DE19832007C2 - Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter Mikroorganismen - Google Patents
Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter MikroorganismenInfo
- Publication number
- DE19832007C2 DE19832007C2 DE1998132007 DE19832007A DE19832007C2 DE 19832007 C2 DE19832007 C2 DE 19832007C2 DE 1998132007 DE1998132007 DE 1998132007 DE 19832007 A DE19832007 A DE 19832007A DE 19832007 C2 DE19832007 C2 DE 19832007C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- living
- fluorescence microscopic
- dead microorganisms
- differentiation
- glutaraldehyde
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft die Medizin, insbesondere die Mikrobio
logie.
Aus Kronvall, G., Myhre, E.: Differential staining of bacte
ria in clinical specimens using acridine orange buffered at a
low pH. In: Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica
(B) 1977, 85: 249-254 ist eine Acricinorange-Fluoreszenz-
Färbung von fixierten Präparaten bekannt. Mit diesem Fluoro
chrom können verschiedene Mikroorganismen, beispielsweise Bak
terien oder Pilze, gesehen werden. Der Mangel dieses Verfah
rens besteht darin, daß bei beliebigem pH der Akridinorange-
Lösung die Bakterien und Pilze nur orangerot fluoreszieren.
Wie aus Strugger, S., Hilbrich, P.: Die fluoreszenzmikroskopi
sche Unterscheidung lebender und toter Bakterienzellen mit
Hilfe der Akridinorange-Färbung. In: Deutsche Tierärzt. Wo
chenschr. 50: 121-130, 1942, insbesondere S. 129, bekannt
ist, kann die vitale Acridinorange-Fluorochromierung zur ex
akten fluoroskopischen Unterscheidung lebender und toter Zel
len eingesetzt werden. Im pH-Bereich zwischen 5 und 8 ist es
infolge konzentrationsbedingter Änderungen des Fluoreszenz
spektrums möglich, lebende und tote Bakterienzellen durch ver
schiedene Fluoreszenzfarben mikroskopisch auseinanderzuhalten.
Das lebende Bakterienplasma fluoresziert grün, während das to
te kupferrot fluoresziert. Das bisher übliche Ausstrichverfah
ren läßt sich nach Auffasssung der Autoren für diese Fluoro
chromierung nicht anwenden. Aus Karnovsky, Morris J.: A Form
aldehyd-Glutaraldehyde Fixative of High Osmolality for Use in
Electron Microscopy. In: Journal of Cellbiology 27 (1965)
137A-138A ist ein Paraformaldehyd-Glutaraldehyd-Fixiermittel
bekannt, das aus Paraformaldehyd und Glutaraldehyd besteht.
Der im Patentanspruch angegebenen Erfindung liegt das Problem
zugrunde, lebende und tote Zellen in fixierten Präparaten zu
unterscheiden.
Dieses Problem wird durch die im Patentanspruch angeführten
Merkmale gelöst.
Eine klinische Probe wird vorläufig mit Paraformaldehyd-
Glutaraldehyd fixiert, danach mit Acridinorange gefärbt und
mit einem Fluoreszenzmikroskop ausgewertet.
Die mit der Erfindung erzielten Vorteile bestehen darin, daß
die Fixierung mit Paraformaldehyd-Glutaraldehyd vor der Mate
rialapplikation der Zellveränderung vorbeugt und ein breites
Farbenspektrum fluoreszierender Bakterien ergibt.
Im folgenden wird ein Ausführungsbeispiel der Erfindung be
schrieben.
Fixierung der klinischen Probe: 10 ml frischer Spontanurin
werden bei 2000 Umdrehungen/min für 5 Minuten zentrifugiert,
anschließend wird der Überstand abgeschüttet. Das Sediment im
Verhältnis 1 : 1 mit Paraformaldehyd-Glutaraldehyd wird minde
stens 30 Minuten fixiert. Das fixierte Sediment wird durch er
neutes 5-minütiges Zentrifugieren bei 2000 Umdrehungen/min vom
Fixativ getrennt, der Überstand abgegossen und das Sediment im
Phosphatpuffer nach Sörensen pH 6,8-7,2 resuspendiert.
Färbung: Lufttrockene Präparate werden für 10 Minuten in eine
mit Puffer nach Sörensen pH 6,8-7,2 verdünnte Acridinorange-
Lösung (1 : 25000) getaucht, danach zweimal nacheinander für
jeweils eine Minute im Puffer gespült. Die Farbstoffreste auf
der Objektträgerunterseite werden mit einem Tuch entfernt und
das Präparat wird schräggestellt bei 37°C an der Luft ge
trocknet.
Mikroskopie: Die Auswertung der Präparate wird mit einem Fluo
reszenzmikroskop vorgenommen.
Ergebnisse: Die mit der Erfindung erzielten Vorteile bestehen
darin, daß die Bakterien in einem breiten (grün - orange -
rot) Farbenspektrum fluoreszieren.
Claims (1)
1. Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung leben
der und toter Mikroorganismen, bei dem eine klinische Probe
vorläufig mit Paraformaldehyd-Glutaraldehyd fixiert, danach
mit Acridinorange gefärbt und mit einem Fluoreszenzmikroskop
ausgewertet wird.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1998132007 DE19832007C2 (de) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter Mikroorganismen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1998132007 DE19832007C2 (de) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter Mikroorganismen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE19832007A1 DE19832007A1 (de) | 2000-01-27 |
DE19832007C2 true DE19832007C2 (de) | 2001-02-08 |
Family
ID=7874294
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE1998132007 Expired - Fee Related DE19832007C2 (de) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter Mikroorganismen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE19832007C2 (de) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001036661A2 (en) * | 1999-10-25 | 2001-05-25 | Genprime, Inc. | Method and apparatus for prokaryotic and eukaryotic cell quantitation |
US6673568B1 (en) | 1999-10-25 | 2004-01-06 | Genprime, Inc. | Method and apparatus for prokaryotic and eukaryotic cell quantitation |
US6787302B2 (en) | 1999-10-25 | 2004-09-07 | Genprime, Inc. | Method and apparatus for prokaryotic and eukaryotic cell quantitation |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4345027A (en) * | 1980-12-12 | 1982-08-17 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Fluorometric method of quantitative cell mutagenesis |
EP0801306A1 (de) * | 1996-04-10 | 1997-10-15 | Becton, Dickinson and Company | Methode zur immunohistochemischen Quantifizierung von co-lokalisierten Molekülen |
-
1998
- 1998-07-16 DE DE1998132007 patent/DE19832007C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4345027A (en) * | 1980-12-12 | 1982-08-17 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Fluorometric method of quantitative cell mutagenesis |
EP0801306A1 (de) * | 1996-04-10 | 1997-10-15 | Becton, Dickinson and Company | Methode zur immunohistochemischen Quantifizierung von co-lokalisierten Molekülen |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
KARNOVSKY, Morris J.: A Formaldehyd- Glutaraldehyde Fixative of High Osmolatity for Use in Electron Microscopy, In: Journal of Celbiology 27 (1965) 137A-138A * |
KRONVALL, G. MYHRE, W.: Differential staining of bacteria in clinical specimens using acridine orange buffered at a low pH, In: Acta Phatologica et Microbiologica Scandinavia (B), 1977, 85: 249-254 * |
STRUGGER, S., HILBRICH, P.: Die fluoreszenzmikrospopische Unterscheidung lebender und toter Baktierienzellen mit Hilfe der Akridinorange-Färbung, In: Deutsche Tierärzt, Wochenschr. 50: 121-130, 1942 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE19832007A1 (de) | 2000-01-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tinwell et al. | Comparison of acridine orange and Giemsa stains in several mouse bone marrow micronucleus assays—including a triple dose study | |
EP1262776B1 (de) | Verfahren zum quantitativen Nachweis vitaler ephithelialer Tumorzellen in einer Körperflüssigkeit | |
WO2003023057A2 (de) | Verfahren und diagnose-kit zur selektionierung und/oder zum qualitativen und/oder quantitativen nachweis von zellen | |
DE69720248T2 (de) | Schneller mikrobieller test | |
DE7004220U (de) | Objekttraeger. | |
DE3115278C2 (de) | Verfahren zum Nachweis von Nucleinsäuren in biologischen Proben | |
DE3304795A1 (de) | Verfahren zur differentiellen bestimmung der entwicklungsstufen neutrophiler, granulozytischer zellen und anderer leukozyten mittels metachromatischer frabstoffadsorption und einer fluoreszenzlicht-emissionseinrichtung | |
DE10143757A1 (de) | Methode zur Darstellung von Merkmalen in Geweben | |
DE19832007C2 (de) | Verfahren zur fluoreszenzmikroskopischen Unterscheidung lebender und toter Mikroorganismen | |
EP1253622A1 (de) | Verfahren zur Identifizierung von Mikroorganismen mittels MALDI-TOF-MS | |
Roux et al. | Use of the Acridine Orange Staining on Smears of Human Spermatozoa after Heat‐Treatment: Evaluation of the Chromatin Condensation/Die Anwendung von Acridin‐Orange zur Färbung menschlicher Spermatozoen in Ausstrichen nach Hitzeeinwirkung: Auswertung der Chromatinkondensation | |
DE69937837T2 (de) | Fluoreszenzsonden zum anfärben von chromosomen | |
WO2007101706A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von molekülen oder molekülteilen in biologischen proben | |
Parizadeh et al. | Physiological and chemical analysis for identification of some lichen extracts | |
EP1437673B1 (de) | Verfahren zur Identifizierung von Mikroorganismen mittels Massenspektrometrie | |
DE3814811A1 (de) | Verfahren und mittel zur differenzierung und bestimmung von leukozyten | |
EP0435226A1 (de) | Phagozytose-Test | |
EP0830599B1 (de) | Testsystem zur erfassung der aktivität von nk-zellen | |
DE102020103968B4 (de) | Plattform zur fluidischen Prozessierung eines Probematerials und ein korrespondierendes Verfahren | |
Franklin et al. | Acridine Orange—Methyl Green Fluorescent Staining of Nucleoli | |
DE60216045T2 (de) | Krebsdiagnoseverfahren | |
DE4114131C2 (de) | Die Azur B - Eosin - APAAP Färbung, ein Verfahren zur simultanen hämatologischen und immunologischen Charakterisierung von Zellen | |
DE4334935C1 (de) | Verfahren zur Bestimmung der Phagozytose- und/oder Killingfähigkeit | |
Kumazawa et al. | Fluorescence from cover and basal scales of Morpho sulkowskyi and Papilio xuthus butterflies | |
Banerjee | Identification of spermatozoa through fluorescent microscopy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
8122 | Nonbinding interest in granting licenses declared | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |