DE2405983A1

DE2405983A1 - Atmungsfoerderndes praeparat

Info

Publication number: DE2405983A1
Application number: DE19742405983
Authority: DE
Inventors: Auf Nichtnennung Antrag
Original assignee: BOETTGER KG PHARMAZEUTISCHE UN
Current assignee: BOETTGER KG PHARMAZEUTISCHE UN
Priority date: 1974-02-08
Filing date: 1974-02-08
Publication date: 1975-08-14
Also published as: DE2405983B2; JPS5538929B2; JPS50107117A

Description

Atmungsförderndes Präparat Die Erfindung betrifft ein atmungsförderndes Präparat sowie ein Verfahren zu dessen Herstellung.
Es sind seit langem Stoffe bekannt, die gegenüber der Zellatmung und dem RES(retikulo-endotheliales System) eine aktivierende Wirkung zeigen und beispielsweise zur Behebung solcher Symptome verwendet werden können, die als Folge von Sauerstoffmangel im Gewebe auftreten (Hypoxämische und hypoxidotische Zustände der verschiedenen Gewebe und Organe ). Obwohl die genaue Zusammensetzung derartiger Stoffe nach Aussage der einschlägigen Literatur doch nicht geklärt ist, sind bereits durch die CH-PS 365 483 und DT-PS 1 076 888 Verfahren bekannt geworden, die die Herstellung solcher Wirkstoffe aus dem Blut junger Schlachttiere aufzeigen.
Es hat sich jedoch gezeigt, daß die aktivierende Wirkung dieser Stoffe begrenzt ist und daß die beschriebenen Verfahren im übrigen sehr aufwendig und teuer sind, da zur Herstellung einer geeigneten Menge Trockensubstanz eirn im Verhältnis sehr große Menge frischen Bluts eben geschlachteter Tiere notwendig ist. Abgesehen von den Schwierigkeiten bei der Beschaffung derartig großer Blutmengen, ist auch deren Aufbereitung äußerst umständlich und aufwendig, da der gesamte Prozeß steriles und pyrogenfreies Arbeiten erfordert. Hinzu kommt der Umstand, daß die erhaltenen Extrakte nach dem Konzentrieren längere Zeit Ausscheidungen und Niederschläge zeigen, die einer Verwendung als injizierbares Mittel entgegenstehen.
Durch bestimmte Testverfahren, die z.B. auf der Messung des Sauerstoffverbrauchs von Leber-Homogenate und Leber-Mitochondrien im Warburg Apparat beruhen, wurde nun ein besonders aktives und reines Konzentrat atmungsfördernder Wirkstoffe gefunden, das gekennzeichnet ist durch einen Gehalt an eiweißfreiem Extrakt aus unter sterilen Bedingungen hämolysiertem Blut oder entsprechend behandelten Mark- oder Organteilen von Säugetieren als Wirkstoff in einer gepufferten stabilen wässrigen Lösung aus zum Teil im Blut nachweisbaren niedermolekularen Komponenten, die selbst bereits atmungssteigernde bzw. stoffwechselaktivierende und regenerationsfördernde Eigenschaften aufweist.
Ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Präparats ist dadurch gekennzeichnet, daß zunächst von den z.T. im Blut nachweisbaren niedermolekularen Komponenten die nipaginlöslichen Stoffe in einer ausreichenden Menge einer ersten Teillösung, bestehend aus einer 0,5 - I,O%igen Nipagin-Lösung, gelöst werden und die restlichen Stoffe mit einer ausreichenden Menge einer zweiten Teillösung aus 2nNaOH versetzt werden und daß dann die beiden Teillösungen mit einer ausreichenden Menge einer auf pH 6,o - 7,0 eingestellten Pufferlösung vermischt und auf die Gesamtlösungsmenge verdünnt werden, die anschließend nach Zugabe von Kochsalz und Aktivkohle steril filtriert und mit einem Gehalt an aus hämolysiertem Blut oder entsprechend behandelten Mark- oder Organteilen gewonnenen eiweißfreien Extrakt versetzt wird.
Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung sind in den übrigen Patentansprüchen enthalten.
Die Erfindung wird anhand des nachfolgenden Beispiels erläutert: 10 1 frisches ungerührtes Rinderblut werden auf dem Schlachthof mit 40 1 bidestilliertem Wasser, das 25 g Nipagin M oder Nipakombin B enthält, vermischt und in der Kälte aufbewahrt (minus 10 bis minus 200). Das ämolysat wird länger als 5 Tage stehengelassen, bei Raumtemperatur aufgetaut und dann unter Rühren durch Zusatz von Milchsäure oder anderen im Organismus vorhandenen Säuren der C-Zahl 2-6 auf pH 6 gebracht und im Wasserbad unter Rühren 10 bis 60 Minuten auf 800 erhitzt. Nach sofortigem Abnutschen über Kieselgel S (oder auch durch Zentrifugieren) wird ein Filtrat (Zentrifugat) erhalten, daß im Vakuumrotationsverdampfer bei pH 6 zur Trockne eingedampft wird.
Von der erhaltenen Trockensubstanz werden ca. 30 g in 1001 einer Lösung aufgenommen, die aus den nachfolgenden Teillösungen hergestellt worden ist. Die der Lösung zugegebene Extraktmenge kann je nach vorhandener Menge und Qualität des als Ausgangsmaterial zur Verfügung stehenden Bluts beliebig gesteigert werden.
Teillösung I In einer Lösung aus 25 g p-Hydroxybenzoesäuremethylester in 40 1 Wasser (bei 700C gelöst) werden bei Zimmertemperatur die folgenden Stoffe gelöst: 1. Aminosäuren 34gM -Alanin; llgß-Alanin, Glykoll; 5,5g iso-Leucin; 3,4g Methionin L; 2,2-2,7g L-Serin, Prolin, Hydroxyprolin; 1,lg D,L-Threonin; unter 1,lg Tryptophan; 22g Lysinhydrochlorid; 5,5g Argininhydrochlorid; O,9g L(+)-Cysteinhydrochlorid; 2. Oligopeptide 7,5g Glutathion; unter Ig Glutathion-Analoge, SH-haltige Di-, Tri- und Tetrapeptide; 3. Karbonsäuren einschl. Hydroxy- und Ketoderivate 420g Zitronensäure; 17,5g Brenztraubensäure (Pyruvat); 2,5goC-Ketoglutar säure; 1,13-1,25g Apfelsäure, Bernsteinsäure; unter ig Oxalessigsäure, iso-Zitronensäure, Fumarsäure; 4. Purin- und Pyrimidinderivate und Harnstoff 57,5g Inosin; unter 5g Guanosin, Adenosin, Inosinphosphat; 125g Harnstoff; 5. Hexite 300g Mannit 6. Schwefelverbindungen lOg Taurin; 1,25g Cysteinsäure; unter 2g Cystathionin, Cysteamin, Homocystein; Teillösung II In 1,1 1 2nNaO werden folgende Stoffe gelöst: 1. Aminosäuren und -derivate 35g Asparaginsäure; 55g Glutaminsäure; 5,5g Valin; 3,0-3,7g Leucin, DL-Phenylalanin, Hippursäure; 2,5g Tyrosin; unter Ig Citrullin, Asparagin; 2. wasserlösl. Vitamine 0,25g p-Aminobenzoesäure; unter O,lg B-Vitamine; 3. Purin- und Pyrimidinderivate lig Harnsäure; unter Ig Orotsäure,Cytidin und -diphosphate; (die Harnsäure wird in 0,55 1 2nNaOH gesondert gelöst) 4. Schwefelverbindungen Teillösung III 2g Djenkolsäure In 2,25 1 2nNaOH werden 420 g Zitronensäure und 400 g N-Methylglukamin gelöst, mit 20 3 Wasser verdünnt und auf pH 6175 eingestellt.
Die Teillösungen 1,11 und III werden nun zusammengegossen und mit 900 g NaCl p-a. und 375 g Natriumlactatlösung (50%ig) versetzt.
Nach Zugabe von 31,5 g Natriumascorbat wird auf 100 1 auf gefüllt und auf pil 6,75 eingestellt. Nach weiterer Zugabe von 5 g frisch ausgeglühter Aktivkohle wird die Gesamtlösung nach mehrstündigem Rühren steril abgefüllt und zur Aufnahme des aus Rinderblut (oder durch entsprechende Behandlung von Mark- und/oder Organteilen) hergestellten Extrakts verwendet. Nach nochmaliger steriler Abfüllung wird der pyrogene Wirkstoff in Ampullen zur Verwendung gebracht.
Der etwas gelblich gefärbte Wirkstoff hat folgende Eigenschaften: pH-Wert 6,75 Trockenrückstand 30 mg/ml (in Trockenpistole) Stickstoff 1,2 mg/ml (nach Kjeldahl) UV-Spektrum max 250 mp , Schulter bei (Verdünnung 1:100) 295 my Atmungssteigerungsfaktor 2,5-3,0 (Warburg-Test) Pyrogentest pyrogenfrei (Kaninchentest) Sterilität keimfrei (Thioglykolattest) Aminosäuren Dünnschichtchromatogramm RES aktiviert Das Dünnschichtchromatogramm entspricht dem von Präpaten, die ausschließlich aus Blut gewonnen wurden. Das erfindungsgemäße Präparat zeigt auch bei einer wesentlich höheren Atmungssteigerung einen konstanten P/O-Quotienten, was beweist, daß die beobachtete Atmungssteigerung mit der Phosphataufnahme gekoppelt ist (ATP-Bildung).

Claims

PATENTANSPRÜCHE
01 Atmungsförderndes Präparat, gekennzeichnet durch einen eiweiß freien Extrakt aus unter sterilen Bedingungen hämolysiertem Blut oder entsprechend behandelten Mark-oder Organteilen von Säugetieren, der als Wirkstoff in einer Lösung mit folgenden z.T. zu Gruppen zusammengefaßten und in Gewichtsprozenten angegebenen Stoffen vorhanden ist: I im Blut nachweisbare Stoffe a) 0,9 . 10 -5 - 6,o . 10-2 Aminosäuren und -derivate einschl. Oligopeptide b) 2,5 . 10 - 3,0 . 10 wasserlösliche Vitamine c) 1,0 . 10 - - 0,2 Karbonsäuren e-inschl. Hydroxy- und Ketoderivate d) 1,0 . 10 - 0,15 Purin- und Pyrimidinderivate und Harnstoff e) 0,1 - 05 Hexie f) 0,5 - 1,0 NaCl II Schwefelverbindungen 1,0 . 10 -5 - 1,0 . 10 vom Cystein ableitbare Derivate III mit 2nNaOH auf pH 6,0 - 7,0 eingestellte Puffersubstanzen a) 0,3 - 0,5 Zitronensäure b) 0,2 - 0,5 N-Methylglukamin IV Konservierungsstoffe 1,5 - 3,0 . 1012 Nipagin 2. Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt in einer Konzentration von mindestens 300 mg Trockensubstanz/l in der Lösung enthalten ist.
3. Präparat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß in den zusammengefaßten Gruppen folgende Stoffe enthalten sind: I im Blut nachweisbare Stoffe a) Aminosäuren und -derivate einschl. Oligopeptide aa. Aminosäuren aa Methionin L, D,L-Threonin, Prolin, L-Serin, iso-Leucin, Hydroxyprolin, -Alanin, Glykoll, i-Alanin aa2 L(+)-Cysteinhydrochlorid, Argininhydrochlorid, Lysinhydrochlorid aa3 Leucin, Valin, Tyrosin, DL-Phenylalanin, Glutaminsäure, Asparaginsäure bb. Aminosäurederivate Hippursäure cc. Oligopeptide Glutathion b) wasserlösliche Vitamine p-AminobenzoesäureX Natriumascorbat, Liponsäure c) Karbonsäuren einschl. Hydroxy- und Ketoderivate Bernsteinsäure, Apfelsäure, Milchsäure (Lactat), Zitronensäure, Brenztraubensäure (Pyruvat), o( -Ketoglutarsäure d) Purin- und Pyrimidinderivate und Harnstoff Inosin, Harnsäure (Urate), Harnstoff, e) Hexite Mannit II Schwefelverbindungen Cysteinsäure, Taurin, Djenkolsäure
4. Präparat nach einem der Ansprüche 1-3, gekennzeichnet durch die Gewichtsproznte der folgenden Stoffe: 0,0009 L(+)-Cystein-hydrochlorid 0,001 - 0,006 Met, Thre, Pro, Ser, i-Leu, OH-Pro, Arg, Leu, Val, Tyr, Phe 0,01 o&-Ala, Gly 0,03 - 0,04 iß-Ala, Asp 0,05 - 0,06 Glu 0,003 # Hippursäure 0,03 - 0,1 Natriumascorbat 0,008 - 0,012 Harnsäure (Urate) 0,0013 # Bernsteinsäure, Apfelsäure 0,001 - 0,004 Djenkolsäure, Cysteinsäure 0,008 - 0,012 Taurin 5. Verfahren zur Herstellung eines atmungsfördernden Präparats nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß zunächst von den folgenden Stoffgruppen in Gewichtsprozenten bezogen auf die Gesamtlösungsmenge I im Blut nachweisbare Stoffe a) 0,9 . 10-5 - 6,0 . 10-2 Aminosäuren und -derivate einschl. Oligopeptide -4 b) 2,5 . 10 - 3,0 . 10 wasserlösliche Wtamine c) 1,0 . 10 -3 - 0,2 Karbonsäuren einschl. Hydroxy- und Ketoderivate d) 1,0 . 10-2 - 0,15 Purin- und Pyrimidinderivate und Harnstoff e) 0,1 - 0,
5 Hexite f) 0,5 - 1,0 NaCl II Schwefelverbindungen 1,0 . 10 -5 - 1,0 . 10-2 vom Cystein ableitbare Derivate die nipaginlöslichen Stoffe in einer ausreichenden Menge einer ersten Teillösung, bestehend aus einer 0,5 - l,O%oigen Nipagin-Lösung, gelöst werden und die restlichen Stoffe mit einer ausreichenden Menge einer zweiten Teillösung aus 2nNaOH versetzt werden und daß dann die beiden Teillösungen mit einer ausreichenden Menge einer auf pH 6,0 - 7,0 eingestellten Pufferlösung vermischt und auf die Gesamtlösungsmenge verdünnt werden, die anschließend nach Zugabe von Kochsalz und Aktivkohle steril filtriert und mit einem Gehalt an aus hämolysiertem Blut oder entsprechend behandelten Mark-oder Organteilen gewonnenen eiweißfreien Extrakt versetzt wird.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt in fester Form und in einer enge von mindestens 0,03 Gewichtsprozenten der Gesamtlösungsmenge beigegeben wird.
7. Verfahren nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß zur Enteiweißung des Extraktes im Organismus vorhandene Säuren der C-Zahl 2 bis 6 bzw. deren Salze verwendet werden.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß zur Pufferung eine Lösung aus 2nNaOH mit 0,4 - 0,5 Gewichtsprozenten Zitronensäure und 0,38 - 0,42 Gewichtsprozenten N-Methylglukamin verwendet wird.
9. Verfahren nach einem der Ansprüche 5 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Vermischen der beiden Teillösungen mit der Pufferlösung unter Zugabe einer 50%igen Natriumlactatlösung erfolgt.