DE2140747A1

DE2140747A1 - Verfahren zur Herstellungg einer ein festes biologisches Produkt enthaltenden homogenen teilchenförmigen Mischung aus fe sten Ausgang sbestandteilen

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Publication number: DE2140747A1
Application number: DE19712140747
Authority: DE
Original assignee: EI Du Pont de Nemours and Co
Current assignee: EIDP Inc
Priority date: 1970-08-14
Filing date: 1971-08-13
Publication date: 1972-02-17
Also published as: GB1316522A; US3721725A; DE2140747B2; IT995018B; SE395221B; DE2140747C3; CH573767A5; JPS5339484B1; NL7111106A; FR2104349A5

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Vermischen eines festen biologischen Produktes mit einer vorwiegenden Menge an einem festen Zucker.

.Es ist bekannt, solche Mischungen herzustellen, indem man die zerkleinerten Bestandteile -in festem Zustand miteinander vermischt. Dieses Verfahren hat aber viele Nachteile, wie Insbesondere den, daß die erhaltene Mischung wenig homogen ist;.-Es können Schwankungen in der Zusammensetzung bis zu 20$ oder darüber auftreten, und diese Schwierigkeit wird besonders schwerwiegend, wenn sehr geringe Mengen an dem einen Bestandteil mit großen Mengen an dem anderen vermischt werden sollen, wie es oft auf dem Arzneimittelgebiet der Fall ist, tind wenn die zu vermischenden Bestandteile in beträchtlich verschiedener Teilchengröße, beispielsweise der eine als Pulver und der andere in der Form großer Kristalle, vorliegen. Außerdem

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können beim Zerkleinern und Vermischen, beispielsweise durch Vermählen Verunreinigungen in die Mischung gelangen.

Aufgabe der Erfindung ist daher ein Verfahren zur Herstellung einer homogenen Mischung aus anfangs trockenen Materialien, von denen wenigstens eines ein biologisches Produkt und das andere, in vorwiegender Menge anwesende, ein inerter Träger ist.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer ein festes biologisches Produkt enthaltenden homogenen pulvrigen Mischung aus festen Ausgangsbestandteilen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

(a) in einem wäßrigen Lösungsmittel

1. einen zur Trockne sublimierbaren Zucker,

2. ein festes biologisches Produkt in einer Konzentration, die geringer als die des Zuckers ist, und ggfs.

3. ein wasserlösliches Gleitmittel in einer Konzentration unter etwa 10 g je 100 ml fertiger Lösung

auflöst,

(b) die erhaltene Lösung in der Form von Tröpfchen in ein bewegtes Bad aus einem siedenden Fluorkohlenstoff als Kühlmittel versprüht,

(c) die ausgefrorenen Tröpfchen einem Vakuum aussetzt und

(d) dann unter Beibehaltung des Vakuums auf eine Temperatur bringt, bei der praktisch das gesamte in den Tröpfchen anwesende Wasser absublimiert,

(e) die Tröpfchen Raumtemperatur und -druck annehmen läßt und

(f) wenigstens, einen Teil der so erhaltenen Teilchen entfernt.

*■· 2 —

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Unter einem zur Trockne sublimierbaren Zucker ist ein Zucker zu verstehen, von dessen erstarrter wäßriger Lösung Wasser absublimiert werden kann, bis die Lösung praktisch wasserfrei ist, ohne daß die Lösung während des Sublimierens flüssig wird.

Das Bad aus siedendem Fluorkohlenstoff hat vorzugsweise eine Temperatur unter etwa -20⁰C.

Bevorzugte Zucker sind Mannit, Maltose, Lactose, Inosit und Dextran.

Der Zusatz eines Gleitmittels erfolgt dann, wenn das biologische Produkt selbst nicht genügend gleitfähig ist, was beispielsweise bei Enzymen der Fall sein kann.

Es kann auch zweckmäßig sein, die Erstarrung der Tröpfchen dadurch zu beschleunigen, daß man Ultrasehallwellen auf das Kühlmittel einwirken laßt.

Weiterhin kann erreicht werden, daß die Sublimation rascher erfolgt und das biologische Produkt in der fertigen Mischung sich in gegebener Zeit weniger zersetzt, wenn man der Mischung noch einen Elektrolyten in einer Menge von weniger als 5 g je 100 ml der fertigen Lösung zusetzt.

Bei Anwendung des Verfahrens gemäß der Erfindung kann die Umgebung ' des biologischen Produktes in der fertigen Mischung dadurch verändert werden, daß man vor dem Versprühen der Lösung verschiedene Substanzen darin auflöst. Auch werden, wenn die Mischung zu Tabletten verpreßt wird, Tabletten mit minimalen Gewichtsunterschieden erhalten, sofern die Teilchengrößen in bestimmten Grenzen gehalten werden. Die Teilchendurchmesser liegen zweckmäßig zwischen 0,24 und 0,43 mm (0,010 und 0,017 inch), und der Koeffizient der Gewichtsschwankung beträgt vorzugsweise weniger als etwa Vfo. Die Bereiche können, ohne daß die Mischung gesiebt oder anderen

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weiteren Verfahrensmaßnahmen unterworfen werden muß, dadurch eingestellt werden, daß man eine Injektionsnadel geeigneter Größe und eine geeignete Ifersprühungsgeschwindigkeit wählt. Für eine gegebene Lösung ist die Verteilung der Teilchengröße eine Punktion dieser beiden Paktoren.

Nach dem Verfahren gemäß der Erfindung können die verschiedensten festen biologischen Substanzen zu Mischungen mit inerten Trägern verarbeitet werden. Beispiele für solche Substanzen sind die Enzyme, wie Luciferase, Hexokinase, Glukose~6-phosphat-dehyd ro genäse, Laotat-dehydrogenase und Pyruvat-kinase. Weitere Beispiele sind Pharmazeutica sowie Proteine und andere Verbindungen, ) wie Luciferin, Ochsenalbumin, Morpholinopropan-sulfonsäure, 2,6-Dichlorphenoleindophenol, Nicotinamid-adeninin-dinucleotid (reduziert) und Nicotinamid-adenin-dinucleotid. Auch Kombinationen biologischer Produkte können nach dem Verfahren gemäß der Erfindung mit einem Träger vermischt werden.

Der Träger muß zur Trockne sublimierbar sein und darf keine abbauende Wirkung auf das biologische Produkt, mit dem er vermischt werden soll, haben. Geeignete Träger sind die fünf Zucker Mannit, Maltose, Lactose, Inosit und Dextran. Ein geringerer Anteil des Trägers, d.h. weniger als die Hälfte, kann von anderen Zuckern, die nicht zur Trockne sublimierbar sind, gebildet werden. Andere k Anforderungen an den Träger ergeben sich aus der Art der Verwendung der Gemische, Wenn beispielsweise das biologische Produkt einer photometrischen Bestimmung unterworfen werden soll, muß der Träger für die entsprechende Wellenlänge durchlässig sein. Wenn das Gemisch als Arzneimittel verwendet werden soll, darf der Träger die Wirkung des biologischen Produktes nicht beeinträchtigen oder nachteilige Nebenwirkungen auf den Patienten verursachen.

Das Mengenverhältnis von Träger zu biologischem Produkt kann in weiten Grenzen variieren. Das biologische Produkt kann in einer Menge bis zur Menge des verwendeten Trägers anwesend sein; jedoch konnten nach dem Verfahren gemäß der Erfindung homogene

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Mischungen aus ein Teil biologischem Produkt und 350 und mehr Teilen Träger erhalten v/erden. Ein weiterer Bestandteil, der der Lösung zugesetzt werden kann, ist ein Gleitmittel. Die Anwesenheit eines Gleitmittels ist zweckmäßig, weil sie das Abmessen, Tablettieren usw. des Pulvers ohne Agglomerieren oder Haften an der Vorrichtung erleichtert. Einige biologische Produkte haben, wenn sie in ausreichender Menge verwendet werden, selbst eine geeignete Gleitwirkung, so daß keine weiteren Materialien zugesetzt werden müssen. Wenn jedoch solche biologischen Produkte in Mengen, die keine ausreichende Gleitwirkung ergeben, verwendet werden, oder wenn das biologische Produkt unabhängig von der Menge, in der es verwendet wird, keine Gleitwirkung hat, muß ein in dem wäßrigen Lösungsmittel lösliches und dem biologischen Produkt gegenüber inertes Gleitmittel verwendet werden. Zwei Gleitmittel, die zusammen mit biologischen Produkten wie Enzymen verwendet werden können, sind Carbowax (Polyäthylenglykol) und Leucin.

Überraschenderweise wurde gefunden, daß der Zusatz eines Elektrolyten zu der Lösung sich günstig sowohl auf das Verfahren als auch auf das erhaltene Produkt auswirkt. Die Sublimationsgeschwindigkeit wird bis zum Zwei- oder Dreifachen erhöht _a Die statische Aufladung der lyophilisierten Tröpfchen wird beträchtlich vermindert, wodurch Schwierigkeiten beim Umfüllen der erstarrten-Tröpfchen vermindert oder in manchen Fällen vollständig behoben werden. Schließlich wird in manchen Fällen auch die chemische Stabilität des biologischen Produktes in dem fertigen Gemisch beträchtlich erhöht. Diese Wirkungen beruhen vermutlich,auf einer änderung der Struktur des Wassers in der Umgebung des als Kühlmittel verwendeten Fluorkohlenstoffs durch den Elektrolyten.

Der verwendete Elektrolyt muß mit dem biologischen Produkt verträglich sein und darf die spätere Verwendung des Gemi&hes nicht beeinträchtigen. Elektrolyte, die sich als für diesen Zweck geeignet erwiesen haben, sind iz.B» ^fKCl_a NaCl, MgSO₁^, MgCl₂ und (

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Es können vermutlich aber auch viele andere Elektrolyte verwendet werden.

Vorzugsweise wird nicht mehr Elektrolyt als etwa 5 g je 100 ml fertiger Lösung zugesetzt. Wenn eine beträchtlich größere Menge verwendet wird, so zerbrechen lyophilisierte Tröpfchen, woraus sich Schwierigkeiten bei der Umfüllung der erstarrten Tröpfchen ergeben und beim Tablettieren Tabletten von unterschiedlichem Gewicht erhalten werden.

Ein besonderer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß man die lokale Umgebung des biologischen Produktes genau einstellen und damit seinen Abbau weitgehend verhindern kann. So kann das pH der fertigen Mischung durch Zusatz einer Säure, einer Base oder eines. Puffers zu der Lösung vor dem Versprühen eingestellt werden, z.B. wird oft in Zuckern des Handels eine sehr geringe Menge an Säure gefunden. Diese Säure würde wegen der geringen Menge an Wasser in der fertigen Mischung von großem Einfluß auf deren pH sein, wodurch ein Abbau des biologischen Produktes verursacht werden könnte» Diese Schwierigkeit kann durch Einstellen des pH mit einem Elektrolyt, beispielsweise NaHCO-,, vor dem Versprühen, behoben werden.

Beim Auflösen der festen Bestandteile der Mischung wird Vorzugs-' v/eise das biologische Produkt zuletzt in Lösung gebracht. Dadurch wird vermieden, daß das biologische Produkt unnötigen pH-Schwankungen, Licht oder Bedingungen einer hypotonischen Osmose ausgesetzt wird.

Die in dem Verfahren gemäß der Erfindung als Kühlmittel verwendeten Pluorkohlenstoffe haben u.a. die Vorteile ungiftig und nicht entzündlich au sein und geeignete Siedepunkte zu besitzen. Die Siedepunkte sind einerseits so niedrig, daß eine rasche Erstarrung der Tropfqhen erzielt wird, andererseits aber nicht so niedrig* daß sich eine trennende Dampfschicht um die Tröpfchen ausbildet und die Erstarrung verzögert. Ein rasches Erstarren

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ist wesentlich, damit Konzentrationsgradienten vermieden und eine gute Homogenität erzielt wird·. Als besonders geeignet hat sich Dichlordifluormethan vom Kp -JO⁰C erwiesen. Weitere verwendbare Fluorkohlenstoffe sind? Trichlorfluormethan, Chlortrifluormethan, Tetrafluormethan, Dichlorfluormethan, Chlordifluormethan, Trifluormethan, Dichlortetrafluoräthan, Chlorpentafluoräthan, Bromtrifluormethan, Dibromtetrafluoräthan usw.

Die Lösung wird in der Weise versprüht, daß sie die Form von Tröpfchen hat, wenn sie in das Kühlmittel gelangt. Das wird durch Wahl der Größe der Sprühöffnung und des Drucks erreicht. Durch das Ausfrieren der Lösung in der Form von Tröpfchen wird die Erstarrungsgeschwindigkeit erhöht und die Homogenität des fertigen Produktes verbessert. Das Fertigprodukt liegt in der Form freijfließender Kügelchen vor und läßt sich daher leicht verarbeiten.

Damit die Tröpfchen nicht agglomerieren, wird das Kühlmittel zweckmäßig in Bewegung gehalten. Das kann durch Rühren des Kühlmittels während des Versprühens erreicht werden. Vorzugsweise wird die Lösung so kräftig gerührt, daß ein Wirbel erzeugt wird, der die ausgefrorenen Tröpfchen in seinen Scheitel treibt und dort sammelt, so daß ein Kontakt dieser ausgefrorenen Tröpfchen mit danach versprühter Lösung vermieden wird«

Die Ausfriergeschwindigkeit der Lösung kann durch die Anwendung von Ultraschallwellen auf das Kühlmittel in dem Gebiet, wo die Lösung versprüht wird, noch erhöht werden. Die Wirkung der Ultraschallwellen beruht möglicherweise darauf, daß dünne trennende Dampfschichten um die Tröpfchen ,jdurchdrungen 'oder die Wärmeübertragung innerhalb der Tröpfchen verbessert vfird.

Die erstarrten Tröpfchen werden gesammelt und in üblicher Weise lyophilisiert. Zu diesem Zweck wird den erstarrten Tröpfchen, während sie in einem Vakuum gehalten werden, so viel Wärme zuge-

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führt, wie für die Sublimation des Wassers verbraucht wird. Dabei dürfen die Tröpfchen nicht so stark erhitzt werden, daß das biologische Produkt abgebaut wird. Die Lyophilisierung wird so lange fortgesetzt, bis die Tröpfchen in praktisch trockene Teilchen übergegangen sind.

Einzelne Anteile der Teilchen können so, wie sie anfallen, d.h. in der Form eines frei fließenden Pulvers, verwendet werden. Alternativ können diese Anteile zu Tabletten verpreßt werden. Damit jede Tablette praktisch die gleiche Menge an biologischem Produkt enthält, muß jede Tablette das gleiche Gewicht haben.

Der Gewichtsunterschied der Tabletten wird als Variationskoeffizient, V.K., angegeben, der definiert ist als

V.K. - — χ 100

χ
worin

J = mittlere Abweichung (bei η Tabletten) =

χ = Gewicht einer Tablette ic = Mittel (für η Tabletten) =

*™ \ cL

1/2

Vorzugsweise wird der Variationskoeffizient bei unter Vfo gehalten. Das wird durch Wahl der Korngrößenverteilung der zu Tabletten verpreßten Teilchen erzielt. In der folgenden Tabelle sind die Variationskoeffizienten für je 20 Tabletten aus Teilchen mit den angegebenen Korngrößenverteilungen zusammengestellt:

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Teilchengröße	mesh	mm	- 0,	84	V.K. des	Tabletten-	8%
	+ 20	>O,84	- 0,	42	. gewichts	88^
	+ 40	0,42	~ 0,	25		66$
-20	+ 60	0,25			o,	60^
-40	+ 100	0,15		o,	1%
-60	; Größen			o,
Alle				2

Durch Begrenzung der Korngrößenverteilung werden Tabletten mit der gewünschten Homogenität erhalten.

Beispiel 1

Aus den folgenden Materialien wird eine Lösung hergestellt, wobei das Nicotinamid-adenin-dinucleotid, reduziert, als letztes zugesetzt wird:

1. Mannit

2. Carbowax

3. Kaliumchlorid

4. NaHCO₅

5. Nicotinamid-adenindinucleotid, reduziert

- 2^,000 g/l00ml fertige

Lösung in destil-_{2 00Q} liertem V/asser

» 0,500

- 0,115

- 0,570 26,185

Damit das Produkt ein möglichst hohesSchuttgewieht hat, wird möglichst viel Mannit in die Lösung eingebracht. Mannit, Carbowax und KCl werden durch Erwärmen der Lösung in Lösung gebracht. Nach Kühlen auf Zimmertemperatur wird NaIICO^ und anschließend das Nicotinamid-adenin-dinucleotid zugesetzt. Das NaHCO^ darf nicht zugesetzt werden, solange die Lösung warm ist, weil es dann in Na₂CO, übergehen und dadurch das pH des Produktes ver-

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ändern würde.

Ein Bad aus Dichlordifluormethan als Kühlmittel wird mit solcher Geschwindigkeit gerührt, daß sich ein bis zu 50# der Tiefe des Bades erstreckender Wirbel ausbildet. Der Schallkopf (probe tip) eines Branson Sonifier Ultraschallgenerators wird 1,3 bis 1,9 cm (1/2 bis 3/4 inch) unter die Oberfläche des Bades eingeführt, und seine Energieabgabe wird auf 35 bis 40 Watt eingestellt.

Die Lösung, die stetig gerührt wird, um eine Ausfällung von Mannit zu verhindern, wird nahe der Basis des Schallkopfes in das Kühlmittelbad versprüht, und die erstarrten Tröpfchen werden kontinuierlich auf einem Sieb gesammelt, bis zu einer Tiefe von nicht über 5 cm (2 inches) in mit Polytetrafluoräthylen überzogene Schalen gefüllt und in einem Gefriertrockner einem Vakuum unter 4θθμ ausgesetzt. Die Böden des Gefriertrockners werden bei 24⁰C (75°P) gehalten, und die Temperatur der Tröpfchen wird mit einem Thermistor überwacht. Wenn die Temperatur des Produktes gleich der des Bodens ist, ist das Produkt trocken. Die Fraktion des Produktes mit einer Korngröße von 0,25 bis 0,43 mm (-20 mesh + 80 mesh) wird mittels einer Stokes Rotary Press mit üblichem Beschickungsrahmen zu Tabletten verpreßt. Die erhaltenen Tabletten sind hinsichtlich ihres Gewichtes, etwa 50 mg, und ihrer Zusammensetzung praktisch homogen. Ihre Zusammensetzung 1st:

	Mannit	zusammensetzung des trockenen Produktes	mg je Tablette
1.	Carbowax	87,83	43,915
2.	Kaliumchlorid	7,63	3,815
3.	NaHCO,	1,92	0,960
4.	Nie ot inamid-adenin- dinucleotid	0,44	0,220
5.	2,18	1,090

50,000

-JO-

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■·■■ -^- r: 2U0747

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Beispiel 2

Mannit, Polyäthylenglykol 6000, Dextran und Ochsenserurcalbumin werden in etwa I50 ml destilliertem Wasser gelöst, und 10 ml 0,1m Morpholinopropansulfonsäure werden zugesetzt. Diese Lösung wird filtriert, Luciferin wird zugesetzt, und die Lösung wird durchmischt, bis alle Bestandteile völlig in Lösung gegangen sind. Das pH wird mit verdünntem Kaliumhydroxyd auf 7,4 eingestellt, Luciferase wird zugesetzt, und die Lösung wird auf 200 ml aufgefüllt und dann bis zur Homogenität vermischt. Die Zusammensetzung der Lösung ist:

	Volumen bzw. Gewicht	20 g
Mannit		* g
Polyäthylenglykol		20 g
Dextran 10 (MG etwa 10 000)		10 ml
Morpholinopropansulfonsäure,	0,1m	0,8 g
Ochsenserumalbumin		110 mg
Luciferin		2,3 ml
Luciferase

Die Lösung wird unter einem Druck von 1,969 ~ 2,109 (through a 2β gauge probe tip needle at 28 to JO psi) in das Kühlmittel verspritzt, und die Tröpfchen werden weiter verarbeitet wie in Beispiel 1. Das Produkt ist hinsichtlich Gewicht und Zusammensetzung praktisch homogen.

Beispiel 3

Wie in den vorhergehenden Beispielen beschrieben, wird eine Nicotinamid-adenin-dinucleotid enthaltende Tablettier-Mischung aus den folgenden Bestandteilen:

Gewicht Je* 100 ml fertige Lösung in destilliertem Wasser, g

Mannit 12,3 -

Polyäthylenglykol 2,0

Kaliumchlorid 0,5

Nicotinamid-adenin-dinucleotid 10,7

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hergesteift; und tablettiert. Die Lösung wird mittels einer Injektionsnadel (26 gauge needle) in einer Menge von 7 bis 8 ml/ min in Dichlordifluormethan als Kühlmittel versprüht, und die erhaltenen Tröpfchen werden weiter verarbeitet, wie in Beispiel 1 beschrieben, wobei homogene Teilchen erhalten werden.

Bei der Durchführung des Verfahrens gemäß der. Erfindung hat sich gezeigt, daß es für die Konzentrationen der verwendeten Materialien optimale Bereiche gibt, die in der folgenden Tabelle zusammengestellt sind:

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Bestandteil

Mannit

Maltose Lactose Inosit

Luciferase Hexokinase G-6-PDH LDH Pyruvatkinase

Ochsenalbumin MOPS Luciferin DIP NADII NAD

KCl NaIICO^

PEG χ 1% Gew.

Optimale Konzentrationen

Mindest-	Höchst-	Andere Bezeichnungen
konzentr.	konzentr.	D-Mannit; Mannit;
Gew. AoI.	Gew. AoI.	Manicol; Mannidexj
1*	*23%*	Diosmol; Osmitrol;
		Osmosal
		k-0-a-D-Gluc opy ran -
		osyl-D-glucose; Malz
1%	*95%*
	Sättigung

1%

0,001$ 0,001# 0,001^ 0,001^ 0,001$

0,05^ 0Λ%

O_fO5fo 0,05fo

1% 95^
Sättigung

Sättigung

95^
Sättigung

Sättigung 20$

Sättigung

Sättigung 5%

5%

5% 5%

zucker, Maltobiose

4-0-ß-D-Galaotopyranosyl-D-glucose; Malzzucker

Fleischzucker, Cyclohexit, i-Inosit, meso-Inosit

Glueöse-6-phosphat ■ dehydrogenase

Lactat-dehydrogenase

Morpholinopropansulfonsäure

2,6-Diohlorphenolindophenol

Nicotinamid-adenindinucleotid, reduziert

Nicot inamid-adenindinucleotid

Kaliumchlorid Nat riumbic arbonat Ammoniumsulfat

Polyäthylengiykol 6000

bedeutet 1 g je 100 ml fertige Lösung - 13 -

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Claims

DE-123 iy 13. Augusb I971 Patentanspr Uc h e

1. Verfahren zur Herstellung einer ein festes biologisches Produkt enthaltenden homogenen teilchenförmigen /Mischung aus festen Ausgangsbestandteilen, dadurch gekennzeichnet, daß man

(a) in einem wäßrigen Lösungsmittel

1. eineη~zur Trockne sublimierbaren Zucker,

3. ein wasserlösliches Gleitmittel in einer Konzentration unter etwa 10g je 100 ml fertiger Lösung auflöst,

(b) die erhaltene Lösung in der Form von Tröpfchen in ein bewegtes Bad aus einem siedenden Fluorkohlenstoff als Kühlmittel, das eine Temperatur unter etwa -20⁰C hat, versprüht,

(c) die ausgefrorenen Tröpfchen einem Vakuum aussetzt,

(d) dann unter Beibehaltung des Vakuums auf eine Temperatur bringt, bei der praktisch das gesamte in ihnen anwesende Wasser absublimiert,

(e) die Tröpfchen Raumtemperatur und -«druck annehmen läßt und

(f) wenigstens einen Teil der Teilchen entfernt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Zucker Mannit, Maltose, Lactose, Inosib oder Dextran verwendet .

j5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man während des Versprühens Ultraschallwellen auf den Fluorkohlenstoff in der Nähe des Gebietes, in,-das-die Lösung versprüht wird, anwendet. .

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.(5

4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis j5* dadurch gekennzeichnet, daß man vor dem Versprühen einen Elektrolyten in einer Menge von weniger als 5 g je 100 ml fertiger Lösung in der Lösung auflöst.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man als Elektrolyt KCl, NaCl, MgSO₁₁, MgCl₂ oder (NH^SO^ verwendet.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5* dadurch gekenn-'zeichnet, daß man als festes biologisches Produkt ein Enzym, nämlich Luciferase, Hexokinase, Glucose-6-phosphat-dehydrogenase, Lactat-dehydrogenase oder Pyruvatkinase verwendet und daß man ein wasserlösliches Gleitmittel in dem Lösungsmittel löst.

7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als wasserlösliches Gleitmittel Carbowax oder Leucin verwendet.

8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man den Zucker und das Gleitmittel in dem wäßrigen Lösungsmittel löst, bevor man das biologische Produkt auflöst, und daß man das pH der Lösung mittels einer Säure, einer Base oder eines Puffers in den Bereich von etwa 3 bis 10 bringt, bevor man das biologische Produkt löst.

9· Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man als festes biologisches Produkt Luciferin, Ochsenflbumin,- Morpholinopropansulfonsäure, 2,6-Dichlorphenol-indophenol, Nicotinamid-adenin-dinucleotid (reduziert) oder Nicotinamid-adenin-dinucleotid verwendet.

10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß man (a) vor der Zugabe der Säure, der Base oder des Puffers einen Elektrolyten, nämlich KCl, NaCl, MgSO₂,,

oder $JH^)₂^°4 in einer Menge von weniger als

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etwa 5 g je 100 ml fertiger Lösung in dem Lösungsmittel löst,

(b) als Gleitmittel Garbowax oder Leucin verwendet und

(c) als biologisches Produkt Luciferase, Hexokinase, Glucose-6-phosphat-dehydrogenäse, Laotat-dehydrogenase oder Pyruvat-kinase .

verwendet.

11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekenn-

• zeichnet, daß man bestimmte Anteile der Teilchen entnimmt und zu Tabletten verformt, wobei man diejenigen Anteile entnimmt, deren Teilchendurchmesser

(a) ·.':! c praktisch alle größer als 0,25 mm (0,01 inch) sind und

(b) in einem Bereich liegen, der Tabletten mit einem Variationskoeffizienten des Gewichtes von weniger als etwa 1% ergibt.

12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man denjenigen Anteil entnimmt, dessen Teilchen, praktisch alle Durchmesser unter O,4j5 mm (0,017 inch) haben.

Ij5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß man als Fluorkohlenstoff Dichlordifluorfnethan, Trichlorfluormethan, Chlortrifluormethan, Tetrafluormethan, Dichlorfluormethan, Chlordifluormethan, Trifluormethan, Dichlortetrafluoräthan, Chlorpentafluoräthan, Bromtrifluormethan oder Dibromtetrafluoräthan verwendet.

14. Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß man als Fluorkohlenstoff Dichlordifluormethan verwendet.

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