DE3242851A1 - Verfahren zur reinigung von menschlichen lymphokinen - Google Patents
Verfahren zur reinigung von menschlichen lymphokinenInfo
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Description
- Verfahren zur Reinigung von menschlichen Lymphokinen
- Lymphokine und insbesondere Interleukin-2 (= T-Zellwachstumsfaktor) können zur Therapie von Immundefizienzien angewendet werden, sei es zur Therapie von genetischer, erworbener oder iatrogener Immundefizienz. Bei Interleukin-2 handelt es sich vermutlich um ein Peptid oder Glykopeptid mit einem Mol.-Gew. von etwa 17 000.
- Es sind bereits die Reinigung von Interferon an RP 8-Umkehrphasen-Säulen (C8-Alkylkette) und die HochleistungsflUssigchromatographie von Proteinen an Siliciumdioxid beschrieben worden, das C1 18-Alkylketten trägt; vgl. Rubinstein in PNAS 76 (1979) 640 und Nice et al in J. Chromatographie 218 (1981) 569 bis 580. Demgegenuber sind Lymphokine als Peptide bzw. Glykopeptide, und zwar Interleukin-2 aus Mäusen und Menschen, bisher an RP 18-Umkehrphasen-SSulen mit geringen Ausbeuten von 5 bis 15 % gereinigt worden; vgl. Jahreabericht des Baseler Instituts fUr Immunologie 1981.
- Aufgabe der Erfindung ist es, den menschliche Lymphokine betreffenden Stand der Technik zu verbessern.
- Dazu wird erfindungsgemäß ein Verfahren zur Reinigung von menschlichen Lymphokinen vorgesehen, daß dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Lymphokine einer Umkehrphasen-Hochleistungsflussigchromatographie (HPLC) an Siliciumdioxid unterwirft, das C1 1O-Alkylketten trägt. Die Alkylketten können an das Siliciumdioxid kovalent gebunden sein. Man kann das Trennmaterial auch als an Siliciumdioxid kovalent gebundene Alkylphasen bezeichnen. Beispiele fur derartige Trennmaterialien finden sich bei Nice et al in J. Chromatographie 218 (1981) 569 bis 580.
- Das erfindungsgemäße Verfahren kann man beispielsweise so durchfUhren, daß man Siliciumdioxid mit C2 8-Alkylketten (insbesondere C6-Alkylketten), einen C1 4-Alkanol-Gradlenten (insbesondere C3-Alkanol-Gradienten) oder einen Acetonitril-Gradlenten und einen pH-Wert von 1 bis 9 (insbesondere 1 bis 5 oder 2 bis 3) anwendet.
- Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich besonders zur Reinigung von menschlichem Interleukin-2.
- Bevor man die menschlichen Lymphokine der Reinigung durch die erfindungsgemäße Umkehrphasen-HochleistungsflUssigchromatographie unterwirft, kann man in an sich bekannter Weise eine Adsorptionschromatographie und/oder eine Gelfiltration durchfUhren.
- Nachstehend wird die Erfindung durch ein Beisplel näher erläutert.
- Beispiel 1 Zur Reinigung von menschlichem Interleukin-2 aus Kulturmedium stimulierter Lymphozyten oder Zellinien wurden die folgenden drei Schritte durchgeführt.
- (1) Zuerst wurde eine Adsorptionschromatographie auf Cibachron-Blue oder Procion-Red-Säulen durchgefuhrt.
- (2) Danach wurde eine Gelfiltration Uber Sephadex-G-100-s Biogel-P-60- oder Toyosoda-G-3000-SW-Säulen in physiologischem Kochsalzpuffer durchgefUhrt.
- (3) Schließlich wurde eine Umkehrphasen-Hochleistung,sflUss chromatographie an einer Spherisorb-S5-Hexyl-Säule (4,5x 250 mm, Korngroße 5 /um) oder Spherisorb-S5-Nitril-Säule (4,5x250 mm, Korngröße 5 /um) in einem 1-molaren H3P04-Puffer .mi;t, dem folgenden Propanol-Gradienten durchgetUhrt: 0-30 min: 0-30 * n-Propanol in 1 M H3P04 30-60 min: 30 X n-Propanol 60-100 min: 30-45 % n-Propanol 100-120 min: 45 X n-Propanol Interleukin-2 wurde bei etwa 38 % n-Propanol nach sämtlichen anderen eluierbaren Proteinen in höchster Reinheit mit einer Ausbeute von ca. 50 X gewonnen.
Claims (4)
- Verfahren zur Reinigung von menschlichen Lymphokinen PATENTANSPRÜCHE 1. Verfahren zur Reinigung von menschlichen Lymphokinen, dadurch g e k e n n z e i c h n e t , daß man die Lymphokine einer Umkehrphasen-HochleistungsflUssigehromatographie an Siliciumdioxid unterwirft, das C1-10-Alkylketten trägt.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch g e k e n n -z e i c h n e t , daß man Siliciumdioxid mit C2- 8-Alkylketten (insbesondere C6-Alkylketten), einen C1 -Alkanol-Gradienten (insbesondere C3-Alkanol-Gradienten) oder Acetonitril-Gradienten und einen pH-Wert von 1 bis 9 (insbesondere 1 bis 5 oder 2 bis 3) anwendet.
- 3q Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch g e k e n n -t e 1 c h n e t , daß man Interleukin-2 reinigt.
- 4. Verfahren nach einem der vorhergehenden AnsprUche, dadurch g e k e n n z e i c h n e t , daß man in an sich bekannter Weise eine Adsorptionschromatographie und/oder eine Gelfiltration und danach die Umkehrphasen-HochleistungsflUssigchromatographie durchführt.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19823242851 DE3242851A1 (de) | 1982-11-19 | 1982-11-19 | Verfahren zur reinigung von menschlichen lymphokinen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19823242851 DE3242851A1 (de) | 1982-11-19 | 1982-11-19 | Verfahren zur reinigung von menschlichen lymphokinen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3242851A1 true DE3242851A1 (de) | 1984-05-24 |
Family
ID=6178527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19823242851 Ceased DE3242851A1 (de) | 1982-11-19 | 1982-11-19 | Verfahren zur reinigung von menschlichen lymphokinen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE3242851A1 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5419899A (en) * | 1984-03-28 | 1995-05-30 | Koths; Kirston | Purified, reduced recombinant interleukin-2 compositions |
-
1982
- 1982-11-19 DE DE19823242851 patent/DE3242851A1/de not_active Ceased
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J. Chromatography 218, S. 569-580, 1981 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5419899A (en) * | 1984-03-28 | 1995-05-30 | Koths; Kirston | Purified, reduced recombinant interleukin-2 compositions |
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