DE455117C

DE455117C - Process for separating the cores containing phosphorus and iron contained in the egg yolk

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Publication number: DE455117C
Application number: DEP52631D
Authority: DE
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Priority date: 1926-04-04
Filing date: 1926-04-04
Publication date: 1928-01-28

Description

Verfahren zur Abscheidung der im Eigelb enthaltenen phosphor- und eisenhaltigen Kerne. Seitdem M i e s c h e r (Med. Chem. Untersuchungen Hoppe Seylers, Heft 4 [18711, S. 5o2) auf das Vorhandensein von organisch gebundenem Phosphor in mit Alkohol und Äther extrahiertem Eigelb hingewiesen hat - er nahm an daß es sich um echte Nucleine handelte -. suchten verschiedene Forscher die phosphorhaltige Verbindung mehr oder weniger frei von Eiweiß abzuscheiden. So liegt im Bungeschen Haematogen (Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd.9, S.49ff. [18851) eine Verbindung vor, welche 5"9 Prozent P und o,:29 Prozent Fe enthält gegenüber 6,7 bis 7,8 Prozent P im Miescherschen Präparat. Dann versuchte A 1 t m a n n (Archiv fÜr Anat. und Phys. [18891, S. 524 ff.) nach seiner allgemeinen Darstellungsmethode der Nucleinsäuren eine ähnliche Säure aus dem Eidotter abzuscheiden. Sie enthielt rund 7 Prozent P. Nach Milroy (Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd.22, S.307ff.) handelte es sich aber nicht um echte Nucleinsäure. Sie gab nämlich nach Hydrolyse mit Mineralsäuren keine Xanthinbasen, zeigte eine ausgesprochene Biuret-, jedoch keine Millonsche Reaktion und- enthielt von 7,51 bis 7,94 Prozent P. Im Jahre igoi stellten L e v e n e und A 1 s b e r g (Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 31 [19011, S. 543 ff.) ihre Avivitellinsäure dar durch Behandlung-von gereinigtem Vitellin mit 25prozentigem Ammoniak in der Kälte, neutralisieren mit Essigsäure, abscheiden der Eiweißstoffe mit Hilfe von Pikrinsäure und Fällen der - obengenannten Säure mit Alkohol. Die durch Umlösen gereinigte Verbindung enthielt im Mittel 9,88 Prozent P und 0,57 Prozent Fe, Diese Autoren konnten auch beim Präparat von Milroy unter gewissen Vorsichtsmaßregeln die Millonsche Reaktion erhalten. Sie gab die Biuret- und Millonsche Reaktion. Nach Hydrolyse wurden 17,8 Prozent des Gesamtstickstoffs in Form des Arginins und 3 Prozent in Form des Histidins festgestellt. Vier Jahre später beschrieben H u g o u n e n q und M o r e 1 (Comptes rendus, Bd. i4o [igo5], S. io65) ein nach Bunge dargestelltes, aber angeblich viel weiter gereinigtes Präparat (die Reinigungsmethode wurde nicht angegeben) mit 8,7 Prozent P und 0,45 Prozent Fe.Process for separating the cores containing phosphorus and iron contained in the egg yolk. Ever since Miescher (Med. Chem. Investigations Hoppe Seylers, No. 4 [18711, p. 502) pointed out the presence of organically bound phosphorus in egg yolk extracted with alcohol and ether - he assumed that it was real nucleins . Various researchers tried to separate the phosphorus-containing compound more or less free of protein. For example, in the Bungeschen Haematogen (Zeitschr. F. Physiol. Chemie, Vol. 9, p.49ff. [18851) there is a compound which contains 5 "9 percent P and O: 29 percent Fe compared to 6.7 to 7, 8 percent P in Miescher's preparation. Then A 1 tmann (Archiv für Anat. Und Phys. [18891, p. 524 ff.) Tried to separate a similar acid from the egg yolk using his general method of preparing nucleic acids. It contained around 7 percent P. According to Milroy (Zeitschr. F. Physiol. Chemie, Vol. 22, pp. 307ff.), However, it was not a real nucleic acid - Contained from 7.51 to 7.94 percent P. In igoi, L evene and A 1 s b er g (Zeitschr. f. Physiol. Chemie, Vol. 31 [19011, p. 543 ff.) presented their avivitellic acid by treating purified vitelline with 25 percent ammonia in the cold, neutralizing it with acetic acid, separating the proteins with the aid of picric acid and precipitation of the - above-mentioned acid with alcohol. The compound purified by dissolution contained an average of 9.88 percent P and 0.57 percent Fe. These authors were also able to obtain Millon's reaction with certain precautionary measures in the preparation of Milroy. She gave the Biuret and Millon reaction. After hydrolysis, 17.8 percent of the total nitrogen was found in the form of arginine and 3 percent in the form of histidine. Four years later, H u g ou nen q and M ore 1 (Comptes rendus, vol. I4o [igo5], p. Io65) described a preparation according to Bunge, but allegedly much more purified (the cleaning method was not specified) with 8, 7 percent P and 0.45 percent Fe.

Aus diesen Literaturangaben erhellt, daß es noch nie gelungen ist, mit Sicherheit die prostethische Phosphorgruppe der Eigelbproteide in chemisch reiner Form abzuscheiden.From these references it is evident that it has never been possible to certainly the prosthetic phosphorus group of egg yolk proteins in chemically pure form Form to be deposited.

Es konnte nun festgestellt werden, daß im Eigelb nicht eine einzige prostethische Phosphorgruppe vorhanden ist, sondern drei, welche durch die Buchstaben a, ß und y bezeichnet werden sollen.It has now been found that not a single one in the yolk prosthetic phosphorus group is present, but three indicated by the letters a, ß and y should be designated.

Gegenstand vorliegender Erfindung ist ein Verfahren zur Darstellung eines Gemisches dieser drei Phosphorkerne, frei von fremden Eiweißspaltprodukten in Form von freien Säuren oder in Gestalt ihrer Salze. Das Verfahren gründet sich auf folgende Beobachtungen: i. Das entfettete und koagulierte Eigelb läßt sich durch Trypsin nicht verdauen, dagegen wird es der Trypsinverdauung durch zuvorigen Aufschluß mit Pepsinsalzsäure zugänglich.The present invention relates to a method of representation a mixture of these three phosphorus nuclei, free from foreign protein breakdown products in the form of free acids or in the form of their salts. The procedure is established on the following observations: i. The defatted and coagulated egg yolk leaves not digest by trypsin, on the other hand it will be digested by trypsin beforehand Digestion accessible with pepsin hydrochloric acid.

:2. Die Einwirkung der Pepsinsalzsäure kann in jedem Augenblick der Verdauung angehalten werden, indem man die Salzsäure mit der entsprechenden Menge Alkalicarbonat abstumpft oder mit Alkaliacetat umsetzt. Die mehr oder weniger weitgehend verdauten Proteide werden dadurch gefällt.: 2. The action of pepsinic acid can at any moment of the Digestion can be stopped by adding the hydrochloric acid with the appropriate amount Alkali carbonate dulls or reacts with alkali acetate. The more or less largely digested proteins are thereby precipitated.

3. Die Trypsinverdauung spaltet die phosphorhaltigen Kerne ab. 3. The trypsin digestion splits off the phosphorus-containing nuclei.

Vom Verfahren der Patentschrift 4o6 963 Kl. i:2p unterscheidet sich das vorliegende unter anderem dadurch, daß eine Vorverdauung mit Pepsinsalzsäure im Falle von Eivitellin unentbehrlich ist und daß die Endprodukte etwa doppelt so viel Phosphor enthalten, als die entsprechenden Produkte aus Casein. Der Phosphorkern &s Milchcaseins enthält auch kein organisch gebundenes Eisen. Beispiel i. io kg mit kochendem Alkohol extrahiertes, getrocknetes und fein gemahlenes Eigelb werden in 5001 Wasser aufgeschlemmt, mit 2,8 kg konzentrierter Salzsäure und ioo g Pepsin oder einer entsprechenden Menge ,eines Salzsäureauszuges der Magenschleimhaut des Schweines versetzt und bei 37 bis 4o' unter stetigem Rühren erwärmt, bis das Eigelb in Lösung gegangen ist. Nach etwa io Stunden setzt man 3,8 kg Natriumacetat oder ill, kg Natriunicarbonat und i kg Eisessig zu. Man filtriert, zweckmäßig auf der Filterpresse, wäscht mit Wasser nach und nimmt den Rückstand mit einer Lösung von i .2oo g Natriumcarbonat in 4o 1 Wasser auf, setzt ioo g fein gehackter Bauchspeicheldrüse zu und verdaut während 24 bis 48 Stunden bei 40'. Die Verdauungsflüssigkeit wird dann mit Essigsäure leicht angesäuert, filtriert und das Filtrat mit Calciumchlorid oder Calciumacetat und mit einem Volumen Alkohol gefällt. Die Fällung wird abfiltriert, mit Alkohol nachgewaschen und, getrocknet. Man erhält auf diese Weise ein gelblich weißes, geschmackloses Pulver, welches nur teilweise in Wasser löslich ist, rund 10,5 Prozent P, i Prozent Fe und 9 bis io Prozent Ca enthält. Beispiel :2. DietryptischeVerdauungsflüssigkeit, wie sie im Beispiel i erhalten wurde, wird nach Ansäuern mit Essigsäure und Abfiltrieren &s Ungelösten mit Bleizuckerlösung versetzt, solange ein Niederschlag entsteht. Die Bleifällung wird filtriert, mit Wasser ausgewaschen und mit einer 2,oprozentigen Natriumcarbonatlösung verrührt, bis die Mischung auf Phenolphthaleinpapier schwach rosa anschlägt. Die Phoshporverbindungen gehen als Natriumsalze in Lösung, das Blei bleibt als Carbon-at unlösl-ich zurück. Die Lösung der Natriumsalze wird im Vakuum stark konzentriert, mit Alkohol gefällt und im Vakuum getrocknet. Man erhält auf diese Weise die Natriumsalze der drei phosphorhaltigen Kerne des Eigelbs in Form eines in Wasser löslichen gelblichen Pulvers.The present one differs from the process of patent specification 406 963 Kl. I: 2p in that pre-digestion with pepsinic acid is indispensable in the case of eivitellin and that the end products contain about twice as much phosphorus as the corresponding products made from casein. The phosphorus core & s milk casein does not contain any organically bound iron. Example i. io kg of boiling alcohol extracted, dried and finely ground egg yolk are slurried in 5001 of water, 2.8 kg of concentrated hydrochloric acid and pepsin ioo g or an equivalent amount of hydrochloric acid added to extract the gastric mucosa of the pig, and at 37 to 4o 'with constant stirring heated until the yolk has gone into solution. After about io hours sets to 3.8 kg sodium acetate or ill, kg Natriunicarbonat and i kg of glacial acetic acid. The mixture is filtered, advantageously on the filter press, washed with water and the residue is taken up in a solution of i .2oo g of sodium carbonate in 1 4o water, sets ioo g minced pancreas and digested for 24 to 48 hours at 40 '. The digestive fluid is then slightly acidified with acetic acid, filtered and the filtrate is precipitated with calcium chloride or calcium acetate and one volume of alcohol. The precipitate is filtered off, washed with alcohol and dried. In this way, a yellowish white, tasteless powder is obtained, which is only partially soluble in water, contains around 10.5 percent P, 1 percent Fe and 9 to 10 percent Ca. Example: 2. The tryptic digestion liquid, as it was obtained in example i, is acidified with acetic acid and filtered off with lead sugar solution, as long as a precipitate is formed. The lead precipitate is filtered, washed out with water and stirred with a 2 percent sodium carbonate solution until the mixture turns pale pink on phenolphthalein paper. The phosphorus compounds dissolve as sodium salts, the lead remains insoluble as carbonate. The solution of the sodium salts is strongly concentrated in vacuo, precipitated with alcohol and dried in vacuo. In this way, the sodium salts of the three phosphorus-containing nuclei of the egg yolk are obtained in the form of a yellowish powder which is soluble in water.

Beispiel 3. Example 3.

Die Lösung der Natriumsalze, wie sie nach Beispiel 2 erhalten wird, wird mit einer LÖ-sung von Calciumchlorid oder Calciumacetat versetzt und die Fällung mit Hilfe von i Vol. Alkohol vervollständigt. Man erhält das gleiche Calciumsalz wie nach Beispiel i. Beispiel 4. Die Lösung der Natriumsalze, wie man sie nach Beispiel 2 erhält, wird in 3 Prozent Salzsäurtenthaltenden Alkohol gegossen, die Fällung filtriert, mit Alkohol gründlich gewaschen und getrocknet. Das erhaltene Pro-,dukt stellt die phosphorhaltigen Kerne des Eigelbs im freien Zustande dar. Die Verbindung ist ein weißes Pulver, welches in Wasser nur teilweise löslich ist,mit Alkalien lösliche Salze gibt, mit löslichen Erdalkali- und Metallsalzen, teils lösliche, teils unlösliche Salze gibt, gegenüber kalten Säuren ziemlich beständig, gegenüber Ätzalkalien sehr unbeständig ist. Die Verbindung gibt eine ausgesprochene Biuretreaktion, keine Millionsche Reaktion, dagegen eine Reaktion nach Molisch.The solution of the sodium salts, as obtained according to Example 2, is mixed with a solution of calcium chloride or calcium acetate and the precipitation is completed with the aid of one volume of alcohol. The same calcium salt is obtained as in Example i. Example 4. The solution of the sodium salts as obtained according to Example 2 is poured into alcohol containing 3 percent hydrochloric acid, the precipitate is filtered, washed thoroughly with alcohol and dried. The product obtained represents the phosphorus-containing kernels of the egg yolk in the free state. The compound is a white powder, which is only partially soluble in water, gives soluble salts with alkalis, with soluble alkaline earth and metal salts, partly soluble, partly insoluble Salts are fairly resistant to cold acids and very unstable to caustic alkalis. The compound gives a pronounced biuret reaction, not a Millionian reaction, but a Molisch reaction.

Es ist selbstverständlich, daß man statt Natriumcarbonat bei der Tryp.;iiiverd-iiiung Kaliumcarbonat und ebenso bei der Pepsinverdauung statt Salzsäure eine andere -Mineralsäure verwenden kann. Ferner kann man als Schwermetallsalze statt Blei- auch Kupfer-, Quecksilber-, Eisensalze u. dgl. verwenden. Endlich kann man bei der Überführung der Schwermetallsalze in Alkalisalze statt Alkalicarbonat andere Alkaliverhindun- 1 gen verwenden, deren Anionen mit den betreffenden Schwermetallen schwerlösliche Verbindungen bilden.It goes without saying that instead of sodium carbonate in tryp. Furthermore, instead of lead, copper, mercury, iron salts and the like can also be used as heavy metal salts. Finally you can in the conversion of heavy metal salts in alkaline salts instead of alkali other Alkaliverhindun- one form gen use their anions sparingly soluble compounds with the heavy metals compounds.

Claims

PATENT CLAIMS. i. Process for separating the phosphorus- and iron-containing nuclei contained in the egg yolk, characterized in that defatted egg yolk is first subjected to peptic digestion in the presence of a mineral acid, the latter being interrupted at a desired time by dulling the mineral acid used or by replacing it with an organic acid , the resulting precipitate is filtered off and subjected to tryptic digestion in a weakly alkaline medium, the digestive fluid obtained is then weakly acidified, filtered and the corresponding earth or alis salts are separated from the filtrate either by treatment with alkaline earth salts and alcohol or the heavy metal compounds of the phosphorus-containing nuclei by treatment with heavy metal salts , which are reacted with such alkali metal compounds, the anions of which form insoluble compounds with the heavy metal in question, whereupon the resulting alkali metal salts of the phosphorus-containing cores are optionally converted by additions tz of acidic alcohol separates the free acids. : 2. Embodiment of the process according to claim i, characterized in that the alkali metal compounds of the phosphorus-containing cores obtained according to claim i are deposited in the form of their alkaline earth metal compounds by treatment with alkaline earth metal salts with the addition of alcohol.