CZ34517U1 - Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma - Google Patents
Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma Download PDFInfo
- Publication number
- CZ34517U1 CZ34517U1 CZ2020-37802U CZ202037802U CZ34517U1 CZ 34517 U1 CZ34517 U1 CZ 34517U1 CZ 202037802 U CZ202037802 U CZ 202037802U CZ 34517 U1 CZ34517 U1 CZ 34517U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- transfer factor
- tablet
- temperature
- medicament according
- dialysis
- Prior art date
Links
- 108010074506 Transfer Factor Proteins 0.000 title claims description 46
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 38
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 29
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 13
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 9
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 8
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 5
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 claims description 5
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 claims description 5
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 claims description 5
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- FTLYMKDSHNWQKD-UHFFFAOYSA-N (2,4,5-trichlorophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl FTLYMKDSHNWQKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940085605 saccharin sodium Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 1
- 239000013039 cover film Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 41
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 19
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 16
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 16
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 15
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 15
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 15
- 239000000306 component Substances 0.000 description 14
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 11
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 9
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000007916 tablet composition Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 4
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 3
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 3
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 3
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000755093 Gaidropsarus vulgaris Species 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M Saccharin sodium Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(=O)[N-]S(=O)(=O)C2=C1 WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 229940119744 dextran 40 Drugs 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- LOTQRUGOUKUSEY-DGPNFKTASA-N [(2r,3r,4r,5r,6r)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl] hydrogen sulfate Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LOTQRUGOUKUSEY-DGPNFKTASA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940068886 polyethylene glycol 300 Drugs 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
- A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma
Oblast techniky
Technické řešení se týká zásadních modifikací v technologii léčiva transfer faktoru a nové lékové formy transfer faktoru ve formě lyofilizované tablety definovaného složení.
Dosavadní stav techniky
Od padesátých a šedesátých let dvacátého století je známý přenosový faktor (transfer faktor), schopný přenést imunologickou reaktivitu dárce na příjemce. Jedná se o směs biologicky aktivních nízkomolekulámích látek, získaných dialyzací homogenátu bílých krvinek (leukocytů).
Transfer faktor lze získat různými metodami, nejčastěji je popisována dialýza nebo ultrafiltrace směsi leukocytů periferní krve (lidské nebo zvířecí).
Stav techniky popisují např. dokumenty EP 2037949 [Sevapharma A.S., CZ] a dokumenty téže patentové rodiny, např. WO 2007143957 a CZ 2006377.
Dosavadní stav techniky popisuje tyto výrobní technologické kroky:
a) Příprava leukocytámího koncentrátu
b) Dialýza a/nebo ultrafiltrace
c) Koncentrace lyofilizací
d) Příprava roztoku surového léčiva
e) Mezioperační zkoušky
f) Homogenizace
g) Předfiltrace
h) Ultrafiltrace
i) Sterilizující filtrace
j) Tepelná inaktivace
k) Rozplnění
1) Lyofilizace
Dosud vyráběné transfer faktory jsou připravovány buď jako tekuté přípravky nebo ve formě prášku, získaného lyofilizací nebo jinou formou sušení. Jejich bezpečnost je zajištěna několika metodami; nej častěji tepelným ošetřením (pasterizací při definované teplotě a délce trvání) nebo různými stupni filtrací (např. sterilizující filtrace) a testy vstupní suroviny na nepřítomnost patologických mikroorganizmů. Výstupem všech dosud popsaných postupů je tekutá nebo prášková forma transfer faktorů, kterou lze aplikovat buď injekčně (podkožně nebo intravenózně) nebo jako perorálně podané přípravky (např. roztoky) do zažívacího traktu.
Biologická účinnost dosud vyráběných transfer faktorů je prokazována testováním in vivo na zvířecích modelech nebo in vitro sledováním jejich vlivu na cytokinové a jiné buněčné aktivity.
Vyráběné přípravky na bázi transfer faktorů vykazují tyto nevýhody:
- při injekčním podání mají velkou bolestivost, která je přímo úměrná aplikovaným objemům;
- parenterální přípravky musí být vyráběny jako sterilní přípravky;
- biologický účinek transfer faktorů, podávaných perorálně do zažívacího traktu, je snižován agresivním prostředím zažívacích orgánů.
Technické řešení řeší všechny tyto nevýhody modifikací technologie výroby a technologií přípravy
- 1 CZ 34517 UI transfer faktoru ve formě lyofilizované tablety definovaného složení.
Podstata technického řešení
Podstatou tohoto technického řešení je zejména léčivo obsahující transfer faktor, které obsahuje dialyzát nebo ultrafiltrát z rozrušených leukocytů periferní krve, tedy koncentrát bez balastních solí, obsahující bílkovinné složky a složky nukleových kyselin, jejichž obsah v léčivu, který je vyjádřen indexem absorbance, který vychází z poměru absorbancí měřených při 260 nm a 280 nm, není menší než 1,7 a ve kterém žádná ze složek léčiva nemá molekulovou hmotnost větší než 10 000 Daltonů. Dále je podstatou tohoto technického řešení forma léčiva.
Způsob výroby shora uvedeného léčiva zahrnuje následující technologické kroky:
a) Přípravu leukocytámího koncentrátu
b) Dialýza nebo ultrafiltrace
c) Odstranění solí a koncentrace nanofiltrací
d) Tepelná inaktivace
e) Formulace tablety
f) Příprava lyofilizované tablety
Tři technologické kroky: příprava leukocytámího koncentrátu (transport, skladování, příprava homogenátu), technologie přípravy účinné látky (dialýza nebo ultrafiltrace) a tepelná inaktivace probíhají dle současného stavu techniky.
Známým způsobem získaná účinná látka (dialyzát nebo ultrafiltrát) obsahuje vedle biologicky účinných složek velké množství balastu ve formě solí. Tyto sole mají buď fyziologický původ (přirozené komponenty krevních složek) nebo umělý (protisrážlivé látky, přidávané do krve při jejím odběru). Zároveň tento materiál obsahuje nežádoucí vysoký obsah vody.
Technického řešení je dosaženo zejména zařazením následujících nových kroků při způsobu přípravy léčiva transfer faktor:
- odstranění přebytečných solí a přebytečného obsahu vody použitím technologie nanofiltrace přes membránu o vhodné porozitě;
- přípravu lyofilizované tablety obsahující transfer faktor jako účinnou látku;
- aplikaci účinné látky perorálně ve formě lyofilizované tablety, která se nepolyká a působí přes bukální sliznici;
- test biologické účinnosti přípravku, založený na sledování proliferačního efektu na tkáňovou kulturu.
Popis jednotlivých kroků
a) Příprava leukocytámího homogenátu:
Leukocytámí koncentráty od jednotlivých dárců jsou transportovány a skladovány ve zmraženém stavu. Po rozmražení při teplotě do +37 °C se surovina získaná od jednotlivých dárců spojuje do většího objemu. Práce musí probíhat ve výrobních prostorách s definovanou třídou čistoty prostředí. Následně se v leukocytámím homogenátu rozruší všechny membránové komponenty metodou opakovaného zmrazování a rozmrazování, popřípadě rozrušením buněk ultrazvukem, nebo kombinací obou postupů.
- 2 CZ 34517 UI al) Příprava homogenátu metodou zmrazení - rozmražení:
Zmrazování se provádí v lázni denaturovaného etylalkoholu při minimální teplotě -35 °C na rotačních zmrazovacích zařízeních. Rozmrazování se provádí ve vodní lázni při teplotě maximálně +37 °C. Celý cyklus mrazení a rozmrazování se opakuje 6x. Po ukončení 6. cyklu se homogenát ponechaný v původních lahvích uloží do mrazicího pultu při teplotě min. -17 °C do dalšího zpracování.
a2) Příprava homogenátu pomocí ultrazvuku:
Leukocytámí homogenát se po rozmražení připraví rozrušením buněk ultrazvukem při 20 kHz po dobu 10 minut při teplotě +2 °C až +8 °C. Po této době dezintegrace se získaný homogenát uloží do mrazicího pultu při teplotě min. -17 °C až do dalšího zpracování.
a3) Příprava homogenátu kombinovanou metodou:
Jako alternativní postup výroby se používá kombinovaný postup homogenizace leukocytů. Cyklus zmrazení a rozmražení se opakuje 5x s následnou dezintegrací ultrazvukem při 20 kHz po dobu 3 minut při teplotě +2 °C až +8 °C. Po této dezintegraci se získaný homogenát uloží do mrazícího pultu při teplotě min. -17 °C až do dalšího zpracování.
U všech teplot uváděných v tomto výrobním kroku by neměl být jejich výkyv větší než 30 °C na obě strany teplotní stupnice a čas by neměl být jiný než v řádu minut.
b) Dialýza
Zpracování leukocytámího homogenátu se provádí v uzavřeném systému na dialyzační koloně. V případě, že leukocytámí homogenát byl před dalším zpracováním zmražen, rozmrazí se ve vodní lázni max. +37 °C teplé. Teplota může být i nižší (do + 4 °C). Je výhodou, pokud se od definované teploty neliší o více než ±33 °C.
Dialýza homogenátu probíhá jako dialýza v uzavřeném systému.
Dialýza se provádí na dialyzační jednotce z umělé ledviny obsahující membránu, zadržující částice o relativní molekulové hmotnosti větší než 10 000. Dialýza se provádí za snížené teploty + 2 °C až +8 °C. Tato teplota nemá být odlišná o více než 20 °C. Objem homogenátu leukocytámího koncentrátu zpracovaného v jednom cyklu se pohybuje s výhodu od 1,4 do 2,4 1. Neměl by být vyšší než desítky litrů a menší než 0,2 litru. Množství vody na injekci potřebné k dialýze nízkomolekulámích látek v rozmezí teplot +2 °C až +8 °C se pohybuje v rozmezí 8 až 13 1. Toto množství vody může být při použití jiných teplot různé, nemělo by být jiném objemovém řádu, než jsou litry.
Je výhodou, pokud při vlastním průběhu dialýzy dezintegrovaný leukocytámí koncentrát pomocí čerpadla koluje přes dialyzační jednotku okruhem o průtoku 1,2 až 2,0 1 / hod. a voda na injekci jako dialyzační medium přes stejnou dialyzační jednotkou dmhým okmhem rychlostí 0,4 až 0,5 1/hod. Za těchto podmínek se pohybuje doba dialýzy v rozmezí 24 hodin ±4 hod. Pokud jsou v procesu použité jiné cirkulační rychlosti, musí se úměrně upravit i doba dialýzy. Dialýza se ukončí, když hodnota absorbance dialyzátu klesne pod 0,6 při 260 nm. Tato hodnota je doporučená, může být i odlišná.
Obdobným způsobem lze postupovat v případě, že je dialýza nahrazena ultrafiltrací.
- 3 CZ 34517 UI
c) Odstranění solí a koncentrace nanofiltraci
V tomto výrobním kroku se získaný dialyzát zbavuje nežádoucích solí a zároveň se koncentruje nanofiltraci na požadovaný objem. V tomto výrobním kroku jde především o to, že získaný dialyzát, který obsahuje pro další zpracování příliš velký objem solí a vody musí být odsolen a zakoncentrován tak, aby byl přímo použitelný pro konstrukci lyofilizované tablety, tedy bez další nutnosti dořeďování nebo zahušťování nebo obohacování nebo jakékoliv jiné dodatečné úpravy získaného roztoku. Metody zahušťování mohou být různé. Použitá metoda řeší dva technologické požadavky: šetrným postupem, zbavuje produkt solí a nežádoucího nadměrného objemu vody. Proti tepelnému namáhání je produkt chráněn chlazením celého procesu. Teplota při nanofiltraci by neměla překročit +30 °C a je výhodou, když se tato teplota, pohybují v rozsahu 14 až 25 °C a zpracovávaný objem tekutiny není větší než 50 litrů a menší než 5 litrů. Ideální objem se pohybuje kolem 15 litrů. Pracovní tlak na filtru je 20 bar ±5 bar (2 ±0,5 MPa). Vždy je třeba se vyhnout statickému protitlaku na straně permeátu. Filtrace se provádí systémem maximálního oddělení permeátu z filtrovaného vzorku. Zbývající vzorek je ve filtračním zařízení přímo naředěný demineralizovanou vodou v množství odebraného permeátu. Po promíchání takto naředěné tekutiny následuje vlastní filtrace. Tento postup se opakuje 4x. Pro nanofiltraci se s výhodou používá polyamidový tenkovrstvý kompozit jako membrána o porozitě umožňující propustnost do 1000 Da. Předmětem patentové ochrany v tomto výrobním krokuje krok odstranění přebytečných solí a vody popsanou metodou nanofiltrace.
d) Tepelná inaktivace
Pro bezpečnost produktu je třeba zajistit jeho inaktivaci. Transfer faktor je tepelně inaktivován pasterizací při ±60 °C po dobu 10 hodin ve vodní lázni. Popsaný postup zaručuje, že produkt je bezpečný a zároveň je natolik šetrný, že nezpůsobí jeho poškození. Tento technologický krok probíhá rovněž dle současného stavu techniky.
e) Formulace matrice tablety
Z hlediska obsahu zahušťovadel a plnidel má tableta toto definované složení:
Formulace jedné tablety reprezentuje tyto komponenty:
Dextranum 40 0,05 g (CeHioOsjn lota karagenan 0,0015 g (P-D-galaktosa-4-sulfát; 3, 6-anhydrid-a-D-galaktosa-2-sulfát)
Macrogolum 300 0,005 g (Polyethylenglycolum 300)
Saccharinum natricum 0,0003333g (Sodná sůl l,l-dioxid-l,2-benzothiazol-3(2H)-onu; C+FFNNaCťS)
Účinná látka (transfer faktor) 1 léčivá dávka
Aqua purificata ad 0,5 g
- 4 CZ 34517 UI
Vlastní příprava tablet:
Předem se připraví roztok účinné látky (transfer faktoru) tak, aby jedna dávka byla rozpuštěna v 0,25 ml vody v kvalitě „voda pro injekce“.
Následuje příprava vlastní matrice:
0,0015 g karagenanu iota se rozpustí za zvýšené teploty ve vodní lázni (60 °C) v 0,17 g čištěné vody. K tomuto roztoku se přidá 0,05 g dextranu 40 a mícháním se rozpustí. K urychlení rozpouštění dextranu lze použít ultrazvukovou lázeň po dobu 1 min nebo lze směs udržovat mírně zahřátou ve vodní lázni (40 °C).
Po ochlazení na laboratorní teplotu se přidá 0,005 g makrogolu 300 a 0,0003 g sodné soli sacharinu, doplní se čištěnou vodou na 0,25 g a míchá se do rozpuštění všech složek. Následně se matrice smísí s předem připraveným roztokem TFI. Následuje dávkování po 0,5 ml do blistru, který slouží jako primární obal lyofilizované tablety. Předmětem technického řešení v tomto výrobním krokuje matrice tablety.
f) Příprava lyofilizované tablety
Dle předpisu pro formulaci jedné tablety se připraví roztok matrice tablet a vhodným dávkovacím zařízením se tento roztok rozplní přímo do jednotlivých jamek blistrů po 0,5 ml.
Před rozplněním přípravku do blistrů se lyofilizační zařízení nastaví do modu vymražení desek do nadefinované teploty -50 °C. Vymražení desek do této teploty proběhne do cca 2 hodin.
Po dosažení požadované teploty -50 °C se na vymražené desky lyofilizačního zařízení založí blistry s rozplněným materiálem. Následně se lyofilizační zařízení přepne do modu primárního sušení (sublimace), nastaví se hodnoty pro vymražení kondenzátoru na hodnotu -55 °C a hodnotu vakua na 0,3 mbar (30 Pa). Po dosažení nastavené teploty kondenzátoru -55 °C se spustí lyofilizační proces.
Lyofilizační sušící proces lze nastavit v automatickém nebo poloautomatickém režimu.
V automatickém režimu nelze zasahovat do nastavených parametrů po celou dobu lyofilizace, poloautomatický režim umožňuje v případě potřeby upravovat a přepínat jednotlivé fáze (vymražení, primární sušení, sekundární sušení) ručním ovládáním. Po 2 hodinách se proces lyofilizace mění do modu sekundárního sušení (desorbce).
Teplota desek se nastaví na hodnotu -30 °C, vakuum na 0,005 mbar (0,5 Pa). V dalším postupu se teplota desek vždy po 1 hodině snižuje postupně na -20 °C, -10 °C, 0 °C, +10 °C a +25 °C. Celý lyofilizační proces se ukončí maximálně do 24 hodin od jeho zahájení. Reálný čas ukončení lyofilizace se odvíjí od dosažení popsaných teplotních hodnot desek a hodnot vakua. Po ukončení lyofilizace se lyofilizační zařízení zavzdušní, blistry s vysušeným produktem se vyjmou a na blistrovacím zařízení uzavřou zatavovací krycí fólii. Předmětem technického řešení v tomto výrobním krokuje forma lyofilizované tablety.
Výše uvedeným způsobem je připraveno léčivo transfer faktor, z leukocytů periferní krve, obsahující bílkovinné složky a složky nukleových kyselin, jejichž poměr v léčivu vyjadřuje index absorbance, což je poměr získaný spektrofotometrickým měřením absorbance v UV oblasti při 260 nm a 280 run. Tento index nesmí mít hodnotu menší než 1,7 s výhodu v rozpětí 1,7 až 2,1. Léčivo je zbavené balastních solí metodou nanofiltrace. Žádná ze složek léčiva nemá molekulovou hmotnost větší než 10 000 Daltonů.
Léková forma podání, kterou je lyofilizovaná tableta. V jedné lyofilizované tabletě je obsažena
- 5 CZ 34517 UI jedna léčivá dávka přípravku, která představuje množství biologicky aktivních látek získaných z cca 200 milionů periferních leukocytů, schopných normalizovat porušenou buněčnou imunitu příjemce. Lyofilizovaná tableta se vyrábí lyofilizací tekuté matrice. Tekutá matrice se vyznačuje hodnotou osmolality v rozpětí 150 až 400 mmol/kg. V lyofilizované tabletě lze prokázat účinnost biologicky aktivních látek.
Test biologické účinnosti
Test biologické účinnosti je založený na sledování účinku transfer faktoru na viabilitu modelové buněčné linie po jejím předchozím ovlivnění imunosupresivní látkou azathioprinem.
Jako modelová buněčná linie se používá imortalizovaná T-lymfocytámí buněčná linie Jurkat CCL81. Viabilita buněk je měřena na průtokovém cytometru s použitím komerčního MTT testu. MTT měří metabolickou aktivitu buněk a je tak vhodný pro stanovení buněčné viability. Test je založen na redukci tetrazoliové soli MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid) na nerozpustný formazan. Množství vytvořeného formazanu je pak přímo úměrné počtu živých buněk.
Buněčná linie Jurkat je kultivována v RPMI médiu obohaceném 10 % fetálního bovinního séra, 2mM glutaminu a směsi penicilín (100I/ml)-streptomycin (100ug/ml). Pro supresi modelové buněčné linie se použije azathioprin o koncentraci 5 pg/ml.
Pro test biologické účinnosti se přidá transfer faktor ředěný 80 až 160krát. Inkubace buněk probíhá po dobu 72 h. Po této době inkubace se ke každé jamce v destičce přidá 20 μΐ zásobního roztoku MTT (5 mg/ml) a destička je nadále inkubována 3 h při 37 °C. Poté se odstraní supernatant a vytvořené krystalky formazanu se solubilizují ve 150 μΐ dimethylsulfoxidu. Výsledná optická denzita roztoků se měří při 570 nm na destičkovém spektrofotometru a vyhodnocuje se jako viabilita buněk.
Při vlastním testuje výhodné použít tyto srovnávací skupiny:
Kontrolní skupina - samotné neovlivněné Jurkat buňky;
Jurkat buňky suprimované azathioprinem;
Jurkat buňky ovlivněné transfer faktorem;
Jurkat buňky suprimované azathioprinem a následně ovlivněné transfer faktorem.
Vyhodnocení výsledků:
Přidaný samotný transfer faktor nijak neovlivní viabilitu buněk oproti kontrolní skupině.
Vzhledem ke kontrole přidaný azathioprin sníží viabilitu buněk pod 50 % hodnoty kontrolní skupiny.
Transfer faktor v kombinaci s azathioprinem vrátí viabilitu buněk potlačenou azathioprinem o cca 40 % směrem zpět k normálu. Předmětem technického řešení v tomto výrobním krokuje in vitro test biologické účinnosti transfer faktoru.
Použití
Technické řešení je využitelné při komerční přípravě jakéhokoliv transfer faktoru, specifického i nespecifického, připraveného z homogenátu leukocytů periferní krve. Technické řešení je využitelné jak při výrobě humánního přípravku, tak i u modifikací určených pro veterinární použití.
Předmětem ochrany je i doporučené podání transfer faktoru, které spočívá v podání lyofilizované tablety do oblasti bukální sliznice.
Podání transfer faktoru v této formě zabrání spolknutí tablety, v průběhu několika sekund dojde
-6CZ 34517 UI k jejímu rozpuštění na sliznici.
Hlavní terapeutický efekt je tak zprostředkovaný průnikem léčiva pouze přes ústní sliznici.
Příklady uskutečnění technického řešení
Příklad 1
Způsob přípravy léčiva transfer faktor
a) Přípravu leukocytámího koncentrátu
b) Dialýza nebo ultrafiltrace
c) Odstranění solí a koncentrace nanofiltrací
d) Tepelná inaktivace
e) Formulace tablety
f) Příprava lyofilizované tablety
a) Příprava leukocytámího koncentrátu
Leukocytámí koncentráty jsou uskladněny ve zmraženém stavu. Následně se při teplotě max. +37 °C leukocytámí koncentrát spojí do pracovního objemu. Práce musí probíhat ve výrobních prostorách s definovanou třídou čistoty „C“ prostředí. Následně se v leukocytámím homogenátu rozruší všechny membránové komponenty metodou opakovaného zmrazování a rozmrazování, popřípadě rozmšením buněk ultrazvukem, nebo kombinací obou postupů.
a 1) Příprava homogenátu metodou zmrazení - rozmražení:
Zmrazování se provádí v lázni denaturovaného etylalkoholu při minimální teplotě -35 °C na rotačních zmrazovacích zařízeních.
Rozmrazování se provádí ve vodní lázni při teplotě maximálně +37 °C. Celý cyklus mrazení a rozmrazování se opakuje 6x. Po ukončení 6. cyklu se homogenát ponechaný v původních lahvích uloží do mrazicího pultu při teplotě min. -17 °C do dalšího zpracování.
a 2) Příprava homogenátu pomocí ultrazvuku:
Leukocytámí homogenát se po rozmražení připraví rozmšením buněk ultrazvukem při 20 kHz po dobu 10 minut při teplotě +2 °C až +8 °C. Po této době dezintegrace se získaný homogenát uloží do mrazicího pultu při teplotě min. -17 °C až do dalšího zpracování.
a 3) Příprava homogenátu kombinovanou metodou:
Jako alternativní postup výroby se používá kombinovaný postup homogenizace leukocytů. Cyklus zmrazení a rozmražení se opakuje 5x s následnou dezintegrací ultrazvukem při 20 kHz po dobu 3 minut při teplotě +2 °C až +8 °C. Po této dezintegraci se získaný homogenát uloží do mrazícího pultu při teplotě min. -17 °C až do dalšího zpracování.
U všech teplot uváděných v tomto výrobním kroku by neměl být jejich výkyv větší než 30 °C na obě strany teplotní stupnice a čas by neměl být jiný než v řádu minut.
b) Dialýza
Zpracování leukocytámího homogenátu se provádí v uzavřeném systému na dialyzační koloně. V případě, že leukocytámí homogenát byl před dalším zpracováním zmražen, rozmrazí se ve vodní lázni max. +37 °C teplé. Teplota může být i nižší (do +4 °C). Je výhodou, pokud se od definované
- 7 CZ 34517 UI teploty neliší o více než 20 °C.
Dialýza se provádí na dialyzační jednotce z umělé ledviny obsahující membránu, zadržující částice o relativní molekulové hmotnosti větší než 10 000. Dialýza se provádí za snížené teploty +2 °C až +8 °C. Tato teplota nemá být odlišná o více než 20 °C. Objem homogenátu leukocytámího koncentrátu zpracovaného v jednom cyklu se pohybuje s výhodu od 1,4 do 2,4 1. Neměl by být vyšší než desítky litrů a menší než 0,2 litru. Množství vody na injekci potřebné k dialýze nízkomolekulámích látek v rozmezí teplot +2 °C až +8 °C se pohybuje v rozmezí 8 až 13 1. Toto množství vody může být při použití jiných teplot různé, nemělo by být jiném objemovém řádu, než jsou litry.
Je výhodou, pokud při vlastním průběhu dialýzy dezintegrovaný leukocytámí koncentrát pomocí čerpadla koluje přes dialyzační jednotku okruhem o průtoku 1,2 až 2,0 1/hod. a voda na injekci jako dialyzační medium přes stejnou dialyzační jednotkou druhým okmhem rychlostí 0,4 až 0,5 1/hod. Za těchto podmínek se pohybuje doba dialýzy v rozmezí 24 hodin ±4 hod. Pokud jsou v procesu použité jiné cirkulační rychlosti, musí se úměrně upravit i doba dialýzy. Dialýza se ukončí, když hodnota absorbance dialyzátu klesne pod 0, 6 při 260 nm. Tato hodnota je dopomčená, může být i odlišná.
Obdobným způsobem lze postupovat v případě, že je dialýza nahrazena ultrafiltrací.
c) Odstranění solí a koncentrace nanofiltrací
V tomto výrobním kroku se získaný dialyzát zbavuje nežádoucích solí a zároveň se koncentmje nanofiltrací na požadovaný objem.
Cílem je, aby dialyzát, který obsahuje pro další zpracování příliš velký objem solí a vody, byl odsolen a zakoncentrován tak, aby byl přímo použitelný pro konstmkci lyofilizované tablety. Proti tepelnému namáhání je produkt chráněn chlazením celého procesu. Teplota při nanofiltrací by neměla překročit +30 °C a je výhodou, když se tato teplota, pohybují v rozsahu 14 až 25 °C a zpracovávaný objem tekutiny není větší než 50 litrů a menší než 5 litrů. Ideální objem se pohybuje kolem 15 litrů. Pracovní tlak na filtru je 20 bar ±5 bar (2 ±0,5 MPa). Vždy je třeba se vyhnout statickému protitlaku na straně permeátu. Filtrace se provádí systémem maximálního oddělení permeátu z filtrovaného vzorku. Zbývající vzorek je ve filtračním zařízení přímo naředěný demineralizovanou vodou v množství odebraného permeátu. Po promíchání takto naředěné tekutiny následuje vlastní filtrace. Tento postup se opakuje 4x. Pro nanofiltrací se s výhodou používá polyamidový tenkovrstvý kompozit jako membrána o porozitě umožňující propustnost do 1000 Da.
d) Tepelná inaktivace - tento technologický krok probíhá rovněž dle současného stavu techniky.
Pro bezpečnost produktu je třeba zajistit jeho inaktivaci. Transfer faktor je tepelně inaktivován pasterizací při ±60 °C po dobu 10 hodin ve vodní lázni. Popsaný postup zaručuje, že produkt je bezpečný a zároveň je natolik šetrný, že nezpůsobí jeho poškození.
e) Formulace tablety
| Velikost šarže (120 tablet) Dextranum 40 lota karrageenan Macrogolum 300 Saccharinum natricum TFI Aqua purificata | 6,0g 0,18 g 0,6 g 0,04 g 30 dávek ad 60,0 g |
Předem se připraví roztok transfer faktoru (30 dávek) v 30 ml čištěné vody (případně vody na
-8CZ 34517 UI injekci). Následně se připraví matrice: 0,18 g karagenanu iota se rozpustí za zvýšené teploty ve vodní lázni (60 °C) v 20 g čištěné vody (odpovídá celkovému množství vzorku 60 g k přípravě 120 tablet). K tomuto roztoku se přidá 6,0 g dextranu 40 a mícháním se rozpustí. K urychlení rozpouštění dextranu lze použít ultrazvukovou lázeň po dobu 1 min nebo lze směs udržovat mírně zahřátou ve vodní lázni (40 °C).
Po ochlazení na laboratorní teplotu se přidá 0,6 g makrogolu 300 a 0,04 g sodné soli sacharinu, doplní se čištěnou vodou na 30,0 g a míchá se do rozpuštění všech složek. Vzniklá matrice se smísí s roztokem transfer faktoru
f) Příprava lyofilizované tablety
Připravená tekutá matrice tablet, obsahující účinnou látku transfer faktor se automatickou dávkovači pipetou rozplní do jednotlivých jamek blistrů po 0,5 ml. Před rozplněním přípravku TFI do blistrů se lyofilizátor nastaví do modu funkce mražení - vymražení desek do definované teploty -50 °C. Toto vymražení desek proběhne za cca 2 hodiny.
Po dosažení požadované teploty se založí blistry s rozplněnou matricí tablet na vymražené desky, lyofilizátor se přepne do modu primárního sušení (sublimace), nastaví se definované hodnoty pro vymražení kondenzátoru na hodnotu -55 °C a hodnota vakua na 0,3 mbar (30 Pa). Po dosažení nastavené teploty kondenzátoru se spustí lyofilizační proces. Lyofilizační proces lze nastavit v automatickém nebo poloautomatickém režimu. V automatickém režimu nelze zasahovat do nastavených parametrů po celou dobu lyofilizace. Poloautomatický režim umožňuje upravovat a přepínat jednotlivé fáze ručním ovládáním (vymražení, primární sušení, sekundární sušení).
Po cca 2 hodinách přechází lyofilizace do modu sekundárního sušení (desorbce), teplota desek se nastaví na -30 °C, vakuum na 0,005 mbar (0,5 Pa). Následně se teplota desek postupně v intervalech po 1 hodině snižuje na -20 °C, -10 °C, 0 °C, +10 °C a +25 °C.
Lyofilizační proces se ukončí maximálně do 24 hodin, čas ukončení lyofilizace se odvíjí od dosažení nastavených hodnot desek a vakua.
Po ukončení lyofilizace se lyofilizátor zavzdušní, blistry s lyofilizátem se vyjmou a na blistrovacím zařízení zakryjí fólií. Použité lyofilizační zařízení: LYOBETA 15
Příklad 2
Léčivo transfer faktor
Výše uvedeným způsobem je připraveno léčivo transfer faktor, z leukocytů periferní krve, obsahující bílkovinné složky a složky nukleových kyselin, jejichž poměr v léčivu vyjadřuje index absorbance, což je poměr získaný spektrofotometrickým měřením absorbance v UV oblasti při 260 nm a 280 nm. Tento index nesmí mít hodnotu menší než 1,7 s výhodu v rozpětí 1,7 až 2,1. Léčivo je zbavené balastních solí metodou nanofiltrace. Žádná ze složek léčiva nemá molekulovou hmotnost větší než 10 000 Daltonů.
Příklad 3
Metodika testování biologické účinnosti léčiva podle popsaného technického řešení
Test biologické účinnosti
Pro měření viability byl použitý průtokový cytometr Guava EasyCyte, Luminex, USA a komerční MTT test Sigma-Aldrich, USA. Pro stanovení viability buněčné linie byl použit kit GuavaViaCount, Luminex, USA, který rozlišuje živé a mrtvé buňky na principu rozdílné permeability
-9CZ 34517 UI buněčné membrány pro DNA-vázající značky. Buněčná linie Jurkat byla kultivována v RPMI médiu obohaceném 10 % fetálního bovinního séra, 2 mM glutaminu a směsi penicilín (100 I/ml)streptomycin (100 pg/ml).
Pro test biologické účinnosti se použije transfer faktor ředěný 80 až 160krát. Inkubace buněk probíhá 72 h. Po této době inkubace se ke každé jamce v destičce pňdá 20 μΐ zásobního roztoku MTT (5 mg/ml) a destička je nadále inkubována 3 h při 37 °C. Poté se odstraní supernatant a vytvořené krystalky formazanu se solubilizují ve 150 μΐ dimethylsulfoxidu. Výsledná optická denzita roztoků se měří při 570 nm na destičkovém spektrofotometru a vyhodnocuje se jako viabilita buněk. Optická denzita roztoku byla měřena při 570 nm na destičkovém spektrofotometru (Beckman Coulter, USA).
Při vlastním testu je výhodné použít tyto srovnávací skupiny: Kontrolní skupina - samotné neovlivněné Jurkat buňky;
Jurkat buňky suprimované azathioprinem;
Jurkat buňky ovlivněné transfer faktorem;
Jurkat buňky suprimované azathioprinem a následně ovlivněné transfer faktorem.
Vyhodnoceni výsledků:
Přidaný samotný transfer faktor nijak neovlivní viabilitu buněk oproti kontrolní skupině.
Vzhledem ke kontrole přidaný azathioprin sníží viabilitu buněk pod 50 % hodnoty kontrolní skupiny.
Transfer faktor v kombinaci s azathioprinem vrátí viabilitu buněk potlačenou azathioprinem o cca 40 % směrem zpět k normálu.
Příklad 4
Uéková forma
Uéková forma podání, kterou je lyofilizovaná tableta. V jedné lyofilizované tabletě je obsažena jedna léčivá dávka přípravku, která představuje množství biologicky aktivních látek získaných z cca 200 milionů periferních leukocytů, schopných normalizovat porušenou buněčnou imunitu příjemce. Uyofilizovaná tableta se vyrábí lyofilizací tekuté matrice. Tekutá matrice se vyznačuje hodnotou osmolality v rozpětí 150 až 400 mmol/kg. V lyofilizované tabletě lze prokázat účinnost biologicky aktivních látek.
Uéková forma je připravena způsobem:
Dle předpisu pro formulaci jedné tablety se připraví roztok matrice tablet a vhodným dávkovacím zařízením se tento roztok rozplní přímo do jednotlivých jamek blistrů po 0,5 ml.
Před rozplněním přípravku do blistrů se lyofilizační zařízení nastaví do modu vymražení desek do nadefinované teploty -50 °C. Vymražení desek do této teploty proběhne do cca 2 hodin.
Po dosažení požadované teploty -50 °C se na vymražené desky lyofilizačního zařízení založí blistry s rozplněným materiálem. Následně se lyofilizační zařízení přepne do modu primárního sušení (sublimace), nastaví se hodnoty pro vymražení kondenzátoru na hodnotu -55 °C a hodnotu vakua na 0,3 mbar (30 Pa). Po dosažení nastavené teploty kondenzátoru -55 °C se spustí lyofilizační proces.
Uyofilizační sušící proces lze nastavit v automatickém nebo poloautomatickém režimu.
V automatickém režimu nelze zasahovat do nastavených parametrů po celou dobu lyofilizace,
- 10 CZ 34517 UI poloautomatický režim umožňuje v případě potřeby upravovat a přepínat jednotlivé fáze (vymražení, primární sušení, sekundární sušení) ručním ovládáním. Po 2 hodinách se proces lyofilizace mění do modu sekundárního sušení (desorbce).
Teplota desek se nastaví na hodnotu -30 °C, vakuum na 0,005 mbar. V dalším postupu se teplota desek vždy po 1 hodině snižuje postupně na -20 °C, -10 °C, 0 °C, +10 °C a+25 °C. Celý lyofilizační proces se ukončí maximálně do 24 hodin od jeho zahájení. Reálný čas ukončení lyofilizace se odvíjí od dosažení popsaných teplotních hodnot desek a hodnot vakua. Po ukončení lyofilizace se lyofilizační zařízení zavzdušní, blistry s vysušeným produktem se vyjmou a na blistrovacím zařízení uzavřou zatavovací krycí fólií. Předmětem technického řešeni v tomto výrobním krokuje forma lyofilizované tablety.
Výše uvedeným způsobem je připraveno léčivo transfer faktor, z leukocytů periferní krve, obsahující bílkovinné složky a složky nukleových kyselin, jejichž poměr v léčivu vyjadřuje index absorbance, což je poměr získaný spektrofotometrickým měřením absorbance v UV oblasti při 260 nm a 280 nm. Tento index nesmí mít hodnotu menší než 1,7 s výhodu v rozpětí 1,7 až 2,1. Léčivo je zbavené balastních solí metodou nanofiltrace. Žádná ze složek léčiva nemá molekulovou hmotnost větší než 10 000 Daltonů.
Příklad 5
Použití lékové formy
a) Použití transfer faktoru podle tohoto technického řešení jako lékové formy lyofilizované tablety k podání do ústní dutiny, při kterém lyofilizovaná tableta bezprostředně adheruje ke sliznici, tím je zabráněno jejímu polknutí a je rychle na bukální sliznici rozpuštěna, přičemž se nedostane se přímo do trávicího systému.
b) Použití transfer faktoru podle tohoto technického řešení jako humánního nebo veterinárního léčiva.
c) Použití transfer faktoru podle tohoto technického řešení jako humánního nebo veterinárního doplňku stravy.
d) Použití transfer faktoru podle tohoto technického řešení jako humánního nebo veterinárního jako přípravku k nápravě chorobných stavů souvisejících s poruchou buněčné imunity, tedy chronické: infekce, septické stavy, atopický ekzém, recidivující mykózy, psoriázy imunodeficience spojené s onkologickou léčbou.
e) Použití transfer faktoru podle tohoto technického řešení jako humánního nebo veterinárního profylaktického přípravku.
Průmyslová využitelnost
Technického řešení je využitelné při komerční přípravě jakéhokoliv transfer faktoru, specifického i nespecifického, připraveného z leukocytů periferní krve. Technického řešení je dále použitelné jak při výrobě humánního léčivého přípravku, tak i u léčivých přípravků určených pro veterinární použití. Technického řešení je využitelné při komerční přípravě jakéhokoliv transfer faktoru, specifického i nespecifického, využitelného jako součást doplňků stravy. Přípravek získaný postupem přípravy podle tohoto technického řešení je použitelné u chorobných stavů souvisejících s poruchou buněčné imunity (chronické: infekce, septické stavy, atopický ekzém, recidivující mykózy, psoriázy; imunodeficience spojené s onkologickou léčbou). Přípravek je použitelný i profýlakticky. Doporučené podání: lyofilizovaná tableta je vložena do úst, kde dojde k jejímu ulpění na sliznici a k rychlému rozpuštění. Tableta se nepolyká.
Claims (7)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Léčivo obsahující transfer faktor, vyznačující se tím, že obsahuje dialyzát nebo ultrafíltrát z rozrušených leukocytů periferní krve, tedy koncentrát bez balastních solí, obsahující bílkovinné složky a složky nukleových kyselin, jejichž obsah v léčivu, který je vyjádřen indexem absorbance, který vychází z poměru absorbancí měřených při 260 nm a 280 nm, není menší než 1,7 a ve kterém žádná ze složek léčiva nemá molekulovou hmotnost větší než 10 000 Daltonů.
- 2. Léčivo podle nároku 1, vyznačující se tím, že index absorbance je v rozmezí 1,7 až 2,1.
- 3. Léčivo podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že je ve formě lyofilizované tablety.
- 4. Léčivo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že je ve formě lyofilizované tablety uzavřené v blistru zataveném krycí fólií.
- 5. Léčivo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že je ve formě lyofilizované tablety pro bukální podání.
- 6. Léčivo podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako pomocné látky obsahuje dextran s molekulovou hmotností 40 000 Da, iota karagenan, polyethylenglykol, sodnou sůl sacharinu a čištěnou vodu.
- 7. Léčivo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že obsahuje léčivou dávku transfer faktoru z 200 milionů rozrušených leukocytů lidské periferní krve.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37802U CZ34517U1 (cs) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37802U CZ34517U1 (cs) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ34517U1 true CZ34517U1 (cs) | 2020-11-10 |
Family
ID=73223590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37802U CZ34517U1 (cs) | 2020-06-12 | 2020-06-12 | Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ34517U1 (cs) |
-
2020
- 2020-06-12 CZ CZ2020-37802U patent/CZ34517U1/cs active Protection Beyond IP Right Term
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4906616A (en) | Hydrolyzed sodium casein compositions for dialysis procedures | |
| TW580392B (en) | Process for preparing synthetic soil-extract materials and medicaments based thereon | |
| TWI309569B (en) | Biocompatible dialysis fluids containing icodextrins | |
| CN101346154B (zh) | 含低粘度藻酸盐的水溶性薄膜 | |
| JPH0813750B2 (ja) | 経口用トロンビン製剤 | |
| JP5475671B2 (ja) | ピロホスフェートを含む滅菌透析溶液 | |
| KR101330394B1 (ko) | 의약 용액, 이의 제조 방법 및 용도 | |
| CZ2020342A3 (cs) | Způsob přípravy léčiva transfer faktor, léčivo transfer faktor, metodika testování biologické účinnosti, léková forma a její použití | |
| Global | Programme | |
| CN106031710B (zh) | 一种富马酸氟呐普拉赞的注射剂及其制备方法 | |
| JP5185470B2 (ja) | 自己血清添加骨髄細胞培養システム、自己血清添加骨髄細胞培養方法および自己血清添加培養骨髄細胞を有効成分とする医薬組成物の製造方法 | |
| CZ34517U1 (cs) | Léčivo obsahující transfer faktor a jeho léková forma | |
| CZ34708U1 (cs) | Kit pro test biologické účinnosti transfer faktoru | |
| RU2605271C1 (ru) | Гранулы с экстрактами клюквы, брусники, марены красильной диуретического, спазмолитического и литолитического действия | |
| CA2820174C (en) | Low sodium solution with different concentrations of sodium for dialysis | |
| WO2007143957B1 (en) | 'transfer factor' medicament - ways of manufacturing and use | |
| CN106333923A (zh) | 一种三七总皂苷缓释凝胶及其制备方法 | |
| CN108926703A (zh) | 骨肽葡萄糖注射液 | |
| RU2523386C1 (ru) | Способ иммунотерапии вирусного гепатита с | |
| RU2187316C2 (ru) | Способ лечения и профилактики иммунологической недостаточности | |
| JP3028274B2 (ja) | トロンビン固形製剤の安定化方法 | |
| RU2745413C2 (ru) | Система из множества пакетов и способ приготовления компонентов крови | |
| RU2252778C1 (ru) | Применение трипептида pro-gly-pro в качестве средства профилактики и лечения диабета, способ профилактики и лечения диабета и фармацевтическая композиция для профилактики и лечения диабета | |
| JPH03169823A (ja) | 抗ウイルス剤 | |
| RU2014050C1 (ru) | Офтальмологическое средство и способ его получения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20201110 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20231207 |