CZ306293B6 - Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem - Google Patents
Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ306293B6 CZ306293B6 CZ2015-670A CZ2015670A CZ306293B6 CZ 306293 B6 CZ306293 B6 CZ 306293B6 CZ 2015670 A CZ2015670 A CZ 2015670A CZ 306293 B6 CZ306293 B6 CZ 306293B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- betulin
- lupeol
- solution
- ethanol
- filtered
- Prior art date
Links
- FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N betulin Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N 0.000 title claims abstract description 90
- JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N Oxyallobutulin Natural products C1CC(=O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(CO)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 89
- MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N betulin Natural products CC(=O)OC1CCC2(C)C(CCC3(C)C2CC=C4C5C(CCC5(CO)CCC34C)C(=C)C)C1(C)C MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 89
- PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N lupeol Natural products CC(=C)C1CC2C(C)(CCC3C4(C)CCC5C(C)(C)C(O)CCC5(C)C4CCC23C)C1 PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N lupeol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 52
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 88
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 44
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 17
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims abstract description 12
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 11
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 claims description 29
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 18
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 8
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims 1
- 125000003177 lupeol group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract 2
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 17
- QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N betulinic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 3-Epi-Betulin-Saeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-20(29)-Lupen-3,27-oic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C(O)=O)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N Betulinic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1C[C@H]([C@H]2CC[C@]3(C)[C@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N 0.000 description 10
- PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N dihydrobetulinic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(C)C)C5C4CCC3C21C PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N nepehinol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 9
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 9
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 4
- 241000219430 Betula pendula Species 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000001577 simple distillation Methods 0.000 description 3
- 235000009109 Betula pendula Nutrition 0.000 description 2
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N limonene Chemical compound CC(=C)C1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 235000003932 Betula Nutrition 0.000 description 1
- 241000219429 Betula Species 0.000 description 1
- 244000274847 Betula papyrifera Species 0.000 description 1
- 241001520764 Betula pubescens Species 0.000 description 1
- 238000006027 Birch reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 241000208267 Calotropis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide Chemical compound C[Si](C)(C)O\C(C(F)(F)F)=N\[Si](C)(C)C XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- PSZDOEIIIJFCFE-UHFFFAOYSA-N Oleanolic alcohol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(CO)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C PSZDOEIIIJFCFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000587208 Oxystelma Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 description 1
- 150000001674 calcium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012824 chemical production Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- PSZDOEIIIJFCFE-OSQDELBUSA-N erythrodiol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C PSZDOEIIIJFCFE-OSQDELBUSA-N 0.000 description 1
- HTZRWCSRPTWJCT-UHFFFAOYSA-N erythrodiol Natural products CC1(C)CCC2(CO)CCC3C(CCC4C3(C)CCC5C(C)(C)C(O)CCC45C)C2C1 HTZRWCSRPTWJCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012632 extractable Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 229940087305 limonene Drugs 0.000 description 1
- 235000001510 limonene Nutrition 0.000 description 1
- NKMDIWKRKQFYPH-VIUFNMEASA-N lupane Chemical compound C1CCC(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CC[C@@H](C(C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C NKMDIWKRKQFYPH-VIUFNMEASA-N 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- MXEMKMNFLXVQBW-UHFFFAOYSA-N oleanoic acid Natural products C1CCC(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MXEMKMNFLXVQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000005092 sublimation method Methods 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 150000003738 xylenes Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Předkládané řešení se týká způsobu purifikace betulinu a lupeolu z extraktu směsi triterpenů březové kůry, který obsahuje následující kroky: a) extrakt směsi triterpenů březové kůry se rozpustí v acetonu, s výhodou za varu; b) vzniklý roztok se za horka přefiltruje, filtrát se naředí destilovanou vodou, vzniklá suspenze se zfiltruje, promyje destilovanou vodou a vysuší; c) sraženina vzniklá v kroku b) se rozpustí v ethanolu za varu, k roztoku se přidá horký roztok CaCl.sub.2.n. v ethanolu a k takto vzniklému čirému roztoku se pomalu přidává horký ethanolový roztok NaOH, za postupného vzniku nerozpustného Ca(OH).sub.2.n., který se odfiltruje, přičemž filtrát se ponechá krystalizovat, vzniklá krystalická sraženina se zfiltruje, promyje ethanolem a vodou a vysuší; d) krystalická sraženina vzniklá v kroku c) se rozpustí v chloroformu, s výhodou za varu, a vzniklý roztok se vysráží petroléterem a/nebo benzinem a/nebo čistým nízkým uhlovodíkem, vybraným ze skupiny obsahující (C5 až C8) uhlovodíky, s výhodou pentan, hexan, cyklohexan, heptan, přičemž vzniklá sraženina betulinu se zfiltruje, promyje petroléterem a/nebo benzinem a/nebo čistým nízkým uhlovodíkem, vybranými ze skupiny obsahující (C5 až C8) uhlovodíky, s výhodou pentan, hexan, cyklohexan, heptan, a vysuší, přičemž proces vaření, filtrace a sušení je s výhodou alespoň ještě jednou zopakován; získaný filtrát obsahující lupeol se odpaří; e) sraženina nebo filtrát z kroku d) se rozpustí v minimálním množství chloroformu za laboratorní teploty, vzniklý roztok se selektivně přefiltruje přes silikagel v chloroformu a bezbarvý filtrát se odpaří dosucha. Předkládané řešení se dále týká betulinu a lupeolu připravitelných tímto způsobem.
Description
Předkládaný vynález se týká způsobu purifikace betulinu a lupeolu z extraktu březové kůry, betulinu a lupeolu připravitelných tímto způsobem.
Dosavadní stav techniky
Betulin (strukturní vzorec I) a lupeol (strukturní vzorec II) jsou pentacyklické triterpeny lupanového typu. Jedná se o lipofilní přírodní látky rostlinného původu, prakticky nerozpustné ve vodě.
Bohatým zdrojem lupeolu a zvláště betulinu je vnější kůra některých druhů bříz, např. druhu Betula pendula (syn. B. alba), široce rozšířeného ve střední Evropě. Břízy produkují i jiné triterpenoidy, např. kyselinu betulinovou, kyselinu oleanovou, erythrodiol, betulon apod., obvykle ale v podstatně menším množství a v závislosti na botanickém druhu. Samotná kůra, zdaleka nebohatší zdroj triterpenů z celé břízy, je pak masivním odpadem dřevařského a zvláště papírenského průmyslu a většinou je využívána jen jako palivo pro výrobu tepla resp. kombinovanou výrobu tepla a elektřiny.
Betulin vykazuje velmi širokou škálu biologických a medicínských účinků. Popsány byly účinky antimykotické, antibakteriální, protizánětlivé, antivirové, anti-HIV, hepatoprotektivní a především antiproliferativní a protinádorové. Navíc bylo prokázáno, že betulin velmi příznivě ovlivňuje léčbu aterosklerózy a obezity způsobené nevhodnou výživou a zvyšuje citlivost buněk na inzulín u diabetů II typu. Betulin je tak mimořádně perspektivní léčivo v mnohých oblastech humánní medicíny, přičemž je klasifikován jako prakticky netoxický. Betulin je také v mnohem větších množstvích dosud zpracováván do kosmetických výrobků a jako součást doplňků výživy.
Lupeol byl doposud zkoumán o něco méně než betulin. Hlavními příčinami mohou být jeho podstatně vyšší cena, než je u betulinu, a patrně také ještě menší rozpustnost ve vodě a v polárních organických rozpouštědlech. Lze však předpokládat, že díky své vysoké strukturní podobnosti (chybí jen OH-skupina na 28. uhlíku) bude vykazovat prakticky stejné biologické účinky jako betulin a bude tedy mít v budoucnu i podobné využití (M. Saleem, Cancer Lett, 2008, 285, 109115; S. Ciurlea et al., JAgroalimentary Processes and Technologies, 2010, 16(4), 427).
Betulin se zdaleka nejčastěji izoluje z kůry bříz. Aby se extrahovatelné látky získaly z přírodních materiálů efektivně, je obvykle nutné surovinu dostatečně rozmělnit. V průmyslovém měřítku se pro březovou kůru používají většinou mlýny. Pro lepší účinnost extrakce triterpenů je navíc vhodné alespoň hrubě oddělit vnější kůru s podstatně vyšším obsahem těchto látek od vnitřní kůry, což lze udělat průmyslově flotací částeček za přítomnosti smáčedla nebo např. selektivním fukarem využívajícím vyšší měrné hmotnosti částic vnitřní kůry.
- 1 CZ 306293 B6
Extrakci triterpenů z březové kůry lze po rozemletí nebo po rozdrcení suché kůry také usnadnit či urychlit působením ultrazvuku, aktivací kůry pomocí vodní páry nebo přehřáté vodní páry nebo působením mikrovln. Vlastní extrakce triterpenů má velké množství modifikací, lišících se především použitými extrakčními činidly. Mnohá z nich však jsou pro průmyslové využití nevhodná, buď pro svou vyšší cenu a menší dostupnost, pro svou horší recyklovatelnost (např. destilací), nebo pro nebezpečnost pro zdraví či pro životní prostředí. V literatuře se lze setkat např. s použitím methanolu, ethanolu, propanolu, butanolu, heptanu, hexanu, cyklohexanu, petroléteru, toluenu, xylenů, acetonu a jiných ketonů, dichlorethanu, chloroformu, ethylacetátu a jiných esterů, limonenu, éterů a dokonce i iontových látek na bázi imidazolu. Velmi často se také používají různé směsi organických rozpouštědel, někdy i směsi obsahující nezanedbatelné množství vody (WO 2005/047 304 a EP 2 514 430).
Poněkud složitější a technicky náročnější jsou superkritické extrakce využívající jako extrakční činidlo oxid uhličitý v superkritickém stavu (EP 2 125 860) nebo oxid uhličitý ve směsi s methanolem, ethanolem nebo acetonem v superkritickém stavu (CN 1 634 972, US 2005/158414). Betulin však může být před vlastní extrakcí převeden ještě v kůře na diacetát (EP 2 125 860).
Je také známá metoda sublimační, kdy je vysušená kůra zahřívána na vysokou teplotu (až přes 300 °C) při atmosférickém tlaku nebo za podtlaku a betulin (patrně s lupeolem) je vysublimován (M. Guidoin et al., Themochim. Acta, 2003, 398, 153).
Ze způsobů purifikace betulinu z primárních extraktů se v laboratorním měřítku používají převážně metody založené na kapalinové chromatografii, resp. flash-chromatografii, které jsou ale použitelné víceméně jen pro laboratorní přípravu, protože kapalinová chromatografie by v poloprovozním nebo průmyslovém měřítku byla při purifikaci triterpenů příliš náročná na čas, na materiál použitý jako stacionární fáze (po několika purifikacích by i přes promývání kolon nakonec došlo k jejich zanesení; u flash-chromatografie jsou pak kolony jednorázové) a hlavně na množství použitých elučních činidel, tedy organických rozpouštědel. Proto se pro použití ve výrobě větších množství betulinu a jiných triterpenů mnohem lépe hodí metody založené na rozdílné rozpustnosti v různých rozpouštědlech a na rekrystalizaci.
Lupeol se obvykle izoluje z jiných rostlin, které většinou neobsahují betulin a není jej tak třeba oddělovat, např. z rostlin rodu Lupinus, Calotropis, Oxystelma a mnoha dalších. Nicméně pro průmyslovou výrobu lupeolu se jeví jako nejvýhodnější zdroj březová kůra hlavně díky masivní dostupnosti této suroviny.
Izolaci lupeolu z březové kůry popisuje CN 1 793 161. Metoda je zpočátku relativně jednoduchá, založená na extrakci dichlormethanem, přečištění cyklohexanem a dvojí krystalizací ze směsi ethanol/aceton. Takto byla získána frakce obohacená lupeolem až na cca 80 %. Ovšem další přečištění na „pure lupeol“ se již děje klasickou chromatografii na silikagelu elucí směsí petroléter/ethylacetát, což metodu pro průmyslové použití výrazně komplikuje. Zmíněný patent nijak neřeší izolaci a případnou purifikaci betulinu, která by mohla probíhat současně.
US 2003/0 153 776 popisuje izolaci a purifikaci betulinu z březové kůry. Používá málo dostupná a drahá rozpouštědla, z hlediska ekologického nevhodná (toluen, xylen, vyšší étery společně s vodou, se kterou tato rozpouštědla tvoří azeotropickou směs a jejich část je tudíž obtížně recyklovatelná). Deklarovaná čistota konečného produktu je pod 96 %, přičemž autoři uvádějí o 3 °C vyšší teplotu tání, než je všeobecně publikovaná. Způsob extrakce z kůry pak vykazuje relativně velmi malou účinnost. Obdobně je tomu - včetně dosažené čistoty - i u DE 10204278.
WO 2005/047 304 využívá k izolaci a purifikaci betulinu, lupeolu a kyseliny betulinové systém extrakcí, srážení a krystalizací s použitím organických rozpouštědel (xylenu, acetonu, cyklohexanu a isopropanolu). Není zde vyřešen problém s recyklací značného množství použitého xylenu tvořícího s vodou azeotropickou směs.
-2CZ 306293 B6
RU 2 270 202 popisuje pro oddělení a purifíkaci betulinu a lupeolu systém extrakcí, rozpouštění, filtrací a krystalizací. Extrakční kroky jsou mnohokrát opakovány (např. na dvou místech purifikačního procesu 5 stejných extrakcí najeden purifikační krok), což nejenže zvyšuje ztráty v procesu, především však proces velmi prodlužuje. Získané produkty mají čistotu deklarovanou pod 96 %.
EP 2 514 430 nárokuje metodu kontinuální purifikace betulinu a kyseliny betulinové z extraktu březové kůry. Základem „kontinuality“ purifikace jsou 4 chromatografické/filtrační kolony s náplní silikagelu nebo hydratovaného oxidu hlinitého propojené důmyslným systémem ventilů. Na kolonách má dojít k účinné separaci betulinu, kyseliny betulinové a polárních barevných komponent. Tento systém má nevýhody snižující hodnotu tohoto náročného technického uspořádáni, a to zejména fakt, že výchozí surovinou pro purifikační krok je extrakt z březové kůry minimálně dvakrát předčištěný krystalizací, což se vše děje vsádkové, takže „kontinualita“ vlastní purifikace je diskutabilní. Dále je to vysoká spotřeba rozpouštědel použitých jak pro eluci purifikovaných látek, tak pro následné recyklační promývání kolon, přičemž jejich recyklace je kvůli vzájemnému míchání různých rozpouštědel velmi náročná. Složitá aparatura kolon, potrubí, ventilů a pump je náročná na údržbu, zvláště tehdy, když nebude možný kontinuální přísun dávkovou extrakcí získaného a krystalizací přečištěného výchozího materiálu a v aparatuře se začnou usazovat nečistoty a rozpouštědla se budou postupně vypařovat. Také recyklační promytí kolon nemůže být při rozumné spotřebě promývacích rozpouštědel dokonalé, bude nejspíše nutné adsorpční materiál kolon častěji vyměňovat, což nejenže prodraží výrobu, ale také naruší onu „kontinuální“ purifíkaci. Celý popsaný systém purifikace je založen na předpokladu, že ve výchozím materiálu není přítomen lupeol či další neuvedené triterpenoidy. To možná splňuje druh břízy, který autoři použili (B. papyrifera), u jiných druhů však je lupeol jako nečistota triterpenoidní povahy při purifíkaci betulinu majoritní a dosahuje až 20 % obsahu betulinu (např. u v Evropě nejrozšířenější B. pendula). Snaha o izolaci a purifíkaci kyseliny betulinové může být vzhledem k jejímu malému obsahu u mnoha druhů bříz poněkud neefektivní (viz. vysoká spotřeba rozpouštědel při purifíkaci), zvláště, vezme-li se v úvahu relativní snadnost její chemické výroby oxidací betulinu přes kyselinu betulonovou.
RU 2 192 879 (EP 2842 564) popisuje relativně jednoduchou přípravu betulinu z březové kůry včetně popisu technického zařízení, čistota získaného betulinu je však nízká (v nejlepším případě pod 95 %). Jako hlavní nečistota je uveden lupeol (přes 7 %).
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález řeší problémy stavu techniky poskytnutím způsobu purifikace betulinu a lupeolu systémem extrakcí, rozpouštění, filtrací a krystalizací, který vede k získání těchto látek v alespoň 99% čistotě, s použitím dobře recyklovatelných (pomocí destilace), levných a dostupných rozpouštědel, což snižuje celkovou spotřebu energie. Díky využití vhodných způsobů srážení z roztoku jsou purifikační kroky velmi účinné a celý extrakční a purifikační proces je bezpochyby podstatně rychlejší a čistota získaného betulinu a lupeolu je zřetelně vyšší než v dosavadním stavu techniky (přesahuje 99 % pro betulin a 95 % pro lupeol).
Předmětem předkládaného vynálezu je způsob purifikace betulinu a lupeolu z extraktu směsi triterpenů březové kůry. Způsob purifikace betulinu a lupeolu z extraktu směsi triterpenů březové kůry obsahuje následující kroky:
a) Pro odstranění polárních nečistot se extrakt směsi triterpenů březové kůry rozpustí v acetonu, s výhodou v 45 až 50násobném objemu acetonu vzhledem k hmotnosti extraktu, s výhodou za varu.
-3CZ 306293 B6
b) Vzniklý roztok se přefiltruje, s výhodou za horka, filtrát se naředí destilovanou vodou, s výhodou polovičního až stejného objemu jako aceton a vzniklá suspenze, s výhodou nejprve přivedená k varu a poté ochlazena na laboratorní teplotu, se přefiltruje. Sraženina obsahující triterpeny a méně polární nečistoty se promyje destilovanou vodou a vysuší. Po vysušení a případném smíchání jednotlivých subfrakcí je získána první purifikovaná frakce triterpenů v celkovém množství přesahujícím cca 80 % původní hmotnosti extraktu směsi triterpenů březové kůry. Jako filtr lze s výhodou použít papírový nebo keramický filtr.
Tento purifikační krok mj. velice usnadňuje další práci s materiálem, neboť všechny meziprodukty pro získání čistého betulinu a lupeolu jsou nadále buď krystalické, nebo jako amorfní dostatečně hrubé, a tudíž jsou dobře filtrovatelné, snadno promývatelné a dobře sušitelné. V tomto kroku téměř vymizí i kyselina betulinová, která jako polárnější triterpen zůstává rozpuštěna ve zředěném acetonu.
Postupné srážení triterpenů vodou z acetonového roztoku může též napomoci získat různé subfrakce s odlišným poměrem zastoupení lupeolu a betulinu. Čím menší množství vody je použito, tím je ve sraženině více zastoupen lupeol.
Z odpadního filtrátu je možné prostou destilací s následnou frakční destilací recyklovat většinu použitého acetonu. Nahnědlý odpad zbývající ve vodném roztoku po oddestilování podstatného množství acetonu nebyl analyzován ani nijak využit.
c) Pro odstranění látek kyselé povahy včetně zbytků kyseliny betulinové a dalších nečistot se sraženina vzniklá v kroku b) rozpustí v ethanolu za varu. S výhodou se použije 35násobný objem ethanolu vzhledem k hmotnosti frakce. Hmotnostně pětinové množství NaOH vzhledem k množství sraženiny vzniklé v kroku b) je rozpuštěno v 25násobném objemu ethanolu o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu rozpouštědla (vzhledem k hmotnosti NaOH) a ekvimolámí množství bezvodého CaCI2 vzhledem k použitému NaOH je odděleně rozpuštěno v 17násobném objemu ethanolu o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu rozpouštědla (vzhledem k hmotnosti CaCl2). K ethanolovému roztoku triterpenů se za intenzivního míchání přidá roztok CaCl2 v ethanolu o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu roztoku, a k takto vzniklému čirému roztoku se pomalu přidává ethanolový roztok NaOH o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu roztoku, za postupného vzniku nerozpustného Ca(OH)2, zpočátku jako bílá sraženina, při zvyšujícím se pH však stále intenzivněji hnědnoucí. Suspenze se přivede k varu a následně se sraženina odfiltruje a promyje ethanolem o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu. Tato sraženina může být dále použita k získání látek vysrážených převážně jako nerozpustné vápenaté sloučeniny či adsorbovaných na sraženinu (vč. určité části betulinu). Nahnědlý filtrát, obsahující převážně betulin a lupeol, se odpaří na přibližně třetinový objem a ponechá se krystalizovat, s výhodou při teplotě nižší než 25 °C, výhodněji při teplotě nižší než 10 °C. Vzniklá krystalická sraženina se zfiltruje, promyje ethanolem a vodou a vysuší. Po vysušení je získáno cca 65 % (vzhledem k výchozímu množství sraženiny v kroku c)) velice světlé, slabě béžové jemně krystalické látky.
Filtrát lze destilací ethanolu odpařit dosucha a odparek použít jako přídavek k výchozí sraženině při příštím cyklu purifíkace, čímž se výrazně zvýší celkový výtěžek, aniž by se snížila čistota konečného produktu.
Tento purifikační krok odstraňuje převážnou část látek kyselé povahy a látek výrazně barevných v alkalickém prostředí, patrně polyfenolické povahy, taninů, mastných kyselin a jejich esterů. Rovněž odstraňuje zbytky kyseliny betulinové, vždy doprovázející betulin a lupeol v březové kůře.
V kroku d) se krystalická sraženina vzniklá v kroku c) rozpustí v chloroformu, s výhodou v 16násobném objemu chloroformu vzhledem k hmotnosti frakce, za varu, a vzniklý roztok se vysráží petroléterem a/nebo benzinem a/nebo (C5 až C8) uhlovodíkem, s výhodou vybraným ze skupiny
-4CZ 306293 B6 obsahující pentan, hexan, cyklohexan a heptan. Vzniklá suspenze se s výhodou přivede k varu, zfiltruje a sraženina betulinu se promyje petroléterem a/nebo benzinem a/nebo (C5 až C8) uhlovodíkem, s výhodou vybraným ze skupiny obsahující pentan, hexan, cyklohexan a heptan, a vysuší, přičemž proces varu, filtrace a sušení je s výhodou alespoň ještě jednou zopakován. S výhodou je ke srážení použit 20násobek (vzhledem k hmotnosti frakce) objemu petroléteru, benzinu nebo (C5 až C8) uhlovodíku, s výhodou vybraného ze skupiny obsahující pentan, hexan, cyklohexan a heptan. Filtrát získaný odfiltrováním téměř bílé, jen velmi slabě nažloutlé amorfní sraženiny betulinu, obsahující lupeol, se odpaří dosucha. Takto se získá cca 5 až 10 hmotnostních % (vzhledem k hmotnosti sraženiny vzniklé v kroku c)) téměř bílé amorfní frakce lupeolu použitelné dále k získání a případné další purifíkaci lupeolu.
Tento purifikační krok využívá velice rozdílné rozpustnosti betulinu a lupeolu v nízkých uhlovodících nebo jejich směsích (petroléteru, benzinu). Zatímco petroléter je častým extrakčním činidlem při získávání lupeolu, betulin je v něm málo rozpustný. Jako velmi málo účinnou se však ukázala přímá extrakce lupeolu z původní jemně krystalické frakce získané v kroku c). Příčinou byla bezpochyby právě krystaličnost oné frakce, kdy povrch směsných krystalů nerozpustného betulinu s lupeolem neumožnily vniknutí petroléteru dovnitř krystalů a vymytí většiny lupeolu. Proto je zvoleno srážení betulinu uhlovodíky z jeho chloroformového roztoku, což se ukázalo jako mimořádně účinné. Z filtrátů lze recyklovat chloroform a použité uhlovodíky pro opakované použití frakční destilací.
e) sraženina betulinu nebo odparek filtrátu s lupeolovou frakcí z kroku d) se rozpustí v chloroformu, s výhodou v co nejmenším množství chloroformu, za laboratorní teploty, vzniklý roztok se přefiltruje přes silikagel v chloroformu a bezbarvý filtrát se odpaří dosucha. V tomto kroku se odstraní poslední zbytky polárních nečistot. Množství použitého silikagelu je s výhodou cca dvojnásobek hmotnosti použité frakce z kroku d) v malé chromatografícké kolonce, kde výška sloupce silikagelu je 1,5 až dvojnásobná oproti průměru kolony. Malé zbytky barevných nečistot se zcela zachytí v prvních přibližně 20 % výšky sloupce silikagelu. Kolona se následně promyje ještě asi polovičním množstvím chloroformu použitého pro rozpuštění frakce z kroku d). Z naprosto bezbarvého filtrátu se poté zcela oddestiluje chloroform, čímž se získá čistě bílý odparek amorfního prášku betulinu nebo lupeolu.
Tento krok využívá vyšší afinity polárních nečistot k povrchu polárního silikagelu v nepolárním prostředí chloroformu. Jedná se o filtraci, která je oproti klasické chromatografii mnohem rychlejší a nesrovnatelně méně náročná na materiál, rozpouštědla a vybavení. Prakticky veškerý chloroform použitý v tomto purifikačním krokuje recyklovatelný prostou destilací.
Ve výhodném provedení se acetonový filtrát vzniklý v kroku b) naředí destilovanou vodou a vzniklá suspenze se zfiltruje, promyje destilovanou vodou a vysuší pro získání další frakce betulinu a lupeolu, přičemž tento postup se může opakovat vícekrát.
Ve výhodném provedení následuje po kroku e) ještě krok f), ve kterém se odparek z předchozího kroku e) dále čistí rekrystalizací. Jako rozpouštědlo pro rekrystalizaci se s výhodou použije ethanol pro betulin (resp. hexan pro lupeol). Při rekrystalizaci betulinu z ethanolu se odparek betulinu s výhodou rozpustí ve 40násobku objemu vroucího 96% čistého ethanolu (vzhledem k hmotnosti použitého odparku) a po úplném rozpuštění se roztok rychle zfiltruje za horka. Následně se čirý filtrát ponechá volně krystalizovat, s výhodou při teplotě nižší než 25 °C, výhodněji při teplotě nižší než 10 °C. Krystalická sraženina se poté zfiltruje za sníženého tlaku, promyje malým množstvím ledového ethanolu a vysuší za laboratorní teploty na vzduchu. Získá se takto přibližně 70 % z původního množství použitého odparku. Ethanol (resp. hexan) lze recyklovat prostou destilací filtrátu.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž betulin připravitelný výše uvedeným způsobem, který má čistotu alespoň 99 %.
-5 CZ 306293 B6
Dále je předmětem vynálezu lupeol připravitelný výše uvedeným způsobem, kteiý má čistotu alespoň 95 %.
K získání extraktu směsi triterpenů březové kůry, ze kterého vychází způsob purifikace betulinu a lupeolu podle předkládaného vynálezu, vede několik způsobů již dříve popsaných v literatuře. Jako nejúčinnější a nej efektivnější způsob jak z hlediska časového, tak z hlediska spotřeby rozpouštědla a energie vynaložené na jeho recyklaci se jeví extrakce v Soxhletově aparatuře. Výchozí surovinou pro extrakt směsi triterpenů je vnější kůra břízy, která je po vysušení náležitě rozemleta či rozdrcena. Pro průmyslové využití jako zdroj připadá v úvahu hlavně odpadní kůra při zpracování březového dřeva např. v papírenském průmyslu, která by byla rozmělněna a případně její vnější vrstva vytříděna některým ze známých způsobů. Jako extrakční krok pro získání triterpenů z vnější březové kůry může být zvolena jednoduchá extrakce technickým ethanolem denaturovaným benzinem v Soxhletově extraktoru, která je mimořádně účinná a rychlá (celý extrakční proces i s vysušením produktu trvá pouze 1 až 2 hodiny). K extrakci triterpenů z březové kůry lze však použít libovolný jiný způsob uvedený ve výše uvedených patentech či jiných odborných článcích.
Objasnění výkresů
Obr. 1: Chromatogramy GC-MS pro frakce: B0, Bia, Blb, Bic, Bid, B2, B3, L3 a B5 (neuvedená frakce B4 má prakticky totožný chromatogram jako frakce B5)
Obr. 2: Tabulka zastoupení triterpenů ve všech frakcích
Obr. 3: A - krystalky frakce B5, B - drúzy krystalů frakce B5b po volném odpaření ethanolu
Obr. 4: Schéma extrakce a purifikace použité v předkládaném vynálezu
Příklady uskutečnění vynálezu
Všechny frakce jsou označeny písmenem (B - betulinová frakce, L - lupeolová frakce) a číslem označujícím číslo purifikačního kroku (0 pro původní extrakt z kůry, 1 pro krok b), 2 pro krok c), 4 pro krok e), 5 pro krok f)). Z každé frakce bylo odebráno jisté množství pro analýzu a pro další případné účely, takže do dalšího purifikačního krokuje použito menší množství, než bylo získáno v předešlém kroku. Čistota vzorků byla kontrolována pomocí GC-MS: Vzorky všech frakcí a subfrakcí v množstvích 1 až 2 mg byly rozpuštěny v pyridinu a derivatizovány N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamidem. Poté byly analyzovány plynovou kapilární chromatografii s hmotnostně-spektrometrickou detekcí. Jako standardy pro určení elučních časů byly použity betulin (min. 98 %), lupeol (min. 94 %) a kyselina betulinová (min. 98 %) od firmy Sigma— Aldrich (USA).
Příklad 1: Extrakce triterpenů z březové kůry g vysušené ručně oloupané vnější kůry z pokácené břízy Betula pendula (lokalita Hradec Králové) bylo nastříháno na malé kousky a rozsekáno sekáčkem kuchyňského mixeru. Takto upravená kůra byla podrobena extrakci technickým ethanolem denaturovaným benzinem v Soxhletově extraktoru, přičemž byl zkondenzovaný teplý ethanol z extrakční nádobky jen sedmkrát vyprázdněn. Ze získaného ethanolového roztoku byl ethanol destilací úplně odstraněn. Takto bylo získáno 12,9 g suchého hrubého extraktu B0 (B0 na obr. 1 a 2).
-6CZ 306293 B6
Příklad 2: Purifikační krok b): částečné odstranění polárních nečistot z hrubého extraktu B0 g hrubého extraktu B0 bylo rozpuštěno v 500 ml acetonu za varu. Ještě horký roztok byl zfiltrován na papírovém filtru malé hustoty. Nerozpuštěný sediment o hmotnosti 0,91 g po vysušení byl označen jako frakce Bia a obsahoval přes 24 % lupeolu a 75 % betulinu (Bia na obr. 1 a 2). Filtrát byl naředěn asi 200 ml destilované vody a vzniklá suspenze byla krátce povařena. Světlá sraženina triterpenů a méně polárních nečistot byla po zchlazení zfiltrována opět na papírovém filtru, promyta destilovanou vodou a vysušena. Takto bylo získáno 1,7 g frakce Blb s obsahem přes 22 % lupeolu a přes 77 % betulinu (Blb na obr. 1 a 2). Do filtrátu bylo následně přilito dalších asi 200 ml vody, nově vzniklá sraženina byla opět zfiltrována a promyta vodou. Takto bylo získáno 4,96 g frakce Blc s obsahem přes 19 % lupeolu a přes 80 % betulinu (Blc na obr. 1 a 2). Do filtrátu bylo přilito následně ještě asi 100 ml destilované vody a obdobným způsobem bylo získáno 3,19 g frakce Bid s obsahem přes 8 % lupeolu a přes 91 % betulinu (Bid na obr. 1 a 2). Celkem tedy bylo získáno cca 10,76 g první purifikované frakce triterpenů Bl. Kyselina betulinová a případné další triterpeny se od této frakce vyskytují prakticky jen ve stopách.
Výsledky analýzy ukazují, že zastoupení lupeolu a betulinu ve sraženině do značné míry závisí na poměru aceton/voda při srážení. Pro přípravu či výrobu samotného lupeolu je vhodnější použít k prvnímu srážení méně vody. V každém případě však je možno další vodou nakonec vysrážet prakticky veškeré zbylé množství betulinu a lupeolu a po vysušení konečnou sraženinu znovu použít spolu s výchozím extraktem při purifíkaci v další várce purifikačního cyklu.
Příklad 3: Purifikační krok c): odstranění látek kyselé povahy a dalších nečistot z frakce Bl
5,5 g směsné frakce Bl bylo rozpuštěno ve 200 ml ethanolu za varu. Vedle toho byl připraven horký roztok 1,1 g NaOH ve 20 ml ethanolu a horký roztok 3 g bezvodého CaCl2 v 50 ml ethanolu. K vroucímu roztoku frakce Bl byl za intenzivního míchání přilit horký roztok CaCl2 a k takto vzniklému čirému roztoku byl přidáván horký ethanolový roztok NaOH pozvolna po dobu cca 30 sekund. Okamžitě začala vznikat sraženina v ethanolu nerozpustného Ca(OH)2, zpočátku bílá, při zvyšujícím se pH však stále intenzivněji hnědnoucí. Po krátkém povaření byla tmavě hnědá sraženina za horka zfiltrována. Z čirého nahnědlého filtrátu bylo následně oddestilováno asi 100 ml ethanolu a zbytek byl ponechán cca 3 h při 7 °C krystalizovat. Po odfiltrování, promytí malým množstvím ethanolu a vysušení bylo takto získáno 3,55 g velice světlé, slabě béžové jemně krystalické frakce B2 s obsahem přes 80 % betulinu a přes 19 % lupeolu (B2 na obr. 1 a 2).
Příklad 4: Purifikační krok d): oddělení betulinu a lupeolu z frakce B2
2,5 g frakce B2 bylo rozpuštěno ve 40 ml chloroformu za varu. Do takto vzniklého čirého roztoku bylo poté přidáno 100 ml petroléteru 40 až 60 °C. Okamžitě začala vznikat sraženina v petroléteru málo rozpustného betulinu. Po cca 10 minutovém povaření a následném zchlazení byla sraženina zfiltrována na papírovém filtru a promyta cca 30 ml čistého petroléteru. Vysušená sraženina byla opět rozpuštěna, tentokrát ve 30 ml vroucího chloroformu, a po úplném rozpuštění bylo přidáno 80 ml petroléteru. Vzniklá sraženina byla zfiltrována na fritě a promyta cca 30 ml petroléteru. Po vysušení sraženiny bylo získáno 1,61 g téměř bílé, jen velmi slabě nažloutlé amorfní frakce B3 s obsahem betulinu téměř 99 % (B3 na obr. 1 a 2). Při použití heptanu místo petroléteru vzniká sraženina betulinu pozvolna a je zapotřebí delšího času po zchlazení a před filtrací. Sraženina se zdá být jemnější a o trochu hůře filtrovatelná, než při použití petroléteru jako srážecího činidla a oddělení lupeolu je méně účinné (o cca 10 %). Naproti tomu je snadnější recyklace původních rozpouštědel frakční destilací na koloně.
-7 CZ 306293 B6
Odpařením prvního filtrátu a vysušením bylo získáno 0,126 g bílého prášku obsahujícího odstraněný lupeol o čistotě téměř 89 % a označeného jako frakce L3 (L3 na obr. 1 a 2). Další purifikace probíhala jednou z následujících variant:
a) rozpuštění frakce L3 v minimálním množství horkého chloroformu a opětovné vysrážení znečišťujícího betulinu 2 až 3 násobným objemem petroléteru, filtrace a odpaření čirého filtrátu nebo
b) rozpuštění většiny frakce L3 v minimálním množství petroléteru za horka tak, aby zbyla nejméně % původního množství nerozpuštěna. Po zchlazení roztoku (čímž se část lupeolu vysráží, spolu však strhne i většinu zbylého znečišťujícího betulinu) se roztok rychle zfiltruje a filtrát nechá odpařit. Takto se odstraní alespoň poloviční množství betulinu a čistota lupeolu je cca 95 % nebo více.
Příklad 5: Purifikační krok e): vyčištění betulinu od zbytku polárních nečistot z frakce B3 g frakce B3 bylo na fritě promyto malým množstvím (cca 10 ml) petroléteru a po vysušení následně rozpuštěno v cca 40 ml chloroformu za laboratorní teploty. Takto vzniklý roztok byl přefiltrován přes 2 g silikagelu nasypaného do malé kolonky s chloroformem. Vrstva silikagelu byla 1,5 cm silná. Malé zbytky barevných nečistot byly beze zbytku zachyceny v horních cca 3 mm sloupce silikagelu. Kolona byla následně promyta ještě 20 ml chloroformu. Ze zcela bezbarvého filtrátu byl poté úplně oddestilován chloroform, přičemž byl získán čistě bílý odparek amorfního prášku - frakce B4 (B4 na obr. 2). Tato frakce s obsahem přes 99 % betulinu nebyla vážena a po odebrání malého množství vzorku k analýze (do 50 mg) bylo veškeré zbylé množství použito pro poslední purifikační krok.
Příklad 6: Purifikační krok e): vyčištění lupeolu od zbytku polárních nečistot z frakce L3
Konečné vyčištění lupeolu od zbytku nečistot bylo obdobné, jako je uvedené u betulinu, tedy filtrací chloroformového roztoku produktu na silikagelu (viz příklad 5). V případě menších množství lupeolové frakce by byla možná jako vysoce účinný purifikační krok lupeolu i kapalinová chromatografie využívající mírně rozdílné lipofility lupeolu a betulinu (viz např. CN 1793161). Přečištěná lupeolová frakce L4 měla čistotu cca 95 %.
Příklad 7: Rekrystalizace čistého betulinu z ethanolu
Téměř veškerá frakce B4 byla rozpuštěna ve 40 ml vroucího 96% čistého ethanolu a po úplném rozpuštění byl roztok rychle zfiltrován za horka. Následně byl původně čirý filtrát, při postupném chladnutí stále více se zakalující postupně vznikajícími zárodečnými krystalky, ponechán k volné krystalizaci cca 3 hodiny při 7 °C. Krystalická sraženina byla poté zfiltrována na fritě za podtlaku, promyta malým množstvím ledového ethanolu a vysušena za laboratorní teploty na vzduchu. Bylo získáno 0,693 g zcela bílé krystalické frakce B5 představující betulin o čistotě 99,6 % (B5 na obr. I a 2). Drobné orthorhombické krystalky betulinu se jevily při pozorování v mikroskopu zcela průhledné a bezbarvé, žádné nečistoty nebyly pozorovány (obr. 3A). Teplota tání tohoto konečného produktu byla zjištěna mikroskopickým bodotávkem a jeho hodnota činila 255 až 256 °C, což zcela odpovídá literárním údajům a je o cca 1 °C vyšší, než standard betulinu od firmy Sigma-Aldrich s deklarovanou čistotou vyšší než 98 %.
Matečný louh po krystalizaci frakce B5 byl v misce ponechán na vzduchu do úplného odpaření ethanolu. Byly získány jehličkovité drúzy dlouhých tenkých krystalů ukázaných na obr. 3B. Matečný louh lze také s výhodou použít místo čistého ethanolu pro rozpuštění frakce B4 při příští purifikaci.
-8CZ 306293 B6
Pro krystalizaci je využit velký rozdíl rozpustnosti betulinu v ethanolu za normální teploty a za varu, kdy je rozpustnost zhruba pětinásobná. Ethanol je však také krystaliformní látkou a nejen rozpouštědlem, neboť betulin krystaluje v průhledných bezbarvých orthorhombických krystalech s jednou molekulou ethanolu na jednu molekulu betulinu, kde jsou vzájemně provázány vodíkovými můstky (S.A. Kuznetsova et al, Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2014, 40, 742). Po ztrátě krystalického ethanolu se krystaly betulinu rozpadají na amorfní bílý prášek.
Schéma celého provedeného procesu izolace a purifikace betulinu a lupeolu z březové kůry je uvedeno na obr. 4.
Příklad 8: Rekrystalizace čistého lupeolu z hexanu
Rekrystalizace frakce L4 lupeolu byla provedena analogicky jako v příkladu 7, rozpouštědlem byl v tomto případě hexan a nikoli ethanol (krystalická sraženina má pak mnohem lepší a hrubší strukturu).
Průmyslová využitelnost
Navržený postup je pro svou technologickou jednoduchost (v podstatě pouze rozpouštění, srážení, filtrace a destilace) a nízkou náročnost na spotřebovaný materiál velice vhodný pro poloprovozní nebo průmyslovou výrobu velmi čistého betulinu a čistého lupeolu z odpadní březové kůry pro medicínské, farmaceutické, kosmetické či výzkumné použití. Použitá rozpouštědla jsou levná, recyklovatelná, s výjimkou chloroformu netoxická a prakticky neškodí životnímu prostředí. Většinu všech použitých rozpouštědel lze recyklovat pomocí prosté nebo frakční destilace.
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob purifikace betulinu a lupeolu z extraktu směsi triterpenů z březové kůry, s výhodou ethanolového extraktu, vyznačený tím, že obsahuje následující kroky:a) extrakt směsi triterpenů z březové kůry se rozpustí v acetonu, s výhodou za varu;b) vzniklý roztok se přefiltruje, s výhodou za horka, triterpeny se vysráží destilovanou vodou, vzniklá suspenze se zfiltruje, sraženina se promyje destilovanou vodou a vysuší;c) vysušená sraženina vzniklá v kroku b) se rozpustí v ethanolu za varu, k roztoku se přidá roztok CaCI2 v ethanolu o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu roztoku, a k takto vzniklému čirému roztoku se pomalu přidává ethanolový roztok NaOH o teplotě v rozmezí mezi 40 °C a teplotou varu roztoku, za postupného vzniku nerozpustného Ca(OH)2, který se odfiltruje, přičemž filtrát se ponechá krystalizovat, vzniklá krystalická sraženina se zfiltruje, promyje ethanolem a vodou a vysuší;d) krystalická sraženina vzniklá v kroku c) se rozpustí v chloroformu, s výhodou za varu, a vzniklý roztok se vysráží petroléterem a/nebo benzinem a/nebo (C5 až C8) uhlovodíkem, s výhodou vybraným ze skupiny obsahující pentan, hexan, cyklohexan a heptan, přičemž vzniklá sraženina betulinu se zfiltruje, promyje petroléterem a/nebo benzinem a/nebo (C5 až C8) uhlovodíkem, s výhodou vybraným ze skupiny obsahující pentan, hexan, cyklohexan a heptan, a vysuší; získaný filtrát obsahující lupeol se odpaří;-9CZ 306293 B6 a dále krok e 1) a/nebo e2), kde el) sraženina betulinu vzniklá v kroku d) se rozpustí v chloroformu za laboratorní teploty, vzniklý roztok se přefiltruje přes silikagel v chloroformu a bezbarvý filtrát se odpaří dosucha;e2) odparek filtrátu z kroku d) obsahující lupeol se rozpustí v chloroformu za laboratorní teploty, vzniklý roztok se přefiltruje přes silikagel v chloroformu a bezbarvý filtrát se odpaří dosucha.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že acetonový roztok se postupně sráží vodou za vzniku subfrakcí s odlišným poměrem zastoupení lupeolu a betulinu.
- 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že po kroku el) následuje krok fl), ve kterém se výsledný odparek betulinu dále čistí rekrystalizaci z ethanolu.
- 4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že po kroku e2) následuje krok f2), ve kterém se výsledný odparek lupeolu dále čistí rekrystalizaci z hexanu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-670A CZ306293B6 (cs) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-670A CZ306293B6 (cs) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2015670A3 CZ2015670A3 (cs) | 2016-11-16 |
| CZ306293B6 true CZ306293B6 (cs) | 2016-11-16 |
Family
ID=57353929
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2015-670A CZ306293B6 (cs) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ306293B6 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023161563A1 (en) * | 2022-02-24 | 2023-08-31 | Innomost Oy | Method and apparatus for processing birch bark |
| WO2023161562A1 (en) * | 2022-02-24 | 2023-08-31 | Innomost Oy | Method for recovering of high purity betulin from birch bark |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109988216B (zh) * | 2017-12-31 | 2023-01-06 | 中国医学科学院药物研究所 | 白桦脂醇晶d型物质及制备方法和其组合物与用途 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000026174A2 (en) * | 1998-11-02 | 2000-05-11 | Daniel Gaudet | Process for preparing natural product derivatives from plants in a single step |
| US20020043577A1 (en) * | 1999-08-10 | 2002-04-18 | Regents Of The University Of Minnesota | Birch bark processing and the isolation of natural products from birch bark |
| DE10204278C1 (de) * | 2002-02-02 | 2003-08-07 | Boehringer Ingelheim Pharma | Verfahren zur Gewinnung von Betulin |
| RU2283655C1 (ru) * | 2005-04-06 | 2006-09-20 | Тамара Федоровна Никуленкова | Способ получения биологически активных веществ |
| CZ200736A3 (cs) * | 2007-01-15 | 2008-10-29 | Univerzita Karlova v Praze, Prírodovedecká fakulta | Zpusob prípravy a izolace betulin-diacetátu z brezové kury z papíren a jeho prípadného zpracování na betulin |
-
2015
- 2015-09-30 CZ CZ2015-670A patent/CZ306293B6/cs unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000026174A2 (en) * | 1998-11-02 | 2000-05-11 | Daniel Gaudet | Process for preparing natural product derivatives from plants in a single step |
| US20020043577A1 (en) * | 1999-08-10 | 2002-04-18 | Regents Of The University Of Minnesota | Birch bark processing and the isolation of natural products from birch bark |
| US20030109727A1 (en) * | 1999-08-10 | 2003-06-12 | Krasutsky Pavel A. | Isolation of natural products from birch bark |
| DE10204278C1 (de) * | 2002-02-02 | 2003-08-07 | Boehringer Ingelheim Pharma | Verfahren zur Gewinnung von Betulin |
| RU2283655C1 (ru) * | 2005-04-06 | 2006-09-20 | Тамара Федоровна Никуленкова | Способ получения биологически активных веществ |
| CZ200736A3 (cs) * | 2007-01-15 | 2008-10-29 | Univerzita Karlova v Praze, Prírodovedecká fakulta | Zpusob prípravy a izolace betulin-diacetátu z brezové kury z papíren a jeho prípadného zpracování na betulin |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| A. Pazhe: "Impact of the solvent on the yield of silver birch (betula pandula roth) Outer bark extractives" 8th WSE meeting, Kaunas , 13-14. 9.2012 http://www.nordicforestresearch.org/wp-content/uploads/2011/03/17_Aigars_Pazhe.pdf * |
| J. Rizhikovs et al: "Isolation of triterpene-rich extracts from outer birch bark by hot water and alkaline pre-treatment or the appropriate choice of solvents" Industrial Crops and Products, 76 (2015) 209-214 * |
| S. A. Kuznetsova et al.: "Extraction of Betulin from Birch Bark and Study of Its Psychico-Chemical and Pharmacological Properties" Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 40 (7) 742-747 (2014) * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023161563A1 (en) * | 2022-02-24 | 2023-08-31 | Innomost Oy | Method and apparatus for processing birch bark |
| WO2023161562A1 (en) * | 2022-02-24 | 2023-08-31 | Innomost Oy | Method for recovering of high purity betulin from birch bark |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2015670A3 (cs) | 2016-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8197870B2 (en) | Depolymerization extraction of compounds from birch bark | |
| CN104529984B (zh) | 一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法 | |
| WO2009036674A1 (en) | A method for recovering sulfuric acid from concentrated acid hydrolyzate of plant cellulose material | |
| CZ306293B6 (cs) | Způsob purifikace betulinu a lupeolu, betulin a lupeol připravitelné tímto způsobem | |
| Yang et al. | In situ pressurized biphase acid hydrolysis, a promising approach to produce bioactive diosgenin from the tubers of Dioscorea zingiberensis | |
| RU2206572C1 (ru) | Способ выделения бетулинола | |
| CN106317148B (zh) | 一种从蛹虫草中提取虫草素的方法 | |
| US2895953A (en) | Process for purification of partially hydrolyzed steroidal saponins | |
| EP2125860B1 (en) | Method of preparation and isolation of betulin diacetate from birch bark from paper mills and its optional processing to betulin | |
| CN101058597A (zh) | 朱砂根皂苷单体的制备工艺 | |
| CN101747406A (zh) | 用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺 | |
| US2774714A (en) | Process for the extraction of sapogenins from plant materials | |
| Paže et al. | Apparatus and selective solvents for extraction of triterpenes from silver birch (Betula pendula Roth.) outer bark | |
| CN104257701B (zh) | 一种制备灵芝三萜类化合物的方法 | |
| US7833994B2 (en) | Ethanol extraction of phytosterols from corn fiber | |
| CN103351373B (zh) | 一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法 | |
| CN1670037A (zh) | 栀子的综合利用 | |
| CN100422191C (zh) | 从雷公藤中分离制备雷公藤内酯二醇的方法 | |
| CN117142936A (zh) | 月腺大戟素a的制备方法 | |
| RU2381031C1 (ru) | Способ получения биологически активных веществ из бересты | |
| RU2812565C1 (ru) | Способ переработки растительного сырья | |
| RU2523545C1 (ru) | Способ получения бетулина (варианты) | |
| CN104530175B (zh) | 荸荠皮提取分离桦木酸的方法 | |
| US2734898A (en) | Production of hecogenin from plant | |
| WO2014092591A1 (en) | Process for the extraction and purification of long-chain bi-functional suberin acids from cork |