CZ295519B6 - Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy, způsob jejich přípravy a kit s jejich obsahem - Google Patents

Abstract

Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy připojeného vzorce I, způsob jejich syntézy a kit s jejich obsahem, a jejich použití v diagnostických a terapeutických metodách.ŕ

Description

Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy, způsob jejich přípravy a kit s jejich obsahem

Oblast techniky

Tento vynález se týká ligandů nesoucích heteroatomy a jejich kovových komplexů, způsobu jejich syntézy a kitu s jejich obsahem. Nové sloučeniny a jejich komplexy nacházejí použití v diagnostických a terapeutických metodách.

Dosavadní stav techniky

Kovové komplexy, jako jsou ty, které obsahují radioaktivní kovy, nacházejí vzrůstající použití jako diagnostická a terapeutická činidla. Zvláště zajímavé jsou komplexy, které obsahují bioaktivní skupiny, které jsou schopny být přijaty požadovaným místem pro usnadnění hodnocení nebo léčení subjektu.

Předložený vynález řeší potřebu v oboru takových komplexů obsahujících ligandy, ze kterých jsou připraveny, zejména takových komplexů, které obsahují skupiny lokalizující hypoxii.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy obecného vzorce (C (RR)) 2

ve kterém

Yj je skupina vzorce -NRo nebo -0-, kde Roje atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 12 atomy uhlíku, každá ze skupin R a R* je nezávisle

i) r₂, ii) atom halogenu, iii) —OR₂, iv) -CO-OR₂,

v) -CO-N(R₂)₂, vi) -N(R₂)₂, vii) -alkylen-CO-OR₂, viii) -alkylen-CO-N(R₂)₂,

-1 CZ 295519 B6 ix) -alkylen-N(R₂)₂,

x) -arylen-CO-OR₂, xi) -arylen-CO-N(R₂)₂, xii) -arylen-N(R₂)₂, xiiii) -acyl, xiv) -acyloxy, xv) -heterocyklo, xvi) -hydroxyalkyl, xvii) —SO₂—R₂, xviii) -alkyl-SO₂-R₂, xix) —(A)_p -R³, kde A je spojovací skupina vybraná ze souboru zahrnujícího -0-, -S-, -CO-, -CS-, -NH-NR₅-, -HC=N-, -CR₅=N-, -heterocyklo-, -alkyleny- a -alkenyleny-, jako je -CH₂-, -CHR₅-CR₅R₆-, -ch=ch-, -chcr₅-, -CR₅=CR₆kde R₅ a R₆ jsou nezávisle alkyl-, alkenyl-, alkoxy-, aryl-, pětičlenné nebo šestičlenné heterocykly obsahující dusík nebo kyslík, halogen-, hydroxyl- nebo hydroxyalkyl; -alkynyleny-, kterými je například -C=C- -cykloalkylen-, -cykloalkenylen-; -arylen-, kterým je například nesubstituovaný nebo hydroxylem substituovaný fenylen; -arylalkyleny-, -hydroxyalkyleny-, -aminoalkyleny-, amidoalkyleny- a -alkylaminoalkyleny-, p je 0 až 20, a

R³ je bioaktivni skupina vybraná ze souboru zahrnujícího anfetaminy, barbituráty, sulfonamidy, monoaminoxidasové substráty a inhibitory, hormony, enzymy, lipidy, ligandy pro buněčné membránové receptory, antihypertenziva, neurotransmitéry, aminokyseliny a oligopeptidy, radiosensibilizátory, steroidy, monoklonální a polyklonální protilátky nebo jejich fragmenty, cukry, mastné kyseliny, substráty pro muskarinové receptory, substráty pro dopaminové receptory, biotin, chemotaktické peptidy, substráty pro benzodiazepinovéreceptory, a zvláště hypoxii lokalizující části struktur

kde D je skupina atomů, které tvoří dohromady s atomy dusíku nebo kyslíku, ke kterým jsou vázány, pětičlenný nebo šetičlenný kruh, n je celkový počet substitučních poloh dostupných na kruhu a jedna nebo více skupin

R₇ je nezávisle atom vodíku, halogenu, alkyl, aryl, alkoxy, hydroxy, hydroxyalkyl, hydroxyalkoxy, alkenyl, arylalkyl, alkylamido, arylalkylamido, alkylamino a (alkylamino)alkyl nebo

-2CZ 295519 B6 xx) dvě skupiny R nebo jedna skupina R a jedna skupina R* tvoří dohromady s jedním nebo více atomy, ke kterým jsou připojeny, nasycený nebo nenasycený, spiro nebo kondenzovaný, karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který je popřípadě substituován jednou nebo více skupinami vybranými ze skupin i) až xix), za předpokladu, že atom uhlíku nesoucí skupinu R není přímo vázán k více než jednomu heteroatomu, a

R₂ je nezávisle atom vodíku, alkyl, alkenyl, alkynyl nebo aryl, přičemž pokud přímo z kontextu nevyplývá jinak, alkyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující 1 až 12 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, aryl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná homocyklická aromatická skupina obsahující 1 nebo 2 kruhy a 6 až 12 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou tři nebo méně nitroskupiny, alkylové skupiny definované výše a/nebo halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, acyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je skupina obsahující až 12 atomů uhlíku a karbonylovou část, heterocyklus, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná, plné nasycená nebo nenasycená aromatická nebo nearomatická cyklická skupina obsahující alespoň jeden heteroatom v alespoň jednom kruhu monocyklická nebo bicyklická skupina obsahující 5 nebo 6 atomů v každém kruhu, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, alkenyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo alespoň jeden halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, alkynyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo alespoň jeden halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol,

-3CZ 295519 B6 bioaktivní skupina je skupina vymezená výše s působností metabolického substrátu, katalyzátoru nebo inhibitoru nebo schopností připojení na zvoleném místě subjektu, a halogen je chlor, brom, fluor nebo jod.

Mezi svrchu uvedené ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy patří (R) -3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan2,10-dion-dioxim a (S) -3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10dion-dioxim, které představují výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu. Předmětem tohoto vynálezu je také způsob stereoselektivní přípravy těchto sloučenin, jehož podstata spočívá v tom, že

i) nechá se reagovat (S)-(+)-epichlorhydrin nebo (R)-(-)-epichlorhydrin s ftalimidem za vzniku stereoizomeru l-chlor-3-ftalimido-2-propanolu, ii) kontaktuje se produkt z kroku i) s činidlem tvořícím epoxidový kruh pro získání stereoizomeru N-(2,3-epoxypropyl)-ftalimidu, iii) kontaktuje se produkt z kroku ii) s bází a 2-nitro-imidazolem pro získání stereoizomeru

2- /2-hydroxyl-2-(nitro-lH-imidazol-l-yl)ethyl/-lH-izoindol-l,3(2H)-dionu, iv) kontaktuje se produkt z kroku iii) s hydrazinem a potom s bází a di-terc-butyl-dikarbamátem pro získání stereoizomeru a-/(t-Boc-amino)methyl/-2-nitro-lH-imidazol-l-ethanolu,

v) kontaktuje se produkt z kroku iv) s N-hydroxyftalimidem, frifenylfosfinem a diethylazodikarboxylátem pro získání stereoizomeru 2-/l-/(t-Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazoll-yl)ethoxy/-lH-izoindol-l,3(2H)-dionu, vi) kontaktuje se produkt z kroku v) s hydrazinem pro získání stereoizomeru l-/2-(aminooxy)-

3- (t-Boc-amino)propyl/-2-nitro-lH-imidazolu, vii) podrobí se deprotekci produkt z kroku vi) pro získání stereoizomeru l-/3-amino-2-(aminooxy)propyl/-2-nitro-lH-imidazolu a viii) kontaktuje se produkt z kroku vii) se 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutanem za přítomnosti terciárního aminu pro získání uvedené sloučeniny.

Předmětem tohoto vynálezu je také komplex pro použití při diagnostice, například pro použití při zobrazení hypoxické tkáně a pro použití v terapii.

Předmětem tohoto vynálezu je konečně kit, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje svrchu uvedenou sloučeninu a farmaceuticky přijatelné redukční činidlo.

Dále se podrobněji vysvětluje předložený vynález a jemu blízká řešení.

Předmětné sloučeniny a jejich deriváty se označují jako ligandy, které lze vyjádřit obecnými vzorci Ia, Ib a Ic

-4CZ 295519 B6

(Ia)

kde

Q je skupina -(C(RR)_ml-Y¹-(C(RR))m2-(Y²-(C(RR)m3)_n-, kde

Y¹ a Y² jsou nezávisle -NR- -O-, -S-, -SO-, -SO₂- nebo -Se- n je celé číslo zvolené od 0 do 1, a ml, m2 a m3 jsou celá čísla nezávisle vybraná z 0 až 4, s tou podmínkou, že součet ml a m2 je větší než nula, všechny skupiny R a R* jsou nezávisle

i) R², ii-) halogen, zejména fluor, iii) -OR₂, iv) -C(O)-OR²,

v) -C(O)-N(R²)₂, vi) -N(R²)₂, vii) -alkyl-C(O)-OR², viii) -alkyl-C(O)-N(R²)₂, ix) -alkyl-N(R²)₂,

x) -aryl-C(O)-OR², xi) -aryl-C(O)-N(R²)₂, xii) -aryl-N(R²)₂, xiiii) -acyl,

-5CZ 295519 B6 xiv) -acyloxy, xv) -heterocyklo, xvi) -hydroxyalkyl, xvii) -SO₂-R², xviii) -alkyl-SO₂-R², xix) -(A)_p -R³, kde A je spojující skupina, p je 0 nebo kladné celé číslo a R³ je bioaktivní skupina, nebo xx) dvě R skupiny, nebo R skupina a R* skupina, tvoří spolu s jedním nebo více atomy, ke kterým jsou navázány, nasycený nebo nenasycený, spiro nebo fúzovaný, karbocyklický (jako je fúzované 1,2-fenyl) nebo heterocyklický kruh, který muže být nesubstituován nebo být substituován jednou nebo více skupinami vybranými ze skupin i) až xix) výše, s tou podmínkou, že atom uhlíku nesoucí R skupinu není přímo navázán k více než jednomu heteroatomu,

R¹ je vodík, thiol chránící skupina, nebo skupina -(A)_p -R³ definovaná výše a

R² je nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, aikinyl, nebo aryl.

Předložený vynález také poskytuje komplexy výše uvedených sloučenin vzorce la, lb a Ic s kovy, výhodně rheniem nebo techneciem a použití těchto komplexu v diagnostických a terapeutických metodách. Předložený vynález dále poskytuje kity pro přípravu kovových komplexe podle předloženého vynálezu.

Ve výhodných provedeních předložený vynález poskytuje komplexy, obsahující bioaktivní skupiny, jako jsou hypoxia-lokalizující skupiny, které si zachovávají biochemické chování a afinitu; volných skupin a které jsou schopny poskytnout rychle zvýšená množství požadovaného radionuklidu selektivně k cílovým oblastem; které mohou být radioaktivně značeny při teplotě místnosti vhodnými, pro použití snadnými radionuklidy, a které jsou permeabilní membránou, což umožňuje intracelulární doručení.

Dále je předložený vynález podrobněji popsán.

Definice

Dále jsou uvedeny definice výrazů používaných v předloženém vynálezu. Tyto definice se aplikují na výrazy používané v celém popise, pokud není uvedeno jinak.

Výraz alkyl nebo alk, jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, znamená popřípadě substituovaný, přímou nebo rozvětvenou nasycenou uhlovodíkovou skupinu, výhodně mající 1 až 12 uhlíků v normálním řetězci, nejvýhodněji i nižší alkylové skupiny. Příklady takových nesubstituovaných skupin zahrnují methyl, ethyl, propyl, izopropyl, b-butyl, terc.butyl, izobutyl, pentyl, hexyl, izohexyl, heptyl, 4,4-dimethylpentyl, oktyl, 2,2,4-trimethylpentyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl a podobně. Příklady substituentů zahrnují, jednu nebo více následujících skupin: halogen, alkoxy, arylalkyloxy (např. benzyl-oxy), alkylthio, alkenyl, aikinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxy, karboxyl (-COOH), amino, alkylamino, dialkylamino, formyl, alkylkarbonyloxy, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxy nebo thiol (-SH). Výhodnými alkylovými skupinami jsou nesubstituovaný alkyl, halogenalkyl, arylalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, aralkoxyalkyl, aryloxyalkyl, hydroxyalkyl a alkoxyalkylskupiny.

Výraz nižší alk nebo nižší alkyl jak je zde použit, označuje takové popřípadě substituované skupiny jak jsou popsány výše pro alkyl, mající 1 až 4 atomy uhlíku v normálním řetězci.

Výraz alkoxy nebo alkylthio označuje alkylovou skupinu popsanou výše, navázanou přes kyslíkové spojení (-0-) nebo spojení sírou (-S). Výraz alkylkarbonyl jak je zde použit, ozna

-6CZ 295519 B6 čuje alkylovou skupinu navázanou přes karbonylovou skupinu. Výraz alkylkarbonyloxy jak je zde použit, označuje alkylovou skupinu navázanou přes karbonylovou skupinu, která je naopak navázána přes kyslík.

Výraz alkenyl, jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě substituované, přímé v nebo rozvětvené uhlovodíkové skupiny, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu uhlík-uhlík, a mající výhodně 2ažl0 uhlíků v normálním řetězci. Příklady takových nesubstituovaných skupin zahrnují ethenyl, propenyl, pentenyl, hexenyl, heptenyl, oktenyl, nonenyl, decenyl, a podobně. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou popsány výše a/nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Výraz alkinyl, jak je zde použit, samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě substituované uhlovodíkové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující alespoň jednu trojnou vazbu uhlík v řetězci, a mající výhodně 2 až 10 uhlíků v normálním řetězci. Příklady takových nesubstituovaných skupin zahrnují ethinyl, propinyl, butinyl, pentinyl, hexinyl, heptinyl, oktinyl, noninyl, decinyl, a podobně. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou popsány výše a/nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Výraz cykloalkyl jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě substituovaný, nasycený cyklický uhlovodíkový kruhový systém, výhodně obsahující 1 až 3 kruhy a 3 až 7 uhlíků na kruh. Příklady nesubstituovaných takových skupin zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklodecyl, cyklododecyl a adamantyl. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou popsány výše a/nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Výraz cykloalkenyl jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje takové popřípadě substituované skupiny jak jsou popsány výše pro cykloalkyl, dále obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu uhlík-uhlík, tvořící částečně nenasycený kruh. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou popsány výše a/nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Výraz ar nebo aryl jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě substituované, homocyklické aromatické skupiny, výhodně obsahující 1 nebo 2 kruhy a 6 až 12 uhlíků v kruhu. Příklady takových nesubstituovaných skupin zahrnují fenyl, bifenyl a naftyl. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více, výhodně tři nebo několik nitroskupin, alkylskupin jak jsou výše popsány a/nebo skupin popsaných výše jako alkylové substituenty. Výhodné arylové skupiny jsou nesubstituovaný aryl a hydroxyaryl.

Výraz karbocyklický jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě substituované nasycené, částečně nenasycené nebo aromatické homocyklické uhlovodíkové kruhové systémy jako jsou cykloalkenyl, cykloalkyl nebo aryl skupiny popsané výše.

Výraz heterocyklo nebo heterocyklický jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje popřípadě plně nasycené nebo nenasycené, aromatické nebo nearomatické cyklické skupiny, mající alespoň jeden heteroatom v alespoň jednom kruhu, výhodně monocyklické nebo bicyklické skupiny, mající 5 nebo 6 atomů v každém kruhu. Heterocykloskupina může mít například 1 nebo 2 kyslíkové atomy, 1 nebo 2 atomy síry a/nebo 1 až 4 atomy dusíku v kruhu. Každá heterocyklická skupina může být navázána přes jakýkoliv uhlík v řetězci kruhového systému. Výhodné skupiny zahrnují skupiny následujícího vzorce, které mohou být navázány přes jakýkoliv atom kruhového systému:

-7CZ 295519 B6

\ / ch₂— ch_? kde r je 0 nebo 1 a T je -O-, -S-, -N-R⁸ nebo -CH-R⁸, kde R⁸ je vodík, alkyl, aryl nebo arylalkyl. Příklady heterocykloskupin zahrnují následující: thienyl, furyl, pyrrolyl, pyridyl, imidazolyl,, pyrrolidinyl, piperidinyl, azepinyl, indolyl, izoindolyl, chinolinyl, izochinolinyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, morfolinyl, piperazinyl,

4-alkylpiperazinyl, 4-alkylpiperidinyly 3-alkylpyrrolidinyl, oxazolyl, pyrazolyl, thiofenyl, pyridazinyl, thiazolyl, triazolyl, pyrimidinyl, 1,4-dioxanyl, benzoxadiazolyl a benzofurazanyl. Příklady substituentů zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou popsány výše a/nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Výrazy halogen, halo nebo hal jak jsou zde použity samotné nebo jako část jiné skupiny, označují chlor, brom, fluor a jod.

Výraz acyl jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje skupinu vytvořenou odstraněním hydroxylové skupiny ze skupiny -COOH organické karboxylové kyseliny. Příklady takových skupin zahrnují alkylkarbonyl, arylkarbonyl, nebo karbocyklo- nebo heterocyklokarbonyl. Výraz acyloxy jak je zde použit samotný nebo jako část jiné skupiny, označuje acylovou skupinu jak je popsána výše navázanou přes kyslíkovou vazbu (—O—).

Pro výše uvedené popřípadě substituované skupiny může být odkaz na specifické substituenty proveden bez vyloučení přítomnosti jiných substituentů. Například hydroxyalkyl je nasycená uhlovodíková skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem, nesoucí alespoň jeden hydroxysubstituent a žádný jiný, nebo popřípadě jeden nebo více dalších substituentů.

Výraz thiol chránící skupina, jak je zde použit, označuje skupinu, která může být odštěpena od síry za poskytnutí thiolové skupiny bez narušení zbytku molekuly.

Výraz bioaktivní skupina nebo bioaktivní seskupení jak je zde použit, označuje skupinu, která je schopna působit jako metabolický substrát, katalyzátor nebo inhibitor, neboje schopna být přednostně přijata na zvoleném místě subjektu, jak je tomu při vykázání afinity pro buněčné rozpoznávané místo.

Výraz spojovací skupina jak je zde použit, označuje skupinu, která, sama nebo spolu s jednou nebo více jinými skupinami, kovalentně váže bioaktivní skupinu ke zbytku sloučeniny vzorce Ia, Ib, nebo Ic předloženého vynálezu.

Mohou být zvoleny různé substituenty ligandů podle předloženého vynálezu za vzniku stabilních sloučenin.

Sloučeniny vzorců Ia, Ib a Ic

Sloučeniny vzorců Ia, Ib a Ic podle předloženého vynálezu mohou být připraveny metodami, jako jsou ty, které jsou ilustrovány, nebo jsou jim analogické, v následujícím reakčním schéma a v příkladech.

-8CZ 295519 B6

Reakční schéma 1

Příprava sloučenin vzorce Ia

~ 2:1 ii + ni --------------** ia c

Uvedené reakční schéma 1 ilustruje metody přípravy sloučenin vzorce Ia.

Podle reakčního schéma 1, jak je uvedeno v reakci A, může být sloučenina vzorce II uvedena do kontaktu s přibližně ekvimolárním množstvím sloučeniny vzorce III, kde X je halogen (výhodně chlor), výhodně za přítomností terciárního aminu jako je diizopropylamin, za vzniku sloučeniny ío vzorce IV. Sloučenina vzorce IV může být uvedena do kontaktu se sloučeninou vzorce III jak je uvedeno v reakci B, výhodně také za přítomnosti terciárního aminu jako je diizopropylethylamin, za poskytnutí sloučeniny vzorce Ia. Alternativně, jak je uvedeno v reakci C mohou dva nebo více ekvivalentů sloučeniny vzorce III reagovat se sloučeninou vzorce II, výhodně za přítomnosti terciárního aminu jako je diizopropylethylamin, a přímo se získá sloučenina vzorce Ia. Ve výše 15 uvedených reakcích může být použito rozpouštědlo jako je dimethylformamid nebo acetonitril.

-9CZ 295519 B6

Provedení reakce C za získání sloučeniny vzorce la přímo, je zvláště vhodné, je-li sloučenina vzorce la symetrická. Jestliže je sloučenina vzorce la nesymetrická, je preferováno použití reakce A následované reakcí B. Tento později uváděný přiklad používá rozdílných sloučenin vzorce III v reakcích A a B.

Sloučeniny vzorce III mohou být připraveny metodami jako jsou metody popsané v práci Vassiana, Inorg.Chem., 6, 2043-2046 (1967) patentové přihlášce US 08 054 120, podané 27,dubna 1993, Linder a kol., nebo zejména ty, kde R nebo R* je CH₃- metodou podle Nowotnikova a kol., evropská přihláška EP 0 179 608 A2 (1986). Sloučeniny vzorce II mohou být připraveny metodami popsanými v, nebo ananalogickými těmto, postupech Boschmana a kol., Eur.J. Me.Chem.Chimica Therapeutica, 15, 351-356 (1980), a Pankaskie a spol., Synthetic Communications, 19, 339-344 (1989). (pro sloučeniny vzorce ΠΙ, je pod skupinou -C(R*)-NO míněna také oximová skupina -C(R*)=N-OH, která je s ní v rovnováze, tj. X-C(RR)-C(R*)NO<-> X-C(RR)-C(R*)=N-OH.

Preferované sloučeniny vzorce Π jsou ty, které mají následující vzorce Ila a lib:

NH₂-(C(RR))_ml-NR-NH₂ (Ha)

NH₂-(C(RR))_mI-O-NH₂ (lib) zejména kde ml je dva.

Sloučeniny vzorce Ila mohou být připraveny vnitřní dehydratací sloučeniny vzorce V

HO-(C(RR))_ml-NH₂ (V) za vzniku sloučeniny vzorce VI z⁽CÍRRn_ml

NH (VI) a cyklický amin takto vytvořený se uvede do kontaktu s hydrazinem vzorce VII

H₂N-NH(R) za vzniku sloučeniny vzorec Ila.

(VH)

Sloučeniny vzorce lib mohou být připraveny reakcí N-hydroxyftalimidu

s halogenaminem vzorce VIII

X-(C(RR))_ml-NH-(Pro) (VIII), kde Pro je aminová chránící skupina jako je /erc-butylkarbonyl (t-Boc nebo Boc) za vzniku ftalimidu vzorce IX

-10CZ 295519 B6 (IX),

Výše uvedený ftalimid může pak být zpracován s hydrazinem a odstraněna chránící skupina za vzniku sloučeniny vzorce Hb.

Protože sloučeniny vzorce II vykazují dvě terminální aminoskupiny, může být žádoucí chránit jednu z těchto skupin za získání preferované reakce na nechráněné aminoskupině. Takto sloučeniny následujícího vzorce II_Pro

H₂N NH(Pro) (II

Pro)_y mohou být použity místo sloučenin vzorce II ve výše uvedeném reakčním schéma 1 (za získání například sloučenin vzorce IV_Pro, kterými jsou sloučeniny vzorce IV, ve kterých se skupina NH(Pro) nachází na místě NH₂ skupiny, s následující deprotekcí pro další reakci), tam kde je žádoucí preferenční reakce na jedné aminoskupině. Například výše uvedená sloučenina vzorce VI může být chráněna na dusíku například použitím di-tórc-butyl-dikarbonátu, za poskytnutí sloučeniny vzorce VI_Pro

(VI

Pro (Pro)

Sloučenina VI_Pro může pak být uvedena do kontaktu se sloučeninou vzorce VII za vzniku sloučeniny vzorce IIa_Pro (Pro-NH-(C-(RR))_m]-NR-NH₂ (IIa_Pro) a tato poslední se použije jako sloučenina vzorce II_Pro jak je popsána výše. V dalším příkladu může být sloučenina vzorce IX uvedena do kontaktu s hydrazinem za poskytnutí sloučeniny následujícího vzorce IIb_Pro

NH₂-(C(RR))_ml-O-NH-(Pro) (IIb_Pro) a tato může být použita jako sloučenina vzorce II_Pro jak je popsáno výše. Je-li to vhodné, sloučeniny vzorce II_Pro mohou být také použity v jiných zde popsaných reakčních schématech.

Podobně, sloučeniny následujícího vzorce

NH₂ N₃ ^(IIa_Zid mohou být také použity místo sloučenin vzorce II ve výše uvedeném reakčním schéma 1 za poskytnutí sloučenin následujícího vzorce IV_azi_d

-11 CZ 295519 B6

^(IV _azW po reakci se sloučeninou vzorce III, výhodně za přítomnosti terciárního aminu jako je diizopropylethylamin a rozpouštědla jako je diizopropylethylamin nebo acetonitril. Azidová skupina takto získané sloučeniny vzorce IV může být redukována na aminovou skupinu NH₂ například kontaktem s trifenylfosfínem a potom s kyselinou jako je HC1 a dále kopulací se sloučeninou vzorce III, provedenou za poskytnutí sloučeniny vzorce Ia. Alternativně například, jestliže se reakce C provádí pro získání symetrické sloučeniny vzorce Ia, může být azidová skupina sloučeniny vzorce n_azid redukována jak je popsáno výše, před kopulací se sloučeninou vzorce III za získání diaminové sloučeniny vzorce II, která může být použita jak je popsáno výše v reakčním schéma 1.

Sloučeniny vzorce II_azid mohou být připraveny metodami,nebo jim anologickými, Spencera Knappa, Jeffreyw J.Halle-a, Margarity Bastosowé a Frania S.Gibsona, Tetrahedron Lett., 2109-2112 (1990), J.Cleophaxe, D.Anglesio-a, S.D.Gero-a a R.D.Guthrie-ho, Tetrahedroir Lett., 1769(1973) nebo ve zde uvedených příkladech.

Jiné preferované sloučeniny vzorce II jsou ty, které mají následující vzorce líc, lid, Ile a Ilf

NH2-(C(RR))ml-S-(C(RR))ml-NH2	(líc)
NH2-(C(RR))ml-SO-(C(RR))ml-NH2	(Hd)
NH2-(C(RR))ml-SO2-(C(RR))ml-NH2	(Ile)
NH2-(C(RR))ml-Se-(C(RR))ml-NH2	(nf)

kde m2 je stejné jako ml, zejména kde R je vodík a ml > 2.

Sloučenina vzorce líc může být připravena reakcí sulfidu sodného (Na₂S) s bromalkylftalimidem (komerčně dostupný) následujícího vzorce

za získání thiodialkylftalimidu následujícího vzorce

-12CZ 295519 B6

Zpracování výše uvedeného thiodialkylftalimidu s hydrazinem (NH₂NH₂) poskytne sloučeninu vzorce líc.

Sloučenina vzorce lid může být připravena oxidací výše uvedeného thiodialkylftalimidu oxidem chromovým (CrO₃) za vzniku následujícího sulfínyldialkylftalimidu

O

Zpracování výše uvedeného sulfínyldialkylftalimidu s hydrazinem (NH₂NH₂) poskytne sloučeninu vzorce lid.

Sloučenina vzorce Ile může být připravena oxidací výše uvedeného thiodialkylftalimidu peroxidem vodíku za získání následujícího sulfonyldialkylftalimidu:

O

Odstraněním chránící skupiny ze ftalimidoskupiny zpracováním s hydrazinen (NH₂NH₂) se získá sloučenina vzorce Ile.

Sloučenina vzorce Uf může být připravena kontaktem výše uvedeného bromalkylftalimidu se selenidem sodným (Na₂Se) za získání následujícího selenodialkylftalimidu:

Zpracování výše uvedeného selenodialkylftalimidu s hydrazinem (NH₂NH₂) poskytne sloučeninu vzorce Ilf.

-13CZ 295519 B6

Reakční schéma 2

Alternativní příprava sloučenin vzorce la

R_v

(XI)

R* N O ^R

I

OH (XII)

la

J

XIII + X ------*

E

XI —

- 14CZ 295519 B6

Reakční schéma 2 (pokrač.)

OH (XXIII)

XXIV

XXV + III

(C(RR) )_mi \

(XXV)

Alternativní metody pro přípravu sloučenin vzorce la jsou uvedeny v reakčním schéma 2.

Podle reakčního schéma 2, v reakci D může být sloučenina vzorce II uvedena do styku s přibližně dvěma nebo více molárními ekvivalenty halogenketonu vzorce X za vzniku diketonu vzorce XI. Sloučenina vzorce la může pak být připravena v reakci E konverzí ketoskupin sloučeniny vzorce XI na oximové skupiny takovými metodami jako je zpracování s O-trimethylsilylhydroxylaminem.

- 15CZ 295519 B6

Alternativně, jak je uvedeno w reakci F může být sloučenina vzorce IV uvedena do styku s halogenketonem vzorce X za tvorby sloučeniny vzorce XII. Ketoskupina ve sloučenině vzorce XII může být převedena v reakci G na oximovou skupinu takovou metodou, jako je popsána výše pro reakci E za vzniku; sloučeniny vzorce Ia.

Jinou alternativní metodou je ta která je popsána v reakci H, kdy sloučeniny vzorců II a X se uvedou do styku v přibližně ekvimolárním poměru za tvorby monoketonu vzorce ΧΙΠ (nebo odpovídající sloučeniny, nesoucí skupinu NH_Pro nebo N₃ na místě skupiny NH₂, jestliže se sloučenina IIp_ro nebo II_azid použije jako výchozí materiál s následujícím odstraněním chránící skupiny nebo redukcí, pro další reakci). Poslední uvedená sloučenina v reakci J může pak být uvedena do kontaktu se sloučeninou vzorce X za poskytnutí sloučeniny vzorce XI a reakce E se provede na vzniku sloučeniny vzorce Ia.

Provedení reakcí D a E postupně je zvláště žádoucí, jestliže jsou požadovány symetrické sloučeniny Ia. Nesymetrické sloučeniny vzorce Ia mohou být připraveny postupným provedením reakcí F a G, kde sloučeniny IV a X obsahují různé Rnebo R* skupiny, nebo postupným provedením reakcí H, J a E, kde se používají různé sloučeniny vzorce X v reakcích H a J.

Sloučeniny vzorce X mohou být získány například takovými metodami jak jsou popsány v práci Pfleiderera a kol., Liebigs Ann.Chem., 99, 3008 (1966).

Sloučeniny vzorce Ia mohou být také připraveny za použití ftalimidových sloučenin vzorce XXII. Jak je uvedeno v reakci V, ftalimidová sloučenina XXIV může být připravena kontaktem sloučeniny XXII se sloučeninou XXIII s následující deprotekcí, jako hydrazineon, za vzniku sloučeniny XXV jak je znázorněno v reakci W. Kontaktem sloučeniny XXV se sloučeninou III, jak je uvedeno v reakci Z, se získá sloučenina vzorce Ia. Tato reakční sekvence je zvláště preferována u sloučenin, kde skupina -C(RR)_m] - je -CH₂CH₂- a kde Y¹ je -SO2Sloučeniny vzorce XXIII mohou být získány jak je popsáno v práci Pfleiderera a kol., Liebigs Ann.Chem., 99, 3008 (1966). Sloučeniny vzorce ΧΧΠ mohou být získány metodami analogickými následující metodě pro přípravu těch sloučenin, kde Y¹ je -SO2-, které mohou být získány kontaktem sloučeniny vzorce

s thionylchloridem.

Způsoby přípravy sloučenin vzorce Ib jsou uvedeny v reakčním schéma 3.

Jak je uvedeno v reakci K, sloučenina vzorce XIV (která může být připravena jak je popsáno v práci Kong a kol., J.Nucl-Med., 25, 326-332 (1984)), může být uvedena do kontaktu se sloučeninou vzorce II za poskytnutí sloučeniny vzorce XV. Tato posledně uvedená sloučenina, jak je znázorněno v reakci L, může být zpracována s redukčním činidlem, jako je borohydrid sodný, za poskytnutí sloučeniny vzorce Ib.

Sloučeniny vzorce Ib, kde R je skupina navázaná k aminu jiná než vodík, například kde taková R skupina je -(A)_p -R³-, mohou být získány, jak je uvedeno v reakci M, kopulací sloučeniny vzorce Ib, kde odpovídající R skupinou je vodík, se sloučeninou vzorce XVI, kde L je odštěpitelná skupina jako je halogen. Sloučeniny vzorce XVI jsou popsány v patentové přihlášce US 08 054 120, podané 27.dubna 1993 Linderem a kol.

-16CZ 295519 B6

II

Reakční schéma 3

Příprava sloučenin vzorce lb

(XIV)

K

----->.

N

(lb)

R +

R

L-R

XVI (L -pa&těp* skup ina)

R (lb) (r navázaný k aminu •je νοαίκ;

R

M * R Ί

R (lb) (R , ^f , · * navazany a aminu je jiný než vodík;

-17CZ 295519 B6

Reakční schéma 4

Příprava sloučenin vzorce Ic

XVI o

---->

_ZR

thiol

U ΙΧΧΉχλ jlC X ža k /

-18CZ 295519 B6 *

H₂řC^Q^OOC₂H₅ ⁺ (XVII)

(XVIII)

Metody pro přípravu sloučenin vzorce Ic jsou uvedeny v reakčním schéma 4.

Sloučeniny vzorce Ic, kde R¹ je vodík, mohou být připraveny ze sloučenin vzorce Ib, jak je uve5 děno v reakci N, redukcí disulfidové skupiny za získání dithiolu Ic použitím disulfíd redukujícího činidla jako je tris(2-karboxyethyl)-fosfín, dithiothreitol a jiná taková činidla, jak jsou popsána veWO 89/10759.

Jak je znázorněno v reakci O, sloučenin vzorce Ic, kde R skupina navázaná k aminům je jiná než ío vodík, mohou být připraveny kopulací odpovídající sloučeniny, kde R je vodík, na takovou, kde

R¹ je thiol chránící skupina, se sloučeninou vzorce XVI. Thiol chráněný výchozí materiál Ic může být získán například přidáním triol-chránicích skupin k odpovídající sloučenině vzorce Ic, kde R^! je vodík, za použití standardních thiol chránících skupin jak jsou popsány v práci T.W.Green, Protecting Groups in Organic Synthesis, 193-217, John Wiley and Sons, NY (1981). 15 (Takové thiolskupiny mohou být zbaveny chránící skupiny metodami, zahrnujícími kontakt

-19CZ 295519 B6 s techneciem, nebo jak je popsáno v prácí Bryson, Dewan, James a kol., Inorg.Chem., 27, 21542161 (1988)).

Dále popsaný způsob pro přípravu sloučenin vzorce Ic je zvláště vhodný pro přípravu nesymetrických sloučenin. V této metodě, jak je uvedeno v reakci P, jsou sloučeniny vzorců XVII a XVIII uvedeny do styku za podmínek vhodných pro peptidovou kopulaci za získání sloučeniny vzorce XIX. Výraz Q* označuje skupinu jako -Q*-CH₂-je Q. Sloučenina vzorce XIX se tak uvede do kontaktu se sloučeninou vzorce XX, jak je uvedeno v reakci T, za podmínek, vhodných pro peptidovou kopulaci, za vzniku sloučeniny vzorce XXI. V reakci U se posledně uvedená sloučenina redukuje, například zpracováním s boranem, za vzniku uvedené sloučeniny Ic.

Sloučeniny vzorce XVII jsou obchodně dostupné, nebo mohou být připraveny takovými metodami, které jsou analogické metodě pro přípravu sloučeniny H2N-O-CH2-COOC2H5, která může být připravena kontaktem sloučeniny N-terc.butoxykarbonylhydroxylaminu (Boc-HN-OH) s BrCH2COOC₂H₅ za přítomnosti NaH v tetrahydrofuranu, za získání sloučeniny Boc-HN-OCH₂COOC₂H₅, s následujícím odstraněním Boc skupiny methanolickou HC1. Sloučeniny vzorce XVIII mohou být připraveny metodami jako jsou ty, které jsou popsány v práci Biniakiewieze a kol., J.Med.Chem., 35, 274-279 (1992). Sloučeniny vzorce XX mohou být připraveny takovými metodami, jako jsou ty, které jsou popsány v práci Corbin a kol., Inorg.Chem., 23, 3404 -3412 (1984).

Ve všech výše popsaných reakcích pro přípravu sloučenin podle vynálezu, mohou být skupiny jako jsou sírové skupiny, aminové skupiny a ketonové skupiny, chráněny tam, kde je to vhodné během různých reakcí a tak zvané chráněné výsledné produkty potom být zbaveny chránících skupin známými technikami. Soli (vytvořené podle potřeby s anorganickými a/nebo organickými kyselinami a/nebo bázemi, výhodně farmaceuticky přijatelnými kyselinami a/nebo bázemi) a/nebo solváty (jako jsou hydráty) reaktantů nebo produktů mohou být použity nebo připraveny podle potřeby v jakékoliv z metod pro přípravu sloučenin podle předloženého vynálezu (včetně komplexů). V tomto popise, pokud není uvedeno jinak, jsou pod sloučeninami vzorců Ia, Ib ale a jejich komplexy míněny i takové soli a soldáty.

Výhodné sloučeniny

Ze sloučenin vzorce Ia jsou v předloženém vynálezu preferovány zvláště ty sloučeniny, mající následující vzorce: Ia' nebo Ia

OH OH kde Z¹ a Z² jsou R* skupiny a Z³ je R skupina, a dále, kde jedna, dvě nebo všechny tři skupiny Z¹, Z² a Z³ jsou -(A)_p-R³ skupiny, nebo

-20CZ 295519 B6

^C<^Z4Z\J

C (RR)

NH (la)

*

OH

OH kde Z⁴ a Z⁵ jsou nezávisle vybrány ze skupiny, zahrnující vodík, halogen (zejména fluor), alkyl (zejména nesubstituovaný alkyl, jako je methyl, nebo hydroxyalkyl, jako je hydroxymethyl), aryl nebo karboxyl.

Výhodné spojovací skupiny a výhodné R³ skupiny jsou popsány dále.

Y¹ je výhodně -NR- nebo zejména -0-, R nebo R* skupiny, které nejsou -(A)_p-R³ jsou výhodně vodík nebo alkylové skupiny, zejména nesubstituované nižší alkylskupiny jako je methyl, ethyl nebo n-butyl nebo alkoxyalkylskupiny jako je ethoxymethyl.

Kovové komplexy

Sloučeniny vzorců la, Ib a Ic mohou být použity jako ligandy pro tvorbu kovových komplexů. Z tohoto hlediska se disulfid sloučeniny vzorce Ib výhodně redukuje na odpovídající dithiol Ic před tvorbou kovového komplexu.

Kovové komplexy podle předloženého vynálezu mohou být tvořeny komplexací sloučeniny la, Ib nebo Ic s radioaktivním nebo neradioaktivním kovem, zahrnujícím kovy, mající atomové číslo 22-31, 39—49 nebo 73-82, zejména rheniem nebo techneciem za bazických podmínek.

Příkladem metody pro tvorbu kovových komplexů podle předloženého vynálezu je ta, ve které se komplex nebo sůl požadovaného kovu v požadovaném oxidačním stavu a obsahující jeden nebo více vyměnitelných ligandů (tj.labilních) (například H₂O, halogen - např. Cl, NO₃“, nebo cukry) smísí s ligandem (ligandy) podle předloženého vynálezu při pH hodnotě vhodné pro tvorbu požadovaného komplexu. Labilní ligand se u kovu nahradí ligandem(y) podle předloženého vynálezu za vzniku kovového komplexu podle předloženého vynálezu.

Takové metody jsou ilustrovány dále:

1) (Met(Ligi_ab)₄ + (Lig_inv)-> (Met)(Lig_inv) + 4(Lig_lab) kde

Met je kov v požadovaném oxidačním stavu, (Ligi_ab) je labilní ligand jako je H₂O, CT, Br“, F“ nebo (Liginv) je ligand podle předloženého vynálezu.

(2) (Met)OCl₄’ + (Lig_inv) -+ (Met)O(Lig_inv) + 4C1“

3) (Met)0₂(Lig_mono)₄ + (Liginv) (Met)O₂ (Lig_inv) + 4 (Ligmono) kde ligmono je monodentátový ligand jako je pyridin, halogen, fosfín nebo amin.

-21 CZ 295519 B6

4) (Me)(Lig_bi)₂ + (Ligi_nv) -> (Met) (Lig_inv) + 2(Lig_bi) nebo

5) (Met)O(Lig_bi)₂ + (Lig_inv) -> (Met)O) (Lig™,) + 2(Lig_bi) kde Ligbi je bidentátový ligand jako je cukr, diol, bisamin, bypiridin nebo fosfín a kde, pro každou rovnici 1 až 5 výše, se použije vhodná rovnováha nábojů.

Alternativně, kovové komplexy podle předloženého vynálezu mohou být připraveny z kovu v oxidačním stupni lišícím se od stupně požadovaného komplexu. Příkladem takové metody je metoda, kde buď redukční činidlo nebo oxidační činidlo (v závislosti na oxidačním stupni použitého kovu a oxidačním stavu požadovaného konečného produktu) se přidá k reakční směsi, obsahující kov za účelem uvedení kovu do požadovaného oxidačního stavu. Oxidant nebo reduktant mohou být použity pro tvorbu meziproduktového komplexu v požadovaném oxidačním stavu, ale s labilními ligandy, které jsou potom nahrazeny požadovaným chelatačním ligandem podle předloženého vynálezu nebo oxidant či reduktant může být přidán k reakční směsi, obsahující kov spolu s požadovaným ligandem pro dosažení změny na požadovaný oxidační stav a chelataci k požadovanému kovu v jednom stupni.

Příklady kovových komplexů podle předloženého vynálezu mohou být komplexy následujících vzorců Ia a Ic:

^^akomplex^ i

O O

, N R w¹/ \Z_

kde skupiny R a R* mají výše definovaný význam a kde M může být radioaktivní nebo neradioaktivní kov, který může popřípadě mít jiný ligand(y) W¹ a/nebo W² v jeho nenaplněných koordinačních místech. Radioaktivní kovy jsou preferovány v těchto komplexech a jsou to například technecium nebo rhenium pro komplexy Ia_kompi_ex. a technecium pro komplexy Ia_kompkx. Výhodně v případech, kde M je rhenium nebo technecium, část ^Ί\ w²

-22CZ 295519 B6

může být uvedena jako		π
O	nebo	/M\ zllx
zM\

O

Jiné vhodné ko~ligandy Wi a W₂ pro vznik těchto komplexů mohou zahrnovat, ale nejsou tak omezeny, mono-, di nebo troj vazné ligandy, které jsou-li spojeny s ligandy Ia, Ib nebo Ic, tvoří neutrální kovové komplexy, zejména technecia nebo rhenia, s kovy výhodně v oxidačním stupni +5.

Kovové komplexy podle předloženého vynálezu nacházejí použití jako diagnostická a/nebo terapeutická činidla. Předložený vynález tak poskytuje metody pro diagnózu přítomnosti a/nebo stavu choroby, nebo pro léčbu chorobného stavu, zahrnující stupeň podání kovového komplexu podle předloženého vynálezu subjektu v případě potřeby. Kovové komplexy podle předloženého vynálezu mohou být podány jakýmkoliv vhodným způsobem jako orálně, parenterálně (například intravenozně, intraperitoneálně, intramuskulámě nebo subkutánně), nebo jakoukoliv jinou vhodnou metodou. Například mohou být komplexy podle tohoto vynálezu podány subjektu jako bolus nebo pomalou infuzí intravenozní injekce.

Podávané množství může být zvoleno, podle požadovaného použití, pro získání diagnostického zobrazení orgánu nebo jiného místa subjektu nebo požadovaného radioterapeutického efektu, metodami známými v oboru. Příklady dávek jsou dávky využívající asi 30 až 200 mCi rhenia (pro radioterapii) nebo asi 10 až 60 mCi technecia (pro zobrazení). Subjektem metod podle předloženého vynálezu je výhodně savec jako je domestikovaný savec, například pes, kočka, kůň a podobně, nebo nejpreferovaněji člověk. V závislosti na kovu a použitém ligandů mohou být komplexy podle předloženého vynálezu použity jako například zobrazující činidla vhodná pro zobrazení orgánů jako je srdce, mozek (kde komplex musí překonat krevní mozkovou bariéru) nebo hepatobiliámí systém. Jsou zvláště vhodné pro zobrazení hypoxických tkání a jako terapeutická činidla, zejména jako cytotoxiny hypoxické tkáně nebo radiosenzibilizátory.

Buněčná permeabilita je vlastnost buněčné membrány, která popisuje mobilitu vnějších molekul (permeantů) do vnitřní struktury membrány (Stein, Transport and Diffusion Across Cell Membráně, New York Academie Press lne. (1986), Kotyk a spol., Biophysical Chemistry of Membráně Functions, Chichester, UK: John Wiley and Sons (1988)). Molekuly vůči kterým je membrána permeabilní jsou schopny penetrovat membránou a dosáhnou prostředí na opačné straně. Kovové komplexy, které mají permeabilitu buněčnými membránami větší než ¹⁴C-sacharoza zejména ty, které obsahuji hypoxia-lokalizující skupinu jak jsou diskutovány dále, jsou preferovány v diagnostických nebo terapeutických metodách předloženého vynálezu. Buněčná permeabilita může být stanovena tak, jak je popsáno v patentové přihlášce US 08 054 120, podané 27.dubna 1993 Linderem a kol., zahrnuté zde jako reference.

Výhodné komplexy podle předloženého vynálezu jsou ty, které obsahují sloučeninu vzorce Ia, Ib nebo Ic komplexovanou s radionuklidemi jako je technecium nebo rhenium.

Rhenium je zvláště vhodné jako radioterapeutické činidlo. Použitým rheniem je výhodně jeden z radionuklidů Re-186 nebo Re-188 nebo jejich směs, a tato směs může také obsahovat Re-185 a/nebo Re-187. Příprava komplexů podle předloženého vynálezu, kde kovem je rhenium může být provedena použitím rhenia v +5 nebo +7 oxidačním stupni. Příklady sloučenin, ve kterých je rhenium ve stavu Re(VII) jsou NH₄ReO₄, nebo KReO₄ . Re(V) je dostupné například jako /ReOCl₄/(NBu₄), /ReOCl₄/(AsPh₄), ReOCl₃(PPh₃)₂ a jako ReO₂(pyridin)₄+. (Ph znamená fenyl, Buje n-butyl). Mohou rovněž být použita jiná rheniová činidla schopná tvorby rheniového komplexu. Použití nosiče rhenia je preferováno. Fráze nosič rhenia znamená, že použití rheniové sloučeniny obsahují neradioaktivní rhenium v koncentracích> ΚΓ⁷ M.

-23CZ 295519 B6

Technecium je zvláště vhodné jako diagnostické zobrazující činidlo. Použitým techneciem je výhodně jeden nebo více radionuklidů Tc-99m, Tc-94m nebo Tc-96. Výhodným radioizotopem pro medikální zobrazení je ^99mTc. Jeho 140 keV -foton je ideální pro použití v široce dostupných gama kamerách. Má krátký (6 hodin) poločas rozpadu, který je žádoucí, jestliže vyžadována pacientova dozimetrie. ^99mTc je snadno dostupný při relativně nízkých nákladech komerčně produkovanými Mo/^mTc generátorovými systémy. Příprava komplexů podle vynálezu, kde kovem je technecium může být provedena použitím technecia ve formě pertechnetátového iontu. U Tc-99m je pertechnetátový iont výhodně získán z komerčně dostupných technecium-99m rodičovských-dceřinných reaktorů; takové technecium je v +7 oxidačním stupni. Generace pertechnetátového iontu za použití tohoto typu generátoru je dobře známá v oboru a je detailněji popsána v patentech US 3 369 121 a 3 920 995. Tyto generátory mohou obecně být eluovány salinickým roztokem a získaným pertechnetátovým iontem je sodná sůl. Pertechnetát může být také připraven z radioaktivního technecia připraveného z cyklotronu za použití postupů dobře známých v oboru.

Tvorba komplexu technecia se výhodně provádí smísením pertechnetátového iontu v normálním salinickém roztoku se vhodným ligandem, výhodně ligandem, obsahujícím alespoň jednu R skupinu, kterou je skupina -(A)_p-R³ , kde (A)p je spojovací skupina a R³ je hypoxia-lokalizující skupina. Může být použit vhodný pufr nebo fyziologicky přijatelná kyselina nebo báze pro úpravu pH na hodnotu vhodnou pro značení ligandu. Tato vhodná hodnota pH se bude měnit v závislosti na charakteru ligandu, například pro ligandy vzorce laje vhodné pH v rozmezí od asi 5,5 do asi 9,5, výhodně je hodnota pH v rozmezí od 7,0 do 8,5. U ligandu vzorce Ic je vhodná hodnota pH v rozmezí 3 až 8, výhodně pH asi 6,0. Zdroj redukčního činidla může být přidán pro uvedení pertechnetátu do nižšího oxidačního stavu Tc (V) pro chelataci s ligandem. Cínatý iont je výhodným redukčním činidlem a může být zaveden ve formě cínaté soli jako je chlorid cínatý, fluorid cínatý, vínan cínatý cínatá dlethylentriaminpentaoctová kyselina ( cínatá DTPA) nebo citrát cínatý nebo podobně. Reakce se výhodně provádí ve vodě nebo směsi voda/alkohol přibližně při teplotě místnosti za použití reakční doby od asi 1 minuty do asi 1 hodiny. Redukční činidlo je výhodně přítomno v koncentraci 5až50/ug/ml. Ligand je výhodně přítomný v koncentraci 0,5 až 2 mg/ml. Popřípadě může být přidán ko-ligan Wi a W2, jak byly tyto ligandy diskutovány výše.

Alternativně mohou být techneciové komplexy podle vynálezu připraveny ligandovou výměnou. Labilní Tc(V) komplex může být připraven redukcí TcOf za přítomnosti ligandu, který tvoří labilní techneciový komplex, jako je ethylenglykol, mannitol nebo hydroxykarboxylátové ligandy glukoheptonátu, glukonátu, citrátu, malátu; nebo tartrátu, při hodnotě pH, která je vhodná pro výměnu použitého ligandu (obvykle 5 až 8). Redukční činidlo, jako jsou výše popsané cínaté soli, za vyvolání tvorby labilního redukovaného komplexu Tc s výměnným ligandem. Tento redukovaný Tc komplex se pak smísí s ligandem požadovaným, výhodně obsahujícím jednu nebo více (A)_p-R³ skupin, při vhodné hodnotě pH (jak je popsáno výše). Labilní výměnný ligand se nahradí na kovu požadovaným ligandem a takto se vytvoří techneciové komplexy podle vynálezu.

Preferovány jsou ty kovové komplexy podle předloženého vynálezu, ve kterých sloučenina popsaná výše v sekci nazvané Preferované sloučeniny“, jako jsou sloučenina vzorce Ia' nebo Ia, je komplexována s kovem, nej výhodněji s rheniem nebo techneciem. Ligandy, které tvoří jednotlivé, neutrální komplexy jsou preferovány. Dále jsou zvláště preferovány komplexy podle předloženého vynálezu, obsahující jednu nebo více bioaktivních skupin R³ (zejména hypoxia-lokalizujících skupin) popsaných dále. Příklady komplexů zahrnují ty, které mají následující struktury:

-24CZ 295519 B6

v

H^z

kde Mi je technecium a M₂ je technecium nebo rhenium a kde alespoň jedna R nebo R* skupina je-(A)_p-R³.

I když jsou preferovány kovové komplexy podle předloženého vynálezu, které obsahují jednu nebo více bioaktivních skupin jak jsou popsány dále, jsou komplexy podle předloženého vynálezu postrádající takové skupiny vhodné například, při zobrazení průtoku nebo orgánu. Výhodnými takovými komplexy, postrádajícími bioaktivní skupinu(y) jsou ty, které obsahují lipofílní ligandy vhodné pro zobrazení srdce, mozku nebo hepatobiliámího systému.

Bioaktivní skupiny

Bioaktivní skupina sloučenin podle předloženého vynálezu je schopna působit jako metabolický substrát, katalyzátor nebo inhibitor, například za účelem clearence komplexu z necílové tkáně, nebo je schopna být přednostně přijata zvoleným místem subjektu, jako při vykázání afinity pro celulámí rozpoznávací místo jako je recepton, enzym nebo transportní mechanismus, nebo při obsahu reaktivních skupin pro kopulaci k proteinům nebo tkáňovou lokalizaci jinými biochemickými procesy. Jsou tak v rozsahu vynálezu komplexy, kde jedna nebo více bioaktivních skupin je navázáno ke zbytku komplexu, který si udržuje svoji požadovanou bioaktivitu, je-li takto vázán.

Příklady bioaktivních skupin zahrnují amfetaminy, barbituráty, sulfonamidy, monoaminoxidásové substráty a inhibitory, hormony, enzymy, lipidy, ligandy pro buněčné membránové receptory, antihypertenziva, neurotransmitéry, aminokyseliny a oligopeptidy, radiosenzibilizátory, steroidy (jako je estrogen nebo estradiol), monoklonální nebo polyklonální protilátky nebo jejich fragmenty, cukry (jako jsou glukózové deriváty), mastné kyseliny, substráty muskarinových receptorů (jako je 3-chinuklidinylbenzilát), substráty pro dopaminové receptory (jako je spiperon), bio

-25 CZ 295519 B6 tin, chemotaktické peptidy, substráty pro benzodiazepinové receptory, zejména hypoxia-lokalizující skupiny, které jsou popsány dále.

Komplexy podle předloženého vynálezu, obsahující bioaktivní skupiny jsou vhodné proto, že využívají vlastnosti, např. vazebný metabolismus atd., jednotlivé biochemicky aktivní skupiny za poskytnutí zobrazení nebo léčení jednotlivého místa nebo funkce. Výhodné komplexy podle předloženého vynálezu, zejména kde kovem je ^99mTc, poskytují vysoce účinné, relativně snadno použitelné diagnostické zobrazující produkty, které jsou charakterizovány kovalentní vazbou mezi radionuklidovým komplexem a bioaktivní skupinou, přičemž si v podSatě udržují vlastnosti volné bioaktivní skupiny. Příklady diagnostických užití pro komplexy podle předloženého vynálezu zahrnují, ale nejsou tak omezeny, zobrazení hypoxické tkáně, např. v srdci, mozku, plících nebo v nádorech, výhodně tam kde bioaktivní skupina je nitro-heterocyklická skupina zachycená hypoxií zprostředkovanou redukcí nitroskupiny (označeno zde jako „hypoxia-zprostředkovaná nitro-heterocyklická skupina), diskutované zde dále; zobrazení mozku a plic, je-li bioaktivní skupina lipofílní amin-obsahující sloučenina, např. amfetamin; zobrazení mozku, srdce nebo nádoru, je-li bioativní skupinou cukr (např. deriváty glukózy); zobrazení srdce, je-li bioaktivní skupinou mastná kyselina zobrazení steroidových receptorových míst je-li bioaktivní skupinou steroid (např. estrogen pro zobrazení karcinomu prsu) a zobrazení míst infekce, je-li bioaktivní skupina chemotaktický peptid s afinitou pro typy krevních buněk, které se lokalizují na místě infekce.

Navíc k diagnostickým činidlům poskytuje předložený vynález také stabilně navázané komplexy pro radioterapeutické indikace, zejména je-li kovem Re, jako jsou indikace, které jsou popsány v patentu US 4 871 836. Například Re komplexy podle předloženého vynálezu, které obsahují estradioly mohou být použity při léčbě rakoviny prsu. Také vzhledem k tomu, že o hypoxické tkáni je známo, že je přítomna v nádorech, jsou Re komplexy podle předloženého vynálezu, kde bioaktivní skupina je hypoxia-lokalizující skupina, vhodné pro radioterapii. Komplexy podle vynálezu, kde kov je Re, pro použití v radioterapii, jsou výhodně injikovány lidem a ponechány koncentrovat v požadovaném místě. Cílení radionuklidu k požadovanému místu je tak možno dosáhnout s vyšší specifítou. Radioterapie je uvažována pro ty oblasti, kde je přítomno dostatečné množství interagujících míst (například estrogenových receptorů nebo hypoxické tkáně) tak, že poskytují terapeutické hladiny radionuklidu v oblastech, vyžadujících léčbu.

Jestliže je bioaktivní skupinou R³ steroid, je třeba chápat, že buď steroid, substituovaný steroidový derivát nebo nesteroidní derivát může být použit s podmínkou, že R³ zvolená skupina má afinitu pro steroidní receptor. Například R³ muže být steroid estradiol:

Estradiolová skupina může být navázána ke zbytku komplexu v jakékoliv vhodné poloze molekuly, ale výhodně je navázána přes spojovací skupinu buď k atomu v B kruhu, nebo k atomu v D kruhu. Dále může být estradiolová molekula substituována v dostupných polohách, jednou nebo více R skupinami, kde R má výše definovaný význam. Alternativně může být steroidová molekula nahrazena nesteroidním diolem se známou afinitou pro estrogenový receptor, jako je

-26CZ 295519 B6

kde (A_p) a R mají výše definovaný význam.

Jestliže bioaktivní skupinou je substrát pro muskarinový receptor, -(A)_p-R³ částí komplexu je výhodně skupina:

R O

I II

HO-C-C-OR⁴ (A) p kde (A)_p a R mají výše definovaný význam, a R⁴ je terciární nebo kvartemí amin jako je 3-chinuklidinol nebo substituovaný 3-chinuklidinol, nebo nesledující sloučeniny:

I

CH₃ pirenzepin

Spojovací skupiny

Spojovací skupina(y) sloučenin podle předloženého vynálezu, jsou-li přítomny (to jest, když je p větší než nula), mohou být jakákoliv jedna nebo více skupin, které mohou sloužit k fyzickému oddálení, nebo jinému izolování, bioaktivní skupiny od zbytku sloučeniny vzorce Ia, lb nebo Ic nebo jejich komplexu. Přítomnost takových spojovacích skupin může být žádoucí například tam, kde bioaktivní skupina jako je hypoxia-lokalizující skupina, může být inhibována ve svém působení zbytkem komplexu. V různých spojovacích skupinách, které mohou být použity je třeba chápat, že p může mít jakoukoliv obvyklou hodnotu v závislosti na zvoleném tvaru; požadovaného komplexu. Výhodně je p < 20 a nejvýhodněji < 10.

Výhodné spojovací skupiny, které mohou být použity samotné (kde p je jedna), nebo spolu za vzniku přímého nebo rozvětveného řetězce (kde p je větší než jedna) a které mohou být navázány ke zbytku ligandu na některém konci jsou: -CH₂-, -CHR⁵-, -CR⁵R⁶-, -CH=CH-, -CH=CR⁵-, -CR⁵=CR⁶-, -C=C-, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl (např. p-fenylen nebo hydroxysubstituovaný p-fenylen), heterocyklo, kyslík, síra, -C(O)-, -NH-, HC=N~, -CR⁵=N-, -NR⁵- nebo -CS-, kde R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vybrány z alkylu, alkenylu, alkoxy, arylu, 5- nebo 6-členného dusík nebo kyslík obsahujícího heterocyklu, halogenu, hydroxy nebo hydroxyalkylu.

-27CZ 295519 B6

V komplexech podle předloženého vynálezu, preferované hodnoty (A)_p (navázané ke zbytku ligandu z kteréhokoliv konce) jsou alkyl, oxa-alkyl, hydroxyalkyl, hydroxyalkoxy, alkenyl, arylalkyl, arylalkylamid, alkylamid, alkylamini a (alkylamin)alkyl.

Nejpreferovanější hodnoty pro (A)_p jsou vybrány z následujících (navázány ke zbytku ligandu z kteréhokoliv konce): -(CH₂)i_5~,(zejména methyl nebo ethyl, zejména je-li navázán k hypoxialokalizující skupině), -CH₂CH=CH-CH₂-, -(CHJ^-QOj-NH-tCHJi-s-, -C₆H₅-(CH₂)_I_₂-, -(CH₂)!_₂-CH-(OH)-CH₂-, -(CH₂)₂-O-, -CH₂CH(OH)CH₂OCH₂-, -CH₂-C(O)-NH-CHC_ňH$-, -(A -O-A )i_₃ a -(A-NH-A )i_₃, kde A' a A” jsou stejné nebo rozdílné alkylové nebo arylové skupiny a C₆H₅, je fenylen).

Hypoxia-lokalizující skupiny

Mnoho postupů používaných v současnosti v oblasti nukleární medicíny zahrnuje radiofarmaka, která poskytují diagnostické zobrazení krevního proudu (perfuze) v hlavních orgánech a v tumorech. Počáteční regionální příjem těchto radiofarmak v orgánu, o který je zájem, je úměrný toku; vysoký tok oblastmi bude přinášet vysokou koncentraci radiofarmak, zatímco oblasti s malým nebo žádným tokem budou mít relativně nízké koncentrace. I když jsou diagnostická zobrazení ukazující tyto regionální rozdíly použitelná k identifikaci ploch se špatnou perfuzí, je také žádoucí metabolická informace o stavu tkáně v oblasti se zjevně nízkou perfuzí. Předložené komplexy, obsahující jednu nebo více skupin -(A)_p-R^{I * 3}, kde R³ je hypoxia-lokalizující skupina specificky se lokalizují v hypoxické tkáni, to je tkáni, která má kyslíkový deficit, aleje stále ještě živá, a tak je poskytnuta další informace o stavu tkáně.

Vhodné hypoxia-lokalizující skupiny jsou ty, které jsou přednostně zadrženy v regionech subjektu, které jsou hypoxické vzhledem ke stupni retence v oblastech, které jsou normoxické. Větší selektivní lokalizace v hypoxické tkáni proti tkáni normoxické, poskytne přesnější informaci. Radiofarmaka těchto vlastností budou zobrazovat relativně vysoké koncentrace v takových hypoxických regionech s nízkými koncentracemi v regionech normoxických a infarktových. Komplexy podle předloženého vynálezu, které se koncentrují rychle v hypoxické tkáni a které zůstávají stabilní v takové tkáni během času, zatímco vykazují ztrátu vazebnosti a rychlé vymývání z normoxické tkáně, jsou preferovány.

Příklady diagnostických použití takových komplexů podle předloženého vynálezu, zejména kde komplexovaným kovem je technecium, zahrnují zobrazení hypoxické tkáně přítomné za patologických podmínek v oblastech jako je srdce, mozek, plíce, játra, ledviny nebo v nádorech, nebo v periferních vaskulámích chorobách jako je diabetes. V mozku nebo srdci hypoxia typicky následuje po ischémické příhodě produkované například arteriální okluzí nebo kombinací zvýšeného poškození a nedostatečného toku. Diagnostické zobrazení s radiofarmaky podle předloženého vynálezu, obsahujícími hypoxia-lokalizující skupiny umožňují identifikaci tkáně, která je ohrožena progresí infarktu, ale ještě je zachranitelná.

Dále mají často nádory oblasti, ve kterých je jejich hmota hypoxická. Toto vzniká, když rychlý růst nádoru není způsoben extenzí nádorové vaskulatury. Radiofarmaka podle předloženého vynálezu, která se lokalizují přednostně v oblastech hypoxie, mohou být také použita pro poskytnutí zobrazení, která jsou vhodná pro diagnózu a managment terapie nádorů. Dále, sloučenina, která se lokalizuje v hypoxické oblasti nádorů, a která je značena radionuklidem se vhodnými ctného β-emisemi, může být použita pro vnitřní radioterapii nádorů. Stabilně navázané komplexy, kde Re je radioaktivní kov, který je komplexován, jsou zvláště vhodné pro radioterapeutické indikace tam, kde je známo, že je hypoxická tkáň přítomna v nádorech.

I když přesný mechanismus retence hypoxia-lokalizujících sloučenin není znám, předpokládá se, že tyto sloučeniny, například nitroheteroaromatika jako je mizonidazol, procházejí intracelulámí enzymatickou redukcí. Tento proces se předpokládá jako reverzibilní v buňkách s normálním parciálním tlakem kyslíku, ale v buňkách, které jsou deficientní pokud jde o kyslík, může probí-28CZ 295519 B6 hat další redukce. Toto vede ke tvorbě reaktivních druhů, které se vážou nebo jsou zachyceny jako intracelulární komponenty, poskytující přednostní zachycení v hypoxických buňkách. Je proto žádoucí u sloučenin používaných pro zobrazení hypoxia a její léčbu, aby byly schopny postupovat buněčnými membránami a být schopny redukce, například reduktasami jako je xan5 thin oxidasa.

Jakákoliv skupina, která je preferenčně přijímána a/nebo zadržována hypoxickou tkání vzhledem k normoxické tkáni a která je schopna být vázána ke zbytku sloučeniny vzorců la, lb nebo Ic, může být použita jako hypoxia-lokalizující skupina podle předloženého vynálezu.

Příklady takových skupin zahrnují hypoxia-zprostředkované nitroheterocyklické sloučeniny, jako jsou nitroheterocyklické skupiny, které mohou být zachyceny hypoxia-zprostředkovanou redukcí nitroskupiny, například nitroimidazoly a jejich deriváty. Různé nitroheterocyklické (anitrokarbocyklické) skupiny jsou popsány v následujících dokumentech, které zde jsou zahrnuty jako odkalí zy a jsou vhodné pro použití v komplexech podle předloženého vynálezu ve spojení se sloučeninou vzorce la, lb nebo Ic přímo nebo přes spojovací skupinu (různé spojovací skupiny jsou zde také popsány): Koh a kol., Hypoxia Imaging of Tumor Using /F-18/Fluoronitroimidazole, J.Nucl.Med., Vol.30, 789 (1989); Koh a spol., Correlation of Kinetic Parameters of Nitroreducktase Enzymes with Redox Properties of Nitroaromatic 20 Compounds, J.Biol.Chem., Vol. 264, 21, 12 379-12 383 (1989) (zejména tabulka 1 na str. 12 380); Hoffman a kol., Binding of the Hypoxic Tracer /H-3/ Misonidazole in Cerebral Ischémia, Stroke, Vol. 18, 168 (1987);. Kedderis a kol., The Metabolic Activation of NitroHeterocycklic Therapeutics Agents, Drug Metabolism Reviews, 19(1), str.. 33-62 (1988);

Adams a kol., Plypoxia Mediated Nitro-Heterocydic Drugs in the Rádio- and Chemotherapy 25 of Cancer, Biochemy Pharmacology, Vol. 35, č. 1, str.71-76 (1986); Brown a kol., StructureActivity Relationships of 1-Substituted 2-Nitroimidazoles: Effect of Partition Coeffícient and Sidechain Hydroxyl Groups on Radiosensitization In vitro, Rad.Research, 90 98-108 (1982); Adams a kol., Structure-Activity Relationships in the Development of Hypoxic Cell Radiosensitizers, Int. J.Radiat.Biol., Vol. 35, č. 2, 133-150 (1979), a Adams a kol., Structure-Activity 30 Relationships in the Development of Hypoxic Cell Radiosensitizers, Int.J.Radiat.Biol., Vol. 38, č. 6,613-626(1980).

Jestliže je hypoxia-lokalizující skupina hypoxia-mediovaná nitro-heterocyklická skupina, může být část linken/lokalizující skupina komplexu přítomna v následujících strukturách:

kde

-29CZ 295519 B6

D je seskupení atomů, tvořící, spolu s atomem dusíku nebo kyslíku, ke kterému je navázáno, 5- nebo 6-členný kruh, n je celkový počet substituovaných poloh dostupných na 5- nebo 6-členném kruhu, a jeden nebo více R⁷ substituentů je nezávisle vybráno ze skupiny, zahrnující vodík, halogen (zejména fluor), hydroxy, alkyl, aryl, alkoxy hydroxyalkyl, hydroxyl alkoxy, alkenyl, arylalkyl, arylalkylamid, alkylamid, alkylamin, acyl, alkoxykarbonyl a (alkylamin)alkyl.

Výhodně seskupení atomů D obsahuje jednu nebo více z následujících skupin: dusík, kyslík, síra, -CR⁵ -, -CR⁷ =, -CR⁷R⁷- nebo -CRR-. Jestliže (A)_p chybí (tj. p=0) je nitro-heterocyklická hypoxia-lokalizující skupina připojeny ke zbytku komplexu přes atom dusíku nebo uhlíku kruhu. Skupina (A)_p může být zvolena nejen podle své kapacity oddálení hypoxia-lokalizující skupiny od zbytku komplexu, ale také podle jejího vlivu na redukční potenciál hypoxia-mediované nitroheterocyklické skupiny.

Výhodné hypoxia-lokalizující skupiny (uvedeny spolu se spojovacími skupinami) jsou 2-, 4- a 5-nitroimidazoly j ako j e

-<A)_P~

1=1=1 (R⁷)2

a

no₂ nitrofuranové a nitrothiazolové deriváty jako je

zejména

a nitrotriazoly jako je

no₂

Příklady skupin (obsahujících (A)_p spojovací skupiny) zahrnují, ale nejsou na ně omezeny

-30CZ 295519 B6

-CHOH-CH“N i

no₂

(CH₂)i--TV

-(CH2)q-	no2 N^N ? I I . -NHCCHry N no2 -1
N=r\ / \
- (CH2) <J-
no2	no2
NO? A -<CH2)yN N w	no2 A , -CH2-CH-CH2—N , OH \_/
alkyl

-31 CZ 295519 B6

(CH₂) _q.-O-(0¾) _q.

N0₂

- (CH₂)_q.-O- (0¾)

» kde q=0 až 10 a každé q' je nezávisle 1 až 3.

Takové komplexy podle předloženého vynálezu jsou vhodné tím, že využívají vlastnosti hypoxia-lokalizující skupiny k poskytnutí zobrazení nebo léčby hypoxické tkáně na určitém místě. Výhodné komplexy jsou ty, kde hypoxia-lokalizující skupina je hypoxia-mediovaná nitro-heterocyklická skupina, jako jsou nitroimidazoly nebo nitrofurany a jejich deriváty. Nejpreferovanější jsou ty, kde hypoxia-lokalizující skupina je 2-nitroimidazol nebo jeho derivát.

-32CZ 295519 B6

Navíc k tomu, že jsou vhodné k zobrazení hypoxické tkáně, mohou předložené komplexy být také použity jako markéry krevního toku, to jest, pro zobrazení perfuze. Počáteční distribuce nových komplexů je úměrná krevnímu proudu a proto zobrazení provedené co nejdříve po podání může být použito jako indikátor perfuze. V krátké pozdější době se komplexy vymývají z normotoxické tkáně, ale jsou zadržovány v hypoxické tkáni a je realizováno zobrazení hypoxické tkáně.

Kity pro tvorbu kovových komplexů

Je výhodné připravovat komplexy podle předloženého vynálezu na, nebo blízko, místa, kde tyto mají být použity. Jedno nebo více lahvičkový kit, který obsahuje všechny komponenty potřebné k přípravě komplexů podle vynálezu, nebo radionuklid samotný, je částí tohoto vynálezu.

Preferovaný jednolahvičkový kit podle předloženého vynálezu obsahuje ligand vzorce Ia, Ibnebo Ic a zdroj farmaceuticky přijatelného redukčního činidla jako je cínatá sůl. Nejvýhodněji, navíc, je kit pufrován farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo bází pro úpravu pH na požadovanou hodnotu pro tvorbu komplexu jak bylo popsáno dříve. Je výhodné, aby obsahy kitu byly v lyofílizované formě. Takový jednolahvičkový kit může popřípadě obsahovat výměnné ligandy jako je glukoheptonát, glukonát, mannitol, malát, kyselina citrónová nebo vinná a může také obsahovat reakční modifíkátory jako je kyselina diethylentriaminpentaoctová nebo kyselina ethylendiamintetraoctová. Mohou být použita další aditiva jako jsou solubilizátory (například a, β nebo γ-cyklodextrin), antioxidanty (například kyselina askorbová), plniva (například NaCl) pro zlepšení radiochemické čistoty a stability finálního produktu, nebo pro usnadnění produkce kitu.

Jednolahvičkové kity mohou být připraveny tak, že složky jsou obsaženy ve dvou nebo více lyofilizovaných vrstvách podle patentové přihlášky US 08 168 100, Nowotnik, nazvané Multilayer Lyophile, podané 14.prosince 1993), která je zde zahrnuta jako odkaz.

Preferované vícelahvičkové kity podle předloženého vynálezu obsahují v jedné lahvičce složky jiné než je radionuklid samotný, potřebné pro tvorbu labilního radionuklidového (zejména Tc(IV)) komplexu jak je popsáno výše, to jest, výměnný ligand a farmaceuticky přijatelné redukční činidlo jako je cínatá sůl. Množství a typ výměnného ligandu a množství a typ redukčního činidla a použitého pufru mohou být vybrány podle charakteru výměnného komplexu, který je tvořen. Ligand Ia, Ib a Ic podle předloženého vynálezu je držen ve druhé lahvičce, stejně jako případná aditiva jako jsou pufry vhodné pro úpravu pH na jeho optimální hodnotu.

Jednolahvičkový kit může být snadno použit pro následující přidání radionuklidového iontu jako je pertechnetát. Multilahvičkový kit může být připraven pro použití přídavkem radionuklidového iontu jako je pertechnetát, do lahvičky, obsahující výměnný ligand a redukční činidlo a po určité době pro tvorbu labilního komplexu, se obsahy této lahvičky, přidají ke druhé lahvičce, obsahující zdroj požadovaného ligandu. Po reakční době asi 1 až 60 minut se vytvoří komplex podle předloženého vynálezu. Je výhodné, aby obsahy obou lahviček tohoto multilahvičkového kitu byly lyofilizovány. Jak je popsáno pro jednolahvičkový kit, mohou být použita další aditiva pro zlepšení radiochemické čistoty a stability konečného produktu nebo pro usnadnění produkce kitu.

Alternativně může multilahvičkový kit obsahovat požadovaný ligand v jedné lahvičce a zdroj redukčního činidla jako cínatý iont ve druhé lahvičce. Pertechnetát může být přidán do lahvičky, obsahující ligand a pak mohou být přidány obsahy druhé lahvičky pro iniciaci radioaktivního značení. Jako výše množství a typ ligandu, pufr pH a redukční činidlo mohou být vybrány na základě charakteru požadovaného ligandu. Opět je výhodné, aby obsahy obou lahviček byly lyofílizovány.

Do rozsahu vynálezu spadají všechny stereoizomery sloučenin a komplexů podle předloženého vynálezu, jak samotné (tj. v podstatě prosté jiných izomerů), ve směsi s určitými stereoizomery

-33 CZ 295519 B6 (například jako racemát) nebo v jakékoliv jejich jiné směsi. Stereoizomemí směsi mohou být rozděleny například použitím vhodné chirální kolony. Požadovaný stereoizomer může být také připraven použitím chirálních výchozích materiálů nebo meziproduktů.

Následující příklady ilustrují specifická provedení tohoto vynálezu a je třeba je chápat tak, že v žádném případě předložený vynález neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza 3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioximu

A. Příprava aziridinu

Ethanolamin (25,0 g, 0,41 mol) se přidá po kapkách k roztoku 1 : 1 kyseliny sírové : vody (kyselina sírová, 18 N, 23 ml a voda, 23 ml) za míchání při chlazení reakční nádoby na ledové lázni. Po přidávání se směs zahřeje na 200 °C a udržuje se na této teplotě 1 h. Voda se odstraní destilací a reakční směs se ochladí. Vysrážená sulfátová sůl se odfiltruje a promyje bezvodým ethanolem. Výtěžek 40,0 g. Sulfát se vaří v baňce se zpětným chladičem a za přítomnosti 40 % hydroxidu sodného (160 ml) po 30 minut a potom se destiluje za použití účinného chladiče. Asi 35 ml destilátu se shromáždí vařením na 70 až 95 °C. K výše uvedenému destilátu se přidá pevný KOH a suší se přes noc v mrazničce. Olej, který se oddělí se odstraní a redestiluje. Frakce vroucí při až 60 °C se shromáždí a destiluje jednou za přítomnosti kovového sodíku. Aziridin, vroucí při až 57 °C se oddělí jako olej. Výtěžek: 4,5 g (26 %). *H NMR (CDC1₃): δ 1,6 (s, N-CH₂).

B. Příprava l-(2-aminoethyl)-l-methylhydrazinu

Aziridin (4,5 g, 0,105 mol) se přidá po kapkách během 1 h k refluxující směsi N-methylhydrazinu (25,0 g, 0,54 mol) a chloridu amonného (1,0 g). Směs se refluxuje dalších 16 h, potom se zahustí za použití rotační odparky pod tlakovým aspirátorem pro odstranění jakýchkoliv nízkovroucích nečistot. Výsledný olej se destiluje za nízkého tlaku a získá se bezbarvá kapalina (4,4 g, t.t. 93 až 95 °C/ 80 až 85 mm). Kapalina se redestiluje pod dusíkem a získá se titulní produkt jako bezbarvý olej. Výtěžek: 2,2 g (25 %), t.v. 160 až 162 °C (Trepanier a kol., J.Med.Chem., 10, 228 (1967), 155 až 165 °C). Ή NMR (D₂O) : δ 2,3 (s, 3H, N-Me), 2,5 (t, 2H, CH₂-N-Me) a 2,7 (t, 2H, CH₂-NH₂).

C. Příprava 3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion dioximu

Roztok l-(2-aminoethyl)-l-methylhydrazinu (1,8 g, 20 mmol) a diizopropylethylaminu (6,5 g, 50 mmol) se přidá po kapkách k roztoku 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutanu (Vassian, Inorg.Chem., 6, 2043 (1967)) (6,6 g, 50 mmol) v suchém AcN (25 ml) při udržování reakční

-34CZ 295519 B6 směsi na lázni led-sůl. Po přidávání se reakční směs míchá pod refluxem dalších 6 hodin. Roztok se zahustí na pastu za sníženého tlaku a potom se přidá 20 ml vody. Roztok se upraví na pH 10-11 přídavkem 4N NaOH a extrahuje se dichlormethanem. Organická vrstva se suší a zahuštěním se získá polopevná látka, která se krystaluje znovu z ethanolu a poskytne titulní produkt jako bezbarvou pevnou látku. Výtěžek: 1,5 g (26 %), t.t. 130 až 131 °C.

Ή NMR (DMSO-d₆): δ 1,5 (s, 12H, CMe₂), 2,08 (s„ 3H, C=CCH₃), 2,12 (s, 3H, C=CCH₃), 2,3 (šs, 1H, NH), 2,6 (s, 3H, N-Me), 2,9 (t, 2H, CH₂-NH)³ a 3,5 (šs, 1H, NH-NMe), 10,8 (s, 1H, N=OH) a 10,85 (s, 1H, N=OH); MS (M+H)⁺ 288.

Elementámií analýza:

vypočteno 54,33 % C, 10,17 % H, 24,37 % N nalezeno 54,48 % C, 9,91 % H, 24,04 % H.

Příklad 2

Příprava ^99mTc komplexu ligandů z příkladu 1

Oxo/3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioximato/(3-)-N,N',N,N7technicium “^99mTc (V)

Ligand z příkladu 1 (2 mg) se rozpustí v salinickém roztoku (1,5 ml) a eluuje; výstupem z Mo/^mTc generátoru (0,5 ml, 15 až 35 mCi). Přidá se nasycený roztok vínanu cínatého v salinickém roztoku (50μ1). Po 5 minutách při teplotě místnosti se stanoví radiochemická čistota titulního komplexu, která podle HPLC (PRP-1 10 μ, 70/30 AcN/0,lM NH₄,OAc, pH 4,6, 1 ml/min) je > 99 %.

Příklad 3

Příprava ⁹⁹Tc komplexu ligandů z příkladu 1 /Tetra-n-butylamonium//TcO(Eg)₂/ (Eg = ethylenglykolát) se připraví in sítu smísením TBATcOC1₄, (342,6 mg), ethylenglykolu (250 μΐ) a 0,75 M octanu sodného v methanolu (3,7 ml). Ligand z příkladu 1 (198 mg) se rozpustí v methanolu (10 ml) a tento roztok se přidá k roztoku /tetra-n-butylamonia/ /TcO(Eg)₂/. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 15 min. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Produkt se čistí na sloupci silikagelu za eluce 5 % MeOH/CH₂Cl₂ a rekrystaluje se z etheru/hexanu. Titulní komplex se získá jako světle hnědý prášek (172,6 mg, 63 % výtěžek). MS /m/z (species)/: (FAB+): 400 (M+H), 384 (M-O); (FAB-): 398 (M-H).

'H NMR (δ ,CDC1₃ ): 3,61 (m, 2H, CH₂), 3,14 (m, 1H, CH₂), 2,70 (m, 1H, CH₂), 2,39 (s, 3H, CH₃), 2,33, (s, 3H, CH₃), 2,26 (s, 3H, CH₃), 1,54 (s, 3H, CH₃), 1,47 (s, 3H, CH₃), 1,40 (s, 3H, CH₃), 1,36 (s, 3H, CH₃). IR 926 cm¹ (uTc=0)

Příklad 4

Syntéza ll-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10dion-dioximu

-35CZ 295519 B6

A. Příprava t-Boc-aziridinu

Di-terc.butyl-dikarbonát (22,0 g, 0,1 mol) v dichlormethanu (20 ml) se přikape k míchanému roztoku aziridinu (4,3 g, 0,1 mol, příklad 1(A)) a triethylaminu (15,0 g, 0,15 mol) v dichlormethanu (10 ml). Po 2 h při teplotě místnosti se reakční směs zahustí na asi 10 ml na rotační odparce při teplotě místnosti, potom se zpracuje s vodou (100 ml). Organická vrstva se oddělí a pečlivě se promyje vodou (5 x 50 ml). Odstraněním rozpouštědla se získá titulní produkt, který se použije v dalším stupni bez dalšího čištění. Výtěžek: 2,1 g (15 %). 'li NMR (CDCI3): δ 1,5 (s, 9H, C-Me) a 2,15 (s, 4H, N-CH₂).

B. Příprava N-(2-terc.Boc-aminomethyl)-l-methylhydrazinu

Roztok t-Boc aziridinu (2,1 g, 0,0141 mol) v etheru (5 ml) se přikape k ledem chlazenému N-methylhydrazinu (6,75 g, 0,141 mol) během 1 h. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti dalších 12 hodin. Všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a získá se hustá kapalina. Tento produkt se použije v dalším stupni bez jakéhokoliv dalšího čištění. Výtěžek: 2,5 g (96 %). ’H NMR (CDClj): 1,5 (s, 9H, C-Me), 2,4 (s, 3H, N-Me), 2,5 (t, 2H, Me-N-CH₂), 2,9 (s, 2H, N-NH₂), 3,4 (m, t-Boc-NH-CH₂) a 5,4 (šs, 1H, NH-t-Boc). MS: /M+H/⁺ = 190.

C. Příprava l-t-Boc-amino-3,4-diamino-3,4-Diana-3,5,5-trimethylheptan-6--on-oximu

Bezvodý uhličitan draselný (1,4 g, 10 mmol) se přidá k míchanému roztoku N-(2-t-Boc-aminoethyl)-l-methyihydrazinu 1,17 g, 5,2 mmol) v AcN (10 ml). Reakční směs se ochladí na lázni led-sůl a po částech se přidá pevný 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (příklad 1(C), (0,745 g,

5,5 mmol) během půlhodiny za míchání pod dusíkem. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se zpracuje s vodou (50 ml). Vodný roztok se extrahuje etherem; (5 x 20 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí vodou a suší (síran sodný). Odpařením rozpouštědla se získá viskozní olej, který se chromatografuje na rychlé silikagelové koloně. Eluce 6 : 4 hexany/ethylacetátem poskytne produkt jako bezbarvou lepkavou kapalinu. Výtěžek: 0,78 g (52 %). ’H NMR (CDC1₃); δ 1,2 (s, 6H, N-C-Me₂), 1,5 (s, 9H. -O-C-Me₃), 1,9 (s, 3H, N=C-Me), 2,3 (šs. ^JH, Me-N-NH), 2,4 (s, 3H, N-Me), 2,6 (t, 2H, Me-N-CH₂), 3,2 (m, 2H, t-Boc-NH-CH₂), 5,3 (šs, 1H, t-Boc-NH-) a 9,1 (šs, 1H, -OH). MS: /M+H/¹' = 289.

D. Příprava 1 l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-penta-methyl-4,5,8-triazaundekan-

2,10-dion-dioximu l-t-Boc-amino-3,4—Diana-3,5,5-trimethyl-heptan-6-on-oxim (0,288 g, 1 mmol) se rozpustí v nasyceném methanolickém HC1 (5 ml) a míchá se 10 min při teplotě místnosti. Roztok se zahustí za sníženého tlaku a pasta se odpaří společně s chloroformem (3x5 ml) a získá se bezbarvá pevná látka. Tato pevná látka se potom zpracuje s methanolickým amoniakem (10 ml) a opět se zahustí za sníženého tlaku. Výsledná pasta se suší za vysokého vakua 2 h při teplotě místnosti a potom se rozpustí v suchém acetonitrilu (5 ml). Přidá se pevný uhličitan draselný a směs

-36CZ 295519 B6 se míchá 5 min. Najednou se přidá 3-chlor-3-methyl-2-nitroso-l-(2-nitro-lH-imidazol-lyl)butan patentová přihláška US 08 054 120, podaná 27.dubna 1993 Linderem a kol., (0,325 g,

1,5 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po 30 min. Rychlý silikagel (5,0 g) se přidá k reakční směsi a potom se rozpouštědlo odstraní za vakua a získá se volně tekoucí prášek. Silikagel obsahující směs se vloží do rychlé kolony a chromatografuje se. Eluci 9 : 1 methylenchlorid/methanol se získá titulní produkt jako světležlutá pevná látka. Výtěžek 5,0 mg (1 %). t.t. 132 až 134 °C, Ή NMR (CDC1₃): δ 1,1 (s, 6H, C-Me), 1,2 (s, 6H, C-Me), 1,8 (s, 3H, C=N-Me), 2,2 (s, 3H, N-Me), 2,3 (šm, 2H, NMe-CH₂), 2,5 (šm, 2H, NH-CH₂), 5,3 (s, 2H, imid-CH₂), 7,0 (s, 1H, imid-H) a 7,2 (s, 1H, imid-H). MS /M+HÁ 399.

Ethylový analog titulní sloučeniny, mající strukturu

může být vyroben postupem analogickým výše popsanému.

Příklad 5

Tc-99m komplex ligandů z příkladů 4 a 6

Ligand z příkladu 4 (1,2 mg) se rozpustí v EtOH (0,2 ml) a přidá se eluát z ⁹⁹Mo/^99mTc generátoru (0,3 ml, 15 až 30 mCi). Přidá se nasycený roztok vínanu cínatého v salinickém roztoku (50 μΐ) a reakční směs se třepe a ponechá stát při teplotě místností 10 minut. Radiochemická čistota komplexu ligandu z příkladu 4 se stanoví jak je popsáno v příkladu 2 a bylo zjištěno, že je vyšší než 96 %.

Tc“^99m komplex ligandu z příkladu 6 byl připraven výše uvedeným způsobem a bylo zjištěno, že má radiochemickou čistotu vyšší než 90 %. Takto vytvořené komplexy ligandu z příkladů 4 a 6 jsou nazvány:

oxo/ll-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion dioximato/(3-)-N,N',N”,N”7-technecium ^_99mTv(V) a oxo/l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion dioximato/ (3-)-N,N',N'',N'/-technecium “^99mTc (V).

Příklad 6

Syntéza l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-diondioximu

-37CZ 295519 B6

OH OH

A. Příprava l-t-Boc-amino-3,4-Diana-7-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,5,5-trimethylheptan-6-on-oximu

Bezvodý uhličitan draselný (1,4 g, 10 mmol) a 3-chlor-3-methyl-2-nitroso-l-(2-nitro-lHimidazol-l-yl)butan (6,6 g, 50 mmol, příklad 4(D)) se přidá k míchanému roztoku N-(2-t-Bocaminoethyl)-l-methylhydrazinu (1,89 g, 20 mmol, příklad 4(B)) v suchém dichlormethanu (10 ml). Míchaná reakční směs se zahřívá pod refluxem, pod dusíkem po 24 h. Po ochlazení se reakční směs zfiltruje a zbytek se promyje dichlormethanem. Filtrát a promývacíroztok se spojí a rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce. Surový produkt se čistí rychlou sloupcovou chromatografií (silikagel: 6 :4 ethylacetát/hexany). Získá se polopevná látka, která se rekrystaluje z izopropyletheru a získá se produkt jako žlutá pevná látka. Výtěžek: 1,5 g (36 %), t.t. 141 až 142 °C.

Ή NMR (CDC1₃): δ 1,2 (s, 6H, C Me₂ methyly), 1,4 (s, 9H, t-Boc methyly), 2,15 (s, 3H, N-Me), 2,6 (šm, 2H, Me-N-CH₂), 3,1 (šm, 2H, t-Boc-NH-CH₂), 5,0 (šs, 1H, t-Boc-NH), 5,3 (s, 2H, imid-CH₂), 7,05 (s, imid-H), 7,1 (s, 1H, imid-H), 8,45 (šs, 1H, N-OH) a 9,9 (šs, 1H, N-OH). MS /M+H/⁺ 400.

Elementární analýza:

vypočteno 48,11 % C, 7,32 % H, 24,55 % N nalezeno 47,99 % C, 7,33 % H, 24,48 % N.

B. Příprava l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-penta-methyl-4,5,8-triazaundekan-2, 10-dion-dioxim l-t-Boc-amino-3,4-diaza-7-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,5,5-trimethylheptan-6-on-oxim (0,5 g, 1,25 mmol) se rozpustí v methanolu nasyceném plynným HC1 (5 ml). Roztok se nechá stát při teplotě místnosti 5 min, rozpouštědlo a těkavé materiály se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklá chmýřovitá pevná látka se zpracuje s methanolem nasyceným plynným aminiakem (10 ml). Rozpouštědlo a těkavé materiály se odstraní za sníženého tlaku při teplotě místnosti a výsledná pevná látka se suší za vakua při teplotě místnosti po 2 hodiny. Pevná látka se suspenduje v suchém acetonitrilu (5 ml) a přidá se uhličitan draselný (0,35 g, 2,5 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 5 min. Najednou se přidá 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,335 g,

2,5 mmol, příklad 1(C) a reakční směs se míchá 24 h při teplotě místnosti. Reakční směs se filtruje a izolované pevná látka; se promyje acetonitrilem. Spojené acetonirilové frakce se zahustí a získá se pasta, která se chromatografuje na rychlé silikagelové koloně. Elucí 9 : 1 dichlormethan-methanol se získá chmýřovitá bezbarvá pevná látka, která se krystaluje zacetonitrilu/izopropyletheru opakovaně tak dlouho, až se dosáhne konstantní teploty tání. Výtěžek: 0,061 g (12%), t.t. 156 až 158 °C. Ή NMR (DMSO-d₆): δ 1,6 (s, 6H, -CMe₂), 1,7 (s, 6H, -C-Me₂), 2,0 (s, 3H, -CH₃ -C=NOH), 2,8 (s, 3H, N-Me), 3,2 (2m, 4H, N-CH₂), 5,7 (s, 2H, -CH₂-imid), 7,5 (s, 1H, imid-H), 7,6 (s, 1H, imid-H), 11,5 (s, 1H, N-OH) a 11,7 (s, 1H, N-OH). HRMS /M+HÁ vypočteno pro C₁₆H₃iN₈O4: 399,2468, nalezeno 399,2477.

-38CZ 295519 B6

Elementární analýza pro C₁₆H₃₁C1N₈O4 vypočteno 43,83 % C, 7,01 % H, 25,55 % N, 8,09 % Cl nalezeno 43,99 % C, 7,14 % H, 25,39 % N, 7,6 % Cl.

Ethylanalog titulní sloučeniny, mající strukturu

může být připraven postupem analogickým výše popsanému.

Příklad 7

Syntéza 3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

Bromethylamin-hydrobromid (30,7 g, 0,15 mol) se přidá k míchané kaši uhličitanu sodného (16,0 g, 0,15 mol) v dioxinu-vodě (2:1, 300 ml) a směs se míchá při 0 °C 15 minut. K této směsi se přidá di-t-butyl-dikarbonát (33 g, 0,15 mol) a míchá se při 0 °C dále jednu hodinu, potom se míchá při teplotě místnosti 12 hodin. Dioxin-voda se odstraní na rotační odparce a zbytek se zpracuje s vodou (400 ml). Směs se extrahuje etherem. Organický extrakt se promyje vodou a suší (síran sodný). Ether se odpaří a v takto získaný olej se použije pro další stupeň bez dalšího čištění. Výtěžek: 31 g (92 %). Ή NMR (CDC1₃): δ 1,48 /s, 9H, C(CH₃)₃/, 3,42 (m, 2H, BrCH₂CH₂NHtBoc), 3,54 (m, 2H, BrCH₂CH₂NHtBoc), 5,08 (šs, 1H, NH).

B. Příprava N-(2-t-Boc-aminoethoxy)ftalimidu

Hydrid sodný (2,4 g, 0,1 mol) se po částech přidá k roztoku N-hydroxyftalimidu (16,13 g, 0,1 mol) v suchém DMF (200 ml) během 30 min. Tmavě červená sraženina se vytvoří a směs se míchá dalších 30 minut při teplotě místnosti. Přidá se l-brom-2-t-Boc-aminoethan (22,4 g, 0,1 mol) a směs se míchá při 70 °C 24 hodin. DMF se odstraní za vakua a zbytek se nalije do vody. Pevná látka, která se vytvoří se izoluje filtrací a suší na vzduchu. Surový produkt se rozpustí v ethylacetátu (200 ml) a roztok se nechá projít ložem neutrálního oxidu hlinitého pro

-39CZ 295519 B6 odstranění nezreagovaného N-hydroxyftalimidu (nezreagovaný N-hydroxyftalimid zůstane jako oranžový pruh na oxidu hlinitém). Lože oxidu hlinitého se promyje ethylacetátem-hexanem (6 : 4) až není eluován žádný materiál viditelný v UV, potom se spojené frakce ethylacetát-hexan odpaří na rotační odparce a získá se titulní produkt jako bílá pevná látka. Produkt se krystaluje z hexanu. Výtěžek: 15,0 g (50 %), t.t. 113 až 114 °C. 'H NMR (CDC1₃) δ 1,48 /s, 9H, C(CH₃)₃/, 3,42 (m, 2H, OCH₂CH₂-NHtBoc), 4,21 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 5,68 (šs, 1H, NH), 7,7 až 7,82 (m, 4H, ArH); MS: (M+H)⁺ =307.

Elementární analýza pro Ci5Hi₈N₂O₅ vypočteno 58,82 % C, 5,92 % H, 9,15 % N nalezeno 58,97 % C, 5,95 % H, 9,29 % N.

C. Příprava 2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethanu

Hydrazin (98 %, 2,1 g, 0,065 mol) se přidá k roztoku surového N-(2-t-Boc-aminoethoxy)ftalimidu (20 g, 0,065 mol) v ethanolu (50 ml) a směs se refluxuje 2 hodiny. Vytvořená pevná látka se odstraní filtrací a filtrát se odpaří na rotační odparce. Takto získaný zbytek se trituruje s ethylacetátem a výsledná sraženina se odstraní filtrací. Ethylacetátový roztok se odpaří na rotační odparce a získá se titulní produkt amin jako olej. Výtěžek 10 g (83 %).

Ή NMR (CDC1₃) δ 1,48 /s, 9H, C(CH₃₂)₃/, 3,42 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 4,21 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 5,68 (šs, 1H, NH), 7,7 až 7,82 (m, 4H, ArH).

D. Příprava 7-t-Boc-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu

Roztok 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (4,1 g, 0,03 mol, příklad 1 (C) se přidá k roztoku surového 2-(ammoxy)-l-t-Boc-aminoethanu (5,3 g, 0,03 mol) a diizopropylethylaminu (4,5 g, 0,035 mol) a směs se míchá při teplotě místnosti 6 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a hustý viskozní olej se zpracuje s vodou a extrahuje etherem (2 x 100 ml). Etherový roztok se suší nad síranem sodným a ether se odstraní na rotační odparce a získá se 8,2 g surového produktu jako hustého viskozního oleje. Tento se čistí na sloupci silikagelu. Elucí methylenchloridem: methanolem 95 : 5 se získá čistý titulní produkt jako hustý viskozní olej. Triturací s hexanem se získá produkt jako krystalická bílá pevná látka, která se krystaluje z hexanu. Výtěžek 4,2 g (44 %), t.t. 97 až 98 °C. Ή NMR (CDC1₃) δ 1,24 /s, 6H, C(CH₃)₃,/, 1,91 (s, 3H, CH₃), 3,32 (m, 2H, OCH₂CH2NHtBoc), 3,70 (m, 2H, OQHjCH.NHtBoc), 4,21 (m, 2H, OCH2CH₂NHtBoc), 5,68 (šs, 1H, NH), 7,7 -7,82 m, 4H, ArH).

D. Příprava 7-t-Boc-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu

Roztok 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutanu (4,1 g, 0,03 mol, příklad 1(C)) se přidá k roztoku surového 2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethanu (5,3 g, 0,03 mol) a diizopropylethylaminu (4,5 g, 0,035 mol) a směs se míchá při teplotě místnosti 6 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a hustý viskozní olej se zpracuje s vodou a extrahuje se etherem (2 x 100 ml). Etherový roztok se suší nad síranem sodným a ether se odstraní na rotační odparce a získá se 8,2 g surového produktu jako hustého viskozního oleje. Tento se čistí na sloupci silikagelu. Elucí methylenchloridem: methanolem 95 : 5 se získá čistý titulní produkt jako hustý viskozní olej. Triturací s hexanem se získá produkt jako krystalická pevná látka, která se krystaluje z hexanu. Výtěžek 4,2 g (44 %), t.t. 97 až 98 °C. Ή NMR (CDC1₃) δ 1,24 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,45 /s, 9H, C(CH₃)₃/, 1,91 (s, 3H, CH₃ ), 3,32 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 3,70 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 5,09 (šs, 1H, NHtBoc), 5,84 (šs, 1H, NH), 8,55 (šs, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺=276.

Elementární analýza pro C₁₂H₂₅N₃O₄ vypočteno 52,35 % C, 9,15 % H, 15,26 % N nalezeno 51,97 % C, 9,10 % Η, 15,05 % N.

-40CZ 295519 B6

E. Příprava 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu

Methanolický HC1 (10 ml) se přidá k roztoku 7-t-Boc-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu (2,75 g, 0,01 mol) v methanolu (20 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 15 min. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a zbytek se neutralizuje methanolickým amoniakem. Vytvořený chlorid amonný se odstraní filtrací a methanolický roztok se zahustí a získá se titulní produkt jako bílá pevná látka. Výtěžek 1,75 g. Volný amin se použije v dalším stupni bez dalšího čištění. Ή NMR (D₂O) δ 1,4 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,82 (s, 3H, CH₃), 3,29 (m, 2H, OCH₂CH₂NH₂), 4,25 (m, 2H, OCH₂CH₂NH₂).

F. Příprava 3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

3- Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (1,45 g, 0,011 mol, příklad 1(C)) se přidá ke směsi 7-amino-

4— aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu (1,75 g, 0,01 mol) a diizopropylethylaminu (1,4 g, 0,011 mol) v acetonitrilu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místností 6 hodin. Vytvořená pevná látka se izoluje filtrací a suší na vzduchu. Tato pevná látka se adsorbuje na silikagel (3,0 g) a směs se vloží na silikagelovou kolonu (plněno methylenchloridem : methanolem 9 : 1) a eluuje se směsí methylenchlorid : methanol 9:1 (150 ml) a potom methylenchlorid : methanol 9 : 2 (200 ml). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpaří se na rotační odparce. Pevná látka takto získaná se rekrystaluje z acetonitrilu a získá se titulní produkt. Výtěžek 0,8 g, t.t. 194 až 195 °C rozkl. Ή NMR (CDC1₃) δ 1,24 /s, 6H, C(CH₃)₂ /, 1,45 /s, 9H, C(CH₃)₃/, 1,91 (s, 3H, CH₃), 3,32 (m, 2H, OC₂CH2NHtBoc), 3,70 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 5,09 (šs, 1H, NHtBoc), 5,84 (šs, 1H, NH), 8,55 (šs, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺ 275.

Příklad 8

Syntéza 1 l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10dion-dioximu

I no₂

OH

3-Chlor-3-methyl-2-nitroso-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)butan (2,46 g, 0,01 mol, příklad 4 (D)) se přidá ke směsi 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu (1,75 g, 0,01 mol příklad 7(E)) a diizopropylethylaminu 1,4 g, 0,011 mol) v acetonitrilu (20 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 24 hodin. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a takto získaný hustý olej se chromatografuge přes silikagel (methylenchlorid : methanol 9 : 1). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpaří na rotační odparce. Výsledná pevná látka se rekrystaluje z acetonitrilu a získá se titulní produkt. Výtěžek 0,68 g (20 %).T.t. 112 až 33 °C rozkl. 'H NMR (DMSO-d₆) δ 1,10 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,18 (s, 6H, C(CH₃)₂), 1,74 (s, 3H, CH₃, 2,31 (m, 2H, OOfyCřfyNH), 3,44 (m, 2H, OCHjOfyNH), 5,22 (s, 2H, CH₂N< ), 7,10 a 7,31 (s, 2H, imiH), 10,42 a 11,4 (s, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺=386. HRMS: vypočt. (M+H)⁺= 386,2152⁺, nalezeno: (M+H)⁺ 386,2162.

Elementární analýza pro CiíH^N/Os, vypočteno 46,74 % C, 7,06 % H, 25,44 % N nalezeno 47,18 % C, 7,10 % H, 24,69 % N.

-41 CZ 295519 B6

Příklad 9

Syntéza l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10dion-dioximu

A. Příprava 7-t-Boc-amino-4~aza-3,3-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-5-oxaheptan-2-on-oximu

3-Chlor-3-methyl-2-nitroso-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)butan (2,46 g, 0,01 mol, příklad 4(D)) se přidá k roztoku 2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethanu (1,76 g, 0,01 mol, příklad 7(C)) a diizopropylethylaminu (1,32 g, 0,0102 mol) v acetonitrilu (30 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 24 h.

Acetonitril se odstraní na rotační odparce a takto získaný hustý viskozní olej se čistí sloupcovou chromatografíí (hexan-ethylacetát 7 : 3). UV viditelné frakce se spojí a odpaří na hustý olej, který tuhne stáním a získá se titulní produkt. Výtěžek 2,68 g (70 %). T.t. 97 až 98 °C, *H NMR (CDC1₃) δ 1,24 (s, 6H, C(CH₃)₂), 1,45 (s, 9H, C(CH₃)₃), 1,91 (s, 3H, CH₃), 3,22 (m, 2H, OCH CH NHtBoc), 3,51 (m, 2H, OCH₂CH₂NHtBoc), 4,70 (šs, 1 H, NhtBoc), 5,34 (s, 2H, CH₂<N), 7,10 a 7,31 (s, 2H, imiH), 8,66 (šs, 1H, NOH).

B. Příprava 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-5-oxaheptan-2on-oximu

Methanolický HC1 (10 ml) se přidá k roztoku 7-t-Boc-amino-4-aza-3,3-dimethyl-l-(2-nitrolH-imidazol-l-yl)-5-oxa-heptan-2-on-oximu (2,68 g, 0,007 mol) v methanolu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 15 min. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a zbytek se neutralizuje methanolickým aminoakem. Vytvořený chlorid amonný se odstraní filtrací a filtrát se zahustí a získá se titulní produkt jako bílá pevná látka. Výtěžek: 1,72 g (60 %). Tento produkt se použije v dalším stupni bez dalšího čištění.

Ή NMR (D₂O) 1,4 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 3,21 (m, 2H, OCH.CILNH,), 4,21 (m, 2H, OCHzC^NH,), 5,34 (s, 2H, CH₂<N), 7,10 a 7,31 (s, 2H, imiH).

C. Příprava l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetra-methyl-5-oxa-4,8-diazaundekan2,10-dion-dioxim

3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (1,45 g, 0,011 mol) se přidá ke směsi 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-5-oxaheptan-2-on-oximu (1,72 g, 0,006 mol) a diizopropylethylaminu (0,84 g, 0,0065 mol) v acetonitrilu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 12 h. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a zbytek se vloží na sloupec silikagelu (plněn methylenchloridem : methanolem, 9,5 : 0,5) a eluuje se směsí methylenchlorid : methanol 9:1. Frakce, obsahující produkt se spojí a odpaří na rotační odparce. Získaná pevná látka se

-42CZ 295519 B6 rekrystaluje z acetonitrilu a získá se titulní produkt. Výtěžek: 0,6 g (26 %), t.t. 149 až 50 °C rozkl. ’H NMR (DMSO-d₆) δ 1,16 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,18 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,68 (s, 3H, CH₃), 2,33 (m, 2H, OCH₂CH₂NH), 3,49 (m, 2H, OCH₂CH₂NH), 5,23 (s, 2H, CH₂N< ), 7,10 a 7,28 (s, 2H, imiH), 10,43 a 11,43 (s, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺=386.

Elementární analýza pro C₁₅H₂7N₇O5 vypočteno 46,74 % C, 7,06 % H, 25,44 % N nalezeno 47,46 % C, 7,11 % H, 25,00 % N.

Příklad 10

Syntéza 12-(2-nitro-lH-imidazoll-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-7-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioximu

A. Příprava 4-chlor-4-methyl-l-(2-nitro-l H-imidazol-l-yl )-3-nitrosopentanu

K ochlazenému (0 až 5 °C) roztoku 4—methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl )-3-pentenu (4,0 g, 0,02 mol) (příklad 11 (A), syntéza je také popsána v patentové přihlášce US 08 054 120, citované dříve) v izoamylnitritu (26 g, 30 ml, 0,22 mol) se přidá koncentrovaná kyselina chlorovodíková (3,5 ml, 0,035 mol) za míchání. Reakční směs se udržuje pod 5 °C během přidávání a míchá se při 5 °C další 2 hodiny. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a promyje studeným etherem : ethanolem (3 : 1, 150 ml) a suší. Výtěžek: 5,0 g (96 %). T.t. 105 až 107 °C. Ή NMR (DMSO) δ 1,72 /s, 6H, C(CH₃)₂)/, 2,94 (t, 2H, CIfyCH.Nc), 4,65 (t, 2H, CHsCHjNc), 7,16 a 7,54 (s, 2H, imiH), 11,42 (s, 1 H, NOH). MS: (M+H)⁺ = 261.

B. Příprava 8-t-Boc-amino-5-aza-4,4-dimethyl- l-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-6-oxaoktan-3-on-oximu

K suspenzi 4-chlor-4-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-nitrosopentanu (2,6 g, 0,01 mol) v acetonitrilu (50 ml) se přidá 2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethan (1,76 g, 0,01 mol, příklad 7(C)). K této směsi se přidá diizopropylethylamin (1,4 g, 0,011 mol) a směs se míchá 48 h. Čirý roztok takto získaný se zahustí a výsledný zelenavý hustý olej se čistí sloupcovou chromatografíí (CH₂C1₂: CH₃OH, 95 : 5). UV viditelné frakce se spojí a rozpouštědlo se odpaří a získá se žlutá pevná látka. Výtěžek: 3,12 g (78 %). Tato se rekrystaluje z hexanu-ethylacetátu a získá se titulní produkt, t.t. 117 až 118 °C. Ή NMR (CDC1₃) δ 1,22 (s, 9H, Boc-CH₃, 1,41 a 1,45 /s, 6H, C(CH₃)₂)/, 2,92 (m, 2H, OCHjCB-NH-Boc-)), 3,33 (m, 2H, CHjCH^NOH), 3,73 (m, 2H, OCHjCHzNH-Boc), 4,73 (t, 2H, CHjCH^NOH), 7,14 a 7,27 (s, 2H, imil-H), 8,78 (s, 1H, NH-Boc).

C. Příprava l-(2-nitro-lH-imidazoi-l-yl)-3,3,9,9,-tetra-methyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10dodekandion-dioximu

-43CZ 295519 B6

8-t-Boc-amino-5-aza-4,4-dimethyl- l-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-6-oxaoktan-3-on-oximu(3,0 g, 0,0075 mol) se zpracuje s methanolickým HC1 (10 ml) a míchá se při teplotě místnosti 2 h. K tomuto roztoku se přidá suchý ether (200 ml) a vytvořená bílá pevná látka se odfiltruje a suší se za vakua. Výtěžek; 2,12 g (72 %). Vytvořený hydrochlorid (2,12 g, 0,0056 mol) se neutralizu5 je methanolickým amoniakem. Získaný volný amin se suspenduje v acetonitrilu. Přidá se 3chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,78 g, 0,0058 mol) připravený podle metody Vassiana a kol., Inorg. Chem., 6, 2043-2046 (1967). Potom se přidá diizopropylethylamin (0,8 g, 0,0062 mol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 48 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a zbytek se rozpustí ve vodě (5 ml). Roztok se zalkalizuje (pH 8,5) přídavkem NaOH a extrahuje se 10 ethylacetátem (2 x 10 ml) a suší nad síranem sodným. Odstraněním ethylacetátu se získá hustý olej, který se suší za vakua. Hustý olej takto získaný se rozpustí v acetonitrilu a produkt začne z acetonitrilového roztoku krystalovat. Získaná pevná látka se dále rekrystaluje z acetonitrilu. Výtěžek: 0,8 g (36 %), t.t. 138 až 139 °C. Ή NMR (DMSO-d₆) δ 1,10 (s, 12H, C^Hjjz), 1,67 (s, 3H, CH₃), 2,34 (m, 2H,OCH₂CH2NH), 2,85 (m, 2H,CH₂CH2C=NOH), 3,53 (t, 2H ,ΟΟ^ΟΕΝ), 15 4,61 (t, 2H,CH₂CH₂C=NOH), 7,10 a 7,50 (s, 2H-imi-H), 10,41 a 10,78 (s, 2H, CH₂C=NOH).

Elementární analýza pro Ci₆H₂₉N₇O₅ vypočteno 48,11 % C, 7,32 % H, 24,55 % N nalezeno 48,53 % C, 7,39 % H, 24,65 % N.

Příklad 11

Syntéza 12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekan25 dion-dioximu

A. Příprava 4-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-pentenu

5-Brom-2-methyl-2-penten (15 g, 0,092 mol) se přidá k suspenzi 2-nitroimidazolu (10,4 g, 30 0,092 mol) a uhličitanu draselného (12,7 g, 0,092 mol) a refluxuje se 24 h. Aceton se odstraní na rotační odparce a zbytek se čistí sloupcovou chromatografíí. Výtěžek 6,2 g (34 %). ’H NMR (CDC1₃) δ 1,44 a 1,68 /s, 6H, =C(CH₃)₂/, 2,53 (m, t, 2H ClfyCH.CNc), 4,41 (t, 2H, CH2CH₂CN<), 5,06 (m, 1H, CH=0), 7,03 a 7,12 (s, 2H, imi H).

B. Příprava 12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetra-methyt-5-oxy-4,8-diaza-2,10dodekandion-dioximu

Ke směsi 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu (příklad 7(E), 0,875 g, 0,005 mol) a diizopropylethylaminu; (0,7 g, 0,0055 mol) se přidá 4-chlor-4-methyl-l-(2-nitro-lH-imida40 zol-l-yl)-3-nitrosopentan (příklad 10 (A), 1,3 g, 0,05 mol) a směs se míchá při teplotě místnosti

h. Vytvořená bílá pevná látka se odfiltruje a suší. Čistí se sloupcovou chromatografíí (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH) a potom se rekrystaluje z acetonitrilu. T.t. 122 až 123 °C. ^]H NMR (D₂O) δ 1,16 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,36 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 1,81 (s, 3H, CH₃), 2,87 (t, 2H, ClfyCH^N^, 3,11

-44CZ 295519 B6 (m, 2H, OCzCHsNH), 3,86 (m, 2H, OCH₂CH₂NH), 4,69 (t, 2H, CH₂CH2CN<), 7,10 a 7,36 (s, 2H, imiH).

Elementární analýza pro C16H29N7O5 vypočteno 48,11 % C, 7,32 % H, 24,55 % N nalezeno 48,47 % C, 7,39 % H, 24,12 % N

Příklad 12

Syntéza 1,13-bis(2-nitro-1 H-imidazol- l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-3-11tridekandion-dioximu

A. Příprava 2-(aminoxy)-l-aminoethan-dihydrochloridu

2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethan (1,23 g, 7 mmol, příklad 7(C)) se suspenduje v methanolu (2 ml). K této suspenzi se přidá methanolický HC1 (5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 2 h. Získá se bílá suspenze. Těkavá látka se odpaří na rotační odparce a získá se bílá pevná látka (1 g, 98 %). Ή NMR (D₂O) d 3,28 (q, 2H, CHzNH,), 4,28 (q, 2H, CHjONHz).

B. Příprava 1,13-bis(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-

3,11-tridekandion-dioximu

Dihydrochlorid 2-(aminoxy)-l-aminoethanu (1 g, 6,8 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (40 ml) a ochladí se na ledové lázni. Po malých částech se přidá diizopropylethylamin (4 g, 31 mmol). Potom se ledová lázeň odstraní a v jednom podílu se přidá 4-chlor-^4-methyl-l-(2nitro-1 H-imidazol-l-yl)-3-nitrosopentan (3,7 g, 14,3 mmol, příklad 10 (A)). Suspenze se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti 48 hodin a získá se čirý zelenavý roztok. Acetonitril se odpaří a získá se lepkavý gumovitý zbytek. TLC (silikagel, 10 % CH₃OH-CH₂C1₂) vykazuje tři skvrny s Rf = 0,4, 0,7 a 0,95 pod UV zářením. Sloupcová chromatografíe se provede na silikagelu za eluce 10 %CH₃OH-CH₂C1₂. Frakce sRf=0,4 se spojí a odpaří na rotační odparce. Výsledný gumovitý produkt se rozpustí v acetonitrilu (80 ml) a roztok se protřepe s nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného (80 ml). Organická vrstva se spojí, promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (3 x 20 ml) a suší se nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní na rotační odparce a diizopropylethylamin se odpaří za vakua. Získá se slabě žlutá pevná látka. Tato pevná látka se rekrystaluje z acetonitrilu-vody a získá se titulní produkt. Výtěžek: 1 g (28 %). HPLC (9 mikron C₁₈ kolona, eluční gradient od 0 % B do 60 % B během 60 minut, kde A je 0,01 % TFA ve vodě a B je 0,01 % TFA v acetonitrilu) vykazuje jeden pík při 27,8 min, s čistotou 99 %. t.t. 90 až 92 °C. MS: (M+H)⁺ = 525. Ή NMR (DMSO) d 1,07 (s, 12H, gem-di-CH3, 2,35 (b, 2H, CH2NH), 2,80 (m, 4H, CH^NOH), 3,51 (b, 2H, CH2ONH), 4,56 (b,4H, CH2- (2-nitroimidazol)), 6,55(b, 1H, NHOCH2), 7,15 a 7,53 (d, 4H, 2nitroimidazolyl-H), 10,74 a 10,81 (s, 2H, CH2C=NOH). ¹³C NMR (DMSO) d 22,99, 25,31, 25,55 a 25,73 (gem-di-CH3), 38,58 (CH₂CH₂NH), 40,42 a 41,61 /C(CH₃)₃/, 45,92 a 46,08

-45CZ 295519 B6 (CH₂C=NOH), 74,33 (OCH₂CH₂), 127,63 a 127,72 (CH₂CH₂-(2-nitroimidazol)), 127,76, 127,90, 144,62,144,70,158,36 a 158,91 (2-nitroimidazol-C.).

Elementární analýza pro C20H32N10O7 vypočteno 45,80 % C, 6,15 % H, 26,7 % N nalezeno 46,12 % C, 6,17 % H, 26,46 / N.

Příklad 13

Syntéza l-//2-nitro-tH-imidazol-l-yl)acetyl/amino/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-

^0H OH

NO2

A. Příprava 3-methyl-l-ftalinido-2-butenu

Ftalimid, draselná sůl (20,5 g, 0,11 mol) se suspenduje v suchém DMF (100 ml). K této suspenzi se přidá l-brom-3-methyl-2-buten (14,8 g, 0,1 mol) za míchání. Reakční směs se míchá pod dusíkem při 45 °C 24 h. TLC (silikagel, 30 % ethylacetát - hexan) vykazuje jednu hlavní viditelnou skvrnu v UV s Rf= 0,65. DMF se odstraní za vakua a zbytek se vyjme do vody (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 150 ml). Extrakty se spojí a suší se nad síranem sodným. Odpařením rozpouštědla se získá titulní produkt jako bílá pevná látka. Výtěžek: 21,0 g (98 %), t.t. 95 až 97 °C. MS: 233 (M+NH₄)⁺, 216 (Μ+Η)⁺· *H NMR (CDC1₃) δ 1,71 a 1,83 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 4,26 (d, J= 6,6 Hz, 2H, CH₂CH=), 5,30 (t, 1H, CH=), 7,67 až 7,86 (m, 4H, aromatický-H).

B. Příprava 3,3-dimethylallylamin-hydrochloridu

3-Methyl-l-ftalimido-2-buten (21 g, 0,0986 mol) se rozpustí v ethanolu (150 ml) a přidá se k tomuto roztoku hydrazin (3,8 g, 0,108 mol). Výsledný roztok se refluxuje lha získá se pevná látka, která se ochladí v ledové lázni, neutralizuje na pH=2 koncentrovanou HC1 a filtruje se. Pevná látka se trituruje s vodou (200 ml) a filtruje. Filtráty se spojí a odpaří se za vakua. Zbytek se krystaluje z ethanolu-etheru a získá se titulní produkt jako bílá pevná látka. Výtěžek 6 g (50 %). t.t. 178 až 182 °C, MS: 122 (M+H)⁺. ŮI NMR ((D₂O) δ 1,62 a 1,68 /s, 6H, =C(CH₃)₂/, 3,49 (d, J=16 Hz, 2H, CI^CH^, 5,18 (t, 1H, CH₂CH=).

C. Příprava ethyl-2- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetátu

Ke směsi 2-nitroimidazolu (8 g, 70 mmol) a suchého uhličitanu draselného (9,7 g, 70 mmol) v acetonu (100 ml) se přidá ethylbromacetát (11,6 g, 70 mmol). Suspenze se míchá pod atmosférou dusíku 48 h. TLC (silikagel, 40 % hexan-ethylacetát) vykazuje jedinou UV viditelnou skvrnu s Rf = 0,55. Suspenze se filtruje a pevná látka se promyje acetonem (3 x 50 ml). Filtrát a promývací podíly se spojí a odpaří se na rotační odparce, získá se hustý žlutý olej. Výtěžek: 13,9 (99 %). MS: 217 (M+NH₄)⁺, 200 (M+H)⁺. Ή NMR (CDC1₃) δ 1,30 (t, 3H, OCH₂CH₃), 4,26 (q, 2H, OCH₂CH₃), 5,12 (s, 2H, CífcCO), 7,09 a 7,21 (s, 2H, imidazolyl-H).

-46CZ 295519 B6

D. Příprava kyseliny 2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-octové

Ethyl-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetát se suspenduje v IN NaOH (100 ml) a míchá se při teplotě místnosti až do vzniku čirého roztoku. Roztok se ochladí na ledové lázni a neutralizuje se na pH 2, získá se tak bílá sraženina. Pevná látka se odfiltruje a promyje se vodou (3 x 25 ml). Výtěžek: 11,5 g (97 %). MS: 189 (M+NH₄)⁺, 172 (M+H)⁺, 170 (M-H)~. Ή NMR (DMSO-d₆) δ 5,22 /s, 2H, CH2-(2-nitro-imidazol)/, 7,22 a 7,65 (s, 2H, 2-nitroimidazolyl-H).

E. Příprava N-(3-methyl-2-butenyl)-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetamidu

Kyselina 2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)octová (8,6 g, 50 mmol) se rozpustí v DMF (50 ml). Po malých částech se k roztoku přidá karbonyldiimidazol /CDI/ (8,7 g, 60 mmol). Reakční směs se míchá pod dusíkem 15 min. Hydrochlorid 3,3-dimethylallylaminu se suspenduje v DMF (50 ml) a míchá se s NaHCO₃ (4,2 g, 50 mmol). Tato suspenze se přidá k CDI a 2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)octové kyselině v DMF roztoku. Směs se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti přes noc. TLC (silikagel, 10% methanol-dichlormethan) vykazuje jednu skvrnu sRf=0,5, indikující úplnou reakci. DMF se odpaří na rotační odparce a zbytek se trituruje s ledem-vodou (125 ml) a filtruje. Pevná látka se promyje studenou vodou (3 x 50 ml) a suší ve vakuu, získá se bílá pevná látka. Výtěžek 7,2 g (61 %), t.t. 174 až 176 °C. MS: 254 (M+NH₄)⁺, 238 (M+H)⁺. 'H NMR (DMSO-dg) δ 1,62 a 1,68 /s, 6H, =C(CH3)₂/, 3,68 (t, 2H, CH₂CH=), 5,08 (s, 2H, COC^imidazolyl), 5,14 (t, 1H. CH₂CH=), 7,19 a 7,62 (s, 2H, 2-nitroimidazolyl-H), 8,37 (t, 1H, HNCO).

Elementární analýza pro C₂₀H₃₂Nio0₇ vypočteno 50,41 % C, 5,92 % H, 23,52 % N nalezeno 50,67 % C, 5,87 % H, 23,38 % N.

F. Příprava 3-chlor-3-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl-acetamido)-2-butanon-oximu

N-(3-Methyl-2-butenyl)-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-acetamid (3,4 g, 14,3 mmol) se rozpustí v izoamylnitritu (50 ml) při teplotě místnosti. Roztok se ochladí na 0 až 5 °C v lázni ledsůl. Přikape se koncentrovaná HC1 (1,39 ml). Reakční teplota se udržuje mezi 0 a 5 °C během přidávání HC1. Reakční směs se míchá v lázni led-sůl 1 h, filtruje a promyje se 1 : 2 ethanoletherem a získá se bílá pevná látka. Výtěžek 3,7 g (85 %). t.t. 154 až 160 °C (rozkl.). 'HNMR (DMSO-d₆) δ 1,74 a 1,88 /s, 6H, CÍCH^)/, 4,17 (q, 2H, HNCH₂CH=), 5,08 (s, 2H, COCH₂imidazolyl), 5,14 (t, 1H, CH₂CH=), 7,18 a 7,63, (s, 2H, 2-nitroimidazolyl-H), 8,51 (t, 1H, HNCO), 11,60 (b, 1H, HON=C).

G. Příprava 3-(3-N-t-butyloxykarbonylpropyl-l-oxa)amino-3-methyl-l-(2-nitro-lHimidazol-l-yl-acetamido)-2-butanon-oximu

2-(Aminoxy)-l-t-Boc-aminoethan (0,28 g, 1,6 mmol, příklad 7(C)) se smísí se 3-chlor-3methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl-acetamido)-2-butanon-oximem (0,48g, 1,6 mmol) v acetonitrilu (5 ml). K suspenzi se přidá N,N-diizopropylethylamin (0,21 g, 1,6 mmol). Reakční směs se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti 48 hodin a získá se čirý roztok. Odstraní se acetonitril a zbytek se suspenduje ve vodě (10 ml) a extrahuje ethylacetátem (3x15 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným a odpaří se do sucha. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, 10 % methanol-dichlormethan). Výtěžek: 0,37 g (53 %). MS; 444 (M+H)⁺. Ή NMR (CDClj) δ 1,22 /s, 6H, C(CH₃)₂)/, 1,48 (s, 9H, boc-CHj), 3,28 (b, 2H, NHCHzCHjO), 3,70 (t, 2H, NHCII₂CH₂O), 4,12 (t, 2H, N^CHzNHCO), 6,04 (b, 1H, HNboc), 7,15 (d, 2H, imidazolyl-H), 7,42 (b, 1H, HNOCH₂), 7,84 (b, 1H, HNCO), 10,04 (b, 1H, HON=C).

H. Příprava l-//2-nitro-l H-imidazol-l-yl)acetyl/amino/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8diaza-2,10-undekandion-dioximu

-47CZ 295519 B6

3-(3-N-t-Butyloxykarbonylpropyl-l-oxa)amino-3-methyl—1-(2-nitro-l H-imi dazol-lacetamido)-2-butanon-oxim (0,37 g, 0,84 mmol) se rozpustí v methanolu (2 ml). Přidá se nasycený HCl-methanol (5 ml) k roztoku a směs se míchá při teplotě místnosti 1 h. Těkavé látky se odstraní na rotační odparce a získá se bílá pevná látka. *H NMR (D₂O) δ 1,42 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 3,26 (t, 2H, NHCH₂CH₂O), 4,02 (s, 2H,N=CCH2NHCO), 4,28 (t, 2H, NHCH₂CH₂O), 5,10 (s, 2H, COCHz).

Tato pevné látka se suspenduje v acetonitrilu (4 ml). K této suspenzi se přidá 3-chlor-3-methyl2-nitrosobutan (0,115 g, 0,84 mmol, příklad 10 (C)) a N,N-diizopropylethylamin (0,22 g, 1,68 mmol). Suspenze se míchá přes noc pod atmosférou dusíku při 45 °C a získá se čirý roztok. Acetonitril se odstraní na rotační odparce. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, 20 % methanol-dichlormethan) a frakce s Rf = 0,3 se spojí. Po odstranění rozpouštědla se zbylý hustý olej rekrystaluje z acetonitrilu a získá se slabě žlutý olej. Výtěžek: 0,15 g (43%). t.t. 148 až 150 °C. HPLC (8 mikron C]₈ kolona, lineární gradient s 1 % za min zvýšení rozpouštědla B) vykazuje pík s retenční dobou 22,5 min. Čistota tohoto píku je 97,3 % při 230 nm a 99,4 při 254 nm. Rozpouštědlo A: 0,01 % TFA ve vodě, B: 0,01 % TFA v acetonitrilu. MS: 443. (M+H)⁺. Ή NMR (DMSO-de), δ 1,12 /s, 12H, C(CH₃)₂)/, 1,70 (s, 3H, N=CCH₃), 2,35 (b, 1H, NHCH₂CH₂O), 3,52 (t, 2H, NHCH₂CH₂O), 3,98 (d, 2H,N=CCH2NHCO), 4,14 (b, 2H, NHCHzCIhO), 5,10 (s, 2H, COCH₂), 6,46 (b, 1H, CH₂CH₂ONH), 7,14 a 7,60 (s, 2H-imidazolylH), 10,45 a 11,06 (s, 2H, NOH).

Elementární analýza pro Ci₇H₃₀N₈O₆ vypočteno 46,15 % C, 6,83 % H, 25,32 % N nalezeno 46,11 % C, 6,85 % H, 25,38 % N.

Příklad 14

Syntéza l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa4,8-diaza-2,10-undekandion- dioximu

A. Příprava 3,3-dimethylallylglycidyl-etheru

K roztoku 3,3-dimethylallylalkohol (17,3 g, 20,5 ml, 0,2 mol) v suchém tetrahydrofuranu (THF) (200 ml) se přidá hydrid sodný (4,8 g, 0,2 mol) po částech a směs se míchá při teplotě místnosti 1 h. Přikape se epibromhydrin (27,4 g, 17,12 ml, 0,2 mol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 24 h. THF se odstraní na rotační odparce a zbytek se vyjme do etheru a filtruje. Etherový roztok se zahustí na rotační odparce a hnědý olej se destiluje za vakua, t.t. 93 až 94 °C/10 mm. Výtěžek: 17,2 g (60,5 %). Ή NMR (CDC1₃,) δ 1,68 a 1,75 (s, 6H, CH₃), 2,61 a 2,88 (dd, 2H, oxiran CH₂), 3,17 (m, 1H, oxiran CH), 3,38 a 3,7 (m, 2H, CH.OCHjCH), 4,05 (m, 2H, CH₂OCH₂CH), 5,35 (m, 1H, >C=CH).

B. Příprava l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl-propyldimethylalyl-etheru

-48CZ 295519 B6

Ke směsi 3,3-dimeťhylalylglycidyleťheru (9,0 g, 0,063 mol) a 2-nitroimidazolu (7,2 g, 0,063 mol) v ethanolu (75 ml) se přidá uhličitan draselný (0,75 g, 0,005 mol) a směs se refluxuje na olejové lázni 4 h. Reakční směs se ochladí a nalije se do vody. Vytvořená žlutá pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje se z vodného ethanolu. Výtěžek: 12,2 g (76 %), t.t. 72 až 73 °C. 'H NMR (CDC1₃) δ 1 ,62 a 1,78 (s, 6H, CH₃), 2,78 (d, 1H, OH), 3,4 a 3,58 (m, 2H, CHOHCH₂O), 4,0 (d, 1H, CHOH), 4,40 a 4,68 (m, 2H, CHOHCH₂N), 5,35 (m, 1H,>C=CH), 7,1 a 7,3 (s, 2H, imiH).

Elementární analýza pro Ci₈H₁₇N3O₄ vypočteno 51,76 % C, 7,71 % H, 16,46 % N nalezeno 51,60 % C, 6,48 % Η, 16,42 % N.

C. Příprava 3-chlor-l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3-methyl-2nitrosobutanu

K ochlazené (0 až 5 °C) kaši l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propyl-dimethylallyletheru (7,0 g, 0,0275 mol) v izoamylnitritu (43 g, 50 ml, 0,042 mol) se přidá koncentrovaná kyselina chlorovodíková (2,5 ml, 0,03 mol) za míchání. Reakční směs se udržuje pod 5 °C během přidávání a míchá se při 5 °C po další 2 h. Vytvořená pevná látka se míchá se studeným etheremethanolem (3 : 1, 150 ml), filtruje a suší se za vakua. Výtěžek: 5,8 g (67 %), t.t. 116 až 117 °C rozkl.

‘HNMR (DMSO) δ 1,55 a 1,62 (s, 6H, CH₃), 3,35 (m, 4H, CH₂OCH₂CHOH, 3,82 (m, 1H, CHOH), 4,1-4,52 (m, 2H,CHOHCH2N<), 5,3 (m, 1H, CHOH), 6,0 (dd, 1H, CHNO), 7,15 a 7,42 (s, 2H, imiH).

D. Příprava 3-/2-N-t-Boc-aminoethoxy/amino-1 -/2-hydroxy-3-(2-nitro-1 H-imidazol-1yl)propoxy/-3-methyl-2-butanon- oximu

Roztok 2-(aminoxy)-l-t-Boc-aminoethanu (1,76 g, 0,01 mol, příklad 7(C)) a diizopropylethylaminu (1,55 g, 0,012 mol) v acetonitrilu (10 ml) se přidá ke kaši 3-chlor-l-/2- hydroxy-3-(2nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3-methyl-2-nitrosobutanu (3,2 g) v acetonitrilu (50 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 48 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získaný hustý viskozní olej se chromatografuje přes silikagel (hexan-ethylacetát 1 :9). UV-viditelné frakce se spojí a odpařením se získá titulní produkt jako hustý olej. Tento se použije v dalším stupni bez dalšího čištění. ’H NMR (CDC1₃) δ 1,29 (s, 6H, CH₃), 1,41 (s, 9H, t-Boc), 3,62 (m,4H, CfLOCHz), 4,15 (NFICH₂CH₂O a CHOH), 5,0 (šs, 1H, NHBoc), 7,1 a 7,27 (s, 2H, imiH), 8,82 (s, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺ = 461.

E. Příprava l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5oxa-4,8-Diana-2,10-undekandion-dioximu

3-/2-N-t-Boc-aminoethoxy/amino-l-2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3methyl-2-butanon-oxim (3,8 g) se zpracuje s methanolickým HC1 (20,0 ml) a míchá se při teplotě místnosti 2 h. K reakční směsi se přidá suchý ether 250 ml) a vytvořená hydrochloridová sůl se odfiltruje a suší, výtěžek 3,9 g.

Diizopropylethylamin (3,9 g, 0,03 mol) se přidá ke kaši výše uvedené hydrochloridové soli (3,9 g, 0,008 mol) suspendované v acetonitrilu (50 ml) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 30 min. K acetonitrilovému roztoku se přidá 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (1,35 g, 0,01 mol, příklad 10(C)) a směs se míchá při teplotě místnosti 36 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a zbytek se zalkalizuje roztokem uhličitanu draselného. Získá se světle zelený olej, který se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 8 : 2). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá olej, který se suší za vakua a získá se světle žlutý olej. Výtěžek: 1,12 g (30 %). Získaný olej se rozpustí v acetonitrilu a ponechá při teplotě místnosti 4 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje z acetonitrilu. Výtěžek: 0,87 g (24 %), t.t. 156 až 157 °C. 'H NMR (DMSO) δ 1,08 a 1,18 /s, 12H, C(CH₃)₂)/, 1,67 (s, 3H, CH₃),

-49CZ 295519 B6

2,32 (m, 2H, NHCH₂CH₂ONH), 3,3-3,35 (m, 4H, CPLOCIfyCHOH), 3,9 (m, 2H, OCH₂CHOH), 4,22 a 4,6 (m, 3H, CHOHCH₂N< ), 7,15 a 7,56 (s, 2H, imiH), 10,4 a 10,93 (s, 2H, NOH).

Elementární analýza pro υ₈Η₃₃Ν₇07 vypočteno 47,05 % C, 7,24 % H, 21,34 % N nalezeno 47,28 % C, 7,24 % H, 21,48 % N.

Příklad 15

Příprava ^99mTc komplexu (metoda 1)

Následující obecný postup se použije pro přípravu čtyř ^99mTc komplexů uvedených dále:

^99mTc komplex připravený použitím ligandu z příkladu 7, ^99mTc komplex připravený použitím ligandu z příkladu 8, ^99mTc komplex připravený použitím ligandu z příkladu 9 a ^99mTckomplex připravený použitím ligandu zpříkladu 14.

Ligand (2—4 mg) se rozpustí v ethanolu (0,1 až 0,2 ml) a 0,9 % roztoku chloridu sodného (1 až 2 mil) v 5 ml skleněné lahvičce. Přidá se pufr hydrogenuhličitanu sodného (0,lM NaHCO₃, 0,5 ml) a eluant z ⁹⁹Mo/^99mTc generátoru (0,2 až 0,5 ml). Lahvička se uzavře a přidá se nasycený roztok vínanu cínatého v salinickém roztoku (50 μΐ). Lahvička se třepe pro smíchání činidel a ponechá se stát při teplotě místnosti. Radiochemická čistota (RCP) ^99mTc komplexů se měří HPLC s reverzní fází (vysokotlakové kapalinové chromatografie) za použití 10 mikron, 15 cm, kolony PRP-1 s reverzní fází (Hamilton), která byla eluována 65/35 acetonitrilem/Ο,ΙΜ NH₄OAc (pH 4,6). Všechny komplexy technecia mají RCP větší než 90 % po 3 min, s výjimkou komplexu ligandu z příkladu 9 (Tc-5-oxa-PnAO-l-2-nitro) (který má počáteční RCP 82-89 %) a komplexu ligandu z příkladu 8 (Tc-5-oxa-l 1-2-nitro), který mé počáteční RCP 82 až 96 %.

Takto vytvořené komplexy se jmenují:

oxo/3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa—4,8-diaza-2,10-undekan-dion-di-oximato/(3-)-N,N',N,N7technecium-^99mTc(V), oxo//ll-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekadiondioximato/(3-)“N,N',N,N” 7-technecium-^99mTc(V), oxo//l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandiondioximato/(3-)-N,N',N”,N7technecium-^99mTc (V), a oxo//l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8diaza-2,10-undekandion-dioximato/(3-)-N, N',N'',N7technecium-^99mTc (V).

Příklad 16

Příprava ^99mTc komplexu (metoda 2)

Následující obecný postup se použije pro přípravu šesti ^99mTc komplexů uvedených dále: ^99mTc komplex připravena z ligandu z příkladu 9, ^99mTc komplex připravený z ligandu zpříkladu 10, ^99mTc komplex připravený z ligandu z příkladu 11,

-50CZ 295519 B6 ^99mTc komplex připravený z ligandu z příkladu 12, ^99mTc komplex připravený z ligandu z příkladu 13 a ^99mTc komplex připravený z ligandu z příkladu 14.

Ligand (2 až 4 mg) se rozpustí v O,1M HC1 (0,1 ml) a 0,9% roztoku chloridu sodného (1,0 ml) v 5 ml skleněné lahvičce a přidá se 0,lM pufr hydrogenuhličitanu sodného (0,5 ml), salinický roztok a eluát ⁹⁹Mo/^99mTc generátoru (celkový objem salinického roztoku/objem eluátu = 0,5 ml). Lahvička se uzavře a přidá se nasycený roztok vínanu cínatého v salinickém roztoku (50 μΐ). Lahvička se třepe pro promísení činidel a ponechá se stát při teplotě místností. Radiochemická čistota (RCP) ^99mTc komplexů byla měřena HPLC s reverzní fází (vysokotlakové kapalinové chromatografie), za použití 10 mikron, 15 cm kolony PRP-1 s reverzní fází (Hamilton), která byla eluována 65/35 acetonitril/Ο,ΙΜ NH₄OAc (pH 4,6). Všechny techneciové komplexy měly RCP větší než 90 % během 3 min.

Takto vytvořené komplexy se nazývají:

oxo/l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-diaza-2,10-undekandion-dioximato/(3-)-N,N',N'',N7technecium-^mTc (V), oxo//12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-7-oxa—4,8-diaza-2,10-dodekandiondioximato/(3-)-N,N',N' ',N'' 7technecium-^99mTc (V), oxo//12-/2-nitro-1 H-imidazol-1 -y 1/- 3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-diaza-2,10-dodekandion-dioximato/(3-)-N,N',N' ',N'' 7technecium-^mTc (V), oxo//1,13-bis(2-nitro-l H-imidazol-l-yl/-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-3,11-tridekandion-dioximato/(3-)-N,N ',N ,N 7technecium (V)-^99mT c.

oxo//l-//(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetyl/amino/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10undekandion-dioximato/-(3-)-N,N^,,N ”,N 7technecium-^99mTc a oxo//1 -/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-1 -yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8diaza-2,10-undekandion-dioximato/(3-)-N,N',N' ',N'' 7technecium (V)-^99mTc.

Příklad 17

Příprava oxo/l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetra-methyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato/(3-)-N,N',N”,N''7technecium-^mTc (V)

K míchanému roztoku (tetrabutylamonium) /TcOCl₄/ (43,8 mg, 0,088 mmol) v 1 ml methanolu se přidá 50 μΐ ethylenglykolu a 0,54 ml 0,75 M roztoku octanu sodného v methanolu. Přidá se ligand z příkladu 9 (33,8 mg, 0,088 mmol) rozpuštěný v methanolu (7,5 ml). Výsledný jasně červenooranžový roztok se odpaří na červený olej pod proudem dusíku, znovu se rozpustí v 5 ml chloroformu a filtrací se odstraní bílé pevné látky. Roztok se odpaří do sucha na rotační odparce, znovu se rozpustí v dichlormethanu a čistí se na sloupci silikagelu,který byl kondicionován 90 : 10 CH₂C1₂: MeOH a eluuje CH₂C1₂. První červený pruh se odebere, zpracuje se stejným objemem hexanu a ponechá vyschnout. Výsledná červenooranžová pevná krystalická látka se čistí pomocí HPLC.

-51 CZ 295519 B6

Příklad 18

Příprava oxo//12-/2-nitro-lH-imidazol-l-yl/-3,3,9,9-tetramethyl-7-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioximato/(3-)-N,N',N,N”7technecium-^99mTc (V)

K míchanému roztoku /tetrabutalamomurn/TcOCl₄ (73,7 mg, 0,148 mol) rozpuštěnému v 1,0 ml methanolu se přidá 150 μΐ ethylenglykolu (21,9 mmol) a potom 1,5 ml 0,75M octanu sodného v methanolu. Ligand z příkladu 10 (70,2 mg, 0,176 mmol) se přidá, což vyvolá změnu na čirou červenooranžovou barvu. Po 15 min se reakční směs odtáhne na viskozní, červenooranžový, opaktní olej na rotační odparce, znovu se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje se vodou (2x10 ml) pro odstranění ve vodě rozpustných bílých pevných látek. Dichlormethanový roztok se suší nad bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří dosucha na rotační odparce. Jasně červený zbytek se znovu rozpustí v dichlormethanu (1,0 ml) a čistí se na sloupci silikagelu, který byl kondicionován 50 : 50 CH₂Cl₂/acetonitrilem. Červený pruh se odebere, filtruje a odpaří dosucha na rotační odparce. Produkt se znovu rozpustí v 0,75 ml dichlormethanu a rekrystaluje přídavkem hexanu (2,5 ml). Jasně červená krystalická pevná látka se izoluje odsátím na filtru, promyje se hexanem a suší ve vakuu. Titulní produkt takto získaný (40,0 mg, 44 % výtěžek) byl podle HPLC čistý.

Elementární analýza pro Ci₆H₂5N₇O₆Tc(.1/2 H₂O vypočteno 37,00 % C, 5,24 % H, 18,88 % N nalezeno 37,03 % C, 5,13 % H, 18,60 % N.

Příklad 19

Syntéza l-hydroxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-7-oxa—4,8-diazadodekan-2,10-dion-diodami

NO₂

A. Příprava 3-chlor-l-hydroxy-3-methyl-2-butanon-oximu

3-Methyl-2-buten-l-ol (8,6 g, 100 mmol) se smísí s izoamylnitritem (28 g, 240 mmol) při teplotě místnosti. Roztok se ochladí na-5 °C v lázni led-sůl a přikape se koncentrované HC1 (11 ml, 100 mmol). Reakční teplota se během přidávání udržuje mezi -5 a 0 °C. Reakční směs se míchá v lázni led-sůl 60 min, filtruje a promyje studenými etherem a získá se bílá pevná látka. Výtěžek 4,5 g (30 %). t.t. 114 až 115 °C. MS (m/z): 305 (2M+2+H)⁺, 303 (2M+H)⁺, 154 (M+2+H)⁺, 152 (M+H)⁺. Ή NMR (DMSO-d6): δ 1,56 (d) a 1,80 (s) /6H, (CH3)2)CCHNO a (CH^C^NOH), 4,10 (m) a 4,26 (s) /2H, HOCH2CH(NO) a HOCJLCTNOH/, 5,2 (b, 1H, HOCH2), 5,93; (t), a 11,28 (b), /1H, CHN=O a C=NOH/. ¹³C (DMSO-d6) δ 29,9 (CH₃)₂)CCHNO/, 31,5 /(CH₃)₂CC=NOH/, 53,7 /(CH₃/₂CCHNO/, 59,7 /(CH₃/₂CC=NOH/, 69,4 /HOCH₂CH(NO)/, 74,1 /HOCH₂C=NOH/, 160,2 /CHN=O a C=NOH/.

Elementární analýza pro C5H10NCIO vypočteno 39,62 % C, 6,65 % H, 9,24 % N, 23,39 % Cl, 21,11 % O

-52CZ 295519 B6 nalezeno 39,73 % C, 6,87 % H, 9,15 % N, 23,43 % Cl.

B. Příprava 1 -hydroxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-7-oxa-4,8diazadodekan-2,10-dion-dioximu

8-t-Boc-amino-5-aza-4,4-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-oxaoktan-3-on-oxim (příklad 10(B), 1,2 g, 3 mmol) se míchá s methanolickým HC1 (10 ml) při teplotě místnosti lha získá se bílá suspenze. Těkavé látky se odpaří na rotační odparce a potom se za vakua získá 8-amino-5-aza-4,4-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-oxa-oktan-3-on-oxim-hydrochlorid jako bílá pevná látka.

’H NMR (D₂O) δ 1,34 /s, 6H, C(CH₃)₂/, 2,87 (t, 2H, NHCJLCHzO), 3,27 (t, 2H, CHzCHa-nitroimidazolyl), 4,28 (t, 2H, NHCH₂CH₂O), 4,68 (t, 2H, CH₂CH2-nitroimidazolyl), 7,07 a 7,34 (s, 2H, nitroimidazolyl-H).

8-Amino-5-aza-4,4-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-oxaoktan-3-on-oxim-hydrochlorid se suspenduje v acetonitrilu (20 ml) a ochladí se na ledové lázni na 15 min. K ochlazené suspenzi se přidá N,N-diizopropylethylamin (2,0 g, 15,5 mmol) a potom 3-chlor-l-hydroxy-3methyl-2-butanon-oxim (0,54 g, 3,6 mmol) a směs se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti 4 h a získá se čirý roztok. Acetonitril se odpaří na rotační odparce. TLC (silikagel, 5 % methanol-ethylacetát) surového produktu ukazuje jednu hlavní skvrnu s Rf= 0,5). HPLC vykazuje jeden hlavní pík s retenčním časem 22,1 min. Zbytek se zpracuje s roztokem uhličitanu draselného. Bazická reakční směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 45 ml) a organická vrstva se suší a odpaří na rotační odparce. Získaný gumovitý zbytek se aplikuje na kolonu (silikagel, ethylacetát) a eluuje ethylacetátem (400 ml) a 5 % methanol-ethylacetátem. Frakce s produktem se spojí a odpařením se získá hustý olej. TLC (silikagel, 5 % methanol-ethylacetát) produktu vykazuje jednu skvrnu se chvostem. Tento olej se déle čistí rekrystalizací z acetonitrilu a získá se bílá pevná látka, 0,57 g (47,5 %), t.t. 127 až 129 °C. HRMS vypočteno pro Ci₆H₃oN₇0₆: (M+H)⁺ = 416,2255. Nalezeno: 416,2258.

Ή NMR (DMSO-d₆): δ 1,11 /s, 6H, CH₂HN(CH₃)₂/, 1,24 (s, 6H, OHNC(CH₃)₂), 2,82 (t, 2H, NFICH₂CH₂O), 3,34 (t, 2H, CHaCHj-nitroimidazolyl), 3,66 (t, 2H,NHCH₂CH2O), 4,34 (s, 2H, CH₂OH), 4,58 (t, 2H, CH₂CH₂-nitroimidazolyl), 6,56 (s, 1H, CH₂CH₂ONH), 7,14 a 7,54 (s, 2H-imidazolyl-H), 10,78 (s, 2H, HON=C).

Elementární analýza pro Ci6H₂₉N₇O₆ vypočteno 46,26 % C, 7,04 % H, 23,46 % N, 23,11 % O nalezeno 46,16 % C, 7,01 % H, 23,29 % N.

Příklad 20

Syntéza 3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-5-oxa-4-,8-diazazundekan-2,10-dion-dioximu

-53CZ 295519 B6

A. Příprava l-(3-ftalimido-2-hydroxypropyl)-2-nitroimidazolu

K roztoku N-(2,3-epoxypropyl)-fitalimidu (obchodně dostupný, 20,3 g, 0,1 mol) v ethanolu (200 ml) se přidá 2-nitroimidazol (11,3 g, 0,1 mol) a uhličitan draselný (1,2 g) a reakční směs se refluxuje 6 h. Reakční směs se ochladí a nalije se do vody (700 ml) a vytvořená žlutá pevná látka se filtruje a suší. Výtěžek 28,2 g (89 %). Rekrystaluje se z methanolu. t.t., 211 až 214 °C.

*H NMR (DMSO) δ 3,62 (m, 4H, PhthNCH₂CHOH), 4,08 (m, 1H, CHOH), 4,32 a 4,63 (m, 2H, CHOHCH₂N<), 5,54 (d, 1H, CHOH), 7,15 a 7,68 (s, 2H, imiH), 7,8 (m, 4H, ArH), MS: (M+H)⁺ = 317⁺.

Elementární analýza pro C₁₄H_]2N₄O₅ vypočteno 53,17 % C, 3,82 % H, 17,71 % N nalezeno 5 3,11 % C, 3,76 % Η, 17,49 % N.

B. Příprava l-(3-N-t-Boc-amino-2-hydroxypropyl)-2-nitro- imidazolu

K suspenzi l-(3-ftalimido-2-hydroxypropyl)-2-nitroimidazolu (28,0 g, 0,09 mol) v methanolu (250 ml) se přidá hydrazin (3,2 g, 0,1 mol) a směs se refluxuje 6 h. Reakční směs se ochladí a methanol se odstraní na rotační odparce. Směs aminohydrinu a hydrazidu se rozpustí v roztoku uhličitanu sodného (21,2 g, 0,2 mol) ve vodě (200 ml). K této směsi se přidá dioxan (400 ml) a ochladí se na 0 °C. K této směsi se přidá di-terciarybutyl-dikarbonát (21,8 g, 0,1 mol) a míchá se při 0 °C 1 h a při teplotě místnosti 12 h. Dioxan-voda se odstraní na rotační odparce a zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x 150 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou, suší (síran sodný) a odpařením na rotační odparce se získá titulní sloučenina jako žlutá pevná látka. Výtěžek 19,2 g (76 %). Tato se rekrystaluje z hexanu-ethylacetátu.

t.t.. 128 až 129 °C.

’ll NMR (DMSO) δ 1,39 (s, 9H, NHBoc), 2,92 (m, 2H, BocHNCIfyCHOH), 3,75 (m, 1H, CHOH), 4,14 a 4,55 (m, 2H, CHOHCH₂N<) 5,25 (d, 1H, CHOH), 6,94 (m, 1H, BocHN), 7,15 a 7,59 (s, 2H, imiH).

Elementámií analýza pro C11H18N4O5 vypočteno 46,15 % C, 6,34 % H, 19,57 % N nalezeno 46,37 % C, 6,41 % H, 19,39 % N.

C. Příprava l-(3-N-t-Boc-amino-2-ftalimidooxypropyl)-2-nitroimidazolu

-54CZ 295519 B6

N-Hydroxyftalimid (3,36 g, 0,02 mol), l-(3-N-t-Boc-amino-2-hydroxypropyl)-2-nitroimidazol a trifenylfosfín (5,25 g, 0,02 mol) se rozpustí v THF (100 ml) a zpracuje s diethylazodikarboxylátem (3,83 g, 0,022 mol). Reakční směs se stane tmavočervenou a barva zmizí po několika málo minutách. Během přidávání diethylazodikarboxylátu byla pozorována slabě exothermní reakce. Reakční směs se mícho při teplotě místnosti po 24 h a na rotační odparce se odpaří dosucha. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití hexanu-ethylacetátu (7:3, 6:4) jako elučního činidla. Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina jako pěnovitá pevná látka, výtěžek 2,8 g.

MS: (M+H)⁺ = 432⁺

D. Příprava 2-aminoxy-3-(2-nitro-l H-imidazol-1 -y 1)-1 -aminopropan-dihydrochloridu

Hydrazin (98%, 0,5 g, 0,016 mol) se přidá k roztoku l-(3-N-t-Boc-amino-2-ftalimidooxypropyl)-2-nitroimidazolu (3,31 g, 0,01 mol) v ethanolu (50 ml) a směs se refluxuje 2 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a filtrát se odpaří na rotační odparce. Získaný hustý olej se trituruje s ethylacetátem a výsledná sraženina se odstraní filtrací. Ethylacetátový roztok se odpaří na rotační odparce a získá se 2-aminoxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-t-Boc-aminopropan jako olej. Výtěžek 2,3 g; Ή NMR (CDC1₃) δ 1,46 (s, 9H, NHBoc), 3,40 (m, 2H, BocHNCHzCHO), 3,82 (m, 1H, CHONH₂), 4,4 a 4,62 (m, 2H, CHOHCHJSK), 4,9 (šs, 1H, NHtBoc), 5,2 (šs, 2H, NH₂), 7,15 a 7,27 (s, 2H, imiH).

Methanolický HC1 (10 ml) se přidá k roztoku 2-aminoxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-tBoc-aminopropanu (3,01 g, 0,1 mol) v methanolu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 20 min. K methanolickému roztoku se přidá ether (150 ml) a 2-aminoxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-aminopropan-dihydrochlorid, který se vytvoří, se odfiltruje a suší se za vakua. Použije se v dalším stupni bez dalšího čistění. Výtěžek 2,6 g (95 %). MS: (M+H)⁺ = 202.

E. Příprava 3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim

3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (1,45 g, 0,011 mol) se přidá ke směsi 2-aminoxy-3-(2-nitrolH-imidazol--l-yl)-l-aminopropan-dihydrochloridu (1,36 g, 0,005 mol) a diizo- propylethylaminu (1,4 g, 0,011 mol) v acetonitrilu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 12 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získaný hustý olej se zalkalizuje roztokem uhličitanu draselného. Získaný světle zelený olej se extrahuje ethylacetátem a suší (síran sodný). Ethylacetát se odstraní na rotační odparce a získaný olej se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, CH₂C1₂:CH₃,OH, 9:1). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá bezbarvý olej, který se suší za vakua a získá se pěnovitá pevná látka. Tato se rozpustí v acetonitrilu a ponechá se při teplotě místnosti 2 h. Takto vytvořená pevná látka se filtruje a rekrystaluje se z acetonitrilu. Výtěžek: 0,82 g (20 %), t.t. 170 až 171 °C.

Ή NMR (DMSO): δ 0,96 a 1,11 (s, 12H, C(CH₃)₂)/, 1,65 (s, 6H, CH₃), 2,30 (m, 2H, HNCH₂CHOH), 3,80 (m, 1H, CHO), 4,5 (m. 2H, CHOHCH, N-< ), 7,15 a 7,59 (s, 2H, imiH), 10,43 (s, 2H, NOH).

MS:(M+H)⁺ = 400.

Elementární analýza pro Ci₆H₂9N₇O₅ vypočteno 48,11 % C, 7,32 % H, 24,55 % N nalezeno 48,63 % C, 7,39 % H, 24,38 % N.

Příklad 21

Syntéza 4,4,10,10-tetramethyl-l, 13-bis(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-7-/(2-nitro-lH-imidazoll-yl)methyl/6-oxa-5,9-diazatridekan-3,11 -dion-dioximu

-55 CZ 295519 B6

Diizopropylethylamin (0,55 g, 0,042 mol) se přidá k suspenzi 2-aminoxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-amino-propan-dihydrochloridu (0,55 g, 0,002 mol) v acetonitrilu (5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 10 min. K acetonitrilovému roztoku se přidá 4-chlor-4—methyl-l-(2nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-nitrosopentan (1,1 g, 0,0042 mol) (příklad 10(A)) a směs se míchá při teplotě místnosti pod dusíkem 24 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získá se viskozní olej, který se zalkalizuje uhličitanem-draselným. Směs se extrahuje ethylacetátem a ethylacetátový roztok se suší nad síranem sodným. Odstraněním ethylacetátu se získá hustý olej, který se čistí sloupcovou chromatografíi (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9: 1). Eluci CH₂C1₂: CH₃OH, 9 : 1 se získá titulní sloučenina jako hustý olej, který se suší za vakua. Takto vytvořená pevná látka se rekrystaluje z acetonitrilu, t.t. 136 až 137 °C. Výtěžek 0,32 g (25 %).

’H NMR (DMSO) δ 0,89 a 1,09 (s, 12H, C(CH₃)₂), 2,42 (m„ 2H, HNCILCHO), 3,72 (m, 1H, CHO), 4,5 (m, 6H, CH₂CH₂N< a CHOHOCH₂N<), 7,10, 7,16 a 7,59 (s, 6H, imiH), 10,43 (s, 2H, NOH).

MS: (M+H)⁺ = 650.

Elementární analýza pro C₂₄H₃5N₁₃O₉ vypočteno 44,37 % C, 5,43 % H, 28,03 % N nalezeno 44,54 % C, 5,43 % H, 27,93 % N.

Příklad 22

Syntéza 1,13-bis(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-7-(hydroxymethyl)-5,9-diaza-3,11 -dodekan-dion-dioximu

-56CZ 295519 B6

A. Příprava 5-hydroxy-2-fenyl-l ,3-dioxanu

K roztoku benzaldehydu (150,0 g, 1,41 mol) v toluenu se přidá glycerol (160,0 g, 1,74 mol) a potom kyselina 4-methylbenzensulfonová (1,0 g) a směs se intenzivně míchá pod refluxem s Dean-Starkovým vodním odlučovačem. V refluxování se pokračuje až se již neobjevuje v odlučovači žádná voda (6 až 8 h). Čirý roztok se zpracuje se 4N NaOH až je alkalický a organická vrstva se promyje vodou (5 x 100 ml), potom nasyceným roztokem chloridu sodného a potom se suší nad bezvodým síranem sodným. Zahuštěním organické vrstvy se získá olej, který se rozpustí v horkém izopropyletheru a ponechá se přes noc v mrazničce. Bezbarvá pevná látka se odfiltruje a promyje se izopropyletherem a získá se titulní produkt jako bezbarvá pevná látka. Výtěžek: 55,0 g (22 %), t.t. 83 až 84 °C (lit.t.t. 83 až 84 °C, J.S. Briamacombe, A.B.Foster a M. Stacey, Chem.and Ind., 1958, 1228-9). Ή NMR (ODC1₃) δ 3,1 (d, 1H, -OH), 3,7 (d, 1H Ar-CH), 4,3 (m, 4H, O-CH₂), 5,6 (s, 1H, O-CH-O) a 7,4 (m, 5H, Ar-H). M/e: /M+HČ =181.

B. Příprava 2-fenyl-5-O-ftalimido-1,3-dioxan

K roztoku 5-hydroxy-2-fenyl-l,3-dioxanu (55,0 g, 0,305 mol) a N-hydroxyftalimidu (54,75 g, 0,34 mol) v suchém THF (100 ml), trifenylfosfin (94,42 g, 0,36 mol) se přidá a roztok se ochladí na 0 °C v lázni led-sůl. Po kapkách za míchání se přidá diethylazodikarboxylát (62,7 g, 0,36 mol) pod dusíkem. Po přidání se reakční směs míchá pod dusíkem přes noc. Pevná látka se odfiltruje a promyje ledově chladným THF. Spojený THF roztok se zahustí a zbytek se opět rekrystaluje z horkého izopropyletheru a získá se další produkt jako bezbarvá pevná látka. Výtěžek 56,0 g (56,6 %), t.t. = 171 až 172 °C. *H NMR (CDC1₃) δ 4,0 (dd jevící se jako t, 2H, Q-CH^,). 4,25 (m, 3H, O-CH_2b a O-CH), 5,3 (s, 1H, O-CH-O), 7,3-8,0 (m, 9H, Ar-H). M/e :/M+HČ = 326.

C. Příprava 3-brom-l-0-benzoyl-2-0-ftalimidopropanu

Roztok 2-fenyl-5-O-ftalimido-l,3-dioxanu (56,0 g, 0,172 mol) v CC1₄, (200 ml) se zpracuje s N-bromsulcinimidem (36,8 g, 0,206 mol), uhličitanem bamatým (41,44 g, 0,21 mol) a směs se intenzivně míchá pod dusíkem a refluxem 2 h. Reakční směs se ochladí a filtruje se přes sloupeček celitu. Pevný zbytek se pečlivě promyje chloridem uhličitým (5 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí hydrogensiřičitanem sodným pro odstranění jakéhokoliv přítomného) přebytku bromu. Bezbarvá organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a zahuštěním se získá pevná látka, která se rekrystaluje z izopropyletheru a získá se titulní produkt jako bezbarvá pevná látka. Výtěžek: 49,0 g (71 %), t.t. 98 až 99 °C. 'H NMR (CDC1₃) δ 3,85 (m, 2H, Br-CH₂), 4,8 (m, 3H, O-CH₂ a O-CH), a 7,0 až 8,0 (m, 9H, Ar-H). M/e :/M+H/‘ = 404,406.

D. Příprava 3-azido-2-O-(ftalimido)-l-O-(benzoyl)propanu

Roztok 3-brom-l-O-benzoyl-2-O-ftalimidopropanu (49,0 g, 0,12 mol) v suchém DMF (200 ml) se zpracuje s NaN₃ (16,6 g, 0,26 mol) a hydrogenuhliěitanem sodným (24,0 g, 0,3 mol) a směs se míchá pod dusíkem při 60 až 65 °C 20 h. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se pasta, která se extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátová vrstva se suší (síran sodný) a jejím zahuštěním se získá olej. Tento olej se krystaluje z hexanu/etheru a získá se titulní produkt azid jako bezbarvá pevná látka. Výtěžek: 38,0 g (87 %), t.t. 69 až 70 °C, ’Η-NMR (CDC1₃): δ 3,7 (m, 2H, N₃-CH₂), 4,7 (m, 3H, PhCOO-CH₂ a N-O-CH) a 7,4-8,2 (m, 9H, Ar-H).

M/e :/M+H/⁺ = 367.

E. Příprava 2-P-(amine)-3-azido-l-propanolu

K nasycenému roztoku methanolického amoniaku (50 ml) se přidá -3-azido-2-O-(ftalimido)-l0-(benzoyl)propan (11,6 g, 31,7 mmol) a míchá se při teplotě místnosti 20 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a promyje se methanolem. Filtrát se zahustí a chromatografuje přes rychlý silikagel. Eluci 1 : 1 ethylacetátem/hexany se získá titulní produkt jako bezbarvý olej.

-57CZ 295519 B6

Výtěžek: 3,25 g (78 %). 'H-NMR (CDC1₃): δ 2,9 (šs, 1H, -OH), 3,4 (d, 2H, Nj-CHJ, 3,9 (m, 3H, O-CHj a N-OCH) a 5,6 (šs, 2H, O-NHz). M/e :/M+H/⁺ = 133.

F. Příprava dihydrochloridové soli 3-amino-2-0-(amino)-l-propanolu

K roztoku 2-O-(amino)-3-azido-l-propanolu (3,25 g, 24,6 mmol) v suchém THF (20 ml) se přidá trifenylfosfín (7,86 g, 30 mmol) a míchá se až do vymizení výchozího materiálu podle TLC (2 h). Organická fáze se extrahuje 2N HC1 a vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3 x 20 ml). Organický roztok se odloží a vodný roztok se zahustí za sníženého tlaku a získá se bezbarvá, velmi hygroskopická pevná látka, která se pro následující stupeň použije bez dalšího čištění. Výtěžek: 4,15 g jako dihydrochloridová sůl (95 %). t.t. > 200 °C (rozkl.). *H NMR (D₂O) δ 3,2 (m, 2H, N-CIL), 3,8 (m, 2H, O-CHJ a 4,4 (m, 1H, N-O-CH). M/e :/M+H/⁺ = 107.

G. Příprava 1,13-bis(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-7-(hydroxymethyl)-5,9-diaza-3,11-dodekandion-dioximu

K roztoku dihydrochloridu 3-amino-2-0-(amino)-l-propanolu (0,54 g, 3 mmol) v suchém DMF (5 ml) se přidá diizopropylethylamin (6,3 g, 7 mmol) a míchá se 1/2 hodiny. Tvorba aminhydrochloridu se pozoruje po 15 min. Najednou se přidá pevný 4-chlor-4-methyl-l-(2-nitrolH-imidazol-l-yl)-3-nitrosopentan (2,45 g, 9,9 mmol; příklad 10(A)) a potom diizopropylethylamin (1,29 g, 10 mmol) a míchá se při teplotě místnosti 1/2 h. Roztok se pak ohřeje na 50 °C. Reakční směs se vyčeří po 20 minutách a míchá se při 50 °C 1 hodinu. Rozpouštědlo a jiné těkavé nečistoty se odstraní za sníženého tlaku. Výsledná guma se rozpustí v minimálním množství vody (5 ml) a zpracuje se s pevným uhličitanem sodným do alkality (pH = 9-9,5). Roztok se potom extrahuje několikrát ethylacetátem (5 x 25 ml). Spojené organické vrstvy se suší (bezvodý síran sodný) a potom se zahustí a získá se žlutá guma. Surový produkt se chromatografuje přes rychlý silikagel a eluuje 9 : 1 dichlormethanem/MeOH a získá se produkt jako polopevná látka, která se chromatografuje dvakrát a získá se žlutá pevná látka 92 až 95 % čistota, HPLC). Pevná látka se opět rozpustí v minimálním množství AcCN a izopropylether se přikape až se začne tvořit sraženina. Pevná látka se odfiltruje a promyje se izopropyletherem/AcCN (9 : 1) a suší se za vakua po několik hodin a získá se titulní produkt.

Výtěžek: 0,145 g (8,7 %). t.t. - získá se pěna při 50 °C a taje za rozkladu při 142 až 144 °C ’H NMR (aceton-d₆) δ 1,15 (s, 6H, gem dimethyly), 1,2 (2s, 6H, gem dimethyly), 2,8 (m, 2H, N-CHJ, 3,0 (m, 4H, N=C-CH2), 3,8 (m, 3H, O-CH, a N-O-CH), 4,8 (m, 4H, imi-CHz), 7,2 (d, 2H, imi-H) a 7,6 (d, 2H, imi-H).M/e :/Μ+Η/¹' = 555. HPLC: Rt 26,73 min.

(0 až 35 % AcN ve vodě, obsahující 0,1 % TFA se použije jako mobilní fáze, Dynamax 25 x 0,46 cm C-18 kolona byla použita a čistota byla měřena při 230 nm).

Elementární analýza pro C₂iH₃₄Nio0₈. H₂O(1,67) vypočteno 43,14 % C, 6,44 % H, 23,96 % N nalezeno 43,53 % C, 6,14 % H, 23,57 % N.

Příklad 23

Syntéza 12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetrainethyl-6-(hydroxymethyl)-7-oxa-4,8diaza-2,10-dodekandion-dioximu

-58CZ 295519 B6

A. Příprava 4-//2-azido-l-(hydroxymethyl)ethoxy/amino/-A-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-pentanon-oximu

K roztoku 2-O-(amino)-3-azido-l-propanolu (1,2 g, 9 mmol, příklad 22(E)) a diizopropylethylaminu (1,55 g, 12 mmol) v suchém AcCN (5 ml) se najednou přidá pevný 4-chlor-4-methyl-l(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-hitrosopentan (2,34 g, 10 mmol, příklad 10 (A)) a míchá se při 60 až 65 °C 2 h. Roztok se zahustí na pastu a surový produkt se chromatografuje přes kolonu rychlého silikagelu. Eluce 85 : 15 methylenchlorid/methanol poskytne alkylovaný titulní produkt jako světle žlutou gumu.

Výtěžek: 2,7 g (54 %). ^]H-NMR (CDC1₃): δ 1,3 (2s, 6H, gem dimethyly), 3,0 (t, 1H, vyměnitelný s D₂O, -OH), 3,5 (d, 2H, N₃ -CH,), 3,7 (m, 3H, O-CH, a-O-CH), 4,8 (t, 2H, imid-CHJ, 5,85 (s, 1H, O-NH), 7,2 (s, 1H, imi-H), 7,3 (s, 1H, imi-H) a 9,2 (s, 1H, N-OH). M/e :/M+HÁ = 357. Výše uvedený produkt se v následujícím stupni použije bez dalšího čištění.

B. Příprava 4-//2-amino-l-(hydroxymethyl)ethoxy/amino/-4-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-pentanonoximu

K roztoku azidového titulního produktu ze stupně A (2,7 g, 7,5 mmol) v suchém THF (5 ml) se přidá trifenylfosfín (2,0 g, 8 mmol) a roztok se míchá 1 h. TLC indikuje, že je azid ještě přítomen). Reakční směs se pak refluxuje 15 min, kdy podle TLC výchozí materiál zcela vymizí. Roztok se zahustí a zředí 10 ml vody. Vodný roztok se opakovaně extrahuje dichlormethanem (5x15 ml) a organická fáze se odloží. Vodný roztok se filtruje a potom se suší vydražením a získá se titulní produkt- amin- jako světle žlutá pevná látka. Malé množství produktu se rekrystaluje z AcCN. Výtěžek: 1,3 g (53 %). t.t. 146 až 147 °C. Ή-NMR (DMSO-d₆): δ 1,2 (s, 6H, gem dimethyly), 2,6 (m, 2H, H^-CHJ, 3,6 (m, 3H, O-CH₂ a O-CH), 4,7 (t, 2Himi-CH,), 6,6 (šs, 1H, -O-NH), 7,2 (s, 1H, imi-H), 7,6 (s, 1H, imi-H) a 10,8 (šs, 1H, N-OH). MS:/M+HŮ = 331.

C. Příprava 12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 —y 1)—3,3,9,9-tetramethyl-6-(hydroxymethyl)-7-oxa4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioximu

K suspenzi monoamin-monooximu - titulního produktu ze stupně B (1,2 g, 3,6 mmol) v suchém AcCN (5 ml), se přidá diizopropylethylamin (0,65 g, 5 mmol) a roztok se ohřeje na 60 až 55 °C a míchá se. Roztok se stane homogenním. K výše uvedenému teplému roztoku se najednou přidá 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,675 g, 5 mmol, příklad 1(C)) jako pevná látka a reakční směs se míchá 30 min při 60 až 65 °C. Reakční směs se pak zahustí na pastu a surový produkt se adsorbuje na rychlý silikagel (10 g) a potom se vloží do rychlé silikagelové kolony. Eluci 8 : 2 dichlormethanem/methanolem se získá produkt jako světle žlutá pevná látka, která se rekrystaluje z THF/izopropyletheru a získá se titulní bisalkylovaná sloučenina jako světle žlutá pevná látka.

-59CZ 295519 B6

Výtěžek: 0,35 g (23 %). t.t. 118 až 120 °C (rozkl.). ^JH NMR (DMSO-d₆) δ 1,3 (šs, 6H, gem dimethyly), 1,8 (s, 3H, N^-CHJ, 2,4 (m, 2H, N-CH,), 3,0 (št, 2H, N=C-CH₂), 3,5 (m, 3H, O-CHz), 4,8 (št, 2H, imi-CHJ, 6,8 (šs, 1H, 0-NH), 7,3 (s, 1H, imi-H), 7,7 (s, 1H, imi-H), 10,6 (s, 1H, N-OH) a 10,9 (s, 1H, N-OH). M/e :/M+H/¹' = 430. HPLC: RT (retenční čas) - 23,7 min. (0 až 45 %AcN ve vodě s 0,1 % TFA, C-18 Dynamax 25 x 0,46 cm kolona, detekce při 230 nm).

Elementární analýza pro Ci₇H₃₁N₇O₆.0,5H2O, 0,1 IPE: vypočteno 47,11 % C, 7,50 % H, 21,86 % N nalezeno 47,12 % C, 7,33 % H, 21,74 % N.

Příklad 24

Syntéza 3,3,9,9-tetramethyl-6-//3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/methyl/-5-oxa-4,8diazaundekan-2,10-dion-dioximu

A. Příprava 3-Boc-amino-2-O-(N-boc-amino)-l-propanolu

K roztoku dihydrochloridu 3-amino-2-O-(amino)-l-propanolu (2,0 g, 10,5 mmol, příklad 22(F)) ve vodě (25 ml) se přidává roztok uhličitanu sodného až pH dosáhne asi 10. Di-íercbutyldikarbonát (5,6 g, 25 mmol) v dioxinu (100 ml) se přidá k výše uvedenému ochlazenému roztoku diaminu ve vodě a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 24 h. Všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a pasta se zředí vodou (100 ml). Vodný roztok se extrahuje etherem (5 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí vodou a suší (síran sodný). Odpařením etheru zbyde pasta, která se chromatografuje na rychlé silikagelové koloně. Eluci 70 : 30 hexany/ethylacetát se získá produkt jako bezbarvý olej. Tento olej se krystaluje z pentan/etheru a získá se bis boc-amin jako titulní produkt ve formě bezbarvé pevné látky.

Výtěžek: 2,32 g (73 %). t.t. 76 až 77 °C. ’Η-NMR (CDC1₃): δ 1,4 (2s, 18H, boc methyly), 3,23,5 (m, 2H, CH₂-NHBoc), 3,6-3,8 (m, 3H, O-CH₂ a OH), 4,2 (m, 1H, CH-ONHBoc), 5,2 (št, 1H, NHBoc) a 7,6 (s, 1H, O-NHBoc). M/e :/M+HC = 307.

B. Příprava N./( 1, l-dimethylethoxy)karbony 1/-2-//( 1, l-dimethylethoxy)karbonyl/amino/oxy/3-/3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propyl/-propanaminu

K roztoku 3-boc-amino-2-0-(N-boc-amino)-l-propanolu (2,2 g, 7,2 mmol) v suchém DMF (10 ml) se přidá Cs₂CO₃ (2,6 g, 8 mmol) a roztok se ohřeje na 60 až 65 °C na olejové lázni pod dusíkem za míchání. K teplému roztoku se přidá 3-brom-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propan (1,90 g, 8 mmol), D.C.Heimbrook, K.Shyam a A.C. Sartorelli, Anti-cancer Drug Design, 2, 339-350 (1988) a v míchání se pokračuje 16 hodin. Všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se chromatografuje na rychlém silikagelu. Eluci 7 : 3 EtOAc-hexany se získá

-60CZ 295519 B6 titulní produkt jako světle žjutá guma. Výtěžek: 1,32 g (40 %). ^]H-NMR (CDC1₃): δ 1,5 (s, 9H, 0-CMe₃), 1,6 (s, 9H, 0-CMe₃), 2,2 (m, 2H,CH₂-CH₂-CH₂-O-), 3,3-3,8 (m, 7H, BocHN-CH₂, O-CEb a N-O-CH), 5,4 (šs, 1H, Boc-NH), 7,1 (s, 1H, imi-H) a 7,2 (s, 1H, imi-H), M/e: /M+H/⁺ = 460.

C. Příprava 3,3,9,9-tetramethyl-6-//3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/methyl/-5-oxa4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

Chráněný diaminoether z titulního produktu z výše uvedeného stupně B (1,7 g, 3,7 mmol) se rozpustí v 5 ml methanolického HC1 a míchá se při teplotě místnosti 30 min. Roztok se zahustí za vakua a získá se žlutá pevná látka, která se rozpustí ve 2 ml vody a ochladí se na ledu. Přikapává se NaOH (2N) až do dosažení pH roztoku 10. Roztok se zmrazí na lázni suchý led-aceton a vymražením dosucha se získá světle žlutá pevná látka, jejíž HPLC vykazuje pouze jeden pík za podmínek lineárního gradientu (t_R—11,89 min). Tato pevná látka se suspenduje v suchém AcCN (2 ml) a přidá se diizopropylethylamin (1,03 g, 8 mmol) a míchá se. Najednou se přidá 3-chlor3-methyl-2-nitrosobutan (1,08 g, 8 mmol, příklad 1 (C)) jako pevná látka a míchá se 30 min při 45 °C. Surová reakční směs se adsorbuje na 5 g rychlého silikagelu a vloží se na kolonu. Eluci 2 % MeOH v EtOAc se získá produkt jako světle žlutá pevná látka. Tato pevná látka se krystaluje z hexanu/izopropyletheru/MeOH.

Výtěžek: 0,025 g (1,4%), t.t. 158 až 160 °C (rozkl. ). Ή NMR (CD₃CN): δ 1,3 (2s, 12H, C-CH₃), 1,9 (2s, 6H, N=C-CH₃), 2,2 (m, imi-CH₂-CH2-CH₂-O). 2,8 (šm, 2H, N-CH,), 3,0 (šm, 3H, O-C_H a O-CHz), 3,8 (št, 2H, O-CEb), 4,6 (m, 2H, imi-CH,), 7,2 (s, 1H, imi-H), 7,5 (s, 1H, imi-H) a 9,0 (šs, 2H, N-OH). M/e : /M+H/⁺ = 458. HPLC: t_R- 26,85 min (0 až 40 % AcN ve vodě s 0,1 % TFA se použije jako lineární gradient, detekce 230 nm, C]₈ Dynamax 25 x 0,46 cm kolona).

Elementární analýza pro 0,1 M hex, 0,1 Μ IPE, 0,9M H₂O vypočteno 49,26 % C, 8,1 % H, 19,9 % N nalezeno 49,40 % C, 7,70 % H, 19,59 % N.

Příklad 25

Syntéza l-ethoxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-/(2-nitroimidazol-lyl)methyl/-7-oxa-4,8-diazadodekan-2,10-dion-dioximu

NO₂

-61 CZ 295519 B6

A. Příprava l-ethoxy-3-methyl-2-butenu

Čerstvě připravený oxid stříbrný (101 g, 370 mmol) se přidá ke směsi 3-methyl-2-buten-l-olu (21,0 g, 25 ml, 240 mmol) a ethyljodidu (300 ml) a míchá se při 45 °C 6 h. Stříbrné soli se odstraní filtrací a filtrační koláč se promyje etherem (2 x 150 ml). Filtrát a promývací podíly se spojí a ether a přebytek ethyljodidu se odstraní destilací. Získaný olej se destiluje za atmosférického tlaku a získá se 14,8 g (51 %) l-ethoxy-3-methyl-2-butenu jako bezbarvé kapaliny, t.v. 119ažl20°C. Ή-NMR (CDC1₃) δ 1,2 (t, 3H, CH₂CH₃), 1,72 (d, 6H, CIL), 3,45 (m, 2H, CILCH₃), 3,95 (d, 2H, CIL), 5,38 (t, 1H, (CH₃)₂ C=CH-).

B. Příprava l-ethoxy-3-chlor--3-methyl-2-nitrosobutanu

Koncentrovaná HC1 se přidá k ochlazenému (0 až 5 °C) roztoku izoamylnitritu (14,0 g, 120 mmol) a l-ethoxy-3-methyl-2-butenu (6,84 g, 60 mmol). Teplota se udržuje pod 5 °C během přidávání a reakční směs se míchá při 5 °C dalších 30 min. Produkt se filtruje a promyje studenou (-20 °C) 1 : 1 směsí ethanolu a etheru. Pevná látka se dále promyje etherem a získá se bílá pevná látka. Výtěžek: 6,9 g (64 %), t.t. 84 až 85 °C. Ή-NMR (CDC1₃): δ 1,12 (t, 3H, CH₂CH₃, 1,65 (d, 6H, CIL), 3,49 a 3,95 (m, 2H, CH₂OCH₂CH₃), 4,15 (m, 2H, CÍLCHJ, 6,12 (dd, 1H, /CH₃)₂C=CH-/. MS: (M+H)⁺ = 180.

C. Příprava 8-terc .B oc-amino-5-aza-4,4-dimethyl-l -(2-nitro-1 H-imidazol-1 -y 1)-6-/(2nitroimidazol-1 -yl)methyl/-6-oxaoktan-3-on-oximu

K suspenzi 4-chlor-T-methyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3-nitrosopentanu (1,3 g, 0,005 mol, příklad 10(A)) v acetonitrilu (50 ml) se přidá 2-aminoxy-3-(2-nitro-tH- imidazol-l-yl)-l-tBoc-aminopropan (1,5 g, 0,005 mol, příklad 20(D)) a diizopropylethylamin (0,75 g, 0,006 mol) a směs se míchá 48 hodin. Čirý roztok se zahustí a zbylý zelenavý hustý olej se čistí sloupcovou chromatografií (CH₂C1₂: CH₃OH, 95 : 5). UV viditelné frakce se spojí a rozpouštědlo se odpaří, získá se žlutá pevná látka. Výtěžek: 2,1 g. Rekrystaluje se z ethylacetátu a získá se titulní produkt, t.t. 175 až 176 °C.

Ή-NMR (CDC1₃): δ 0,92 /s, 6H, C(CH₃)₂)/, 1,44 (s, 9H, Boc-CH₃), 2,82 (m, 2H, OCH₂CILNHBoc)), 3,33 (m, 2H, ΟΗ₂ΟΗ^=ΝΟΗ), 3,73 (m, 2H, OCILCH₂NH-Boc), 4,63 (t. 2H, N>CILCH₂C=NOH a CH₂N<), 6,92 (s, 1H, NH-Boc), 7,14 a 7,27 (s, 2H, nitroimidazolyl-H), 7,6 (s, 2H, imiH).

Elementární analýza pro C₂oH₃iN90₈ vypočteno 46,28 % C, 5,99 % H, 23,64 % N nalezeno 45,71 % C, 5,95 % H, 23,99 % N.

D. Příprava l-ethoxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6=/(2-nitroimidazol-l-yl)methyl/-7-oxa-4,8-diazadodekan-2,10-dion-dioximu

8-t-Boc-amino-5-aza-4,4-dimethyl-l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-/(2-nitroimidazol-lyl)methyl/-6-oxaoktan-3-on-oxim (1,0 g, 0,002 mol) se zpracuje s methanolickým HC1 (2 ml) a míchá se při teplotě místnosti 0,5 h. K tomuto roztoku se přidá suchý ether (100 ml) a vytvořená bílá pevná látka se filtruje a suší za vakua. Výtěžek 0,82 g. Ke směsi hydrochloridu (0,82 g, 0,0018 mol) a diizopropylethylaminu (0,7 g, 0,0056 mol), v acetonitrilu (10 ml) se přidá 1-ethoxy-3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,54 g, 0,003, mol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 48 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a zbytek se rozpustí ve vodě (5 ml) a roztok se zalkalizuje (pH 8,5) přídavkem NaOH a extrahuje se ethylacetátem (2 x 10 ml) a suší se (síran sodný). Odstraněním ethylacetátu se získá pěnovitá pevná látka. Tato získaná pevná látka se dále rekrystaluje z methylenchloridu a získá se titulní produkt. Výtěžek: 0,8 g, t.t. 105 až 107 °C.

Ή NMR (DMSO-d₆) δ 1,10 (s, 12H, C(CIL)₂)/, 1,67 (s, 3H, CH₃), 2,34 (m, 2H, OCH₂CILNH), 2,85 (m, 2H, CH₂CILC=NOH), 3,53 (m, 2H, OCHzCH^ a CH₂CH₃), 4,61 (m, 4H,

-62CZ 295519 B6 >NCH₂CH₂C=NOH a >NCH₉CHL 7,10 a 7,50 (s a d, nitroimidazolyl-H), 10,78 a 10,82 (s, 2H, CH₂C=NOH). MS: (M+H)⁺ =570.

Elementární analýza pro C20H51N9O8 vypočteno 46,47 % C, 6,38 % H, 24,63 % N nalezeno 46,28 % C, 6,38 % H, 24,54 % N.

Příklad 26

Syntéza 3,3,9,9-tetramethy 1-1 -ethoxy-6-/ (2-nitro-l H-imidazol-1 -yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

OC2H5

A. Příprava 2-//l-(aminomethyl)-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/amino/-3-methyl-lethoxy-2-butanon-oximu dihydrochloridu

1- Ethoxy-3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (2,2 g, 0,012 mol, příklad 25 (B)) se přidá ke směsi

2- aminoxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-t-Boc-aminopropanu (3,01 g, 0,01 mol, příklad 20(D)) a diizopropylethylaminu (1,6 g, 0,12 mol) v acetonitrilu (20 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 24 h. Acetonitril se odpaří a získaný olej se trituruje s hexanem a zbytek se nalije do vody. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekiystaluje z hexanu a ethylacetátu a získá se 3//l-(t-Boc-amino)methyl-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/amino/-3-methyl-l-ethoxy2-butanon-oxim. Výtěžek 3,5 g (78 %). t.t. 125 až 126 °C.

Methanolický HC1 (3 ml) se přidá k roztoku 3-//l-/(t-Boc-amino)methyl-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/-amino/-3-methyl-l-ethoxy-2-butanonoximu (1,5 g, 0,0034 mol) v methanolu (5 ml) a míchá se při teplotě místnosti 1 h. K methanolickému roztoku se přidá ether a vysrážený hydrochlorid se odfiltruje a použije se pro příští stupeň bez čištění. Výtěžek: 1,22 g (84 %).

B. Příprava 3,3,9,9-tetramethyl-1 -ethoxy-6-/ (2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)methyl/-5-oxa-4,8diazaundekan-2,10-dion-dioximu

3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,43 g, 0,0032 mol, Vassian, Inorg.Chem., 6, 2043 (1967)) se přidá ke směsi titulního hydrochloridu ze stupně A výše (1,2 g, 0,0029 mol) a diizopropylethylaminu (0,45 g, 0,0035 mol) v acetonitrilu (10 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 12 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získaný hustý olej se zalkalizuje roztokem uhličitanu draselného. Získaný světle zelený olej se extrahuje ethylacetátem a suší (síran sodný). Ethylacetát

-63CZ 295519 B6 se odstraní na rotační odparce a získaný olej se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9 : 1). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá bezbarvý olej, který se suší za vakua a získá se pěnovitá pevná látka. Tato se rozpustí v acetonitrilu a ponechá při teplotě místnosti 2 h. Takto vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje z acetonitrilu. Výtěžek: 0,42 g (31 %). t.t. 129 až 130 °C.

*H NMR (DMSO): δ 0,96 a 1,11 /m, 15H, C(CH₃)₂) a CH₂CH₃)/, 1,65 (s, 6H, CH₃), 2,30 (m, 2H, HNCH₂CHOH), 3,42 (m, 2H, CH₂CH₃), 3,80 (m, 1H, CHO), 4,17 (CH₂OCH₂CH₃), 4,5 (m, 2H, CHOHCIfyNc), 7,15 a 7,59 (s, 2H, imiH), 10,43: (s, 1H, NOH) a 10,83 (s, 1H, NOH).

MS: (M+H)⁺= 444

Elementární analýza pro Ci8H₃₃N7O₆ vypočteno 48,75 % C, 7,50 % H, 22,11 % N nalezeno 49,00 % C, 7,64 % H, 21,65 % N

Příklad 27

Syntéza 4,4_s10,10-tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan-3 .,11 -dion-dioximu

A. Příprava 4-chlor-4-methyl-3-nitrosopentanu

Koncentrovaná HC1 (9,0 ml, 0,11 mol) se přidá k ochlazenému (0 až 5 °C) roztoku izoamylnitritu (14,8 g, 0,1 mol) a 2-methyl-2-pentenu (8,4 g, 0,1 mol). Teplota se udržuje pod 5 °C během přidávání a reakční směs se míchá při 5 °C po dalších 30 min. Produkt se odfiltruje a promyje se studenou (-20 °C) 1 : 1 směsí petrolether ether. Pevná látka se dále promývá petroletherem a získá se bílá pevná látka. Výtěžek: 4,9 g (34 %), t.t. 85 až 86 °C. 'H-NMR (CDC1₃): δ 0,98 (CH₂CH₃), 1,68 (d, 6H, CH₃), 2,05 (m, 2H, CH₂CH₃), 5,88 (dd, 1H, CHNO). MS: 299 (2m+H)⁺.

Elemetámí analýza proC₆Hi₂NOCl vypočteno 48,17 % C, 8,08 % H, 9,36 % N, 23,70 % Cl nalezeno 48,47 % C, 8,33 % H, 9,3 % N, 24,04 % Cl.

B. Příprava 4,4,10,10-tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan-3,11-dion-dioximu

4-Chlor-4-methyl-3-nitrosopentan (1,45 g, 0,011 mol) se přidá ke směsi 2-aminoxy-3-(2nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-aninopropanu-dihydrochloridu (1,36 g, 0,005 mol, příklad 20(D)) a diizopropalethylaminu (1,4 g, 0,011 mol) v acetonitrilu (15 ml) a směs se míchá při teplotě míst

-64CZ 295519 B6 nosti 12 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získaný hustý olej se zalkalizuje uhličitanem draselným ve formě roztoku. Získaný světle zelený olej se extrahuje ethylacetátem a suší (síran sodný). Ethylacetát se odstraní na rotační odparce a získaný olej se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9 : 1). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá bezbarvý olej, který se suší za vakua a získá se pěnovitá pevná látka. Získaný olej se rozpustí v acetonitrilu a ponechá při teplotě místnosti 2 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje se z acetonitrilu. Výtěžek: 0,75 g (35 %), t.t. 143 až 44 °C. ’H NMR (DMSO): δ 0,98 (m, 6H, CH₂CH₃), 1,13 /s, 12H, C(CH₃)₂)/, 2,19 (m, 4H, CH₂CH₃), 2,33 (m, 2H, HNCH^CHOH), 3,80 (m 1H, CHO), 4,5 (m, 2H, CHOHCHzN^, 7,15 a 7,55 (s, 2H, imiH), 10,35 a 10,37 (s, 2H, NOH).

MS: (M+H)⁺ = 428.

Elementární analýza pro C18H33N7O5 vypočteno 50,57 % C, 7,78 % H, 22,93 % N nalezeno 50,74 % C, 7,81 % H, 22,93 % N.

Příklad 28

Syntéza 4,4,10,10-tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-8-oxa-5,9-diazapentadekan-3,11-dion-dioximu

A. Příprava 6-methyl-6-chlor-5-nitrosoheptanu

K ochlazenému (0 až 5 °C) směsi izoamylnitritu (14,0 g 0,12 mol) a 2-methyl-2-heptenu (10,89 g, 0,097 mol) se přidá koncentrovaná HC1 (9,0 ml, 0,11 mol) během 45 min. Teplota se udržuje pod 5 °C během přidávání a reakční směs se míchá při 5 °C dalších 30 min. Produkt se odfiltruje a promyje se studeným (-20 °C) petroetherem. Výtěžek: 5,1 g (29 %), t.t. 84 až 85 °C. ’Η-NMR (CDCI3): δ 0,87 (m, 3H, CH₂CH₂CH₂CH3), 1,32 (m, 4H, CH₂CH₂CH2CH₃), 1,69 (d,6H, CH₃), 1,98 a 2,12 (m, 2H, CH2CH₂CH₂CH₃), 4,15 (m, 2H, CH₂CH₃), 5,88 (dd, 1H, /CHNO/. MS: 355 (2M+H)⁺.

B. Příprava 2-//l-(aminomethyD-2-(2-nitro-IH-imidazol-l-yl)ethoxy/amino/-2-methyl-3heptanon-oxim-dihydro-chloridu

6-Methyl-6-chlor-5-nitrosoheptan (0,8 g, 4,45 mmol) se přidá ke směsi 2-aminoxy-3-(2nitro-lH-imidazol-l-yl)-l-t-Boc-aminopropanu (1,0 g, 3,3 mmol, příklad 20 (D)) a diizopropylethylaminu (0,7 g, 5,4 mmol) v acetonitrilu (15 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti

-65CZ 295519 B6

h. Acetonitril se odpaří a získaný olej se trituruje s hexanem a zbytek se nalije do vody. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje se z hexanu a ethylacetátu a získá se 2—//l—/(t— Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/amino/-2-methyl-3-heptanon-oxim. Výtěžek: 0,82 g (58%). Přidá se methanolický HC1 (3 ml) k roztoku 2-//l-(t-Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-ethoxy/amino/-2-methyl-3-heptanon-oximu (0,82 g, 1,9 mmol) v methanolu (5 ml) a míchá se při teplotě místnosti 1 h. K methanolickému roztoku se přidá ether a vysrážený hydrochlorid se odfiltruje a použije v dalším stupni bez čištění. Výtěžek: 0,62 g (79 %).

C. Příprava 4,4,10,10-tetramethyl-7-/ (2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)methyl/-8-oxa-5,9-diazapentadekan-3,11-dion-dioximu

4-Chlor-4-methyl-3-nitrosopentan (0,52 g, 3,5 mmol, příklad 27(A)) se přidá ke směsi hydrochloridu titulního produktu ze stupně B výše (0,62 g, 1,5 mmol) a diizopropylethylaminu (0,45 g, 1,5 mmol) v acetonitrilu (10 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 12 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a získaný hustý olej se zalkalizuje roztokem uhličitanu draselného. Získaný světle zelený olej se extrahuje ethylacetátem a suší (síran sodný). Ethylacetát se odstraní na rotační odparce a získaný oleji se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, ethylacetát hexan, 6 : 4). Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá bezbarvý olej, který se suší za vakua a získá se pěnovitá pevná látka. Tato se rozpustí v acetonitrilu a ponechá při teplotě místnosti 2 h. Takto vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje z acetonitrilu. Výtěžek: 0,32 g (47 %), t.t. 153 až 154 °C.

Ή NMR (DMSO): δ 0,86, 0,96, 1,11 a 1,35 (m, 22H, C(CH₃)₂) CH₂CH₃ aCH₂CH₂CH2CH₃)), 2,15 (m, 4H, CH2CH₂CH₂CH₃ a CHjOE), 2,30 (m, 2H, HNCH₂CHOH), 3,80 (m, 1H, CHO), 4,5 (m, 2H, CHOFICH₂N<), 7,14 a 7,56 (s, 2H, imiH), 10,35 (s, 1H, NOH) a 10,37 (s, 1H, NOH). MS: (M+H)⁺ = 456.

Elementární analýza pro C₂oH₃₇N70₅ vypočteno 52,71 % C, 8,19 % H, 21,53 % N nalezeno 52,94 % C, 8,26 % H, 21,63 % N.

Příklad 29

Syntéza 5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,9-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12dion-dioxim-dihydrochlorid

.2HC1

A. Příprava 2-//(3-methyl-2-butenyl)oxy/methyl/-5-nitrO“furanu

Čerstvě připravený oxid stříbrný (34,8 g, 0,15 mol) se přidá ke směsi 3-methyl-2-buten-l-olu (21,0 g, 25 ml, 0,24 mol) a 5-nitro-2-furfuryl-bromidu (18,8 g, 0,1 mol) a míchá se při teplotě místnosti 12 h. Stříbrné soli se odstraní filtrací a filtrační koláč se promyje etherem (200 ml).

-66CZ 295519 B6

Filtrát a promývací podíly se spojí a zahuštěním se odstraní ether a přebytek 3-methyl-2-buten-

1- olu. Získaný olej se čistí sloupcovou chromatografíi (silikagel, hexan : ethylacetát 7 : 1). Frakce obsahující produkt se spojí a odpařením se získá světležlutý olej. Výtěžek: 5,5 g.

Ή NMR (CDC1₃) δ 1,69 a 1,77 (s, 6H, CH₃), 4,09 /d, 2H, (CH₃)₂C=CHCH2-OCH₂/, 4,64 /s, 2H, (CH₃)₂C=CHCH₂-OCH₂/, 5,38 (t, 1H, (CH₃)₂C=CH_), 6,6 a 7,27 (d, 2H, ArH).

B. Příprava 2-/(3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutoxy)methyl/-5-nitrofuranu

Koncentrovaná HC1 (2,5 ml) se přidá k ochlazenému (0 až 5 °C) roztoku izoamylnitritu (14,0 g, 0,12 mol) a 2-//(3-methyl-2-butenyl)oxy/methyl/-5-nitrofuranu (4,0 g, 0,06 mol). Teplota se během přidávání udržuje pod 5 °C a reakční směs se míchá při 5 °C dalších 30 min. Produkt se odfiltruje a promyje se studenou (-20 °C) 1 : 1 směsí ethanolu a etheru. Pevná látka se dále promyje etherem a získá se světležlutá pevná látka. Výtěžek 2,6g (52 %), t.t. 134 až 135 °C.

Ή NMR (DMSO) 1,78 (δ ,6H, CIL), 4,44 (s, 2H, HONECH,), 4,67 (s, 2H, CFfOAr), 6,6 a 7,27 (d, 2H, ArH). MS: 277 (M+H)⁺

C. Příprava 5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,9-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12dion-dioxim-dihydrochloridu

2- /(3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutoxy)methyl/-5-nitrofuran (0,27 g, 1 mmol) se přidá k roztoku 7-amino-4-aza-3,3-dimethyl-5-oxaheptan-2-on-oximu (0,27 g, 1 mmol, příklad 7(E)) a diizopropalethylaminu (0,4 g, 3 mmol) v acetonitrilu (5,0° ml) a míchá se při 40 °C 4 h. Po reakci se acetonitril odpaří a výsledný hustý olej se několikrát promyje vodou a suší (síran sodný). Takto získaný olej se čistí sloupcovou chromatografíi (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9:1. Frakce, obsahující produkt se spojí a odpařením se získá viskozní olej. Tento se čistí jako dihydrochlorid titulního produktu, t.t. 168 až 169 °C (rozkl.). Výtěžek 0,23 g. *H-NMR (CDC1₃): δ 1,24 a 1,34 /s, 12H, C(CH₃)₂)/, 2,64 (t, 2H, NHCH₂CH₂O), 1,90 (s, 3H, CH₃), 3,75 (t, 2H, NHCH.CHjO), 4,40 (s, 2H, HONECH,), 4,59 (s, 2H, CH₂OAr), 6,6 a 7,27 (d, 2H, ArH). MS: 416 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro Ci₇H₃₁N₅O₇Cl₂ vypočteno 41,81 % C, 6,40 % H, 14,34 % N nalezeno 41,53 % C, 6,46 % H, 13,78 % N.

Příklad 30

Syntéza 5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,7-dioxa-6,10-diazateradekan-4,12-diondioxim-dihydrochloridu

HO OH • 2HC1

A. Příprava 3-//2-(t-Boc-amino)ethoxy/amino/-3-methyl-1 -/(5-nitro-2-furanyl)methoxy/2-butanon-oximu

-67CZ 295519 B6

2-/(3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutoxy)methyl/-5-nitrofuran (2,37 g, 8,5 mmol, příklad 29(B)) se přidá k roztoku 2-(aminoxy-t-Boc-arninoethanu (1,5 g, 8,5 mmol, příklad 7(C)) a N,N-diizopropylethylaminu (1,3 g, 10 mmol) v acetonitrilu (15,0 ml) a míchá se při 40 °C 4 h. Po reakci se acetonitril odpaří na rotační odparce a výsledný hustý olej se několikrát promyje vodou a suší (síran sodný). Získaný olej se čistí sloupcovou chromatografii (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 95 : 5). Frakce obsahující produkt se spojí a odpařením se získá viskozní olej, výtěžek: 1,47 g. Ή-NMR (CDC1₃): δ 1,34 /s, 6H, C(CH₃)₂)/, 1,44 (s, 6H, NHBoc), 3,28 (m, 2H, NHCHjCHzO), 3,75 (t, 2H, NHCH₂CH2O), 4,40 (s, 2H, HON=CCH2), 4,59 (s, 2H, CH₂OAr), 4,95 (šs, 1H, NHBoc), 6,6 a 7,27 (d, 2H, ArH).

B. Příprava 5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,7-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12dion-dioxim-dihydrochloridu

Methanolická HC1 (5 ml) se přidá k roztoku titulního produktu ze stupně A výše (2 g, 0,05 mol) v methanolu (5 ml) a míchá se při teplotě místnosti 30 min. K methanolickému roztoku se přidá ether a vytvořený hydrochlorid se použije v dalším stupni. Diizopropylethylamin (1,29 g, 0,01 mol) se přidá ke kaši hydrochloridu (0,8 g, 0,0025 mol) v acetonitrilu (10 ml) během 15 min. 3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,42 g, 0,003 mol) se přidá k reakční směsi a míchá se při teplotě místnosti 12 h. Po reakci se acetonitril odpaří na rotační odparce a výsledný hustý olej se několikrát promyje vodou a suší (síran sodný). Získaný olej se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9 : 1). Frakce obsahující produkt se spojí a odpaří. Získá se viskozní olej. Výtěžek 0,43 g. Tento se převede na hydrochlorid a rekrystaluje se z ethanoletheru, t.t. 99 až 100 °C.

Ή NMR (DMSO) δ 1,01 a 1,18 (s, 12H,C(CH₃)₂), 1,68 (s, 3H, CH₃), 2,30 (m, 2H, NHCH2CH₂O), 3,5 (m, 2H, NHCH^O), 4,30 (s, 2H, HON=CCH₂), 4,5 (s, 2H, CH₂OAr), 6,6 a 7,77 (d, 2H, ArH), 10,3 a 11,0 (s, 2H, NOH). MS: 416 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro Ci7H₃₁N₅O7.C₂H₅OH vypočteno 42,70 % C, 6,98 % H, 13,10 % N nalezeno 42,80 % C, 6,94 % H, 12,85 % N.

Příklad 31

Syntéza 3,3,9,9-tetramethyl-l-//(5-nitro-2-furyl)karbonyl/-amino)/-5-oxa-4,8-diazaundekan2,10-dion-dioximu

A. Příprava N-(3-methyl-2-butenyl)-5-nitro-2-furankarboxarnidu

Kyselina 5-nitro-2-furoová (5 g, 0,032 mol) se rozpustí v suchém DMF (25 ml). K tomuto roztoku se přidá Ι,Γ-karbonyldiimidazol (5,7 g, 0,035 mol). Směs se míchá při teplotě místnosti 15 min, vytvoří se oranžově zabarvená suspenze. 3-Methyl-2-butenyl-amin-hydrochlorid (3,9 g, 0,032 mol) se suspenduje v suchém DMF (15 ml) v Erlenmeyerově bance a neutralizuje se hydrogenuhličitanem sodným a aminová suspenze se pomalu přidá k 5-nitro-2-furanové kyseli

-68CZ 295519 B6 ně a l,l'-karbonyldiimídazolové reakční směsi. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 2 h. TLC (silikagel, 10% methanol-dichlormethan, Rf= 0,45) indikuje úplný průběh reakce. DMF se odstraní na rotační odparce a zbytek se míchá s vodou (800 ml) a získá se žlutá pevná látka. Výtěžek 3,3 g (46 %). t.t. 92 až 94 °C. MS m/z 448 (2M)⁺, 2=2 (M+NH₄)⁺, 225 (M+H)⁺.

Ή NMR (DMSO-d₆) δ 1,73 (d, 6H,(CH₃)₂C=), 3,86 (t, 2H, 0^01=), 5,22 (t, 1H, CH₂CH=), 7,40 a 7,78 (d, 2H, furanyl-H), 8,96 (t, 1H, NHCO).

B. Příprava N-(3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutyl)-5-nitro-2-furankarboxamidu

N-(3-Methyl-2-butenyl)-5-nitro-2-furankarboxamid (2,2 g, 0,01 mol) se suspenduje vizoamylnitritu (60 ml) a ochladí se na -5 °C. Stříkačkou se přidá koncentrovaná HC1 (1 ml, 37 %, 0,01 mol). Reakční směs se míchá při-5 °C po 30 min a při teplotě místnosti 30 min. Pevná látka se odfiltruje a promyje se studeným (-10 °C) ethanolem-etherem (100 ml). Získá se světlezelený prášek. Výtěžek: 1,5 g (52 %), t.t. 110 až 112 °C. MS m/z 254 /(M+H)-HC1A.

Ή NMR (DMSO-d₆) δ 1,82 (s, 6H, (CH,)^), 4,28 (d, 2H, CH^N), 7,49 a 7,75 (d, 2H, furanyl-H), 8,66 (t, 1H, NHCO), 11,72 (s, 1H, C=NOH).

C. Příprava N-/3-//(t-Boc-amino)ethoxy/amino/-2-(hydroxy-imino)-3-methylbutyl/-5nitro-2-furankarboxamidu

2-(Aminoxy)-l-t-Boc-aminoethan (0,4 g, 2,3 mmol, příklad 7(C)) a N-(3-chlor-3-methyl-2nitrosobutyl)-5-nitro-2-furankarboxamid (0,5 g, 1,7 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (10 ml). K roztoku se přidá Ν,Ν-diizopropylethylamin a reakční směs se míchá pod dusíkem při teplotě místnosti přes noc. Získá se čirý roztok. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se vloží na silikagelovou kolonu a eluuje 50% ethylacetátem-hexanem. Výtěžek 0,62 g (85 %). MS m/z 430 (M+H⁺, 374 (M -> =)⁺. ’Η-NMR (CDC1₃): δ 1,26 (s, 6H, (CH₃)₂C=), 1,38 (s, 9H, boc-CH₃), 3,35 (m, 2H, CH₂NH), 3,68 (t, 2H, NHOCHJ, 4,28 (d, 2H, ClfyNH), 5,15 (tb, 1H, NHBoc), 6,24 (s, 1H, ΟΝΉ), 7,35 (s, 2H, furanyl-H), 7,72 (tb, 1H, NHCO), 8,54 (s, 1H, C=NOH).

D. Příprava 3,3,9,9-tetramethyl-l-//(5-nitro-2-furyl)karbonyl/amino/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

N-/3-//(t-Boc-amino)ethoxy/amino/-2-(hydroxyimino)-3-methylbutyl/-5-nitro-2-furankarboxamid (0,22 g, 0,5 mmol) se suspenduje v methanolu (10 ml) a roztok se ochladí na ledové lázni po 30 min. Přikape se HC1 nasycený methanolový roztok (14 kapek) a suspenze se míchá při teplotě místnosti pod dusíkem přes noc. TLC (silikagel, 50% ethylacetát-hexan) indikuje, že debocylace byla úplná. Methanol se odpaří a získá se bílá pevná látka. HPLC (Vydac Ci₈, 0,46 x 25 cm, 5 μ kolona, 1 ml/min eluce gradientem od 100 % A do 50 % B během 50 min, kde A je voda, B je acetonitril, oba obsahující 0,01 % TFA) vykazuje jeden pík s retenční dobou 15 min. Ή NMR (D₂O) δ 1,42 (s, 6H,(CH₃)₂C=), 3,24 (m, 2H, CIfyNH), 4,13 (t, 2H, NHOCHJ, 4,30 (s, 2H, CIfyNH), 7,31 a 7,53 (d, 2H, furanyl-H).

Tato pevná látka se suspenduje v acetonitrilu (10 ml), ochladí se na 0 °C a neutralizuje N,N-diizopropylethylaminem (0,13 g, 1 mmol). Přidá se 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,1 g, 0,7 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti pod dusíkem. HPLC vykazuje jeden hlavní pík s retenčním časem 26 min, přičemž není pozorován žádný výchozí materiál (retenční čas = 15 min). Acetonitril se odpaří a zbytek se vloží na silikagelovou kolonu, eluuje 5% methanolem-dichlormethanem. Frakce obsahující UV viditelnou skvrnu s Rf = 0,4 se spojí. Po odstranění rozpouštědla se získá slabě žlutá pevná látka.

Volná báze se rozpustí v 5 ml etheru a ochladí se na ledové lázni. K ochlazenému roztoku se přidá 10 kapek HCl/methanolu. Vysráží se HC1 sůl jako gumovitý produkt, který se suší za vakua přes noc. Sůl se potom vloží na silikagelovou kolonu a eluuje se 50% THF-CH₂C1₂. Frakce s Rf - 0,5 se spojí a odpaří se na rotační odparce, získá se 100 mg HC1 soli, t.t. 126 až 128 °C. MS m/z 429 (M+H)⁺. 'H-NMR (CDC1₃) δ 1,26 (d, 12H, (CH₃)₂)C=), 1,87 (s, 3H, CH₃C=N), 2,65

-69CZ 295519 B6 (m, 2H, CH₂NH), 3,81 (t, 2H, NHOCfL), 4,38 (s, 2H, CHjNH), 6,08 (b, 1H, ONH), 7,27 a 7,34 (d, 2H, furanyl-H), 7,89 (tb, 1H, NHCO).

Elementární analýza pro CjsE^CfiNgOg .1 EtOH vypočteno 41,69 % C, 6,63 % H, 15,35 % N, 12,95 % Cl nalezeno 40,92 % C, 6,64 % H, 15,25 % N, 12,90 % Cl.

Příklad 32

Příprava ^99mTc komplexů (metoda 3)

Následující obecný postup byl použit pro přípravu ^99mTc komplexů ligandů titulních produktů z výše uvedených příkladů 9,10,12, 14, 20, 22,25 a 28:

Ligand (2 až 4 mg) se rozpustí v 0,lM HC1 (0,1 až 0,15 ml) a 0,9% roztoku chloridu sodného (1,0 ml), a pak 0,lM pufru hydrogenuhličitanu sodného (0,5 ml) v 5ml skleněné lahvičce. Potom se přidá salinický roztok a eluát ⁹⁹Mo/ ^99mTc generátoru (celkový objem 0,5 až 1,0 ml) a lahvička se uzavře a třepe pro promíchání činidel. Obchodně dostupný kit přípravku ^99mTc-DTPA (Techneplex kit pro přípravu ^99mTc-pentenátu) se rekonstituuje 2 až 4 ml 0,9% roztoku chloridu sodného a část tohoto roztoku (0,15 až 0,3 ml) se přidá do lahvičky, obsahující ligand a ^99mTcO4. Lahvička se třepe a nechá se stát při teplotě místnosti. Radiochemická čistota (RCP) ^99mkomplexů byla měřena HPLC s reverzní fází za použití 5 nebo 10 mikrometrové 15 cm PRP-l-kolony s reverzní fází, která byla eluována 65/35 acetonitrilem/Ο,ΙΜ octanem amonným (NH4OAc, pH 4,6). Všechny techneciové komplexy mají RCP vyšší než 90 % v 10 minutách.

Takto vytvořené komplexy mají názvy (v závorkách dále je uvedeno číslo přikladu, ve kterém byl připraven výchozí ligand):

oxo/l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandiondioximato/(3-)-N,N',N,N7technecium-^99mTc (V) (příklad 9), oxo/12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -y 1)-3,3,9,9-tetramethyl-7-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandiondioximato/(3-)-N,N\N,N'/technecium-^99mTc (V) (příklad 10), oxo/l,13-bis(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-3,ll-tridekandion-dioximato/(3-)-N,N\N,N7technecium-^99mTc (V) (příklad 12), oxo/l-(2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato/(3-)-N,N',N'',N7technecium-^99mTc (V) (příklad 14), oxo/6-/ (2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)methyl/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato(3-)-N,N',N,N''7technecium-^99mTc (V) (příklad 20), oxo/1,13-bis(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-7-(hydroxymethyl)5,9-diaza-3,l l-dodekandion-dioximato(3-)-N,N',N,N7technecium-^99mTc (V) (příklad 22), oxo/1 -ethoxy-3,3,9,9-tetramethyl-l 2-(2-nitro-l H-imidazol-1 -yl)-6-/(2-nitroimidazol-yl)methyl/-7-oxa-4,8-diazadodekan-2,10-dion-dioximato(3-)-N,N',N,N7technecium-^99mTc (V) (příklad 25), a oxo/4,4,10,10-tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-8-oxa-5,9-diazapentadekan-3,1 l-dion-dioximato(3-)-N,N',N,N7technecium-^99mTc (V) (příklad 28).

Příklad 33

Příprava ^99mTc komplexů

Techneciové komplexy ligandů titulních produktů z příkladu 23,24,26, 27, 30 a 31 se připraví za použití metody popsané v příkladu 16, s následujícími výjimkami: ligand z příkladu 23 se

-70CZ 295519 B6 rozpustí v 0,1 ml vody místo O,1M HC1 a voda také nahradí HC1 pro komplexaci ligandu z příkladu 30.

Takto vytvořené komplexy mají následující názvy (v závorkách následuje číslo příkladu, ve kterém byl připraven výchozí ligand):

oxo/12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 —y 1)—3,3,9,9-tetramethyl-6-(hydroxymethyl)-7-oxa-4,8diaza-2,10-dodekandion-dioximato (3-)-N,N',N,N7technecium-^mTc (V) (příklad 23), oxo/3,3,9,9-tetramethyl-6-//3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-propoxy/methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximato(3-)-N,N',N”,N”7technecium-^99mTc (V) (příklad 24), oxo/3,3,9,9-tetramethyl-l-ethoxy-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximato(3-)-N,N',N'',N''7technecium-^99mTc (V) (příklad 26), oxo/4,4,10,10-tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan3,1 l-dion-dioximato(3-)- N,N',N”,N”7technecium-^99mTc (V) (příklad 27), oxo/5,5,11,11 -tetramethyl-1 -(5-nitro-2-furyl)-2,7-dioxa-6,10—diazatetradekan-dion-dioximato(3-)-N,N',N'',N7technecium-^99mTc (V) (příklad 30) a oxo/3,3,9,9-tetramethyl-l-//(5-nitro-2-furyl)karbonyl/-amino/-5-oxa-4,8-diazaundekan2,10-dion-dioximato(3“)-N,N',N'',N7technecium-⁹⁹'Tc (V) (příklad 31).

Příklad 34

Syntéza R a S izomerů oxo/6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-3,3,9,9-tetramethyl-5oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato(3-)-N,N',N'',N''7technecium-^99mTc (V) ml skleněná lahvička, obsahující 2,0 mg vymražením sušeného racemického ligandu z příkladu 20 při pH 8,2 se rekonstituuje 1,8 ml směsi 0,9% chloridu sodného a eluátu ⁹⁹Mo/^99mTc generátoru. Lahvička se třepe pro rozpuštění činidel. Obchodně dostupný kit pro přípravu ^99mTc DTP A (Techneplex kit pro přípravu ^99mTc-pentenátu) se rekonstituuje 4 ml 0,9% roztoku chloridu sodného a podíl tohoto roztoku (0,15 až 0,3 ml) se přidá do lahvičky, obsahující ligand a ^99mTcO47 Po 10 minutách při teplotě místnosti se obsahy lahvičky adsorbují na PRP-1 pryskyřici s reverzní fází a supematant se odloží. Pryskyřice se promyje 1 ml 1 : 3 směsi ethanol:salinický roztok a supematant se odloží. Racemická směs komplexů technecia se eluuje z pryskyřice 0,5 ml EtOH, který se odpaří téměř dosucha proudem dusíku. Jednotlivé izomery ^99mTc komplexu ligandu z příkladu 20 se potom rozštěpí od sebe na koloně Chiralpak AD tak, že se tato eluuje 65/35 hexan/EtOH/0,1 % diethylamin (Et2NH) rychlostí 1 ml/min.

Příklad 35

Syntéza 3,3, 6, 9,9-pentamethyl-5-oxa-4,8-diaza-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

-71 CZ 295519 B6

A. Příprava l-t-Bocamino-2-ftalimidooxypropanu l-t-Bocamino-2-hydroxypropan (11,7 g, 67 mmol), N-hydroxyftalimid (13,1 g, 80 mmol) atrifenylfosfín (21 g, 80 ml) se rozpustí v THF (500 ml). K tomuto roztoku se přidá molekulové síto (5 g) a potom diethylazodikarboxylát (14 g, 80 mmol) po malých částech. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 24 h. THF se odstraní a zbytek se čistí sloupcovou chromatografíí (silikagel, ethylacetát-hexan 2 : 8). Frakce, obsahující produkt (Rf = 0,42) se spojí a odpařením se získá bílá pevná látka. Výtěžek 13,4 g (64 %). Tato se krystaluje z hexanu-ethylacetátu, t.t. 105 až 107 °C.

B. Příprava 3,3,6,9,9-pentamethyl-5-oxy-4,8-diaza-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

Hydrazin (1,5 g, 40 mmol) se přidá k roztoku l-t-Bocamino-2-ftalimidooxypropanu (12 g, 38 mmol) v ethanolu (250 ml) a směs se refluxuje 6 h. Reakční směs se chladí na ledu 30 min a odfiltruje. Filtrát se odpaří a získá se 2-aminooxy-3-methyl-l-t-Boc-aminopropan jako olej. Výtěžek 7,0 g (97 %). Tento se rozpustí v methanolické HC1 a míchá se při teplotě místnosti 30 min. K methanolickému roztoku se přidá ether (200 ml) a vytvořený hydrochlorid 2-aminoxy-3-methyl-l-aminopropanu se odfiltruje a použije v příštím stupni bez dalšího čištění.

Výše uvedený hydrochlorid (0,5 g, 3 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (10 ml) a suspenze se ochladí na 0 °C a neutralizuje diizopropylethylaminem. K reakční směsi se přidá 3-chlor-3methyl-2-nitrosobutan (1,9 g, 15 mmol) a míchá se při 0 °C 30 min při teplotě místnosti 4 h. Odpaří se acetonitril a zbytek se neutralizuje nasyceným roztokem uhličitanu draselného (10 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3x50 ml). Ethylacetát se odpaří a získá se olej, který triturací s hexanem poskytne bílou pevnou látku. Tato se krystaluje z hexanu/ethylacetátu, t.t. 104 až 106 °C. Výtěžek 0,83 g. MS: (m/z) 289 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro CijHmNA vypočteno 54,14 % C, 9,79 % H, 19,43 % N nalezeno 54,37 % C, 10,15 % Η, 19,72 % N.

Příklad 36

Stereoselektivní syntéza stereoizomerů ligandu z příkladu 20, (R)-3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu, z (S)-(+)-epichlorhydrinu

-72CZ 295519 B6

A. Příprava (S)-l-chlor-3-ftalimido-2-propanolu (S)-(+)-epichlorhydrin (5 g, 54 mmol) a ftalimid (5 g, 34 mmol) se smísí a suspenze se refluxuje pod dusíkem 4 h. Postup reakce se sleduje pomocí TLC (silikagel, 60% ethylacetát-hexan). Reakční směs se pak ochladí a nalije do hexanu (150 ml). Vytvořená pevná látka se rozpustí v ethylacetátu (150 ml). K ethylacetátovému roztoku se přidá silikagel (10 g) a odpaří se na rotační odparce. Volně tekoucí prášek se vloží na silikagelovou kolonu a eluuje methylenchloridem-ethylacetátem (9 : 1). Počáteční UV viditelné frakce obsahují epoxid. Další frakce obsahují titulní halohydrin. Surový produkt se rekrystaluje z diizopropyletheru a získá se 4,5 g (55,4 %). MS m/z, 240 (M+H)⁺. ^-NMR (CDC1₃) δ 2,80 (d, 1H, CHOH), 3,64 (m, 2H, CřfCl), 3,90 (m, 2H, ft-CHj), 4,18 (m, 1H, CHOH), 7,74 a 7,86 (m, 4H, ft-H). t.t. 100-101 °C.

B. Příprava (S)-N-(2,3-epoxypropyl)-ftalimidu

K ochlazenému roztoku l-chlor-3-ftalimido-2-propanolu ze stupně A výše (2 g, 0,01 mol) v THF (15 ml) se přidá hydrid sodný (90,24 g, 0,01 mol) a směs se míchá při 0 °C 30 min a při teplotě místnosti 24 h. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se zpracuje s vodou (5 ml) a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetát se odstraní a získaná pevná látka se chromatografuje přes silikagel (9 : 1 CH₂Cl₂:ethylacetát). UV viditelné frakce se spojí a zahuštěním se získá titulní epoxid. Výtěžek 1,2 g.

Ή-NMR (CDClj) δ 2,68 a 2,84 (m, 2H, CH/t), 3,24 (m, 1H, epoxy-CH), 3,80 a 3,94 (m, 2H, epoxy-CHj), 7,70 a 7,88 (m, 4H, ft-H).

C. Příprava (R)-2-/2-hydroxy-2-(nitro-lH-imidazol-l-yl)-ethyl/-lH-izoindoll,3(2H)dionu

K roztoku (S)-N-(2,3-epoxypropyl)ftalimidu (1,75 g, 0,0086 mol) v ethanolu (10 ml) se přidá

2-nitroimidazol (1,13 g, 0,01 mol) a uhličitan draselný (751 mg) a reakční směs se refluxuje 6 h. Reakční směs se ochladí a nalije se do vody (50 ml) a vytvořená žlutá pevná látka se odfiltruje a suší. Výtěžek 2,5 g (91 %). Rekrystaluje se z methanolu, t.t. 191 až 192 °C rozkl.

Ή-NMR (DMSO) δ 3,62 (m, 4H, ftNCH₂CHOH), 4,08 (m, 1H, CHOH), 4,32 a 4,63 (m, 2H, CHOHCH₂N<), 5,54 (d, 1H, CHOH), 7,15 a 7,68 (s, 2H, imíH), 7,8 (m, 4H, ArH). MS: (M+H)⁺ = 317.

D. Příprava (S)-oc-/(t-Boc-amino)methyl/-2-nitro-1 H-imidazol-1 -ethanolu

K suspenzi (R)-2-/2-hydroxy-2-(nitro-lH-imidazol-l-yl)-ethyl/-lH-izoindol-l,3(2H-dionu (2,5 g, 0,008 mol) v methanolu (10 ml) se přidá hydrazin (0,32 g, 0,01 mol) a směs se refluxuje 6 h. Reakční směs se ochladí a methanol se odstraní na rotační odparce. Směs aminohydrinu a

-73CZ 295519 B6 hydrazidu se rozpustí v roztoku uhličitanu sodného (2,12 g, 0,02 mol) ve vodě (5 ml). K této směsi se přidá THF (15 ml) a ochladí se na 0 °C. Di-Zerc-butyl-dikarbonát (2,18 g, 0,01 molů se přidá k této směsi a míchá se při 0 °C po 1 h a při teplotě místnosti 48 h. THF-voda se odstraní na rotační odparce a zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x25 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou, suší (síran sodný) a odpaří se na rotační odparce a získá se titulní sloučenina jako žlutá pevná látka. Výtěžek 1,72 g (75 %). Tato se rekrystaluje z hexan-ethylacetátu, t.t. 128 až 129 °C.

’HNMR (DMSO) δ 1,39 (s, 9H, NHBoc), 2,92 (m, 2H, BocHN-CFfCHOH), 3,75 (m, 1H, CHOH), 4,14 a 4,55 (m, 2H, CHOHCIfclSK), 5,25 (d, 1H, CHOH), 6,94 (ml, 1H, BocHN), 7,15 a 7,59 (s, 2H, imiH).

E. Příprava (R)-2-/(t-Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/-lH-izoindol-1,3 (2H)-dionu

N-Hydroxyftalimid (0,4 g, 0,0025 mol), (S)-a-/(t-Boc-amino)methyl/-2-nitro-lH-imidazol1-ethanol (0,57 g, 0,002 mol) a trifenylfosfin (0,79 g, 0,03 mol) se rozpustí v THF (7,5 ml) a ochladí se na -15 °C. K reakční směsi se přidá molekulové síto a k roztoku se přidá diethylazodikarboxylát (0,5 g, 0,003 mol) a v míchání se pokračuje 1 h při -15 °C. Reakční směs se stane tmavočervenou a barva zmizí po 1 h. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 24 h a odpaří se na rotační odparce dosucha. Zbytek se chromatografuje přes silikagel, za použití hexanuethylacetátu (7:3, 6:4) jako elučního činidla. Odpařením rozpouštědla se získá titulní sloučenina jako pěnovitá pevná látka. Výtěžek 0,53 g (61 %). MS: (M+H)⁺ = 432⁺.

F. Příprava (R)-l-/2-(aminooxy)-3-(t-Boc-amino)propyl/-2-nitro-lH-imidazolu

Hydrazin (98 %, 50 mg, 0,0015 mol) se přidá k roztoku (R)-2-/l-/(t-Boc-amino)methyl/-2-(2nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/-lH-izomdol-l,3(2H)-dionu (0,53 g, 0,0012 mol) v ethanolu (50 ml) a směs se refluxuje 6 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a filtrát se odpaří na rotační odparce. Získaný hustý olej se trituruje s ethylacetátem a výsledná sraženina se odstraní filtrací. Ethylacetátový roztok se odpaří na rotační odparce a získá se titulní produkt jako olej. Výtěžek: 0,32 g (86 %).

‘H-NMR (CDCI3) δ 1,46 (s, 9H, NHBoc), 3,40 (m, 2H, BocHNCH₂CHO), 3,82 (m, 1H, CHONH2), 4,4 a 4,62 (m, 2H,CHOHCH2N<), 4,9 (šs, 1H, NHtBoc), 5,2 (šs, 2H, NH₂), 7,15 a 7,27 (s, 2H, imiH).

F. Příprava dihydrochloridu (R)-l-/3-amino-2-(aminoxy)-propyl/-2-nitro-lH-imidazolu

Methanolická HC1 (1 ml) se přidá k roztoku (R)-l-/2-(aminooxy)-3-(t-Boc-amino)propyl/-2nitro-lH-imidazolu (0,3 g, 0,001 mol) v methanolu (1,5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 20 min. K methanolickému roztoku se přidá ether (15 ml) a vytvořený dihydrochlorid (R)l-/3-amino-2-(aminooxy)propyl/-2-nitro-lH-imidazolu se odfiltruje a suší za vakua. Použije se v příštím stupni bez dalšího čištění. Výtěžek 0,23 g (84 %). MS: (M+H)⁺ = 202.

H. Příprava (R)-3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu

3-Chlor-3-methyl-2-nitrosobutan (0,145 g, 0,0011 mol) se přidá ke směsi (R)-l-/3-amino-2nitro-lH-imidazol-dihydrochloridu (0,15 g, 0,0005 mol) a diizopropylethylaminu (0,3 g, 0,0023 mol) v acetonitrilu (1,5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 12 h. Acetonitril se odstraní na rotační odparce a hustý olej takto získaný se alkalizuje roztokem uhličitanu draselného. Světlezelený olej takto získaný se extrahuje ethylacetátem a suší (síran sodný). Ethylacetát se odstraní na rotační odparce a získaný olej se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, CH₂C1₂: CH₃OH, 9 : 1). Frakce obsahující produkt se spojí a odpařením se získá bezbarvý olej, který se suší za vakua a získá se pěnovitá pevná látka. Tato se rozpustí v acetonitrilu a ponechá při teplotě míst-74CZ 295519 B6 nosti 2 h. Vytvořená pevná látka se odfiltruje a rekrystaluje z acetonitrilu. Výtěžek: 120 mg (55 %).

Ή NMR (DMSO) δ 0,96 a 1,11 (s, 12H, (CH₃)₂), 1,65 (s, 6H, CH₃), 2,30 (m, 2H, HNCH₂CHOH), 3,80 (m, 1 H, CHO), 4,5 (m, 2H, CHOHCHzNC), 7,15 a 7,59 (s, 1H, imiH), 10,43 (s, 2H, NOH). MS: (M+H)⁺ = 400.

Odpovídající S steroizomer, (S)-3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, se připraví podle uvedeného postupu a vychází se z (R)-(-)-epichlorhydrinu ve stupni A.

Takto mohou být připraveny R a S stereoizomery sloučeniny 3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro1 H-imidazol-1 -yl)-methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioximu stereo- selektivně metodou, obsahující stupně:

i) reakce (S)-(+)-epichlorhydrinu nebo (R)-(-)-epichlorhydrinu se ftalimidem za vzniku stereoizomeru 1 -chlor-3-ftalimido-2-propanolu, ii) kontaktu produktu z i) s epoxidovým kruhem tvořícím činidlem za vzniku stereoizomeru N(2,3-epoxypropyl)ftalimidu, iii) kontakt produktu z ii) s bází a 2-nitroimidazolem za vzniku stereoizomeru 2-/2-hydroxy-2(nitro-1 H-imidazol-1 -y 1) ethyl/— 1 H-izoindol-1,3 (2H)-dionu, iv) kontakt produktu z iii) s hydrazinem a potom s bází a di-terc.butyl-dikarbonátem za vzniku stereoizomeru a-/(t-Boc-amino)methyl/-2-nitro-lH-imidazol-l-ethanolu,

v) kontakt produktu z iv) s N-hydroxyftalimidem, trifenylfosfinem a diethylazodikarboxylátem za vzniku stereoizomeru 2-/l-/(t-Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)ethoxy/1 H-izoindol-1,3 (2H)-dionu, vi) kontakt produktu z v) s hydrazinem za vzniku stereoizomeru l-/2-(aminooxy)-3-(t-Bocamino)propyl/-2-nitro-lH-imidazolu, vii) deprotekci produktu z vi) za získání stereoizomeru l-/3-amino-2-(aminooxy)propyl/-2nitro-lH-imidazolu a viii) kontakt produktu z vii) se 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutanem za přítomnosti terciárního aminu.

Zkratky:

V příkladové části jsou používány následující zkratky:

h = hodiny

Me = Methyl

AcN nebo ACN nebo AcCN = acetonitril

NH₄OAc = octan amonný

Eg = ethylenglykol

TBATcOC1₄ = /tetran-n-butylamonium/ /TcOCl₄/

MeOH = methanol t-Boc nebo Boc = terc.butoxykarbonyl

EtOH = ethanol

DMF - dimethylformamid

t.t = teplota tání

TFA = kyselina trifluoroctová

THF = tetrahydrofuran

-75CZ 295519 B6

TLC = chromatografie na tenké vrstvě DMSO = dimethylsulfoxid

IPE = izopropylether

EtOAc = ethylacetát

t.v. = teplota varu

Claims (25)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy obecného vzorce (C(RR)) 2 ve kterém

   Yi je skupina vzorce -NRo- nebo -0-, kde Roje atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 12 atomy uhlíku, každá ze skupin R a R* je nezávisle

   i) r₂, ii) atom halogenu, iii) -OR₂, iv) -CO-OR₂,

   v) -CO-N(R₂)₂, vi) -N(R₂)₂, vii) -alkylen-CO-OR₂, viii) -alkylen-CO-N(R₂)₂, ix) -alkylen-N(R₂)₂,

   x) -arylen-CO-OR₂, xi) -arylen-CO-N(R₂)₂, xii) -arylen-N(R₂)₂, xiiii) -acyl, xiv) -acyloxy, xv) -heterocyklo, xvi) -hydroxyalkyl, xvii) -SO₂-R₂, xviii) -alkyl-SO₂-R₂, xix) -(A)_p -R³, kde A je spojovací skupina vybraná ze souboru zahrnujícího -O-, -S-, -CO-, -CS-, -NH-, -NR₅-, -HC=N-, -CR₅=N-, -heterocyklo-, -alkyleny- a -alkenyleny-, jako je -CH₂-, -CHR₅-CRsRg-, -CH=CH-, -CHCR₅-, -CR₅=CR6-,

   -76CZ 295519 B6 kde R₅ a R₆ jsou nezávisle alkyl-, alkenyl-, alkoxy-, aryl-, pětičlenné nebo šestičlenné heterocykly obsahující dusík nebo kyslík, halogen-, hydroxy- nebo hydroxyalkyl; -alkynyleny-, kterými je například -C=C~, -cykloalkylen-, -cykloalkenylen-; -arylen-, kterým je například nesubstituovaný nebo hydroxylem substituovaný fenylen; -arylalkyleny-, -hydroxyalkyleny-aminoalkyleny-, amidoalkyleny- a -alkylaminoalkylenyp je 0 až 20, a

   R³ je bioaktivni skupina vybraná ze souboru zahrnujícího anfetaminy, barbituráty, sulfonamidy, monoaminoxidasové substráty a inhibitory, hormony, enzymy, lipidy, ligandy pro buněčné membránové receptory, antihypertenziva, neurotransmitéry, aminokyseliny a oligopeptidy, radiosensibilizátory, steroidy, monoklonální a polyklonální protilátky nebo jejich fragmenty, cukry, mastné kyseliny, substráty pro muskarinové receptory, substráty pro dopaminové receptory, biotin, chemotaktické peptidy, substráty pro benzodiazepinovéreceptory, a zvláště hypoxii lokalizující části struktur kde D je skupina atomů, které tvoří dohromady s atomy dusíku nebo kyslíku, ke kterým jsou vázány, pětičlenný nebo šetičlenný kruh, n je celkový počet substitučních poloh dostupných na kruhu a jedna nebo více skupin

   R₇ je nezávisle atom vodíku, halogenu, alkyl, aryl, alkoxy, hydroxy, hydroxyalkyl, hydroxyalkoxy, alkenyl, arylalkyl, alkylamido, arylalkylamido, alkylamino a (alkylamino)alkyl nebo xx) dvě skupiny R nebo jedna skupina R a jedna skupina R* tvoří dohromady s jedním nebo více atomy, ke kterým jsou připojeny, nasycený nebo nenasycený, spiro nebo kondenzovaný, karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který je popřípadě substituován jednou nebo více skupinami vybranými ze skupin i) až xix), za předpokladu, že atom uhlíku nesoucí skupinu R není přímo vázán k více než jednomu heteroatomu, a

   R₂ je nezávisle atom vodíku, alkyl, alkenyl, alkynyl nebo aryl, přičemž pokud přímo z kontextu nevyplývá jinak, alkyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující 1 až 12 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, aryl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná homocyklická aromatická skupina obsahující 1 nebo 2 kruhy a 6 až 12 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty

   -77CZ 295519 B6 jsou tři nebo méně nitroskupiny, alkylové skupiny definované výše a/nebo halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, acyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je skupina obsahující až 12 atomů uhlíku a karbonylovou část, heterocyklus, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná, plné nasycená nebo nenasycená aromatická nebo nearomatická cyklická skupina obsahující alespoň jeden heteroatom v alespoň jednom kruhu monocyklická nebo bicyklická skupina obsahující 5 nebo 6 atomů v každém kruhu, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, alkenyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo alespoň jeden halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, alkynyl, samostatně nebo jako část jiné skupiny, je popřípadě substituovaná přímá nebo rozvětvená uhlovodíková skupina obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, přičemž případnými substituenty jsou alespoň jedna alkylová skupina definovaná výše a/nebo alespoň jeden halogen, alkoxyskupina, arylalkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, hydroxyskupina, karboxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, formyl, alkylkarbonyloxyskupina, alkylkarbonyl, heterocyklo, aryloxyskupina nebo thiol, bioaktivní skupina je skupina vymezená výše s působností metabolického substrátu, katalyzátoru nebo inhibitoru nebo schopností připojení na zvoleném místě subjektu, a halogen je chlor, brom, fluor nebo jod.
2. 2. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 1, kde, jestliže uvedená sloučenina obsahuje skupinu xx), skupina obsahuje dvě R skupiny tvořící spolu s jedním nebo více atomy, ke kterým jsou navázány, nasycený nebo nenasycený, spiro nebo kondenzovaný, karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který může být nesubstituován nebo substituován jednou nebo více skupinami vybranými ze skupin i) až xix).
3. 3. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 1, mající obecný vzorec Ia'

   NH

   C(RR)

   HN>

   OH

   OH

   -78CZ 295519 B6 kde Z¹ a Z² jsou R* skupiny a Z³ je R skupina a dále kde jeden, dva nebo všechny tři skupiny Z¹, Z² a Z³ jsou skupiny -(A)p-R³.
4. 4. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 3 obecného vzorce Ia', kde Y¹ je -NR- nebo -O-.
5. 5. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 4 obecného vzorce Ia', kdeÝje-O-.
6. 6. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 3 obecného vzorce Ia', kde R³ je hypoxii lokalizující skupina.
7. 7. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 6 obecného vzorce Ia', kde R nebo R*, které nejsou -(A)p-R³, jsou vodík nebo alkylové skupiny ve významu vymezeném v nároku 1.
8. 8. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 6 obecného vzorce Ia', kde R³ je nitroimidazolylová nebo nitrofurylová skupina.
9. 9. Ligandy nesoucí heteroatomy a jejich kovové komplexy podle nároku 1, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího

   3.3.5.9.9- pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   11- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   12- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazadodekan-2,10-dion-dioxim, l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl—4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   I- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,6,10,10-pentamethyl-5,6,9-triazadodekan-3,ll-dion-dioxim,

   3.3.9.9- tetramethyl-5-oxa-4,8—diazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   II- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetrameťhyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, 12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetrameťhyl-7-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioxim,

   12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioxim,

   1.13- bis-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)^4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-3,11-tridekandion-dioxim, l-//2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetyl/amino/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioxim, l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-

   2.10- undekandion-dioxim, l-hydroxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-7-oxa-4,8-diazadodekan-

   2.10- dion-dioxim,

   3.3.9.9- tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   4.4.10.10- tetramethyl-l, 13-bis-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan-3,11-dion-dioxim,

   1.13- bis-(2-nitro-l H-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-7-(hydroxymethyl)-5,9-diaza-3,11-dodekandion-dioxim,

   -79CZ 295519 B6

   12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-6-(hydroxymethyl)-7-oxa-4,8-diaza-

   2.10- dodekandion-dioxim,

   3.3.9.9- tetramethyl-6-//3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, l-ethoxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-/(2-nitroimidazol-l-yl)methyl/-7-oxa-4,8-diaza-dodekan-2,10-dion-dioxim,

   3.3.9.9- tetramethyl-l-ethoxy-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim,

   4.4.10.10- tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan-3,lldion-dioxim,

   4.4.10.10- tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-8-oxa-5,9-diazapentadekan-

   3,11-dion-dioxim,

   5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,9-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12-dion-dioxim,

   5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,7-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12-dion-dioxim,

   3.3.9.9- tetramethyl-l-//(5-nitro-2-furyl)karbonyl/ammo/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-diondioxim a

   3.3.6.9.9- pentamethyl-5-oxa-4,8-diaza-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim.
10. 10. Ligandy nesoucí heteroatomy a j ejich kovové komplexy podle nároku 1, které j sou (R) -3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-

    2.10- dion-dioxim nebo (S) -3,3,9,9-tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10dion-dioxim.
11. 11. Komplex, obsahující sloučeninu podle nároku 1 komplexovanou s kovem.
12. 12. Komplex podle nároku 11, mající vzorec Ia_k()mpi_eM nebo Ick_ompiex (^komplex

    R

    -R (^Ickotnplex , ^rA4x A^r

    R s s R

    -80CZ 295519 B6 kde

    M je radioaktivní nebo neradioaktivní kov, který může popřípadě mít jiný ko-ligand nebo jiné ko-ligandy W¹ a/nebo W² ve svých nenaplněných koordinačních místech a

    Q je skupina -(C(RR) ml-Y'-(C(RR)m²-Y²-(C(RR))m³ _n-, kde Y¹ a Y² jsou nezávisle -NR-, -0-, -S-, -SO-, -SO₂- nebo -Se-, n je celé číslo vybrané z 0 nebo 1 a m je celé číslo nezávisle zvolené z 0 až 4, za předpokladu, že součet ml a m2 je větší než 0 a

    R a R* skupiny mají výše definovaný význam.
13. 13. Komplex podle nároku 12, kde kovem je technecium nebo rhenium.
14. 14. Komplex podle nároku 13, mající vzorec v

    H^z nebo kde Mi, je technecium,

    M₂ je technecium nebo rhenium, alespoň jedna ze skupin R nebo R* je -(A)_p-R³ a

    A, R³, Yj, a p mají význam uvedený výše.
15. 15. Komplex podle nároku 11, kde technecium je komplexováno se sloučeninou vybranou ze souboru zahrnujícího

    3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion—dioxim,

    11- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioxim,

    12- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazadodekan-2,10-dion-dioxim,

    -81 CZ 295519 B6 l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,5,9,9-pentamethyl-4,5,8-triazaundekan-2,10-dion-dioxim,

    I- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,6,10,10-pentamethyl-5,6,9-triazadodekan-3,l 1-dion-dioxim,

    3.3.9.9- tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion—dioxim,

    II- (2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, l-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, 12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-7-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioxim, 12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-dodekandion-dioxim,

    1.13- bis-(2-nitro-l H-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-5,9-diaza-3,11-tridekandion-dioxim, l-//2-nitro-lH-imidazol-l-yl)acetyl/amino/-3,3,9,9-tetra-methyl-5-oxa-^l,8-diaza-2,10-undekandion-dioxim, l-/2-hydroxy-3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)propoxy/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-

    2.10- undekandion-dioxim, l-hydroxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-1 H-imidazol-1 -yl)-7-oxa-4,8-diazadodekan-

    2.10- dion-dioxim,

    3.3.9.9- tetramethyl-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10dion-dioxim,

    4.4.10.10- tetramethyl-1,13-bis-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-6-oxa-5,9-diazatri-dekan-3,11-dion-dioxim,

    1.13- bis-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-4,4,10,10-tetramethyl-6-oxa-7-(hydroxymethyl)-5,9-diaza-3,11-dodekandion-dioxim,

    12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-3,3,9,9-tetramethyl-6-(hydroxymethyl)-7-oxa-4,8-diaza-

    2.10- dodekandion-dioxim,

    3.3.9.9- tetramethyl-6-//3-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-propoxy/methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim, l-ethoxy-3,3,9,9-tetramethyl-12-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)-6-/(2-nitroimidazol-l-yl)methyl/-7-oxa-4,8-diaza-dodekan-2,10-dion-dioxim,

    3.3.9.9- tetramethyl-l-ethoxy-6-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-5-oxa-4,8-diazaundekan-

    2.10- dion-dioxim,

    4.4.10.10- tetramethyl-7-/ (2-nitro-1 H-imidazol-l-yl)-methyl/-6-oxa-5,9-diazatridekan-3,11— dion-dioxim,

    4.4.10.10- tetramethyl-7-/(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-8-oxa-5,9-diazapentadekan-

    3,11-dion-dioxim,

    5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,9-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12-dion-dioxim,

    5,5,11,1 l-tetramethyl-l-(5-nitro-2-furyl)-2,7-dioxa-6,10-diazatetradekan-4,12-dion-dioxim,

    3.3.9.9- tetramethyl-l-//(5-nitro-2-furyl)karbonyl/amino/-5-oxa-4,8-diazaundekan-2,10-diondioxim a

    3.3.6.9.9- pentamethyl-5-oxa-4,8-diaza-4,8-diazaundekan-2,10-dion-dioxim.
16. 16. Komplex podle nároku 15, kterým je oxo/(R)-6-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato/-(3-)-N,N' ,N'' ,N'' 7technecium-^99mT c (V)nebo

    -82CZ 295519 B6 oxo/(S)-6-(2-nitro-lH-imidazol-l-yl)methyl/-3,3,9,9-tetramethyl-5-oxa-4,8-diaza-2,10-undekandion-dioximato/-(3-)-N,N',N”,N7technecium-^99mTc (V).
17. 17. Komplex podle nároku 11 pro použití při diagnostice.
18. 18. Komplex podle nároku 17, kde kovem uvedeného komplexu je technecium.
19. 19. Komplex podle nároku 17 pro použití při zobrazení hypoxické tkáně.
20. 20. Komplex podle nároku 11 pro použití v terapii.
21. 21. Komplex podle nároku 20, kde kovem uvedeného komplexu je rhenium.
22. 22. Kit, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelné redukční činidlo.
23. 23. Kit podle nároku 22, který obsahuje jedinou lahvičku s obsahem sloučeniny podle nároku 1 a uvedeného redukčního činidla.
24. 24. Kit podle nároku 22, který obsahuje první a druhou lahvičku, kde první lahvička obsahuje sloučeninu podle nároku 1 a druhá lahvička obsahuje uvedené redukční činidlo.
25. 25. Způsob stereoselektivní přípravy sloučeniny podle nároku 10, vy z n a č uj í c í se tím, že

    i) nechá se reagovat (S)-(+)-epichlorhydrin nebo (R)-(-)-epichlorhydrin s ftalimidem za vzniku stereoizomeru l-chlor-3-ftalimido-2-propanolu, ii) kontaktuje se produkt z kroku i) s činidlem tvořícím epoxidový kruh pro získání stereoizomeru N-(2,3-epoxypropyl)-ftalimidu, iii) kontaktuje se produkt z kroku ii) s bází a 2-nitro-imidazolem pro získání stereoizomeru

    2- /2-hydroxy-2-(nitro-lH-imidazol-l-yl)ethyl/-lH-izoindol-l,3(2H)-dionu, iv) kontaktuje se produkt z kroku iii) s hydrazinem a potom s bází a di-terc-butyl-dikarbamátem pro získání stereoizomeru a-/(t-Boc-amino)methyl/-2-nitro-lH-imidazol-l-ethanolu,

    v) kontaktuje se produkt z kroku iv) s N-hydroxyftalimidem, frifenylfosfínem a diethylazodikarboxylátem pro získání stereoizomeru 2-/l-/(t-Boc-amino)methyl/-2-(2-nitro-lH-imidazoll-yl)ethoxy/-lH-izoindol-l,3(2H)-dionu, vi) kontaktuje se produkt z kroku v) s hydrazinem pro získání stereoizomeru l-/2-(aminooxy)-

    3- (t-Boc-amino)propyl/-2-nitro-1 H-imidazolu, vii) podrobí se deprotekci produkt z kroku vi) pro získání stereoizomeru l-/3-amino-2-(aminooxy)propyl/-2-nitro-l H-imidazolu a viii) kontaktuje se produkt z kroku vii) se 3-chlor-3-methyl-2-nitrosobutanem za přítomnosti terciárního aminu pro získání sloučeniny podle nároku 10.