DE112017006187T5 - 1,5-disubstituierte 1,2,3-triazole sind inhibitoren von rac/cdc42-gtpasen - Google Patents

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Linette CASTILLO-PICHARDO
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Abstract

Verbindungen sind offenbart, die RhoGTPasen hemmen, die zur Inhibierung hyperprofilerativer und neoplastischer Krankheiten nützlich sind. Insbesondere hemmen die Verbindungen die GTPasen Rac und Cdc42, die in Signalwegen bei Krebs und Metastasierung überaktiv oder überexprimiert sind. Verfahren zur Behandlung von Krebs und hyperproliferativen Krankheiten sind offenbart.

Description

  • QUERVERWEIS AUF VERWANDTE ANMELDUNGEN
  • Diese Anmeldung beansprucht die Priorität von U.S. Ser.-Nr. 62/328,282 , eingereicht am 26. April 2016, dessen gesamter Inhalt hierin durch Verweis eingegliedert ist.
  • Diese Erfindung wurde mit Regierungsunterstützung unter Gewährungs-Nr. NIH/NIHMD U54MD008149; NIH/NIHMD P20GM103475; NIH/NIGMS SC3GM116713; NIH/NIMHD G12MD007600 und NIH/NCI U54 CA096297, gewährt von The National Institutes of Health, gemacht. Die U.S.-Regierung hat bestimmte Rechte an der Erfindung.
  • HINTERGRUND
  • Verbindungen sind offenbart, die Rho-GTPasen hemmen, die zur Hemmung hyperproliferativer und neoplastischer Krankheiten nützlich sind. Genauer hemmen die Verbindungen die GTPasen Rac und Cdc42, die in Signalwegen in Krebs und Metastasen überaktiv oder überexprimiert sind. Verfahren zur Behandlung von Krebs und hyperproliferativen Krankheiten sind offenbart.
  • Die Rho-GTPasen Rac (Ras-verwandtes C3-Botulinumtoxin-Substrat) und Cdc42 (Zellteilungskontrollprotein 42-Homolog) regulieren Zellfunktionen, die Krebsmalignität beherrschen, einschließlich Zellpolarität, Migration, und Zellzyklusfortschritt. Die Rho-Familie von GTPasen in Menschen besteht aus 20 verschiedenen Mitgliedern, und abweichendes Verhalten in ihrer Regulierungsaktivität ist bei Krebs und anderen Krankheiten impliziert worden. Mehr als 70 Guanin-Nukleotid-Austauschfaktoren (GEFs) sind bekannt, die spezifisch eine oder mehr der GTPasen aktivieren. Die aktivierten GTPasen wiederum können mit mehr als 60 nachgelagerten Effektoren spezifisch wechselwirken. Dysregulation von einem oder mehr Zellprozessen kann zur Freisetzung maligner Zellen von ihren ursprünglichen Orten führen, die sich anschließend in prämetastatischen Nischen in, zum Beispiel, Knochen oder Lungen, etablieren können. Es wurde gefunden, dass Mitglieder der Rho-GTPase-Familie, einschließlich Rac, Cdc42 und Rho, Schlüsselrollen bei der Signalgebung in diesen Prozessen spielen.
  • Rho-GTPasen regulieren Migration und Invasion, Zytoskelett-Organisation, Transkriptionsregulierung, Zellzyklusfortschritt, Apoptose, Vesikeltransport und Zell-Zell- und Zell-extrazelluläre Matrix-Adhäsionen. Die Rho-GTPasen Rac und Cdc42 sind wirksame Induktoren von Aktinpolymerisation und Ausdehnung von Aktinstrukturen am Vorderrand beweglicher Zellen. Zusätzlich spielt Cdc42 eine Rolle bei der Zellpolarität und fördert so gerichtete und anhaltende Migration.
  • Studien haben hyperaktives Rac und Cdc42 mit erhöhtem Überleben von Krebszellen, Proliferation und Invasion in Verbindung gebracht, sowie mit durch Ras und andere Onkogene vermittelter Transformation. Des Weiteren aktivieren onkogene Zelloberflächenrezeptoren, wie etwa Tyrosinkinase-, Zytokin- und G-Protein-gekoppelte Rezeptoren, Rac und Cdc42 durch Regulierung ihrer vorgelagerten Effektor-GEFs. Dementsprechend sind Rac- und Cdc42-Proteine im Allgemeinen in Krebs nicht mutiert, sondern überexprimiert oder hyperaktiviert. Obwohl ~9% von Melanomen eine aktivierende Rac(P29S)-Mutation enthalten, und die hyperaktive Spleißvariante Raclb in manchen Krebsen überexprimiert ist, wird die Mehrheit des Rac und Cdc42 bei menschlichem Krebs auf Grund hochregulierter GEFs aktiviert.
  • Von den direkten nachgelagerten Effektoren von Rac und Cdc42 sind p21-aktivierte Kinasen (PAK) in einer Anzahl von Krebsen überexprimiert und tragen zu Krebstransformation und -progression durch Regulieren zellulärer Schlüsselfunktionen, einschließlich Zytoskelettorganisation, Zellmigration, -adhäsion, -wachstum und -entwicklung bei. Daher sind eine Anzahl von PAK-Inhibitoren als Anti-Krebs-Therapeutika entwickelt worden. Jedoch sind diese durch Spezifizität, Bioverfügbarkeit und Toxizität beschränkt geblieben, und müssen klinische Studien erst noch erfolgreich abschließen.
  • Es gibt einen Bedarf an neuen therapeutischen Agenzien für die Behandlung von Krebs und anderen hyperproliferativen Krankheiten. Die Rac- und Cdc42-GTPasen sind wichtige zelluläre Mittler, die in metastatischen Tumoren hyperaktiv oder überexprimiert sind. Die Entwicklung neuer Inhibitoren der Aktivitäten von Rac und/oder Cdc42 mit verbesserter Aktivität, pharmakochemischem Profil und verringerter Toxizität ist wünschenswert.
  • ZUSAMMENFASSUNG
  • Eine Reihe neuer 1,5-disubstituierter 1,2,3-Triazole ist hierin offenbart. Die Erfinder entwickelten Rac-Inhibitor EHop-016 (IC50, 1.100 nm), der in vivo Krebszellenmigration und -lebensfähigkeit hemmt und Tumorwachstum, Metastasierung und Angiogenese verringert. Es wurde berichtet, dass Verbindung EHop-016 in metastatischen MDA-MB-435-Zellen Rac1-Aktivität bei Konzentrationen <5 µM und mit einem IC50 = 1,1 µM hemmt. Bei höheren Konzentrationen (>10 µM) hemmt EHop-016 Rac-Aktivität um 100% und Cdc42-Aktivität um 75%. Ehop-016 hemmte Zellmigration in vitro, und ein in vivo-Modell für metastatischen Krebs in Mäusen konnte Metastasierung und Tumorwachstum hemmen.
  • Manche Mitglieder sind 10mal wirksamere Inhibitoren von Rac und Cdc42 als EHop-016. Behandlung von MDA-MB-435-Zellen mit 150 nM eines spezifischen Beispiels aus dieser Reihe (MBQ-167) über 24 Stunden führte zu verringerter Expression der Onkogene und Überlebensinduktoren c-Myc, Bcl-XL, Bcl-2, bei gleichzeitiger Erhöhung des pro-apoptotischen Proteins BAD. Studien in einer Reihe von Krebstypen haben gezeigt, dass Rac/Cdc42/PAK-Signalgebung Zellüberleben induzieren und Apoptose ausweichen kann. Daher wird vorhergesagt, dass die verringerte Zelllebensfähigkeit und erhöhte Apoptose durch MBQ-167, bei Konzentrationen die sowohl Rac als auch Cdc42 hemmen, auf der dualen Hemmung der Rac- und Cdc42-Funktion basiert.
  • MBQ-167 hemmt Rac und Cdc42 in metastatischen Brustkrebszellen mit IC50s von 103 nM bzw. 78 nM. Folglich verringert MBQ-167 die Signalgebung durch den Rac und Cdc42 nachgelagerten Effektor p21-aktivierte Kinase (PAK) und die Aktivität von Signalüberträger und Aktivator der Transkription (STAT3) signifikant, ohne Rho-, MAPK- oder Akt-Aktivitäten zu beeinflussen. MBQ-167 hemmt auch Migration und Lebensfähigkeit von Brustkrebszellen und Mammopshärenbildung. Außerdem beeinträchtigt MBQ-167 Krebszellen, die den epithelial-mesenchymalen Übergang durchlaufen haben, durch einen Verlust der Zellpolarität und Hemmung der Aktin-basierten Fortsätze der Zelloberfläche, was letztlich zur Ablösung vom Substrat führt. Verlängerte Inkubation (120 h) in MBQ-167 verringert die Lebensfähigkeit metastatischer Krebszellen mit einem Gl50 von ~130 nM, ohne Nicht-Krebszellen des Milchdrüsenepithels zu beeinträchtigen. Der Verlust an Lebensfähigkeit von Krebszellen basiert auf MBQ-167-vermitteltem G2/M-Zellzyklusstillstand und anschließender Apoptose, insbesondere der abgelösten Zellen. In vivo hemmt MBQ-167 Wachstum und Metastasierung von Mammatumoren in immunkompromittierten Mäusen um ~90%. Schlussendlich ist MBQ-167 10X wirksamer als andere verfügbare Rac/Cdc42-Inhibitoren und hat das Potenzial, zu einem Anti-Krebs-Medikament sowie einer dual hemmenden Sonde für das Studium von Rac und Cdc42 entwickelt zu werden.
  • Die folgenden nummerierten Ausführungsformen werden erwogen und sind nicht beschränkend:
    • 1. Eine Verbindung der Formel (I),
      Figure DE112017006187T5_0001
      wobei A und B unabhängig H, Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OH, -CN, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, - NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -OR4, CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, - S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) sind; oder A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2#NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder-OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHSO)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; jedes R4, R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 2. Die Verbindung aus Klausel 1, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden, wobei jedes Wasserstoffatom in C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder einem 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, - OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-,Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, - N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 3. Die Verbindung aus Klausel 1 oder Klausel 2, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C6-C10-Aryl bilden, wobei jedes Wasserstoffatom in C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), - N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, - C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, - CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 4. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-3, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 5. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-4, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 6. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-5, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 7. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-6, wobei x 0 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 8. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-6, wobei x 1, 2 oder 3 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 9. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-8, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 10. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-9, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 11. Die Verbindung aus irgendeiner von Klauseln 1-9, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 12. Die Verbindung aus Klausel 1, wobei die Verbindung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus
      Figure DE112017006187T5_0002
      Figure DE112017006187T5_0003
      Figure DE112017006187T5_0004
      Figure DE112017006187T5_0005
      Figure DE112017006187T5_0006
      Figure DE112017006187T5_0007
      Figure DE112017006187T5_0008
      Figure DE112017006187T5_0009
      Figure DE112017006187T5_0010
      Figure DE112017006187T5_0011
      und
      Figure DE112017006187T5_0012
      oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon.
    • 13. Die Verbindung aus Klausel 1 oder Klausel 12, wobei die Verbindung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus
      Figure DE112017006187T5_0013
      Figure DE112017006187T5_0014
      Figure DE112017006187T5_0015
      oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon.
    • 14. Die Verbindung aus Klausel 1, wobei die Verbindung die Formel (II)
      Figure DE112017006187T5_0016
      hat, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder-OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; jedes R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6_Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon. Die Verbindung aus Klausel 1 oder Klausel 14, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 15. Die Verbindung aus Klausel 1 oder Klausel 14, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 16. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1, Klausel 14 oder Klausel 15, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 17. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-16, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 18. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-17, wobei x 0 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 19. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-17, wobei x 1, 2 oder 3 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 20. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-19, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8). C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl,-S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6_Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 21. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-20, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, - NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, - N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)CrC6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 22. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1 oder Klauseln 14-21, wobei R3 is C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 23. Die Verbindung aus Klausel 1, wobei die Verbindung die Formel (III),
      Figure DE112017006187T5_0017
      hat, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder-OR5 substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; und jedes R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6_Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 24. Die Verbindung aus Klausel 1 oder Klausel 23, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalky oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 25. Die Verbindung aus Klausel 1, Klausel 23 oder Klausel 24, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 26. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1, oder Klauseln 23-25, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 27. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1, oder Klauseln 23-26, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8). C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 28. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1, oder Klauseln 23-27, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, CrC6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, - NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, - N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 29. Die Verbindung aus irgendeiner von Klausel 1, oder Klauseln 23-28, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 30. Die Verbindung aus Klausel 1, wobei die Verbindung die Formel
      Figure DE112017006187T5_0018
      hat, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 31. Ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I),
      Figure DE112017006187T5_0019
       wobei A und B unabhängig H, Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OH, -CN, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, - NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -OR4, CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, - S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; oder A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-,Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, - N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, -S(O)NH(C1C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-.Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6_Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder - CH2F substituiert ist; jedes R4, R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist, das Verfahren umfassen Kontaktieren einer Verbindung der Formel (V),
      Figure DE112017006187T5_0020
      wobei A, B, R1, R2 und x wie in Formel (I) definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (VI),
      Figure DE112017006187T5_0021
      wobei R3 wie in Formel (I) definiert ist, Y fehlt oder ein Halogen ist und M ein Metall ist, oder mit einer Verbindung der Formel (VIa),
      Figure DE112017006187T5_0022
      wobei R3 wie in Formel (I) definiert ist, und einem Katalysator.
    • 32. Das Verfahren aus Klausel 31, wobei die Verbindung der Formel (VI),
      Figure DE112017006187T5_0023
      hergestellt wird durch Kontaktieren einer Verbindung der Formel (VIa),
      Figure DE112017006187T5_0024
      mit einer Verbindung der Formel (VII), RBYX (VII) wobei RB C1-C6-Alkyl ist, M ein Metall ist und Y ein Halogen ist.
    • 33. Das Verfahren aus Klausel 31 oder Klausel 32, wobei M Magnesium ist.
    • 34. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-33, wobei Y Brom oder Chlor ist.
    • 35. Das Verfahren aus Klausel 31, wobei Y fehlt und M Zink umfasst.
    • 36. Das Verfahren aus Klausel 35, wobei das Zink Diethylzink ist.
    • 37. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-36, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
    • 38. Das Verfahren aus Klausel 37, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
    • 39. Das Verfahren aus Klausel 31, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
    • 40. Das Verfahren aus Klausel 31 oder Klausel 39, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
    • 41. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-40, wobei der Schritt des Kontaktierens in der Gegenwart eines polaren Lösungsmittels durchgeführt wird.
    • 42. Das Verfahren aus Klausel 41, wobei das polare Lösungsmittel THF, DMF, Dichlormethan, Et2O, Diglyme oder eine Mischung davon ist.
    • 43. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-42, wobei das Verfahren bei einer erhöhten Temperatur durchgeführt wird.
    • 44. Das Verfahren aus Klausel 43, wobei die erhöhte Temperatur mindestens 35 °C beträgt.
    • 45. Das Verfahren aus Klausel 44, wobei die erhöhte Temperatur ausgewählt ist aus einem Bereich von etwa 35 °C bis etwa 65 °C.
    • 46. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-45, wobei die Verbindung der Formel (V),
      Figure DE112017006187T5_0025
      hergestellt wird durch
      • (a) Kontaktieren einer Verbindung der Formel (VIII),
        Figure DE112017006187T5_0026
        mit einer Säure in einem wässrigen Lösungsmittel, um ein Zwischenprodukt zu bilden, und
      • (b) Reagieren des in (a) gebildeten Zwischenprodukts mit einem Azid.
    • 47. Das Verfahren aus Klausel 46, wobei die Säure eine mineralische Säure ist.
    • 48. Das Verfahren aus Klausel 47, wobei die mineralische Säure Schwefelsäure ist.
    • 49. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 46-48, wobei das Azid Natriumazid ist.
    • 50. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 46-49, wobei Schritt (a) weiter Natriumnitrit umfasst.
    • 51. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 46-50, weiter umfassend das Reinigen der Verbindung von Formel (V) durch Chromatografie.
    • 52. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-51, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C6-C10-Aryl bilden.
    • 53. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 31-52, wobei die Verbindung von Formel (I) die Struktur einer Verbindung von Formel (III)
      Figure DE112017006187T5_0027
      hat, wobei R1 und R3 wie in Klausel 31 definiert sind, und die Verbindung von Formel (V) die Struktur von Formel (Va)
      Figure DE112017006187T5_0028
      hat.
    • 54. Das Verfahren aus Klausel 53, wobei das Verfahren den Schritt des Kontaktierens der Verbindung der Formel (Va),
      Figure DE112017006187T5_0029
      mit einer Verbindung der Formel VI,
      Figure DE112017006187T5_0030
      wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(OR8) oder C1-C6-Alkyl-(NR8R9) ist, Y fehlt und M ein Metall ist, oder mit einer Verbindung der Formel Via,
      Figure DE112017006187T5_0031
      wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(OR8) oder C1-C6-Alkyl-(NR8R9) und einem Katalysator, umfasst.
    • 55. Das Verfahren aus Klausel 54, wobei Y fehlt und M Zink umfasst.
    • 56. Das Verfahren aus Klausel 55, wobei das Zink Diethylzink ist.
    • 57. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 54-56, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
    • 58. Das Verfahren aus Klausel 57, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
    • 59. Das Verfahren aus Klausel 54, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
    • 60. Das Verfahren aus Klausel 54 oder Klausel 59, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
    • 61. Das Verfahren aus Klausel 54, wobei die Verbindung der Formel (Va),
      Figure DE112017006187T5_0032
      mit einer Verbindung der Formel (VIa),
      Figure DE112017006187T5_0033
      und einem Katalysator kontaktiert wird.
    • 62. Das Verfahren aus Klausel 61, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
    • 63. Das Verfahren aus Klausel 61, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
    • 64. Das Verfahren aus Klausel 54, wobei die Verbindung der Formel (Va),
      Figure DE112017006187T5_0034
      mit einer Verbindung der Formel (VI),
      Figure DE112017006187T5_0035
      kontaktiert wird, wobei Y fehlt und M ein Metall ist.
    • 65. Das Verfahren aus Klausel 64, wobei M Zink umfasst.
    • 66. Das Verfahren aus Klausel 65, wobei das Zink Diethylzink ist.
    • 67. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 64-66, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
    • 68. Das Verfahren aus Klausel 67, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
    • 69. Das Verfahren aus Klausel 53, wobei das Verfahren den Schritt des Kontaktierens der Verbindung der Formel (Va),
      Figure DE112017006187T5_0036
      mit einer Verbindung der Formel (VI),
      Figure DE112017006187T5_0037
      umfasst, wobei R3 C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C6-C10-Aryl-(OR8) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl, Y ein Halogen ist und M ein Metall ist.
    • 70. Das Verfahren aus Klausel 69, wobei M Magnesium ist.
    • 71. Das Verfahren aus Klauseln 69 oder Klausel 70, wobei Y Brom oder Chlor ist.
    • 72. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 69-71, wobei der Schritt des Kontaktierens in der Gegenwart eines polaren Lösungsmittels ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus THF, DMF, Dichlormethan, Et2O, Diglyme und einer Mischung davon durchgeführt wird.
    • 73. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 69-72, wobei das Verfahren bei einer erhöhten Temperatur durchgeführt wird.
    • 74. Das Verfahren aus Klausel 73, wobei die erhöhte Temperatur mindestens 35 °C beträgt.
    • 75. Das Verfahren aus Klausel 73 oder Klausel 74, wobei die erhöhte Temperatur ausgewählt ist aus einem Bereich von etwa 35 °C bis etwa 65 °C.
    • 76. Ein Verfahren zur Behandlung einer Krankheit in einem Patienten, das Verfahren umfassend Verabreichen an den Patienten, der dessen bedarf, einer wirksamen Menge einer Verbindung gemäß irgendeiner der Klauseln 1-30.
    • 77. Das Verfahren aus Klausel 76, wobei die Krankheit Krebs ist.
    • 78. Das Verfahren aus Klausel 76 oder Klausel 77, wobei die Verbindung Krebszellenmigration hemmt.
    • 79. Das Verfahren aus Klausel 77 oder Klausel 78, wobei die Krankheit ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Brustkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Magenkrebs und neuronalem Krebs.
    • 80. Das Verfahren aus Klausel 79, wobei die Krankheit Bauchspeicheldrüsenkrebs ist.
    • 81. Das Verfahren aus Klausel 79, wobei die Krankheit Eierstockkrebs ist.
    • 82. Das Verfahren aus Klausel 79, wobei die Krankheit Magenkrebs ist.
    • 83. Das Verfahren aus Klausel 79, wobei die Krankheit neuronaler Krebs ist.
    • 84. Das Verfahren aus Klausel 79, wobei die Krankheit Brustkrebs ist.
    • 85. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-79 oder Klausel 84, wobei die Verbindung Mammosphärenbildung hemmt.
    • 86. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-85, wobei die Verbindung Zellzyklusstillstand einer erkrankten Zelle induziert.
    • 87. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-86, wobei die Verbindung Apoptose einer erkrankten Zelle induziert.
    • 88. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-87, wobei die Verbindung die Expression eines Bcl-2-Proteins verringert.
    • 89. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-88, wobei die Krankheit durch eine GTPase vermittelt wird.
    • 90. Das Verfahren aus Klausel 89, wobei die GTPase Rac1 oder Cdc42 ist.
    • 91. Das Verfahren aus Klausel 89, wobei die GTPase Rac1 ist.
    • 92. Das Verfahren aus Klausel 89, wobei die GTPase Cdc42 ist.
    • 93. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-92, wobei die Verbindung PAK1/2-Aktivität hemmt.
    • 94. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-93, wobei die Verbindung STAT3-Aktivität hemmt.
    • 95. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-94, wobei die Verbindung die Formel
      Figure DE112017006187T5_0038
      hat oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
    • 96. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-95, wobei die wirksame Menge der Verbindung in einem Bereich von etwa 0,01 mg/kg bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht des Patienten ist.
    • 97. Das Verfahren aus irgendeiner der Klauseln 76-95, wobei die wirksame Menge der Verbindung in einem Bereich von etwa 0,1 mg/kg bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht des Patienten ist.
  • Figurenliste
  • Die Patent- oder Anmeldungsakte enthält mindestens eine in Farbe ausgeführte Zeichnung. Kopien dieser Patent- oder Patentanmeldungsveröffentlichung mit Farbzeichnung (en) werden vom Amt auf Anfrage und Zahlung der erforderlichen Gebühr zur Verfügung gestellt.
    • 1. Design und Synthese von MBQ-167. Synthese von MBQ-167. Reaktionsbedingungen: (i) konz. H2SO4, NaNO2, Wasser 0-5 °C, 1 h; (ii) NaN3, 0 °C, 1 h, 76%; (iii) THF, 3, 50 °C, 1 h; (iv) NH4Cl (aq), 86%.
    • 2 (A, B, C). Brustkrebszellphänotyp nach MBQ-167-Behandlung. 2A, oberes Feld, Hellfeldbilder von menschlichen metastatischen MDA-MB-231-Brustkrebszellen bei Antwort auf MBQ-167. Unteres Feld, MCF-7-Zellen bei Antwort auf MBQ-167. 2B, C, fokale Adhäsionen und Aktinzytoskelett nach MBQ-167-Behandlung, die repräsentative Fluoreszenzmikrographien von MDA-MB-231-Zellen zeigen. MDA-MB-231-Zellen wurden 24 Stunden mit 0, 250 oder 500 nM MBQ-167 behandelt und fixiert und in 2B fixiert mit PhosphoTyrosin-Antikörpern für fokale Adhäsionen (grün) und Rhodamin-Phalloidin für F-Aktin (rot) und in 2C mit Anti-Vinculin (rot) gefärbt. Pfeile, Invadopodien; Pfeilspitzen, fokale Adhäsionen.
    • 3. (A, B, C). Inhibitorischer Effekt von MBQ-167 auf Rac- und Cdc42-Aktivierung. Menschliche MDA-MB-231-Brustkrebszellen wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt. A-C, Die anhaftenden (A) und losgelösten (D) Zellpopulationen wurden gewonnen und gleiche Mengen von Proteinen Pulldown-Assays unterworfen, unter Verwendung der p21-Bindedomäne von PAK, um das GTP-gebundene Rac und Cdc42 zu isolieren. Ergebnisse aus positiven Banden in Western-Blots wurden mittels Bild J quantifiziert. 3A-1, Links, Repräsentativer Western-Blot für Rac1/2; 3A-2, Rechts, Quantifizierung der Rac-Aktivierung bei 24 h nach 0 oder 250 nM MBQ-167. 3B-1, Links, Repräsentativer Western-Blot für Cdc42; 3B-2, Rechts, Quantifizierung der Cdc42-Aktivierung bei 24 h nach 0 oder 250 nM MBQ-167. Die integrierte Dichte für aktives Rac oder Cdc42 (GTP) wurde durch das gesamte rac oder Cdc42 aus denselben Zelllysaten geteilt. Rac- oder cdc42-Aktivität für jede MBQ-167-Behandlung wurde für jedes Experiment durch die Vehikelkontrollen geteilt, um die Relative Rac- oder cdc42-Aktivität zu erhalten. N=3, *= P < 0,05, *** = P < 0,001. Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. C, D, MDA-MB-231-Zellen mit Vehikelkontrolle (0,1% DMSO) oder verschiedenen Konzentrationen von MBQ-167 (0-1000 nM) wurden 24 Std. behandelt. Gesamtzelllysate unter Verwendung kombinierter anhaftender und losgelöster behandelter Populationen wurden dem G-LISA Rac1/2/3- oder Cdc42-Aktivierungstest unterzogen. IC50-Kurven für prozentuale Rac- 3C oder Cdc42- 3D Aktivierung sind relativ zur Vehikelkontrolle aus drei biologischen Replikaten mit je zwei technischen Replikaten. Fehlerbalken stellen ± S.D. dar. Vier-Parameter-Dosis-Antwort-Kurven, erzeugt mit GraphPad Prism®, sind gezeigt.
    • 4 (A-G). Die Wirkung von MBQ-167 auf Rac und Cdc42 nachgelagerte Signalgebung. 4A, Die Wirkung von MBQ-167 auf PAK1- und PAK2-Phosphorylierung wie durch Western-Blot auf Spiegel von pPAK1 (T423)/ pPAK2 (T402), pPAK1 (S199)/pPAK2 (S192) und pPAK1 (S144) in MDA-MB-231-Zellen nach 24 Stunden Behandlung in 0 oder 250 nM MBQ-167 gemessen. Daten für getrennte anhaftende (Att) und losgelöste (Det) Populationen sind gezeigt. 4A-1 Links, repräsentative Western-Blots (N=3) 4A-2. Rechts, relative PAK-Aktivität nach MBQ-167-Behandlung. Positive banden aus allen Western-Blots wurden mittels Bild J quantifiziert. Die integrierte Dichte von p-PAK wurde durch die von Gesamt-PAK für dasselbe Zelllysat geteilt und als ein Maß für PAK-Aktivität für jeden phospho-PAK-Rest verwendet. Relative PAK-Aktivität wurde für jedes Experiment relativ zu Vehikelkontrollen bestimmt. N=3, *= P < 0,05, ** = P < 0,01, *** = P < 0,001. Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. 4B, Wirkung von MBQ-167 Phosphorylierung von PAK nachgelagerten Effektoren LIMK und Cofilin. MDA-MB-231-Zellen wurden 4,12 oder 24 h in Vehikel oder 250 nM MBQ-167 inkubiert, die angehefteten (A) und abgelösten (D) Populationen wurden getrennt, lysiert, und gleiches Protein für Western-Blot verwendet. Repräsentativer Western-Blot für Gesamt-LIMK1 oder p-LIMK1/2 (Y507/T508) nach 24 h in 0 oder 250 nM MBW-167 (N=2) ist gezeigt. 4C, Repräsentativer Western-Blot für Gesamt- oder p-Cofilin (S3) gleicher Mengen von Gesamtproteinlysaten nach 4,12 oder 24 h in 250 nM MBQ-167 (N=3). Getrennte angeheftete (A) und abgelöste (D) Populationen sind für 12 und 24 h MBQ-167-Behandlung gezeigt. 4D, Wirkung von MBQ-167 auf STAT3-Phosphorylierung und -Expression. Repräsentativer Western-Blot für pSTAT3 (Y705) und Gesamt-STAT3-Expression in GFP-HER2-BM-Zellen nach 24 h Behandlung mit Vehikel oder 100, 200 oder 500 nM MBQ-167 ist gezeigt. 4D-1 Repräsentativer Western-Blot (links) 4D-2 und Quantifizierung (rechts). N=3, * = P < 0,05, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. E, F, Wirkung von MBQ-167 auf Zellmigration. 4E-1, Die Wirkung von MBQ-167 auf MDA-MB-231-Zellmigration wie in einem Transwell-Test gemessen. Bilder sind repräsentativ für drei unabhängige Experimente. 4E-2 Der Graph unten zeigt die Quantifizierung von 20 mikroskopischen Feldern pro Behandlung pro Experiment von PI-gefärbten Zellen, die durch Poren mit 8 Mikron Durchmesser auf die Unterseite der Membran migrierten N=3, * = P <0,05, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. 4F, Die Wirkung von MBQ-167 auf Zellmigration in einem Kratztest. In gleicher Dichte ausplattierte MDA-MB-231-Zellen wurden einem Kratzer in der Mitte unterzogen und mit MBQ-167 bei 0, 250 oder 500 nM behandelt. Mikrographen wurden digital bei 0 und 24 h aufgenommen und die Entfernung des Kratzers für jede Behandlung quantifiziert und relativ zur Distanz zur Zeit 0 dargestellt. Ergebnisse sind ein Durchschnitt von zwei technischen Replikaten und zwei biologischen Replikaten für jede Behandlung ± S.D, * = P <0,05. 4G, die Wirkung von MBQ-167 auf Mammosphärenbildungseffizienz in MDA-MB-231-Zellen. Mit 0 oder 250 nM MBQ-167 behandelte MDA-MB-231-Zellen wurden 4 Tage Mammosphären-Tests unterzogen. Zellen wurden nur einmal mit MBQ-167 behandelt, bevor sie auf dem Mammosphären-Medium platziert wurden. Mammosphärenbildungseffizienz wurde berechnet als der Prozentsatz der Anzahl von Mammosphären geteilt durch die Anzahl von ausgesäten Zellen pro Gefäß. N=3, *** = P < 0,001, Fehlerbalken stellen ± S.D. dar.
    • 5A-D. Wirkung von MBQ-167 auf Zellüberleben. 5A, die Wirkung von MBQ-167 auf Lebensfähigkeit von MDA-MB-231-, GFP-HER2-BM- und MCFA10A-Zellen. Gleiche Anzahlen jeder Zelllinie wurden jeweils mit Vehikelkontrolle (0.1% DMSO) oder verschiedenen Konzentrationen von MBQ-167 (0-1000 nM) 120 h behandelt. GI50-Kurven für prozentuale Zelllebensfähigkeit sind relativ zu Vehikel aus drei biologischen Replikaten mit je zwei technischen Replikaten. Vier-Parameter-Dosis-Antwort-Kurven, erzeugt mit GraphPad Prism®, sind gezeigt. N=3, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. 5B, Die Wirkung von MBQ-167 auf Zellzyklusfortschritt. Gleiche Anzahlen von MDA-MB-231-Zellen entweder in Vehikelkontroll- oder Behandlungsgruppen wurden 24 h mit 0 oder 250 nM MBQ-167 behandelt. Graphen stellen den Prozentsatz von Kontrolle gegenüber 250 nM MBQ-167-behandelten Zellen in G0/G1, S oder G2/M-Phasen des Zellzyklus dar, gefärbt mit PI. 5B-1 Linker Graph, repräsentative Durchflusszytometrieanalyse 5B-2; rechter Graph, Quantifizierung des Zellzyklusstadiums. N=3, Fehlerbalken ± S.E.M. 5C, Die Wirkung von MBQ-167 auf Caspase3-, -7-Aktivität. 5C-1 Linker Graph, Caspase3/7-Aktivität von MDA-MB-231- und GFP-HER2-BMZellen (einschließlich angehefteter und abgelöster Populationen) nach Vehikel (0,1% DMSO) oder verschiedenen Konzentrationen von MBQ-167 (0-1000 nM) über 24 h. N=3, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. 5C-2 Rechter Graph, die Wirkung von MBQ-167 auf Caspase-3-, -7-Aktivität von MDA-MB-231-Zellen. Zellen wurden mit 250 nM MBQ-167 24 h behandelt und gleiche Anzahlen getrennter angehefteter und abgelöster Zellen wurden lysiert und für Caspase 3/7-Tests verwendet. Caspase-3-, -7-Aktivität relativ zu gleicher Anzahl angehefteter Zellen aus Kontrollzellen ist gezeigt. N=3, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar. 5D, die Wirkung von MBQ-167 auf mitochondriale Regulierung von Apoptose. Die Wirkung von MBQ-167 auf die Expression der pro-Überlebens-Proteine Bcl-2, Bcl-xL und Mcl-1 in MDA-Mb-231-Zellen nach 24 h Behandlung. 5D-1 Linke Tafel, repräsentativer Western-Blot 5D-2; Rechte Tafel, Quantifizierung der intergierten Dichte positiver Banden mittels Bild J. N=3, * = P < 0,05, *** = P < 0,001, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar.
    • 6 (A-E). Wirksamkeit in vivo von MBQ-167 in Brustkrebs vom Typ HER2. Mamma-Fettpolster-Tumore wurden in Nude-Mäuse durch Inokulieren von 5 X 105 GFP-HER2-BM-Zellen etabliert. Nach einer Woche wurden die Mäuse 3 X pro Woche mit Vehikelkontrolle oder 1,0 oder 10,0 mg/kg Körpergewicht (BW) MBQ-167 durch i.p. Injektion behandelt. 6A-1, Linke Tafel, repräsentative entfernte Tumore nach 0, 1, 10 mg/kg BW MBQ-167. 6A-2 Rechte Tafel, durchschnittliches relatives Tumorwachstum aus in situ Fluoreszenzbildern bis 65 Tage nach 0, 1,0 oder 10,0 mg/kg BW MBQ-167 (3X pro Woche) (N=6). 6B, Repräsentative Fluoreszenzmikrographien von Lungen, Milzen und Nieren aus Vehikel- oder MBQ-167-behandelten Mäusen nach Nekropsie. 6C, Mausgewichte aus Tagen 1-65. 6D, E, Leberenzymaktivitäten nach MBQ-167-Behandlung. Nach Nekropsie wurden die Lebern geerntet, lysiert und 6D ALP-Aktivitäts- oder 6E ALT-Aktivitätstests unterzogen. N=4, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar.
    • 7. Die Wirkung von MBQ-167 auf die Rac-Aktivität metastatischer Krebszellen, die ein konstitutiv aktives Rac (Rac1G12V) exprimieren. Menschliche metastatische MDA-MB-435-Krebszellen, die Wildtyp-Rac1 (WT) oder konstitutiv aus aktiviertes Rac1(G12V) exprimierten, wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt. Die angehefteten (A) und abgelösten (D) Zellpopulationen wurden gewonnen und gleiche Mengen von Proteinen Pulldown-Assays mittels der p21-Bindedomäne von PAK unterzogen, um das GTP-gebundene Rac zu isolieren. Zelllysate wurden mit Antikörpern gegen Rac Western-blottiert. Ergebnisse aus positiven banden in Western-Blots wurden mittels Bild J quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen, dass obwohl MBQ-167 die Rac-Aktivität abgelöster Zellen, die Wildtyp-Rac exprimierten, signifikant hemmte, diese Hemmung in Zellen, die eine konstitutiv aktive GTP-gebundene Form von Rac1 exprimierten, nicht beobachtet wurde.
    • 8(A, B). Die Wirkung von MBQ-167 auf Überleben und PAK -Aktivität in NCI-N87-Magenkrebszellen. 8A. Gleiche Anzahlen von NCI-N87-Zellen entweder in Vehikelkontroll- oder Behandlungsgruppen wurden 24 h mit 0 oder 250 nM MBQ-167 behandelt. Die Zellen wurden MTT-Tests auf Lebensfähigkeit unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass 250 nM MBQ-167 über 24 h NCI-N87-Zelllebensfähigkeit um 50% reduziert. 8B. Gleiche Anzahlen mit 0, 250 oder 500 nM MBQ-167 behandelter Zellen wurden lysiert und auf phsopho (P)-PAK1T432 (aktive Form) oder Gesamt-PAK1, oder phospho (P)-PAK4S474 (aktive Form) oder Gesamt-PAK4 Western-blottiert. Der gezeigte repräsentative Western-Blots demonstriert, dass MBQ-167 sowohl PAK1- als auch PAK4-Aktivität in den NCI-N87-Magenkrebszellen hemmt.
    • 9. Phänotyp menschlicher Krebszellen nach MBQ-167-Behandlung. Zelllinien von dreifach negativem Brustkrebs (MDA-MB-468), aggressivem Bauchspeicheldrüsenkrebs (Mia PaCa-2), Eierstockkrebs (SKVO3), Magenkarzinom (AGS und NCI-N87) und eine Neuroblastom-Zelllinie (SH-SY5Y) wurden 24 h mit 0, 250 oder 500 nM MBQ-167 behandelt. Repräsentative Hellfeldbilder sind für jede Zelllinie gezeigt.
    • 10 (A-C). Wirkung von MBQ-167 auf Rho-GTPase-Aktivität in GFP-HER2-BM-Zellen. GFP-HER2-BM-Zellen wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt. Die angehefteten und abgelösten Zellpopulationen wurden gewonnen und gleiche Mengen von Proteinen G-LISA-Tests auf 10A Rac oder Cdc42 10B, 10C unterzogen. Menschliche GFP-HER2-BM-Brutskrebszellen wurden 24 h mit 0 oder MBQ-167 behandelt wurden lysiert (sowohl angeheftete als auch abgelöste Zellen) und mit der Rho-Bindedomäne von Rhotekin inkubiert, um aktives Rho zu isolieren. Zelllysate wurden mit Antikörpern gegen Rac, Cdc42 oder Rho Western-blottiert. Ergebnisse aus positiven Banden in Western-Blots wurden mittels Bild J quantifiziert. Die integrierte Dichte für aktives Rho wurde durch das Gesamt-Rho aus denselben Zelllysaten geteilt. Rac-, Cdc42- oder Rho-Aktivität für jede MBQ-167-Behandlung wurde für jedes Experiment durch die Vehikelkontrollen geteilt, um die relative Aktivität zu erhalten.
    • 11. MBQ-167 beeinträchtigt nicht die PAK -Aktivität in MCF-7-Zellen. MCF-7-Zellen wurden 24 h mit 0 oder 250 nM MBQ-167 behandelt und die angehefteten (A) und abgelösten (D) Zellen wurden getrennt gewonnen. Gleiche Mengen von Protein wurden auf SDS-PAGE laufen gelassen und mit einem phospho-PAK (T423)- oder Gesamt-PAK-Antikörper Western-blottiert. Repräsentativer Western (N=2) ist gezeigt.
    • 12 (A, B). Wirkung von MBQ-167 auf STAT3-Aktivierung und Zellmigration in metastatischen GFP-HER2-BM-Zellen. 12A, Die Wirkung von MBQ-167 auf PAK1- und PAK2-Phosphorylierung wie durch Western-Blots auf STAT3- und p-STAT3 (Y705)-Spiegel in MDA-MB-231- und GFP-HER2-BM-Zellen nach 24 Stunden Behandlung in 0 oder 250 nM MBQ-167 gemessen. Daten für getrennte angeheftete (A) und abgelöste (D) Populationen sind gezeigt. Repräsentative Western-Blots (N=2). 12B, Die Wirkung von MBQ-167 auf GFP-HER2-BM-Zellmigration wie durch einen Transwell-Test gemessen. Die Graphen zeigen Quantifizierung von 20 mikroskopischen Feldern pro Behandlung pro Experiment von PI-gefärbten Zellen, die durch Poren mit 8 Mikron Durchmesser in 6 h auf die Unterseite der Membran migrierten, N=3, * = P < 0,05, Fehlerbalken stellen ± S.E.M. dar.
    • 13 (A, B). MAPK- und Akt-Signalgebung in MDA-MB-231-Zellen. MDA-MB-231-Zellen wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt und gleiche Mengen Protein aus Lysaten angehefteter und abgelöster Zellen wurden auf 13A phospho (aktives) p-38 und p-42/44 (ERK) MAPKs oder 13B Gesamt- und phospho (s-473)-Akt Western-blottiert. Repräsentative Western-Blots von N=3 sind gezeigt.
    • 14. Annexin V-Färbung in Antwort auf MBQ-167. Auf Deckgläschen wachsende GFP-MDA-MB-231-Zellen wurden 6 h mit Vehikel oder MBQ-167 bei 240 oder 500 nM behandelt. Zellen wurden in Formaldehyd fixiert und mit Annexin V-Cy3-18 gefärbt. Repräsentative Fluoreszenzmikrographien sind gezeigt. Pfeil zeigt rot fluoreszierende Annexin V-Färbung an den Membranen apoptotischer Zellen an.
    • 15 (A-D). Wirkung von MBQ-167 auf Knospenpolarität in Saccharomyces cerevisiae. Ein haploides Derivat des Hefestamms BY4741, der den tTa-Transaktivator unter der Kontrolle des CMV-Promotors exprimierte, wurde verwendet, um in den Cdc42-Promotor zu integrieren, um die essentielle Cdc42-Genexpression auszuknocken. 15A Oben links, repräsentative Mikrographie des Knospungsphänotyps in der Abwesenheit von Doxycyclin. 15B Oben rechts, repräsentative Mikrographie desselben Zellstamms nach 24 h in 25 µM MBQ-167. 15C Unten links, repräsentative Mikrographie von Zellen nach 10 µg/ml Doxycyclin, um Cdc42 auszuknocken. 15D Unten rechts, repräsentative Mikrographie von Zellen mit sowohl Cdc42-Knockdown als auch 25 µM MBQ-167.
    • 16. Wirksamkeit in vivo von MBQ-167 in dreifach negativem Brustkrebs. Mamma-Fettpolster-Tumore wurden in Mäusen mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID) unter Verwendung von mit grün fluoreszierendem Protein (GFP) markierten MDA-MB-231-Brustkrebszellen etabliert. Eine Woche später wurden die Mäuse mit 0, 1,0, 5,0 oder 10,0 mg/kg Körpergewicht (BW) MBQ-167 durch intraperitoneale Injektionen 3X die Woche über 50 Tage behandelt. Mammatumorwachstum wurde aus GFP-Bildanalyse quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen ein durchschnittliches Tumorwachstum nach 50 Tagen als eine Funktion der Größe jedes Tumors an Tag 01. Vehikelkontrolle (0 mg/kg BW MBQ-167) wird als 100% Tumorwachstum dargestellt. Verabreichung von 1,0 mg/kg BW Behandlung führte zu 95% Hemmung von Tumorwachstum und die Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 führte zu 100% Hemmung von Tumorwachstum in 50 Tagen.
  • AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG
  • Zwei Verbindungen, die Rho-GTPasen, Rac und Cdc42, hemmen, wurden auch als Medikamentenziele verwendet. NSC23766 war der erste Rac-Inhibitor, von dem gezeigt wurde, dass er die Wechselwirkung von Rac mit den GEFs Trio und Triam 1 blockierte; jedoch begrenzen seine hohen wirksamen Konzentrationen (IC50>75 µM) seinen therapeutischen Einsatz. Eine Auswahl mutmaßlicher Rac- und Cdc42-Inhibitoren führte zur Identifizierung von EHop-16. EHop-16 blockiert die Wechselwirkung des GEF Vav2 mit Rac und hemmt Rac-Aktivität mit einem IC50 von ~1,1 µM, was es ~100X wirksamer macht als NSC23766. EHop-16 hemmt auch Ccd42-Aktivität bei Konzentrationen von ≥10 µM, ohne Rho-Aktivität zu beeinträchtigen.
  • Bei 25 mg/kg Körpergewicht (BW) verringert EHop-16 in Nude-Mäusen Mammatumorwachstum, Metastasierung und Angiogenese ohne erkennbare Toxizität. Die pharmakokinetische Analyse von EHop-16 nach oraler oder intraperitonealer (i.p.) Verabreichung zeigte eine Bioverfügbarkeit von ~30% mit einer durchschnittlichen Halbwertszeit von ~4,5h, was sein Potenzial als ein Krebstherapeutikum in Brustkrebs und anschließend in anderen Krebstypen anzeigt.
  • Obwohl andere Kleinmolekül-Inhibitoren, wie etwa das NSC23766-Derivat Aza-1 (hemmt sowohl Rac als auch Cdc42) und CID2950007/ML141 (selektiv für Cdc42), gegenwärtig verfügbar sind, sind sie im mikromolaren Bereich wirksam. Ein Ziel war es, einen Rac/Cdc42-Inhibitor mit verbesserter Aktivität zu entwickeln führte zur Identifizierung von MBQ-167. Verglichen mit EHop-16 ist MBQ-167 ein 10X wirksamerer Inhibitor von Rac und ein 100X wirksamerer Inhibitor von Cdc42, was zu einer verstärkten Hemmung von Krebsmalignität führte.
  • Substituenten A und B können alternativ ein Ringsystem bilden:
    Figure DE112017006187T5_0039
    Wobei:
    • R5 bei jedem Auftreten unabhängig Wasserstoff, Halide, Hydroxyl, Cyano, C1-6-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, C1-6-Haloalkyl, Nitro, Amino, usw., ist.
  • Eine Verbindung gemäß Formel I umfasst eine oder mehr Verbindungen ausgewählt aus den Verbindungen in TABELLE I.
  • Es gibt ein Verfahren zur Hemmung von Rac- und Cdc42-Aktivität in einer Zelle durch Behandlung mit Verbindung I, wobei R1, R2, R3, R4, R5, Ra, Rb und A und B wie oben definiert sind.
  • Es gibt ein Verfahren zur Hemmung von Rac- und Cdc42-Aktivität in einem Patienten mit Krebs oder hyperproliferativer Störung durch Behandlung mit Verbindung I, wobei R1, R2, R3, R4, R5, Ra, Rb und A und B wie oben definiert sind.
  • Verbindungen und Herstellung
  • Die 1,5-disubstituierten 1,2,3-Triazole können durch ein Verfahren mit zwei Schritten gemäß Schema A hergestellt werden, umfassend Schritt 1) Bildung des Azids aus dem entsprechenden Amin; und Schritt 2) Bildung des 1,5-Triazols durch Reagieren des Azids mit einem Alkin unter einer der unten beschriebenen Bedingungen.
    Figure DE112017006187T5_0040
  • Schritt 1 kann durch Kontaktieren einer Aufschlämmung des geeigneten aromatischen Amins in Wasser mit konzentrierter Schwefelsäure durchgeführt werden, gefolgt von der tropfenweisen Zugabe einer wässrigen Lösung von Natriumnitrit. Nach Abschluss der Bildung des intermediären Diazo-Derivats wird eine wässrige Lösung von Natriumazid zugegeben, was zum Azidprodukt von Schritt 1 führt.
  • Schritt 2 kann unter verschiedenen Bedingungen durchgeführt werden, die selektiv die 1,5-substituierten 1,2,3-Triazolprodukte (im Gegensatz zu dem häufiger hergestellten 1,4-substituierten 1,2,3-Triazolprodukt) liefern. Die am häufigsten verwendeten Verfahren in der Literatur umfassen:
    • a) Kontaktieren des primären Alkins mit einem Grignard-Reagens wie etwa Ethylmagnesiumbromid, was zum Alkinylmagnesiumbromid führt. Anschließendes Reagieren des Alkinylmagnesiumbromid-Produkts mit dem Azid aus Schritt 1 ergibt selektiv das 1,5-disubstituierte 1,2,3-Triazol
    • b) Kontaktieren des primären Alkins mit dem Azid in der Gegenwart von Pentamethylcyclopentadienyl-Rutheniumchlorid führt regioselektiv zum 1,5-disubstituierten 1,2,3-Triazol
    • c) Kontaktieren des primären Alkins mit dem Azid in der Gegenwart von Diethylzink und N-Methylimidazol.
  • Viele der aromatischen Amin- und Alkin-Startmaterialien sind kommerziell erhältlich oder könnten über veröffentlichte Verfahren hergestellt werden. Alternativ können Modifikationen eingeführt werden, nachdem die Ringschlussreaktion durchgeführt wurde. In manchen Fällen müssen Schutzgruppenstrategien angewendet werden.
  • Verbindungen sind offenbart, die RhoGTPasen hemmen und daher zur Hemmung hyperproliferativer und neoplastischer Krankheiten nützlich sind. Genauer hemmen die Verbindungen die GTPasen Rac und Cdc42, die in Signalwegen in Krebs und Metastasen überaktiv oder überexprimiert sind. Diese Verbindungen sind nützlich zur Behandlung von Krebs und hyperproliferativen Krankheiten.
  • Eine Reihe von 1,5-disubstituierten 1,2,3-Triazolen als neue Inhibitoren von Rac und Cdc42. Ein spezifisches Beispiel (MBQ-167) (vormals EHop-167) wurde in ausführlichem Detail untersucht.
  • MBQ-167 hemmt Rac- und Cdc42-Aktivierung in metastatischen Krebszellen
  • MDA-MB-231- und GFP-HER2-BM-Zellen wurden 24 h mit Vehikel oder MBQ-167 behandelt, und die abgelösten und angehefteten Zellen (~50% für jede Population) wurden sofort gewonnen und lysiert. Gleiche Proteinmengen wurden Aktivierungstests für Rac oder Cdc42 unterzogen. Nach 24 h Behandlung mit 250 nM MBQ-167 zeigte die angeheftete Population von MDA-MB-231-Zellen eine Verringerung der Rac-Aktivierung um ~25%, während die abgelösten Zellen mit einer Abnahme von ~75% stärker reagierten (3A). Zu früheren Zeitpunkten (6 h) induzierte die Behandlung mit 250 oder 500 nm MBQ-167 10-20% Hemmung der Rac-Aktivität in der angehefteten Zellpopulation, während die abgelöste Population ~40-50% Hemmung zeigte. Ähnlich wurde Cdc42-Aktivität nach 250 nM MBQ-167 über 24 h in den angehefteten Zellen um 60% und in den abgelösten MDA-MB-231-Zellen um 78% gehemmt (3C). Diese Ergebnisse zeigen, dass sowohl Rac- als auch Cdc42-Aktivität gehemmt werden, während die Zellen noch am Substrat haften, aber die stärker reagierenden Zellen zuerst abgelöst werden. Die Inkubation von MDA-MB-231-Zellen über 24 h mit 500 nM MBQ-167 führte zu ~90% Ablösung der Zellen und einer parallelen Abnahme der Rac- und Cdc42-Aktivitäten, was zeigte, dass die Mehrheit der Zellen auf MBQ-167 ansprach. Ähnlich reagierte die stark metastatische Brustkrebszelllinie GFP-HER2-BM auf MBQ-167 durch Hemmung der Rac- und Cdc42-Aktivitäten in den abgelösten Zellpopulationen signifikant (10A, B). Die nicht-metastatische, mehr epitheliale MCF-7-Zelllinie, die auf MBQ-167 nicht durch den Zellablösungsphänotyp reagierte, war auch in Rac-Hemmung gegenüber MBQ-167-Behandlung unempfindlich (Ergänzende Tabelle 2). Dies kann auf Unterschieden in den Rac- und Cdc42-GEFs beruhen, die in metastatischen Brustkrebszelllinien (MDA-MB-231), verglichen mit der weniger metastatischen, mehr epithelialen MCF-7-Zelllinie, exprimiert und aktiviert werden.
  • Als nächstes wurden als ein Maß für die Spezifität von MBQ-167 als ein Rac- /Cdc42-Inhibitor die IC50s für Rac- und Cdc42-Aktivierung nach 24 h in MBQ-167 unter Verwendung kombinierter angehefteter und abgelöster Populationen bestimmt. Die Ergebnisse zeigen, dass MBQ-167 Rac 1/2/3-Aktivität in den MDA-MB-231-Zellen mit einem IC50 von 103 nM und Cdc42-Aktivität mit einem IC50 von 78 nM hemmt (3D, E). Da die IC50 für Rac-Hemmung durch EHop-016 1,1 µM beträgt und Cdc42-Hemmung ~8 µM (16) ist, ist MBQ-167 10X wirksamer als EHop-016 bei Rac-Hemmung und 100X wirksamer bei Cdc42-Hemmung.
  • Um indirekt die Spezifität von MBQ-167 für die Hemmung der Rac-Aktivierung durch GEFs zu bestimmen, wurde die Rac-Aktivität aus zuvor charakterisierten MDA-MB-435Br-Zellen, die einen Kontrollvektor oder konstitutiv aktives (Rac1G12V) exprimieren, bestimmt. Jedoch beeinflusste MBQ-167 nicht die Rac-Aktivität dieser Zelllinie, die ein Rac1(G12V) exprimierte (7), was darauf hinweist, dass die konstitutive Aktivierung von Rac1 die Zellen gegenüber einer Hemmung durch MBQ-167 desensibilisiert. Darüber hinaus beeinflusste, wie durch Aktivierungstests für Rac, Cdc42 und Rho aus angehefteten und abgelösten Zellpopulationen gezeigt, MBQ-167 die verwandte GTPase-Rho-Aktivierung in beiden Zellpopulationen von MDA-MB-231- und metastatischen GFP-HER2-BM Krebszellen nicht (Tabelle 1, 10).
  • MBQ-167 hemmt Rac und Cdc42 nachgelagerte Effektoren
  • Um die Wirkung von MBQ-167 auf die Rac-/Cdc42-Signalgebung zu untersuchen, wurde seine Wirkung auf den hauptsächlichen Rac/Cdc42 nachgelagerten Effektor PAK untersucht. Der Phosphorylierungsstatus mehrerer PAK -Reste wurde durch Western-Blot als Maß für seine Aktivität analysiert. Bei 250 nM hemmte 24 h Behandlung mit MBQ-167 PAK1- und PAK2-Phosphorylierung an den Resten T423/T402 und S199/S192 in der abgelösten Population von MDA-MB-231-Zellen. Mit Ausnahme von PAK 1T123 war die Phosphorylierung all dieser Reste in der angehefteten Population ebenfalls signifikant verringert. Obwohl PAK 1T423-Phosphorylierung in den angehefteten Zellen nicht gehemmt wurde, zeigt die Reduktion an den homologen PAK2-Phosphorylierungsstellen eine bevorzugte Hemmung von PAK2 in den angehefteten Zellen (4A, B). Interessanterweise induzierte MBQ-167 einen dramatischen Anstieg der Phosphorylierung von PAK 1S144 (4A). Die Gesamt-PAK-Aktivität wird jedoch durch MBQ-167 gehemmt, da die aktivierende Phosphorylierung (Y507/T508) des direkten PAK-Substrats LIM-Kinase (LIMK) und die inaktivierende Phosphorylierung (S3) von Cofilin (Aktin-Depolymerisationsfaktor), einem nachgelagerten Effektor von LIMK, sich beide nach MBQ-167-Behandlung verringerten. Die Abnahme der Cofilin-Phosphorylierung war nach 12 h nach 250 nM MBQ-167 offensichtlich (4C), was die Aktivierung von Cofilin anzeigt, die für die beobachtete Umstrukturierung des Actin-Zytoskeletts (2B) verantwortlich ist. Darüber hinaus beeinflusste MBQ-167 in der MCF7-Zelllinie, die auf MBQ-167 nicht durch Zellablösung oder Hemmung der Rac-Aktivierung reagierte, auch die PAK -Aktivität nicht. Ähnlich hemmte MBQ-167 in der menschlichen metastatischen NCI-N87-Magenkrebszelllinie die Lebensfähigkeit und die Aktivität von PAK -Isoformen PAK1 und PAK4 (8B), die mit Magenkrebs-Malignität in Zusammenhang gebracht wurde.
  • Es wurde auch gezeigt, dass Rac-Aktivität die Aktivität des Transkriptionsfaktors STAT3 direkt stimuliert (30). Wie in 4D und 12A ersichtlich, verringerte MBQ-167 die STAT3-Aktivität nach 24 h Exposition sowohl in der angehefteten als auch der abgelösten Population von MDA-MB-231- und GFP-HER2-BM-Zellen. MBQ-167 beeinflusste jedoch nicht die Aktivitäten von mitogenaktivierten Proteinkinasen (MAPK), weder von p38-MAPK noch der p42/44-MAPK, ebensowenig wie Akt-Aktivitäten, wie durch Western-Blot mit phosphospezifischen Antikörpern gezeigt (13).
  • MBQ-167 beeinflusst Krebszellpolarität
  • Menschliche Brustkrebszellen wurden nach MBQ-167-Behandlung durch Hellfeldmikroskopie visualisiert. Bei ≥100 nM, beginnend bei sechs Stunden, induzierte MBQ-167 einen Verlust der Polarität in metastatischen Brustkrebszellen. Behandlung mit 500 nM MBQ-167 über 24 h führte zu ~95% Zellabrundung und Ablösung von dem Substrat in metastatischen MDA-MB-231-Zellen (2A oberes Feld). Darüber hinaus induzierte MBQ-167 diesen Phänotyp in mehreren mesenchymalen Krebszelltypen einschließlich GFP-HER2-BM, MDA-MB-468 und menschlichen Hs578t-Brustkrebszellen, sowie Mia-PaCa-2-Bauchspeicheldrüsenkrebszellen, SKOV3-Eierstockkrebszellen, AGS- und NCI-N87-Magenkrebszellen und SH-SY5Y-Neuroblastomzellen (9). Andererseits waren Nichtkrebs-MCF10A-Mammaepithelzellen und epitheliale MCF-7-Brustkrebszellen resistent gegen MBQ-167 und blieben polarisiert und aneinander und das Substrat angeheftet (2A, unteres Feld). Dies deutet darauf hin, dass MBQ-167 nur Krebszelllinien beeinflusst, die den epithelial-mesenchymalen (EMT) Übergang durchlaufen haben, und Nichtkrebs-Epithelzelllinien oder epitheliale Krebszelllinien nicht beeinflusst.
  • Um die Wirkung von MBQ-167 auf MDA-MB-231-Zellen weiter zu untersuchen, wurde Immunofluoreszenzmikroskopie nach 0-500 nM MBQ-167 durchgeführt, um Aktindynamik (durch Rhodaminphalloidin) und fokale Adhäsionen (durch anti-p-Tyrosin und anti-Vinculin) nachzuweisen. MBQ-167 ordnete das Aktin-Zytoskelett und fokale Adhäsionen um, was zu einem Verlust von Zellpolarität und Bindung an die extrazelluläre Matrix (ECM) führte, mit einer deutlichen Verringerung sowohl von Rac-regulierten Lamellipodien/ Invadopodien als auch von Cdc42-induzierten Mikrospikes und Filopodien (II). Darüber hinaus wurden in MBQ-167-behandelten Zellen die fokalen Adhäsionen von der Zellkante verringert und vom Zytoskelett zum Zentrum der abgerundeten sich ablösenden Zellen umgeordnet.
  • Daher hemmt MBQ-167 Zellpolarisierung, Ausdehnung von Lamellipodien und Fliopodien und Bildung fokaler Adhäsionen an der führenden Zellkante (2B, C). Wachstum von Hefezellen, die nur Cdc42 und kein Rac exprimieren, wurde durch MBQ-167 auch gehemmt, mit einem charakteristischen Verlust an Knospenpolarität (15).
  • MBQ-167 hemmt Zellmigration und Mammosphärenbildung
  • Rac/Cdc42 und sein nachgelagerter Effektor PAK regulieren direkt Zellmigration. Die Wirkung von MBQ-167 auf MDA-MB-231-Zellmigration wurde untersucht. Die zwei Zellpopulationen (abgelöst und angeheftet) wurden nach 18 h in MBQ-167 gewonnen und gleiche Anzahlen von Zellen (Vehikel-behandelte und MBQ-167-behandelte angeheftete und abgelöste Populationen) wurden für einen Transwell-Test über 6 h verwendet. Diese kurze Inkubationszeit ist nicht ausreichend für eine Zellteilung von MDA-MB-231 (Verdopplungszeit von ~38 Stunden) oder eine Hemmung der Zelllebensfähigkeit (Suppl. 8B, C). Daher misst der Test nur die Effizienz der Zellmigration.
  • MBQ-167-Behandlung verringerte die gerichtete Migration der angehefteten MDA-MB-231-Zellpopulation bei 250 und 500 nM um ~60-70%. In der abgelösten Population hemmte MBQ-167 (250 und 500 nM) die Zellmigration in statistisch signifikanter Weise um ~90% (4E). In der stärker metastatischen GFP-HER2-BM-Zellinie hemmten 250 und 500 nM MBQ-167 die Zellmigration sowohl in den angehefteten als auch den abgelösten Zellen um 80-90%. Diese Ergebnisse wurden in einem Wundheilungstest bestätigt, in dem 250 und 500 nM MBQ-167-Behandlung über 24 h zu statistisch signifikanter ~80 bzw. 90% Hemmung des Wundverschlusses führten (4F). STAT3- und Rac-Aktivitäten wurden mit erhöhten Stammzell-ähnlichen Eigenschaften von Brustkrebs und Therapieresistenz in Verbindung gebracht. Die Fähigkeit von MBQ-167, Krebs-Stammzellenpopulationen anzusprechen, unter Verwendung eines Mammosphären-Bildungstests. Zugabe von MBQ-167 einmal über vier Tage verringerte die Mammosphärenbildungs-Effizienz von MDA-MB-231-Zellen nach 24 h Behandlung mit MBQ-167 um ~50% (4F).
  • MBQ-167 hemmt Zellüberleben
  • MBQ-167 induziert einen Phänotyp, der durch Zellabrundung, Verlust von Lamellipodien und schließlich Ablösung vom Oberflächensubstrat gekennzeichnet ist (2). Daher testeten wir das Potenzial von MBQ-167, Anoikis zu induzieren: Apoptose auf Grund der Auflösung von Integrin-vermittelten Zellen-ECM-VErbindungen. Es sollte betont werden, dass die metastatischen Krebszellen, die sich als Reaktion auf MBQ-167 nach 24 h Behandlung ablösen, lebensfähig sind, was durch den Ausschluss von Trypanblau aus lebenden Zellen gezeigt wird (Suppl. 8A). Diese abgelösten Zellen haben auch die Fähigkeit zum erneuten Wachstum, wenn sie ohne MBQ-167 erneut plattiert werden (Daten nicht gezeigt). Wie in ergänzender 8B gezeigt, sind MDA-MB-231-Zellen bei Konzentrationen ≤ 300 nM für 24 h 100% lebensfähig. Bei 24 h MBQ-167-Behandlung sind ~75% der MDA-MB-231-, GFP-HER2-BM- und MCF-7-Brustkrebszellen sowie der MCF-10-Mammaepithelzellen selbst bei 6 µM MBQ-167 lebensfähig. Verlängerte Behandlung über 48, 96 und 120 h mit MBQ-167 führt zu Zellablösung vom Substrat und Verlust der Zelllebensfähigkeit.
  • 5A zeigt einen MTT-Test nach MBQ-167-Behandlung über 120 h für die metastatischen Krebszellen MDA-MB-231 und GFP-HER2-BM und die Nichtkrebs-Mammaepithelzellen MCF10A, wenn wir für alle Zelltypen ~100% Zelltod bei hohen Konzentrationen (1000 nM) von MBQ-167 erhielten. Dieser Test umfasst sowohl abgelöste als auch angeheftete Zellen im Falle der metastatischen Krebszellen. MBQ-167 verringerte nach 120 h die Lebensfähigkeit von MDA-MB-231- und GFP-HER2-BM-Zellen mit einem GI50 von 110 nM bzw. 150 nM. Jedoch war der GI50 für die MCF10A-Epithelzellen bei 350 nM MBQ-167 ~3X höher (5A). Es sollte angemerkt werden, dass MBQ-167 Rac- und Cdc42-Aktivitäten nach 24 h mit IC50s im Bereich von ~100 nM hemmt, wenn die MDA-MB-231-, GFP-HER2-BM-, MCF-7- und MCF-10-Zellen immer noch lebensfähig sind. Als nächstes wurde durch Durchflusszytometrie bestimmt, ob die Wirkung von MBQ-167 auf die Lebensfähigkeit der Zellen auf Zellzyklusstillstand zurückzuführen ist. Wie in 5B gezeigt, blockierte MBQ-167 signifikant den Zellzyklus von MDA-MB-231-Zellen in der G2/M-Phase.
  • Um zu beurteilen, ob der Zellzyklusstillstand mit einem Anstieg der Apoptose einherging, war die Aktivität der Effektorcaspasen3/7 Gesamtzellpopulationen (sowohl angeheftet als auch abgelöst) bestimmt. Ein dosisabhängiger Anstieg für Caspase-3/7-Aktivität wurde sowohl in MDA-MB-231- als auch GFP-HER2-BM-Zellinien nach 24 h in MBQ-167 beobachtet (5C, linkes Feld). Um zu bestimmen, ob MBQ-167 Anoikis induziert, wurden die relativen Spiegel an Caspase-3/7-Aktivitäten in den angehefteten und abgelösten MDA-MB-231-Zellpopulationen nach 24 h bei 250 nM MBQ-167 analysiert. Es gab einen signifikanten ~15-fachen Anstieg der Caspase-3/7-Aktivität in der abgelösten Population verglichen mit der angehefteten Population von MDA-MB-231-Zellen (5C, rechtes Feld), die Wirkung von MBQ-167 auf Apoptose wurde bestätigt durch Zeigen erhöhter Annexin V-Färbung in MDA-MB-231-Zellen nach 250 oder 500 nM MBQ-167 (14). In 500 nM MBQ-167 zeigten die Zellen auch das klassische Blebbing, das mit Apoptose assoziiert ist. Um schließlich die Wirkung von MBQ-167 auf mitochondriale Apoptose zu erforschen, wurde die Expression der pro-Überlebensproteine Bcl-2, Bcl-xL und Mcl-1 durch Western-Blot untersucht. Eine signifikante Abnahme wurde bei der Expression von pro-Überlebensproteinen nach 24 h mit 250 nM MBQ-167 gefunden (5D).
  • MBQ-167 hemmt Mammatumorprogression von Brustkrebs vom Typ HER2 in immunkompromittierten Mäusen
  • Um die Wirkung von MBQ-167 auf Mammatumorprogression zu untersuchen, wurden Nude-Mäuse verwendet, um Mamma-Fettpolster-Tumore aus GFP-HER2-BM-Zellen zu etablieren. Eine Woche nach der Etablierung des Mammatumors wurden die Mäuse 3X die Woche über 65 Tage mit 0,1 oder 10 mg/kg BW MBQ-167 durch i.p. behandelt. Die Vehikelbehandelten Mäuse zeigten einen linearen Anstieg des Tumorwachstums, während MBQ-167-behandelte Mäuse eine statistisch signifikante Verringerung im Tumorwachstums zeigten ( 6A). Bei der Tötung führten 1,0 mg/kg BW MBQ-167 zu ~80% Verringerung im Tumorwachstum und die Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 zu ~95% Verringerung im Tumorwachstum. Da EHop-016 nur ~40% Verringerung im Tumorwachstum bei 10 mg/kg BW bewirkt, ist MBQ-167 10X wirksamer als EHop-016 (6A).
  • Die optimale % Veränderung der Tumorgröße, die das individuelle Tumorwachstum für jede Behandlung berücksichtigt, zeigte, dass die Tumore von Mäusen, die mit 1 mg/kg BW MBQ-167 behandelt wurden, eine Wachstumsveränderung von 58% im Vergleich zu Kontrollen (100%) aufwiesen, während Tumore von Mäusen, die mit 10 mg/kg BW MBQ-167 behandelt wurden, nur eine Zunahme der Tumorgröße um 9% zeigten (Suppl. Tabelle 3). Diese Daten zeigen, dass es, obwohl es während der Studiendauer keine Tumorregression gab, eine drastische Verringerung des Tumorwachstum in den mit 10 mg/kg BW MBQ-167 behandelten Mäusen gab.
  • Wenn die Tumorwachstumsverzögerung quantifiziert wurde, verdoppelten sich die Kontrollmäuse in 8 Tagen und die MBQ-167-behandelten Mäuse zeigten ähnliche Verdopplungszeiten für beide Behandlungen (10 und 11 Tage). Jedoch kam es bei der zweiten Verdoppelung (22) zu einer Verzögerung des Tumorwachstums der MBQ-167-behandelten Mäuse, wobei die Tumore von Kontroll-behandelten Mäusen 22 in 14,5 Tagen erreichten, während die Tumoren von mit 1 und 10 mg/kg BW behandelten Mäusen einander ähnlich waren und 22 in 30 Tagen erreichten. Bei der 3. Verdopplung gab es auch eine Diskrepanz zwischen den beiden MBQ-167-Behandlungen, wobei die Tumore von Kontrollmäusen 23 in 27 Tagen erreichten, die mit 1 mg/kg BW MBQ-167 behandelten Tumore 57 Tage brauchten, um dieselbe Größe zu erreichen, und die mit 10 mg/kg BW behandelten Tumore 23 beim Tumorwachstum nie erreichten. Ähnlich erreichten nur die Kontrolltumore 24 in 33 Tagen, während die Tumore von beiden MBQ-167-behandelten (1 und 10 mg/kg BW) Mäusen diese Größe niemals erreichten. Dieses Ergebnis zeigt eine signifikante Hemmung des Tumorwachstums, die nach 24 Tagen MBQ-167-Behandlung eingeleitet wurde (6A). Diese drastische Verringerung des Tumorwachstums nach MBQ-167-Behandlung führte zu keinen Metastasen in allen getesteten Organen (6B).
  • MBQ-167 hemmt Mammatumorprogression von dreifach negativem Brustkrebs in immunkompromittierten Mäusen. Mamma-Fettpolster-Tumore wurden in Mäusen mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID) unter Verwendung von mit grün fluoreszierendem Protein (GFP) markierten MDA-MB-231-Brustkrebszellen etabliert. Eine Woche später wurden die Mäuse durch intraperitoneale Injektionen 3X die Woche über 50 Tage mit 0, 1,0, 5,0 oder 10,0 mg/kg Körpergewicht (BW) MBQ-167 behandelt. Mammatumorwachstum wurde aus der GFP-Bildanalyse quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen durchschnittliches Tumorwachstum in 50 Tagen als Funktion der Größe jedes Tumors am Tag 01. Die Vehikelkontrolle (0 mg/kg BW MBQ-167) wird als 100% Tumorwachstum dargestellt. Verabreichung von 1,0 mg/kg BW MBQ-167 führte zu 90% Hemmung des Tumorwachstums, Behandlung mit 5,0 mg/kg BW führte zu 95% Hemmung des Tumorwachstums und Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 führte zu 100% Hemmung des Tumorwachstums in 50 Tagen ( 16).
  • MBQ-167 ist nicht toxisch für immunkompromittierte Mäuse
  • Die Mäuse aus dieser Studie wurden auch einmal pro Woche auf potentielle Toxizität untersucht. Die mit Vehikel oder MBQ-167 behandelten Mäuse zeigten während der 65-Tage-Studie keinen signifikanten Gewichtsverlust oder phänotypische Veränderungen ( 6C). Bei der Nekropsie wurden die Lebern geerntet, lysiert und Leberenzym-Assays als Test auf mögliche toxische Wirkungen unterzogen. 6D zeigt, dass MBQ-167 die ALP-Aktivität in den Lebern von MBQ-167-behandelten Nude-Mäusen (1 und 10 mg/kg BW) nicht beeinflusst. Die ALT-Spiegel in der Leber waren jedoch bei Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 signifikant erhöht, was eine mögliche Verstoffwechselung von MBQ-167 bei höheren Konzentrationen andeutet (6E).
  • Moleküle, die als Inhibitoren der Ras-homologen (Rho-) Familie von kleinen GTPasen (z. B. Rac und Cdc42) wirken, und deren Verwendung zur Behandlung von Krebs, einschließlich Brustkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Prostatakrebs, Magenkrebs und Neuroblastom, wobei diese GTPasen überexprimiert oder hyperaktiviert sind und Krankheiten, bei denen die Aktivierung von Rho-GTPasen eine Schlüsselrolle spielt, werden durch diese Proteine vermittelt.
  • Eine Verbindung gemäß allgemeiner Formel I
    Figure DE112017006187T5_0041
    Wobei:
    • R1 Wasserstoff, C1-6-Alkyl oder C3-6-Cycloalkyl ist.
    • R2 bei jedem Auftreten unabhängig Wasserstoff, Halid, Hydroxyl, Cyano, C1-6-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, C1-6-Haloalkyl, Nitro, Amino, usw. ist.
    • R3 Aryl, Heteroaryl, Indol-5-yl, Benzimidazol-5-yl, Indazol-5-yl, C1-6-Alkyl, C2-6 ist.
    • Hydroxyalkyl, C3-6-Cycloalkyl oder Ra,RbN[CR4]2-6.
    • Ra und Rb unabhängig Wasserstoff, C1-6-Alkyl oder C3-6-Cycloalkyl sind
    • R4 bei jedem Auftreten unabhängig Wasserstoff oder C1-6-Alkyl ist.
  • A und B sind unabhängig Wasserstoff, Halid, Hydroxyl, Cyano, C1-6-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, C1-6-Haloalkyl, Nitro, Amino, usw.
  • In der Verbindung der allgemeinen Formel 1, wobei A und B ein Ringsystem bilden:
    Figure DE112017006187T5_0042
    Wobei:
    • R5 bei jedem Auftreten unabhängig Wasserstoff, Halide, Hydroxyl, Cyano, C1-6-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, C1-6-Haloalkyl, Nitro, Amino ist.
  • Ein Verfahren zur Hemmung von Rac und/oder Cdc42 in einer Zelle umfasst Kontaktieren der Zelle mit einer Verbindung der allgemeinen Formel 1.
  • Ein Verfahren zur Behandlung eines Patienten mit Krebs oder hyperproliferativen Störungen ist durch Verabreichen einer Verbindung der allgemeinen Formel 1 an den Patienten.
  • Der Krebs oder die hyperproliferativen Störungen umfassen Brustkrebs, Prostatakrebs, Neuroblastom, Eierstockkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs oder Magenkrebs.
  • Die biochemische Charakterisierung von MBQ-167, das die Rac- und Cdc42-Aktivierung hemmt. Rac und Cdc42 sind entscheidende Signalintermediate, deren Dysregulation mit onkogener Transformation, Progression von Krebs, Metastasierung und multiplen Erkrankungen in Verbindung gebracht wurde. Jüngste Studien, einschließlich der von den Erfindern selbst, haben gezeigt, dass das Targeting von Rac und Cdc42 Potenzial für eine Therapie für metastatischen Krebs hat. Die gegenwärtigen Kleinmolekül-Inhibitoren von Rac und Cdc42 sind jedoch nur in mikromolaren Konzentrationen wirksam.
  • Um einen neuen, wirksameren Inhibitor von Rac und Cdc42 mit einem IC50 < 1,0 µM zu entwickeln, zeigt das neue Derivat MBQ-167 eine verbesserte Wirksamkeit bei metastatischen Brustkrebszellen durch Hemmung der Rac-Aktivität mit einem IC50 von ~103 nM und Cdc42 mit einem IC50 von 78 nM. Diese konzentrationsabhängige Reaktion von Brustkrebszellen auf MBQ-167 zeigt, dass MBQ-167 spezifisch die biochemische Aktivierung von Rac und Cdc42 hemmt. MBQ-167 hemmte jedoch nicht die Rac-Aktivität von Zellen, die dominant aktives Rac1(G12V) exprimierten, was anzeigt, dass MBQ-167 die Rac1-Aktivierung spezifisch hemmt. Darüber hinaus zeigen unsere Daten, dass MBQ-167 die Aktivierung der verwandten GTPase Rho nicht beeinflusst. Daher erwarten wir, dass dieses neue Molekül als Werkzeug zur Untersuchung der Rac- und Cdc42-Funktion in reaktiven Zelltypen nützlich sein wird.
  • MBQ-167 war ein wirksamer Inhibitor des Rac-und Cdc42 nachgelagerten Effektors PAK . Interessanterweise induzierte MBQ-167 eine erhöhte Autophosphorylierung von S144 (PAK1), dessen Aktivierung nicht essentiell ist, aber zur Aktivität der PAK -Kinasedomäne beiträgt. Dieses Ergebnis könnte auf einen Rückkopplungsmechanismus zurückzuführen sein, der die Hemmung von Rac/Cdc42 kompensiert. Dennoch wurden Phosphorylierungen in den PAK-Kinasedomänen sowie den PAK -Effektoren LIMK und Cofilin, einem wirksamen Regulator der Dynamik von Aktinfilamenten während der Zellmigration, durch MBQ-167 signifikant gehemmt. Daher schlussfolgern wir, dass MBQ-167 insgesamt PAK -Aktivität hemmt und zu einer Verringerung von Aktin-Zytoskelett-Extensionen und Zellmigration beiträgt. Da Rac und Cdc42 auch Wiskott-Aldrich-Syndrom-Protein- (WASP-) Familienmitglieder regulieren, die zur Aktindynamik beitragen, könnte MBQ-167 zusätzliche inhibitorische Wirkungen auf das Zytoskelett ausüben.
  • Darüber hinaus reguliert Cdc42 Zellpolarität durch die Polaritätsproteinportionierenden defekten Proteine (PAR6, 3), die Mikrotubuli während der gerichteten Migration stabilisieren. Unter Verwendung eines haploiden Derivats des Hefestamms BY4741, in dem das essentielle Gen Cdc42 über einen Tetracyclin-induzierbaren Promotor ausgeknockt wurde, übt MBQ-167 einen ähnlichen Phänotyp wie der Zellen mit reduzierter Cdc42-Expression aus. Cdc42-Knockdown beseitigt die Zellpolarität, wobei die Hefeknospen (Tochterzellen) nicht symmetrisch an den Mutterzellen ausgerichtet sind. Ein ähnlicher unpolarer Effekt wurde auch bei Hefezellenknospung in Gegenwart von MBQ-167 beobachtet. Dieser mutierte Phänotyp war in den Hefezellen mit sowohl Cdc42-Knockdown als auch MBQ-167-Behandlung ausgeprägter, was zeigt, dass MBQ-167 das hochkonservierte Hefe-Cdc42 hemmen kann, um die Zellpolarität zu regulieren. Wie erwartet verbesserte MBQ-167-Behandlung auch die wachstumshemmenden Wirkungen des Cdc42-Knockdowns.
  • Die Regulierung der Mikrotubulusdynamik durch Rac- und Cdc42-Aktivitäten ist auch für den Zellzyklusfortschritt entscheidend, wobei Cdc42, und damit PAK , die Bildung der mitotischen Spindel und Zellzyklusfortschritt in G2/M steuert (41, 42). Daher kann der beobachtete MBQ-167-vermittelte Zellzyklusstillstand in metastatischen Brustkrebszellen in der G2/M-Phase eine Folge von Rac/Cdc42/PAK-Hemmung durch MBQ-167 sein.
  • Die verminderten Rac/Cdc42/PAK-Aktivitäten, Zelllebensfähigkeit, Verlust der Zellpolarität und Ablösung vom Substrat als Reaktion auf MBQ-167 ist auf Krebszellen beschränkt, die epithelial-mesenchymalen Übergang (EMT) durchlaufen haben, aber nicht auf Epithelkrebs- oder Nichtkrebs-Zellen. Diese selektive Antwort auf MBQ-167 könnte auf die unterschiedliche Expression und Aktivität von Rac- und Cdc42-GEFs in verschiedenen Brustkrebszelllinien zurückzuführen sein, wo nur von einer Untergruppe der ~80 bekannten Rac- und Cdc42-GEFs erwartet wird, dass sie in metastatischen Brustkrebszelllinien, die untersucht wurden, exprimiert und aktiviert wird. Darüber hinaus hemmen die derzeit verfügbaren Rac/Cdc42-Inhibitoren auch nur eine Teilmenge von Rac/Cdc42-GEFs. Zum Beispiel hemmt NSC23766 nur Tiam-1-/und Trio-Aktivierung von Rac, während EHop-016 ein spezifischer Inhibitor der Vav/Rac-Wechselwirkung ist. Daher könnte MBQ-167 nur eine Untergruppe von Rac/Cdc42-GEFs hemmen, die vorzugsweise in den stärker metastatischen mesenchymartigen Krebszelllinien exprimiert/aktiviert sind.
  • Darüber hinaus kann die relative Unempfindlichkeit von epithelartigen Zellen gegenüber MBQ-167 darauf zurückzuführen sein, dass die Hemidesmosomen in Epithelzellen hauptsächlich durch α6β4-Integrin-vermittelte Anheftungen an das Intermediärefilament-Zytoskelett reguliert werden, die nicht direkt von Rac und Cdc42 reguliert werden. Im Gegensatz dazu stehen die fokalen Adhäsionen in mesenchymalen Zellen, die durch multiple Integrin-Untereinheiten reguliert werden, um Anheftungen an das Aktin-Zytoskelett zu bilden, unter Rac/Cdc42/PAK-Regulierung. Daher kann die beobachtete Verringerung und Reorganisation fokaler Adhäsionen in MBQ-167-behandelten Krebszellen die Hemmung der Rac/Cdc42/PAK-regulierten Integrin-vermittelten fokalen Adhäsion an der führenden Zellkante widerspiegeln.
  • Fokale Adhäsionen sind nicht nur für die gerichtete Migration wichtig, Störungen der ordnungsgemäßen Regulierung der Zelladhäsion ans ECM können zu Anoikis führen, Apoptose, die durch ungeeignete oder unpassende Zell-Matrix-Wechselwirkungen induziert wird. In diesem Zusammenhang wurde gezeigt, dass Rac1 Anoikisresistenz verleiht. Daten, die mit Caspase-Tests offenbart wurden, und Verringerung von pro-Überlebens-BCl2-Homologieproteinen bestätigen die Hypothese, dass MBQ-167 als ein Antikrebs-Mittel wirkt, indem es Anoikis induziert. Daten zeigen, dass nur die abgelösten Brustkrebszellen auf durch MBQ-167 erhöhte Caspase3/7-Aktivitäten ansprechen, was darauf hinweist, dass die Zellablösung der Apoptosesignalgebung vorangeht, wie dies für Anoikis vorhergesagt würde. Darüber hinaus zeigen wir, dass MBQ-167 selektiv die Lebensfähigkeit von Krebszelllinien verringert, die EMT durchlaufen haben, ohne die Nicht-Krebszelllinie MCF10A zu beeinflussen. Diese Zelllinienspezifität könnte auf Unterschiede in der Abhängigkeit von der Rac/Cdc42/PAK-Signalgebung und der begleitenden Integrinbindung und dem Aufbau fokaler Adhäsionen in den wandernderen Mesenchymzellen verglichen mit den Epithelzellen zurückzuführen sein. Darüber hinaus könnte MBQ-167 ähnliche Wirkungen bei mehreren anderen Krebsen zeigen, einschließlich einer Anzahl von Eierstock-, Magen-, Pankreas- und Neuroblastom-Zelllinien, die EMT durchlaufen haben. Da EMT mit stammzellähnlicheren Eigenschaften, Therapieresistenz und Wiederauftreten der Krankheit assoziiert, hat MBQ-167 das Potenzial, die Therapieresistenz zu verringern. Darüber hinaus zeigt die Tatsache, dass MBQ-167 gegen die KRAS-mutierte MIA-PaCa-2-Zelllinie wirksam ist, seine Fähigkeit, auf von onkogenem RAS abhängige Krebserkrankungen abzuzielen.
  • MBQ-167 hemmt auch STAT3-Phosphorylierung, einen Rac-regulierten Transkriptionsfaktor, von dem gezeigt wurde, dass er in mehreren Krebsen aktiv ist. Da die STAT3-Aktivität die Expression mehrerer Gene erhöht, die am Zellzyklusfortschritt beteiligt sind, kann seine Aktivitätsabnahme zum beobachteten Zellzyklusstillstand durch MBQ-167-Behandlung beitragen. Wichtig ist, dass STAT3 transkriptional alle drei pro-Überlebens-Gene der Familie BCI-2 reguliert, die in dieser Studie analysiert wurden. Des Weiteren zeigen mehrere Berichte, dass Krebsstammzell-artige Eigenschaften von STAT3-Aktivität abhängig sind. Dementsprechend verringert MBQ-167 die Effizienz der Mammosphärenbildung in MDA-MB-231-Zellen um ~50%. Diese Ergebnisse legen nahe, dass MBQ-167 außerdem als Antikrebs-Therapeutikum wirksam sein könnte, indem es auf Krebsstammzell-artige Populationen abzielt, möglicherweise spezifisch Krebsstammzellaktivität hemmt.
  • Schließlich verringert MBQ-167 die Größe von Mamma-fettpolster-Tumoren bereits ab 3 Wochen nach Behandlung, mit 91% Verringerung nach 2 Monaten bei einer nichttoxischen Konzentration von 10 mg/kg BW. Die drastische Verringerung von Mammatumoren führte auch zu 100% Hemmung von Metastasierung in allen getesteten Organen, wahrscheinlich weil weniger Zellen von den kleinen Tumoren abgegeben wurden. Wie durch die in vitro-Daten belegt, wird vorhergesagt, dass die verringerte Tumorgröße als Antwort auf MBQ-167-Behandlung auf die Hemmung der Rac/Cdc42/PAK-Signalgebung zurückzuführen ist, was schließlich zu einem Verlust von Zelllebensfähigkeit, -wachstum und -polarität führt und die Zellen sich vom Tumor ablösen und Anoikis durchlaufen lässt. Da wir bei Mäusen, die mit MBQ-167 behandelt wurden, keine Metastasen beobachtet haben, durchlaufen wahrscheinlich alle vom Primärtumor abgelösten Zellen Anoikis und überleben nicht im Kreislauf.
  • Ähnlich hemmte in Mäusen mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID) mit MDA-MB-23-Mammatumoren MBQ-167 Tumorwachstum um 90%, 95% und 100% nach Dosen von 1, 5 bzw. 10 mg/kg BW (16).
  • Zusammengefasst ist MBQ-167 ein wirksamer Cdc42- und Rac-Inhibitor, der die nachgelagerte Signalgebung und die krebsfördernden Zellfunktionen signifikant verringert, um schließlich das Mammatumorwachstum mit 10X höherer Wirksamkeit als der zuerst beschriebene Rac-Inhibitor EHop-016 zu verringern. Die Wirkungen von MBQ-167 auf den metastatischen Krebszellphänotyp, bei dem sich die Zellen vom Substrat ablösen, um schließlich durch Anoikis-Mechanismen Apoptose zu durchlaufen, können jedoch auf zusätzliche Effekte von MBQ-167 auf Integrinsignalgebung oder alternative Mechanismen zurückzuführen sein. Nichtsdestoweniger rechtfertigt die dramatische Wirkung von MBQ-167 auf Mammatumorwachstum in Mäusen die weitere Entwicklung von MBQ-167 als ein Antikrebs-Therapeutikum.
  • BEISPIELE
  • MBQ-167- (9-Ethyl-3-(5-phenyl-[1,2,3]triazol-1-yl)-9H-carbazol-) Daten
  • 1. Frisch hergestelltes 3-Azido-9-ethylcarbazol wurde mit Magnesium-Phenylacetylid reagiert, um das Zwischenprodukt 4-Halomagnesiotriazol herzustellen, das mit 10% Ammoniumchlorid abgeschreckt wurde, um 9-Ethyl-(5-phenyl-[1,2,3]triazol-1-yl)-9H-carbazol (MBQ-167) mit 86% Ausbeute zu liefern.
  • 2A; 2B. MBQ-167 beeinflusst die Polarität von metastatischen Krebszellen, ohne nicht-metastatische Krebszellen zu beeinflussen. Bei ≥100 nM induziert MBQ-167 ab sechs Stunden einen Verlust an Polarität und Ablösung vom Substrat in metastatischen MDA-MB-231- Brustkrebszellen, nicht jedoch in nicht-metastatischen menschlichen MCF-7-Brustkrebszellen. 250 nM MBQ-167 führt dazu, dass ~70% der Zellen ihre Polarität verlieren und einen abgerundeten Phänotyp annehmen. Höhere Konzentrationen von MBQ-167, d. h. 500 nM über 24 Stunden, führen zu ~90% Verlust der Zellpolarität und löst sich vom Substrat.
  • 2A; 9. Diese dramatische Rundung und Ablösung als Antwort auf MBQ-167 wird durch Brustkrebszellen vom Typ HER2 und von dreifach negativen mesenchymalen Brustkrebszellen (TNBC) (MDA-MB-231, Hs578t, MDA-MB-468 und HER2-BM) gezeigt, sowie von anderen metastatischen Krebszelllinien: Bauchspeicheldrüsenkrebs Mia-PaCa-2 (mit G12C-kRas-Mutation), Eierstockkrebs SKOV3, Magenkrebs NCI-N87 und Neuroblastom SH-SY5Y. Dieser Effekt war in den mehr epithelialen MCF-10A- und MCF-7-Brustkrebszellen und AGS-Primärmagenkrebszellen geringer.
  • 15. In Saccharomyces cerevisiae (Knospenhefe), die nur Cdc42 exprimiert, das Polarität und Zellteilung reguliert, hemmte Behandlung mit 100 mikroM MBQ-167 Hefeknospenpolarität und Wachstum, was nahelegte, dass die Wirkung auf die Zellpolarität auf Hemmung von Cdc42 durch MBQ-167 beruhen könnte.
  • 2B. Färbung auf F-Aktin mit Rhodamin-Phalloidin zeigt einen Verlust von Invadopodien und Filopodien. F-Aktiv-basierten beweglichen Strukturen, die durch Rac und Cdc42 reguliert werden, als Antwort auf MBQ-167.
  • 2B, C. Immunfärbung mit einem anti-Phosphotyrosin- oder -Vinculin-Antikörper für fokale Adhäsionen, die durch die Bindung von Integrinrezeptoren an der ECM gebildet werden, demonstrieren eine dramatische Umordnung von fokalen Adhäsionen während der Zellrundung, wobei sich die fokalen Adhäsionen vom Zellrand zum Zellzentrum hin bewegten und unorganisierter erscheinen.
  • 3. MBQ-167 hemmt Rac 1/2/3-Aktivität in der menschlichen metastatischen Brustkrebszelllinie MDA-MB-231 mit einem IC50 von 103 nM, und Cdc-Aktivität mit einem IC50 von 78 nM.
  • Tabelle 1. Bei 250 nM hemmt MBQ-167 die Rac- und Cdc42-Aktivitäten von MDA-MB-231-Zellen, ohne die Aktivität der nahen Isoform Rho zu beeinflussen.
  • 10. MBQ-167 hemmt auch die Rac- und Cdc42-Aktivitäten von menschlichen metastatischen GFP-HER2-Brustkrebszellen. MBQ-167 beeinflusst nicht die Aktivität von Rho.
  • Tabelle 2. MBQ-167 (250 nM) beeinflusst nicht die Rac-Aktivität von MCF-7, einer nicht-metastatischen menschlichen Brustkrebszelllinie.
  • 7. MBQ-167 hemmt auch nicht die Rac-Aktivität einer konstitutiv aktiven metastatischen Brustkrebszelllinie (MDA-MB-231-Rac1G12V), was andeutet, dass MBQ-167 die Beladung von Rac mit GTP hemmt.
  • 3, 10. In metastatischen MDA-MB-231- und GFP-Her2-BM-Brustkrebsellen wurden die Aktivitäten von Rac, Cdc42, und des Rac und Cdc42 nachgelagerten Effektors p21-aktivierte Kinase PAK um 75, 85 bzw. 90%, in den abgelösten Zellen verglichen mit Vehikelkontrollen, verringert, während diese Aktivitäten in der angehefteten Population weniger verringert wurden (~25%).
  • 8. In NCI-N87-magenkrebszellen verringert MBQ-167 die Aktivität (aber nicht Expression) der Rac und Cdc42 nachgelagerten Effektors p21-aktivierte Kinase PAK (PAK 1, 2, 4), wie durch Western-Blot mit Antikörpern gegen Gesamt- und aktive phospho-Reste gezeigt.
  • 11. MBQ-167 hemmt PAK -Aktivitäten der primären Brustkrebszelllinie MCF-7 nicht.
  • 4B, 4C. In MDA-MB-231-Zellen hemmt 250 nM MBQ-167 nachgelagerte PAK-Signalgebung, wie durch Western-Blot gegen die aktivierende Phosphorylierung (Y507/T508) des direkten PAK -Substrats LIM-Kinase (LIMK) und die inaktivierende Phosphorylierung (S3) des LIMK-Substrats Cofilin (Aktin-Depolymerisations-Faktor) gezeigt.
  • 4D, 12A. In MDA-MB-231-Zellen und GFP-HER2-BM-Zellen verringert MBQ-167 die Aktivität von Signalüberträger und Aktivator der Transkription (STAT3). Jedoch beeinflusst MBQ-167 nicht die P42/44-Mitogen-aktivierte Kinase- (MAPK-), p38-MAPK- oder Akt-Aktivitäten von MDA-MB-231-Zellen.
  • 4E, 4F; 12B. MBQ-167-vermittelte Hemmung von Rac/Cdc42-Signalgebung führt zu 80-90% Hemmung von MDA-MB-231- und GFP-HER2-Zellmigration, wie durch Transwell- und Wundheilungstests gezeigt.
  • 4G. Die Mammosphärenbildungs-Effizienz von MDA-MB-231-Zellen wird nach einer 4-tägigen Behandlung mit MBQ-167 signifikant um ~50% verringert.
  • 5A. In 1000 nM MBQ-167 über 120 h inkubierte metastatische MDA-MB-231- und GFP-HER2-BM-Brustkrebszellen durchläuft ~100% Zelltod mit einem GI50 von 110 nM für MDA-MB-231-Zellen und einem GI50 von 150 nM für GFP-HER2-BM-Zellen. MBQ-167 beeinflusst auch nicht die Lebensfähigkeit von nicht-metastatischen MCF7-Brustkrebszellen oder MCF-10A-Mammaepithelzellen bei diesen Konzentrationen. Das GI50 für die MCF10A-Epithelzellen bei 350 nM MBQ-167 ist ~3X höher als das für die metastatischen Brustkrebszellen.
  • 8A. NCI-87-Lebensfähigkeit. 250 nM MBQ-167 verringerten die Lebensfähigkeit von NCI-N87-Zellen um 55%, wie aus einem MTT-Test analysiert.
  • 5B. MBQ-167-Behandlung über 24 h an kombinierten angehefteten und abgelösten MDA-MB-231-Zellen führt zu einem G2/M-Phasen-Stillstand.
  • 5C; 14. Die abgelösten MDA-MB-231-Brustkrebszellen reagieren auf MBQ-167 mit erhöhter Caspase 3/7-Aktivität. Die angehefteten Zellen leiten als Antwort auf 250-500 nM MBQ-167 über 6h Apoptose ein, wie durch Annexin V-Färbung gezeigt.
  • 5D. MBQ-167-Behandlung von MDA-MB-231-Zellen über 24 h führt zu verringerter Expression der mitochondrialen pro-Überlebens-Proteine der Bcl-2-Familie (Bcl-2, Bcl-XL und MCI-1).
  • 6A, 6B. Tabellen 3, 4. In Nude-Mäusen mit durch GFP-HER2-BM-Zellen etablierten Mamma-Fettpolster-Tumoren führt 1,0 mg/kg BW MBQ-167 zu ~80% Verringerung im Tumorwachstum, und die Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 führt zu ~95% Verringerung im Tumorwachstum nach 65 Tagen. Daten deuten eine drastische Verringerung im Tumorwachstum in den mit 10 mg/kg BW MBQ-167 behandelten Mäusen an, mit einer signifikanten Hemmung im Tumorwachstum, die nach 24 Tagen von Behandlung mit 1 oder 10 mg/kg BQ MBQ-167 induziert wird.
  • 16. MB-231-Mammatumorwachstum. In Mäusen mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID), die GFP-MDA-MB-231-Mamma-Fettpolster-Tumore trugen, führte 1,0 mg/kg BW MBQ-167 zu 90% Hemmung des Tumorwachstums, Behandlung mit 5,0 mg/kg BW MBQ-167 führten zu 95% Hemmung des Tumorwachstums und die Behandlung mit 10 mg/kg BW MBQ-167 führte zu 100% Hemmung des Tumorwachstums nach 50 Tagen.
  • 6B. Auf Grund dieser drastischen Verringerung im Tumorwachstum hemmt MBQ-167 Metastasierung in alle getesteten Organe (Lungen, Knochen, Herz, Milz, Niere, Lebern) um 100%.
  • 6C. MBQ-167 übt keine toxischen Wirkungen auf Gewicht oder Phänotyp von Nude- oder immunkompromittierten SCID-Mäusen aus.
  • 6D, 6E. MBQ-167 hemmt die Aktivität von alkalischer Phosphatase (ALP) in der Leber nicht signifikant, aber verringert Aktivität von Alanin-Transaminase (ALT) in der Leber.
  • Sofern nicht anders definiert, haben alle hier verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die gleiche Bedeutung, wie sie üblicherweise von einem Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet, zu dem diese Offenbarung gehört, verstanden werden. Alle Patente, Anmeldungen, veröffentlichten Anmeldungen und andere Veröffentlichungen, auf die hierin Bezug genommen wird, sind durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit eingegliedert. Wenn eine in diesem Abschnitt dargelegte Definition einer Definition in einem Patent, einer Anmeldung oder einer anderen Veröffentlichung, die hierin durch Bezugnahme eingegliedert ist, widerspricht oder mit ihr anderweitig inkonsistent ist, hat die in diesem Abschnitt dargelegte Definition Vorrang vor der hierin durch Bezugnahme eingegliederten Definition.
  • Wie hierin und in den beigefügten Ansprüchen verwendet, umfassen die Singularformen „ein“, „eine“ und „der“ plurale Referenten, sofern der Zusammenhang nicht eindeutig etwas anderes vorschreibt. Es wird ferner darauf hingewiesen, dass die Ansprüche so formuliert werden können, dass sie jedes optionale Element ausschließen. Als solche soll diese Aussage als eine vorausgehende Grundlage für die Verwendung einer solchen ausschließenden Terminologie wie „ausschließlich“, „nur“ und dergleichen in Verbindung mit der Aufzählung von Anspruchselementen oder der Verwendung einer „negativen“ Beschränkung dienen.
  • Wie hierin verwendet, werden die Begriffe „einschließlich“, „enthaltend“ und „umfassend“ in ihrem offenen, nicht beschränkenden Sinn verwendet.
  • Um eine knappere Beschreibung bereitzustellen, werden einige der hier angegebenen quantitativen Ausdrücke nicht durch den Begriff „etwa“ qualifiziert. Es versteht sich, dass, unabhängig davon, ob der Begriff „etwa“ explizit verwendet wird oder nicht, jede hier angegebene Größe sich auf den tatsächlich angegebenen Wert beziehen soll und sich auch auf die Annäherung an den so angegebenen Wert beziehen soll, die vernünftigerweise basierend auf dem Durchschnittsfachmann abgeleitet werden könnte, einschließlich Äquivalenten und Näherungen auf Grund der experimentellen und/oder Messbedingungen für einen solchen angegebenen Wert. Immer wenn eine Ausbeute als Prozentsatz angegeben wird, bezieht sich eine solche Ausbeute auf eine Masse der Einheit, für die die Ausbeute angegeben ist, mit Bezug auf die maximale Menge derselben Einheit, die unter den jeweiligen stöchiometrischen Bedingungen erhalten werden könnte. Konzentrationen, die in Prozent angegeben sind, beziehen sich auf Massenverhältnisse, sofern nicht anders angegeben.
  • Sofern nicht anders angegeben, werden die Verfahren und Techniken der vorliegenden Ausführungsformen im Allgemeinen gemäß herkömmlichen Verfahren durchgeführt, die im Stand der Technik wohlbekannt sind, und wie in verschiedenen allgemeinen und spezifischeren Referenzen beschrieben, die in der gesamten vorliegenden Beschreibung zitiert und diskutiert werden. Siehe z.B. Loudon, Organic Chemistry, vierte Auflage, New York: Oxford University Press, 2002, Seiten 360-361, 1084-1085; Smith und March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, fünfte Auflage, Wiley-Interscience, 2001.
  • Die chemische Nomenklatur für hierin beschriebene Verbindungen wurde im Allgemeinen unter Verwendung des kommerziell erhältlichen ACD/Name 2014 (ACD/Labs) oder ChemBioDraw Ultra 13.0 (Perkin Elmer) abgeleitet.
  • Es versteht sich, dass bestimmte Merkmale der Offenbarung, die der Klarheit halber im Zusammenhang mit getrennten Ausführungsformen beschrieben sind, auch in Kombination in einer einzelnen Ausführungsform bereitgestellt werden können. Umgekehrt können verschiedene Merkmale der Offenbarung, die der Kürze halber im Zusammenhang mit einer einzelnen Ausführungsform beschrieben werden, auch getrennt oder in irgendeiner geeigneten Unterkombination bereitgestellt werden. Alle Kombinationen der Ausführungsformen, die zu den durch die Variablen dargestellten chemischen Gruppen gehören, werden von der vorliegenden Offenbarung ausdrücklich umfasst und sind hierin so offenbart, als ob jede Kombination einzeln und explizit offenbart wäre, soweit solche Kombinationen Verbindungen umfassen, die stabile Verbindungen sind (d.h. Verbindungen, die isoliert, charakterisiert und auf biologische Aktivität getestet werden können). Zusätzlich werden alle Unterkombinationen der chemischen Gruppen, die in den diese Variablen beschreibenden Ausführungsformen aufgelistet sind, ebenfalls ausdrücklich von der vorliegenden Offenbarung umfasst und sind hierin so offenbart, als ob jede einzelne Unterkombination von chemischen Gruppen hier einzeln und explizit offenbart wäre.
  • Definitionen
  • Wie hierin verwendet, umfasst der Begriff „Alkyl“ eine Kette von Kohlenstoffatomen, die optional verzweigt ist und von 1 bis 20 Kohlenstoffatome enthält. Es versteht sich weiter, dass in manchen Ausführungsformen Alkyl vorteilhaft von beschränkter Länge sein kann, einschließlich C1-C12, C1-C10, C1-C9, C1-C8, C1-C7, C1-C6 und C1-C4, Veranschaulichend können solche Alkylgruppen beschränkter Länge, einschließlich C1-C8, C1-C7, C1-C6 und C1-C4 und dergleichen, als „niederes Alkyl“ bezeichnet werden. Beispielhafte Alkylgruppen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl, Pentyl, 2-Pentyl, 3-Pentyl, Neopentyl, Hexyl, Heptyl, Octyl und dergleichen. Alkyl kann substituiert oder unsubstituiert sein. Typische Substituentengruppen umfassen Cycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, heteroalizyklisch, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxy, Mercapto, Alkylthio, Arylthio, Cyano, Halo, Carbonyl, Oxo, (=O), Thiocarbonyl, O-Carbamyl, N-Carbamyl, O-Thiocarbamyl, N-Thiocarbamyl, C-Amido, N-Amido, C-Carboxy, O-Carboxy, Nitro und Amino, oder wie in den verschiedenen hierin bereitgestellten Ausführungsformen beschrieben. Es versteht sich, dass „Alkyl“ mit anderen Gruppen kombiniert werden kann, wie den oben genannten, um ein funktionalisiertes Alkyl zu bilden. Zum Beispiel kann die Kombination einer „Alkyl“-Gruppe, wie hierin beschrieben, mit einer „Carboxy“-Gruppe als eine „Carboxyalkyl“-Gruppe bezeichnet werden. Andere nicht beschränkende Beispiele umfassen Hydroxyalkyl, Aminoalkyl und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, umfasst der Begriff „Alkenyl“ eine Kette von Kohlenstoffatomen, die optional verzweigt ist und von 2 bis 20 Kohlenstoffatome enthält, und auch mindestens eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung (d.h. C=C) enthält. Es versteht sich, dass in manchen Ausführungsformen Alkenyl vorteilhaft von beschränkter Länge sein kann, einschließlich C2-C12, C2-C9, C2-C8, C2-C7, C2-C6 und C2-C4. Veranschaulichend können solche Alkenylgruppen besonders beschränkter Länge, einschließlich C2-C8, C2-C7, C2-C6 und C2-C4, als niederes Alkenyl bezeichnet werden. Alkenyl kann substituiert oder unsubstituiert sein, wie für Alkyl beschrieben oder wie in den verschiedenen hierin bereitgestellten Ausführungsformen beschrieben. Beispielhafte Alkenylgruppen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Ethenyl, 1-Propenyl, 2-Propenyl, 1-, 2- oder 3-Butenyl und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, umfasst der Begriff „Alkinyl“ eine Kette von Kohlenstoffatomen, die optional verzweigt ist und von 2 bis 20 Kohlenstoffatome enthält, und auch mindestens eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-Dreifachbindung (d.h. C≡C) enthält. Es versteht sich, dass in manchen Ausführungsformen Alkinyl vorteilhaft von beschränkter Länge sein kann, einschließlich C2-C12, C2-C9, C2-C8, C2-C7, C2-C6 und C2-C4. Veranschaulichend können solche Alkinylgruppen besonders beschränkter Länge, einschließlich C2-C8, C2-C7, C2-C6 und C2-C4, als niederes Alkinyl bezeichnet werden. Alkenyl kann substituiert oder unsubstituiert sein, wie für Alkyl beschrieben oder wie in den verschiedenen hierin bereitgestellten Ausführungsformen beschrieben. Beispielhafte Alkenylgruppen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Ethinyl, 1-Propinyl, 2-Propinyl, 1-, 2- oder 3-Butinyl und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Aryl“ auf nur Kohlenstoff enthaltende monozyklische Gruppen oder polyzyklische Gruppen mit kondensierten Ringen mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen, die ein vollständig konjugiertes pi-Elektronensystem. Es versteht sich, dass Aryl in bestimmten Ausführungsformen vorteilhaft von begrenzter Größe wie C6-C10-Aryl sein kann. Beispielhafte Arylgruppen umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, Phenyl, Naphthylenyl und Anthracenyl. Die Arylgruppe kann unsubstituiert oder wie für Alkyl beschrieben oder wie in den hierin bereitgestellten verschiedenen Ausführungsformen beschrieben substituiert sein.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Cycloalkyl“ auf einen 3- bis 15-gliedrigen monozyklischen Kohlenstoffring, einschließlich eines 5-gliedrig/6-gliedrigen oder 6-gliedrig/6-gliedrig kondensierten bizyklischen Kohlenstoffringes, oder einen multizyklischen kondensierten Ring (ein „kondensiertes“ Ringsystem bedeutet, dass jeder Ring in dem System ein benachbartes Paar von Kohlenstoffatomen mit jedem anderen Ring im System teilt) Gruppe, wobei einer oder mehr der Ringe eine oder mehr Doppelbindungen enthalten können, aber das Cycloalkyl kein vollständig konjugiertes pi-Elektronensystem enthält. Es versteht sich, dass Cycloalkyl in bestimmten Ausführungsformen vorteilhaft von begrenzter Größe wie C3-C13, C3-C9, C3-C6 und C4-C6 sein kann. Cycloalkyl kann unsubstituiert oder wie für Alkyl beschrieben oder wie in den verschiedenen hierin bereitgestellten Ausführungsformen beschrieben substituiert sein. Beispielhafte Cycloalkylgruppen umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclopentenyl, Cyclopentadienyl, Cyclohexyl, Cyclohexenyl, Cycloheptyl, Adamantyl, Norbornyl, Norbornenyl, 9H-Fluoren-9-yl und dergleichen. Veranschaulichende Beispiele von Cycloalkylgruppen, die in graphischen Darstellungen gezeigt sind, umfassen die folgenden Einheiten in der Form richtig gebundener Gruppen:
    Figure DE112017006187T5_0043
    Figure DE112017006187T5_0044
    Figure DE112017006187T5_0045
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Heterocycloalkyl“ auf eine monozyklische oder kondensierte Ringgruppe, mit 3 bis 12 Ringatomen in dem (den) Ring(en), wobei mindestens ein Ringatom ein Heteroatom wie Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel ist, wobei die verbleibenden Ringatome Kohlenstoffatome sind. Heterocycloalkyl kann optional 1, 2, 3 oder 4 Heteroatome enthalten. Heterocycloalkyl kann auch eine oder mehr Doppelbindungen aufweisen, einschließlich Doppelbindungen zu Stickstoff (z. B. C=N oder N=N), enthält jedoch kein vollständig konjugiertes pi-Elektronensystem. Es versteht sich, dass in bestimmten Ausführungsformen Heterocycloalkyl vorteilhaft von begrenzter Größe sein kann, wie etwa 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl und dergleichen. Heterocycloalkyl kann unsubstituiert sein oder wie für Alkyl beschrieben oder wie in den verschiedenen hierin bereitgestellten Ausführungsformen beschrieben substituiert sein. Beispielhafte Heterocycloalkylgruppen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf Oxiranyl, Thianaryl, Azetidinyl, Oxetanyl, Tetrahydrofuranyl, Pyrrolidinyl, Tetrahydropyranyl, Piperidinyl, 1,4-Dioxanyl, Morpholinyl, 1,4-Dithianyl, Piperazinyl, Oxepanyl, 3,4-Dihydro-2H-pyranyl, 5,6-Dihydro-2H-pyranyl, 2H-Pyranyl, 1,2,3,4-Tetrahydropyridinyl und dergleichen.
    Veranschaulichende Beispiele von Heterocycloalkylgruppen, die in graphischen Darstellungen gezeigt sind, umfassen die folgenden Einheiten in der Form richtig gebundener Gruppen:
    Figure DE112017006187T5_0046
    Figure DE112017006187T5_0047
    Figure DE112017006187T5_0048
    Figure DE112017006187T5_0049
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Heteroaryl“ auf eine monozyklische oder kondensierte Ringgruppe mit 5 bis 12 Ringatomen, die ein, zwei, drei oder vier Ring-Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält, wobei die verbleibenden Ringatome Kohlenstoffatome sind, und ein vollständig konjugiertes pi-Elektronensystem hat. Es versteht sich, dass Heteroaryl in bestimmten Ausführungsformen vorteilhaft von begrenzter Größe sein kann, wie 3- bis 7-gliedriges Heteroaryl, 5- bis 7-gliedriges Heteroaryl und dergleichen. Heteroaryl kann unsubstituiert oder wie für Alkyl beschrieben oder wie in den hierin bereitgestellten verschiedenen Ausführungsformen beschrieben substituiert sein. Illustrative Heteroarylgruppen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Pyrrolyl, Furanyl, Thiophenyl, Imidazolyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Pyrazolyl, Pyridinyl, Pyrimidinyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Purinyl, Tetrazolyl, Triazinyl, Pyrazinyl, Tetrazinyl, Chinazolinyl, Chinoxalinyl, Thienyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Oxadiazolyl, Thiadiazolyl, Triazolyl, Benzimidazolyl, Benzoxazolyl, Benzthiazolyl, Benzisoxazolyl, Benzisothiazolyl und Carbazoloyl und dergleichen. Veranschaulichende Beispiele von Heteroarylgruppen, die in graphischen Darstellungen gezeigt sind, umfassen die folgenden Einheiten in der Form richtig gebundener Gruppen:
    Figure DE112017006187T5_0050
    Figure DE112017006187T5_0051
    Figure DE112017006187T5_0052
    Figure DE112017006187T5_0053
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Hydroxy“ oder „Hydroxyl“ auf eine -OH-Gruppe.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Alkoxy“ sowohl auf eine -O-(Alkyl)- als auch auf eine -O-(unsubstituiertes Cycloalkyl)-Gruppe. Repräsentative Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy, Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy, Cyclohexyloxy und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Aryloxy“ auf eine -O-Aryl- oder eine -O-Heteroaryl-Gruppe. Repräsentative Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Phenoxy, Pyridinyloxy, Furanyloxy, Thienyloxy, Pyrimidinyloxy, Pyrazinyloxy und dergleichen und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Mercapto“ auf eine -SH-Gruppe.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Alkylthio“ sowohl auf eine -S-(Alkyl)- als auch auf eine -S-(unsubstituiertes Cycloalkyl)-Gruppe. Repräsentative Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Butylthio, Cyclopropylthio, Cyclobutylthio, Cyclopentylthio, Cyclohexylthio und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Arylthio“ auf eine -S-Aryl- oder eine -S-Heteroaryl-Gruppe. Repräsentative Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Phenylthio, Pyridinylthio, Furanylthio, Thienylthio, Pyrimidinylthio, Pyrazinylthio und dergleichen.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Halo“ oder „Halogen“ auf Fluor, Chlor, Brom oder Jod.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Cyano“ auf eine -CN-Gruppe.
  • Der Begriff „Oxo“ stellt einen Carbonyl-Sauerstoff dar. Zum Beispiel ist ein mit Oxo substituiertes Cyclopentanyl Cyclopentanon.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich „Bindung“ auf eine kovalente Bindung.
  • Der Begriff „substituiert“ bedeutet, dass die angegebene Gruppe oder Einheit einen oder mehr Substituenten trägt. Der Begriff „unsubstituiert“ bedeutet, dass die angegebene Gruppe keine Substituenten trägt. Wo der Begriff „substituiert“ verwendet wird, um ein strukturelles System zu beschreiben, soll die Substitution an einer beliebigen Valenzzulässigen Position im System auftreten. In einigen Ausführungsformen bedeutet „substituiert“, dass die angegebene Gruppe oder Einheit einen, zwei oder drei Substituenten trägt. In anderen Ausführungsformen bedeutet „substituiert“, dass die angegebene Gruppe oder Einheit einen oder zwei Substituenten trägt. In noch weiteren Ausführungsformen bedeutet „substituiert“, dass die angegebene Gruppe oder Einheit einen Substituenten trägt.
  • Wie hier verwendet, bedeutet „optional“, dass das nachfolgend beschriebene Ereignis oder die nachfolgend beschriebenen Umstände auftreten können aber nicht müssen, und dass die Beschreibung Fälle umfasst, in denen das Ereignis oder die Umstände auftreten, und Fälle, in denen sie es nicht tun. Zum Beispiel bedeutet „wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch C1-C6-Alkyl substituiert ist“, dass ein Alkyl an einem von C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl durch Ersetzen eines Wasserstoffatoms für jede Alkylgruppe vorhanden sein kann aber nicht muss, und die Beschreibung umfasst Situationen, in denen das C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrige Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklische Heteroaryl mit einer Alkylgruppe substituiert ist, und Situationen, in denen das C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrige Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklische Heteroaryl ist nicht mit der Alkylgruppe substituiert ist.
  • Wie hierin verwendet, bedeutet „unabhängig“, dass das nachfolgend beschriebene Ereignis oder die Situation für sich selbst, unabhängig von anderen ähnlichen Ereignissen oder Umständen, gelesen werden muss. Zum Beispiel bedeutet in einem Fall, in dem mehrere äquivalente Wasserstoffgruppen gegebenenfalls durch eine andere unter dem Umstand beschriebene Gruppe substituiert sind, die Verwendung von „unabhängig optional“, dass jedes Auftreten eines Wasserstoffatoms an der Gruppe durch eine andere Gruppe substituiert sein kann, wobei die Gruppen, die jedes der Wasserstoffatome ersetzen, gleich oder verschieden sein können. Wenn beispielsweise mehrere Gruppen vorhanden sind, die alle aus einem Satz von Möglichkeiten ausgewählt werden können, bedeutet die Verwendung von „unabhängig“, dass jede der Gruppen aus dem Satz von Möglichkeiten getrennt von jeder anderen Gruppe ausgewählt werden kann, und die unter dem Umstand ausgewählten Gruppen gleich oder verschieden sein können.
  • Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „pharmazeutisch annehmbares Salz“ auf diejenigen Salze, die Gegenionen die in Pharmazeutika verwendet werden können. Siehe allgemein S.M. Berge, et al., „Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Bevorzugte pharmazeutisch annehmbare Salze sind solche, die pharmakologisch wirksam und für den Kontakt mit den Geweben von Subjekten ohne übermäßige Toxizität, Reizung oder allergische Reaktion geeignet sind. Eine hierin beschriebene Verbindung kann eine ausreichend saure Gruppe, eine ausreichend basische Gruppe, beide Arten von funktionellen Gruppen oder mehr als eine von jedem Typ besitzen und dementsprechend mit einer Anzahl von anorganischen oder organischen Basen und anorganischen und organischen Säuren unter Bildung eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes reagieren. Solche Salze umfassen:
  • (1) Säureadditionssalze, die erhalten werden können durch Reaktion der freien Base der Ausgangsverbindung mit anorganischen Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure und Perchlorsäure und dergleichen, oder mit organischen Säuren wie Essigsäure, Oxalsäure, (D)- oder (L)-Äpfelsäure, Maleinsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Salicylsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Bernsteinsäure oder Malonsäure und dergleichen; oder
  • (2) Salze, die gebildet werden, wenn ein in der Stammverbindung vorhandenes saures Proton entweder durch ein Metallion, z.B. ein Alkalimetallion, ein Erdalkalimetallion oder ein Aluminiumion, ersetzt wird; oder mit einer organischen Base wie Ethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Trimethamin, N-Methylglucamin koordiniert, und dergleichen.
  • Pharmazeutisch annehmbare Salze sind dem Fachmann wohlbekannt, und ein beliebiges solches pharmazeutisch annehmbares Salz kann in Verbindung mit den hierin beschriebenen Ausführungsformen erwogen werden. Beispiele für pharmazeutisch annehmbare Salze umfassen Sulfate, Pyrosulfate, Bisulfate, Sulfite, Bisulfite, Phosphate, Monohydrogenphosphate, Dihydrogenphosphate, Metaphosphate, Pyrophosphate, Chloride, Bromide, lodide, Acetate, Propionate, Decanoate, Caprylate, Acrylate, Formiate, Isobutyrate, Caproate, Heptanoate, Propiolate, Oxalate, Malonate, Succinate, Suberate, Sebacate, Fumarate, Maleate, Butin-1,4-dioate, Hexyn-1,6-dioate, Benzoate, Chlorbenzoate, Methylbenzoate, Dinitrobenzoate, Hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, Phthalate, Sulfonate, Methylsulfonate, Propylsulfonate, Besylate, Xylolsulfonate, Naphthalin-1-sulfonate, Naphthalin-2-sulfonate, Phenylacetate, Phenylpropionate, Phenylbutyrate, Citrate, Lactate, γ-Hydroxybutyrate, Glycolate, Tartrate und Mandelate. Listen anderer geeigneter pharmazeutisch annehmbarer Salze finden sich in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. Ausgabe, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1985.
  • Für ein das einen basischen Stickstoff enthält, kann ein pharmazeutisch annehmbares Salz durch jegliches geeignete Verfahren hergestellt werden, das auf dem Fachgebiet verfügbar ist, zum Beispiel Behandlung der freien Base mit einer anorganischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Sulfaminsäure, Salpetersäure, Borsäure, Phosphorsäure und dergleichen, oder mit einer organischen Säure, wie Essigsäure, Phenylessigsäure, Propionsäure, Stearinsäure, Milchsäure, Ascorbinsäure, Maleinsäure, Hydroxymaleinsäure, Isethionsäure, Bernsteinsäure, Valeriansäure, Fumarsäure, Malonsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Glykolsäure, Salicylsäure, Ölsäure, Palmitinsäure, Laurinsäure, eine Pyranosidylsäure wie Glucuronsäure oder Galacturonsäure, eine alpha-Hydroxysäure wie Mandelsäure, Zitronensäure oder Weinsäure, eine Aminosäure wie Asparaginsäure oder Glutaminsäure, eine aromatische Säure wie Benzoesäure, 2-Acetoxybenzoesäure, Naphthoesäure oder Zimtsäure, eine Sulfonsäure wie Laurylsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure oder Ethansulfonsäure, oder eine beliebige kompatible Mischung von Säuren, wie sie hierin als Beispiele angegeben sind, und jegliche andere Säure und Mischung davon, die als Äquivalente oder akzeptable Substitute im Hinblick auf den üblichen Kenntnisstand dieser Technologie angesehen werden.
  • Die Offenbarung betrifft auch pharmazeutisch annehmbare Prodrugs der Verbindungen und Behandlungsverfahren, die solche pharmazeutisch annehmbaren Prodrugs verwenden. Der Begriff „Prodrug“ bedeutet eine Vorstufe einer angegebenen Verbindung, die nach Verabreichung an ein Subjekt die Verbindung in vivo über einen chemischen oder physiologischen Prozess, wie Solvolyse oder enzymatische Spaltung, oder unter physiologischen Bedingungen liefert (z. B. wird ein Prodrug beim Einbringen in physiologisches pH in die Verbindung gemäß der vorliegenden Offenbarung umgewandelt). Ein „pharmazeutisch annehmbares Prodrug“ ist ein Prodrug, das nicht-toxisch, biologisch tolerierbar und zur Verabreichung an den Patienten anderweitig biologisch geeignet ist. Beispielhafte Verfahren zur Auswahl und Herstellung von geeigneten Prodrug-Derivaten sind zum Beispiel in „Design of Prodrugs“, Hrsg. H. Bundgaard, Elsevier, 1985, beschrieben.
  • Jede hierin abgebildete Formel soll eine Verbindung von jener Strukturformel sowie bestimmte Variationen oder Formen darstellen. Zum Beispiel soll eine hier angegebene Formel eine racemische Form oder ein oder mehr enantiomere, diastereomere oder geometrische Isomere oder eine Mischung davon umfassen. Zusätzlich soll sich jede hierin angegebene Formel auch auf ein Hydrat, Solvat oder Polymorph einer solchen Verbindung oder eine Mischung davon beziehen. Zum Beispiel versteht es sich, dass Verbindungen, die durch eine Strukturformel, die das Symbol „
    Figure DE112017006187T5_0054
    “ enthält, abgebildet werden, beide Stereoisomere des Kohlenstoffatoms, an das das Symbol „
    Figure DE112017006187T5_0055
    “ angefügt ist, umfassen, genauer beide Bindungen „
    Figure DE112017006187T5_0056
    “ und „
    Figure DE112017006187T5_0057
    “ von der Bedeutung von „
    Figure DE112017006187T5_0058
    “ umfasst sind.
  • Jede hierin angegebene Formel soll auch unmarkierte Formen sowie isotopenmarkierte Formen der Verbindungen darstellen. Isotopenmarkierte Verbindungen haben Strukturen, die durch die hierin angegebenen Formeln dargestellt sind, außer dass ein oder mehr Atome durch ein Atom mit einer ausgewählten atomaren Masse oder Massenzahl ersetzt sind. Beispiele von Isotopen, die in die Verbindungen der Offenbarung eingebracht werden können, umfassen Isotope von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Fluor, Chlor und Jod, wie 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O 17O 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl und 125I. Solche isotopenmarkierten Verbindungen sind in Stoffwechselstudien (vorzugsweise mit 14C), reaktionskinetischen Studien (mit beispielsweise 2H oder 3H), Nachweis- oder Abbildungstechniken [wie Positronemissionstomographie (PET) oder Einzelphotonemissions-Computertomographie (SPECT)] einschließlich Gewebeverteilungstestsvon Medikamenten oder Substraten oder bei der radioaktiven Behandlung von Patienten nützlich. Ferner kann die Substitution mit schwereren Isotopen wie Deuterium (d.h. 2H), bestimmte therapeutische Vorteile ergeben, die sich aus einer größeren Stoffwechselstabilität ergeben, beispielsweise erhöhter in vivo-Halbwertszeit oder verringerten Dosierungsanforderungen. Isotopenmarkierte Verbindungen dieser Offenbarung und Prodrugs davon können allgemein durch Durchführen der in den Schemata oder in den nachstehend beschriebenen Beispielen und Präparationen offenbarten Verfahren hergestellt werden, indem ein nicht isotopenmarkiertes Reagens durch ein leicht verfügbares isotopenmarkiertes Reagens ersetzt wird.
  • Jeder hierin erwähnte Disubstituent soll die verschiedenen Anbringungsmöglichkeiten umfassen, wenn mehr als eine dieser Möglichkeiten erlaubt ist. Zum Beispiel bezieht sich die Bezugnahme auf Disubstituent -A-B-, wobei A ≠ B, auf einen solchen Disubstituenten, wobei A an ein erstes substituiertes Element und B an ein zweites substituiertes Element gebunden ist, und bezieht sich auch auf einen solchen Disubstituenten, wobei A an das zweite substituierte Element und B an das erste substituierte Element gebunden ist.
  • MATERIALIEN UND METHODEN
  • Synthese von MBQ-167
  • Alle Reagenzien wurden von der Sigma-Aldrich Chemical Company bezogen. Die Synthese von 3-Azido-9-ethyl-9H-carbazol 3 ist wie folgt (1).
  • Schritt 1: Zu einer Lösung von 2,10 g (10,0 mmol) 9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl-amin 1 in 20 ml Wasser wurden 2,0 ml (40,0 mmol) konzentrierte Schwefelsäure (H2SO4) zugegeben. Als das gesamte Amin in das Sulfat (grüner Niederschlag) umgewandelt worden war, wurden weitere 10 ml Wasser zugegeben und die Suspension in einem Eiswasserbad auf 0-5°C abgekühlt. Eine Lösung von 0,828 g (12,0 mmol) Natriumnitrit (NaNO2) in 5 ml Wasser wurde tropfenweise zugegeben und die Mischung 1 h gerührt. Als nächstes wurde eine Lösung von 0,780 g (12,0 mmol) Natriumazid (NaN3) in 5 ml Wasser tropfenweise zugegeben und 2-8 h kontinuierlich gerührt. Nach Abschluss der Reaktion wurde das Reaktionsgemisch auf 25°C erwärmt, 30 ml Ethylacetat und 20 ml destilliertes Wasser wurden zugegeben und nach kräftigem Mischen wurden die Schichten getrennt. Die organische Schicht wurde mit 10 ml Kochsalzlösung extrahiert, abgetrennt, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und auf einem Rotationsverdampfer konzentriert. Nach Kieselgelchromatographie unter Verwendung von 3:1 Hexanen/Ethylacetat als das Elutionsmittel wurde 3-Azido-9-ethyl-9H-carbazol 3 als ein weißlicher Feststoff mit einer Ausbeute von 1,79 g (7,58 mmol = 76%) erhalten. Das Produkt wurde mit TLC- und NMR-Spektroskopie identifiziert. Rf= 0,82 (3:1, Hexan/Ethylacetate); 1HNMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,43 (t, J = 7,19 Hz, 3H), 4,37 (q, J = 7,19 Hz, 2H), 7,14 (dd, J = 2,17, 8,63 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,13 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,64 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 7,14 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 7,80 Hz, 1H); 13C (CDCl3, 100 MHz) δ 14,1, 38,0, 109,0, 109,8, 110,7, 117,5, 119,3, 120,9, 122,5, 124,2, 126,6, 131,4, 137,8 140,9.
  • Schritt 2: Synthese von 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol 6 (MBQ-167). In einem 25 ml-Dreihals-Rundkolben, der 0,11 g (1,1 mmol) Phenylacetylen unter einer Stickstoffatmosphäre enthielt, wurde bei 25°C 1,1 ml (1,1 mmol) einer Lösung von Ethylmagnesiumbromid in THF tropfenweise zugegeben. Nachdem das Grignard-Reagens zugegeben worden war, wurde das Gemisch 15 min auf 50°C erhitzt und auf 25°C abgekühlt. Eine Lösung von 0,24 g (1,0 mmol) Azid 3 in THF (1,0 M) wurde tropfenweise zugegeben und 1 h auf 50°C erhitzt. Nach dem Abschrecken mit 10% Ammoniumchlorid wurden die Produkte mit Ethylacetat extrahiert (3X). Die organische Schicht wurde mit 10 ml Kochsalzlösung gewaschen, abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer konzentriert, um Rohmaterial (0,33 g) zu erhalten. Das rohe Öl wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt, um 0,29 g (0,86 mmol = 86%) 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol MBQ-167 als einen weißen Feststoff zu erhalten. Die Reinheit (≥ 98%) wurde durch TLC, NMR-Spektroskopie und GC/MS verifiziert: Rf= 0,26 (3:1, Hexan/ Ethylacetate); 1HNMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,47 (t, J = 7,22 Hz, 3H), 4,38 (q, J = 7,22 Hz, 2H), 7,26 -7,33 (m, 6H), 7,36 (dt, J = 1,76, 8,60 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,84 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 8,32 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,32 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,84 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 1,80 Hz, 1H); 13C (CDCl3, 100 MHz) δ 13,8, 37,9, 108,7, 108,9, 117,9, 119,5, 120,8, 122,5, 123,0, 123,2, 126,6, 127,1, 128,3, 128,5, 128,8, 129,0, 133,1, 138,0, 139,8, 140.7. LRGC-MS m/z (rel%): [M]+338 (37), [M-C2H5]+ 310 (55), [M-C2H5N]+ 295 (100), [M-C2H5N2]+ 281 (34), [M-C9H9N3] + 179 (34).
  • 9-Ethyl-3-(5-phenyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol (I-1).
  • Schritt 1: Synthese von 3-Azido-9-ethyl-9H-carbazol: Zu einer Aufschlämmung von 2,10 g (10,0 mmol) 9-Ethyl-9H-carbazol-3-ylamin in 20 ml Wasser wurden 2,0 ml (40,0 mmol) konzentrierte Schwefelsäure (H2SO4) zugegeben. Nach Umwandlung des gesamten Amins in das Sulfat (grüner Niederschlag) wurden weitere 10 ml Wasser zugegeben und die Suspension wurde auf 0-5°C in einem Eiswasserbad gekühlt. Eine Lösung von 0,828 g (12,0 mmol) Natriumnitrit (NaNO2) in 5 ml Wasser wurde tropfenweise zugegeben und die Mischung 1 h gerührt. Unter starkem Rühren wurde eine Lösung von 0,780 g (12,0 mmol) Natriumazid (NaN3) in 5 ml Wasser tropfenweise zugegeben und das Rühren wurde 2-8 h fortgesetzt. Nach Erwärmung des Reaktionsgemisches auf Raumtemperatur wurden 30 ml Ethylacetat und 20 ml destilliertes Wasser zugegeben, und nach kräftigem Mischen wurden die Schichten mit Hilfe eines Trenntrichters getrennt. Die organische Schicht wurde mit 10 ml Kochsalzlösung extrahiert, abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer konzentriert, um ein rohes braunes Öl zu erhalten. Nach Kieselgelchromatographie mit 3:1 Hexanen/Ethylacetat als Elutionsmittel wurde das 3-Azido-9-ethyl-9H-carbazol 2 als reine Verbindung in einer Ausbeute von 1,79 g (7,58 mmol = 76% aus Rohmaterial) erhalten. Das Produkt wurde mit TLC, NMR und GC/MS identifiziert. Rf = 1,00 (3:1, Hexan/Ethylacetat); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,43 (t, J = 7,26 Hz, 3H), 4,37 (q, J = 7,24 Hz, 2H), 7,14 (dd, J = 2,17, 8,63 Hz, 1H), 7,24 (t, J = 7,13 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,64 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 8,17 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 7,80 Hz, 1H); 13C (CDCl3, 100 MHz) δ 13,7, 37,6, 109,2, 108,6, 109,4,110,3, 117,1, 118,9, 120,2, 120,6, 122,1, 123,8, 126,2, 131,0, 137,5, 140,5.
  • Schritt 2: Synthese von 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol (I-1). In einen 25 ml-Dreihals-Rundkolben, der 0,11 g (1,1 mmol) Phenylacetylen unter einer Stickstoffatmosphäre enthielt, wurde bei Raumtemperatur 1,1 ml (1,1 mmol) einer Lösung von Ethylmagnesiumbromid (EtMgBr) in THF tropfenweise zugegeben. Nachdem Zugabe des Ethylmagnesiumbromids wurde das Gemisch 15 min auf 50°C erhitzt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Eine Lösung von 0,24 g (1,0 mmol) Azid 2 in THF (1,0 M) wurde tropfenweise zugegeben und die Mischung 1 h auf 50°C erhitzt. Nach dem Abschrecken mit einer Lösung von 10% Ammoniumchlorid (NH4Cl) wurden die Produkte mit Ethylacetat extrahiert (3X). Die organische Schicht wurde mit 10 ml Kochsalzlösung gewaschen, abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer konzentriert, um Rohmaterial (0,1104 g) zu erhalten. Das rohe Öl wurde über Kieselgelchromatographie gereinigt, um 0,29 g (0,86 mmol = 86%) 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol (I-1) zu erhalten. Das Produkt wurde durch TLC und NMR als im Wesentlichen rein identifiziert: Rf= 0,26 (3:1, Hexan/Ethylacetat); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,45 (t, J = 6,64 Hz, 3H), 4,38 (q, J = 7,24 Hz , 2H), 7,25 (d, J = 5,5, 1H), 7,27-7,29 (m, 4H), 7,31 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 1,9, 8,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 13C(CDCl3, 100 MHz) δ 13,8, 37,8, 53,4, 108,7, 108,9, 117,8, 119,5, 120,7, 122,0, 122,9, 123,1, 126,6, 127,0, 128,3, 128,5, 128,7, 128,9, 133,0, 138,0, 139,7, 140,6. LRGC-MS m/z (rel%): [M]+ 338 (37), [M-C2H5]+ 310 (55), [M-C2H5N]+ 295 (100), [M-C2H5N2] + 281 (34), [M- C9H9N3] + 179 (34).
  • Schritt 2: Synthese von 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol (I-1). In einen 25 ml-Dreihals-Rundkolben, der 0,11 g (1,1 mmol) Phenylacetylen unter einer Stickstoffatmosphäre enthielt, wurde bei Raumtemperatur 1,1 ml (1,1 mmol) einer Lösung von Ethylmagnesiumbromid (EtMgBr) in THF tropfenweise zugegeben. Nachdem Zugabe des Ethylmagnesiumbromids wurde das Gemisch 15 min auf 50°C erhitzt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Eine Lösung von 0,24 g (1,0 mmol) Azid 2 in THF (1,0 M) wurde tropfenweise zugegeben und die Mischung 1 h auf 50°C erhitzt. Nach dem Abschrecken mit einer Lösung von 10% Ammoniumchlorid (NH4Cl) wurden die Produkte mit Ethylacetat extrahiert (3X). Die organische Schicht wurde mit 10 ml Kochsalzlösung gewaschen, abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer konzentriert, um Rohmaterial (0,1104 g) zu erhalten. Das rohe Öl wurde über Kieselgelchromatographie gereinigt, um 0,29 g (0,86 mmol = 86%) 1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-5-phenyl-1H-1,2,3-triazol (I-1) zu erhalten. Das Produkt wurde durch TLC und NMR als im Wesentlichen rein identifiziert: Rf= 0,26 (3:1, Hexan/Ethylacetat); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,45 (t, J = 6,64 Hz, 3H), 4,38 (q, J = 7,24 Hz , 2H), 7,25 (d, J = 5,5, 1H), 7,27-7,29 (m, 4H), 7,31 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 1,9, 8,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 13C (CDCl3, 100 MHz) δ 13,8, 37,8, 53,4, 108,7, 108,9, 117,8, 119,5, 120,7, 122,0, 122,9, 123,1, 126,6, 127,0, 128,3, 128,5, 128,7, 128,9, 133,0, 138,0, 139,7, 140,6. LRGC-MS m/z (rel%): [M]+ 338 (37), [M-C2H5]+ 310 (55), [M-C2H5N]+ 295 (100), [M-C2H5N2]+ 281 (34), [M- C9H9N3]+ 179 (34).
  • Zellkultur
  • Zellen von MDA-MB-231, MCF-7 (ATCC), mit grün fluoreszierendem Protein (GFP) markierte der knochenmetastatischen Variante von MBA-MB-435 (GFP-HER2-BM) (charakterisiert in (25), von Dr. Danny Welch, The University of Kansas Cancer Center), und MCF10A-Mammaepithel (ATCC) wurden kultiviert und erhalten wie früher beschrieben (16). Zelllinien MDA-MB-231 und MCF-7 wurden in 2000 erhalten, die Zelllinie MCF-10A wurde in 2013 erworben, und die Zelllinie GFP-HER2-BM war ein Geschenk von Dr. Danny Welch in 2008. Die Zelllinien wurden durch die ATCC in 2015 authentifiziert.
  • Rac- und Cdc42-Aktivierungstests
  • Für die IC50-Kurven: Rac1/2/3- und Cdc42-Aktivierung wurde wie beschrieben (16) bestimmt, unter Verwendung eines G-LISA-Kits (Cytoskeleton, Inc., Denver, CO). MDA-MB-231-Zelllysate wurden aus 24 h MBQ-167-Behandlung durch Kombinieren angehefteter und abgelöster Zellpopulationen hergestellt (N=3). Vier-Parameter-Dosis-Antwort-IC50-Kurven wurden unter Verwendung der nichtlinearen Regressionsfunktion von GraphPad Prism® angepasst.
  • Zusätzlich wurde Rac-, Cdc42- oder Rac-Aktivierung durch Pulldowns unter Verwendung der P21-Bindedomäne (PBD) von PAK oder Rho-Bindedomäne von Rhotekin wie beschrieben (2,16) bestimmt. Das GTP-gebundene aktive Rac, Cdc42 oder Rho wurde durch Western-Blot nachgewiesen (N=3).
  • Western-Blot-Analyse
  • Gesamtzelllysate oder Pulldowns wurden unter Verwendung von Routineverfahren Western-blottiert. Die verwendeten primären Antikörper waren: Rac (Rac1,2,3), Cdc42, Bcl-xL, Bcl-2, Mcl-1, PAK1, PAK2, phospho (p) -PAK1(T423)/PAK2(T402), p-PAK1(S199/204)/PAK2(S192/197), p-PAK1(S144/204)/PAK2(S141), LIM kinase (LIMK1), p-LIMK1/2(Tyr507/Thr508), Cofilin, p-Cofilin(S3), STAT3, p-STAT3(Y705), p-P-38 MAPK (T180/Y182), p-ERK (T202/Y204), p-Akt (S473), und Akt (Cell Signaling Technology, Inc.) und β-Aktin (Sigma).
  • Fluoreszenzmikroskopie
  • MDA-MB-231-Zellen wurden 24 h mit Vehikel oder MBQ-167 bei 250 oder 500 nM behandelt. Die Zellen wurden fixiert, permeabilisiert und wie beschrieben (2) mit Rhodamin-Phalloidin gefärbt, um F-Aktin sichtbar zu machen, und mit p-Tyrosin oder Vinculin, um fokale Adhäsionen sichtbar zu machen. Fluoreszenzmikroskopische Aufnahmen wurden bei 600X in einem Olympus BX40-Fluoreszenzmikroskop unter Verwendung einer Spot-Digitalkamera aufgenommen.
  • Zellmigrationstests
  • Transwell-Test:
  • Wie beschrieben (2) wurden ruhende MDA-MB-231-Zellen 24 h mit Vehikel oder MBQ-167 (250 nM) behandelt. Die angehefteten und abgelösten Populationen wurden getrennt und genau 2×105 Zellen wurden auf die obere Vertiefung von Transwell-Kammern mit 5% FBS in der unteren Vertiefung platziert. Die Anzahl der Zellen, die nach 7 h Inkubation auf die Unterseite der Membran wanderten, wurde nach Färbung der fixierten Zellen mit Propidiumiodid (PI) quantifiziert. Für jede Behandlung (N=3) wurden Zellen in 20 mikroskopischen Feldern quantifiziert.
  • Wundheilungs-Kratztest:
  • MDA-MB-231-Zellen, die auf 6-Gefäß-Platten mit gleicher Zelldichte plattiert waren, wurden in 10% FBS bis zur Konfluenz inkubiert. Das Medium wurde zu 2% FBS geändert und ein einzelner Kratzer wurde in der Mitte der Monoschichtkultur mit einer Pipettenspitze vorgenommen. MBQ-167 wurde unmittelbar nach der Verwundung bei 0, 250 oder 500 nM zugegeben. Bilder wurden von einem Olympus-Mikroskop (4X Vergrößerung) bei 0, 8, 12 und 24 h digital erfasst und die Kratzer-Distanz in Adobe Photoshop quantifiziert. N=3 biologische Replikate (mit je 2 technischen Replikaten).
  • Mammosphärenbildungstest
  • Wie beschrieben (26) wurden gleiche Anzahlen von MDA-MB-231-Zellen, die mit Vehikel oder MBQ-167 behandelt worden waren, Platten mit ultraniedriger Anheftung (Corning) mit einer Dichte von 500 Zellen/Gefäß in serumfreiem Mammaepithel-Basalmedium (Lonza) ausgesät. Mammosphären wurden nach 4 Tagen Inkubation in 0 oder 250 nM MBQ-167 bei 37°C, 5% CO2 gezählt. Mammosphärenbildungs-Effizienz wurde als die Anzahl der Mammosphären dividiert durch die Anzahl der pro Gefäß ausgesäten Zellen berechnet und relativ zu den Vehikelkontrollen ausgedrückt.
  • Zelllebensfähigkeitstests
  • Wie beschrieben (16) wurden gleiche Anzahlen von MDA-MB-231-, GFP-HER2-BM- oder MCF-10A-Zellen 120 h in 0-1 µM MBQ-167 inkubiert. Der CellTiter 96® Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (Promega, Fitchburg, WI) wurde gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet. Dieser Test ermöglicht die Quantifizierung der Lebensfähigkeit sowohl angehefteter als auch abgelöster Zellen im gleichen Gefäß. Gl50 wurde als 100x(T-T0)/(C-T0) = 50 bestimmt (T = die optische Dichte der Medikamentenbehandlung nach 120 h, T0 = die optische Dichte zum Zeitpunkt Null und C = die optische Dichte der unbehandelten Zellen). Die Kurven wurden unter Verwendung der logarithmischen nichtlinearen Vier-Parameter-Regressionsmodelle in der GraphPad Prism-Software angepasst.
  • Zellzyklusfortschritt
  • MDA-MB-231-Zellen wurden 48 h mit 0 oder 250 nM MBQ-167 inkubiert und alle Zellen (abgelöst und angeheftet) wurden wie in (27) mit PI gefärbt. Der Zellzyklus wurde unter Verwendung eines Vierfarben-Durchflusszytometers (FACSCalibur, BD Biosciences, San Jose, CA) analysiert. Für jede Probe wurden insgesamt 20.000 Ereignisse analysiert. Dateien im Listenmodus wurden mit Cell Quest-Software 3.3 gesammelt und mit der Flow Jo-Software vX.0.7 (BD Biosciences, San Jose, CA) analysiert.
  • Apoptosetest
  • Die Apoptose wurde unter Verwendung eines Caspase-Glo3/7-Lumineszenz-Testkits gemäß den Anweisungen des Herstellers (Promega, Corp., Madison, WI, USA) gemessen. Nach der Behandlung einer gleichen Anzahl von Zellen mit Vehikel oder MBQ-167 über 24 h wurde Caspase-3/7-Glo-Reagens zugegeben und bei Raumtemperatur 60 min inkubiert. Caspase-3/7-Aktivitäten wurden durch Quantifizierung der Lumineszenz bestimmt.
  • Annexin V-Färbung
  • Apoptotische Zellen wurden durch Fluoreszenzmikroskopie von Annexin V-Cy3-18-gefärbten Zellen gemäß den Anweisungen des Herstellers (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) nachgewiesen. Kurz gesagt wurden auf Deckgläschen gezüchtete GFP-MDA-MB-231-Zellen, 6 h mit Vehikel oder 250 oder 500 nM MBQ-167 behandelt und mit Annexin V-Cy3-18 in Bindungspuffer (10 mM HEPES / NaOH, pH 7,5, 0,14 M NaCI, 2,5 mM CaCI2) 15 min bei Raumtemperatur gefärbt. Die Deckgläschen wurden in Bindungspuffer gewaschen und vor der Fluoreszenzmikroskopie mit 3,7% Paraformaldehyd fixiert. Bilder wurden digital von einem inversen Fluoreszenzmikroskop von Olympus aufgenommen.
  • Tierprotokoll
  • Alle Tierstudien wurden unter dem genehmigten Protokoll #A8180112 Institutional Animal Care and Use Committee, in Übereinstimmung mit der NIH Guideline for the Care and Use ofLaboratory Animals, durchgeführt. Weibliche athymische nu/nu-Mäuse und schwere kombinierte Immundefizienz CrI:SHO-Prkdc SCID Hairless 4 bis 5 Wochen alt (Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA) wurden unter pathogenfreien Bedingungen in HEPAgefilterten Käfigen gehalten.
  • Tumoretablierung
  • GFP-HER2-BM-Zellen (~5×105) oder GFP-MDA-MB-231-Zellen (1×105) in Matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA) wurden am vierten rechten Mamma-Fettpolster unter Isofluoran-Inhalation (1-3% in Sauerstoff unter Verwendung einer Inhalationskammer bei 2l/min) injiziert, um orthotopische Primärtumore zu erzeugen. Nach Tumoretablierung (1 Woche nach Inokulation) wurden die Tiere zufällig in Behandlungsgruppen (n=6) eingeteilt.
  • Verabreichung von MBQ-167
  • Mäuse wurden mit Vehikel (12,5% Ethanol, 12,5% Cremophor (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) und 75% 1X PBS pH 7,4) oder 1 oder 10 mg/kg BW MBQ-167 durch i.p. Injektion in einem Volumen von 100 µl 3X die Woche behandelt. Die Behandlungen wurden bis zur Tötung an Tag 65 fortgesetzt.
  • Ganzkörper-Fluoreszenzbild-Analyse
  • Mammatumorwachstum wurde quantifiziert als Änderungen in der integrierten Dichte der GFP-Fluoreszenz, wie in (28). Die Mäuse wurden am Tag 1 der Verabreichung der Behandlung und danach einmal pro Woche über 65 Tage unter Verwendung des in vivo-Bildgebungssystems FluorVivo für kleine Tiere (INDEC Systems, Inc., Santa Clara, CA) aufgenommen. Tumorfluoreszenzintensitäten wurden unter Verwendung der Image J-Software (National Institutes of Health, Bethesda, MD) analysiert. Relatives Tumorwachstum wurde berechnet als die integrierte Dichte der Fluoreszenz jedes Tumors an jedem Aufnahmetag relativ zu der integrierten Dichte der Fluoreszenz desselben Tumors am Tag 1 der Behandlung, wie beschrieben (17). Wie in (29) wurde optimales Tumorwachstum berechnet als %T/C= (δT/δC) X 100, wenn δT >0, δT=durchschnittliche Tumorgröße der behandelten Mäuse an Tag 65 - durchschnittliche Tumorgröße der behandelten Mäuse an Tag 01. δC= durchschnittliche Tumorgröße der Kontrollmäuse an Tag 65 - durchschnittliche Tumorgröße der Kontrollmäuse an Tag 01. Tumorwachstumsverzögerung wurde als der Prozentsatz berechnet, um den die Tumorgröße der behandelten Gruppe beim Erreichen einer bestimmten Anzahl von Verdoppelungen (vom Tag 1) im Vergleich zu Kontrollen verzögert wurde, mittels: [(T-C)/C] X 100, wobei T und C die Mediane der Zeiten der Tumorverdopplung in Tagen für behandelte und Kontrollgruppen sind.
  • Analyse von Metastasen
  • Nach der Tötung wurden Lungen, Nieren, Lebern, Knochen und Milzen entfernt und sofort in flüssigem N2 gelagert. Gelagerte Organe wurden aufgetaut und mit Fluoreszenzmikroskopie analysiert, wie beschrieben.
  • Leberenzymtests
  • Gefrorene gelagerte Lebern wurden aufgetaut und homogenisiert, um die Aktivitäten von alkalischer Phosphatase (ALP) und Alanin-Transaminase (ALT) unter Verwendung kolorimetrischer Testkits von Abcam bzw. Cayman Chemicals zu messen, nach den Anweisungen des Herstellers.
  • Statistische Analyse
  • Statistische Analysen wurden unter Verwendung von Microsoft Excel und GraphPad Prism durchgeführt, und die Unterschiede wurden bei P ≤ 0,05 als statistisch signifikant angesehen.
    Tabelle 1A TABELLE I
    Verb. # Struktur Rac-Aktivität Cdc42-Aktivität 1H-NMR Name
    I-1
    Figure DE112017006187T5_0059
         		A A (CDCl3) δ 1,43 (t, J = 7,26 Hz, 3H), 4,37 (q, J = 7,24 Hz, 2H), 7,14 (dd, J = 2,17, 8,63 Hz, 1H), 7,24 (t, J = 7,13 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,64 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 8,17 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 9-Ethyl-3-(5-phenyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-2
    Figure DE112017006187T5_0060
         		(CDCl3) δ 1,45 (t, J = 7,24 Hz, 3H), 4,38 (q, J = 7,24 Hz, 2H), 6,99 (dd, J = 1,4, 8,76 Hz, 1H), 7,12-7,17 (m, 3H), 7,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 2,0, 8,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 8,01 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 1,9 Hz, 1H) 9-Ethyl-3-(5-(m-tolyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-3
    Figure DE112017006187T5_0061
         		(CDCl3) δ 1,45 (t, J = 7.20 Hz, 3H), 3,63 (s, 3H), 4,39 (q, J = 7,20 Hz, 2H), 6,81 (dd, J = 1,4, 4,5 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 2,5, 9,5 Hz, 1H), 7,19 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 2,0, 8,6 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 1,9 Hz, 1H) 9-Ethyl-3-(5-(3-methoxyphenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    A: >50% Hemmung bei 250 nM; B: > 50% Hemmung bei 1 µM; C > 50% Hemmung bei 5 µM; D <50% Hemmung bei 5 µM.
    TABELLE I (fortges.)
    I-4
    Figure DE112017006187T5_0062
         		I-5
    Figure DE112017006187T5_0063
         		I-6
    Figure DE112017006187T5_0064
         		I-7
    Figure DE112017006187T5_0065
    I-8
    Figure DE112017006187T5_0066
         		I-9
    Figure DE112017006187T5_0067
         		I-10
    Figure DE112017006187T5_0068
         		I-11
    Figure DE112017006187T5_0069
    I-12
    Figure DE112017006187T5_0070
         		I-13
    Figure DE112017006187T5_0071
         		I-14
    Figure DE112017006187T5_0072
         		I 15
    Figure DE112017006187T5_0073
    I-16
    Figure DE112017006187T5_0074
         		I-17
    Figure DE112017006187T5_0075
         		I-18
    Figure DE112017006187T5_0076
         		I-19
    Figure DE112017006187T5_0077
    I-20
    Figure DE112017006187T5_0078
         		I-21
    Figure DE112017006187T5_0079
         		I-22
    Figure DE112017006187T5_0080
         		I-23
    Figure DE112017006187T5_0081
    I-24
    Figure DE112017006187T5_0082
         		I-25
    Figure DE112017006187T5_0083
         		I-26
    Figure DE112017006187T5_0084
         		I-27
    Figure DE112017006187T5_0085
    I-28
    Figure DE112017006187T5_0086
         		I-29
    Figure DE112017006187T5_0087
         		I-30
    Figure DE112017006187T5_0088
         		I-31
    Figure DE112017006187T5_0089
    I-32
    Figure DE112017006187T5_0090
         		I-33
    Figure DE112017006187T5_0091
         		I-34
    Figure DE112017006187T5_0092
         		I-35
    Figure DE112017006187T5_0093
    I-36
    Figure DE112017006187T5_0094
         		I-37
    Figure DE112017006187T5_0095
         		I-38
    Figure DE112017006187T5_0096
         		I-39
    Figure DE112017006187T5_0097
    I-40
    Figure DE112017006187T5_0098
         		I-41
    Figure DE112017006187T5_0099
         		I-42
    Figure DE112017006187T5_0100
         		I-43
    Figure DE112017006187T5_0101
    I-44 I-45 I-46 I-47
    I-48 I-49 I-50 I-51
  • Tabelle 1B
    Verb. # Struktur Gl50 (µM) MDA-MB-231 Migrations-Hemmung (%) MDA-MB-231 1H-NMR und 13C-NMR Name
    I-1
    Figure DE112017006187T5_0102
         		0,128 37,2 (0,25 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,43 (t, J = 7,3, 3H), 4,37 (q, J = 7,2, 2H), 7,14 (dd, J = 2,17, 8,63, 1H), 7,24 (t, J = 7,13, 1H), 7,37 (d, J = 8,64, 1H), 7,41 (d, J = 8,24, 1H), 7,49 (t, J = 8,17, 1H), 7,75 (d, J = 2,19, 1H), 8,07 (d, J = 7,80, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,8, 37,8, 108,7, 108,9, 117,8, 119,5, 120,8, 122,5, 123,0, 123,2, 126,6, 127,1, 128,3, 128,5, 128,8, 128,0, 133,0, 138,0, 139,8, 140,7. 9-Ethyl-3-(5-phenyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-2
    Figure DE112017006187T5_0103
         		1,332 ≤1 (1 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,45 (t, J = 7,24, 3H), 4,38 (q, J = 7,24, 2H), 6,99 (dd, J = 1,4, 8,76, 1H), 7,12-7,17 (m, 3H), 7,24 (t, J = 7,0, 1H), 7,34 (dd, J = 2,0, 8,6, 1H), 7,39 (d, J = 8,6, 1H), 7,45 (d, J = 8,2, 1H), 7,51 (t, J = 7,2, 1H), 7,91 (s, 1H), 8,01 (d, J = 7,8, 1H), 8,17 (d, J = 1,9, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14,0, 21,6, 38,1, 108,9, 109,2, 118,1, 119,8, 121,1, 122,8, 123,3, 123,4, 125,9, 126,9, 127,2, 128,7, 128,9, 129,5, 130,0, 133,3, 138,4, 138,8, 140,0, 140,9. 9-Ethyl-3-(5-(m-tolyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-3
    Figure DE112017006187T5_0104
         		0,248 ≤1 (1 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,45 (t, J = 7,2, 3H), 3,63 (s, 3H), 4,39 (q, J = 7,2, 2H), 6,81 (dd, J = 1,4, 4,5, 1H), 6,85 (dd, J = 2,5, 9,5, 1H), 7,19 (t, J = 8,0, 1H), 7,36 (dd, J = 2,0, 8,6, 1H), 7,41 (d, J = 8,6, 1H), 7,45 (d, J = 8,2, 1H), 7,52 (t, J = 7,2, 1H), 7,92 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,8, 1H), 8,16 (d, J = 1,9, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,8, 37,9, 55,4, 109,0, 109,1, 110,9, 113,3, 114,4, 118,3, 118,6, 119,1, 119,6, 120,8, 122,6, 123,4, 126,7, 129,5, 129,9, 131,9, 139,6, 140,9, 148,1, 160,1. 9-Ethyl-3-(5-(3-methoxypheny-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-4
    Figure DE112017006187T5_0105
         		>50 65,1 (10 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,47 (t, 3H, J = 7,2), 4,39 (q, J = 7,14, 2H), 7,2158 (d, 1H, J = 3,0), 7,26 (t, 1H, J = 7,4), 7,34 (d, J = 1,8, 1H), 7,36 (d, 1H, J = 1,8), 7,42 (s, 1H), 7,45 (d, 1H, J = 4,4), 7,52 (t, 1H, J = 7,3), 8,01 (d, 1H, J = 6,0), 8,12 (s, 1H), 8,56 (d, J = 4,6, 1H), 8,62 (s, 1H), 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,7, 37,8, 108,9, 117,8, 119,6, 120,7, 122,2, 122,4, 122,2, 123,2, 123,4, 123,4, 126,7, 149,9. 9-Ethyl-3-(5-(pyridin-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-5
    Figure DE112017006187T5_0106
         		0,408 2,4 (1 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,50 (t, 3H, J = 7,2), 4,43 (q, 2H, J = 7,239), 6,97 (d, J = 5,0, 1H), 7,09 (d, J = 2,84, 1H,), 7,2720 (t, J = 3,0, 1H), 7,45 (d, J = 1,9, 1H), 7,48 (d, 1H, J = 6,137), 7,53 (d, 1H, J = 7,2), 7,95 (s, 1H), 8,04 (d, 1H, J = 7,8), 8,16 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,8, 37,9, 108,9, 108,9, 118,3, 119,7, 120,8, 122,5, 123,2, 123,3, 124,3, 126,5, 126,7, 126,9, 127,0, 128,2, 132,3, 134,1, 140,0, 140,7. 9-Ethyl-3-(5-(thiophen-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-6
    Figure DE112017006187T5_0107
         		>50 28 (10 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,48 (t, 3H, J = 7,1), 4,43 (q, 2H, J = 7,3), 7,29 (t, 1H, J = 13,5), 7,47 (d, 1H, J = 8,1), 7,53 (t, 1H, J = 7,8), 7,83 (t, 1H, J = 7,8), 7,87 (d, 1H, J = 2,11), 7,89 (d, 1H, J = 2,1), 8,13 (d, 1H, J = 7,36), 8,29 (d, 1H, J = 7,2), 8,49 (s, 1H), 8,64 (d, 1H, J = 4,1), 8,68 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,8, 37,9, 108,9, 109,1, 113,2, 118,8, 119,6, 120,4, 120,7, 120,8, 122,6, 122,9, 123,4, 126,7, 129,4, 136,9, 139,7, 140,8, 148,8, 149,5, 150,3. 9-Ethyl-3-(5-(pyridin-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-7
    Figure DE112017006187T5_0108
         		>50 30,8 (10 µM) 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,48 (t, 3H, J = 7,3), 4,41 (q, 2H, J = 5,652), 6,8907 (d, 1H, J = 7,9), 7,9872 (d, 1H, J = 3,0), 7,00 (d, 1H, J = 4,2), 7,09 (t, 1H, J = 8,3), 7,21 (d, 1H, J = 8,6), 7,26 (t, 1H, J = 9,7), 7,32 (t, 1H, J = 7,7), 7,41 (d, 1H, J = 6,4), 7,46 (d, 1H, J = 9,7), 7,53 (t, 1H, J = 6,5), 7,90 (s, 1H), 8,04 (d, 1H, J = 4,3), 8,13 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13,9, 37,9, 108,8, 108,9, 117,3, 117,918, 118,405, 119,604, 120,239, 120,8, 121,5, 122,5, 123,1, 123,2, 124,1, 124,7, 126,7, 128,3, 129,9, 130,0, 130,1, 132,4, 132,8, 138,1,139,8, 140,7. 9-Ethyl-3-[5-(4-phenoxyphenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)]-9H-carbazol
    I-8
    Figure DE112017006187T5_0109
         		>50 n/a 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,46 (t, J = 7,6, 3H), 2,96 (t, J = 6,3, 2H), 3,85 (t, J = 6,3, 2H), 4,41 (q, J = 7,6, 2H), 7,25 (dd, J = 7,6, 1H), 7,44-7,55 (m, 4H), 7,71 (s, 1H), 8,04 (d, J = 7,6, 1H), 8,14 (t, J = 1,4, 1H). 2-(1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-5-yl)ethan-1-ol
    I-9
    Figure DE112017006187T5_0110
         		n/a n/a 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,49 (t, J = 7,2, 3H), 2,95 (s, 3H), 3,20 (t, J = 6,4, 2H), 4,38 (t, J = 6,4, 2H), 4,45 (q, J = 7,2, 2H), 7,30 (dd, J = 7,2, 1H), 7,43-7,58 (m, 4H), 7,77 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,0, 1H), 8,13 (t, J = 1,6, 1H) 2-(1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-5-yl)ethyl-Methanesulfon at
    I-10
    Figure DE112017006187T5_0111
         		n/a n/a 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,48 (t, J = 7,2, 3H), 2,95 (s, 3H), 3,20 (t, J = 6,4, 2H), 4,43 (t, J = 6,4, 2H), 4,45 (q, J = 7,2, 2H), 5,47 (d, J = 11,4, 1H), 5,84 (d, J = 17,6, 1H), 6,52 (dd, J = 17,6 and 11,4 H, 1H), 7,29 (dd, J = 7,2, 1H), 7,47-7,57 (m, 4H), 7,95 (s, 1H), 8,10 (d, J = 7,8, 1H), 8,18 (t, J = 1,6, 1H) 9-Ethyl-3-(5-vinyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-9H-carbazol
    I-11
    Figure DE112017006187T5_0112
         		n/a n/a 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,40 (t, J = 7,2, 3H), 1,80 (q, J = 7,6, 2H), 2,75 (t, J = 7,8, 2H), 3,78 (t, J = 6,2, 2H), 4,32 (q, J = 7,2, 2H), 7,23 (dd, J = 7,6, 1H), 7,44-7,55 (m, 4H), 7,60 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,6, 1H), 8,13 (s, 1H) 4-(2-(1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-5-yl)ethyl)morph olin
    I-12
    Figure DE112017006187T5_0113
         		n/a n/a 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,49 (t, J = 7,6, 3H), 2,39 (m, 4H), 2,60 (t, J = 7,6, 2H), 2,88 (t, J = 7,6, 2H), 3,66 (m, 4H), 4,45 (q, J = 7,6, 2H), 7,29 (dd, J = 7,6, 1H), 7,47-7,58 (m, 4H), 7,71 (s, 1H), 8,11 (d, J = 7,6, 1H), 8,15 (d, J = 1,4, 1H). 4-(2-(1-(9-Ethyl-9H-carbazol-3-yl)-1H-1,2,3-triazol-5-yl)ethyl)morph olin
  • Tabelle 2. Wirkung von MBQ-167 auf Rho-GTPase-Aktivität (Aktive Rho-GTPase/Gesamt-Rho-GTPase) nach 24 h in MDA-MB-231-Zellen, relativ zu Vehikel (=1)
    Rho-GTPase Angeheftete Zellen Abgelöste Zellen
    Rac 0,74* 0,23*
    Cdc42 0,39* 0,22*
    Rho 0,9 0,85
    *p<0,05
  • Menschliche MDA-MB-231-Brustkrebszellen wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt. Die angehefteten und abgelösten Zellpopulationen wurden gewonnen und gleiche Mengen an Proteinen Pulldown-Assays unter Verwendung der p21-Bindedomäne von PAK , um das GTP-gebundene Rac und Cdc42 zu isolieren, oder der Rho-Bindedomäne von Rhotekin, um aktives Rho zu isolieren, unterzogen. Zelllysate wurden mit Antikörpern gegen Rac, Cdc42 oder Rho Western-blottiert. Ergebnisse von positiven Banden in Western-Blots wurden unter Verwendung von Bild J quantifiziert. Die integrierte Dichte für aktive Rho-GTPase (Rac, Cdc42, Rho.GTP) wurde durch die gesamte Rho-GTPase (Rac, Cdc42, Rho) aus denselben Zelllysaten geteilt. Die Rac-, Cdc42- oder Rho-Aktivität für jede MBQ-167-Behandlung wurde durch die Vehikelkontrollen für jedes Experiment geteilt, um die relative Rho-GTPase-Aktivität zu erhalten.
  • Tabelle 3. Wirkung von MBQ-167 auf Rac-Aktivität (Aktives Rac/Gesamt-Rac) nach 24 h in MCF-7-Zellen
    MBQ-167 nM Rac-Aktivität
    0 1,0
    250 1,075±0,3
  • Menschliche MCF-7-Brustkrebszellen wurden 24 h mit 250 nM MBQ-167 behandelt. Die Zellen wurden lysiert und gleiche Mengen an Proteinen wurden Pulldown-Assays unter Verwendung der p21-Bindedomäne von PAK unterzogen, um das GTP-gebundene Rac zu isolieren. Zelllysate wurden mit Antikörpern gegen Rac, Cdc42 oder Rho Western-blottiert. Ergebnisse von positiven Banden in Western-Blots wurden unter Verwendung von Bild J quantifiziert. Die integrierte Dichte für aktives Rac (Rac.GTP) wurde durch das gesamte Rac aus denselben Zelllysaten (N=2) geteilt.
  • Tabelle 4: Optimaler % Behandelt (T)/Kontrolle (C) für Mamma-Fettpolster-Tumorwachstum für MBQ-167-behandelte Nude-Mäuse
    Behandlung mg/kg BW Optimale %-Änderung in Tumorgröße
    0 100
    1 58
    10 9
  • Wie angepasst aus (Alley et al., Kapitel 7, Human tumor xenograft models in NCI drug development, aus Anticancer drug development guide BA Teicher und PA Andrews, Hrsg, 2004, Humana Press, Inc., NJ), wurde %-Änderung für Tumore aus Mäusen, die MBQ-167-Behandlung erhielten, berechnet als: %T/C = (delta T/delta C) X 100, wenn Delta T>0
  • Delta T=durchschnittliche Tumorgröße der behandelten Mäuse an Tag 65-durchschnittliche Tumorgröße der behandelten Mäuse an Tag 01. Delta C= durchschnittliche Tumorgröße der Kontrollmäuse an Tag 65- durchschnittliche Tumorgröße der Kontrollmäuse an Tag 01.
  • Tabelle 5: Tumorwachstumsverzögerung für MBQ-167-behandelte Mäuse
    Behandlung mg/kg BW Zeit in Tagen für Verdopplung der Tumorgröße
    21 22 23 24
    0 8 14.5 27.7 33.3
    1 10 30 57 -
    10 11 30 - -
  • Wie angepasst aus (Alley et al., Kapitel 7, Human tumor xenograft models in NCI drug development, aus Anticancer drug development guide BA Teicher und PA Andrews, Hrsg, 2004, Humana Press, Inc., NJ), wurde Tumorwachstumsverzögerung berechnet als der Prozentsatz, um den die Tumorgröße der behandelten Gruppe beim Erreichen einer angegebenen Anzahl von Verdopplungen (ab Tag 1) verglichen mit Kontrollen verzögert ist, unter Verwendung von:
  • [(T-C)/C] X 100, wobei T und C die Mediane der Zeiten in Tagen für behandelte und Kontrollgruppen zum Erreichen einer Verdopplung der Tumorgröße sind.
  • ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
  • Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
  • Zitierte Patentliteratur
    • US 62328282 [0001]
  • Zitierte Nicht-Patentliteratur
    • Loudon, Organic Chemistry, vierte Auflage, New York: Oxford University Press, 2002, Seiten 360-361, 1084-1085 [0096]
    • Smith und March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, fünfte Auflage, Wiley-Interscience, 2001 [0096]
    • S.M. Berge, et al., „Pharmaceutical Salts“, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 [0119]
    • Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. Ausgabe, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1985 [0122]
    • Alley et al., Kapitel 7, Human tumor xenograft models in NCI drug development, aus Anticancer drug development guide BA Teicher und PA Andrews, Hrsg, 2004, Humana Press, Inc., NJ [0155, 0157]

Claims (97)

  1. Eine Verbindung der Formel (I),
    Figure DE112017006187T5_0114
    wobei A und B unabhängig H, Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OH, -CN, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, - NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -OR4, CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1C6-Alkyl, - S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) sind; oder A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)ZNH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2, - NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)ZNH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(0)Cl-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(0)Cl-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-AlkyL), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; jedes R4, R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  2. Die Verbindung aus Anspruch 1, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden, wobei jedes Wasserstoffatom in C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder einem 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, - OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-AlkY1), -N(C1-C6-,Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, - N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  3. Die Verbindung aus Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C6-C10-Aryl bilden, wobei jedes Wasserstoffatom in C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-,Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, - N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  4. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-3, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3-bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  5. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-4, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  6. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-5, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  7. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-6, wobei x 0 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  8. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-6, wobei x 1, 2 oder 3 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  9. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-8, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl,-S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  10. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-9, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, - OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)ZNH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  11. Die Verbindung aus irgendeinem von Ansprüchen 1-9, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  12. Die Verbindung aus Anspruch 1, wobei die Verbindung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus
    Figure DE112017006187T5_0115
    Figure DE112017006187T5_0116
    Figure DE112017006187T5_0117
    Figure DE112017006187T5_0118
    Figure DE112017006187T5_0119
    Figure DE112017006187T5_0120
    Figure DE112017006187T5_0121
    Figure DE112017006187T5_0122
    Figure DE112017006187T5_0123
    Figure DE112017006187T5_0124
    Figure DE112017006187T5_0125
    oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon.
  13. Die Verbindung aus Anspruch 1 oder Anspruch 12, wobei die Verbindung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus
    Figure DE112017006187T5_0126
    Figure DE112017006187T5_0127
    Figure DE112017006187T5_0128
    oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon.
  14. Die Verbindung aus Anspruch 1, wobei die Verbindung die Formel (II)
    Figure DE112017006187T5_0129
    hat, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)ZNH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(o)NH2, -C(O)NH(C1-C6-AlkyL), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6_Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; jedes R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  15. Die Verbindung aus Anspruch 1 oder Anspruch 14, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  16. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1, Anspruch 14 oder Anspruch 15, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  17. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-16, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  18. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-17, wobei x 0 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  19. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-17, wobei x 1, 2 oder 3 ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  20. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-19, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl,-S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkynyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  21. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-20, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, - NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, - N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)ZNH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  22. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1 oder Ansprüchen 14-21, wobei R3 is C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  23. Die Verbindung aus Anspruch 1, wobei die Verbindung die Formel (III),
    Figure DE112017006187T5_0130
    hat, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder-OR5 substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-ArY1)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; und jedes R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  24. Die Verbindung aus Anspruch 1 oder Anspruch 23, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalky oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  25. Die Verbindung aus Anspruch 1, Anspruch 23 oder Anspruch 24, wobei R1 H, C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  26. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1, oder Ansprüchen 23-25, wobei R1 H oder C1-C6-Alkyl ist, wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  27. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1, oder Ansprüchen 23-26, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  28. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1, oder Ansprüchen 23-27, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, - NHR8 -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, - N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  29. Die Verbindung aus irgendeinem von Anspruch 1, oder Ansprüchen 23-28, wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8) oder monozyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C6-C10-Aryl oder monozyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -OR8, -OC1-C6-Alkyl, C1-C6-Alkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  30. Die Verbindung aus Anspruch 1, wobei die Verbindung die Formel
    Figure DE112017006187T5_0131
    hat, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  31. Ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I),
    Figure DE112017006187T5_0132
    wobei A und B unabhängig H, Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OH, -CN, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, - NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -OR4, CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, - S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; oder A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder ein 5- bis 8-gliedriges Heterocycloalkyl bilden; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C5-C8-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl oder 5- bis 8-gliedrigem Heterocycloalkyl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, -CN, -OR4, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-,Alkyl)S(0)N(C1-C6-Alkyl)2, - N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F substituiert ist; R1 H, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, C1-C6-Alkyl, C1-C6-Haloalkyl oder -OR5 substituiert ist; jedes R2 unabhängig Deuterium, Halogen, -OH, -CN, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, C6-C10-Aryl, -OR6, -C(O)OR6, -C(O)NR6R7, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl) ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl und C6-C10-Aryl unabhängig optional durch Deuterium, Halogen, -OH, - CN, -OR6, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), - C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1-C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), - S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, -C3-C6-Cycloalkyl oder 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl substituiert ist; R3 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3-bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C1-C6-Alkyl-(NHR8), C1-C6-Alkyl-(OR8), C6-C10-Aryl-(OR8), C1-C6-Alkyl-(NR8R9) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl ist; wobei jedes Wasserstoffatom in C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl oder mono- oder bizyklischem Heteroaryl optional durch Deuterium, Halogen, -OH, Oxo, -OR8, -NHR8, -CN, -OC1-C6-Alkyl, -NH2, -NH(C1-C6-Alkyl), -NH(C6-C10-Aryl), -NH(C6-C10-Aryl)-N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)C1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)C1-C6-Alkyl, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NHC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)NHC1-C6-Alkyl, -NHC(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHC(O)OC1-C6-Alkyl, -N(C1-C6-Alkyl)C(O)OC1-C6-Alkyl, -NHS(O)(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2(C1-C6-Alkyl),-NHS(O)NH2,-NHS(O)2NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH2, -NHS(O)NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -NHS(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -NHS(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -N(C1-C6-Alkyl)S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -N(C1-C6-Alkyl)S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, -CO2H, -C(O)OC1-C6-Alkyl, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6-Alkyl), -C(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -SC1-C6-Alkyl, -S(O)C1C6-Alkyl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -S(O)NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)2NH(C1-C6-Alkyl), -S(O)N(C1-C6-Alkyl)2, -S(O)2N(C1-C6-Alkyl)2, - P(C1-C6-Alkyl)2, -P(O)(C1-C6-Alkyl)2, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, -C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), -CF3, -CHF2 oder - CH2F substituiert ist; jedes R4, R5, R6, R7, R8 und R9 unabhängig H, Deuterium, C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C6-C10-Aryl, C1-C6-Alkyl-(3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl), Heteroaryl, -S(O)2C1-C6-Alkyl, -CF3, -CHF2 oder -CH2F ist, wobei jeder Wasserstoff in C6-C10-Aryl optional durch C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl oder -CH2CN substituiert ist; und x 0, 1, 2 oder 3 ist, das Verfahren umfassen Kontaktieren einer Verbindung der Formel (V),
    Figure DE112017006187T5_0133
    wobei A, B, R1, R2 und x wie in Formel (I) definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (VI),
    Figure DE112017006187T5_0134
    wobei R3 wie in Formel (I) definiert ist, Y fehlt oder ein Halogen ist und M ein Metall ist, oder mit einer Verbindung der Formel (VIa),
    Figure DE112017006187T5_0135
    wobei R3 wie in Formel (I) definiert ist, und einem Katalysator.
  32. Das Verfahren aus Anspruch 31, wobei die Verbindung der Formel (VI),
    Figure DE112017006187T5_0136
    hergestellt wird durch Kontaktieren einer Verbindung der Formel (VIa),
    Figure DE112017006187T5_0137
    mit einer Verbindung der Formel (VII),
    Figure DE112017006187T5_0138
    wobei RB C1-C6-Alkyl ist, M ein Metall ist und Y ein Halogen ist.
  33. Das Verfahren aus Anspruch 31 oder Anspruch 32, wobei M Magnesium ist.
  34. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-33, wobei Y Brom oder Chlor ist.
  35. Das Verfahren aus Anspruch 31, wobei Y fehlt und M Zink umfasst.
  36. Das Verfahren aus Anspruch 35, wobei das Zink Diethylzink ist.
  37. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-36, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
  38. Das Verfahren aus Anspruch 37, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
  39. Das Verfahren aus Anspruch 31, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
  40. Das Verfahren aus Anspruch 31 oder Anspruch 39, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
  41. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-40, wobei der Schritt des Kontaktierens in der Gegenwart eines polaren Lösungsmittels durchgeführt wird.
  42. Das Verfahren aus Anspruch 41, wobei das polare Lösungsmittel THF, DMF, Dichlormethan, Et2O, Diglyme oder eine Mischung davon ist.
  43. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-42, wobei das Verfahren bei einer erhöhten Temperatur durchgeführt wird.
  44. Das Verfahren aus Anspruch 43, wobei die erhöhte Temperatur mindestens 35 °C beträgt.
  45. Das Verfahren aus Anspruch 44, wobei die erhöhte Temperatur ausgewählt ist aus einem Bereich von etwa 35 °C bis etwa 65 °C.
  46. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-45, wobei die Verbindung der Formel (V),
    Figure DE112017006187T5_0139
    hergestellt wird durch (a) Kontaktieren einer Verbindung der Formel (VIII),
    Figure DE112017006187T5_0140
    mit einer Säure in einem wässrigen Lösungsmittel, um ein Zwischenprodukt zu bilden, und (b) Reagieren des in (a) gebildeten Zwischenprodukts mit einem Azid.
  47. Das Verfahren aus Anspruch 46, wobei die Säure eine mineralische Säure ist.
  48. Das Verfahren aus Anspruch 47, wobei die mineralische Säure Schwefelsäure ist.
  49. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 46-48, wobei das Azid Natriumazid ist.
  50. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 46-49, wobei Schritt (a) weiter Natriumnitrit umfasst.
  51. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 46-50, weiter umfassend das Reinigen der Verbindung von Formel (V) durch Chromatografie.
  52. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-51, wobei A und B, zusammen mit dem Ring, an dem sie angebracht sind, ein C6-C10-Aryl bilden.
  53. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 31-52, wobei die Verbindung von Formel (I) die Struktur einer Verbindung von Formel (III)
    Figure DE112017006187T5_0141
    hat, wobei R1 und R3 wie in Klausel 31 definiert sind, und die Verbindung von Formel (V) die Struktur von Formel (Va)
    Figure DE112017006187T5_0142
    hat.
  54. Das Verfahren aus Anspruch 53, wobei das Verfahren den Schritt des Kontaktierens der Verbindung der Formel (Va),
    Figure DE112017006187T5_0143
    mit einer Verbindung der Formel VI,
    Figure DE112017006187T5_0144
    wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedriges Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(OR8) oder C1-C6-Alkyl-(NR8R9) ist, Y fehlt und M ein Metall ist, oder mit einer Verbindung der Formel Via,
    Figure DE112017006187T5_0145
    wobei R3 C1-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, C3-C6-Cycloalkyl, 3- bis 7-gliedrigem Heterocycloalkyl, C1-C6-Alkyl-(OR8) oder C1-C6-Alkyl-(NR8R9) und einem Katalysator, umfasst.
  55. Das Verfahren aus Anspruch 54, wobei Y fehlt und M Zink umfasst.
  56. Das Verfahren aus Anspruch 55, wobei das Zink Diethylzink ist.
  57. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 54-56, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
  58. Das Verfahren aus Anspruch 57, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
  59. Das Verfahren aus Anspruch 54, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
  60. Das Verfahren aus Anspruch 54 oder Anspruch 59, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
  61. Das Verfahren aus Anspruch 54, wobei die Verbindung der Formel (Va),
    Figure DE112017006187T5_0146
    mit einer Verbindung der Formel (VIa),
    Figure DE112017006187T5_0147
    und einem Katalysator kontaktiert wird.
  62. Das Verfahren aus Anspruch 61, wobei der Katalysator ein Rutheniumkatalysator ist.
  63. Das Verfahren aus Anspruch 61, wobei der Katalysator (Cp*RuCl)4 ist.
  64. Das Verfahren aus Anspruch 54, wobei die Verbindung der Formel (Va),
    Figure DE112017006187T5_0148
    mit einer Verbindung der Formel (VI),
    Figure DE112017006187T5_0149
    kontaktiert wird, wobei Y fehlt und M ein Metall ist.
  65. Das Verfahren aus Anspruch 64, wobei M Zink umfasst.
  66. Das Verfahren aus Anspruch 65, wobei das Zink Diethylzink ist.
  67. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 64-66, wobei das Verfahren weiter eine Base umfasst.
  68. Das Verfahren aus Anspruch 67, wobei die Base N-Methylimidazol ist.
  69. Das Verfahren aus Anspruch 53, wobei das Verfahren den Schritt des Kontaktierens der Verbindung der Formel (Va),
    Figure DE112017006187T5_0150
    mit einer Verbindung der Formel (VI),
    Figure DE112017006187T5_0151
    umfasst, wobei R3 C6-C10-Aryl, C6-C10-Aryl-(C6-C10-Aryl), C6-C10-Aryl-(OR8) oder mono- oder bizyklisches Heteroaryl, Y ein Halogen ist und M ein Metall ist.
  70. Das Verfahren aus Anspruch 69, wobei M Magnesium ist.
  71. Das Verfahren aus Ansprüchen 69 oder Anspruch 70, wobei Y Brom oder Chlor ist.
  72. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 69-71, wobei der Schritt des Kontaktierens in der Gegenwart eines polaren Lösungsmittels ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus THF, DMF, Dichlormethan, Et2O, Diglyme und einer Mischung davon durchgeführt wird.
  73. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 69-72, wobei das Verfahren bei einer erhöhten Temperatur durchgeführt wird.
  74. Das Verfahren aus Anspruch 73, wobei die erhöhte Temperatur mindestens 35 °C beträgt.
  75. Das Verfahren aus Anspruch 73 oder Anspruch 74, wobei die erhöhte Temperatur ausgewählt ist aus einem Bereich von etwa 35 °C bis etwa 65 °C.
  76. Ein Verfahren zur Behandlung einer Krankheit in einem Patienten, das Verfahren umfassend Verabreichen an den Patienten, der dessen bedarf, einer wirksamen Menge einer Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1-30.
  77. Das Verfahren aus Anspruch 76, wobei die Krankheit Krebs ist.
  78. Das Verfahren aus Anspruch 76 oder Anspruch 77, wobei die Verbindung Krebszellenmigration hemmt.
  79. Das Verfahren aus Anspruch 77 oder Anspruch 78, wobei die Krankheit ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Brustkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Magenkrebs und neuronalem Krebs.
  80. Das Verfahren aus Anspruch 79, wobei die Krankheit Bauchspeicheldrüsenkrebs ist.
  81. Das Verfahren aus Anspruch 79, wobei die Krankheit Eierstockkrebs ist.
  82. Das Verfahren aus Anspruch 79, wobei die Krankheit Magenkrebs ist.
  83. Das Verfahren aus Anspruch 79, wobei die Krankheit neuronaler Krebs ist.
  84. Das Verfahren aus Anspruch 79, wobei die Krankheit Brustkrebs ist.
  85. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-79 oder Anspruch 84, wobei die Verbindung Mammosphärenbildung hemmt.
  86. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-85, wobei die Verbindung Zellzyklusstillstand einer erkrankten Zelle induziert.
  87. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-86, wobei die Verbindung Apoptose einer erkrankten Zelle induziert.
  88. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-87, wobei die Verbindung die Expression eines Bcl-2-Proteins verringert.
  89. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-88, wobei die Krankheit durch eine GTPase vermittelt wird.
  90. Das Verfahren aus Anspruch 89, wobei die GTPase Rac1 oder Cdc42 ist.
  91. Das Verfahren aus Anspruch 89, wobei die GTPase Rac1 ist.
  92. Das Verfahren aus Anspruch 89, wobei die GTPase Cdc42 ist.
  93. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-92, wobei die Verbindung PAK 1/2-Aktivität hemmt.
  94. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-93, wobei die Verbindung STAT3-Aktivität hemmt.
  95. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-94, wobei die Verbindung die Formel
    Figure DE112017006187T5_0152
    hat oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
  96. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-95, wobei die wirksame Menge der Verbindung in einem Bereich von etwa 0,01 mg/kg bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht des Patienten ist.
  97. Das Verfahren aus irgendeinem der Ansprüche 76-95, wobei die wirksame Menge der Verbindung in einem Bereich von etwa 0,1 mg/kg bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht des Patienten ist.
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