DE1119773T1 - Test zum nachweis von krankheitsverbunden- konformation eines eiweis - Google Patents

Test zum nachweis von krankheitsverbunden- konformation eines eiweis

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Claims (19)

Patentansprüche
1. Analyseverfahren mit den Schritten:
Behandeln einer Probe, die im Verdacht steht, ein Protein zu enthalten, das eine erste Konformation und eine zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation einnimmt, mit einer Verbindung, die das Protein in der ersten Konformation aber nicht in der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation
hydrolysiert, um eine behandelte Probe bereitzustellen; In-Kontaktbringen der behandelten Probe mit einem Bindungspartner, der die mit einer Krankheit verbundene Konformation bindet; und
Bestimmen des Vorhandenseins der mit einer Krankheit
verbundenen Konformation auf Basis der Bindung des Bindungspartners.
2. Analyseverfahren nach Anspruch 1, bei dem das Protein ein PrP Protein ist, die erste Konformation PrPc ist und die zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation PrPSc ist und bei dem die PrPc hydrolysierende Verbindung die Konformation von PrPSc derart verändert, dass ein zuvor nicht exponiertes Epitop nach der Behandlung exponiert ist.
3. Analyseverfahren nach Anspruch 2, bei dem die Verbindung, die PrPc, aber nicht PrPSc hydrolysiert, ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend &zgr; Metalloendopeptidase und Dispase.
4. Analyseverfahren nach Anspruch 1, ferner umfassend: 30
"DE/EP 1 119 773 U1
-2-
Abtrennen von Protein der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation von der behandelten Probe; In-Kontaktbringen des abgetrennten Teils mit dem Bindungspartner.
5
5. Analyseverfahren nach Anspruch 4, bei dem das Abtrennen mittels Zentrifugation durchgeführt wird und bei dem der Bindungspartner ein Antikörper ist und bei dem das Protein ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem PrP Protein, einem TTR Protein und einem Amyloidprotein.
6. Analyseverfahren nach Anspruch 1 ferner umfassend:
Vorbehandeln der Probe vor der Behandlung der Probe mit der Verbindung, die das Protein in der ersten Konformation hydrolysiert, wobei das Vorbehandeln die Konzentration von
Protein in der Probe reduziert, das nicht die mit einer Krankheit verbundene Konformation des Proteins ist.
7. Analyseverfahren nach Anspruch 6, bei dem das Vorbehandeln Entfernen von Protein in der Probe durch In-Kontaktbringen der Probe mit Antikörpern umfasst, die an einen Träger gebunden sind, wobei die Antikörper Protein binden, das nicht das Protein in der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation ist.
8. Analyseverfahren nach Anspruch 6, bei dem das Vorbehandeln das Hyrolysieren von Proteinen in der Probe umfasst, die nicht die Proteine in der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation sind.
9. Analyseverfahren nach Anspruch 1, bei dem der Bindungspartner ein Rl Antikörper ist.
-3-
10. Analyseverfahren mit den Schritten:
Behandeln einer Probe, die im Verdacht steht, ein Protein zu enthalten, das eine erste Konformation und eine zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation einnimmt, mit einer Verbindung, die das Protein in der ersten Konformation, aber nicht
in der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation hydrolysiert, um eine behandelte Probe bereitzustellen; Denaturieren von Protein in der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation, um eine behandelte, denaturierte Probe bereitzustellen;
Kontaktieren der behandelten, denaturierten Probe mit einem Bindungspartner, der die denaturierte zweite, mit einer Krankheit verbundenen Konformation des Proteins bindet; und Detektieren der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation des Proteins auf Basis der Bindung mit dem
Bindungspartner.
11. Analyseverfahren nach Anspruch 10, bei dem das Protein ein Protein ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem PrP Protein, einem TTR Protein und einem Amydoidprotein.
12. Analyseverfahren nach Anspruch 10, bei dem das Protein ein PrP Protein ist, die erste Konformation des Protein PrPc ist und die zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation des Proteins PrPSc ist.
13. Analyseverfahren nach Anspruch 10, bei dem das Protein in der ersten Konformation PrPc ist und die Verbindung, die PrPc hydrolysiert, ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Dispase und Metalloendopeptidase.
'"Yt/EP 1 119773 Ul
14. Analyseverfahren nach Anspruch 10, bei dem der Bindungspartner an eine detektierbare Markierung gebunden ist.
15. Analyseverfahren nach Anspruch 14, bei dem das Detektieren unter Verwendung von zeitaufgelöster, durch Diassoziation verstärkte Fluoreszenz durchgeführt wird.
16. Analyseverfahren nach Anspruch 14, bei dem das Detektieren unter Verwendung eines mit einem Laser gesteuerten Fluorometers mit zwei Wellenlängen durchgeführt wird.
17. Analyseverfahren mit den Schritten:
Bereitstellen einer Probe, die im Verdacht steht, ein Protein zu enthalten, das eine erste Konformation und eine zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation einnimmt;
In-Kontaktbringen der Probe mit einem ersten Bindungspartner, wobei der erste Bindungspartner die erste Konformation aber nicht die zweite, mit einer Krankheit verbundene Konformation des Proteins bindet, wobei der erste Bindungspartner in ausreichenden Mengen hinzugeführt wird, damit er im Wesentlichen an alle
zugänglichen Epitope in der Probe bindet;
In-Kontaktbringen der Probe mit einem zweiten Bindungspartner, der sowohl die erste Konformation des Proteins als auch die zweite, mit einer Krankheit verbundenen Konformation des Proteins bindet;
Detektieren des Vorhandenseins der zweiten, mit einer Krankheit verbundenen Konformation des Proteins auf Basis der Bindung mit dem zweiten Bindungspartner.
18. Analyse nach Anspruch 17, bei dem der erste Bindungspartner ein 3F4 Antikörper ist.
DE/EP 1 119773 U1
19. Analyseverfahren nach Anspruch 17, bei dem der zweite Bindungspartner ein Rl Antikörper ist.
DE1119773T 1998-10-09 1999-10-05 Test zum nachweis von krankheitsverbunden- konformation eines eiweis Pending DE1119773T1 (de)

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