DE2659864C3 - Diagnostisches Verfahren - Google Patents

Diagnostisches Verfahren

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Description

Gegenstand des Hauptpatents ist ein diagnostisches Verfahren in vitro, bei dem Lymphozyten mit Antigenen inkubiert, das Inkubationsgemisch zu einer Dispersion von Indikatorpartikeln gegeben und die Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in einem elektrischen Feld gemessen wird, wobei mikroskopisch beobachtbare elektrisch geladene Indikatorpartikel mit homogener Größenverteilung, aber nicht Makrophagen verwendet werden. Die Lymphozyten werden dabei vor Zugabe der Indikatorpartikel aus dem Inkubationsgemisch abgetrennt
Es wurde nun gefunden, daß das Verfahren des Hauptanspruchs auch ohne vorherige Abtrennung der Indikatorpartikel erfolgreich ausgeführt werden kann. Gegenstand des vorliegenden Zusatzpatents ist demnach ein diagnostisches Verfahren in vitro, bei dem Lymphozyten mit Antigenen inkubiert, das Inkubationsgemisch zu einer Dispersion von Indikatorpartikeln gegeben und die Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in einem elektrischen Feld gemessen wird, wobei mikroskopisch beobachtbare elektrisch geladene Indikatorpartikel mit homogener Größenverteilung, aber nicht Makrophagen verwendet werden, dadurch gekennzeichnet, daß die Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in Gegenwart der aus dem Inkubationsgemisch nicht abgetrennten Lymphozyten gemessen wird.
Die Durchführung des Verfahrens und seine praktische Anwendung unterscheidet sich, abgesehen von der erwähnten Unterlassung, nicht von denen der Hauptanmeldung.
Die Erfindung wird an nachstehend angegebenen Beispielen verdeutlicht-
Beispiel 1
Mit 20 ml Heparin versetztes venöses Blut eines Probanden werden 1 :2 mit Hanks' Lösung verdünnt und auf einen zweischichtigen Gradienten aufgetragen,
ι ο bestehend aus je 20 ml Lösung unterschiedlicher Dichte, und zwar einer oberen Schicht A, bestehend aus Natrium-, Calcium-, Magnesium- und Methylglukaminsalzen der Metrizoesäure (Rompagon®), Cilag-Chemie GmbH, Aisbach) und einem hochmolekularen Copolymer von Saccharose und Epichlorhydrin (Ficoll"), Pharmacia, Uppsala) mit der Dichte 1,077 und einer unteren Schicht B bestehend aus den genannten Substanzen, jedoch mit der Dichte 1,119. Die Verdünnung, aufgetragen auf den Gradienten, wird über 20 Min. bei 800 g zentrifugiert. Der über der Schicht A liegende Lymphozytenring wird abgehebert, dreimal in Hanks' Lösung gewaschen und die so gewonnenen Lymphozyten in Dulbeco-Medium aufgenommen. Die die Messung störenden geformten Blutbestandteile, insbesondere Granulozyten und Erythrozyten, befinden sich an der Grenzschicht zwischen Schicht A und B, bzw. am Boden des Gradientengefäßes.
Als Testansatz werden gemischt 1 χ 106 Lymphozyten mit 5 χ 107 Indikatorpartikeln (tannierte und sulfosalizylsäurebehandelte Erythrozyten im Sinne der Erfindung) unter Zusatz des Antigens EF in der Konzentration von 0,3 mg/ml in einem Gesamtvolumen von 3,5 ml. Nach Inkubation für 60 Min. wird das Gemisch in ein Zytopherometer gegeben und die elektrophoretische Wanderung der im Gemisch enthaltenen Indikatorpartikel bestimmt. Die Verlangsamung der Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel läßt auf das Vorliegen einer malignen Erkrankung des Probanden schließen. Als Kontrolle dient ein entsprechender Testansatz unter Weglassen des Antigens.
Beispiel 2
Werden wie im Beispiel 1 im Testansatz Lymphozyten eines Probanden an Stelle eines löslichen Antigens, EF, mit 1 χ ΙΟ6 Lymphozyten eines nicht verwandten zweiten Probanden gemischt und inkubiert im Sinne einer gemischten Lymphozytenkultur und werden diesem Gemisch ebenfalls wie im Beispiel 1 5 χ 107 Indikatorpartikel zugegeben, so läßt sich nach Messung der Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in einem Zytopherometer der Grad der Inkompatibilität zwischen den zwei Lymphozytenpolulationen bzw. den Probanden feststellen, im Sinne etwa einer Spender-Empfänger-Auswahl bei der Organtransplantation.

Claims (3)

Patentansprüche:
1. Diagnostisches Verfahren in vitro gemäß Patent 24 41536, bei dem Lymphozyten mit Antigenen inkubiert, das. Inkubationsgemisch zu einer Dispersion von Indikatorpartikeln gegeben und die Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in einem elektrischen Feld gemessen wird, wobei mikroskopisch beobachtbare elektrisch geladene Indikatorpartikel mit homogener Größenverteilung, aber nicht Makrophagen, verwendet werden, dadurch gekennzeichnet, daß die Wanderungsgeschwindigkeit der Indikatorpartikel in Gegenwart der aus dem Inkubationsgemisch nicht abgetrennten Lymphozyten gemessen wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Indikatorpartikel denaturierte Erythrozyten verwendet werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Indikatorpartikel Latex-Partikel verwendet werden.
DE2659864A 1974-08-30 1976-08-23 Diagnostisches Verfahren Expired DE2659864C3 (de)

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DE2659864A1 DE2659864A1 (de) 1977-10-27
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DE2750521A1 (de) * 1977-11-11 1979-05-17 Behringwerke Ag Diagnostisches verfahren
DE2847877A1 (de) * 1978-11-04 1980-05-22 Behringwerke Ag Reagenz zum nachweis der infektioesen mononucleose

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