CZ35511U1

CZ35511U1 - Kultivační médium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S - 1

Info

Publication number: CZ35511U1
Application number: CZ202138975U
Authority: CZ
Inventors: Tereza Žalmanová; Žalmanová Tereza Ing., Ph.D.; Šárka Prokešová; Šárka Ing. Prokešová; Beáta Močáryová; Beáta Mgr. Močáryová; Tomáš Kott; Kott Tomáš Ing., Ph.D.; Jaroslav Petr; DrSc. Petr Jaroslav prof. Ing.
Original assignee: Výzkumný Ústav Živočišné Výroby V.V.I.
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2021-07-08
Publication date: 2021-11-04

Description

Kultivační médium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S -1

Oblast techniky

Řešení se týká zvýšení vývojové schopnosti savčích oocytů získaných od zvířat, která byla vystavena nepříznivým účinkům endokrinních disruptorů bisfenolu A nebo bisfenolu S. Tento způsob kultivace má velký význam zejména při asistované reprodukci hospodářských zvířat.

Dosavadní stav techniky

Narůstající znečištění životního prostředí má za následek poruchy plodnosti. K polutantům, které se na tom významně podílejí, patří i endokrinní disruptory čili látky schopné narušit hormonální rovnováhu organismu. Mezi nimi zaujímají významné místo bisfenoly, především pak bisfenol A abisfenol S, používané hojně do nej různějších plastů, ale i dalších produktů, např. nej různějších druhů papíru včetně recyklovaných papírů. Endokrinní disruptory včetně bisfenolu A a bisfenolu S jsou v životním prostředí velmi rozšířené a jejich negativní efekt se projevuje už ve velmi nízkých koncentracích. Je proto krajně obtížné, ne-li nemožné, zajistit, aby lidé či zvířata nebyli účinku těchto látek vystaveni.

V současné době se pro asistovanou reprodukci savců, např. pro klonování, in vitro oplození, transgenozi, včetně hospodářsky významných druhů využívají oocyty dozrálé v podmínkách in vitro. Ty mohou pocházet od zvířat, jež byla vystavena účinkům endokrinních disruptorů. Kvalita takových oocytů je snížená a jejich schopnost dozrát v podmínkách in vitro bývá narušena. Platí to i při expozici zvířat bisfenolu A nebo bisfenolu S. Oba tyto endokrinní disruptory jsou s to narušit následné zrání oocytů in vitro. Proto se vyvíjejí systémy kultivace, které by riziko narušení in vitro zrání u oocytů ze zvířat exponovaných bisfenolu A nebo bisfenolu S snížily či eliminovaly. Pro tyto kultivační systémy se hledají látky, které by u oocytů kultivovaných in vitro zabránily významným vývojovým defektům.

Pokud by se podařilo zajistit plnohodnotné zrání i u oocytů ze zvířat, která byla předtím v důsledku znečištění životního prostředí vystavena působení bisfenolu A nebo bisfenolu S, zvýšilo by se využití šlechtitelského potenciálu samic a zefektivnily by se i postupy asistované reprodukce.

Podstata technického řešení

Uvedené problémy odstraňuje kultivační médium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S, podle technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že 1 litr tohoto média obsahuje

Chlorid vápenatý	0,139600 g/1
Dusičnan železitý · 9 H2O	0,000720 g/1
Síran hořečnatý (bezvodý)	0,097670 g/1
Chlorid draselný	4,000000 g/1
Fosforečnan draselný	0,060000 g/1
Octan sodný (bezvodý)	0,050000 g/1
Uhličitan sodný	2,200000 g/1
Chlorid sodný	8,000000 g/1
Fosforečnan sodný (bezvodý)	0,047880 g/1
L-alanin	0,025000 g/1
L-arginin · HC1	0,070000 g/1
L-kyselina asparagová	0,030000 g/1

- 1 CZ 35511 UI

L-cystein · HC1 · H2O

L-cystin · 2 HC1

L-kyselina glutamová

L-glutamin

Glycin

L-histidin · HC1 · H2O

Hydroxy-L-prolin

L-isoleucin

L-leucin

L-lysin · HC1

L-methionin

L-fenylalanin

L-prolin

L-serin

L-threonin

L-tryptofan

L-tyrozin· 2 Na · 2 H2O

L-valin

Kyselina askorbová · Na

D-Biotin

Kalciferol

Cholin chlorid

Kyselina listová

Menadion

Myo-inozitol

Niacinamid

Kyselina nikotinová

Kyselina pantotenová

Kyselina p-aminobenzoová

Pyridoxal · HC1

Pyridoxin · HC1

Retinol acetát

Riboflavin

DL-a-tokoferol fosfát · Na

Thiamin · HC1

Adenin sulfát

Adenosin trifosfát · 2 Na

Adenosin monofosfát · Na

Cholesterol

Deoxyribóza

Glukóza

Glutathion (redukovaný)

Guanin · HC1

Hypoxanthin

Fenolová červeň · Na

TWEEN 80 - polyethylenglykolsorbitan oleát

Ribóza

Thymin

Uracil

Xantin · Na

Resveratrol

Cystathionin

Kyselina merkaptopyrohroznová

Pinobanksin

0,000110 g/1 0,026000 g/1 0,066800 g/1 0,100000 g/1 0,050000 g/1 0,021880 g/1 0,010000 g/1 0,020000 g/1 0,060000 g/1 0,070000 g/1 0,015000 g/1 0,025000 g/1 0,040000 g/1 0,025000 g/1 0,030000 g/1 0,010000 g/1 0,057660 g/1 0,025000 g/1 0,0000566 g/1 0,000010 g/1 0,000100 g/1 0,000500 g/1 0,000010 g/1 0,000016 g/1 0,000050 g/1 0,000025 g/1 0,000025 g/1 0,000050 g/1 0,000010 g/1 0,000025 g/1 0,000025 g/1 0,000140 g/1 0,000010 g/1 0,000010 g/1 0,000010 g/1 0,010000 g/1 0,001000 g/1 0,0002385 g/1 0,0002000 g/1 0,0005000 g/1 1,0000000 g/1 0,0000500 g/1 0,0003000 g/1 0,0003000 g/1 0,0213000 g/1 0,0200000 g/1 0,0005000 g/1 0,0003000 g/1 0,0003000 g/1 0,0003440 g/1 5 pM pM pM nM.

-2 CZ 35511 UI

Kultivační medium podle technického řešení, ve kterém je nově obsažen pinobanksin, podstatně zlepšuje kultivaci oocytů od zvířat, na které bylo nechtěně působeno všude přítomným bisfenolemA nebo bisfenolem S. Tím se snižují nežádoucí ztráty při řízené reprodukci hospodářských zvířat, což přináší velkou úsporu finančních prostředků.

Kultivační medium podle technického řešení bylo původci úspěšně vyzkoušeno v praxi v laboratořích přihlašovatele, kterým je Výzkumný ústav živočišné výroby, v.v.i., Praha Uhříněves, CZ.

Následující příklady provedení kultivační medium podle technického řešení pouze dokládají, ale neomezují.

Příklady uskutečnění technického řešení

Příklad 1

Při klasické kultivaci prasečích oocytů od prasnic, jež byly předtím vystaveny účinkům bisfenolu A nebo bisfenolu S, dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II jen u 40 % oocytů.

Při použití kultivačního média podle technického řešení jsou prasečí oocyty s ukončenou růstovou fází kultivovány 44 hodin v kultivačním médiu s přídavkem 25nM pinobanksinu. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II s četností přes 85 %. Takto získané oocyty lze podrobit standardní partenogenetické aktivaci a navodit u nich vývoj do stádia blastocysty. Takto získané savčí partenogenetické zárodky ve vývojovém stádiu blastocysty lze využít například pro tvorbu embryonálních kmenových buněk při řízené reprodukci hospodářských zvířat.

Příklad 2

Při tradiční kultivaci oocytů skotu s ukončeným růstem od krav, jež byly předtím vystaveny účinkům bisfenolu A nebo bisfenolu S, dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II jen u 25 % oocytů.

Při použití kultivačního média podle technického řešení jsou oocyty skotu s ukončenou růstovou fází od krav, jež byly předtím vystaveny účinku bisfenolu A nebo bisfenolu S, kultivovány 24 hodin v kultivačním médiu s přídavkem 50nM pinobanksinu. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II s četností přes 85 %. Takto získané oocyty lze podrobit standardnímu oplození in vitro. Úspěšně oplozené oocyty se dále vyvíjejí v embrya vhodná pro přenos náhradní matce.

Průmyslová využitelnost

Nové kultivační médium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S, které je obohaceno přídavkem pinobanksinu, podstatně zdokonaluje kultivaci oocytů in vitro, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat.

Claims

NÁROKY NA OCHRANU

1. Kultivační médium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo

5 bisfenolem S, vyznačující se tím, že 1 litr tohoto média obsahuje

Chlorid vápenatý 0,139600 g/1

Dusičnan železitý · 9 H2O 0,000720 g/1

Síran hořečnatý bezvodý 0,097670 g/1

10 Chlorid draselný 4,000000 g/1

Fosforečnan draselný 0,060000 g/1

Octan sodný bezvodý 0,050000 g/1

Uhličitan sodný 2,200000 g/1

Chlorid sodný 8,000000 g/1

15 Fosforečnan sodný bezvodý 0,047880 g/1

U-alanin 0,025000 g/1

U-arginin · HC1 0,070000 g/1

U-kyselina asparagová 0,030000 g/1

U-cystein · HC1 · H2O 0,000110 g/1

20 U-cystin · 2 HC1 0,026000 g/1

U-kyselina glutamová 0,066800 g/1

U-glutamin 0,100000 g/1

Glycin 0,050000 g/1

U-histidin · HC1 · H2O 0,021880 g/1

25 Hydroxy-U-prolin 0,010000 g/1

U-isoleucin 0,020000 g/1

U-leucin 0,060000 g/1

U-lysin · HC1 0,070000 g/1

U-methionin 0,015000 g/1

30 U-fenylalanin 0,025000 g/1

U-prolin 0,040000 g/1

U-serin 0,025000 g/1

U-threonin 0,030000 g/1

U-tryptofan 0,010000 g/1

35 U-tyrozin· 2 Na · 2 H2O 0,057660 g/1

U-valin 0,025000 g/1

Kyselina askorbová · Na 0,0000566 g/1

D-Biotin 0,000010 g/1

Kalciferol 0,000100 g/1

40 Cholin chlorid 0,000500 g/1

Kyselina listová 0,000010 g/1

Menadion 0,000016 g/1

Myo-inozitol 0,000050 g/1

Niacinamid 0,000025 g/1

45 Kyselina nikotinová 0,000025 g/1

Kyselina pantotenová 0,000050 g/1

Kyselina p-aminobenzoová 0,000010 g/1

Pyridoxal · HC1 0,000025 g/1

Pyridoxin · HC1 0,000025 g/1

50 Retinol acetát 0,000140 g/1

Riboflavin 0,000010 g/1

DU-a-tokoferol fosfát · Na 0,000010 g/1

Thiamin · HC1 0,000010 g/1

Adenin sulfát 0,010000 g/1

55 Adenosin trifosfát · 2 Na 0,001000 g/1