DE2806430A1 - Verfahren zum nachweis und zur bestimmung des lipoproteins lp-x im serum - Google Patents

Description

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Patentanmeldung

Anmelder: AKZO MOVo

IJssellaan 82 Arnhem, Niederlande

Titels Verfahren, zum Nachweis und zur Bestimmung des

lipoproteins LP-X im Serum_o

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1A-50 481 Anmelder: AKZO U.V.

Beschreibung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung des sogenannten Lipoproteins-j(LP-X) und eine Analyseneinheit zur Durchführung des Verfahrens.

Serum
/ enthält eine Anzahl von "normalen" Lipoproteinen, die nach

der Dichte eingeteilt und als Chylomikrone, VLDL, LDL und HDL bezeichnet werden. Sie enthalten freies und verestertes Cholesterin, Triglyceride, Phospholipide und Proteine.

Bei manchen Krankheitszuständen können andere Arten von Lipoproteinen im Serum gebildet werden und diese können als "abnorme" Lipoproteine angesehen werden. Das LP-X ist eines dieser abnormen Lipoproteine. Mit den jetzt zur Verfügung stehenden diagnostischen Hilfsmitteln können LP-X oder mit LP-X verwandte Lipoproteine bei einer Krankheit nachgewiesen werden, die auf einem Mangel an dem Enzym Lecithin/Cholesterol-Acyltransferase (EC 2.3.1·43) in der Leber beruht, einer außerordentlich seltenen angeborenen Stoffwechselstörung. Die Unfähigkeit der Leber, Cholesterin zu verestern, wird als einer der Gründe dafür angesehen, daß LP-X ein Lipoprotein mit einem verhältnismäßig hohen Gehalt an freiem Cholesterin gebildet wird. LP-X oder eine sehr nahe mit LP-X verwandte Substanz findet sich auch bei manchen Kindern kurz nach der Geburt. Ein Befund, der z. B. der physiologischen Unreife der Leberfunktion in der ersten Lebenszeit augeschrieben werden kann, oder der physiologisch deutlichen Verringerung der Synthese

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von Gallen säuren, durch die die Absorption von Fett "bei dem Kleinkind ebenfalls reduziert ist» In diesem Falle tritt LP-X nur nach der Geburt auf, nachdem die Nahrungsaufnahme begonnen hat.

LP-X tritt auch im Blut von nahezu allen Patienten auf, die an Chloestase leiden. Als Ergebnis eines intra- oder extrahepatischen Verschlusses tritt eine Anzahl von pathologischen Veränderungen auf, z. B. ändert sich der Bilirubinstoffwechsel so, daß die Patienten Gelbsucht bekommen» Die Aktivität einer Anzahl von Enzymen im Blut, z. Bo von alkalischer Phosphatase (EG 3.1.3.1), D-Glutamyltransferase (EG 2.3.2.1) und anderen Serumaminotrans^rasen (EO 2.6.1.2 und/oder 2.6.1.6) kann ebenfalls verändert werden. Gelbsucht (Ikterus) kann jedoch auch durch viele andere Krankheitszustände hervorgerufen werden, während diese Störungen auch ihre Wirkungen auf die oben erwähnten Enzymaktivitäten ausüben können. Es ist daher allgemein anerkannt, daß LP-X ein sehr viel spezifischerer Parameter für das Vorliegen von Gholestase ist als die oben angegebenen. Es ist nicht ohne Grund, daß LP-X auch "Cholestase spezifisches Lipoprotein" genannt wird.

Die meisten Verfahren zur Bestimmung von LP-X beruhen auf der Beobachtung, daß bei der Agargelelektrophorese LP-X zur Kathode wandert, d. h. in der anderen Richtung als die übrigen Lipoproteine. Eine Identifizierung mit Hilfe von beispielsweise lipophilen Farbstoffen, Immunpräzipitantien gegen LP-X oder ausfällende mehrwertige An.ion.en. machen einen qualitativen Nachweis und in extremen Fällen sogar eine seraiquantitative Bestimmung möglich,, Diese quantitative Bestimmung kann gegebenenfalls weiter verbessert werden durch andere Bestiramungs- und Identifizierungsverfahren, wie durch Anwendung von radioaktiv markierten Verbindungen oder Herausnehmen des Stückes von dem Agargel, das die LP-X-Fr a.k ti on enthält und chemische Bestimmung bestimmter Bestandteile davon, Z₀ B. der Phospho^lipide, Das elektrophoretische Verfahren erfordert in all diesen Fällen viel Zeit und Erfahrung und ist sehr schwierig durchzuführen.

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Die Ergebnisse sind manchmal selir unzuverlässig, z. B. nach, einer nicht ganz korrekten Handhabung oder Lagerung der zu analysierenden Probe oder bei Anwendung von ungeeignetem oder altem Agar.

Es gibt auch eine Reihe von quantitativen immunοchemischen Verfahren, bei denen a. B. das Serum-nach Entfernung von störenden Lipoproteinen-Verfahren, wie der Radialdiffusion nach Mancini oder der Elektroiramunodixfusion nach Laurell (Clin. Chem. 1974, 20(6), 676-81) unterworfen wird. In diesen .Fällen ist eine genauere Bestimmung des LP-X sicher möglich, aber die Verfahren erfordern zeitraubende Arbeiten und erfordern immer noch mehrere Stunden oder in einigen Fällen sogar Tage, bevor das Ergebnis abgelesen werden kann. Der Vorteil eines genauen quantitativen Verfahrens zur Bestimmung von LP-X ist außerordentlich groß. Wenn ein solches Verfahren die strengen Erfordernisse bezüglich der Einfachheit, Schnelligkeit und Reprodusierbarkeit erfüllt, kann der LP-X-Gehalt als Hilfe bei der Diagnose und Therapie von Cholestase angewandt werden. Wenn die Zunahme unter einem Grenzwert von ungefähr 400 mg pro 100 ml liegt, liegt in vielen Fällen eine intrahepatische Cholestase vor, während bei der extrahepatischen Cholestase,die im allgemeinen operabel ist, der Serum LP-X-Gehalt weit über diesen Wert hinausgehen kann. Eine quantitative Bestimmung von LP-X stellt auch einen wichtigen Beitrag dar zur Diagnose und Behandlung von Fällen von Cholestas^³,"¹⁷ die durch Anwendung bestimmter Arzneimittel verursacht worden sind.

Ein Verfahren zur qualitativen und quantitativen Bestimmung von LP-X wurde nun entwickelt. Dieses Verfahren besteht darin, daß man zunächst die Apo-B-haltigen Lipoproteine in an sich bekannter Weise entfernt, anschließend zu dem verbleibenden Serum Substanzen zugibt, die die Löslichkeit von Lipoproteinen verringern und die Menge an LP-X in der entstehenden LP-X-Suspension mit Hilfe photooptischer Verfahren mißt und bestimmt.

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Die Entfernung von störenden Lipoproteinen wird vorzugsweise erreicht, indem man das Serum mit einem Antikörper oder Antiserum gegen das Lipoprotein mit geringer Dichte (LDL) oder gegen das Apo-pro te in-B davon zusammenbringt,, Dieses Antiserum oder der Antikörper werden vorzugsweise in gefriergetrocknetem Zustand aufbewahrt und zugegeben. Sie können jedoch auch in Form einer Lösung angewandt werden.

Neben einer immunochemischen Trennung können die störenden Lipoproteine auch durch Zugabe bestimmter Substanzen, wie Goncanavalin A oder anderen Lektinen, Hydroxylapatit, Aerosil usw., entfernt werden,

Antikörper gegen Lipoproteine, enthaltend Apo-B können erhalten werden von Säugetieren, z. B. Kaninchen, Kühen, Schafen oder Pferden durch Immunisierung dieser Tiere mit Lipoproteinen oder mit/entlipidisierten Lipoproteinen menschlichen Ursprungs, die Apolipoprotein B enthielten, z. B. mit menschlichem LDL₀ Die auf diese Weise erhaltenen Antisera können weiter verarbeitet werden, um a) lipoproteinfreie Tiersera., b) die y—GrIobulinfraktion· davon oder c) den reinen, nur für LP-B spezifischen Antikörper zu erhalten„

Ea hat sich gezeigt, daß LP-X enthaltende Sera._? wenn sie mit Lösungen von oder lyophylisiertem Antilipoprotein /zusammengebracht werden, ein Präcipitat ergeben, das alles TLDL und LDL (mit Ausnahme von LP-X) entfernte Überraschenderweise hat es sich gezeigt, daß diese Präcipitation praktisch augenblicklich, eintritt und daß nach Abtrennung des entstehenden Agglutinate, ζ. B. durch Abfiltrieren oder Zentrifugieren sofort eine klare Lösung erhalten wird» Wenn die vorhandene Antikörpermenge nicht ausreicht, um das gesamte VLDL und EDL in der Probe zu entfernen j ist das Piltrat trübe oder opako In diesem Falle wird eine weitere Menge Antikörper zu dem Serum zugegeben und anschließend die Probe erneut filtriert oder zentrifugiert» In allen Fällen bleibt das LP-X in dem restlichen Serum in Lösung zusammen mit dem HDL, spfern dieses aus Teilchen mit den Apo-LipoproteiQen A und C bestehto

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Nach. Abtrennung der störenden Lipoproteine, gegebenenfalls als Immunkomplex, werden die Substanzen zur Verringerung der Löslichkeit von LP-X zu dem restlichen Serum zugegeben. Das kann erreicht werden durch Zugabe von Substanzen mit anionischem oder polyanionischen Charakter, z. B. Salzen von Wolframsäure, Phosphowolframsäure, Molybdänsäure, Salzen von höheren aliphatischen Sulfaten und Carbonsäuren, wie Natriumdodecylsulfat, Natriumlaurat und Natriumoleat, Salzen von Gallensäure, wie Natriuiacholat oder Kaliumdesoxycholat, Polykationen, sulfatisiertenPolysacchariden, wie Dextransulfat und Heparinoide»!

Die angegebenen anionischen Reagentien werden vorzugsweise in Kombination mit Metallverbindungen, besonders zweiwertigen Metallverbindungen, wie Salzen von Magnesium, Calcium oder Mangan, angewandt. Es kann z. B. auch. Polyvinylpyrrolidon angewandt werden.

Durch Zugabe der oben erwähnten Reagentien wird das LP-X unlöslich oder wenig löslich. Im allgemeinen werden diese Substanzen in einer solchen Konzentration zugegeben, daß ein System von feinen Teilchen,so homogen wie möglich dispergiert, entsteht, so daß das unlösliche System sich nur sehr langsam absetzt. Die Menge an LP-X wird anschließend mit Hilfe photooptischer Verfahr en, z. B. durch Trübungsmessung (jEurbidometrie ode2?ifeph.elometrie) ,bestimmt. Das wird erreicht durch Messung in einem Turbidometer oder Nephilometer nach dem folgenden Prinzip. Wenn Licht auf ein System von suspendierten feinen Teilchen auffällt, geht ein Teil des Lichtes hindurch, ein weiterer Teil wird gestreut und ein Teil wird

möglicherweise auch absorbiert. Bei der Trübungsmessung wird das Verhältnis von durchgehendem zu einfallendem Licht angewandt, um die Konzentration an suspendierten Teilchen zu messen. Bei der Nephelometrie wird das Verhältnis von gestreutem Licht zu einfallendem Licht zu dieser Konzentrationsbestimmung angewandt.

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Eine Standardisierung wird erreicht durch Vergleich, mit gereinigtem LP-X, das a.us dem Blut von7ch.olesta.se leidenden Patienten oder Tieren, bei denen künstlich, eine Gh.olesta.se erzeugt worden ist (z. B. Hunden) gewonnen worden ist. Oa LP-X nicht in großer Menge zur Verfügung gestellt werden kann und nur begrenzt lagerfähig ist, selbst bei der bestmöglichen Stabilisierung, kann ein interner turbidometrischer oder nephelometrischer Standard angewandt werden. Dieser besteht vorzugsweise aus einem Lyophilisat, das hergestellt worden ist aus einem Serum menschlichen oder tierischen Ursprungs oder aus Substanzen, die ebenso wie LP-X ein homogen dispergiertes System aus Teilchen mit dem angewandten Anionenreagens ergeben. Beispiele hierfür sind lyophilisierte oder stabilisierte Lösungen von menschlichen oder tierischen Lipoproteinen, wie VLDL und/oder LDL, lyophilisiertes oder gelöstes Protaminsulfat oder ein Gemisch davon. In diesem Falle wird der innere Standard bezüglich LP-X geeicht, wodurch sehr viel weniger dieses teuren Materials erforderlich ist, ohne daß die wichtige Genauigkeit nachteilig beeinflußt wird.

Obwohl einzelne Elemente dieses Testverfahrens an sich bekannt sind, ergeben sie in ihrer Kombination ein neues und überraschend schnelles, einfaches und spezifisches Testverfahren, das eine sehr hohe Genauigkeit bzw«, Zuverlässigkeit besitzt. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren sind darüberhinaus keine teuren und speziellen Ausrüstungen erforderlich und auch keine besondere Erfahrung. Im Gegenteil kann der Test von verhältnismäßig ungeübten Personen mit üblichen Laborvorrichtungen durchgeführt werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann besonders leicht durchgeführt werden mit Hilfe einer Analyseneinheit, enthaltend im wesentlichen

a) ein Antiserum oder einen Antikörper gegen Apolipoprotein-B;

b) einen LP-X Standard und/oder einen Trübungsstandard, der gegen LP-X geeicht ist;

c) ein wäßriges Reagens, das die Löslichkeit von LP-X herabsetzt.

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Die unter a) angegebene immunologische Komponente kann gegebenenfalls in einen unlöslichen Träger gekoppelt sein, so daß die bei der Bestimmung störenden Lipoproteine noch, leichter von dem Serum entfernt werden können.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.

Beispiel 1

Es wurde eine Analyaeneinheit hergestellt, enthaltend die folgenden Komponenten:

10 Reagensgläser A^, die mit Stopfen verschlossen waren und jeweils 5 mg lyophilisiertes Antiapolipoprotein B enthielten, das erhalten worden war nach Biochem. Biophys. Acta, 188 (1969), 157, aus dem Serum von Pferden, die mit reinem Human-LDL immunisiert worden waren;

10 identische Reagensgläser Ap₁ enthaltend 0,1 mg Protaminsulfat in lyphilisierter Form;

2 χ 10 identische Reagensgläser A- bzw. A·,, , sauber, ohne Stopfen;

1 Fläschchen, enthaltend stabilisiertes LP-X-positives Serum mit einem bekannten Gehalt an LP-X (103,3 mg/100 ml); 1 Pläschchen, enthaltend 1 ml einer wäßrigen Lösung (Fällungsreagens P), bestehend aus

Dextransulfa.t 500, Natriumsalz 0,65 mg

Magens iumchloridiiexahydrat 12,7 mg

Nipagin 1 mg

Nipasol 1 mg

1 Fläschchen, enthaltend 10 ml einer wäßrigen Lösung(Verdünnungsmittel D), bestehend aus

Natriumchlorid 90 mg

Magens iumchloridiiexahydrat 100 mg

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Beispiel 2

Die folgenden Bestandteile der Analyseneinheit, wie sie in Beispiel 1 beschrieben ist, wurden in ein Gestell gegeben: 2 Rea.gensgläser A..

1 Reagensglas A^

2 Reagensgläser A~

pa

2 Reagensgläser A.,,

Die Stopfen wurden von den Reagensgläsern entfernt und anschließend 150 /ul chylomikronfreies Patientenserum,in eines der Reagensgläser A.. gegeben, und 150 /ul des IP-X-positiven Vergleichsserums in das andere Reagensglas A₁, und es wurde heftig geschüttelt. Diese Reagensgläser wurden anschließend mit 3000 g zentrifugiert und danach 50 /ul der klaren überstehenden Flüssigkeit in jedes der Reagensgläser A,„ und A^-,

Ja JO

pipettiert. Dann wurden 50 /ul physiologische Salzlösung in eines der Gläser k~ pipettiert.

10 /Ul Dextransulfatlösung wurden in die Gläser Ag und A·,, pipettiert und schließlich wurden 500 /ul des Verdünnungsmittels (D) in die Gläser Ag, A~ und A^ gegeben.

Nach kräftigem Schütteln wurden die Reagensgläser In einem Zeiss PMQ II Spektrophotometer bei 400 um untersucht. Die physiologische Salzlösung diente zur Festlegung des 0-Punktes

für die Probe A₀ und der Inhalt der Gläser A^_ diente zur Festig jS

Setzung des 0-Punktes für die Probe in den Gläsern. A.,, (für jede Probe einzeln)

Die gemessenen Absorptionen waren: A₂ :0,140

Α.,, : (Patientenserum): 0,620
A,^:(LP-X Standardserum): 0,450.

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Aus diesen Absorptionen kann berechnet werden, daß der LP-X Gehalt des Patientenserums 142,5 -5,7 mg/100 ml beträgt. Eine Absorption von 0,100 für den Trübungsstandard Protaminsulfat entspricht 22,95 mg LP-X/100 ml.

Beispiel 3

Es wurde eine Analyseneinheit wie in Beispiel 1 zusammengestellt, wobei das Fläschchen mit dem LP-X Standard weggelassen wurde und das lyphilisierte Antiapolipoprotein B in den Reagensgläsern A.. ersetzt wurde durch 50 /ul einer Lösung a.us 3 mg Antiapolipoprotein B von Kaninchen.

Die Bestimmung wurde mit einem anderen Patientenserum, wie in Beispiel 2 durchgeführt (unter Wegla.ssung des LP-X Vergleichs) Die Trübungsmessungen des Glases A^-, ergaben einen Wert von 0,285, der LP-X Gehalt dieses Serums berechnet sich damit zu 87,2 - 3,5 mg pro 100 ml.

Beispiel 4

Es wurde eine Analyseneinheit entsprechend Beispiel 1 zusammengestellt mit den folgenden Modifikationen:

a) das lläaschchen mit dem LP-X Vergleich (Standard) wurde ersetzt durch ein Fläschchen, enthaltend lyophilisiertes Pferdeserum. Dieses muß vor der Anwendung durch Zugabe von 1 ml Salzlösung gelöst (solubilisiert) werden.

b) Das Anionenreagens bestand aus 1 ml wäßriger Lösung von: Heparin (150 USP/mg) 6 mg Mn-II-chloridtetrahydrat 60 mg

Nipa.gin 1 mg

Nipasol 1 mg

c) Das Verdünnungsmittel besta/nd aus 10 ml einer wäßrigen Lösung a.us:

Natriumchlorid 90 mg

Mn-II-chloridtetrahydrat 100 mg

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Die Sera, von drei Patienten wurden entsprechend Beispiel 2 untersucht. Es wurden die folgenden Absorptionen gemessen:

Probe 1 Probe 2 Probe

A₂ : 0,425 A₂ : 0,434 A₂ : 0,418

A_5b : (LP-X Standard) 0,652

A_5b : 0,825 A^ : 0,072 A^ : 0,008

Aus diesen Messungen kann geschlossen bzw. berechnet werden, daß Probe 1 140,2 - 4,9 mg/100 ml LP-X, Probe 2 12,0 - 0,4 mg LP-X/100 ml und Probe 3 keine meßbare Menge LP-X enthielt. Die Gesamtdauer der Bestimmung dieser drei Proben betrug 21 min.

Beispiel 5

Eine Analyseneinheit wurde wie in Beispiel 1 zusammengestellt, wobei die folgenden Komponenten geändert wurden:

a) Bas Fläschchen mit dem "LP-X Standard" enthielt eine stabilisierte Lösung, enthaltend 100 mg/100 ml Human LDL.

b) Das Reagens für die Trübung bestand aus: Natriumphosphowolframat 10 mg Magnesiumchloridiiexahydrat 50 mg Wasser auf 1 ml

c) Das Fläschchen mit dem Verdünnungsmittel enthielt: Natriumchlorid 90 mg MgOI₂.6 H₂O 160 mg Wasser auf 10 ml

Die Trübung der Proben in diesem Falle wurde mit einem Laser Uephelometer (Behring Werke AG, He-Ne Laser) gemessen_o

Aufgrund der höheren Empfindlichkeit wurden alle Proben in diesem Falle durch Zugabe von 1 ml Lösung D anstelle von 0,5 ml verdünnt.Es wurden die folgenden Werte gemessen?

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. AU-

Probe 1 Probe 2

1A-5O

A₂ : 6,29 V A₂ : 6,33 V

A₅₁₃ : (Standard-LDL) 9,61 V

A_3b : 11,62 V A^ : 1,45 V

Aus diesen Werten wurde berechnet, daß die Probe 1 103,2 -3,1 mg LP-X/100 ml und die Probe 2 12,8 - 0,35 mg/1OO ml enthielt. Der angesetzte LP-X Gehalt des Protaminsulfatstandards betrug 55,8 mg/100 ml und des LDL Standards 85,3 mg/ 100 ml.

Beispiel 6

Es wurden Analyseneinheiten entsprechend Beispiel 1 zusammengestellt, wobei das Trübungsreagens aus: Matriumdodecylsulfat 14 mg

Wasser auf 1 ml

bestand. Das Verdünnungsmittel bestand aus: Natriumchlorid 90 mg

MgOl₂.6 H₂O 124 mg

Wasser auf 10 ml

Beispiel 7

Es wurde eine Analyseneinheit zusammengestellt, umfassend 30 Reagensgläser A^, die mit Gummistopfen verschlossen waren, und 2 mg lyophilisiertes Antiapolipoprotein B enthielten, das hergestellt worden war entsprechend Biochem. Biophys. Acta 188 (1969) 157 aus dem Serum von Schafen, die mit reinem Human-LP-B immunisiert worden waren. Die Analyseneinheit enthielt außerdem eine schwarze Bodenplatte aus Kunststoff oder Glas mit Vertiefungen.

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Ein Fläschchen, enthaltend 1 ml einer wäßrigen Lösung aus: Hatriumphosphorwolframat 10 mg

MgGl₂.6 H₂O 50 mg

Nipagin 1 mg

Nipasol 1 mg

1 Pa.steurpipette

1 Fläschchen, enthaltend stabilisiertes LP-X positives Serum.

1 Fläschchen, enthaltend stabilisiertes LP-X negatives Serum.

Verfahren:

Die Stopfen wurden von den Reagensgläsern entfernt und 50 /ul unterschiedlicher Proben sowie von dem positiven und negativen Standard in die einzelnen Gläschen A₁ pipettiert. Die Reagensgläser wurden kräftig geschüttelt und 5 min bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wurden sie 5 min mit 3000 g zentrifugiert.

Die überstehende Flüssigkeit der Reagensgläser wurde direkt

Vertiefungen
in einzelne der Kunststoffplatte gegeben und anschließend ein Tropfen des Fällmittels zugegeben.

Das sofortige Auftreten eines Niederschlags oder einer Trübung ist ein' Zeichen für LP-X.

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Claims (9)

1. Patentansprüche

   Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung des Lipoproteins LP-X im Serum, dadurch gekennzeichnet , daß man zunächst die störenden Apo-B-enthaltenden Lipoproteine nach an sich bekannten Verfahren entfernt und an= schließend Substanzen zugibt, die die Löslichkeit von Lipoproteinen erhöhen und die LP-X Menge in der entstehenden Suspension mit Hilfe visueller oder photooptischer Verfahren bestimmt.
2. 2.

   Verfahren nach Anspruch 1, dadurch g e k e η η

   zeichne.t, daß man zur Entfernung der störenden Lipoproteine Antikörper oder ein Antiserum gegen Lipoprotein LDL oder gegen das Apoprotein B davon zusetzte
3. 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch g e k e η η zeichnets daß man Antikörper oder Antiserum in gefriergetrocknetem Zustand zusetzte
4. 4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3_S dadurch g e kennzeichnet j daß man zur Verringerung der Löslichkeit ein (poly)anionisches Reagens zusetzt©
5. 5. Analyseneinheit zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 1 bis 4₅ bestehend im wesentlichen auss '

   a) einem Antiserum oder Antikörper gegen Apolipoprotein Bj

   b) einem LP=X Standard und/oder einem Trübungsstandard, der gegen LP-X geeicht ist5

   c) einem Reagens, das die Löslichkeit von LP=X verringerte

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   ORIGINAL INSPECTED

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6. 6. Aaalyseneinheit nach Anspruch 5, dadurch g e k e η η zeichnet, daß Antikörper oder Antiserum an einen festen Träger gekuppelt sind.
7. 7. Analyseneinheit nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet , daß das LP-X tierischen Ursprungs ist.
8. 8o Analyseneinheit nach Anspruch 5 his 7, dadurch gekennzeichnet, daß der Triibungs standard Pr ο t ami ns u If a t^ nt hält.
9. 9. Analyseneinheit nach Anspruch 5 bis 8, dadurch gekennzeichnet , daß das Fällungsreagens eine mehrwertige Metallverbindung enthält.

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