CZ305622B6

CZ305622B6 - Substituovaný tetrazol, jeho použití a farmaceutický přípravek ho obsahující

Info

Publication number: CZ305622B6
Application number: CZ2013-262A
Authority: CZ
Inventors: Alexandr Hrabálek; Jaroslav Roh; Galina Karabanovich; Věra Klimešová; Jan Němeček; Petr Pávek
Original assignee: Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové
Priority date: 2013-04-04
Filing date: 2013-04-04
Publication date: 2016-01-13
Also published as: CZ2013262A3

Abstract

Antituberkuloticky účinné látky na bázi substituovaného tetrazolu obecného vzorce I, kde X = O, S, SO, SO.sub.2.n.; R = H, NH.sub.2.n.-, C.sub.1.n.-C.sub.11.n. alkyl, allyl, cyklohexyl-, benzyl-, fenyl-, fenyl- s elektronakceptorovými a/nebo elektrondonorovými skupinami; R.sup.1.n., R.sup.2.n., R.sup.3.n. a R.sup.4.n. je H nebo NO.sub.2.n., přičemž když R.sup.1.n. a R.sup.3.n. je –NO.sub.2.n., potom R.sup.2.n. a R.sup.4.n. je -H, nebo když R.sup.1.n. a R.sup.3.n. je –H, potom R.sup.2.n. a R.sup.4.n. je -NO.sub.2.n.; vyjma sloučenin 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-1-fenyl-1H-tetrazolu a 5-((2,4-dinitrobenzyl)sulfanyl)-1-fenyl-1H-tetrazolu. Tyto sloučeniny lze vyrobit jednoduchými syntézami a vyznačují se nízkou toxicitou a vysokou účinností proti mykobakteriím včetně jejich multirezistentních kmenů. Vynález řeší i farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou látku substituovaný tetrazol vzorce I, jakož i použití tohoto substituovaného tetrazolu jako antituberkulotika.

Description

Substituovaný tetrazol, jeho použití a farmaceutický přípravek ho obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nových antituberkulotik na bázi nitrosloučenin, které jsou účinné proti multirezistentním kmenům mykobakterií.

Současný stav techniky

Tuberkulóza (TB), způsobená Mycobacterium tuberculosis complex (M.tb), patří již řadu let k nejrozšířenějším infekčním onemocněním na světě. Její incidenci ani mortalitu se dosud nepodařilo i přes dosavadní antituberkulotickou (AT) léčbu snížit (World Health Organization, Stop TB Partnership. Tuberculosis Global Facts 2010). K léčbě se používá kombinace léků santimykobakteriálním efektem, které se podávají zpravidla 6 až 9 měsíců. Již řadu let je k dispozici pouze 5 účinných preparátů označovaných jako AT 1. řady. Patří mezi ně baktericidně působící isoniazid, rifampicin, pyrazinamid, streptomycin a bakteriostaticky působící etambutol. Problémem současnosti je zvyšující se výskyt multirezistentních kmenů označovaných jako MDR-TB (Multi-drug-resistant tuberculosis), případně mimořádně závažné a rozsáhlé rezistence označované jako XDR-TB (Extensively drug-resistant tuberculosis), případně zcela rezistentní kmeny TDR-TB (Totally drug-resistant tuberculosis), vůči kteiým je dosavadní léčba neadekvátní a léčebné možnosti se stávají velmi omezené. Na léčbu rezistentních forem se používají fluorochinolony, amikacin, kanamycin, cykloserin, ethionamid, protionamid, p-aminosalicylová kyselina, které se podávají v kombinaci minimálně 18 až 24 měsíců. V případě výskytu TDR-TB zcela bez léčebného efektu. Dalším problémem je kombinace tuberkulózy s HIV/AIDS. Příčinou toho je latentní forma TB, kterou Světová zdravotnická organizace předpokládá u 1/3 lidské populace a která v důsledku imunodeficience u HIV pacientů, přechází do aktivní formy TB. Kombinace TB a HIV je smrtelné onemocnění.

Z důvodů výše uvedených je snaha nalézt látky, které by působily vůči MDR-TB kmenům, případně vůči latentním formám TB. Musí se jednat o látky, které působí jiným mechanismem než současně používaná AT. Nová potenciální AT, které jsou nyní v preklinické a klinické fázi vývoje jsou často látky, které obsahují ve své molekule nitroskupinu. Jedná se o nitroimidazooxazin PA-824 (Singh, R.; Manjunatha, U.; Boshoff, Η. I. M.; Ha, Y. H.; Niyomrattanakit, P.; Ledwidge, R.; Dowd, C. S.; Lee, I. Y.; Kim, P.; Zhang, L.; Kang, S.; Keller, T. H.; Jiřiček, J. Barry, C. E. 3rd.

Bicyclic nitroimidazoles act as intracellular NO donors and kill non-replicating Mycobacterium tuberculosis. Science 2008, 322, 1392-1395), nitrodihydroimidazo-oxazol OPC-67683 (Matsumoto, M.; Hashizume, H.; Tomishige, T.; Kawasaki, M.; Tsubouchi, H.; Sasaki, H.; Shimokawa, Y.; Komatsu, M. OPC-67683, and nitro-dihydro-imidazooxazole derivative with promising action against tuberculosis in vitro and in mice. PLOSMedicine 2006, 3, 2131-2143),

V N·^ /—f V-OCF3 N=( Υό \=/ PA-824 1,3-benzothiazin-4-on

/=\ /—\ <^NU o-(\ //^-^ )“^ov OPC-67683 OCF3

- 1 CZ 305622 B6

BTZ043 (Makarov, V.; Manina, G.; Mikusova, K.; Móllmann, U.; Ryabova, O.; Saint-Joanis, B.; Dhar, N.; Pasca, M. R.; Buroni, S.; Lucarelli, A. P.; Milano, A.; De Rossi, E.; Belanova, M.; Bobovska, A.; Dianiskova, P.; Kordulakova, J.; Sala, C.; Fullnm, E.; Schneder, P.; McKinney, J.D.; Brodin, P.; Christophe, T.; Waddell, S.; Butcher, P.; Albrethesen, J.; Rosenkrands, I.; Brosch, R.; Nandi, V.; Bharath, S.; Gaonkar, S.; Shandil, R. K.; Balasubramanian, V.; Balganesh, T.; Tyagi, S.; Grosset, J.; Riccardi, G.; Cole, S. T. Benzothiazinones kill Mycobacterium tuberculosis by blocking arabinan synthesis. Science 2009, 324, 801-804 a dinitrobenzamidy (Christophe, T.; Jackson, M.; Jeon, Η. K.; Fenistein, D.; Contreras-Dominguez, M.; Kim, J.; Genovesio, A.; Carralot, J. P.; Ewann, F.; Kim, E. H.; Lee, S. Y.; Kang, S.; Seo, M. S.; Park, E. J.; Škovierová, H.; Pham, H.; Riccardi, G.; Nam, J. Y.; Marsollier, L.; Kempf, M.; Joly-Guillou, M. L.; Oh, T.; Shin, W. K.; No, Z.; Nehrbass, U.; Brosch, R.; Cole, S. T.; Brodin, P. High content screening identifies decaprenyl-phosphoribose 2'epimerase as a target for intracellular antimycobacterial inhibitors. PLOS Pathog 2009, 5, 1-10).

O

BTZ038; BTZ043 (S); BTZ044 (R)

R= 4-methoxyfenylR= benzyl dinitrobenzamidy

U všech těchto látek se nitro skupina ukázala jako esenciální pro jejich antimykobakteriální aktivitu, avšak mechanismem účinku se liší.

Dokument WO 2010/034003 popisuje velké množství tetrazolových sloučenin určených pro modulaci kalciových kanálů, u kterých se neuvádí antimykobakteriální účinek nárokovaných sloučenin, a žádná z námi nárokovaných sloučenin zde není popsána. Dokument EP 0 045 129 A2 popisuje tetrazolové sloučeniny pro použití ve fotografickém průmyslu, z kterých dvě zde uvádíme jako disclaimer: 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-fenyl-177-tetrazol a 5((2,4-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-fenyl-l//-tetrazol.

Podstata vynálezu

Významnou aktivitu proti Mycobacterium tuberculosis i proti atypickým kmenům, včetně patogenních kmenů izolovaným z nemocných pacientů vykazují nové sloučeniny podle obecného vzorce I,

(I).

kde X = S, O, SO, SO₂;

R = H-, -NH₂, Ci-Cn alkyl, allyl-, cyklohexyl-, benzyl-, fenyl s elektronakceptorovými a/nebo elektrondonorovými skupinami v polohách 2, 3,4 a 5, naftyl-,

R¹, R², R³ a R⁴ je H nebo NO2, přičemž když R¹ a R³ je -NO2, potom R² a R⁴ je -H, nebo když R¹a R³ je -H, potom R² a R⁴ je -NO₂;

-2CZ 305622 B6 vyjma sloučeniny 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-fenyl-l//-tetrazolu a 5-((2,4-dinitrobenzy l)sulfany 1)-1 -feny 1-1 //-tetrazol u.

Elektrondonorovými skupinami se rozumí takové substituenty, které zvyšují elektronovou hustotu na fenylovém substituentu R. Jsou to zejména: -NH₂, -NHAlk, -NAIk₂, -OH, -OAlk, -OAr, -NHCOCH3, -NHCOAlk; -NHCOAr; -Alk, -Ar, kde Alk = Alkyl, Ar = Aryl, Elektronakceptorovými skupinami se rozumí takové substituenty, které snižují elektronovou hustotu na fenylovém substituentu R. Jsou to zejména: -NO₂, -NAlkj, -CF₃, CC1₃, -CN, -COOH, -COOAlk, -COOAr, -CHO, -COAlk, -COAr, -F, -Cl, -Br, -I, kde Alk = alkyl, Ar = aiyl. (zdroj: a) John McMurry: Organic Chemistry, Sixth edition, 2004, Brooks/Cole, a Thomson Learning Company; b) L. G. Wade, Jr.: Organic Chemistiy, Sixth edition, 2006, Pearson Prentice Hall Inc.; c) J. Clayden, N. Greeves, S. Warren, P. Wothers: Organic Chemistry, 2001, Oxford University Press).

Dalším předmětem vynálezu je použití výše uvedeného substituovaného tetrazolu obecného vzorce I podle vynálezu pro použití jako antituberkulotikum.

Dalším aspektem vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující jakou účinnou složku substituovaný tetrazol vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou přístupné běžnými postupy organické syntézy. Při syntéze výchozích látek pro syntézu sloučenin obecného vzorce I byla použita syntetická metoda podle následující práce: Han, S. Y.; Lee, J. W.; Kim, H. J.; Kim, Y. J.; Lee, S. W.; Gyoung, Y. S., A Facile One-Pot Synthesis of 1-Substituted Tetrazole-5-thiones and 1-Substituted 5Alkyl(aryl)sulfanyltetrazoles from Organic Isothiocyanates. Bull. Korean Chern. Soc. 2012, 33 (1), 55-59, (viz Schéma 1).

pyridin ^-N

R-NCS + NaN₃ ------► N >-SH ³ H₂O, lab.t. N

R

Schéma 1

Finální produkty obecného vzorce I, kde X = S pak byly získány Willimasonovou syntézou zodpovídajícího prekurzoru reakcí svhodně substituovaným benzylhalogenidem (Schéma2). Jejich příprava není synteticky náročná a suroviny, ze kterých jsou připraveny, jsou snadno přístupné a levné.

NaOH, TBAB ch₂ci₂/h₂o

TBAB = tetra-n-butylamonium bromid

Schéma 2

Finální produkty obecného vzorce I, kde X = SO a SO₂ pak byly získány oxidací příslušných sulfidů (Schéma 3).

-3CZ 305622 B6

h₂o₂

CH3COOH

Schéma 3

Finální produkty obecného vzorce I, kde X = O pak byly získány syntetickou metodou podle následující práce: Goltsberg, M. A.; Koldobskii, G. I., Simple method for the preparation of 5alkyloxy(aryloxy)-l-phenyltetrazoles. Zhumal Organicheskoi Khimii 1995, 31 (11), 1726-1727, (Schéma 4).

Schéma 4

Připravené sloučeniny odpovídající obecnému vzorci I byly testovány na Zdravotním ústavu se sídlem v Ostravě (Oddělení bakteriologie a mykologie, laboratoř pro diagnostiku mykobakterií, Partyzánské náměstí 7, 702 00 Ostrava) za podmínek in vitro v Šulově tekuté půdě a stanoveny jejich minimální inhibiční koncentrace (MIC). Připravené sloučeniny byly testovány na antimykobakteriální aktivitu proti sbírkovému kmenu Mycobacterium tuberculosis CNCTC My 331/88 a sbírkovým atypickým kmenům M. avium CNCTC My 330/88, M. kansaii CNCTC My 235/80 a 6509/96. Jejich aktivita byla vztažena na účinnost isoniazidu (INH), běžně používanému léčivu. Výsledky testů jsou shrnuty v tabulce č. 6.

Nejúčinnější sloučeniny odpovídající obecnému vzorci I byly dále testovány na multirezistentní kmeny mykobakterií (MDR kmeny) s označením 8666/2010, 9449/2007, 234/2005, Praha 1, Praha 4 a Praha 131, které byly klinicky izolovány z pacientů a jsou uloženy na Zdravotním ústavu se sídlem v Ostravě (Oddělení bakteriologie a mykologie, laboratoř pro diagnostiku mykobakterií, Partyzánské náměstí 7, 702 00 Ostrava). Citlivosti těchto klinicky izolovaných kmenů na běžná antituberkulotika a antibiotika jsou shrnuty v tabulce č. 7a. Aktivita sloučenin odpovídající obecnému vzorci I byla vztažena na účinnost isoniazidu (INH), běžně používanému léčivu. Výsledky jsou shrnuty v tabulce č. 7b.

U nej účinnějších sloučenin, které byly účinné na standardní Mycobacteria i na MDR kmeny byly podrobeny základním toxicitním MTT testům na lidských hepatocytech. Z výsledků vyplývá, že ani při nejvyšší testované koncentraci (20 pmol/l) testovaných potenciálních antituberkulotik odpovídajících obecnému vzorci I nebyla viabilita hepatocytů ovlivněna.

Nejúčinnější potenciální antituberkulotika dle přihlášky vynálezu odpovídající obecnému vzorci I byla podrobena testům na cytotoxicitu metodou CellTiter96® na buněčné linii JEG3. Viabilita buněk nebyla ovlivněna ani při koncentracích sledovaných látek 10 pmol/l.

V obou příkladech toxicitních testů byla použita 100 až 200 krát vyšší dávka, než je antituberkulotická aktivita testovaných látek.

Všechny sloučeniny podle obecného vzorce I obsahují ve své molekule nejméně jednu nitroskupinu, avšak jejich toxicita v provedených testech je velmi nízká. Tyto látky jsou svou nízkou toxicitou výjimečné, neboť nitroskupina v molekule léčívaje obvykle nositelem vyšší toxicity či

-4CZ 305622 B6 dráždivosti. Dle dosavadních poznatků farmaceutické chemie byla tato substituce v oblasti syntézy nových perspektivních léčiv doposud vždy považována za nežádoucí. Zásadní roli pro účinek má také vybraný pětičlenný heterocyklus ze skupiny tetrazolů, neboť stejným způsobem substituované 1,3,4-triazoly, které byly vnáší skupině syntetizovány dříve, byly antituberkuloticky prakticky inaktivní.

Podstatou vynálezu je tedy kombinace pětičlenného heterocyklu tetrazolů a dinitrofenylového uskupení, které je na zmíněný heterocyklus navázáno přes krátký methylsulfanylový spojovací řetězec.

Příklady uskutečnění vynálezu

V dalším textu budou uvedeny substituované tetrazoly obecného vzorce I,

kde symboly X, R, R_b R₂, R3, a R4 mají výše uvedený význam.

Příklad 1: 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-amino-l//-tetrazol (1)

Sloučenina 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-amino-l/Z-tetrazol 1 se připravuje reakcí 1amino-177-tetrazol-5-thiolu (1,1 mmol) s 3,5-dinitrobenzyIchloridem (1 mmol) v systému 7 ml CH2CI2/4 ml H₂O, za přítomnosti tetrabutylamonium-bromidu (0,05 mmol) a NaOH (1,1 mmol) za laboratorní teploty po dobu 12 hodin. Po skončení reakce byla organická vrstva oddělena, vysušena pomocí Na₂SO4 a zahuštěna na vakuové odparce. Produkt 1 byl izolován a purifikován pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu (mobilní fáze: hexan/ethyl-acetát 1:1).

Výchozí 3,5-dinitrobenzylchlorid je komerčně běžně dostupná látka. Výchozí 1-amino-\Htetrazol-5-thiol byl připraven známými metodami (Patent JP 59106475 A2, 1984 Chem. Abstr. 1984, 101,211156)

-5CZ 305622 B6

Příklad 2: 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-methyl-l//-tetrazol (2)

Sloučenina 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-methyl-lH-tetrazol 2 se připravuje reakcí 1methyl-lH-tetrazol-5-thiolu (1,1 mmol) s 3,5-dinitrobenzylchloridem (1 mmol) v systému 7 ml CH2CI2M ml H₂O, za přítomnosti tetrabutylamonium-bromidu (0,05 mmol) a NaOH (1,1 mmol) za laboratorní teploty po dobu 12 hodin. Po skončení reakce byla organická vrstva oddělena, vysušena pomocí Na₂SO₄ a zahuštěna na vakuové odparce. Produkt 2 byl izolován a purifikován pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu (mobilní fáze: hexan/ethyl-acetát 4:1).

Výchozí 3,5-dinitrobenzylchlorid je komerčně běžně dostupná látka. Výchozí 1-methyl-l//tetrazol-5-thiolu byl připraven známými metodami: Shin, K.. J.; Koo, K. D.; Yoo, K. H.; Kim, D. C.; Kim, D. J.; Park, S. W., Synthesis and biological properties of new 1 beta-methyicarbapenems having tetrazolothioether moiety. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2000, 10(13), 1421-1425.

S využitím uvedených postupů syntézy lze syntetizovat četné další sloučeniny obecného vzorce I (sloučeniny 3 - 22)

V níže uvedených tabulkách Ph znamená fenyl a Et znamená ethyl.

Tabulka 1. Příklady látek obecného vzorce I (sloučeniny 1 - 22)

	X	R¹	R²	R³	R⁴	R
1	s	H	NO₂	H	no₂	nh₂
2	s	H	no₂	H	no₂	ch₃
3	s	H	NO₂	H	no₂	C6H₅CH₂
4	s	H	NO₂	H	no₂	CóHii (cyklohexyl)
5	s	H	NO₂	H	no₂	CioHis (1-adamantyl)
6	s	H	NO₂	H	NO₂	C10H7 (1-naftyl)
7	s	H	NO2	H	no₂	Ph
8	s	H	NO₂	H	no₂	2-CH₃OC₆H4
9	s	H	NO₂	H	NO₂	3-CH₃OC₆H4
10	s	H	no₂	H	no₂	4-CH₃OC6H4
11	s	H	no₂	H	no₂	4-(Et₂N)C₆H₄

-6CZ 305622 B6

12	S	H	no₂	H	no₂	3,4-diCH₃C₆H₃
13	S	H	no₂	H	no₂	2,4,6-triCH₃C₆H₂
14	s	H	no₂	H	no₂	4-BrC₆H4
15	s	H	no₂	H	no₂	3-FC_éH4
16	s	H	no₂	H	no₂	4-FC₆H4
17	s	H	no₂	H	no₂	3,4-diClC₆H₃
18	s	H	no₂	H	no₂	2-NO₂C₆H4
19	s	H	no₂	H	no₂	3-NO₂C₆H4
20	s	H	no₂	H	no₂	4-NO₂C6H₄
21	s	H	no₂	H	no₂	3-COOHC6H4
22	s	H	no₂	H	no₂	ch₂=ch-ch₂-

Příklad 3: l-cyklohexyl-5-((2,4-dinitrobenzyl)sulfanyl)-lF/-tetrazol (23)

Sloučenina l-cyklohexyl-5-((2,4-dinitrobenzyl)sulfanyl)-lH—tetrazol 23 se připravuje reakcí 1cyklohexyl-l/Z-tetrazol-5-thiolu (1,1 mmol) s 2,4-dinitrobenzylchloridem (1 mmol) v systému 7 ml CH₂Cl₂/4 ml H₂O, za přítomnosti tetrabutylamonium-bromidu (0,05 mmol) a NaOH (1,1 mmol) za laboratorní teploty po dobu 12 hodin. Po skončení reakce byla organická vrstva oddělena, vysušena pomocí Na₂SO4 a zahuštěna na vakuové odparce. Produkt 22 byl izolován a purifikován pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu (mobilní fáze: hexan/ethyl-acetát 4:1).

Výchozí 2,4-dinitrobenzylchlorid je komerčně běžně dostupná látka. Výchozí 1-cyklohexyl-l//tetrazol-5-thiol byl připraven známými metodami: Shin, K. J.; Koo, K. D.; Yoo, K. H.; Kim, D. C.; Kim, D. J.; Park, S. W., Synthesis and biological properties of new 1 beta-methylcarbapenems having tetrazolothioether moiety. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2000, 10(13), 1421-1425.

S využitím uvedených postupů syntézy lze syntetizovat četné další sloučeniny obecného vzorce I (sloučeniny 24-28)

-7CZ 305622 B6

Tabulka 2. Příklady látek obecného vzorce I (sloučeniny 23-28)

	X	R	R²	R^J	R⁴	R
23	S	no₂	H	no₂	H	CéHn (cyklohexyl)
24	s	no₂	H	no₂	H	Ph
25	s	no₂	H	no₂	H	4-CH₃OC₆H₄
26	s	no₂	H	no₂	H	2-NO₂C₆H₄
27	s	no₂	H	no₂	H	3-NO₂C₆H₄
28	s	no₂	H	no₂	H	4-NO₂C₆H₄

Příklad 4: l-cyklohexyl-5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfmyl]-l//-tetrazol (29)

Sloučenina l-cyklohexyl-5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfinyl]-177-tetrazol 29 se připravuje oxidací l^cyklohexyl-5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl]-l/7-tetrazolu 4 (1 mmol) 30 % peroxidem vodíku (0,5 ml, 5 mmol) v octové kyselině (98%, 7 ml) při 45 °C po dobu 6 hodin. Po této době se reakční směs vlije do studené vody (10 ml). Sraženina je odfiltrována a produkt 29 je získán sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: hexan/ethyl-acetát 5:1).

Výchozí derivát 4 byl připraven dle příkladu 2. Ostatní reaktanty jsou běžně dostupné.

S využitím uvedených postupů syntézy lze syntetizovat četné další sloučeniny obecného vzorce I (sloučeniny 30—32)

Sloučenina 30 byla získána oxidací látky 7 s využitím uvedeného postupu.

Sloučenina 31 byla získána oxidací látky 10 s využitím uvedeného postupu.

Sloučenina 32 byla získána oxidací látky 20 s využitím uvedeného postupu.

-8CZ 305622 B6

Tabulka 3. Příklady látek obecného vzorce I (sloučeniny 29 - 32)

	X	R	R²	R³	R⁴	R
29	SO	H	no₂	H	no₂	CóHn (cyklohexyl)
30	SO	H	no₂	H	no₂	Ph
31	SO	H	no₂	H	no₂	4-CH₃OC₆H4
32	SO	H	no₂	H	no₂	4-NO₂C₆H4

Příklad 5: l-cyklohexyl-5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfonyl]-lH-tetrazol (34)

Sloučenina l-cyklohexyl-5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfonyl]-l#-tetrazol 34 se připravuje oxidací 1-cyklohexyl—5-[(3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl]-l//-tetrazolu 4 (1 mmol) 30 % peroxidem vodíku (0,5 ml; 5 mmol) v octové kyselině (98%, 7 ml) při 70 °C po dobu 6 hodin. Po této době se reakční směs vlije do studené vody (10 ml). Sraženina je odfiltrována a produkt 34 je získán sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: Hexan/ethyl-acetát 2:1).

S využitím uvedených postupů syntézy lze syntetizovat četné další sloučeniny obecného vzorce I (sloučeniny 33-37)

Sloučenina 33 byla získána oxidací látky 2 s využitím uvedeného postupu.

Sloučenina 35 byla získána oxidací látky 7 s využitím uvedeného postupu.

Sloučenina 36 byla získána oxidací látky 10 s využitím uvedeného postupu.

Sloučenina 37 byla získána oxidací látky 20 s využitím uvedeného postupu.

-9CZ 305622 B6

Tabulka 4. Příklady látek obecného vzorce I (sloučeniny 33 - 37)

	X	R	R²	R³	R⁴	R
33	SO₂	H	NO₂	H	NO₂	ch₃
34	SO₂	H	NO2	H	NO2	CóHh (cyklohexyl)
35	SO₂	H	NO₂	H	NO₂	Ph
36	SO₂	H	NO₂	H	NO₂	4-CH₃OC₆H4
37	SO₂	H	NOz	H	NO₂	4-NO₂C₆H4

Příklad 6: 5-[(3,5-dinitrobenzyl)oxy]-l-fenyl-l//-tetrazol (38)

Do roztoku l-fenyl-5—methylsulfanyl-l/7-tetrazolu (1,1 mmol) a 3,5-dinitrobenzylalkoholu (1 mmol) v THF (10 ml) byl přidán hydroxid sodný (1,3 mmol). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty po dobu 24 hodin. Poté byla reakční směs zahuštěna, odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu a extrahován vodou (2 x 20ml). Ethyl-acetátová frakce byla odpařena a produkt 38 byl izolován sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: CHC1₃).

Výchozí 2,4-dinitrobenzylaIkohol je komerčně běžně dostupná látka. Výchozí l-fenyl-5methylsulfonyl-l/7-tetrazol byl připraven známými metodami: Goltsberg, M. A.; Koldobskii, G. I., Tetrazoles 31. Reactions of l-R-tetrazole-5-thiones and their derivatives under the phase transfer catalysis. Zhumal Organicheskoi Khimii 1996, 32 (8), 1238-1245.

Příklad 7: 5-[(3,5-dinitrobenzyl)oxy]-l-(4-nitrofenyl)-l//-tetrazol (40)

NO₂ (40)

- 10CZ 305622 B6

Do roztoku l-(4-nitrofenyl)-5-methylsulfonyl-l//-tetrazolů (1,1 mmol) a 3,5-dinitrobenzylalkoholu (1 mmol) vTHF (10 ml) byl přidán hydroxid sodný (1,3 mmol). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty po dobu 24 hodin. Poté byla reakční směs zahuštěna, odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu a extrahován vodou (2 x 20ml). Ethyl-acetátová frakce byla odpařena a produkt 40 byl izolován sloupcovou chromatografií (mobilní fáze: CHC1₃). Výchozí 2,4-dinitrobenzylalkohol je komerčně běžně dostupná látka. Výchozí l-(4-nitrofenyl)-5-methylsulfonyl-l//-tetrazol byl připraven známými metodami: Alam, L. V.; Kharbash, R. V.; Koldobskii, G. I., 2-Substituted 5-methylthio- and 5-methylsulfonyltetrazoles. Russ. J. Org. Chern. 2000,36(6),916-918.

S využitím uvedených postupů syntézy lze syntetizovat četné další sloučeniny obecného vzorce I (sloučeniny 39,41-46)

Výchozí l-(4-methoxyfenyl)-5-methylsulfonyl-l//-tetrazol pro syntézu látky 39, výchozí 1(3,4,5-trimethoxyfenyl)-5-methylsulfonyl-l//-tetrazol pro syntézu látky 41, výchozí l-(4bromfenyl)-5-methylsulfonyl-l//-tetrazol pro syntézu látky 42, výchozí l-(4-chlorfenyl)-5methylsulfonyl-l//-tetrazol pro syntézu látky 43, výchozí l-(3,4-dichlorfenyl)-5-methylsulfonyl-l/Z-tetrazol pro syntézu látky 44, výchozí l-(2-nitrofenyl)-5-methylsulfonyl-l//tetrazol pro syntézu látky 45, výchozí l-(3-nitrofenyl)-5-methylsulfonyl-lJ/-tetrazol pro syntézu látky 46 byly připraveny s využitím následujících postupů: a) Alam, L. V.; Kharbash, R. V.; Koldobskii, G. I., 2-Substituted 5-methylthio- and 5-methylsulfonyl-tetrazoles. Russ. J. Org. Chem. 2000, 36 (6), 916-918; b) Goltsberg, M. A.; Koldobskii, G. L, Tetrazoles. 31. Reactions of l-R-tetrazole-5-thiones and their derivatives under the phase transfer catalysis. Zhumal Organicheskoi Khimii 1996, 32 (8), 1238-1245.

Tabulka 5. Příklady látek obecného vzorce I (sloučeniny 38 - 46)

	X	R¹	R²	R³	R⁴	R
38	O	H	NO₂	H	NO2	Ph
39	0	H	NO₂	H	NO₂	4-CH₃OC6H4
40	O	H	NO₂	H	NO₂	4-NO2C6H₄
41	O	H	NO₂	H	NO₂	3,4,5-(CH₃O)₃C₆H₂
42	0	H	NO₂	H	NO2	4-BrC₆H4
43	O	H	NO₂	H	NO₂	4-ClC_éH4
44	O	H	NO2	H	NO2	3,4-Cl₂C₆H₃
45	O	H	NO₂	H	NOz	2-NO₂C₆H4
46	O	H	NO2	H	NO2	3-NO₂C₆H₄

- 11 CZ 305622 B6

Tabulka 6. Minimální inhibiční koncentrace (gmol.l¹) in vitro látek obecného vzorce I - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Šulově půdě v plastikových Pdestičkách, po 14 a 21 dnech inkubace pro M. tuberculosis a M. avium a po 7, 14 a 21 dnech inkubace pro M. kansasii

	M.tuberc.	M.avium	M.kansasii	M.kansasii
	My 331/88	My 330/88	My 235/80	6509/96
1	8 /16	1000/1000	8/32/32	16/32/32
2	4/8	500/ 1000	4/16/32	16/32/32
3	1/2	250/250	2/8/8	2/4/4
4	1/1	16/32	4/4/4	2/2/4
5	4/4	500/500	4/8/16	8/8/8
6	125 /125	125 /125	125/ 125/ 125	125/ 125/ 125
7	4/4	62,5/62,5	2/4/16	2/2/4
8	125/125	125/125	125/ 125/ 125	125/ 125/ 125
9	2/4	125/125	125/125/ 125	125/125/ 125
10	2/4	16/32	1 /4/4	1/1/2
11	2/2	62,5/62,5	4/8/32	8/16/62,5
12	500 / 500	250/250	250 /250/250	250 /250/250
13	125/125	125/125	125/ 125/ 125	125 / 125 / 125
14	1 /1	>125/>125	1/2/2	2/4/4
15	16/32	>250/>250	4/4/8	4/8/8
16	2/2	250/250	2/4/4	4/8/16
17	1/1	8/16	1/1/2	1/2/4
18	4/16	62,5 / 62,5	4/16/16	4/4/16
19	2/2	62,5 /125	2/4/8	2/2/4
20	1/1	32/32	1/1/1	1/2/2
21	1000/1000	>1000/ >1000	500/ 1000/1000	1000/1000/1000

- 12CZ 305622 B6

22	4/4	>250/>250	8/16/16	8/16/16
23	8/16	16/32	4/8/16	16/62,5/62,5
24	8/16	32/62,5	16/62,5/62,5	8/32/32
25	8/8	62,5/62,5	32/62,5/62,5	8/ 16/32
26	16/32	32/62,5	16/62,5/62,5	16/32/62,5
27	16/32	62,5/62,5	16/32/62,5	8/32/32
28	4/8	62,5 / 62,5	8/32/32	16 / 32 / 62,5
29	8/16	125/125	4/16/62,5	4/16/32
30	62,5 / 62,5	125/125	62,5/250/250	125/250/250
31	62,5/62,5	250/250	62,5/125/125	32/125/125
32	32/32	125/250	62,5 / 62,5 / 62,5	16/62,5/62,5
33	16/16	125/125	62,5/>62,5/>62,5	62,5/>62,5/>62,5
34	2/4	32/62,5	8/16/16	8/16/16
35	8/8	62,5/125	32/62,5/62,5	32/62,5/62,5
36	8/8	125/125	125/250/250	125/125/ 125
37	16/32	250/500	32/32/62,5	16/32/32
38	2/4	125 / 125	8/16/32	8/16/32
39	2/2	16/32	4/8/16	4/16/16
40	1/1	125 1125	1/1/1	1/1/2
41	2/2	64/64	2/2/2	2/4/8
42	1/2	32/64	1/2/2	2/4/4
43	1/2	32/64	1/2/2	2/4/4
44	1/1	16/16	1/1/2	1/2/2
45	2/4	125/125	4/8/16	8/16/32
46	1/2	16/32	2/2/4	1/1/2

-13 CZ 305622 B6

Tabulka 7a. Minimální inhibiční koncentrace (pmol.l¹) in vitro běžně používaných antibiotik a antituberkulotik - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Sulově půdě v plastikových P-destičkách - pro multiresistentní kmeny M. tuberculosis.

M. tuberculosis	7357/1998	234/2005	8666/2010	9449/2007	Praha 1	Praha 4	Praha 131
Streptomycin	>27,5 R	27,5 R	>27,5 R	>27,5 R	13,7 R	>27,5 R	>27,5 R
Isoniazid	14,6 R	14,6 R	29,2 R	58,3 R	14,6 R	14,6 R	14,6 R
Etambutol	19,6R	19,6 R	19,6 R	9,8 C	39,2 R	19,6 R	39,2 R
Rifampicin	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R	>9,7 R
Ofloxacin	11,1 R	0,69 C	11,1 R	2,75 C	1,38 C	>22,2 R	22,2 R
Gentamicin	1,05 C	0,26 C	2,09 C	1,05 C	1,05 C	0,52 C	>8,37 R
Clofazimin	0,13 C	0,06 C	2,11 R	0,13 C	0,53 R	0,53 R	0,26 C
Amikacin	0,85 C	0,43 C	1,7 C	0,43 C	0,43 C	0,85 C	>27,2 R

R - kmen rezistentní k danému antituberkulotiku

C - kmen citlivý k danému antituberkulotiku

Tabulka 7b. Minimální inhibiční koncentrace (pmol.T¹) in vitro látek obecného vzorce I - mikrometoda pro stanovení minimálních inhibičních koncentrací léků v Sulově půdě v plastikových Pdestičkách, po 14 a 21 dnech inkubace pro multiresistentní kmeny M. tuberculosis.

	M.tuberculosis (MDR kmeny)
	234/2005	9449/2007	8666/2010	Praha 1	Praha 4	Praha 131
4	0,5/1	1/1	0,5 / 0,5	1/1	0,5/1	1/1
20	0,25/0,5	0,5/0,5	0,25 / 0,5	0,5 / 0,5	0,25/0,5	0,5 / 0,5
40	0,5/1	1 /2	0, 5 / 0,5	1 /2	0,5/1	1 /2

- 14CZ 305622 B6

Tabulka 8. NMR spektra látek obecného vzorce I

	*HNMR	^I3cnmr
1	Ή NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,80 (s, 2H), 8,72 (s, 1H), 6,95 (s, 2H, NH₂), 4,75 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,59; 148,02; 142,48; 129,75; 117,91; 33,55.
2	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,77 (s, 2H), 8,72 (s, 1H), 4,77 (s, 2H, SCH₂), 3,89 (s, 2H, CH₃).	^I3C NMR (126 MHz, DMSO) δ 152,97; 148,04; 142,20; 129,81; 117,98; 34,86; 33,86.
3	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,72 8,65 (m, 3H), 7,33 - 7,27 (m, 3H), 7,17 - 7,12 (m, 2H), 5,54 (s, 2H, NCH₂), 4,77 (s, 2H, SCH₂).	^I3C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,06; 147,97; 141,97; 133,92; 129,70; 128,99; 128,62; 127,95; 117,99; 50,51; 35,00.
4	*H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 8,95 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,72 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 4,74 (s, 2H, SCH₂), 4,15 - 4,05 (m, 1H, NCH), 2,05 - 1,71 (m, 7H), 1,48 - 1,22 (m, 3H).	¹³C NMR (126 MHz, CDC1₃) δ 150,76; 148,51; 140,95; 129,39; 118,34; 58,65; 35,25; 31,99; 25,05; 24,69.
5	^TH NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,82 (s, 2H), 8,72 (s, 1H), 4,87 (s, 2H, SCH₂), 2,25 - 2,21 (m, 6H), 2,18 (m, 3H), 1,72-1,66 (m, 6H).	ⁱ³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 151,24; 148,04; 141,98; 129,92; 117,97; 61,81; 40,45; 35,51; 35,12; 29,07.
6	'H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,75 8,62 (m, 3H), 8,31 - 8,05 (m, 2H), 7,86 - 7,45 (m, 4H), 6,98 (s, 1H), 4,77 (s, 2H, SCH₂).	^l3C NMR (126 MHz, CDCI3) δ 155,50; 147,93; 141,85; 133,82; 132,05; 129,83; 129,58; 128,64; 128,58; 127,97; 127,67; 126,15; 125,70; 121,25; 117,82; 35,02.
7	'H NMR (500 MHz, CDCI3) δ 8,96 (t, J= 2,0 Hz, 1H), 8,73 (d, J= 2,0 Hz, 2H), 7,65 - 7,43 (m, 5H, Ph), 4,76 (s,	¹³C NMR (126 MHz, CDCI3) δ 152,28; 148,50; 140,72; 133,10; 130,53; 130,00; 129,46; 123,60; 118,38; 35,51.

- 15CZ 305622 B6

	2H, SCH₂).
8	'H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,79 8,70 (m, 3H), 7,63 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,14 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H, SCH₂), 3,76 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 155,20; 153,67; 148,05; 142,03; 133,32; 129,73; 128,20; 121,23; 120,96; 118,02; 113,33; 56,28; 34,79.
9	’H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,84 8,67 (m, 3H), 7,52 (s, 1H), 7,22 - 7,11 (m, 3H), 4,81 (s, 2H, SCH₂), 3,80 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 160,15; 153,69; 148,02; 141,92; 133,98; 131,05; 129,91; 117,96; 116,66; 116,54; 110,52; 55,89; 35,05.
10	'H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 8,95 (t, J= 2,0 Hz, 1H), 8,72 (d, J= 2,0 Hz, 2H), 7,40 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 7,04 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 4,74 (s, 2H, SCH₂), 3,88 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (126 MHz, CDC1₃) δ 161,02; 152,43; 148,50; 140,82; 129,44; 125,67; 125,36; 118,36; 115,04; 55,69; 35,45.
11	’H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,77 (s, 2H), 8,71 (t, J- 1,9 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,74 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 4,78 (s, 2H, SCH₂), 3,37 (q, J = 7,1 Hz, 4H, NCH₂), 1,10 (t, J= 7,1 Hz, 6H, CH₂CH₃).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,57; 148,72; 148,01; 142,09; 129,86; 125,97; 119,85; 117,93; 111,26; 44,00; 34,87; 12,38.
12	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,76 (s, 2H), 8,71 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 7,38 7,27 (m, 3H), 4,79 (s, 2H, SCH₂), 2,28 (s, 3H, CH₃), 2,27 (s, 3H, CH₃).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,50; 147,99; 141,96; 139,65; 138,66; 130,75; 130,69; 129,87; 125,29; 121,97; 117,94; 35,07; 19,38; 19,29.
13	’H NMR (300 MHz, DMSO) δ 8,79 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,73 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 7,14 (s, 2H), 4,86 (s, 2H, SCH₂), 2,32 (s, 3H, CH₃), 1,75 (s, 6H, 2xCH₃).	¹³C NMR (75 MHz, DMSO) δ 155,51; 148,55; 142,32; 142,13; 135,68; 130,20; 130,18; 128,60; 118,58; 34,82; 21,38; 17,21.

-16CT 305622 B6

14	*H NMR (300 MHz, DMSO) δ 8,78 (d, J= 2,0 Hz, 2H), 8,72 (s, 1H), 7,84 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,58 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 4,82 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (75 MHz, DMSO) δ 153,73; 148,01; 141,87; 133,13; 132,29; 129,92; 126,84; 124,07; 117,97; 35,17.
15	Ή NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,79 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 8,72 (ζ /= 2,0 Hz, 1H), 7,72 - 7,66 (m, 1H), 7,63 - 7,58 (m, 1H), 7,53 - 7,46 (m, 2H), 4,82 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 162,08 (d, /=247,1 Hz); 153,87; 148,01; 141,83; 134,15 (d, J= 10,5 Hz); 132,07 (d, J= 9,0 Hz); 129,92; 121,15 (d, 3,2 Hz); 117,97; 117,95 (d, / = 20,9 Hz); 112,64 (d, J =25,7 Hz); 35,13.
16	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,79 (d, J= 2,2 Hz, 2H), 8,72 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 7,72 - 7,65 (m, 2H), 7,52 - 7,45 (m, 2H), 4,81 (s, 2H, SCH₂).	^I3C NMR (126 MHz,DMSO) δ 162,95 (d, J= 248,8 Hz); 153,92 (s); 148,03 (s); 141,92 (s); 129,93 (s); 129,37 (d, J= 3,1 Hz); 127,64 (d, / = 9,3 Hz); 117,99 (s); 117,18 (d,/=23,5 Hz); 35,06 (s).
17	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,77 (s, 2H), 8,72 (s, 1H), 8,01 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 7,91 (d, J- 8,7 Hz, 1H), 7,68 7,63 (m, 1H), 4,79 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,93; 147,99; 141,87; 133,83; 132,61; 132,47; 132,01; 129,90; 127,04; 125,33; 117,93; 35,35.
18	'H NMR (500 MHz, aceton) δ 8,86 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,83 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,37 (dt, J= 8,1; 1,1 Hz, 1H), 8,12 - 8,07 (m, 1H), 8,06 - 8,01 (m, 1H), 7,89 (dt, J= 7,7; 1,1 Hz, 1H), 4,95 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, aceton) δ 155,66; 149,30; 145,23; 142,59; 136,23; 134,06; 130,49; 130,47; 130,45; 127,33; 126,69; 118,73; 36,00.
19	*H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,88 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,84 (t, 2,1 Hz, 1H), 8,55 - 8,52 (m, 1H), 8,52 - 8,47 (m, 1H), 8,18 - 8,12 (m,lH), 8,01 (t,/ = 8,2 Hz, 1H), 5,00 (s, 2H, SCH₂).	^T3C NMR (75 MHz, aceton) δ 154,58; 149,66; 149,32; 142,74; 135,22; 132,44; 131,19; 130,60; 125,89; 120,24; 118,70; 36,25.

- 17CZ 305622 B6

20	*H NMR (500 MHz, aceton) δ 8,89 (d, J= 2,2 Hz, 2H), 8,84 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 8,53 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 8,01 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 5,02 (s, 2H, SCH₂).	^,3C NMR (126 MHz, aceton) δ 154,54; 149,32; 149,30; 142,68; 139,13; 130,62; 126,19; 126,00; 118,71; 36,21.
21	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,78 (s, 2H), 8,70 (s, 1H), 8,12 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 8,07 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,73 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 4,82 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 166,18; 153,66; 148,02; 141,93; 133,29; 131,20; 130,55; 129,94; 128,45; 124,97; 117,97; 35,25.
22	'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,94 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,70 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 5,97 - 5,80 (m, 1H), 5,39 (d, J= 10,3 Hz, 1H), 5,24 (d, J= 17,0,1H), 4,88 - 4,82 (m, 2H), 4,72 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 152,12; 148,51; 140,77; 129,36; 128,72; 121,22; 118,37; 49,83; 35,44.
23	NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 8,96 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,42 (dd, J= 8,5; 2,3 Hz, 1H), 8,22 (d, 8,5 Hz, 1H), 4,98 (s, 2H, SCH₂), 4,12 - 3,85 (m, 1H, NCH), 2,09-1,16 (m, 10H).	¹³CNMR(126 MHz, CDCI3) δ 151,71; 147,65; 147,50; 139,29; 134,90; 127,91; 121,02; 58,52; 33,97; 31,94; 25,02; 24,68.
24	^JH NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 8,96 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,46 (dd, J= 8,5; 2,4 Hz, 1H), 8,30 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,58 - 7,53 (m, 3H, Ph), 7,50 - 7,46 (m, 2H, Ph), 5,03 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, CDC1₃) δ 153,28; 147,67; 147,46; 139,15; 134,96; 133,10; 130,45; 129,97; 127,93; 123,58; 121,06; 34,27.
25	‘H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 8,96 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,45 (dd, J= 8,6; 2,4 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,35 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 7,02 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 5,00 (s, 2H, SCH₂), 3,87 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (126 MHz, CDC1₃) δ 160,94; 153,42; 147,64; 147,45; 139,25; 134,94; 127,91; 125,66; 125,33; 121,04; 115,01; 55,67; 34,18.

-18CZ 305622 B6

26	‘H NMR (500 MHz, aceton) δ 8,87 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,59 (dd, J= 8,5; 2,4 Hz, 1H), 8,37 (dd, J= 8,2; 1,5 Hz, 1H), 8,20 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 8,12 8,01 (m, 2H), 7,87 (dd, J= 7,6; 1,5 Hz, 1H), 5,07 (s, 2H, SCH₂).	^,3C NMR (126 MHz, aceton) δ 156,07; 148,90; 148,59; 139,82; 136,24; 135,38; 134,08; 130,44; 128,75; 127,34; 126,63; 121,51; 35,00.
27	‘H NMR (500 MHz, aceton) δ 8,85 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H), 8,57 (dd, J = 8,5; 2,4 Hz, 1H), 8,54 - 8,48 (m, 2H), 8,25 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 8,14 - 8,11 (m, 1H), 8,00 (t, J= 8,1 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, aceton) δ 154,81; 149,65; 149,07; 148,54; 139,88; 135,46; 132,43; 131,24; 128,67; 125,94; 121,43; 120,38; 35,08.
28	'H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,76 8,70 (m, 1H), 8,56 - 8,43 (m, 3H), 8,13 - 8,06 (m, 1H), 7,98 - 7,89 (m, 2H), 4,97 (s, 2H, SCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 153,99; 148,28; 148,12; 147,23; 138,84; 137,77; 134,51; 128,20; 125,87; 125,57; 120,65; 34,11.
29	^lH NMR (300 MHz, aceton) δ 8,96 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,66 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 5,30 - 5,11 (m, 2H, S(O)CH₂), 4,94 - 4,64 (m, 1H), 2.30 -1,08 (m, 10H).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 155,02; 149,22; 134,65; 132,06; 119,53; 60,20; 58,17; 33,87; 33,34; 25,65; 25,59; 25,40.
30	’H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,93 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,69 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 7,77 - 7,52 (m, 5H), 5,25 (d, J= 1,7 Hz, 2H, S(O)CH₂).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 157,36; 149,27; 134,64; 134,02; 132,15; 131,99; 130,68; 126,05; 119,59; 57,49.
31	*H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,93 (t, 2,1 Hz, 1H), 8,69 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 7,57 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,14 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 5,22 (d, J= 2,5 Hz, 2H, S(O)CH₂), 3,90 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 162,46; 157,34; 149,27; 134,69; 132,11; 127,63; 126,53; 119,57; 115,64; 57,41; 56,17.

- 19CZ 305622 B6

32	'H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,93 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,68 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,48 (d, J- 9,1 Hz, 2H), 7,99 (d, J= 9,1 Hz, 2H), 5,49 - 5,01 (m, 2H, S(O)CH₂).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 157,51; 149,87; 149,23; 138,68; 134,36; 132,17; 127,60; 125,77; 119,66; 57,84.
33	’H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,88 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,68 (d, J- 2,1 Hz, 2H), 5,58 (s, 2H, S(O)₂CH₂), 4,23 (s, 3H, NCH₃).	^I3C NMR (126 MHz, DMSO) δ 150,35; 146,29; 130,18; 129,03; 117,86; 57,53; 35,04.
34	‘H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 9,10 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,77 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 5,22 (s, 2H, S(O)₂CH₂), 4,78 (tt, J = 11,2; 3,9 Hz, 1H), 2,17 - 2,07 (m, 2H), 2,04 - 1,91 (m, 4H), 1,81-1,72 (m, 1H), 1,50 - 1,40 (m, 2H), 1,36 1,25 (m, 1H).	^,3C NMR (126 MHz, CDCI3) δ 151,90; 148,72; 131,77; 129,59; 119,99; 61,40; 60,23; 32,80; 24,95; 24,55.
35	Ή NMR (300 MHz, aceton) δ 8,99 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,83 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 7,77 - 7,51 (m, 5H), 5,63 (s, 2H, S(O)₂CH₂).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 154,07; 149,40; 134,07; 132,83; 132,36; 131,56; 130,30; 126,75; 120,32; 60,80.
36	'H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,99 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,81 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 7,55 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 7,12 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 5,60 (s, 2H, S(O)₂CH₂), 3,90 (s, 3H, OCH₃).	ⁿC NMR (75 MHz, aceton) δ 162,71; 154,08; 149,39; 132,80; 131,63; 128,24; 126,51; 120,29; 115,25; 60,75; 56,15.
37	^]H NMR (300 MHz; aceton) δ 9,00 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,84 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,52 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 8,04 (d, J=9,0Hz, 2H), 5,67 (s, 2H, S(O)₂CH₂).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 154,21; 150,36; 149,43; 138,67; 132,88; 131,39; 128,52; 125,59; 120,40; 60,95.

-20CZ 305622 B6

38	'H NMR (300 MHz, Aceton) δ 8,97 8,92 (m, 3H), 7,85 - 7,78 (m, 2H), 7,65 - 7,50 (m, 3H), 6,00 (s, 2H, OCH₂).	¹³C NMR (75 MHz, Aceton) δ 160,96; 149,58; 140,15; 134,24; 130,57; 130,15; 129,71; 123,15; 119,65; 73,30.
39	*H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,95 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 8,90 (d, J= 2,2 Hz, 2H), 7,68 (d, 9,0 Hz, 2H), 7,13 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 5,96 (s, 2H, OCH₂), 3,87 (s, 3H, OCH₃).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 161,22; 160,93; 149,57; 140,23; 129,66; 126,91; 125,20; 119,62; 115,58; 73,13; 56,02.
40	*H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,89 (d, J= 2,2 Hz, 2H), 8,84 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 9,1 Hz, 2H), 8,07 (d, J= 9,1 Hz, 2H), 5,91 (s, 2H, OCH₂).	¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ160,27; 148,33; 147,22; 138,76; 137,72; 129,40; 125,50; 123,04; 119,09; 72,91.
41	NMR (300 MHz, aceton) δ 8,95 (s, 3H), 7,09 (s, 2H), 5,97 (s, 2H, OCH₂), 3,87 (s, 6H), 3,77 (s, 3H).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 160,82; 154,83; 149,57; 140,22; 139,62; 129,48; 129,45; 119,64; 101,48; 73,17; 60,69; 56,72.
42	^]H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,96 (t, J=2,l Hz, 1H), 8,93 (d, J=2,l Hz, 2H), 7,80 (s,4H), 6,01 (s, 2H).	^l3C NMR (75 MHz, aceton) δ 149,56; 140,01; 133,67; 133,48; 129,81; 124,90; 123,27; 119,69; 73,48.
43	ΤΗ NMR (300 MHz, aceton) δ 8,96 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,93 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 7,86 (d, J= 8,9 Hz, 2H), 7,64 (d, J= 8,9 Hz, 2H), 6,01 (s, 2H).	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 160,96; 149,57; 140,02; 135,29; 133,01; 130,65; 129,80; 124,71; 119,69; 73,47.
44	Ή NMR (500 MHz, aceton) δ 8,96 (t, J= 2,1 Hz, 1H), 8,93 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,07 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,85 (dd, J= 8,8; 2,4 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H).	¹³C NMR (126 MHz, aceton) δ 160,99; 149,56; 139,95; 133,79; 133,76; 133,46; 132,53; 129,75; 124,78; 122,88; 119,71; 73,67.
45	*H NMR (300 MHz, aceton) δ 8,96 (t, J=2,1 Hz, 1H), 8,82 (d, J= 2,1 Hz,	¹³C NMR (75 MHz, aceton) δ 161,59; 149,49; 139,54; 135,94; 133,14; 129,84;

-21 CZ 305622 B6

	2H), 8,32 (dd, J= 8,4; 1,5 Hz, 1H), 8,11 - 7,92 (m, 3H), 5,95 (s, 2H).	129,74; 126,94; 125,95; 119,81; 73,56.
46	'H NMR (500 MHz, aceton) δ 8,98 8,95 (m, 3H), 8,70 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 8,40 (ddd, J= 8,2; 2,2; 1,0 Hz, 1H), 8,32 (ddd, 8,2; 2,2; 1,0 Hz, 1H), 7,95 (t, J= 8,2 Hz, 1H), 6,07 (s, 2H).	^l3C NMR (126 MHz, aceton) δ 161,17; 149,59; 139,96; 135,10; 132,18; 129,78; 128,70; 124,50; 119,75; 117,74; 73,77.

Tabulka 9. Elementární analýza látek obecného vzorce I

	vypočteno	změřeno
1	C, 32,32; H, 2,37; N, 32,98; S, 10,79	C, 32,49; H, 2,45; N, 33,01; S, 11,43
2	C, 36,49; H, 2,72; N, 28,37; S, 10,82	C, 36,70; H, 2,88; N, 28,48; S, 11,49
3	C, 48,38; H, 3,25; N, 22,57; S, 8,61	C, 48,80; H, 3,38; N, 22,99; S, 8,76
4	C, 46,15; H, 4,43; N, 23,06; S, 8,80	C, 46,35; H, 4,75; N, 22,60; S, 8,92
5	C, 51,91; H, 4,84; N, 20,18; S, 7,70	C, 52,67; H, 5,01; N, 20,77; S, 7,51
6	C, 52,94; H, 2,96; N, 20,58; S, 7,85	C, 53,06; H, 2,85; N, 20,69; S, 8,02
7	C, 46,93; H, 2,81; N, 23,45; S, 8,95	C, 46,68; H, 3,13; N, 23,16; S, 9,31
8	C, 46,39; H, 3,11; N, 21,64; S, 8,26	C, 46,41; H, 3,20; N, 21,87; S, 8,43
9	C, 46,39; H, 3,11; N, 21,64; S, 8,26	C, 46,24; H, 3,06; N, 21,91; S, 8,57
10	C, 46,39; H, 3,11; N, 21,64; S, 8,26	C, 46,93; H, 3,76; N, 21,61; S, 8,41
11	C, 50,34; H, 4,46; N, 22,83; S, 7,47	C, 50,44; H, 4,54; N, 22,89; S, 7,07
12	C, 49,74; H, 3,65; N, 21,75; S, 8,30	C, 49,94; H, 3,70; N, 22,32; S, 8,24
13	C, 50,99; H, 4,03; N, 20,99; S, 8,01	C, 51,25; H, 4,11; N, 20,75; S, 8,36
14	C, 38,46; H, 2,07; N, 19,22; S, 7,33	C, 38,17; H, 2,32; N, 19,18; S, 7,67

-22CL 305622 B6

15	C, 44,68; H, 2,41; N, 22,33; S, 8,52	C, 44,43; H, 2,57; N, 22,18; S, 8,63
16	C, 44,68; H, 2,41; N, 22,33; S, 8,52	C, 45,15; H, 2,55; N, 22,76; S, 8,62
17	C, 39,36; H, 1,89; N, 19,67; S, 7,51	C, 39,01; H, 1,80; N, 19,74; S, 7,83
18	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,73; H, 2,67; N, 24,34; S, 8,15
19	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,61; H, 2,45; N, 24,76; S, 8,26
20	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,46; H, 2,14; N, 24,65; S, 8,04
21	C, 44,78; H, 2,51; N, 20,89; S, 7,97	C, 44,60; H, 2,69; N, 21,12; S, 7,75
22	C, 40,99; H, 3,13; N, 26,08; S, 9,95	C, 40,719; H, 3,07; N, 26,04; S, 10,18
23	C, 46,15; H, 4,43; N, 23,06; S, 8,80	C, 46,22; H, 4,77; N, 22,82; S, 8,94
24	C, 46,93; H, 2,81; N, 23,45; S, 8,95	C, 46,82; H, 3,20; N, 23,23; S, 9,21
25	C, 46,39; H, 3,11; N, 21,64; S, 8,26	C, 46,53; H, 3,58; N, 21,56; S, 8,38
26	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,57; H, 2,37; N, 24,48; S, 8,25
27	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,43; H, 2,46; N, 24,71; S, 8,13
28	C, 41,69; H, 2,25; N, 24,31; S, 7,95	C, 41,86; H, 2,07; N, 24,63; S, 8,29
29	C, 44,21; H, 4,24; N, 22,09; S, 8,43	C, 44,65; H, 4,17; N, 21,87; S, 8,75
30	C, 44,92; H, 2,69; N, 22,45; S, 8,57	C, 45,28; H, 3,02; N, 22,12; S, 8,36
31	C, 44,55; H, 2,99; N, 20,78; S, 7,93	C, 44,84; H, 3,25; N, 20,71; S, 7,90
32	C, 40,10; H, 2,16; N, 23,38; S, 7,65	Č, 40,44; H, 2,37; N, 23,01; S, 7,70
33	C, 32,93; H, 2,46; N, 25,60; S, 9,77	C, 32,72; H, 2,29; N, 25,63; S, 9,99
34	C, 42,42; H, 4,07; N, 21,20; S, 8,09	C, 42,68; H, 4,51; N, 21,39; S, 8,03
35	Č, 43,08; H, 2,58; N, 21,53; S, 8,21	C, 43,29; H, 2,78; N, 21,59; S, 8,41
36	C, 42,86; H, 2,88; N, 19,99; S, 7,63	C, 42,97; H, 3,12; N, 20,19; S, 7,73

-23CZ 305622 B6

37	C, 38,63; H, 2,08; N, 22,52; S, 7,37	C, 39,01; H, 2,26; N, 22,75; S, 6,98
38	C, 49,13; H, 2,94; N, 24,55	C, 48,94; H, 3,12; N, 24,27
39	C, 48,39; H,3,25;N, 22,57	C, 48,38; H, 3,51; N, 22,34
40	C, 43,42; H, 2,34; N, 25,32	C, 43,58; H, 2,54; N, 25,02
41	C, 47,23; H, 3,73; N, 19,44	C, 47,20; H, 3,45; N, 19,27
42	C, 39,93; H, 2,15; N, 19,95	C, 40,03; H, 2,34 N, 20,12
43	C, 44,64; H, 2,41; N, 22,31	C, 44,71 ;H, 2,26; N, 22,47
44	C, 40,90; H, 1,96; N, 20,44	C, 40,98; H, 2,06; N, 20,31
45	C, 43,42; H, 2,34; N, 25,32	C, 43,53; H, 2,49; N, 25,27
46	C, 43,42; H, 2,34; N, 25,32	C, 43,34; H, 2,59; N, 25,59

Příklady farmaceutických přípravků - tablet

Při výrobě pevných lékových forem se postupuje technologií v tomto oboru obvyklou, tedy suchou či vlhkou granulací, která je odborníkovi dostatečně známa. Používají se běžné a osvědčené pomocné látky a vhodné přísady dodávající lékové formě požadované fyzikální vlastnosti.

Příklady na suchou granulaci:

Příklad 1 (obsah účinné látky 100 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 1 Celulóza mikrokrystalická Karboxymethylškrob sodná sůl Stearan hořečnatý 20 Oxid křemičitý koloidní Příklad 2 (obsah účinné látky 200 mg) 25 Léčivá látka obecného vzorce I 6 Celulóza mikrokrystalická Karboxymethylškrob sodná sůl Stearan hořečnatý Oxid křemičitý koloidní

100,0 mg 75,0 mg 3,5 mg 0,5 mg 0,5 mg 200,0 mg 95,0 mg 7,0 mg 1,0 mg 1,0 mg

-24CZ 305622 B6

Příklad 3 (obsah účinné látky 300 mg):

Léčivá látka obecného vzorce 120 300,0 mg

Celulóza mikrokrystalická 115,0 mg

Karboxymethylškrob sodná sůl 10,5 mg

Stearan hořečnatý 1,5 mg

Oxid křemičitý koloidní 1,5 mg

Příklad 4 (obsah účinné látky 400 mg):

Léčivá látka obecného vzorce 141 400,0 mg

Celulóza mikrokrystalická 130,0 mg

Karboxymethylškrob sodná sůl 14,5 mg

Stearan hořečnatý 2,0 mg

Oxid křemičitý koloidní 2,0 mg

Příklad 5 (obsah účinné látky 500 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 32 500,0 mg

Celulóza mikrokrystalická 140,0 mg

Karboxymethylškrob sodná sůl 17,5 mg

Stearan hořečnatý 2,5 mg

Oxid křemičitý koloidní 2,5 mg

Léčivá látka se smísí s jednotlivými složkami tabletoviny a směs se obvyklým způsobem tabletuje na tabletovacím lisu.

Příklady na vlhkou granulaci:

Příklad 6 (obsah účinné látky 100 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 28 Škrob bramborový Laktóza Povidon Karboxymethylškrob sodná sůl Stearan hořečnatý Mastek Příklad 7 (obsah účinné látky 200 mg) Léčivá látka obecného vzorce 14 Škrob bramborový Laktóza Povidon

100,0 mg 48,0 mg 27,0 mg 3,0 mg 4,0 mg 0,2 mg 1,8 mg 200,0 mg 60,8 mg 34,2 mg 6,0 mg

-25CZ 305622 B6

Karboxymethylškrob sodná sůl

Stearan hořečnatý

Mastek

8,0 mg

0,4 mg

3,6 mg

Příklad 8 (obsah účinné látky 300 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 11	300,0 mg
Škrob bramborový	73,6 mg
Laktóza	41,4 mg
Povidon	9,0 mg
Karboxymethylškrob sodná sůl	12,0 mg
Stearan hořečnatý	0,6 mg
Mastek	5,4 mg

Příklad 9 (obsah účinné látky 400 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 34	400,0 mg
Škrob bramborový	82,3 mg
Laktóza	46,8 mg
Povidon	12,0 mg
Karboxymethylškrob sodná sůl	16,0 mg
Stearan hořečnatý	0,8 mg
Mastek	7,2 mg

Příklad 10 (obsah účinné látky 500 mg):

Léčivá látka obecného vzorce I 3

Škrob bramborový

Laktóza

Povidon

Karboxymethylškrob sodná sůl

Stearan hořečnatý

Mastek

500,0 mg

96,0 mg

54,0 mg

15,0 mg

20,0 mg

1,0 mg

9,0 mg

Léčivá látka se postupně smíchá s laktózou, bramborovým škrobem, směs se zgranuluje povidonem, vysušený granulát se smíchá se sodnou solí karboxymethylškrobu, stearanem hořečnatým a s mastkem a vzniklá směs se obvyklým způsobem tabletuje na tabletovacím lisu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I

R¹ R²

kde,

X je O nebo S nebo SO nebo SO₂;

R je vybrán ze skupiny sestávající z: H, NH₂-, Cr-Cu alkyl, allyl, cyklohexyl-, benzyl-, fenylnebo fenyl- substituovaný v polohách 2, 3, 4 a 5 jednou nebo více elektronakceptorovými skupinami, zahrnujícími -NO₂, -N(alkyl)₃, -CF₃, CCl₃, -CN, -COOH, -COOAlk, -COOAr, -CHO, -COAlk, -COAr, -F, -Cl, -Br, -I, a/nebo jednou nebo více elektrondonorovými skupinami, zahrnujícími -NH₂, -NHalkyl, -N(alkyl)₂, -OH, -Oalkyl, -Oaryl, -NHCOCH₃, -NHCOalkyl; -NHCOaryl, -alkyl, -aryl;

R¹, R², R³ a R⁴ je H nebo NO₂, přičemž když R¹ a R³ je -NO2, potom R² a R⁴ je -H, nebo když R¹ a R³ je -H, potom R² a R⁴ je -NO2;

vyjma sloučeniny 5-((3,5-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-fenyl-l//-tetrazolu a 5-((2,4-dinitrobenzyl)sulfanyl)-l-fenyl-l//-tetrazolu.
2. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I podle nároku 1, kde X je O.
3. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I podle nároku 1, kde X je S.
4. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I podle nároku 1, kde X je SO.
5. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I podle nároku 1, kde X je SO₂.
6. Substituovaný tetrazol obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití jako antituberkulotikum.
7. Použití substituovaného tetrazolu obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro přípravu léčiva k léčení tuberkulózy.
8. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku substituovaný tetrazol vzorce I podle nároku 1.
9. Farmaceutický přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo více farmaceuticky přijatelných excipientů.