DD255001A1 - METHOD FOR OBTAINING A MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST PROTEIN P24 OF THE BOVINE ELECTRIC VIRUS (BLV) - Google Patents

METHOD FOR OBTAINING A MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST PROTEIN P24 OF THE BOVINE ELECTRIC VIRUS (BLV) Download PDF

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DD255001A1
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Cornelia Platzer
Helga Roessler
Cornelia Groebel
Sinaida Rosenthal
Walter Malz
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Akad Wissenschaften Ddr
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Abstract

Ziel der Erfindung ist die Herstellung eines monoklonalen Antikoerpers gegen das Protein p24 aus BLV. Das erfindungsgemaesse Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man Myelomzellen mit Milzzellen von Maeusen, die mit BLV immunisiert wurden, mit Hilfe von PEG fusioniert. Die antikoerperproduzierenden Hybridzellen werden in bekannter Weise selektiert, kloniert und zur Antikoerperproduktion in vitro oder in vivo vermehrt. Mit dem erfindungsgemaessen Verfahren koennen monoklonale Antikoerper gegen das Protein p24 aus BLV hergestellt werden. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die Biologie, Veterinaermedizin, Landwirtschaft und Biotechnologie.The aim of the invention is the production of a monoclonal antibody against the protein p24 from BLV. The method according to the invention is characterized in that myeloma cells are fused with spleen cells of mice which have been immunized with BLV by means of PEG. The antibody-producing hybrid cells are selected in a known manner, cloned and propagated for antibody production in vitro or in vivo. With the method according to the invention, monoclonal antibodies against the p24 protein can be produced from BLV. Field of application of the invention is biology, veterinary medicine, agriculture and biotechnology.

Description

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung monoklonaler Antikörper gegen Proteine des Rinderleukämievirus (BLV). Es wird insbesondere die Herstellung eines monoklonalen Antikörpers (mAK) gegen das Hauptstrukturprotein des BLV p24 beschrieben. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die Veterinärmedizin, Landwirtschaft, Biotechnologie und Biologie.The invention relates to a method for obtaining monoclonal antibodies against proteins of bovine leukemia virus (BLV). In particular, the production of a monoclonal antibody (mAb) against the major structural protein of BLV p24 is described. Fields of application of the invention are veterinary medicine, agriculture, biotechnology and biology.

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Antikörper gegen Proteine können durch Immunisierung geeigneter Versuchtstiere gewonnen werden.Antibodies to proteins can be obtained by immunization of suitable experimental animals.

Werden Mäuse immunisiert, so können nach Fusion der Milzzellen mit geeigneten Myelomzellen mit Hilfe von Polyäthylenglykol (PEG) Hybridome, die mAK produzieren, gewonnen werden. Entsprechend dieser Methode wurden bereits mAK gegen das Hüllprotein gp51 aus BLV hergestellt (Bruck, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C., Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A. Virology 122 [1982] 342-352). Ein mAK gegen das Protein p24 aus BLV ist bisher aus der Literatur nicht bekannt.If mice are immunized, after fusion of the spleen cells with suitable myeloma cells using polyethyleneglycol (PEG) hybridomas, which produce mAb, can be obtained. According to this method, mAbs have already been prepared against the envelope protein gp51 from BLV (Bruck, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C., Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A Virology 122 [1982] 342-352). An mAb against the protein p24 from BLV is not known from the literature.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Erfindung hat das Ziel, einen mAK gegen das Protein p24 des BLV mit guter Bindungsfähigkeit und hoher Spezifität herzustellen.The aim of the invention is to produce a mAb against the BLV protein p24 with good binding ability and high specificity.

Darlegung des Wesens der Erfindung »Explanation of the essence of the invention »

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung eines mAK gegen das Protein p24aus BLV ist dadurch gekennzeichnet, daß man Mäuse mit gereinigtem BLV immunisiert, die Milzzellen entnimmt und mit Hilfe von PEG mit Myelomzellen fusioniert. Die fusionierten Zellen werden in Mikrotestplatten ausgesät, die BLV-p24-spezifischen antikörperproduzierenden Hybridzellen mit Hilfe des radioaktiven Bindungstestes selektiert, kloniert, weitervermehrt und ggf. in flüssigem Stickstoff gelagert und zur Produktion der mAK in bekannter Weise in vitro oder in vivo kultiviert.The process according to the invention for producing an mAb against the protein p24 from BLV is characterized in that mice are immunized with purified BLV, the spleen cells are removed and fused with myeloma cells by means of PEG. The fused cells are seeded in microtest plates, the BLV p24-specific antibody-producing hybrid cells selected by means of the radioactive binding assay, cloned, further increased and optionally stored in liquid nitrogen and cultured in a known manner in vitro or in vivo for the production of the mAb.

Man gewinnt den mAK gegen das Protein p24 des BLV durch Kultivierung des Hybridoms Nr. 0137 der Nationalen Liste.The mAb is raised against the BLV protein p24 by culturing the hybrid list No. 0137 of the National List.

Der mAK gegen das Protein p24des BLV ist gekennzeichnet durch eine hohe Affinität gegenüber p24. Er gehört der Immunglobulinsubklasse lgG2a an und reagiert mit p24aus BLV (Western Blot, Immunpräzipitation mit 125J-markiertem p24) und mit mikrobiell in gentechnisch manipulierten Mikroorganismen synthetisiertem p24-Derivat (Western Blot mit E.coli-pEX-Rekombinante, die das Expressionsplasmid pGAG46-200 enthält).The mAb against the protein p24 of the BLV is characterized by a high affinity to p24. It belongs to the immunoglobulin subclass IgG2a and reacts with p24 from BLV (Western Blot, immunoprecipitation with 125J-labeled p24) and p24 derivative synthesized microbially in genetically engineered microorganisms (Western Blot with E. coli pEX recombinant containing the expression plasmid pGAG46). 200 contains).

Ausführungsbeispiel 1. Balb/c-Mäuse wurden mit dem aus Zellkulturüberstand permanent infizierten FLK-Zeilen gereinigten BLV immunisiert. 2. Vitale p3-X63/Ag8-Myelomzellen wurden mit Milzzellen der immunisierten Tiere mit Hilfe von PEG fusioniert. Kultivierung und Klonierung erfolgte entsprechend den üblichen Methoden. 3. Die Selektion der Antikörper produzierenden Hybridome erfolgte mit einem Flüssigphasen-Radioimmuntest unter Verwendung von 125J-markiertem p24-Protein aus BLV und Anti-Maus-Antikörpern aus Kaninchen, mit dem nur Anti-p24-Antikörper erfaßt werden. 4. Das Hybridom, das Antikörper gegen Protein p 214 aus BLV stabil produziert, wurde in bekannter Weise in flüssigem Stickstoff eingefroren und zur Antikörpergewinnung in vitro oder in vivo weitervermehrt.Exemplary Embodiment 1. Balb / c mice were immunized with BLV purified from cell culture supernatant of permanently infected FLK cells. 2. Vital p3-X63 / Ag8 myeloma cells were fused with spleen cells of the immunized animals using PEG. Cultivation and cloning were carried out according to the usual methods. 3. The selection of the antibody-producing hybridomas was carried out by a liquid-phase radioimmunoassay using 125J-labeled p24 protein from BLV and rabbit anti-mouse antibodies, with which only anti-p24 antibodies are detected. 4. The hybridoma which stably produces antibody to protein p 214 from BLV was frozen in liquid nitrogen in a known manner and further amplified for antibody recovery in vitro or in vivo.

Claims (4)

1. Balb/c-Mäuse wurden mit dem ausZellkulturüberstand permanent infizierten FLK-Zellen gereinigten BLV immunisiert.1. Balb / c mice were immunized with BLV purified from cell culture supernatant of permanently infected FLK cells. 1. Verfahren zur Gewinnung eines monoklonalen Antikörpers, der mit ρ24 aus BLV und biosynthetisch und peptidchemisch hergestelltem p24-Derivat reagiert, dadurch gekennzeichnet, daß Myelomzellen mit Milzzellen von Mäusen, die mit BLV immunisiert wurden, mit Hilfe von PEG fusioniert werden, das anti-p24-antikörperproduzierende Hybridom in an sich bekannter Weise selektiert, kloniert und für die Antikörperproduktion in vivo oder in vitro vermehrt wird.1. A method for obtaining a monoclonal antibody which reacts with ρ24 from BLV and biosynthetically and peptidochemically prepared p24 derivative, characterized in that myeloma cells are fused with spleen cells of mice which have been immunized with BLV by means of PEG, the anti- p24 antibody-producing hybridoma is selected in a conventional manner, cloned and propagated for antibody production in vivo or in vitro. 2. Vitale p3-X63/Ag8-Myelomzellen wurden mit Milzzellen der immunisierten Tiere mit Hilfe von PEG fusioniert. Kultivierung und Klonierung erfolgte entsprechend den üblichen Methoden.2. Vital p3-X63 / Ag8 myeloma cells were fused with spleen cells of the immunized animals using PEG. Cultivation and cloning were carried out according to the usual methods. 2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Produktion von monoklonalen Antikörpern gegen das Protein ρ24 aus BLV das Hybridon Nr. 0137 eingesetzt wird.2. The method according to item 1, characterized in that for the production of monoclonal antibodies against the protein ρ24 from BLV, the hybrid no. 0137 is used. Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung monoklonaler Antikörper gegen Proteine des Rinderleukämievirus (BLV). Es wird insbesondere die Herstellung eines monoklonalen Antikörpers (mAK) gegen das Hauptstrukturprotein des BLV p24 beschrieben. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die Veterinärmedizin, Landwirtschaft, Biotechnologie und Biologie.The invention relates to a method for obtaining monoclonal antibodies against proteins of bovine leukemia virus (BLV). In particular, the production of a monoclonal antibody (mAb) against the major structural protein of BLV p24 is described. Fields of application of the invention are veterinary medicine, agriculture, biotechnology and biology. Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions Antikörper gegen Proteine können durch Immunisierung geeigneter Versuchtstiere gewonnen werden. Werden Mäuse immunisiert, so können nach Fusion der Milzzellen mit geeigneten Myelomzellen mit Hilfe von Polyäthylenglykol (PEG) Hybridome, die mAK produzieren, gewonnen werden. Entsprechend dieser Methode wurden bereits mAK gegen das Hüllprotein gp51 aus BLV hergestellt (Brück, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C, Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A. Virology 122 [1982] 342-352). Ein mAK gegen das Protein p24 aus BLV ist bisher aus der Literatur nicht bekannt.Antibodies to proteins can be obtained by immunization of suitable experimental animals. If mice are immunized, after fusion of the spleen cells with suitable myeloma cells using polyethyleneglycol (PEG) hybridomas, which produce mAb, can be obtained. According to this method, mAbs have already been prepared against the coat protein gp51 from BLV (Brück, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C, Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A. Virology 122 [1982] 342-352). An mAb against the protein p24 from BLV is not known from the literature. Ziel der ErfindungObject of the invention Die Erfindung hat das Ziel, einen mAK gegen das Protein p24 des BLV mit guter Bindungsfähigkeit und hoher Spezifität herzustellen.The aim of the invention is to produce a mAb against the BLV protein p24 with good binding ability and high specificity. Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung eines mAK gegen das Protein p24aus BLV ist dadurch gekennzeichnet, daß man Mäuse mit gereinigtem BLV immunisiert, die Milzzellen entnimmt und mit Hilfe von PEG mit Myelomzellen fusioniert. Die fusionierten Zellen werden in Mikrotestplatten ausgesät, die BLV-p24-spezifischen antikörperproduzierenden Hybridzellen mit Hilfe des radioaktiven Bindungstestes selektiert, kloniert, weitervermehrt und ggf. in flüssigem Stickstoff gelagert und zur Produktion der mAK in bekannter Weise in vitro oder in vivo kultiviert.The process according to the invention for producing an mAb against the protein p24 from BLV is characterized in that mice are immunized with purified BLV, the spleen cells are removed and fused with myeloma cells by means of PEG. The fused cells are seeded in microtest plates, the BLV p24-specific antibody-producing hybrid cells selected by means of the radioactive binding assay, cloned, further increased and optionally stored in liquid nitrogen and cultured in a known manner in vitro or in vivo for the production of the mAb. Man gewinnt den mAK gegen das Protein ρ24 des BLV durch Kultivierung des Hybridoms Nr. 0137 der Nationalen Liste. Der mAK gegen das Protein p24des BLV ist gekennzeichnet durch eine hohe Affinität gegenüber ρ24. Er gehört der Immunglobulinsubklasse lgG2a an und reagiert mit p24 aus BLV (Western Blot, Immunpräzipitation mit 126J-markiertem p24) und mit mikrobiell in gentechnisch manipulierten Mikroorganismen synthetisiertem ρ24-Derivat (Western BlotmitE.coli-pEX-Rekombinante, die das Expressionsplasmid pGAG46-200 enthält).The mAb is raised against the protein ρ24 of the BLV by culturing the hybrid list No. 0137 of the National List. The mAb against the protein p24 of the BLV is characterized by a high affinity to p24. It belongs to the immunoglobulin subclass IgG2a and reacts with p24 from BLV (Western Blot, immunoprecipitation with 126 J-labeled p24) and ρ24 derivative synthesized microbially in genetically engineered microorganisms (Western blot with E.coli pEX recombinant containing the expression plasmid pGAG46). 200 contains). Ausführungsbeispielembodiment 3. Die Selektion der Antikörper produzierenden Hybridome erfolgte mit einem Flüssigphasen-Radioimmuntest unter Verwendung von 125J-markiertem p24-Protein aus BLV und Anti-Maus-Antikörpern aus Kaninchen, mit dem nur Anti-p24-Antikörper erfaßt werden.3. The selection of the antibody-producing hybridomas was carried out by a liquid-phase radioimmunoassay using 125 I-labeled p24 protein from BLV and rabbit anti-mouse antibodies, with which only anti-p24 antibodies are detected. 4. Das Hybridom, das Antikörper gegen Protein ρ 214 aus BLV stabil produziert, wurde in bekannter Weise in flüssigem Stickstoff eingefroren und zur Antikörpergewinnung in vitro oder in vivo weitervermehrt.4. The hybridoma which stably produces antibodies to protein ρ 214 from BLV was frozen in liquid nitrogen in a known manner and further amplified for antibody recovery in vitro or in vivo.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110078820A (en) * 2018-12-29 2019-08-02 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） Bovine leukemia virus antibody and detection kit

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110078820A (en) * 2018-12-29 2019-08-02 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） Bovine leukemia virus antibody and detection kit

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