benetzungsmitteln, Emulgatoren, Salzen zur Beeinflussung des osmotischen Druckes, Puffern, Farbstoffen, Geschmacksstoffen und/oder Aromasubstanzen und dergleichen, welche den Wirkstoff nicht nachteilig beeinflussen gemischt werden. Weitere pharmazeutisch annehmbare Träger schließen wässrige Lösungen, ungiftige Hilfsmittel, Salze, Konservierungsmittel, Puffer und dergleichen eingeschlossen, wie es z.B. in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe (1990), Mack Publishing Co., Easton, PA, beschrieben ist, wobei die Inhalte davon hierdurch durch Bezugnahme darauf enthalten sind. Der pH-Wert und die genaue Konzentration der verschiedenen Komponenten der pharmazeutischen Zusammensetzung werden gemäß im Fachgebiet geläufiger Routine eingestellt. Gilman et al. (Herausgeber) (1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, B. Ausgabe, Pergamon Press. Die DMG und/oder PCE können auch, wenn erwünscht, mit anderen Wirkstoffen einschließlich PCE bzw. DMG kombiniert werden.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen werden vorzugsweise in Dosiseinheiten hergestellt und können in Dosiseinheiten verabreicht werden. Feste Dosiseinheiten sind Tabletten, Kapseln und Zäpfchen. Zur Behandlung eines Patienten sind abhängig von der Aktivität der Verbindung, der Art der Verabreichung, der Natur und Schwere der Störung, dem Alter, dem Körpergewicht des Patienten, verschiedene tägliche Dosen notwendig. Unter bestimmen Umständen können jedoch höhere oder niedrigere tägliche Dosen angemessen sein. Die mittlere tägliche Dosis der Verbindungen dieser Erfindung, wenn sie verwendet werden, um eine Entzündungskrankheit zu behandeln oder um die Immunantwort zu modulieren, sind typischerweise wie folgt: für DMG beträgt die mittlere tägliche Dosis im Allgemeinen ungefähr 1 bis ungefähr 500 mg/kg/Tag, vorzugsweise 10 bis ungefähr 100 mg/kg/Tag, mehr bevorzugt ungefähr 2 bis ungefähr 30 mg/kg/Tag; für PCE, wenn PCE gemahlene ganze Muscheln umfasst, beträgt die mittlere tägliche Dosis im Allgemeinen ungefähr 1 bis 500 mg/kg/Tag, vorzugsweise ungefähr 10 bis ungefähr 100 mg/kg/Tag, mehr bevorzugt ungefähr 20 bis ungefähr 60 mg/kg/Tag. Für PCE-Komponenten, die keine gemahlene ganze Muschel sind, kann die mittlere tägliche Dosis variieren, sie kann aber durch den Fachmann leicht bestimmt werden. Die tägliche Dosierung kann als Einzeldosis pro Tag oder als eine Mehrzahl von unterteilten Dosen pro Tag verabreicht werden. Die tägliche Dosis kann auch auf nicht-täglicher Basis verabreicht werden, wie z.B. jeden zweiten oder dritten Tag, vorausgesetzt, dass eine mittlere tägliche Dosis wie oben beschrieben erreicht wird.
Die Kombination von PCE und DMG kann gemeinsam oder alternierend mit anderen therapeutischen Behandlungen verabreicht werden, die normalerweise zur Behandlung entzündlicher Krankheiten verwendet werden. Z.B. können zur Behandlung von Lupus erythematosus, rheumatoider Arthritis und Osteoarthritis PCE und DMG zusammen mit entzündungshemmenden Mitteln, einschließlich Corticosteroid-Mitteln wie z.B. Prednison oder Methylprednisolon und entzündungshemmenden nicht-Steroiden Mitteln wie z.B. Salicylaten und Ibuprofen verabreicht werden. Zur Behandlung von Lupus erythematosus, zum Beispiel, können die Verbindungen dieser Erfindung auch zusammen mit Antimalaria-Wirkstoffen, einschließlich z.B. Hydroxychlorchinon, oder zusammen mit zytotoxischen Chemotherapeutika, einschließlich z.B. Azathioprin und Cyclophosphamid verabreicht werden.
Ein weiterer Aspekt dieser Erfindung ist die Verwendung einer DMG-Komponente und mindestens einer therapeutisch wirksamen PCE-Komponente zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von systemischem Lupus erythematosus, umfassend die Verabreichung einer Kombination von DMG und PCE. In einer bevorzugten Ausführungsform verringert die Verabreichung der Kombination die Serumkonzentration von antinukleären Antikörpern wie z.B. antinukleären Antikörpern, die an Chromatin, Nukleosomen, Histon/DNA-Komplexe, Histone, doppelsträngige DNA (dsDNA), einzelsträngige DNA (ssDNA), doppelsträngige RNA (dsRNA), einzelsträngige RNA (ssRNA) und transfer-RNA (tRNA) binden. Vorzugsweise wird die Serumkonzentration von anti-ssDNA- und/oder anti-dsDNA-Antikörpern verringert.
Die folgenden Wirkungen auf die Immunantwort oder jede Kombination davon werden erreicht: Eine Verringerung der Serumlevels von Interleukin 6 (il-6), eine Verringerung der Serumlevels von Interleukin 10 (il-10), eine Erhöhung der Serumlevels von Tumornekrosefaktor-α (TNF-α) oder eine Verringerung der Konzentration von CD8^--Lymphozyten im Blut. Diese Effekte wirken typischerweise abnormalen Immunprofilen, die bei Entzündungskrankheiten beobachtet werden, entgegen. Ein bevorzugter Effekt ist eine Verringerung der Serumlevels von il-10 oder eine Erhöhung der CD8⁺-Lymphozyten im Blut.
Ein weiterer Aspekt dieser Erfindung ist ein Kit enthaltend eine Kombination von DMG- und PCE-Formulierungen, wobei die PCE-Formulierung mindestens eine therapeutisch wirksame PCE-Komponente umfasst. Insbesondere bevorzugt ist ein Kit enthaltend sowohl DMG- als auch PCE-Formulierungen, die zur oralen Verabreichung nützlich sind, vorzugsweise als diätetische Zusätze. Ein Kit wird typischerweise eine mittlere tägliche Dosis von PCE oder DMG, wie oben beschrieben, bereitstellen.
KURZE BESCHREIBUNG DER FIGUREN
1 ist ein Diagramm, das Gewichtszunahme-Vergleiche für Kontrollmäuse und für Mäuse zeigt, die mit DMG, PCE oder einer Kombination von DMG und PCE behandelt wurden.
2 ist ein Diagramm, in welchem die Cytokin-Konzentrationen, einschließlich il-4, il-6, il-10 und TNF-α, in Kontrollmäusen und in mit DMG, PCE oder einer Kombination von DMG und PCE behandelten Mäusen verglichen werden.
3 ist ein Diagramm, in welchem die Lymphozytenpopulations-Levels, einschließlich Lymphozyten mit CD4-, CD8- und CD19-Markern, in Kontrollmäusen und in Mäusen, die mit DMG, PCE oder einer Kombination von DMG und PCE behandelt wurden, verglichen werden.
4 ist ein Diagramm, in welchem die Konzentrationen von anti-Doppelstrang-DNA-Antikörpern in Kontrollmäusen und in Mäusen, die mit DMG, PCE oder einer Kombination von DMG und PCE behandelt wurden, verglichen werden. Es wurden zwei Experimente, (#1) und (#2), durchgeführt.
5 ist ein Diagramm, in dem die Konzentrationen von anti-Einzelstrang-DNA-Antikörpern in Kontrollmäusen und in Mäusen, die mit DMG, PCE oder einer Kombination von DMG und PCE behandelt wurden, verglichen werden.
6 ist ein Diagramm, in dem die Lymphozyten-Populationen in gesunden Patienten mit Lymphozyten-Populationen in Patienten mit Osteoarthritis oder rheumatoider Arthritis verglichen werden. Die Zellpopulationen, die gemessen wurden, schließen die gesamten T-Zellen (T Zellen), Helfer-T-Zellen (Th) (CD4-), zytotoxische T-Zellen (Tc) (CD8^–), B-Zellen (B) (CD19^–) und natürliche Killerzellen (NK) ein. Innerhalb einer Subpopulation sind Säulen mit verschiedenen Indizes (d.h. a und b) deutlich verschieden (p ≤ 0,01).
7 ist ein Diagramm, in dem die Cytokin-Konzentrationen in gesunden Patienten mit Cytokin-Konzentrationen in Patienten mit Osteoarthritis oder rheumatoider Arthritis verglichen werden. Innerhalb einer Subpopulation sind Säulen mit verschiedenen Indizes, (d.h. a und b) deutlich verschieden (p ≤ 0,01).
Ohne weitere Erklärung wird es für den Fachmann möglich sein, die vorliegende Erfindung unter Berücksichtigung der vorangegangenen Beschreibung in vollem Umfang anzuwenden. Die folgenden bevorzugten spezifischen Ausführungsformen sind daher nur zur Veranschaulichung gedacht und sollen den Rest der Offenbarung nicht einschränken.
BEISPIELE
In den folgenden Beispielen sind alle Teile und Prozentangaben Gewichtsangaben, wenn es nicht anders angegeben ist.
Beispiel 1
Herstellung einer therapeutisch wirksamen PCE-Komponente
Eine therapeutisch wirksame Formulierung von Pema canaliculus wird hergestellt, indem das Fleisch der Muschel gefriergetrocknet wird und in ein Pulver gemahlen wird. Das Produkt wird mit den Hilfsmitteln von Alfalfa, Cellulose und Magnesiumstearat in Kapseln formuliert.
Beispiel 2
Behandlung von systemischem Lupus erythematosus mit einer Kombination von DMG und PCE-Extrakt
Systemischer Lupus erythematosus (SLE) wird als die prototypische Autoimmunkrankheit angesehen. SLE ist durch verschiedene Schweregrade der Krankheit gekennzeichnet, wobei milde Formen zu einem geringen Hautausschlag und zu Gelenkschmerzen führen und ernste Formen zu Glomerulonephritis, Immunkomplexkrankheit, ernster Lymphknotenvergrößerung und multiplem Organversagen führen. SLE ist ferner durch die Entwicklung von auto-Antikörpern gegen zytoplasmatische und nukleäre Komponenten gekennzeichnet. Zusätzlich zu klinischen Symptomen ist das Vorhandensein von antinukleären Antikörpern ein Merkmal der Krankheit und das Vorhandensein davon ist ein wichtiges Anzeichen bei der Diagnose der Krankheit (Tan, 1989, Adv. Immunology 44:93). MRI-Ipr-Mäuse sind ein akzeptiertes und gut dokumentiertes Modell für SLE (Cohen und Eisenberg, 1991, Ann. Rev. Immunol. 9:203; Kotzin, 1996, Cell 85:303). Diese Mäuse zeigen einen homozygoten genetischen Defekt in dem Fas-TNF-Rezeptor, der mit der Apoptose im Zusammenhang steht. Das Fas-Protein ist ein wichtiger Weg zur Induzierung von Apoptose und das Fas-Protein ist verantwortlich für die Lymphozyten-Entfernung. Diese Mäuse produzieren ein breites Spektrum von auto-Antiköpern gegen nukleäre und zytoplasmatische Proteine, und die MRI-Ipr-Mäuse sterben an klassischen Lupus-ähnlichen Symptomen.
Es wurden MRI-Ipr-Mäuse verwendet, um die Wirkungen einer Kombination von DMG und PCE auf Komponenten des Immunsystems und auf den Verlauf der SLE-Krankheit zu untersuchen. 40 MRI-Ipr-Mäuse wurden in 4 Gruppen mit jeweils 10 Mäusen unterteilt: in eine Kontrollgruppe, eine PCR-behandelte Gruppe, eine DMG-behandelte Gruppe und eine PCE-DMG-behandelte Gruppe. Der Kontrollgruppe wurden Standard-Mäusefutter und Wasser verabreicht. Der DMG-Gruppe wurden Standard-Mäusefutter und Wasser, gemischt mit 34 mg/l DMG (AANGAMIK^® DMG, FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont) verabreicht. Der PCE-Gruppe wurden eine PCE-Mäusefutter-Mischung und Wasser verabreicht. Der PCE-DMG-Kombinations-Gruppe wurden eine PCE-Mäusefutter-Mischung und DMG-Wasser verabreicht. Der PCE-Zusatz, der in den Untersuchungen verwendet wurde, war ein Produkt, das gefriergetrocknete gemahlene ganze Perna canaliculus-Muschel enthielt (Pema, FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont). Den Mäusen wurden Nahrung und Wasser nach Belieben verabreicht. Es wird geschätzt, dass die Mäuse mit einer Größe im Bereich von 30–50 g ungefähr 1-3 mg/Tag an DMG und 2–6 mg/Tag an PCE verzehrten. Die Mäuse wurden wöchentlich gewogen und wöchentlich wurden 100 μl Blut über die Orbitalader gesammelt. Das gesammelte Blut wurde zentrifugiert und das Serum wurde gewonnen und bei –20 °C zur Analyse am Ende des 12-wöchigen Experiments aufbewahrt. Nach 12 Wochen wurden die Mäuse getötet und die Milzen, Nieren, Leber wurden entnommen. Als die Mäuse getötet wurden, wurde auch Blut über einen Herzstab gesammelt. Das Serum wurde gesammelt und wie oben beschrieben aufbewahrt. Die Milzen wurden bearbeitet und die gewonnenen Zellen wurden durch Flusszytometrie unter Verwendung von fluoreszierenden anti-CD4, anti-CD8 und anti-CD19-Antikörpern quantifiziert (Pharmingen, San Diego, CA). Unter Verwendung eines Enzym-gebundenen Immunadsorbtionsassay (ELISA) wurden die Cytokin-Levels in dem Serum und die anti-Einzelstrang- und Doppelstang-DNA-Antikörper-Levels in dem Serum bestimmt.
Die Tiere, deren Nahrung mit PCE alleine oder mit der DMG-PCE-Kombination versetzt worden war, zeigten eine höhere Gewichtszunahme als die Kontrolloder die DMG-behandelten Tiere, was angibt, dass die mit der Kombination behandelten Mäuse durch die Behandlung nicht negativ beeinträchtigt waren (1). Eine beträchtliche Verringerung der CD8-T-Zellen wurde bei Tieren beobachtet, die mit der Standard-DMG-PCE-Kombination gefüttert wurden, wobei ein Trend in Richtung niedrigeren Levels in Tieren zu beobachten war, denen nur PCR gefüttert worden war (3). Einen Trend in Richtung niedrigere CD19⁺-B-Zell-Prozentanteile wurde auch bei DMG-PCE-behandelten Tieren beobachtet, während Tiere, die mit PCE alleine behandelt worden waren, CD19⁺-B-Zell-Levels aufwiesen, die vergleichbar waren mit denen der Kontrolltiere. Bei DMG alleine konnte keine Wirkung auf CD8⁺-T-Zell- oder CD19⁺-B-Zell-Levels detektiert werden (3).
Es wurden auch die Effekte auf die Cytokin-Produktion in Mäusen, die mit der DMG-PCE-Kombination behandelt worden waren, untersucht. Wie es in 2 gezeigt ist, zeigten Tiere, die mit der DMG-PCE-Kombination behandelt worden waren, beträchtlich niedrigere Levels an Serum il-6, als entweder Kontrolltiere oder Tiere, die mit DMG alleine behandelt worden waren. Obwohl Tiere, die mit entweder DMG oder PCE alleine behandelt worden waren, beträchtlich niedrigere Levels an il-6 als Kontrolltiere aufwiesen, zeigten Tiere, die mit einer Kombination der beiden behandelt worden waren, noch niedrigere Levels. DMG-PCE-behandelte Tiere zeigten auch beträchtlich niedrigere Levels an Serum il-10 als entweder Kontrolltiere oder Tiere, die mit entweder DMG oder PCE alleine behandelt worden waren. Diese Veränderungen der Cytokin-Serum-Levels sind auch hinweisend auf eine Verschiebung einer Th2-Reaktion zu einer Th1-Reaktion. Die beträchtliche Erhöhung der Serumlevels von Tumornekrosefaktor (TNF) in DMG-PCE-behandelten Tiere ist auch hinweisend auf eine Verschiebung einer Th2-Reaktion zu einer Th1-Reaktion.
Die Behandlung von Tieren mit DMG alleine führte zu höheren Levels an il-10 als bei Kontrollen, was auf eine Verschiebung in Richtung einer Th2-Reaktion hinweist. Obwohl DMG ein bekannter Verstärker der Antikörper-Produktion ist, ist nicht bekannt, ob die beobachtete verstärkte Antikörper-Produktion eine pathologische IgG2a-Produktion darstellt. Die Levels von Serum il-10 und TNFα waren in Kontrolltieren und in Tieren, die mit PCE alleine behandelt worden waren, vergleichbar. Daher schien die DMG-PCE-Behandlung die Lymphozyten-Reaktion von einer Th2-Reaktion mit einer einhergehenden Erniedrigung einer übermäßigen Antiköperproduktion, einschließlich der Produktion antinukleärer Antiköper, wie unten diskutiert, zu einer Th1-Reaktion zu verschieben.
Es wurden auch die Levels an antinukleären Antiköpern in Kontrollen und behandelten Mäusen untersucht. Nach 11 Wochen der Behandlung waren antidsDNA-Antikörper-Levels im Serum von DMG-PCE-behandelten Tieren beträchtlich niedriger als in Kontrolltieren oder in Tieren, die mit DMG alleine oder PCE alleine behandelt worden waren (4). Noch deutlicher waren die anti-ssDNA-Antikörper-Levels im Serum von DMG-PCE-behandelten Tieren im Gleichklang mit den Levels von Kontrolltieren, bis zur 7. Woche, als diese Serumkonzentrationen niedriger waren (5). Dieser beträchtliche Unterschied wurde weiter beobachtet, bis die Tiere nach der 11. Woche getötet wurden. Die Serumlevels von anti-ssDNA-Antikörpern in Kontrolltieren und in mit PCE alleine behandelten Tieren nahmen über den Verlauf der Behandlung hinweg weiter zu. In der 11. Woche schienen sich die Serumlevels in mit DMG alleine behandelten Tieren einzupendeln.
Beispiel 3
Vergleich von Lymphozyten-Populationen in gesunden Patienten mit Lymphozyten-Populationen in Patienten mit Osteoarthritis oder rheumatoider Arthritis
sEs wurden Lymphozyten-Populationen gemessen, und es wurden die von gesunden Patienten mit den von Patienten verglichen, die Osteoarthritis oder rheumatoide Arthritis hatten (6). Die gemessenen Lymphozyten-Populationen schlossen ganze T-Zellen (T-Zellen), Helfer-T-Zellen (Th) (CD4^–-Zellen), zytotoxische T-Zellen (Tc) (CD8⁺-Zellen), B-Zellen (B) und natürliche Killerzellen (NK) ein. Die Zellpopulationen wurden durch externes Anfärben der Gesamtblutlymphozyten unter Verwendung der folgenden Antiköper identifiziert: anti-CD3-Antikörper für ganze T-Zellen; anti-CD4-Antikörper für Helfer-T-Zellen; anti-CD8-Antikörper für zytotoxische T; anti-CD5- und anti-CD19-Antikörper für B-Zellen; anti-CD56-Antikörper für natürliche Killerzellen; und anti-CD45-Antikörper für Monozyten. Die Antiköper wurden entweder von Caltag Corp. oder Coulter Corp. erhalten und wurden zur Analyse auf einem EPICs 751 Flusscytometer (Coulter F1) mit einem Cicero Zusatzmodul und Cyclops-Analysesoftware (Cytomation, CA) markiert. Wie es durch die Daten in 6 gezeigt wird, wurde bei beiden Krankheiten verglichen mit gesunden Kontrollen eine CD4^–/CD8^–-T-Zellen-Verschiebung beobachtet, wobei eine beträchtliche Verringerung von CD4⁺-Zellen in Patienten mit jeder Krankheit und eine Erhöhung der CD8^–-Zellen in Patienten mit jeder der Krankheiten beobachtet wurde.
Beispiel 4
Vergleich von Cytokin-Konzentrationen in gesunden Patienten mit Cytokin-Konzentrationen in Patienten mit Osteoarthritis oder rheumatoider Arthritis
Es wurden Cytokin-Levels gemessen, und die von gesunden Patienten wurden mit den von Patienten mit Osteoarthritis oder rheumatoider Arthritis verglichen (7). Die gemessenen Cytokine schlossen Gammainterferon, Interleukin 1-beta, Interleukin 2, Interleukin 4, Interleukin 6, Interleukin 10 und TNF-α ein. Die Cytokine wurden unter Verwendung spezifischer ELISA-Kits gemäß den Hersteller-Instruktionen gemessen (Immunotech, Frankreich). Interleukin 6-Levels waren in Patienten mit jeder der Krankheiten verglichen mit Kontroll-Patienten beträchtlich höher. Die TNF-α-Levels waren in Patienten mit rheumatoider Arthritis verglichen mit normalen Kontrollen beträchtlich erhöht, waren aber in Patienten mit Osteoarthritis nicht erhöht.
Die vorangehenden Beispiele können mit vergleichbarem Erfolg durch Ersetzen der allgemein oder spezifisch beschriebenen Reaktanten und/oder Durchführungsbedingungen dieser Erfindung gegen solche, die in den vorangehenden Beispielen verwendet wurden, wiederholt werden.
Es wird davon ausgegangen, dass ein Fachmann ohne weitere Erläuterung die vorliegende Erfindung unter Berücksichtigung der vorangegangenen Beschreibung in ihrem vollen Umfang anwenden kann. Die vorangegangenen bevorzugten spezifischen Ausführungsformen sind daher nur zur Veranschaulichung angegeben und sollen die übrige der Offenbarung auf keinste Weise einschränken.

Claims

Verwendung einer N,N-Dimethylglycin (DMG)-Komponente und mindestens einer therapeutisch wirksamen Perna canaliculus-Extrakt (PCE)-Komponente zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung einer Entzündungskrankheit.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Krankheit eine Autoimmunkrankheit ist.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei die Autoimmunkrankheit Lupus erythmatosus ist.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei durch das Medikament eine Verringerung der Serumkonzentration mindestens eines anti-nukleären Antikörpers erreicht wird.
Verwendung nach Anspruch 4, wobei der anti-nukleäre Antikörper ein antidsDNA-Antikörper oder ein anti-ssDNA-Antikörper ist.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei mindestens eine PCE-Komponente gefriergetrocknete gemahlene ganze Muschel ist.
Verwendung einer DMG-Komponente und mindestens einer therapeutisch wirksamen PCE-Komponente zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung einer Autoimmunkrankheit.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 7, wobei die Krankheit Lupus erythmatosus, rheumatoide Arthritis, Multiple Sklerose, Myasthemia gravis, Graves-Krankheit, Hashimoto-Thyroiditis, Crohn-Krankheit, hämolytische Autoimmunanämie, insulinabhängiger Diabetes mellitus, Glomerulonephritis, rheumatisches Fieber, Osteoarthritis, Lichtarthritis, Konjunktivitis, Dermatitis, Bronchitis, Rhinitis und/oder Asthma ist.
Verwendung nach Anspruch 7 oder 8, wobei die Behandlung zu einer Abnahme von Serum-IL-6-Konzentrationen, einer Abnahme von Serum-IL-10-Konzentrationen, einer Erhöhung von Serum-TNF-α-Konzentrationen oder einer Abnahme von CD8⁺-Zellen im Blut führt.
Verwendung nach Anspruch 7 oder 8, wobei die Behandlung zu einer Abnahme von Serum-IL-10-Konzentrationen und einer Abnahme von CD8⁺-Zellen im Blut führt.
Verwendung nach Anspruch 7 oder 8, wobei die Behandlung zu einer Abnahme von CD8⁺-Zellen führt.
Zusammensetzung umfassend eine DMG-Komponente und mindestens eine therapeutisch wirksame PCE-Komponente.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei mindestens eine PCE-Komponente gefriergetrocknete gemahlene ganze Muschel umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, die zur Verwendung als Nahrungsergänzungsmittel geeignet ist.
Kit umfassend eine DMG-Formulierung und eine PCE-Formulierung, wobei die PCE-Formulierung mindestens eine therapeutisch wirksame PCE-Komponente umfasst.
Kit nach Anspruch 15, wobei die DMG-Formulierung und die PCE-Formulierung zur Verwendung als Nahrungsergänzungsmittel geeignet sind.
Kit nach Anspruch 15, wobei mindestens eine PCE-Komponente gemahlene gefriergetrocknete ganze Muschel umfasst.
Kit nach Anspruch 15, wobei die DMG-Formulierung zur Verabreichung als Mischung mit Wasser geeignet ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die DMG-Komponente und mindestens eine PCE-Komponente beide in einer Form vorliegen, die zur oralen Verabreichung geeignet ist.
Kit nach Anspruch 15, wobei die DMG-Komponente und die PCE-Formulierung beide in einer Form vorliegen, die zur oralen Verabreichung geeignet ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Zusammensetzung in einer Form vorliegt, die zur oralen Verabreichung geeignet ist.
Kit nach Anspruch 15, wobei sowohl die DMG-Formulierung als auch die PCE-Formulierung in einer Form vorliegt, die zur oralen Verabreichung geeignet ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3, 7, 8, 9 oder 10, wobei die DMG-Komponente und die PCE-Komponente zur oralen Verabreichung vorgesehen sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3, 7, 8 oder 9, wobei die Menge an zu verabreichender DMG-Komponente 1 bis 500 mg/kg/Tag und die Menge mindestens einer zu verabreichenden PCE-Komponente 1 bis 500 mg/kg/Tag beträgt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3, 7, 8 oder 9, wobei die Menge an zu verabreichender DMG-Komponente 10 bis 100 mg/kg/Tag und die Menge mindestens einer zu verabreichenden PCE-Komponente 10 bis 100 mg/kg/Tag beträgt.