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Die
Erfindung betrifft die Verwendung von Verbindungen der allgemeinen
Formel (I) insbesondere von N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
zur Behandlung von Malaria.
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Malaria
ist eine Tropenkrankheit, an der weltweit jährlich 1,5 bis 2,7 Millionen
Menschen sterben. Humanpathogen sind die Malaria-Erreger Plasmodium
falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale und Plasmodium malariae,
die die verschiedenen Formen der Malaria, Malaria tropica, Malaria
tertiana und Malaria quartana, auslösen können. Die durch Plasmodium
falciparum hervorgerufene Malaria tropica ist die schwerste humane
Verlaufsform der Malaria.
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Im
Stand der Technik sind verschiedene Wirkstoffe bekannt, die zur
medikamentösen
Prophylaxe oder Therapie der Malaria am Menschen eingesetzt werden.
Beispielsweise wird das Chemotherapeutikum Chloroquin aufgrund seiner
relativ guten Verträglichkeit
vielfach zur Behandlung eingesetzt. Aufgrund der häufigen und
gegebenenfalls wiederholten Anwendung haben Malariaerreger, insbesondere
der hoch pathogene Erreger Plasmodium falciparum jedoch insbesondere
gegen Chloroquin eine Resistenz entwickelt. Resistenzen von Malariaerregern
bestehen ebenfalls gegen andere Malariamittel wie Pyrimethamine.
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Daher
besteht ein Bedarf an neuen Malariamitteln. Insbesondere besteht
ein Bedarf an einem Malariamittel, dass die zunehmende Schwierigkeit
bei der Bekämpfung
der Malaria aufgrund der Resistenzentwicklung von Plasmodium falciparum
gegen bekannte Malariamittel überwindet.
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Es
bestand daher die Aufgabe, neue Chemotherapeutika gegen Malaria
zur Verfügung
zu stellen.
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Diese
Aufgabe wird gelöst
durch die Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
wie nachstehend angegeben:
worin:
Z ist H oder
weist nachstehende Formel (II) auf:
Y
1, Y
2 sind jeweils
unabhängig
voneinander ausgewählt
aus der Gruppe umfassend O, S und/oder weisen nachstehende Formel
(III) auf:
R
1,
R
2 sind jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus
der Gruppe umfassend H, C
1-C
5-Alkyl,
C
1-C
5-Alkyloxy,
CF
3 und/oder CN;
m ist eine ganze Zahl
von zwischen 1 und 10;
n ist 1, 2 oder 3;
o ist 1, 2 oder
3,
und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch
verträgliche
Salze zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen und/oder
prophylaktischen Behandlung von Malaria.
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Die
Wiedergabe des Strukturelements Y1, Y2 gemäß der Formel
(III) umfasst jede Orientierung des Strukturelements in einer Verbindung,
beispielsweise ausgewählt
aus -(-CO-NH-)-
und/oder -(-NH-CO-)- wie beispielsweise anhand der Formel (IV) ersichtlich
ist.
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In
bevorzugten Ausführungsformen
weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen
ein Strukturelement Z gemäß der nachstehende
Formel (IV) auf:
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In
weiterhin bevorzugten Ausführungsformen
der erfindungsgemäßen Verbindungen
sind die Strukturelemente R1 und R2 jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus
der Gruppe umfassend H und/oder Methyl. In weiterhin bevorzugten
Ausführungsformen
ist m vorzugsweise 2, 3 oder 8, bevorzugt 8. In weiterhin noch bevorzugten
Ausführungsformen
ist n 1 oder 2, besonders bevorzugt ist n 2. In weiter bevorzugten
Ausführungsformen
ist o 1 oder 2, besonders bevorzugt ist o 2.
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In
bevorzugten Ausführungsformen
ist eine Verbindung gemäß der allgemeinen
Formel (V) wie nachstehend angegeben:
worin:
R
1, R
2 sind jeweils
unabhängig
voneinander ausgewählt
aus der Gruppe umfassend H, C
1-C
5-Alkyl,
C
1-C
5-Alkyloxy,
CF
3 und/oder CN;
m ist 1, 2, 3, 4,
5, 6, 7, 8, 9 oder 10;
n ist 1, 2 oder 3, und/oder
o ist
1, 2 oder 3,
und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie
deren pharmazeutisch verträgliche
Salze zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen und/oder
prophylaktischen Behandlung von Malaria verwendbar.
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Die
erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen besitzen die überraschende
Eigenschaft, eine nur geringe oder vernachlässigbare Toxizität bei der
Verabreichung aufzuweisen. Dies bedeutet einen großen Vorteil
gegenüber
bekannten Wirkstoffen gegen Malaria, die oftmals unangenehme oder
physiologisch oder psychisch belastende Nebenwirkungen zeigen wie
im Falle von Mefloquin.
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In
bevorzugten Ausführungsformen
sind die Gruppen R1 und R2 jeweils
unabhängig
voneinander ausgewählt
aus der Gruppe umfassend H und/oder Methyl. In weiterhin bevorzugten
Ausführungsformen
ist m vorzugsweise 2, 3 oder 8, bevorzugt 8. Vorzugsweise ist n
1 oder 2, besonders bevorzugt ist n 2. Bevorzugt ist o 1 oder 2,
besonders bevorzugt ist o 2.
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Besonders
bevorzugt ist die Verwendung der Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen
Formel (VI):
N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon),
und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch
verträgliche
Salze, zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen und/oder
prophylaktischen Behandlung von Malaria.
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Die
Verbindung gemäß der Formel
(VI), N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamidtetrakis(amidinohydrazon),
wird auch als N,N'-Bis(3,5-bis(1-((aminoiminomethyl)hydrazon)ethyl)phenyl)-decandiamid
bezeichnet.
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Es
wurde überraschend
gefunden, dass insbesonere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
im Zellkulturmodell gegenüber
Plasmodium falciparum zu einem anti-plasmodialen Effekt führen konnte.
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Vorteilhafterweise
verwendbar sind die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen,
insbesondere die Verbindung N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamidtetrakis(amidinohydrazon)
bei Malaria bei Mensch und Tier, beispielsweise bei Nagern.
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Ein
besonderer Vorteil der erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen,
insbesondere der Verbindung N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
ist, dass die Verbindungen insbesondere auch für die prophylaktische Verwendung
zur Vermeidung einer Malariaerkrankung verwendbar sind. Hierdurch
ergibt sich nicht nur die Möglichkeit
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen, insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon),
zur Behandlung einer bereits bestehenden Malaria zu verwenden sondern
auch deren prophylaktischer Einsatz in der Malariavorsorge.
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Unter
dem Begriff "prophylaktische
Behandlung" wird
im Sinne der vorliegenden Erfindung insbesondere verstanden, dass
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
prophylaktisch verabreicht werden können, bevor Symptome einer
Malaria auftreten oder die Gefahr einer Erkrankung besteht. Insbesondere
wird unter einer "prophylaktischen
Behandlung" eine
so genannte Chemoprophylaxe, das heißt eine medikamentöse Vorbeugung
verstanden. Ein besonderer Vorteil der Verwendung ergibt sich daraus,
dass eine Vorbeugung auch bei Resistenz gegen bekannte Wirkstoffe
wie Chloroquin ermöglicht
wird. Insbesondere ist von Vorteil, dass eine zerebrale Malaria
durch eine prophylaktische Behandlung verhindert werden kann.
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Unter
dem Begriff "Resistenz" ist im Sinne der
vorliegenden Erfindung das Nichtansprechen eines Medikamentes oder
Wirkstoffs entweder bei einem Patienten (in vivo-Resistenz) oder
unter Laborbedingungen bei den Parasiten bzw. Malariaerregern direkt
(in-vitro-Resistenz) zu verstehen.
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Vorteilhafter
Weise sind die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen und/oder
prophylaktischen Behandlung von Malaria bei Malaria-Erregern, die
gegen bekannte Malariamittel vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe umfassend
Chinin, Chloroquin, Mefloquin, Primaquin, Pyrimethamine, Cycloguanil,
Trimethoprim, Sulfadoxin und/oder Dapson, insbesondere Chloroquin,
resistent sind, verwendbar.
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Von
besonderem Vorteil ist hierbei, dass die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen
und/oder prophylaktischen Behandlung von Malariaerregern mit Resistenzen
gegen Malariamittel ausgewählt
aus der Gruppe umfassend Chloroquin, Mefloquin, Pyrimethamine und/oder
Sulfadoxin, insbesondere Chloroquin, verwendbar sind.
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Insbesondere
sind die zur Verfügung
gestellten Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch
verträgliche
Salze, zur Herstellung eines Arzneimittels zur therapeutischen und/oder
prophylaktischen Behandlung von chloroquinresistenten Malariaerregern
verwendbar.
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Vorteilhafter
Weise können
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
in in vitro-Experimenten
eine positive Wirkung auf mit Plasmodien infizierter Erythrocyten
zeigen. So kann die Anzahl mit Plasmodien infizierter Erythrocyten
deutlich vermindert werden. Experimentell konnte festgestellt werden,
dass beispielsweise die Wirksamkeit bei der Senkung der Parasitämie im Vergleich
zu Alpha-Difluoromethylornithin, einem Protozoenmittel, höher war.
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Vorteilhafterweise
verwendbar sind insbesondere pharmazeutisch verträgliche Additionssalze
der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere von N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
von N,N'-Bis(3,5diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon),
beispielsweise Säureadditionssalze,
insbesondere mit anorganischen Säuren
wie Salzsäure,
Schwefelsäure
oder Phosphorsäure,
oder mit geeigneten organischen Carbon- oder Sulfonsäuren, oder
mit Aminosäuren.
Insbesondere vorteilhaft verwendbar ist N,N'-Bis(3,5diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)-tetrahydrochlorid.
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Ein
weiterer erheblicher Vorteil der erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen
insbsondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
liegt darin, dass ebenfalls eine antivirale Wirkung, beispielsweise
gegen eine HIV-Infektion, zur Verfügung gestellt werden kann.
Insbesondere tritt eine Malariainfektion häufig als Coinfektion mit einer
HIV-Infektion auf, so dass ein besonderer Vorteil durch die Ermöglichung
einer Therapie mit nur einer Verbindung ermöglicht wird.
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Die
verwendbaren Verbindungen sind allein oder in Kombination mit bekannten
Substanzen zur Behandlung von Malaria verwendbar.
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Vorteilhafterweise
können
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
eine nur geringe oder vernachlässigbare Toxizität bei der
Verabreichung aufweisen. Bevorzugte Dosierungen der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen liegen für
die Verabreichung an Menschen im Bereich ≥ 1 mg/Tag/kg Körpergewicht
bis ≤ 1 g/Tag/kg Körpergewicht,
vorzugsweise im Bereich von ≤ 5
mg/Tag/kg Körpergewicht
bis ≤ 500
mg/Tag/kg Körpergewicht.
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Vorteilhafter
Weise können
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen eine nur geringe oder vernachlässigbare Toxizität bei der
Verabreichung aufweisen. Dies ermöglicht beispielsweise eine
langfristige Verabreichung, insbesondere eine tägliche Verabreichung. Dies
ermöglicht
nicht nur, die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen zur Behandlung von bereits mit Malaria infizierten
Menschen und/oder Tieren zu verwenden, sondern auch eine prophylaktische
Verabreichung, insbesondere an Menschen. Eine Verabreichung kann
in einer oder mehreren Dosen pro Tag erfolgen.
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Die
erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
sind entsprechend üblichen
Methoden verabreichbar. Bevorzugt ist eine orale oder parenterale
Verabreichung, besonders bevorzugt ist eine intravenöse Verabreichung.
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Bevorzugte
Dosierungen der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
liegen für
die orale Verabreichung an Menschen im Bereich ≥ 50 mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o. bis ≤ 1
g/Tag/kg Körpergewicht
p.o., vorzugsweise im Bereich von ≥ 100
mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o. bis ≤ 250
mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o., noch vorzugsweise im Bereich von ≥ 250 mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o. bis ≤ 750
mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o., besonders bevorzugt im Bereich von 400 mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o. bis ≤ 600
mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o., ganz besonders bevorzugt im Bereich von 500 mg/Tag/kg Körpergewicht
p.o..
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Eine
orale Verabreichung kann vorzugsweise in einem Behandlungszeitraum
von 8 Wochen in einer Dosierung von 60 mg an 3 aufeinanderfolgenden
Tagen erfolgen.
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Bevorzugte
Dosierungen der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
liegen für
die intramuskuläre
Verabreichung an Menschen im Bereich ≥ 1 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m. bis ≤ 50
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m., vorzugsweise im Bereich von ≥ 2
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m. bis ≤ 20
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m., besonders bevorzugt im Bereich von 5 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m. bis ≤ 10
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m., ganz besonders bevorzugt im Bereich von 7,5 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.m..
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Bevorzugte
Dosierungen der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
liegen für
die intravenöse
Verabreichung an Menschen im Bereich von ≥ 1 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v. bis ≤ 150
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v., vorzugsweise im Bereich von ≥ 5
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v. bis ≤ 100
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v., noch vorzugsweise im Bereich von ≥ 10 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v. bis ≤ 60
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v., besonders bevorzugt im Bereich von 20 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v, bis ≤ 40
mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v., ganz besonders bevorzugt im Bereich von 30 mg/Tag/kg Körpergewicht
i.v..
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Eine
Verabreichung der erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
kann vorzugsweise in einem geringeren Behandlungszeitraum erfolgen
als mit bekannten Monopräparaten.
Der Behandlungszeitraum insbesondere für eine prophylaktische Behandlung,
beispielsweise vor, während
und/oder nach einem möglichen
Kontakt mit Erregern, kann insgesamt mehrere Wochen, vorzugsweise
im Bereich von einer Woche bis 10 Wochen, bevorzugt im Bereich von
2 Wochen bis 8 Wochen betragen. Es kann bevorzugt sein, dass eine
prophylaktische Behandlung bereits mehrere Wochen, beispielsweise
1 Woche bis 4 Wochen vor einem möglichen
Kontakt mit Erregern begonnen wird.
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Von
besonderem Vorteil ist, dass die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen
insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
bereits eine Schutzwirkung zur Verfügung stellen können, wenn
die Verbindung in einem Zeitraum von mehreren Tagen, beispielsweise
im Bereich von 10 Tagen bis 5 Tage vor einem möglichen Kontakt mit Erregern
verabreicht werden. Dies kann insbesondere einen Vorteil gegenüber Wirkstoffen
zur Verfügung
stellen, die mindestens eine bis 4 Wochen vor einem möglichen
Kontakt und weiterhin mehrere Wochen nach einem möglichen
Kontakt verabreicht werden müssen.
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Weiterhin
können
die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen bereits bei geringeren Konzentrationen eine positive
Wirkung gegenüber
Malaria, insbesondere eine schützende
Wirkung aufweisen aufweisen, als bekannte Wirkstoffe.
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Angegebene
Dosierungen pro Tag und kg Körpergewicht
sind in Form einer Einzeldosis verabreichbar oder in Form von mehreren
Dosen verabreichbar.
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In
bevorzugten Ausführungsformen
ist das Arzneimittel für
die intravenöse
Verabreichung formuliert. Bevorzugt sind sterile Suspensionen zur
parenteralen Verabreichung, insbesondere zur intravenösen Injektion.
Insbesondere für
Injektionslösungen
sind Hilfsstoffe und/oder Lösemittel,
vorzugsweise ausgewählt
aus der Gruppe umfassend Dimethylsulfoxid (DMSO), Alkohole, bevorzugt
mehrwertige Alkohole, vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe umfassend
Glycerol und/oder Propylenglykol und/oder pflanzliche Öle geeignet. Ein
besonders bevorzugtes Lösemittel
ist Glycerol. Von besonderem Vorteil ist, dass durch die Verwendung von
Glycerol als Lösemittel
eine deutliche Verbesserung der Verträglichkeit zur Verfügung gestellt
werden kann. Insbesondere gegenüber
Lösemitteln,
die zelltoxische Wirkungen zeigen, kann durch die Verwendung von
Glycerol eine Zellschädigung
vermieden werden. Ein bevorzugt verwendbarer Alkohol ist Mannitol,
insbesondere bevorzugt verwendbar ist eine 1%-ige Mannitollösung.
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Überraschend
konnte festgestellt werden, dass die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen, insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
eine antiplasmodiale Wirkung zur Verfügung stellen kann. Vorteilhafterweise
ist die Verbindung N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
zur Behandlung von Malaria, ausgelöst durch Erreger ausgewählt aus
der Gruppe umfassend Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium
ovale, Plasmodium malariae und/oder Plasmodium berghei verwendbar.
Plasmodium berghei ist ein Erreger von Nagetiermalaria.
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Insbesondere
ist von Vorteil, dass die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen
insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
einen Schutz gegen zerebrale Malaria zur Verfügung stellen kann. Von ganz
besonderem Vorteil ist, dass durch die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen
ein Ausbruch von zerebraler Malaria verhindert werden kann.
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Die
Malariaerkrankungen, die mit den erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen
insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
behandelt werden können,
sind insbesondere ausgewählt
aus der Gruppe umfassend Malaria tropica, Malaria tertiana und/oder
Malaria quartana. Insbesondere sind die erfindungsgemäß verwendbaren
Verbindungen insbesondere N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamidtetrakis(amidinohydrazon)
zur Behandlung von Malaria tropica geeignet.
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Beispiele,
die der Veranschaulichung der vorliegenden Erfindung dienen, sind
nachstehend angegeben.
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Beispiel 1
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In vitro-Behandlung von Plasmodium falciparum
mit N,N'-Bis(3,5diacetylphenyl)-
decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
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Kulturen
von Plasmodium falciparum des Stammes NF54 (Malaria Stock Center,
NIH) wurden auf eine Parasitämie
von 1,5% in einer angereicherten menschlichen Erythrozytensuspension
(Serum A+) eingestellt. Aliquots von 200 μl wurden
in 2 ml RPMI-Medium (Firma Sigma/Aldrich) mit 25 mM HEPES, 20 mM
Natriumbicarbonat und hitzeinaktiviertem menschlichem Serum bei
einen Hämatocritwert
von 10% suspendiert und in 12 well-Kulturschalen bei 37°C in einem
Inkubator nach der "Candle
Jar Methode" bei
37°C unter
Begasung mit einem Gemisch aus 90% Stickstoff, 5% Sauerstoff und
5% Kohlendioxid inkubiert. Die Kulturen wurden für vier Tage mit 50 μM, 100 μM oder 200 μM der Verbindung
N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
kultiviert. Während
dieser Zeit wurde das Medium täglich
gewechselt und die entsprechende Menge N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamidtetrakis(amidinohydrazon)
dem Medium zugesetzt.
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Die
Parasitämie
wurde täglich
durch Auszählung
von 1000 Erythrozyten, die mittels Giemsa (Firma Merck, Darmstadt)
angefärbt
waren, bestimmt. Negativkontrollen wurden ohne Zugabe von N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
kultiviert, während
weitere Kulturen in Anwesenheit von 0,01 μM Chloroquin kultiviert wurden.
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Als
negative Kontrolle dienen unbehandelte Kulturen, als positive Kontrolle
dienten Kulturen, die unter Versuchsbedingungen mit 0,01 μM des bekannten
Malariamittels Chloroquin behandelt wurden.
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Es
zeigte sich, dass die Parasitämie
bei Konzentrationen von 100 μM
und 200 μM
am zweiten Tag nach der Infektion auf 0 oder beinah auf 0 zurück gegangen
war, während
dieser Effekt bei Chloroquin mit einer Konzentration 0,01 μM am dritten
Tag auftrat. Bereits am ersten Tag entsprach die Parasitämie bei
Verwendung von 50 μM
N,N'Bis(3,5diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
in etwa der mit 0,01 μM Chloroquin
behandelten Kulturen, während
die mit 100 μM
oder 200 μM
behandelten Kulturen circa die Hälfte an
Parasiten gegenüber
der Chloroquin-Behandlung aufwiesen.
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Beispiel 2
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Versuche zur Überlebenszeit von mit N,N'-Bis(3,5diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
behandelten Mäusen
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Verwendet
wurden C57BL/6 Mäuse,
die mit dem Malariaerreger Plasmodium berghei ANKA Stamm (Malaria
Stock Center, NIH) infiziert wurden. Der Malariaerreger des Plasmodium
berghei-Stamms entwickelt in den C57BL/6 Mäusen aufgrund eines immunologischen
Defektes die zerebrale Malaria und eignet sich daher als Tiermodell
der zerebralen Malaria.
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Der
ANKA Stamm wurde periodisch im Moskito Anopheles stephensi gehalten.
Dauerkulturen in Erythrozyten, die in flüssigem Stickstoff eingefroren
waren, wurden zur Infektion von 2–3 Mäusen verwendet. Die Parasiten
wurden erneut einer Mauspassage unterworfen. Zwei Tage später nahmen
die Stechmücken
eine Blutmahlzeit. Nach 21 Tagen wurden die Speicheldrüsen präpariert
um die Sporozoiten zu isolieren. 500 Sporozoiten suspendiert in
200 μl Phosphatpuffer
wurden neuen Wirts-Mäusen
intravenös
injiziert und diesen wurden parasitierte Erythrozyten entnommen.
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Am
ersten Versuchstag erhielten die Mäuse N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamidtetrakis(amidinohydrazon)-tetrahydrochlorid
einer Konzentration von 4 mg/kg, suspendiert in DMSO mittels intravenöser Injektion
verabreicht. Die Behandlung wurde jeden zweiten Tag wiederholt.
Es wurden jeweils vier Mäuse
behandelt und fünf
Kontrolltieren in gleicher Weise Lösemittel injiziert.
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Am
fünften
Versuchstag wurden die C57BL/6-Mäuse
mit Plasmodium berghei ANKA Stamm infiziert. Dazu wurden 50.000
parasitierte Erythrozyten mit 20% Parasitämie den zu behandelnden Mäusen sowie
den Kontrollmäusen
intravenös
injiziert.
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Es
zeigte sich, dass die mit N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
behandelten Mäuse
den Ausbruch einer zerebralen Malaria zwischen dem sechsten und
zehnten Tag nach der Infektion überlebten,
während
vier der Kontrolltieren während
dieser Zeit starben. N,N'-Bis(3,5-diacetylphenyl)decandiamid-tetrakis(amidinohydrazon)
kann somit einen deutlichen Schutz vor zerebraler Malaria zur Verfügung stellen.