DE10322123A1

DE10322123A1 - Injizierbare Depots aus Liposomen und Polymeren zum Peptid- & Proteindelivery

Info

Publication number: DE10322123A1
Application number: DE2003122123
Authority: DE
Original assignee: Novosom AG
Current assignee: Novosom AG
Priority date: 2003-05-12
Filing date: 2003-05-12
Publication date: 2004-12-16

Abstract

Die Erfindung betrifft Formulierungen aus Liposomen und Polymeren zur Herstellung eines injizierbaren Depots von Peptid- und Proteinwirkstoffen zur langanhaltenden Freisetzung und Wirkung in einem Säugerkörper.

Description

Peptid- und Proteinwirkstoffe werden im Körper nach Applikation sehr schnell abgebaut oder ausgeschieden und müssen daher durch wiederholte Injektionen verabreicht werden. Um die „patient compiliance" zu erhöhen wird ein geeignetes Deliverysystem benötigt, das den Wirkstoff im Körper vor Abbau schützt und ihn nur langsam in die Blutbahn freigibt. Als solche Deliverysysteme werden Depotsysteme eingesetzt, die subkutan oder intramuskulär injiziert werden. Liposomen sind eine mögliche Form eines solchen Trägersystems. Sie sind aufgebaut aus einer oder mehreren Lipid-Doppelschichten und umschliessen in ihrem Innern ein wässriges Kompartiment, in welches wasserlösliche Substanzen eingeschlossen werden können. In die Lipid-Doppelschicht können lipophile Substanzen eingebaut werden.

Für Depotsysteme finden nach dem Stand der Technik Liposomen Verwendung, die aus neutralen, anionischen oder PEG-Lipiden zusammengesetzt sind, etwa in der WO 9920301 für ein Depot von γ-Interferon, in Diabetes 31 (1982), 506–511 für ein Depot von Insulin; weiterhin in Proc. Natl. Acad. Sci. 88 (1991) zur Vakzinierung.

In BBA 1328 (1997), 261–272 werden verschiedene liposomale Systeme (unilamellar und multilamellar) aus Ei-PC, Ei-PG, DPPC, DPPG, PS und Cholesterin auf deren Aufnahme ins Lymphsystem und der Bioverteilung nach subkutaner Gabe hin untersucht. Der Review-Artikel Advanced Drug Delivery Reviews 50 (2001), 143–156 schliesst an diese Untersuchungen an. Hier wird gezeigt, dass kleinere Liposomen (< 150nm) aus einem subkutanen Depot in die Lymphe auswandern.

Nach dem Stand der Technik werden also neutrale und negativ geladene Liposomen für liposomale Depotsysteme verwendet. Die Liposomen müssen eine Mindestgrösse aufweisen, um nicht in die Lymphe abzuwandern.

In weiteren Veröffentlichungen wird auf diese Grössenabhöngigkeit Bezug genommen und die kleinen Liposomen werden in verschiedene Matrizes verpackt, aus denen sie dann freigesetzt werden. Solche Grundstrukturen können aus synthetischen Polymeren bestehen (Bos et al. Biopharm Europe, Nov. 2001, 64–74, Bezemer et al. J. Controlled release 62 (1999) 393–405), Stenekes et al. Pharm. Res. 17 (2000), 690–695) oder natürliche Strukturen wie ein Fibrinnetzwerk nutzen (Meyenburg et al., J. Controlled Release 69 (2000), 159–168).

Oft wirken sich jedoch solche Polymere, insbesondere unter in vivo-Bedingungen, nachteilig auf die Stabilität der Liposomen aus. So erreichen Meyenburg et al. nur eine kurze Halbwertszeit von Tagen, die nicht wesentlich über der des freien Wirkstoffs liegt.

Aufgabe der Erfindung war es nun, neue stabile liposomale Depotformulierungen bereitzustellen, die eine langfristige Freisetzung des Wirkstoffes über mindestens eine Woche erreichen, keinen oder nur vernachlässigbaren „burst release" zeigen und eine gute Verträglichkeit im Organismus aufweisen.

Zusammenfassung der Erfindung

Die Aufgabe wird gelöst durch die Formulierung der Wirkstoffe in Liposomen, die insbesondere bei der Anwendung als Depot in Form von Aggregaten vorliegen. Solche liposomalen Aggregate sind aus anionischen Liposomen und kationischen Polymeren aufgebaut. In einer besonders vorteilhaften Ausführung werden kationische Liposomen als solche aggregatbildenden Polymere genutzt.

Die Aggregate können während der Produktion gebildet werden und bei der Anwendung fertig vorliegen. Es ist aber auch möglich, beide Komponenten als Lösung bzw. Suspension erst kurz vor der Anwendung oder unmittelbar dabei zu mischen. Die Herstellung der liposomalen Container und die Bildung der grösseren Aggregate sind zwei Prozessschritte, wobei sich jeder dieser Schritte vorteilhaft so gestalten lässt, dass sich die betreffenden Lösungen oder Suspensionen steril filtrieren lassen. Somit entstehen die grösseren Aggregate, mit denen ein Wegdiffundieren von der Einstichstelle vermieden wird, erst in einem nachgelagerten und sehr einfachen Prozessschritt.

Ausführliche Beschreibung der Erfindung

In einer bevorzugten Ausführung der vorliegenden Erfindung werden Liposomen, die aus neutralen und anionischen Lipiden aufgebaut sind, als liposomales Depotsystem für die verzögerte Freisetzung von therapeutischen Peptiden und Proteinen eingesetzt. Da therapeutische Peptide und Proteine im Körper sehr schnell abgebaut werden, müssen diese durch wiederholte Injektionen verabreicht werden. Die für diese Ausführung der Erfindung relevanten Peptide und Proteine, deren Analoga, zugehörige Peptide, Fragmente, Inhibitoren und Anatagonisten, sind z.B.: Transforming growth factors (TGF-alpha, TGF-beta), Interleukine (IL-1, IL-2, IL-3), Interferone (IFN-alpha, IFN-beta, IFN-gamma), Calcitonine, Insulinlike growth factors (IGF-1, IGF-2), Parathyroid hormone, Granulozyten-Makrophagen stimulierender Faktor (GMCSF), Makrophagen stimulierender Faktor (MCSF), Erythropoetin, Insuline, Amyline, Glucagone, Lipocortine, Wachstumshormone, Somatostatin, Gonadotropin releasing hormone (GNRH), Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH), Platelet-derived growth factor; Thromboplastin-Aktivatoren, Gewebe Plasminogen Aktivatoren, Streptokinase, Vasopressin, Muramyldipeptide (MDP), Atrial naturetic factor (ANF), Calcitonin gene-related Peptid (CGRP), Bombesin, Enkephaline, Vasoaktives intestinales Peptid (VIP), Epidermal growth factor (EGF), Fibroblast growth factor (FGF), Growth hormone releasing hormone (GRH), Peptid T und Peptid T Amide, Herpes Virus Inhibitor, Virus Replikations Inhibitions Faktor, lösliches CD4, ACTH und Fragmente, Angiotensine, und ACE Inhibitoren, Bradykinin (BK), Hypercalcemia malignancy factor (PTH like adenylate cyclase-stimulating protein), betacasomorphins, chemotactic peptides and inhibitors, corticotropin releasing factor (CRF), caerulein, cholecystokinins + Fragmente und Analoga, Galanin, gastric inhibitory polypeptide (GIP), gastrins, gastrin releasing peptide (GRP), motilin, PHI peptides, PHM peptides, peptide YY, secretins, melanocyte stimulating hormone (MSH), neuropeptide Y (NPY), neuromedins, neuropeptide K, neurotensins, phosphate acceptor peptide (c-AMP protein kinase substrates), Oxytocine, substance P, TRH, sowie Fragmente, Analoga und Derivate dieser Stoffe.

Für die Herstellung der Liposomen werden nach dem Stand der Technik etablierte Verfahren, wie Extrusion durch Polycarbonat-Membranen, Ethanolinjektion oder Hochdruckhomogenisation verwendet. Als Lipide kommen membranbildende und membranständige Lipide in Frage, wobei diese natürlichen oder synthetischen Ursprungs sein können. Hierzu zählen insbesondere Cholesterin und Derivate, Phosphatidylcholine, Phosphatidylethanolamine als neutrale Lipide. Besonders bevorzugt werden die vollständig gesättigten Verbindungen dieser Klasse verwendet, also beispielsweise Dipalmitoylphosphatidylcholin oder Distearoylphosphatidylcholin.

Bevorzugte anionische Lipide zur Ausführung der Erfindung umfassen Cholesterolhemisuccinat, Phosphatidylglycerole, Phosphatidylserin und Phosphatidsäure. Daneben können weitere membranbildendee oder membranständige Substanzen mit negativer Ladung, wie z.B. Alkylcarbonsäuren in die liposomalen Bilayer eingebaut werden.

In einer bevorzugten Zusammensetzung werden gesättigte synthetische Phosphatidylcholine, wie DMPC, DPPC oder DSPC, Cholesterin und die anionischen Lipide DPPG oder DPPS oder CHEMS verwendet, wobei ganz besonders bevorzugt der Anteil der anionischen Lipide zwischen 5 und 20 mol% beträgt und der Anteil aller sterolbasierten Lipide zwischen 35 und 50% beträgt.

Die Größe der Liposomen variiert von 20–1000 nm, insbesondere von 50–800 nm, bevorzugt von 100–500 nm und ganz besonders bevorzugt von 200–400 nm.

Für den Einschluss des gewünschten Wirkstoffes in die Liposomen wird dieser in einer Pufferlösung gelöst, mit welcher dann die Liposomen hergestellt werden. Um hohe Einschlussraten zu erzielen, wird in einem bevorzugten Verfahren der Erfindung bei einem pH-Wert gearbeitet, bei welchem der Peptid- oder Proteinwirkstoff in einem kationischen Ladungszustand vorliegt. Für Proteine oder Peptide ist das unterhalb ihres isoelektrischen Punktes der Fall, dieser Parameter kann aus Datenbanken entnommen werden, etwa der SWISS-PROT oder lässt sich nach bekannten Algorithmen berechnen.

Bei diesem Verfahren werden die Liposomen bei niedrigen Ionnenstärken hergestellt, um eine maximale Wechselwirkung des Wirkstoffes an die membranbildenden Substanzen zu erreichen.

Nach der Liposomenpräparation wird nicht eingeschlossener Wirkstoff von der Oberfläche der Liposomen entfernt. Das geschieht durch eine Auflösung der bestehenden Wechselwirkung (z.B. Erhöhung des pH-Wertes oder Erhöhung der Ionenstärke). Der freie Wirkstoff kann mittels eines geeigneten Trennverfahrens abgetrennt werden. Hierfür können chromatographische Verfahren, Zentrifugation, Dialyse oder Ultrafiltration verwendet werden. Diese Abtrennung ist wesentlich für die Minimierung eines „burst release", die Erfindung wird bevorzugt unter Einbeziehung dieses Schrittes ausgeführt.

Die so hergestellten, anionischen und wirkstoffhaltigen Liposomen werden dann zur Bildung der Aggregate eingesetzt und dazu mit einem Polykation in Kontakt gebracht. Geeignete Polykationen sind insbesondere Chitosan, Poly-Dimethyldiallylammoniumchlorid, Poly-allylamin, Polythylenimin, Poly-dimethylaminoethylacrylat, Poly-Lysin, Poly-Histidin, Poly-Ornithin, Poly-Arginin, Polyquats (Stärkederivate mit Amino- oder Ammoniumgruppen), sowie Copolymere derselben.

Es wurde aber überraschenderweise gefunden, dass sich auch mit kationischen Liposomen solche Aggregate bilden lassen. Dazu werden stabile kationische Liposomen eingesetzt, die mit anionischen Liposomen kaum fusionieren. Solche Liposomen enthalten kationische Lipide wie beispielsweise:
DAC-Chol 3-β-[N-(N,N'-dimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol
DC-Chol 3-β-[N-(N',N'-dimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol
TC-Chol 3-β-[N-(N',N',N'-trimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol
BGSC Bis-guanidinium-spermidine-cholesterol
BGTC Bis-guanidinium-tren-cholesterol,
DOTAP (1,2-dioleoyloxypropyl)-N,N,N-trimethylammoniumchlorid
DOSPER (1,3-dioleoyloxy-2-(6-Carboxy-spermyl)-propylamid)
DOTMA (1,2-dioleyloxypropyl)-N,N,N-trimethylammoniumchlorid) (Lipofectin^®)
DORIE (1,2-dioleyloxypropyl)-3dimethylhydroxyethylammoniumbromid)
DOSC (1,2-dioleoyl-3-succinyl-sn-glycerlcholinester)
DOGSDSO (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-succinyl-2hydroxyethyldisulfide ornithin),
DDAB Dimethyldioctadecylammoniumbromid
DOGS ((C18)₂GlySper3^–) N,N-dioctadecylamido-glycyl-spermin (Transfectam^®)
(C18)₂Gly⁺ N,N-dioctadecylamido-glycin
DOEPC 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-ethylphosphocholin oder andere O-Alkyl-Phosphatidylcholin oder -ethanolamine,

Bevorzugte kationische Lipide zur Ausführung der Erfindung umfassen Cholesteryl 3β-N-(Dimethyl-aminoethyl)carbamat (DC-Chol), DAC-Chol, (N-[1-(2,3-Dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium Salz (DOTAP).

Die kationischen Liposomen enthalten, neben dem kationischen Lipid selbst, insbesondere Cholesterol und gesättigte neutrale Phosphatidylcholine, bevorzugt DPPC oder DSPC.

Der Anteil der Cholesterole beträgt besonders bevorzugt zwischen 35 und 50 mol%, die kationischen Lipide werden mit 5 bis 20 mol% in der Mischung eingesetzt.

Wirkstoffhaltige anionische Liposomen und das zur Aggregation benutzte Polykation werden bevorzugt in einem Verhältnis von 5:1 bis 1:5 zusammengegeben, wobei sich diese Angabe auf das molare Verhältnis der Ladungsträger bezieht. Besonders bevorzugt sind Mischungen um den Äquivalenzpunkt, also zwischen einem 2:1 und 1:2 Anteil der Komponenten.

Die Nettoladung der Aggregate kann also zwischen negativ, neutral und positiv eingestellt werden.

Die Aggregate formen sich sehr schnell beim einfachen Mischen der 1iposomalen Suspension mit dem Polykation. Es ist daher möglich, die beiden Suspensionen getrennt zu produzieren und zu lagern und sie erst unmittelbar vor der Anwendung zusammen zu führen. Das kann durch einfaches Mischen vor der Injektion erfolgen. In einer besonders bevorzugten Ausführung werden beide Komponenten in einer Doppelkammerspritze geliefert und durch die Injektion gemischt.

Man kann die Aggregate aber auch industriell produzieren und diese Strukturen dann beispielsweise durch Lyophilisation langfristig lagerstabil machen.

Besonders bevorzugt und kontrolliert erfolgt die Herstellung solcher Aggregate in einem kontinuierlichen Flussreaktor, wie er in der WO 01 64330 beschrieben ist. In der genannten Druckschrift wird eine Vorrichtung offenbart, die eine kontinuierliche Bechichtung von Liposomen mit Polyelektrolyten erlaubt.

Die erfindungsgemäße Lehre der Aggregatbildung lässt sich in dieser Maschine besonders gut steuern. Ein besonderer Vorteil der hier offenbarten Methode liegt in der Herstellung grösserer Strukturen, die durch Zusammenführung von vorher steril filtrierbaren Lösungen (Wirkstoffliposome und Polykation) gewonnen werden. Damit lassen sich hohe regulatorische Anforderungen erfüllen.

Anschließend wird die Erfindung an Beispielen weiter erläutert, ohne auf diese Ausführungen begrenzt zu sein.

Beispiel 1
Einschluss von Insulin in Liposomen
Ein Gemisch aus 50 mol% DPPC, 10 mol% DPPG und 40 mol% Chol wird bei 50°C in Chloroform gelöst und anschließend im Rotationsverdampfer im Vakuum vollständig getrocknet. Der Lipidfilm wird mit soviel human-Insulin-Lösung (rekombinantes Insulin) (7,5 mg/ml Insulin in 10 mM Glycin-HCl, 300 mM Sucrose, pH 3) versetzt, dass eine 50 mM Suspension entsteht. Anschließend wird diese Suspension für 45 Minuten im Wasserbad bei 50°C unter Rotieren hydratisiert und für weitere 5 Minuten im Ultraschallbad behandelt. Danach wird die Suspension eingefroren. Es folgen 3 Einfrier- und Auftauprozesse, wobei nach dem Auftauen jeweils eine 5-minütige Behandlung im Ultraschallbad erfolgt.
Nach dem letzten Auftauen werden die Liposomen mehrfach durch eine Membran mit einer Porenweite von 200nm oder 400nm extrudiert (Avestin LiposoFast, Polycarbonat-Membran mit einer Porenweite von 200 oder 400nm). Nach der Extrusion wird die erhaltene Suspension durch Zugabe von Stammlösungen HEPES, pH = 7,5 und NaCl umgepuffert. Nach einer Filtration der Liposomen durch 0,8 μm erfolgt die Abtrennung des nicht-eingeschlossenen Insulins über eine Gelfiltration (5-200-Säule, Pharmacia). Die Menge des eingeschlossenen Insulins wird nach der Freisetzung aus den Liposomen mittels eines ELISA (DRG-ELISA-Kit) bestimmt. Es ergeben sich Einschlussquoten von 50–70% Insulin.
Beispiel 2
Einschluss eines radioaktiv markierten Modellcargos in Liposomen
Ein Gemisch aus 50 mol% DPPC, 10 mol% DPPC und 40 mol% Chol wird bei 50°C in Chloroform gelöst und anschließend im Rotationsverdampfer im Vakuum vollständig getrocknet. Der Lipidfilm wird mit soviel 3H-Inulin-Lösung (18,5 MBq/ml 3H-Inulin in 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7,5) versetzt, dass eine 100 mM Suspension entsteht. Anschließend wird diese Suspension für 45 Minuten im Wasserbad bei 50°C unter Rotieren hydratisiert. Danach wird die Suspension eingefroren.
Nach dem Auftauen werden die Liposomen mehrfach durch eine Membran mit einer Porenweite von 50, 200 oder 400 nm extrudiert (Avestin LiposoFast, Polycarbonat-Membran mit einer Porenweite von 50 nm, 200 nm oder 400 nm). Die Abtrennung des nicht-eingeschlossenen 3H-Inulins erfolgt über eine Gelfiltration (G75-Säule, Pharmacia). Die Menge des eingeschlossenen 3H-Inulins wird nach der Abtrennung im Scintillationszähler bestimmt. Es ergeben sich Einschlussquoten von 20–30% 3H-Inulin.
Analog werden 3H-Inulin gefüllten Liposomen der Zusammensetzung 60 mol% DPPC, 10 mol% DC-Chol und 30 mol% Chol hergestellt (Extrusion durch 200 nm).
Beispiel 3
Aggregation von negativ geladenen Liposomen mit positiv geladenen Polymeren und positiv geladenen Liposomen
Je 2 mL der aus Beispiel 2 erhaltenen Liposomen der Zusammensetzung 50 mol% DPPC, 10 mol% DPPG und 40 mol% Chol (Extrusion durch 100 oder 200 nm) werden im Anschluß an die Gelfiltration mit einer Lösung der Polymere PLL oder Chitosan oder mit kationischen Leerliposomen der Zusammensetzung 60 mol% DPPC, 10 mol% DC-Chol und 30 mol% Chol in einem Röhrchen schnell gemischt:
Tabelle 1: Aggregation von negativen Liposomen mit verschiedenen positiven Polymeren bzw. Liposomen
Beispiel 4
Einsatz von liposomalen Depotsystemen im Tiermodell
Negativ geladene Liposomen (3H-Inulin-Cargo), die mit positiven Polymeren oder Liposomen aggregiert wurden (vgl. Beispiel 2 und 3), wurden in einer Konzentration von 12,5 mM in Lipid in einem Volumen von 0,5 mL subkutan in gesunde Ratten injiziert. Eine Kontrollprobe mit Leerliposomen und 3H-Inulin wurde ebenfalls in einem Volumen von 0,5 mL subkutan verabreicht. Die pharmakokinetischen Daten wurden durch Blutabnahmen zu verschiedenen Zeitpunkten und anschliessende Scintillationsmessungen bestimmt. Die gesamte Versuchsdauer der Tierstudie betrug 2 Wochen. Nur bei zwei Formulierungen zeigten die Tiere laut Befundung leichte, lokale adverse Reaktionen (Rötungen an der Injektionsstelle), die aber nach spätestens 10 Tagen abgeheilt waren. Das Allgemeinbefinden aller Tiere war über die Versuchsdauer gut. Die Formulierungen und die relativen Bioverfügbarkeiten bis t = 336 h sind in folgender Tabelle dargestellt:
Abbildungen
Abbildung 1 Vergleich der liposomalen Depotsysteme der vorliegenden Erfindung mit der injizierten Kontrollprobe im Tiermodell

Claims

Abgabesystem zur verzögerten Wirkstofffreisetzung, dadurch gekennzeichnet, dass es Liposomen enthaltend neutrale und anionische Lipide, ein kationisches Polymer, sowie einen Wirkstoff umfasst.
Abgabesystem nach dem vorgehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass der Wirkstoff ein therapeutisches Peptid oder Protein umfasst.
Abgabesystem nach einem der vorgehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Wirkstoff zu mindestens 90% im Liposom eingeschlossen ist und weniger als 10% sich außerhalb des Liposoms befindet.
Abgabesystem zur verzögerten Wirkstofffreisetzung nach einem der vorgehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Abgabe des Wirkstoffes mindestens 1 Woche anhält.
Abgabesystem nach den vorgehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, dass die Liposomen – aus gesättigten synthetischen Phosphatidylcholinen, ausgewählt aus der Gruppe DMPC, DPPC und/oder DSPC, – aus Cholesterol, – die anionischen Lipide ausgewählt aus der Gruppe DPPG, DPPS, DPPA, CHEMS zusammengesetzt sind.
Abgabesystem nach den vorgehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, dass die Liposomen zwischen 5 und 20 mol% anionische Lipide und zwischen 35 und 50 mol% sterolbasierte Lipide enthalten.
Abgabesystem nach einem der vorgehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Größe der Liposomen variiert von 20–1000 nm, insbesondere von 50–800 nm, bevorzugt von 100–500 nm und ganz besonders bevorzugt von 200–400 nm.
Abgabesystem nach den vorhergehenden Ansprüchen, dadurch gekennzeichnet, dass das kationische Polymere aus der Gruppe von Chitosan, Poly-Dimethyldiallylammoniumchlorid, Poly-allylamin, Polythylenimin, Poly-dimethylaminoethylacrylat, Poly-Lysin, Poly-Histidin, Poly-Ornithin, Poly-Arginin, Polyquats, sowie Copolymere derselben ausgewählt ist.
Verfahren zur Herstellung eines liposomalen Depots aus anionischen Lipiden dadurch gekennzeichnet, dass – Liposomen in Gegenwart von Wirkstoff hergestellt werden, wobei bei einem pH-Wert gearbeitet wird, bei welchem der Peptid- oder Proteinwirkstoff in einem kationischen Ladungszustand vorliegt, – nichteingeschlossener, überschüssiger Wirkstoff von den Liposomen abgetrennt wird. – Die wirkstoffhaltigen Liposomen mit einer wässrigen Lösung von kationischem Polymer gemischt werden.
Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Liposomen im molaren Ladungsträgerverhältnis von 5:1 bis 1:5, bevorzugt von 2:1 bis 1:2 mit dem Polykation gemischt werden.
Abgabesystem nach Anspruch 1–7, dadurch gekennzeichnet, dass es statt kationischen Polymeren, kationische Liposomen umfasst.
Abgabesystem nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass die kationischen Liposomen, neben dem kationischen Lipid selbst, insbesondere Cholesterol und gesättigte neutrale Phosphatidylcholine, bevorzugt DPPC oder DSPC enthalten.
Abgabesystem nach Anspruch 11 und 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Anteil der Cholesterole zwischen 35 und 50 mol% beträgt, die kationischen Lipide zwischen 5 und 20 mol% in der Mischung enthalten sind.
Verfahren nach Anspruch 9 und 10, dadurch gekennzeichnet, dass es statt kationischen Polymeren, kationische Liposomen umfasst.
Verwendung des Abgabesystems nach einem der vorhergehenden Ansprüche zur Herstellung eines Arzneimittels.
Verwendung des Abgabesystems nach einem der vorhergehenden Ansprüche zur subkutanen oder intramuskulären Applikation.