DE2119082C3

DE2119082C3 - Oral verabreichbares Arzneipräparat mit Serumcholesterinspiegelsenkender. Wirkung

Info

Publication number: DE2119082C3
Application number: DE19712119082
Authority: DE
Inventors: Kyoichi Higo; Tsutomu Irikura; Akitoshi Maeda; Fumihiko Morinaga; Takeshi Naruke
Original assignee: Kyorin Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kyorin Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1971-04-20
Filing date: 1971-04-20
Publication date: 1973-12-20
Also published as: DE2119082A1; DE2119082B2

Description

Die Erfindung betrifft ein oral verabreichbares Arzneipräparat mit Serumcholesterinspiegel senkender Wirkung, enthaltend 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin als Wirkstoff.

2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-tria.zin ist bereits von S u t e r und Z u 11 e r in Helvetica Chimica Acta, Bd. 48 (1965), S. 1940 bis 1944, beschrieben worden. S u t e r und Z u t t e r synthetisierten zwölf s-Triazinderivate, in der Hoffnung, oral wirksame Antidiabetika zu finden. Die Versuche gründeten auf der Tatsache, daß die s-Triazinderivate durch Ringschlußreaküon von Biguaniden entstehen, deren Blutzucker senkende Wirkung bekannt war. Wie aus der vorgenannten Literaturstelle hervorgeht, besitzt keines der zwölf s-Triazinderivate, einschließlich 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin, antidiabetische Wirkung. Darüber hinaus sind auch weder Einzelheiten der Darstellung von 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin noch irgendwelche pharmakologischen Eigenschaften dieser Verbindung beschrieben.

Aus der deutschen Offenlcgungsschrift ! 907 589 sind 2-Phenäthylamino-4-amino-s-triazinderivate bekannt, die in der 6-Stellung z. B. durch einen Alkylamino- oder Dialkylaminoresi mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen substituiert sein können.

Diese s-Triazinderivate hemmen die Lipoidabscheidung in den Arterienwänden ohne den Serumcholesterinspiegel zu senken. Im Verlauf der weiteren Untersuchung über den Mechanismus der antiarteriosklerotischen Wirkung und über den Zusammenhang zwischen der antiateriosklerotischen Aktivität und der Struktur der s-Triazinderivate wurde überraschenderweise gefunden, daß einige s-Triazinderivate Blutbzw. Serumcholesterinspiegel senkende Wirkung besitzen. Insbesondere das 2-Amino-4.6-diphenäthylamino-s-triazin unterdrückt die Biosynthese des Cholesterins in der Leber, reduziert den Serumcholesterinspiegel und verhindert die künstlich hervorgerufene Arteriosklerose. In dieser Wirkung zeichnet sich das 2-Amino-4,6-diphenyläthylamino-s-triazin vor den be- ^fio kannten s-Triazinderivaten aus.

Das Arzneipräparat der Erfindung kann z. B. in Form einer Tablette oder Pille, als Kapsel. Sirup oder Elixier oral verabfolgt werden.

Bestandteil

2-Amino-4.6-diphenäthylamino-

s-triazin

Lactose

Kristalline Cellulose

Kartoffelstärke

Magnesiumstearat

Hydroxypropylcellulose

Menge, mg

50

25

15
0.5
2.5

Zur Herstellung eines oral verabreichbaren Pulvers können 50 mg des Arzneistoffes mit 450 mg Lactose vermischt werden.

Die Einheitsdosis eines Sirups kann aus 50 mg Arzneistoff, 300 mg Nalriumcarboxymethylcellulose und 60 ml einfachem Sirup bestehen. Die nachstehenden Versuche erläutern die Wirkung des 2-Amino-4.6-diphenäthyiamino-s-triazins.

Versuch A

Einfluß von 2-Amino-4,6-diphenylamino-s-triazin auf den Serumcholesterinspiegel von mit cholesterinreicher Nahrung gefutterten Mäusen

Männliche. 8 Wochen alte Mäuse (dd-Abstammung) mit einem Gewicht von 20 bis 23 g werden in 3 Gruppen eingeteilt. Die erste Gruppe (A) wird mit einer Grundnahrung gefüttert. Die zweite Gruppe (B) erhält ein cholesterinreiches Futter, das 2% Cholesterin und 0.1% Cholsäure, bezogen auf die Grundnahrung. enthält. Die dritte Gruppe (C) erhält ein Futter, das 2% Cholesterin, 0,1% Cholsäure und 0.0714"/o 2-Amino-4.6-diphcnäthylamino-s-triazin. jeweils bezogen auf die Grundnahrung, enthält. Die Mäuse werden 14 Tage gefüttert und am 14. Tag getötet. Hierbei wird nach dem Dccapitieren das gesamte Blut aufgefangen. Im Serum wird nach der Methode von Z a k und H e η 1 y der Gesamtcholesteringehall bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengestellt. In der Spalte 1 der Tabelle I gibt die Zahl in Klammern die Anzahl der Versuchstiere an. Die in der letzten Spalte angegebene Senkungsrate berechnet sich wie folsil:

Senkungsrate (%) —

(Serumcholesteringehalt der Gruppe B) (Serumcholesleringehalt der Gruppe C) iSerurncholesteringehait der Gruppe B) —- (Serumcholesteringehalt der Gruppe A.)

Gruppe

Λ. Grundnahrung(9)

B. Chnlesterinreiche Nahrung (10)

C. Cholesterinreiche Nahrung

+■ Triazin (8)

Tabelle !

Körper-

gcvtichis-

/unuhme

(gl

0,6

2,7

·) Mittelwert ± statistische Abweichung.
♦*l Erhebliche Senkung (P < 0,005) gegenüber der Gruppe B.

Nahrungsaufnahme

(gkgTagi

160,6
189,7.

163,2

(g kg Tag ι

0
3,794

3,264

Seruincluilesterin· gehalt'l

ι mg "u|

173.3 ± 22,5 270,1 ± 31,9

215.4 ± 30,3**)

Senkungsr.ite

• J) I

56,5

Tabelle I zeigt, daß bei den mil der triazinhaltigen Nahrung gefütterten Mäusen (Gruppe C) der Serumcholesteringehalt gegenüber den Mäusen der Gruppe B erhebiich herabgesetzt ist.

Versuch B

Einfluß von S-Amino^.o-diphenäthylamino-s-triazin auf den Serumcholesterinspiegel bei Ratten

Männliche, 10 Wochen alte Wistar-Ratten von 236 bis 300 g Gewicht werden in drei Gruppen eingeteilt, die mit einer Grundnahrung gefüttert werden, die 0,0% (Gruppe A), 0,1% (Gruppe B) und 0,3% (Gruppe C) 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin enthält. Die Ratten werden 14 Tage mit der angegebenen Nahrung gefüttert und dann gemäß Beispiel 1 getötet. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt. In der ersten Spalte der Tabelle II gibt die *5 Zahl in Klammern die Anzahl der Versuchstiere an.

Tabelle II

Gruppe

A. Ohne Triazin (6)

B. 0,1% Triazin (5).

C. 0,3% Triazin (6).

Körpergewichtszunahme

(g)

23,0

3.8

13,3 Triazindosis

(mgkgTag)

58,1
204,9

Gewicht der Leber pro 100 μ Körpergewicht')

(g)

3,821 ± 0,121
4,310 ± 0,630 5,513 ± 0,312

Serumcholesteringehalt*)

(mg %)

91,8 ± 8,3 100,2 ± 26,6 79,8 ± 7.0**)

♦) Mittelwert ± statistische Abweichung.
*♦) Erhebliche Senkung gegenüber der Gruppe A (P < 0.025).

Versuch C

Unterdrückung der Biosynthese von Cholesterin in der Rattenleber durch 2 - Amino - 4,6 - diphenäthyl-

amino-s-triazin

Es werden männliche Wistar-Ratten, die 7 Tage mit einer Grundnahrung gefüttert werden, die-0,1 bzw. 0,3% des Triazins enthält, mit denjenigen Ratten verglichen, die mit triazinfreier Grundnahrung gefüttert werden. Am 8. Tag wird den Ratten in die Schwanzvene pro 200 g Körpergewicht ImI einer l-¹⁴C-Acetallösung (20 ixCurie/20 μΜοΙ pro 1 ml Lösung) injiziert. 60 Minuten danach werden die Ratten getötet. Die Lebern der Tiere werden 3 Stunden bei 80 C in 5 ml 1 g Lebereiner lOprozentigen alkoholischen Kalilauge der Hydrolyse unterworfen.

Die erhaltene Lösung wird zur Troekne eingedampft, der Rückstand wird mit 3mal 30 ml Petroläther extrahiert. Die Petrolätherextrakte werden zur Troekne eingedampft, der Rückstand wird in 10 ml Petroläther gelöst, von denen 5 ml in ein Prüfröhrchen übergeführt und nach dem Eindampfen zur Troekne in 2 ml Aceton gelöst werden. Nach Versetzen dieser Lösung mit 4 ml einer lprozentigen Digitoninlösung in wäßrigem Äthanol (1:1) läßt man das Reaktionsgemisch 15 Stunden stehen. Das entstandene Cholesterindigitonid wird 2mal mit wäßrigem Äthanol (Wasser: Äthanol = 1:3) gewaschen, in 3 ml Pyridin eelöst und mit Dioxan auf 10 ml verdünnt. Zur Aktivitätsbestimmung werden 10 ml eines Dioxanszintillators mit 2 ml dieser Lösung versetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt. In Tabelle III sind in jeder Gruppe A, B und C jeweils acht Versuchstiere verwendet worden.

Tabelle III

Gruppe

A. Ohne Triazin

B. 0.1% Triazin

C. 0.3% Trazin

Anzahl der Zerfalle (lOVmin)

18.65
7.76
9.26

Anzahl der Zerfalle

pro g Leber*)

(10³/min g)

2,72 ± 0,97 0,80 ±0.14 0,76 ± 0,19

Mittelwert ± statistische Abweichung.

Tabelle III zeigt, daß bei den Versuchstieren, deren Nahrung 2 - Amino - 4,6 - diphenälhylamino - s - triazin enthält, die Biosynthese des Cholesterins aus Acetaten in der Leber deutlich gehemmt wird.

Versuch D

Einfluß von 2-Amino-4.6-diphenäthylamino-s-triazin auf die künstlich hervorgerufene Arteriosklerose bei Kaninchen

Von drei Gruppen aus jeweils fünf Kaninchen wird die Gruppe A mit einer Grundnahrung, die Gruppe B mit einer cholesterinreichen Nahrung, die 2% Cho-

lesterin, bezogen auf die Grundnahrung, und die Gruppe C mit einer Grundnahrung, die 2% Cholesterin und 0,2% des Triazins enthalten, 80 Tage gefuttert. Danach werden die Tiere getötei. Je nach dem Umfang der makroskopisch ermittelten plaquesartigen Einbzw. Ablagerung von Cholesterin (Atheromatose) erfolgt eine Bewertung von 0 bis 5. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengestellt. Durch die Wirkung des 2-Amino-4,6-diphenüthylamiiio-s-inazins wird dsr Cholesterinspiegel in der Aorta und in der Leber beträchtlich herabgesetzt. Aus der makroskopischen Bewertung geht hervor, daß 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin hemmend aufdie Entstehung von Arteriosklerose wirkt.

Tabelle IV

Gruppe

A. Grundnahrung

B. Cholesterinreiche
Nahrung

C. Cholesterinreiche
Nahrung + Triazin.

Lebergewichl'l
Ig)

88 ± 8

151 ± 14
140 ± 2C

Cholesierinuehall der Leben

img.g)

2,50 ±0,16 23,49 ± 2,65 14,29 ± 3,82**) Atheromatose
Aorta

*) Mittelwert ± statistische Abweichung.
**) Erhebliehe Senkung (P < 0,01) gegenüber der Gruppe B. ***) Erhebliche Senkung (P < 0,02) gegenüber der Gruppe B.

•\rch.	Thrac.	Abdom
0	0	0
4,4	3,3	2,0
2,5	1,2	0,4

Cholesieringehalt
d>:r Aorta']

(mg g)

1,65 ± 0,28
19,87 ± 2,47
7,38 ± 2,10***)

Versuch E

Vergleich der Serumcholesterinspiegel senkenden Wirkung von 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin und 3 typischen Verbindungen, die aus der deutschen Offenlegungsschrift 1 907 589 bekannt sind.

Die Versuchsbedingungen und die Methodik sind die gleichen wie in Versuch A. Die zu untersuchenden Verbindungen wurden in einer Dosis von 0,0714% in Futter, das 2% Cholesterin und 0,l%Cholsäure, bezogen auf die Grundnahrung, enthält, Mäusen 14 Tage verabfolgt.

Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengestellt.

Aus Tabelle V ist ersichtlich, daß 2-Amino-4,6-di-

phenäthylamino-s-triazin die Zunahme des Serumcholesterinspiegels bei den Versuchstieren am stärksten unterdrückt.

	Zahl der Versuchstiere	Tabelle	V	Cholesterin- dosis (g/kg/Tag)	Serumcholesterin- gehalt*) (mg %)	Serum- cholesterin- lndex")
Cholesterinreiche Grundnahrung	10 8 9 8 7	Körper gewichts- zunahme (g)	Triazin- Tsgesdosis iitig< kg/Tag)	3,794 3,264 3,120 3,904 3,168	270,1 ± 39,1 215,4 ± 30,3 228,7 ± 36,4 228,4 ± 36,3 270,9 ± 58,1	100 79,7 84,7 84,6 100,3
A. Ohne Zusatz B. 2-Amino-4,6-diphenäthyl- amino-s-triazin C. 2-Amino-4-phenäthyl- amino-6-n-butyl-s-triazin ... D. I-n-PropyM.ö-cyclohexyl- aniino-s-triazin E. 2-Amino-4-cyclohexyl- amino-6-äthylamino-s-tri- azin	2,7 1,1 1,8 0,8 0,7	116,5 111,4 139,8 113,1

*) Mittelwert ± statistische Abweichung.
**) Der Serumcholesterin-Index S.I. wird nach folgender Gleichung berechnet:

g . _ Serumcholesterinspiegel der mit der Testverbindung behandelten Tiere .„ Serumcholesterinspiegel der unbehandelten Tiere

Claims

Patentanspruch:

Oral verabreichbares Arzneipräparat mit Serumcholesterinspiegel senkender Wirkung, enthaltend 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin als Wirkstoff.

Herstellung von 2-Amino-4,6-diphenyhiminos-triazin

Eine Suspension von 3,3 g 2-Amino-4,6-dichlors-iriazin in 100 ml Wasser wird unter Kühlen und Rühren tropfenweise mit 9,7 g Phenäthylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden unter Rühren erhitzt, nach dem Abkühlen wird der Niederschlag abgetrennt und aus Isopropanol umkristallisiert. Hierbei erhält man 6,0 g des gewünschten Triazins in Form farbloser Nadeln vom F. 140 bis 142 C.

Beispiel

Die nachstehend genannten Bestandteile werden zur Herstellung einer Tablette in üblicher Weise vermischt, granuliert und verpreßt.