DE19647644A1

DE19647644A1 - Mikromechanische Transmissionsmeßzelle

Info

Publication number: DE19647644A1
Application number: DE19647644A
Authority: DE
Inventors: Peter Dr Woias; Bernd Dr Hillerich
Original assignee: Fraunhofer Gesellschaft zur Forderung der Angewandten Forschung eV
Current assignee: Fraunhofer Gesellschaft zur Forderung der Angewandten Forschung eV
Priority date: 1996-11-18
Filing date: 1996-11-18
Publication date: 1998-05-20
Anticipated expiration: 2016-11-19
Also published as: DE59701451D1; DE29622495U1; DE19647644C2

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf optische Trans missionsmeßzellen und Reaktoren mit integriertem optischem Detektionsmechanismus und insbesondere auf eine mikromecha nische Transmissionsmeßzelle zur Bestimmung einer optischen Absorption eines Probenfluids.

Reaktoren sowohl mit als auch ohne integrierte Auswertekom ponente werden gegenwärtig in verschiedenen Bereichen der chemischen Analytik und Synthese eingesetzt. Eine in der chemischen Analytik häufig verwendete Ausführungsform ist die Mikrotiterplatte, die bei immunologischen Testverfahren, wie z. B. dem Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA), ver wendet wird. Mikrotiterplatten bestehen üblicherweise aus einem optisch transparenten Kunststoffkörper, der eine An zahl von Vertiefungen als Reaktionsgefäße aufweist. Die In nenwand der Reaktionsgefäße ist mit einer geeigneten bioche mischen Rezeptorschicht belegt, die nach Einfüllen der Pro benlösung eine selektive Bindung des zu bestimmenden Analyt moleküls an mindestens eine Reaktorwand erlaubt. In weiteren Reaktionsschritten wird im Reaktionsgefäß ein Farbumschlag als Indikatorreaktion erzeugt, der eine Meßgröße für die Menge an gebundenen Analytmolekülen darstellt. Die quantita tive Bestimmung der Farbveränderung erfolgt üblicherweise durch eine optische Transmissionsmessung durch das Reaktor innenvolumen und den Kunststoffkörper hindurch.

Weitere Ausführungsformen von Mikroreaktoren bestehen aus einem durchströmten Volumen, wie z. B. einer Kapillare oder einem mit einem Trägermaterial gefüllten Strömungskanal, an dessen innerer Fläche (der inneren Wandung bzw. Oberfläche des Trägermaterials) eine Rezeptorschicht immobilisiert ist. Ein derartiges System ist in E. Yacoub-George, H. Wolf, S. Koch, P. Woias, A Miniaturized ISFET-ELISA System with a Pretreated Fused Silica Capillary as Reaction Cartridge, Proc. of the Transducers '95 - Eurosensors IX, Stockholm, Schweden, 1995, S. 898-901, beschrieben. Der dabei verwen dete chemische Reaktionsmechanismus gleicht dem oben be schriebenen Vorgehen und erzeugt als letzten Schritt im Flüs sigkeitsvolumen, das im Reaktor vorhanden ist, wiederum eine Indikatorreaktion. Das Reaktorinnenvolumen wird anschließend einer nachgeschalteten Auswertekomponente, wie z. B. einem Photometer oder einem elektrochemischen Sensor, zugeführt, um die quantitative Bestimmung der Indikatorreaktion durch zuführen.

Wie auch Reaktoren mit und ohne integrierte Auswertekompo nente werden auch optische Transmissionszellen derzeit in verschiedensten Ausführungen in der chemischen Analytik und Synthese eingesetzt. Einfache Ausführungsformen bestehen aus Meßküvetten, die mit der zu analysierenden Flüssigkeit ge füllt und in den Strahlengang einer Anordnung aus Lichtquel le und optischem Detektor gebracht werden. Dagegen beinhal ten Durchflußküvetten einen Strömungskanal, der in Strö mungsrichtung oder auch quer zur Strömungsrichtung in den Strahlengang der optischen Anordnung, die aus Lichtquelle und optischem Detektor besteht, gebracht wird.

In E. Verpoorte, A. Manz, H. Lüdli, H.M. Widmer, B.H. van der Schoot, N.F. de Rooij, A Novel Optical Detector for Use in Miniaturized Total Chemical Analysis Systems, Transducers '91, Book of Abstracts, S. 796-799, ist eine mikromechani sche Durchflußküvette beschrieben, welche aus einem durch anisotrope Ätzverfahren realisierten Kanal besteht, der an seiner Oberfläche mit einem mit Fenstern versehenen Silizi umchip abgedeckt ist. Durch Verwendung von Siliziumwafern mit einer <100<-Kristallorientierung weisen die anisotrop geätzten Kanalseitenwände die Orientierung der ätzresisten ten <111<-Kristallebene auf. Wie es für Fachleute bekannt ist, weist diese Ebene einen Winkel von etwa 54° zu einer waagerechten Bezugsebene auf. Bei der bekannten mikromecha nischen Durchflußküvette erfolgt die Lichteinkopplung durch annähernd senkrechte Einstrahlung mit einem Lichtwellenlei ter durch eine optisches Eintrittsfenster, der auf eine ge neigte Stirnseite des geätzten Kanals justiert wird. Senk recht bezieht sich in diesem Zusammenhang auf eine zur Flußrichtung des Probenfluids senkrechte Richtung. Durch Reflexion an der einen Stirnseite des Kanals wird Licht in das Zelleninnere und durch Mehrfachreflexionen an den Seitenwänden zur zweiten Stirnseite geführt, wo es durch ein optisches Fenster, d. h. durch den Deckchip, aus dem Kanal ausgekoppelt und in eine senkrecht zur Flußrichtung der Probenflüssigkeit angeordnete Glasfaser eingespeist wird. Die Auskopplung des Lichts erfolgt also an der zweiten Stirnseite, wobei die Auskopplungsglasfaser zu einem Detek tor führt, der konventionell aufgebaut sein kann.

Ein Nachteil der handelsüblichen Mikrotiterplatten besteht darin, daß dieselben typische Reaktorinnenvolumina im Be reich einiger ml und Diffusionsweglängen im Bereich einiger mm aufweisen. Dies führt dazu, daß der Ablauf der chemischen Prozesse im Inneren des Reaktors, d. h. die Bindung der Ana lytmoleküle an die Rezeptorschicht, die Erzeugung der Indi katorgröße, usw., hauptsächlich durch die vergleichsweise langen Diffusionswege und die damit verbundenen langen Dif fusionszeiten bestimmt wird. Die Dauer einer Analyse kann daher im Bereich einiger Stunden liegen.

Ferner erfolgt die Prozessierung von Mikrotiterplatten-Tests durch automatisierte Analysengeräte, die einen vergleichs weise hohen Mechanisierungsgrad aufweisen müssen (z. B. Pi pettierroboter, Platten-Transportmechanismen), wodurch die Kosten und die Fehleranfälligkeit erhöht werden.

Die Verwendung von Reaktoren ohne integrierte Auswertekompo nente erfordert im allgemeinen zusätzliche Transportschritte am Ende der Indikatorreaktion, die zu erhöhtem Aufwand und je nach Ausgestaltung zu Signalverlusten, wie z. B. durch Vermischungsprozesse beim Transport in einem Durchflußsy stem, führen können.

Optische Transmissionszellen nach dem Küvettenprinzip weisen ein vergleichsweise großes Flüssigkeitsvolumen im Bereich einiger ml auf und sind nicht für einen Durchflußbetrieb ge eignet. Die automatische Prozessierung von Probenserien kann dementsprechend nur mit hohem mechanischem Aufwand unter Verwendung eines Robotersystem bzw. von Handlingautomaten, erfolgen.

Optische Durchflußküvetten werden häufig in konventioneller Technik, wie z. B. durch Kunststoff-Spritzguß, hergestellt, wodurch eine Miniaturisierung nur bis zu einem gewissen Grad möglich ist.

Die mikromechanische Durchflußküvette in Siliziumtechnolo gie, die oben erwähnt ist, weist ferner, wie es oben be schrieben wurde, eine bewußt gewählte senkrechte Lichtein kopplung auf, damit ein Strahlengang mit Mehrfachreflexionen an den Kanalwänden entsteht. Durch eine hohe Anzahl von Mehrfachreflexionen soll die effektive optische Weglänge der Zelle im Vergleich zum Kanaldurchmesser um Faktoren 10 bis 50 wesentlich erhöht werden, wodurch eine verbesserte Er fassungsempfindlichkeit erreicht werden soll. Da die geätz ten Kanalwände aus Silizium jedoch lediglich verlustbehaf tete Reflexionen zulassen, muß in diese bekannte Transmis sionsmeßzelle eine hohe Lichtleistung eingekoppelt werden, um eine meßbare Lichtleistung am Ausgang auszukoppeln.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, eine mikromechanische Transmissionsmeßzelle zu schaffen, welche einen geringen Probenfluid- bzw. Reagenzienverbrauch ermög licht und eine hohe Erfassungsgenauigkeit erreicht.

Diese Aufgabe wird durch eine mikromechanische Transmis sionsmeßzelle gemäß Anspruch 1 gelöst.

Der Erfindung liegt die Erkenntnis zugrunde, daß für eine hohe Erfassungsgenauigkeit Mehrfachreflexionen von in einen Probenfluidbehälter eingekoppeltem Licht an der Behälter innenwand vermieden werden müssen, um die Reflexionsverluste in dem Probenfluidbehälter auf ein Minimum zu bringen. Daher wird bei der mikromechanischen Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung ein quasiparalleles Lichtstrahlen bündel, das im folgenden als "Lichtstrahl" bezeichnet wird, mit einem Durchmesser, der kleiner als der Innenquerschnitt des Fluidbehälters ist, zur Transmissionsmessung verwendet. Der "Lichtstrahl" wird definiert auf eine erste Reflektor einrichtung derart eingekoppelt, daß er den Probenfluidbe hälter, der mikromechanisch in einem Siliziumsubstrat her gestellt sein kann, weitgehende ohne Mehrfachreflexionen an der Behälterwand durchläuft. Diese Reflektoreinrichtung kann beispielsweise mit Gold beschichtet sein, wodurch ihre Re flexionseigenschaften optimal werden. Es ist nicht notwen dig, die restliche Innenwand mit Gold zu beschichten, da lediglich ein kleiner Anteil des in den Behälters eingespei sten Lichts Mehrfachreflexionen an der Behälterwand erfährt.

Das zur Messung verwendete Licht kann in der Regel nicht als "Lichtstrahl" vorliegen, sondern dasselbe kann divergent sein. In solchen Fällen kann optional ein kollimierendes Linsensystem an geeigneter Stelle in dem Lichtstrahlengang eingefügt werden. Diese Verfahren ist aus der Optik allge mein bekannt. Wird das aus einem Lichtwellenleiter austre tenden divergente Licht verwendet, so wird zweckmäßigerweise eine Gradientenlinse geeigneter Länge unmittelbar auf die Endfläche des Lichtwellenleiters aufgebracht.

Die mikromechanische Transmissionszelle zur Bestimmung der optischen Absorption eines Probenfluids umfaßt einen Behäl ter zum Halten des Probenfluids, eine Lichtdurchlaßöffnung zum Einführen des Lichts in den Behälter und die Reflektor einrichtung, die das Licht derart bezüglich des Behälters richtet, daß ein Großteil des Lichts den Behälter ohne Mehr fachreflexionen an einer Behälterwand durchläuft.

Im Vergleich zu makroskopischen Reaktoren, wie z. B. der ein gangs beschriebenen Mikrotiterplatte, bietet die mikromecha nische Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung den Vorteil des geringen Reaktorinnenvolumens, der durch die mikromechanische Siliziumverarbeitungstechnik möglich ist. Dadurch ergeben sich kurze Diffusionswege und Diffusions zeiten, ein geringer Reagenzien- und Analyt- bzw. Proben fluid-Verbrauch. Die mikromechanische Transmissionszelle kann eine Probenfluideinlaßöffnung aufweisen, durch die ein Probenfluid in den Behälter eingebracht wird, wonach sie im sogenannten "Stopped-Flow" Betrieb betrieben wird, d. h. das Probenfluid fließt nicht durch die mikromechanische Trans missionsmeßzelle durch sondern steht gewissermaßen in der selben. Durch Vorsehen einer Probenfluidauslaßöffnung kann die mikromechanische Transmissionszelle gemäß der vorlie genden Erfindung jedoch auch im Durchflußbetrieb eingesetzt werden. Sie weist somit eine hohe Flexibilität im Einsatz auf. Bei Vorhandensein einer Ein- und einer Auslaßöffnung ist ebenfalls der "Stopped-Flow"-Betrieb möglich. In diesem Fall wird das Reagens eingepumpt, wonach die Pumpe gestoppt, und der Ablauf der Reaktion abgewartet werden.

Im Vergleich zu Reaktoren ohne integrierte Auswertekompo nente (wie z. B. einer Fused Silica Kapillare) ermöglicht sie eine in-situ-Bestimmung von Reaktionsergebnissen ohne den Aufwand zusätzlicher Transporte. Ferner können Reaktionsab läufe im Reaktorinnenvolumen beispielsweise durch Messungen der Reaktionskinetik in-situ-mäßig bestimmt werden.

Wie es bereits erwähnt wurde, bestehen die Hauptvorteile der mikromechanischen Transmissionszelle gegenüber der bekannten mikromechanischen Durchflußküvette mit integrierter Auswer tekomponente in der minimalen Anzahl von Reflexionen in dem Probenfluidbehälter durch die Wahl des Strahlenganges pa rallel oder senkrecht zur Strömungsrichtung sowie parallel zur Behälterwand, wodurch Reflexionsverluste des durch den Behälter transmittierten Lichts minimiert werden. Ferner er laubt die mikromechanische Transmissionszelle gemäß der vor liegenden Erfindung beliebige Kombinationsmöglichkeiten der Lichtein- und Lichtauskopplung bzw. der fluidischen Zu- und Abfuhr auf der Ober- bzw. Unterseite des Behälters.

Die mikromechanische Transmissionszelle gemäß der vorliegen den Erfindung kann durch Immobilisierung einer biochemischen Komponente an der Behälterinnenwand, welche durch Wechsel wirkung mit einem zugehörigen, zu detektierenden Reaktions partner, wie z. B. einem Enzymsubstrat oder einem Antigen, eine chemische Reaktion im Reaktorinneren auslöst bzw. be einflußt und so ein optisch detektierbares Reaktionsergebnis erzeugt, das mit der Analytkonzentration korreliert werden kann, auch als biochemischer Reaktor eingesetzt werden, ohne daß die Transmission durch die Reflexionseigenschaften der biochemischen Komponente an der Innenwand der Behälters beeinflußt wird. Ohne Immobilisierung einer biochemischen Komponente an dem Behälter kann die mikromechanische Trans missionszelle als universell einsetzbare Transmissionszelle verwendet werden.

Bevorzugte Ausführungsbeispiele der vorliegenden Erfindung werden nachfolgend bezugnehmend auf die beiliegenden Zeich nungen detaillierter erläutert. Es zeigen:

Fig. 1 eine Grundstruktur der Transmissionszelle mit ge neigten Wänden an den Stirnflächen eines Behälters und mit einer Lichteinkopplung aus einem Lichtwellenleiter;

Fig. 2 eine Grundstruktur des Reaktors mit geneigten Wän den an den Seitenflächen des Behälters;

Fig. 3 eine Draufsicht auf die mikromechanische Transmis sionszelle von Fig. 1, bei der der Deckel entfernt ist;

Fig. 4 eine Querschnittsansicht der mikromechanischen Transmissionszelle von Fig. 3, bei der eine Einlaß- und eine Auslaßöffnung direkt unterhalb bzw. ober halb des Behälters gezeigt sind;

Fig. 5 eine Draufsicht auf eine bezüglich Fig. 4 modifi zierte Transmissionszelle mit seitlichem Einlaß;

Fig. 6 eine Querschnittansicht entlang der Linie A-A von Fig. 5;

Fig. 7 eine mikromechanische Transmissionszelle gemäß ei nem ersten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Er findung;

Fig. 8 eine mikromechanische Transmissionszelle gemäß ei nem zweiten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung mit integrierter Ein- und Auskoppeloptik für Lichtwellenleiter;

Fig. 9 eine mikromechanische Transmissionszelle gemäß ei nem dritten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung; und

Fig. 10 eine mikromechanische Transmissionszelle gemäß ei nem vierten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung.

Die mikromechanische Transmissionszelle der vorliegenden Erfindung kann für eine integrierte optische Transmissions messung verwendet und vollständig durch die Verfahren der Silizium-Mikromechanik hergestellt und miniaturisiert wer den. Die mikromechanische Transmissionszelle kann für die folgenden Zwecke verwendet werden:

An der Innenwand des Reaktors wird eine biochemische Kompo nente immobilisiert, wie z. B. ein Enzym oder ein Rezeptor, die durch Wechselwirkung mit einem zugehörigen, zu detektie renden Reaktionspartner, wie z. B. einem Enzymsubstrat oder Antigen, eine chemische Reaktion im Reaktorinneren auslöst bzw. beeinflußt und so ein optisch detektierbares Reaktions ergebnis erzeugt, das mit der Analytkonzentration korreliert werden kann.

Des weiteren kann die mikromechanische Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung ohne Immobilisierung einer biochemischen Komponente als universell einsetzbare Trans missionszelle verwendet werden. Durch das geringe realisier bare Innenvolumen können zeitlich und lokal aufgelöste Mes sungen wesentlich besser durchgeführt werden als mit makros kopischen Zellen. Beispielsweise kann der Ablauf einer che mischen Reaktion im Inneren der vom Reaktionsmedium durch strömten Zelle unmittelbar anhand eines optisch detektier baren Reaktionsergebnisses überwacht werden. Auf diese Weise kann die Reaktionskinetik unmittelbar verfolgt und eventuell durch geeignete Wahl der Reaktionsparameter, wie z. B. der Durchflußrate, des Mischungsverhältnisses der Reagenzien vor der Zelle, während der Messung, d. h. on-line, gesteuert wer den.

Fig. 1 und Fig. 2 zeigen das fluidische Grundkonzept der mikromechanischen Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung. Fig. 1 stellt einen Längsschnitt durch die Zelle 12 dar, wohingegen Fig. 2 einen Querschnitt derselben lie fert. In einem Substrat 10, das vorzugsweise aus Silizium besteht, ist ein Behälter 12 gebildet. In den Behälter 12 kann mittels einer Einlaßöffnung 14 ein Probenfluid einge führt werden, welches durch eine Auslaßöffnung 16 aus dem Behälter 12 austreten kann. Wie es in Fig. 1 und Fig. 2 ge zeigt ist, weisen sowohl die Einlaßöffnungen 14 als auch die Auslaßöffnung 16 sowie der Behälter 12 geneigte Wände 18, 26 auf, die mittels bekannter anisotroper Ätzverfahren für Si lizium, wie z. B. Ätzen mit Kalilauge, hergestellt werden. An dieser Stelle sei angemerkt, daß die Ein- bzw. die Auslaß öffnung 14, 16 keine geneigten Wände benötigen. Für Fach leute ist es offensichtlich, daß das anisotrope Ätzen mit Kalilauge relativ glatte geneigte Wände 18, 26 ergibt, die auch zur Reflexion von Licht ohne nennenswerte Streuung ge eignet sind.

Wenn die mikromechanische Transmissionszelle sowohl die Ein laßöffnung 14 als auch die Auslaßöffnungen 16 aufweist, dient der Behälter 12 als Probenfluidkanal. Auf der dem Substrat 10 gegenüberliegenden Seite ist der Behälter 12 durch einen Deckel 20 abgeschlossen. Aus der weiteren Be schreibung wird es offensichtlich, daß die Querschnitt- bzw. Längsschnittform des Behälters 12 unerheblich ist, solange Licht derart in den Behälter 12 gerichtet wird, damit mög lichst wenig Mehrfachreflexionen des Lichts an den Wänden auftreten.

In Fig. 1 ist beispielhaft die Transformation eines aus ei nem Lichtwellenleiter 7 austretenden, divergenten Strahlen bündels in ein quasiparalleles Strahlenbündel 24 ("Licht strahl") mit Hilfe einer Gradientenlinse 6 gezeigt.

Wie es in Fig. 3 zu sehen ist, weist der Behälter 12 der optischen Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfin dung bevorzugterweise eine längliche Form auf. Insbesondere zeigt Fig. 3 eine Draufsicht auf die mikromechanische Trans missionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung, bei der der Deckel 20 weggelassen ist. Bei dieser Variante ist durch das Siliziumsubstrat 10 eine Einlaßöffnung 14 zum Einführen ei nes Probenfluids in den Behälter 12 gebildet. Wie es aus Fig. 4 ersichtlich ist, ist die Auslaßöffnung 16 jedoch nicht, wie es in Fig. 1 dargestellt ist, ebenfalls in dem Siliziumsubstrat 10 gebildet, sondern in dem Deckel 20.

Der Deckel 20, der den Behälter an der Substratoberseite ab schließt, sollte aus einem geeigneten Material bestehen, das abhängig von der Art der nachfolgend beschriebenen Lichtein kopplung zumindest stellenweise eine optische Transparenz aufweisen muß. Ein geeignetes Material für den Deckel 20 könnte beispielsweise Glas sein. Abgesehen von den für die Lichtein- bzw. Lichtauskopplung erforderlichen optisch transparenten Fenstern kann die gesamte Innenwand des Behäl ters, vorzugsweise jedoch lediglich die als Spiegelflächen bzw. Reflektoreinrichtungen verwendeten geneigten Wände 18 beschichtet werden, um ein optimales optisches Reflexions verhalten zu erzielen. Ein geeignetes Beschichtungsmaterial für Silizium ist beispielsweise Gold.

Wie es aus dem Vergleich von Fig. 4 mit Fig. 1 offensicht lich ist, können der Zu- und Abfluß des Behälters 12 auf be liebige Art und Weise kombiniert werden. Der Zu- und der Ab fluß können entweder an der Rückseite des Substrats 10 oder im Deckel 20 realisiert werden.

Wie es in Fig. 5 und Fig. 6 gezeigt ist, wobei Fig. 6 ein Querschnitt entlang der Linie A-A von Fig. 5 ist, kann die Einlaßöffnung 14 bzw. die Auslaßöffnung 16 (Fig. 6) auch seitlich von dem Behälter 12 angeordnet werden, wobei die selben mittels eines kurzen Zuführungskanals 22 jeweils mit dem Behälter 12 verbunden sind.

Fig. 7 zeigt eine Funktionsdarstellung der mikromechanischen Transmissionszelle gemäß einem ersten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung. Durch den transparenten Deckel 20 wird der "Lichtstrahl" 24, der schematisch durch einen Strahlenzug dargestellt ist, unter einem definierten Winkel auf eine Reflektoreinrichtung 26 eingestrahlt. Die Reflek toreinrichtung 26 ist bei dem in Fig. 7 gezeigten Ausfüh rungsbeispiel der mikromechanischen Transmissionsmeßzelle als eine geneigte Wand des Behälters 12 realisiert, welche mit einer hochreflektierenden Schicht, beispielsweise mit Gold, beschichtet sein kann, um ein optimales Reflexionsver halten zu erreichen.

Der "Lichtstrahl" 24 (im nachfolgenden auch als das "Licht" 24 bezeichnet) wird von einem ersten Medium mit einem Bre chungsindex n₁, das beispielsweise Luft sein kann, in den optisch transparenten Deckel 20 mit einem Brechungsindex n₂ und von dort in das Probenfluid mit dem Brechungsindex n₃ eingestrahlt, um von der Reflektoreinrichtung 26 zu einer weiteren Reflektoreinrichtung im wesentlichen parallel zu der einen Behälterwand, die durch das Substrat 10 realisiert ist, und der anderen Behälterwand, die durch die Unterseite des Deckels 20 realisiert ist, zu einer weiteren Reflektor einrichtung 28 gerichtet zu werden, welche wiederum durch eine geneigte Wand des Behälters 12 realisiert sein kann, die optional mit Gold beschichtet ist. Von der weiteren Re flektoreinrichtung 28 aus wird das Licht von dem Probenfluid mit dem Brechungsindex n₃ wieder in den optisch transparen ten Deckel mit dem Brechungsindex n₂ und von dort in das äußere Medium mit dem Brechungsindex n₁, das Luft sein kann, gerichtet, wie es in Fig. 7 dargestellt ist.

Der optisch transparente Deckel 20 in Fig. 7 wirkt somit als Lichtdurchlaßöffnung 30 zum Einkoppeln des Lichts 24 in den Behälter 12 und gleichzeitig als weitere Lichtdurchlaßöff nung 32, um das Licht 24 aus dem Behälter 12 wieder austre ten zu lassen. Für Fachleute ist es offensichtlich, daß der Deckel 20 nicht unbedingt vollständig aus transparentem Ma terial sein muß, sondern daß derselbe beispielsweise eben falls aus dem Substratmaterial 10, wie z. B. Silizium, gebil det sein kann, wobei er jedoch dann als die Lichtdurchlaß öffnung 30 ein transparentes Fenster und auch für die weite re Lichtdurchlaßöffnung 32 ebenfalls ein entsprechend ge staltetes transparentes Fenster aufweisen muß. Falls kein "Lichtstrahl", also kein vollständig kollimiertes Licht zur Verfügung steht, so wird dasselbe jedoch durch die Einkopp lung des Lichts 24 auf die Reflektoreinrichtung 26 annähernd parallel zu den Begrenzungswänden des Behälters 12 gerichtet sein, derart, daß ein Großteil des Lichts 24 den Behälter 12 ohne Mehrfachreflexionen an einer Wand desselben durchläuft. In diesem Fall kann es sinnvoll sein, die Seitenwände des Behälters vollständig mit einer hochreflektierenden Schicht, z. B. Gold, zu versehen. Ein wesentlicher Punkt der vorlie genden Erfindung besteht demnach darin, daß das Licht 24 im wesentlichen parallel zur Oberfläche des Substrats 10 läuft, die die bezüglich Fig. 7 untere Wand des Behälters 12 bil det.

Die Neigung der Reflektoreinrichtung 26 sowie der weiteren Reflektoreinrichtung 28 bezüglich der Längsrichtung des Be hälters 12 kann durch das anisotrope Kaliumlauge-Ätzen be stimmt sein, wodurch sich ein Neigungswinkel von etwa 55∘ ergibt. Geneigte Wände mit anderen Neigungswinkeln oder ex tra in dem Probenfluidbehälter geformte Reflektoren können jedoch ebenfalls bei der Transmissionszelle gemäß der vor liegenden Erfindung verwendet werden, solange ein Großteil des in den Probenfluidbehälter eingestrahlten Lichts den selben ohne Mehrfachreflexionen an der Behälterwand durch läuft. Durch den Einkopplungswinkel des Lichtstrahls 24 in den transparenten Deckel 20 kann jeder beliebige Einfalls winkel des Lichts 24 auf die Reflektoreinrichtung 26 er reicht werden, derart, daß der Strahl im wesentlichen pa rallel zu dem Substrat 10 geführt wird, wodurch nur ein geringer Teil an Mehrfachreflexionen an einer Wand des Be hälters 12 auftritt, um optische Verluste in dem Behälter 12 minimal zu halten. Durch den Einkopplungswinkel des Lichts 24 in den optisch transparenten Deckel kann somit jede Brechzahl n₃ des Probenfluids ausgeglichen werden, wodurch die optische Transmissionsmeßzelle gemäß der vorliegenden Erfindung eine große Flexibilität im Einsatz aufweist, um immer eine möglichst optimal parallele Führung des Lichts zu erreichen.

Die Bestimmung der transmittierten Lichtintensität, d. h. des Lichts, das durch die weitere Lichtdurchlaßöffnung 32 aus dem Deckel 20 austritt, erfolgt mit Hilfe eines für Fachleu te bekannten Detektionsverfahrens.

Fig. 8 zeigt ein zweites Ausführungsbeispiel der optischen Transmissionsmeßzelle gemäß der vorliegenden Erfindung. Im Vergleich zum in Fig. 7 gezeigten ersten Ausführungsbeispiel weist das zweite Ausführungsbeispiel zusätzlich eine Ein/Auskopplungseinrichtung 34 für Lichtwellenleiter auf, welche einen Einkopplungsspiegel 36, einen Auskopplungsspiegel 38, und zwei Kugellinsen 6 und die zwei Lichtwellenleiter 7 auf weist. Die Ein/Auskopplungseinrichtung besteht vorzugsweise ebenfalls aus einem Siliziumchip, wobei der Einkopplungs spiegel 36 sowie der Auskopplungsspiegel 38 als geneigte Seitenflächen realisiert sind, sowie die Lichtwellenleiter 7 und die Linsen 6 selbstjustierend in V-förmig geätzte Ver tiefungen positioniert sind, wie es in Fig. 8 dargestellt ist.

Optional können der Einkopplungsspiegel 36 sowie der Aus kopplungsspiegel 38 z. B. mit Gold beschichtet werden, um das Reflexionsverhalten der Spiegel zu optimieren.

Der optische Brechungsindex n₁ zwischen dem Ein- und dem Auskopplungsort und dem jeweiligen ersten Reflexionspunkt kann zur Erzielung einer exakt achsparallelen Lichteinkopp lung dem Brechungsindex des Mediums im Kanal n₃ angepaßt werden. Diese Anpassung kann beispielsweise durch optisch transparente Vergußmassen oder Flüssigkeiten in dem mit n₁ bezeichneten Raum in Fig. 8 erreicht werden. Der Brechungs index n₂ des Deckels 20 erzeugt unter diesen Umständen nur eine Parallelverschiebung der Lichtstrahlen, die beim Ent wurf der optischen Transmissionsmeßzelle gemäß dem zweiten Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung berücksich tigt werden kann.

Gegenüber dem ersten in Fig. 7 gezeigten Ausführungsbeispiel weist das in Fig. 8 gezeigte Ausführungsbeispiel ferner den Vorteil auf, daß die Fehleranfälligkeit gegenüber einem fal schen Einkopplungswinkel in den optischen transparenten Deckel 20 beim zweiten Ausführungsbeispiel deutlich redu ziert ist, da das in Fig. 8 gezeigte zweite Ausführungs beispiel immer eine parallel zu dem Substrat 10 bzw. zu der Ein/Auskopplungsvorrichtung 34 ausgerichtete Einkopplung möglich macht, wobei der Brechungsindex n₃, wie es erwähnt wurde, gewissermaßen durch das Medium mit dem Brechungsindex n₁ strukturmäßig berücksichtigt wird.

Fig. 9 zeigt ein drittes Ausführungsbeispiel der mikromecha nischen Transmissionszelle gemäß der vorliegenden Erfindung.

Bei diesem Ausführungsbeispiel erfolgt die Einkopplung bzw. Auskopplung des Lichts 24 an der Rückseite des Substrats 10, wodurch es nicht mehr erforderlich ist, daß der Deckel 20 optisch transparent ist. Um eine Einkopplung des Lichts 24 auf die Reflektoreinrichtung 26 zu ermöglichen, wird ein Lichtschacht 40 in dem Substrat 10 hergestellt. Die Auskopp lung des Lichts 24 erfolgt durch einen weiteren Lichtschacht 42, der ebenfalls in dem Substrat 10 hergestellt ist, wie es in Fig. 9 gezeigt ist. Der Lichtschacht 40 und der weitere Lichtschacht 42 sind als geätzte Vertiefungen ausgeführt, die an die Stirnseiten des Behälters 12 bzw. an gegenüber liegenden Stellen der Behälterwände anschließen und zum Be hälter hin jeweils eine optisch transparente Membran auf weisen. Die optisch transparente Membran 30 dient somit als Lichtdurchlaßöffnung, während die optisch transparente Mem bran 32 als weitere Lichtdurchlaßöffnung zum Auskoppeln des Lichts 24 aus dem Behälter 12 wirkt. Die Einkopplung und Auskopplung des Lichts erfolgt durch Reflexion an der Re flexionseinrichtung 26 bzw. an der weiteren Reflektorein richtung 28, welche als geneigte Wände in dem Lichtschacht 40 bzw. in dem weiteren Lichtschacht 42 realisiert sind. Der Einstrahlwinkel des Lichts 24, die Einstrahlebene und die Einstrahlorte sind wiederum so gewählt, daß in dem Behälter 12 ein Strahlengang parallel zur Oberfläche des Substrats 10 und entweder parallel (Stirneinstrahlung) oder senkrecht (Seiteneinstrahlung) zur Strömungsrichtung des Probenfluids entsteht, das beispielsweise durch die in Fig. 5 oder Fig. 6 gezeigte seitliche Konfiguration in den Behälter 12 ein- bzw. ausgeführt wird.

Fig. 10 zeigt ein viertes Ausführungsbeispiel der optischen Transmissionsmeßzelle gemäß der vorliegenden Erfindung, wel ches dem in Fig. 8 gezeigten zweiten Ausführungsbeispiel ähnlich ist, wobei jedoch nun das Licht 24 von der Rückseite des Substrats 10 aus über den Einkopplungsspiegel der Ein-/Auskopplungseinrichtung 34 durch die Lichtdurchlaßöffnung 30 und durch die weitere Lichtdurchlaßöffnung 32 zu der wei teren Reflektoreinrichtung 28 und von dort auf den Auskopp lungsspiegel 38 gerichtet wird, um die Transmissionszelle zu verlassen. Zur Erreichung eines optimal parallelen Strahlen gangs in dem Behälter 12 kann zum Auffüllen der Lichtschäch te 40 und 42, wie es bezüglich Fig. 8 beschrieben wurde, ein Material mit einem bestimmten Brechungsindex n₁ verwendet werden.

In Abweichung von den im Vorhergehenden beschriebenen Aus führungsbeispielen könnte beispielsweise statt der weiteren Reflektoreinrichtung 28 eine Lichtdurchlaßöffnung beispiels weise mittels einer mikromechanischen Bohrung in dem Sub strat 10 vorhanden sein, um das Licht 24 ohne eine zweite Reflexion in dem Behälter 12 aus demselben heraus zu führen.

Ferner könnte die weitere Reflektoreinrichtung 28 statt einer geneigten Wand zum Richten des Lichts 24 in den Deckel 20 als senkrecht stehender Spiegel ausgeführt sein, wodurch das Licht 24 nach dem Einkoppeln auf die Reflektoreinrich tung 26 und dem parallelen Verlauf durch den Behälter voll ständig auf dem gleichen Weg zurück reflektiert wird und durch eine Reflexion an der Reflektoreinrichtung wieder auf dem gleichen Weg der Einkopplung aus dem Behälter 20 aus tritt. Fachleute wissen, wie ein hin- und rücklaufender op tischer Strahl getrennt werden kann, wie z. B. durch optische Filtereinrichtungen.

Claims

1. Mikromechanische Transmissionsmeßzelle zur Bestimmung einer optischen Absorption eines Probenfluids, mit fol genden Merkmalen:
einem in einem Substrat (10) gebildeten Behälter (12) zum Halten des Probenfluids;
einer Lichtdurchlaßöffnung (30) zum Einführen des Lichts in den Behälter (12);
einer Reflektoreinrichtung (26), die das Licht (24) derart bezüglich des Behälters (12) richtet, daß ein Großteil des Lichts (24) den Behälter (12) ohne Mehr fachreflexionen an einer Wand des Behälters (12) durch läuft.

2. Mikromechanische Transmissionsmeßzelle nach Anspruch 1, bei der das Substrat (10) aus Silizium besteht.

3. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 1 oder 2, bei der der Behälter (12) eine längliche Form aufweist.

4. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der An sprüche 1 bis 3, bei der der Behälter (12) durch einen Deckel (20) ab geschlossen ist.

5. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 3 oder 4, bei der die Reflektoreinrichtung (26) eine bezüglich der Längsrichtung des Behälters (12) geneigte Wand ist.

6. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 5, bei der eine Strahltransformation von eingespeistem Licht in ein im wesentlichen paralleles Strahlenbündel (24) durch eine Linse (6) bewirkt wird, wohingegen eine weitere Linse (6) den umgekehrten Vorgang bewirkt.

7. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 5 oder 6, bei der ein Neigungswinkel der Reflektoreinrichtung (26) durch einen Ätzprozeß zum Bearbeiten des Silizium substrats festgelegt ist.

8. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der vor hergehenden Ansprüche, die ferner eine Einlaßöffnung (14) in dem Substrat (10) zum Einführen des Probenfluids in den Behälter (12) aufweist.

9. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 8, die ferner eine in dem Substrat (10) oder in dem Deckel (20) gebildete Auslaßöffnung (16) für das Probenfluid aufweist, um einen Durchfluß des Probenfluids durch den Behälter (12) zu erlauben.

10. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der vor hergehenden Ansprüche, welche ferner folgende Merkmale aufweist:
eine weitere Reflektoreinrichtung (28), die von der Re flektoreinrichtung (26) entfernt in dem Weg des Lichts (24) durch den Behälter (12) angeordnet ist und das be züglich des Behälters (12) gerichtete Licht aus dem Be hälter (12) heraus richtet; und
eine weitere Lichtdurchlaßöffnung (32), aus der das durch die weitere Reflektoreinrichtung (28) gerichtete Licht aus dem Behälter (12) austritt.

11. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 10, bei die Lichtdurchlaßöffnung (30) und die weitere Lichtdurchlaßöffnung (32) mittels des Deckels (20) ge bildet sind, der aus einem für das Licht (24) transpa renten Material besteht.

12. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 11, bei der auf der Seite des Deckels (20), die dem Behäl ter (12) gegenüberliegt, eine Ein/Auskopplungseinrich tung (34) angeordnet ist, die einen Einkopplungsspiegel (36) und einen Auskopplungsspiegel (38) aufweist, die derart bezüglich der Lichtdurchlaßöffnungen (30, 32) geneigt sind, daß Licht in der Richtung in die Trans missionszelle ein- bzw. aus derselben auskoppelbar ist, in der es in dem Behälter (12) für das Probenfluid läuft.

13. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der An sprüche 1 bis 9, bei der die Reflektoreinrichtung (26) außerhalb des Be hälters (12) in einem in dem Substrat (10) gebildeten Lichtschacht (40) angeordnet ist.

14. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 13, die ferner folgende Merkmale aufweist:
eine weitere Lichtdurchlaßöffnung (32), durch die das durch den Behälter (12) laufende Licht (24) aus demsel ben austritt;
eine in einem weiteren Lichtschacht (42) gebildete wei tere Reflektoreinrichtung (28), die das durch die wei tere Lichtdurchlaßöffnung (32) laufende Licht (24) von dem Substrat (10) weg richtet.

15. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 13 oder 14, bei der der Deckel (20) nicht für das Licht transparent ist.

16. Mikromechanische Transmissionszelle nach Anspruch 14 oder 15, bei der in der Nähe der Lichtschächte (40, 42) eine Ein/Auskopplungseinrichtung (34) angeordnet ist, die einen Einkopplungsspiegel (36) und einen Auskopplungs spiegel (38) aufweist, welche derart bezüglich der Re flexionseinrichtung (26) bzw. der weiteren Reflektor einrichtung (28) geneigt sind, daß das Licht (24) in der Richtung in die mikromechanische Transmissionszelle ein- bzw. aus derselben auskoppelbar ist, in der es durch den Behälter (12) für das Probenfluid läuft.

17. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der vor hergehenden Ansprüche, bei der an einer Innenwand des Behälters (12) eine bio chemische Komponente immobilisiert ist, die durch Wechselwirkung mit einem zu erfassenden Reaktionspart ner in dem Probenfluid eine chemische Reaktion bewirkt, die ein optisch erfaßbares Reaktionsergebnis liefert.

18. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Reflektoreinrichtung (26) bzw. die weitere Reflektoreinrichtung (28) eine hochreflektierende Beschichtung aufweisen.

19. Mikromechanische Transmissionszelle nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Innenwände des Behälters (12) ganz oder teilweise mit einer hochreflektierenden Beschichtung versehen sind.