DD250531A1

DD250531A1 - Verfahren zur herstellung von malonylaminosaeure-p-nitrobenzylestern

Info

Publication number: DD250531A1
Application number: DD28498485A
Authority: DD
Inventors: Mathias Boettcher; Peter Henklein; Katrin Hoffmann; Gottfried Heder; Eberhard Siems; Hartmut Niedrich
Original assignee: Adw Ddr
Priority date: 1985-12-23
Filing date: 1985-12-23
Publication date: 1987-10-14

Abstract

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Malonylaminosaeure-p-nitrobenzylestern der Formel I, die durch Kondensation von Malonsaeurehalbestern mit Aminosaeure-p-nitrobenzylestern gewonnen werden. Die neuen Verbindungen weisen ACE-inhibitorische Eigenschaften auf. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die pharmazeutische Industrie.

Description

2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid/N-Hydroxybenzotriazol bzw. N-Hydroxy-5-norbomen-2,3-dicarboximid vorgenommen wird.

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Malonylaminosäure-p-nitrobenzylestern als potentiellen Inhibitoren des Angiotensin-Converting-Enzyms (ACE). Die Blockade des ACE stellt einen Ansatz zur therapeutischen Behandlung des renalen Bluthochdruckes dar

Anwendungsgebiet der Erfindung sind die Wirkstofforschung und die pharmazeutische Industrie.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Das Angiotensin-Converting-Enzym (ACE EC 3.4.15.1), auch als Kinase Il bezeichnet, spielt sowohl im Renin-Angiotensin-Aldosteron — als auch im Kinin-Kallikrein-System bei der Regulierung des Blutdruckes eine wichtige Rolle. Als Dipeptid-Peptidyl-Hydrolase spaltet es aus dem Decapeptid Angiotensiη I dasC-terminale Dipeptid His-Leu-OH ab. Das entstehende Angiotensin Il wirkt blutdrucksteigernd. Die Blockade des ACE ist ein Ansatz zur therapeutischen Behandlung des renalen Bluthochdruckes (Geiger, R. Arzneimittel-Forschg./Drug Res. 34 Il [1984] 1386; Siems, W.-E., W.Halle, Die Pharmazie 37 [1982] 539). Seit der Synthese von Captopril als erstem oral wirksamen ACE-Hemmer (Cushman, D.W., H.S.Cheung, E.P.Sabo, M.S.Ondetti, Biochemistry 16 [1977] 5484) ist eine große Anzahl neuer, potentaler ACE-Inhibitoren veröffentlicht worden, wie MK421 (Enalapril) oder HOE 498 (Patchett, A. H. et al., Nature [London] 288 [1980] 280; Bünnig, P., Arzneimittel-Forschg./Drug Res. 34 (II), 106 [1984] 1406).

Bei der Ableitung wirksamer ACE-hemmender Strukturen fanden die von Cushman und Petrillo entwickelten Modellvorstellungen, nach denen eine C-terminale freie Carboxylgruppe für die Reaktion mit einem positiv geladenen Arginylrest mit katalytischen ACE-Zentrum von essentieller Bedeutung ist, eine weitgehende Bestätigung (Ondetti, M. A., D. W.Cushman, Biopolymers 20 [1981], 2001; Petrillo, E. W., M. A. Ondetti, Med. Res. Rev. 2, 41 [1982]).

Aminosäure-p-nitrobenzylestersind bekannt (Mc Laren, J. A., Aus., J. Chem.31 [1978] 1865; Kofodziejyk, A. M., Synthetis 1984, 865), auch die Herstellung von Z-Aminosäure-nitrobenzylestern aus Z-Aminosäure und p-Nitrobenzylbromid (Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie Bd.XV/1 [1974] 359). Malonylaminosäure-p-nitrobenzylester sind noch nicht beschrieben worden.

Zusammenhängezwischen der Struktur von Malonylaminosäure-p-nitrobenzylestern und ihrer biologischen Wirkung sind nicht bekannt. Wenn ACE/E.C.3.4.15.1/in reiner Form, z.B. das aus Schweinelunge isolierbare ACE (Molekulargewicht 270000, SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese, elektrophoretisch einheitlich, Aktivität: Spaltung von 80000 nMol His-His-Leu pro 1 mg Enzymprotein (Lowry, O. H., N. J. Rosebrough, A. L. Farr und R.-J. Randall, 1951 ,J. Biol. Chem. 193,265-275) verwendet wird, läßt sich die Hemmung von ACE durch die zu testenden Substanzen bestimmen.

Ziel der Erfindung

Es ist das Ziel der Erfindung, neue biologisch aktive Malonylaminosäure-p-nitrobenzylester bereitzustellen, die als Antihypertensiva Verwendung finden können.

Darlegung des Wesens de Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zu entwickeln, nach dem sich Malonylaminosäure-p-nitrobenzylester herstellen lassen. Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß Malonsäurehalbester mit Aminosäure-p-nitrobenzylestern zu den gewünschten Verbindungen der Formel I, in der

R¹ 0OC - CH - CO- R³

R¹ = Alkyl, R² = H, Alkyl, Aralkyl, Aryl und R³ einen Aminosäure-p-nitrobenzyl-Rest bedeuten, umgesetzt werden. Da für diese Kopplung die Mischanhydrid-Methode ungeeignet ist (Pallai, P. V. et al., Int. J. Peptide Protein Res. 21 [1983] 34), wurde mit DCCI/HOBT bzw. HONB kondensiert. Die neuen Verbindungen weisen überraschenderweise ACE-hemmende Eigenschaften auf. Deshalb sind sie als potentielle antihypertensiv wirkende Arzneimittel anzusehen (Tabelle 1). Durch Vermischen der neuen Verbindungen mit pharmazeutischen Trägerstoffen gelangt man zu den entsprechenden pharmazeutischen Verabreichungsformen. Die Ermittlung der ACE-Hemmung erfolgte in vitro an einem aus Schweinelunge isolierten Enzym mit Hip-His-Leu-OH als Substrat [Spez. Aktivität: Freisetzung von 4000OnMoI His-Leu/min/mg Protein bei 37⁰C]. His-Leu-OH als enzymatisches Spaltprodukt wird dabei nach Umsetzung mit o-Phthalaldehydfluorimetrisch bestimmt (Siems, W.E., G. Heder, N.W. Komissarowa, Zeitschrift f. med. Labordiagnostik, 26 [1985] 232)

Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden.

Ausführungsbeispiele

Abkürzungen:

DCCI Dicyclohexylcarbodiimid

HOBT N-Hydroxybenzotriazol

HONB N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid

Nbzl 4-Nitrobenzyl

Phabu 4-Phenyl-2-aminobuttersäure

THF Tetrahydrofuran

Z Benzyloxycarbonyl

Allgemeine Synthesevorschrift:

Malonsäurehalbester (2OmMoI) wird in 20 ml THF gelöst und auf-10⁰C abgekühlt. Anschließend werden 11 mMol HOBT bzw. 1OmMoI HONB in 10ml THF und 10,5mMol DCCI in 10ml Methylenchlorid dazugegeben. 1OmMoI Aminosäure-pnitrobenzylester, gelöst in 10 ml Methylenchlorid, werden der Reaktionsmischung hinzugefügt. Nach 2 h bei -10⁰C wird noch 48h bei Raumtemperatur gerührt. Nach Entfernen des ausfallenden Harnstoffes wird die organische Phase je 3mal alkalisch, sauer und neutral gewaschen. Das Lösungsmittel wird nach Trocknen über MgSO₄ im Vakuum entfernt. Die Reinigung des erhaltenen Feststoffes erfolgt durch Umkristallisation aus Essigester.

Tabelle 1 Malonylaminosäure-p-nitrobenzylester

R¹OOC-CH-CO-R³ I

R¹ =

Fp(⁰C)

ACE

IC₅₀-WeHe (μΜ/\) CPA CPB

-H	Phe-ONbzl	98-100	>100	200	200
-C₂H₅	Phe-ONbzl	123-125	75	200	200
i-C₃H₇	Phe-ONbzl	118-121	75	10	63
i-C₄Hg	Phe-ONbzl	89-90	20	160	200
n-C₄H₉	Phe-ONbzl	141-142	13	55	200
-C₆H₅	Phe-ONbzl	148-150	35	35	92
-CH₂-C₆H₅	Phe-ONbzl	100-102	33	85	200
-(CH₂I₂-C₆H₅	Phe-ONbzl	106-108	20	28	95
-(CH₂J₂-C₆H₅	lle-ONbzl	87-89	45	46	200
n-C₄H₉	Phabu-ONbzl	89-90	20	65	195
n-C₄Hg	Leu-ONbzl	79-81	100	200	• 200
n-C₄Hg	PheOH	181-185	>100	—	—

Claims

1. Verfahren zur Herstellung von Malonylaminosäure-p-nitrobenzylestern der Formel I, in der

R¹ = Alkyl, R² = H, Alkyl, Aralkyl, Aryl und R³ einen Aminosäure-p-nitrobenzyl-Rest bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß Malonsäurehalbester mit Aminosäure-p-nitrobenzylestern umgesetzt werden.

R²

1 I 3 '

R¹OOC-CH-OO-R-'