DE176971T1 - Fuer ein thermostabiles beta-galaktosidase, kodierendes gen, dieses gen enthaltender bacillus-subtilis, das durch dieses gen kodiertes enzym und verfahren zu dessen herstellung. - Google Patents

Fuer ein thermostabiles beta-galaktosidase, kodierendes gen, dieses gen enthaltender bacillus-subtilis, das durch dieses gen kodiertes enzym und verfahren zu dessen herstellung.

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Seiji Suita-Shi Osaka-Fu Negoro
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EP 85 11 2245.1 WAKAMOTO PHARM. CO. LTD. Patentansprüche ~. (deutsche Übersetzung nach Art. 67 EPÜ)
1. Gen, das für ein Polypeptid mit der in Fig. 4 dargestellten Aminosäuresequenz codiert.
2. Gen mit der in Fig. 3 dargestellten Nukleotidsequenz, das für eine hitzestabile ß-Galactosidase codiert.
3. Rekombinante DNA, in die ein DNA-Fragment, das ein Gen mit der Nukleotidsequenz von Fig. 3 enthält, in eine Vektor-DNA für Bacillus subtilis eingebaut ist.
4. Bacillus subtilis, in dem ein DNA-Fragment, das ein Gen.mit der Nukleotidsequenz von Fig. 3 enthält, mit Hilfe eines Vektors eingeschleust ist.
5. Verfahren zur Herstellung einer hitzestabilen ß-Galactosidase, dadurch gekennzeichnet, daß man Bacillus subtilis, in den ein DNA-Fragment, das ein Gen mit der Nukleotidsequenz von Fig. 3 enthält, mit Hilfe eines Vektors eingeführt worden ist, züchtet und die in der Kultur angereicherte hitzestabile ß-Galactosidase erntet.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man vor der Ernte eine Hitzebehandlung durchführt.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Hitzebehandlung 15 bis 30 Minuten bei 65 bis 750C durchführt.
8. DNA mit Promotor-Aktivität und mit der Nukleotidsequenz von Fig. 8.
9. Rekombinante DNA, in die die DNA mit der Nukleotidsequenz von Fig. 8 eingebaut ist.
10. Mikroorganismus, in den rekombinante DNA, die eingebaute DNA mit der Nukleotidsequenz von Fig. 8 enthält, eingeschleust ist.
11. Hitzestabile ß-Galactosidase mit folgenden physikalisch-chemischen Eigenschaften:
a) Wirksamkeit und Substratspezifität:
Hydrolyse von Substraten mit einer ß-D-galactosidischen Bindung unter Freisetzung von D-Galactose,
b) pH-Optimum und pH-Bereich der Stabilität: pH-Optimum: 5,5
pH-Bereich der Stabilität: 5,5 bis 9,0
c) für die Aktivität geeigneter Temperaturbereich: optimale Temperatur für die Aktivität: etwa 700C
d) Temperaturbereich der Stabilität:
die Halbwertszeiten der ß-Galactosidase-Aktivität bei 55°C, 600C und 65°C betragen etwa 620, 150 bzw. 55 Stunden.
e) Hemmung durch Metallionen:
Mg++, Ca++, CuT+, Fe+", Co++ und Li"1" in einer Höhe von 1 mM hemmen die Enzymaktivität nicht, während Aa+ die Aktivität zu etwa 80 % oder mehr und Hg' zu etwa 90 % oder, mehr hemmt,
f) Molekulargewicht:
(a) etwa 67 000 (bestimmt mit Hilfe der SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese)
(b) 78 051 (berechnet aus der Aminosäuresequenz)
g) Michaelis-Konstante für Lactose (K ): ^ m
2,4 mM.
12. Hitzestabile ß-Galactosidase nach Anspruch 11 mit der Aminosäuresequenz von Fig. 4.
DE198585112245T 1984-09-29 1985-09-27 Fuer ein thermostabiles beta-galaktosidase, kodierendes gen, dieses gen enthaltender bacillus-subtilis, das durch dieses gen kodiertes enzym und verfahren zu dessen herstellung. Pending DE176971T1 (de)

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