CZ294206B6

CZ294206B6 - Peptid a farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ294206B6
Application number: CZ19992414A
Authority: CZ
Inventors: Chapusácatherine
Original assignee: Laboratoireálaphalá}Laboratoireádeápharmacologieáa
Priority date: 1997-01-07
Filing date: 1998-01-06
Publication date: 2004-10-13
Also published as: FR2758143A1; ZA9894B; US6432400B1; ATE273995T1; HUP0001458A2; CN1248264A; CZ241499A3; WO1998030588A1; BR9806857A; AU727469B2; DE69825733D1; DE69825733T2; FR2758143B1; EP0970118A1; EP0970118B1; CA2277778C; CA2277778A1; AU5868698A; NZ337087A; HUP0001458A3

Abstract

Řešení se týká peptiduŹ který je specifickým inhibitorem pankreatické lipázy a je vhodný pro použití při léčení onemocnění srdečního a cévního systémuŹ hyperlipemie a obezity@ Peptid je tvořen C@terminálním fragmentem pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu@ Součást řešení tvoří rovněž farmaceutický prostředek s obsahem tohoto peptiduŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká peptidů, které jsou specifickými inhibitory pankreatické lipázy a jejich použití klečení a prevenci onemocnění srdce a cév, hyperlipemie a obezity, mimoto je peptidy možno použít jako diagnostické látky a při řízené lipolýze triglyceridů.

Dosavadní stav techniky

Tuky v potravě představují účinný zdroj energie pro organismus. Množství energie, metabolizované z lipidů je podstatně vyšší než množství energie, metabolizované z uhlohydrátů nebo bílkovin. Avšak za předpokladu, že jsou všechny lipidy v potravě v organismu využity, může přebytek lipidů způsobit podstatné zdravotní poruchy. Jde zejména o poruchy srdečního a cévního systému, hyperlipemii a obezitu.

Tyto poruchy jsou často pozorovány v průmyslově vyspělých státech, kde obyvatelstvo má ve stravě obvykle příliš vysoké množství nasycených tuků.

Aby bylo možno odstranit tyto patologické stavy, je důležité omezit tuky v potravě, toto opatření však není vždy dostatečné. Některé tuky je totiž možno z potravy snadno odstranit, jde například o máslo, oleje a podobně, jiné tuky jsou však integrovány do potravy, například do masa, mléčných produktů a podobně a jejich odstranění je nesnadné.

V případě zjištění, že dietní opatření není dostatečné, navrhuje se farmakologické léčení. Většina postupů si klade za cíl snížit hyperlipemii například použitím inhibitorů syntézy cholesterolu.

V současné době se význam soustředí na získání látek, které by vyvolaly obecnější inhibici využití tuků.

Jedním ze směrů, který byl zvláště sledován, je inhibice pankreatické lipázy, která je klíčovým enzymem při štěpení triglyceridů v potravě. Štěpení látek typu triglyceridů, které tvoří přibližně 95 % lipidů začíná u člověka lipázou ze žaludku a pak pokračuje ve střevě působením pankreatické lipázy. Tento enzym štěpí triglyceridy na volné mastné kyseliny a na 2-monoglyceridy, polárnější produkty hydrolýzy, které jsou schopné projít membránou enterocytů po začlenění do směsných micel žlučových solí a fosfolipidů.

Pankreatická lipáza proto hraje úlohu při vzniku chorob, spojených s přítomností přebytku lipidů, jako jsou srdeční a cévní choroby, hyperlipemie a obezita vzhledem k tomu že umožní asimilaci všech triglyceridů z potravy. Mimoto zahajuje tento enzym vstřebování cholesterolu, protože také rozpustnost cholesterolu se zvyšuje ve směsných micelách s vysokým obsahem mastných kyselin.

Působení pankreatické lipázy probíhá v několika stupních. Jde o adsorpci enzymů ve střevě na povrch tuků v přítomnosti žlučových solí a kolipázy, jejichž úlohou je zakotvit lipázu na povrchu, načež dochází khydrolýze sm-l,3-esterové vazby triacylglycerolu, podle publikace C. Chapus a další, FEBS Letters, 1975, 58, 1, 155-158.

Při trávení triglyceridů tedy dochází k interakcím lipázy a kolipázy na povrchu lipidů.

Například lipáza vepřového původu je glykoprotein s obsahem 449 aminokyselin, jehož glykanové řetězce, jsou vázány na zbytek asparaginu Asn v poloze 166. Enzym obsahuje dvě oblasti oddělené vazbou Phe³³⁶-Ala³³⁷ podle publikace M. Bousset-Rossp a další, FEBS Letters, 1985,

- 1 CZ 294206 B6

182, 2, 323-326. Každá doména obsahuje rozpoznávací místo, a to N-koncová doména místo pro rozpoznání povrchu nebo rozhraní lipidů a místo pro hydrolýzu jako takovou a rozpoznávací místo pro pomocný enzym kolipázu v C-koncové oblasti. N-koncová oblast, tvořená zbytky 1335, která nese účinnou oblast enzymu, je oddělena od C-koncové oblasti, tvořené zbytky 336449 úzkou oblastí, která je velmi odolná proti proteolýze. Tato organizace do dvou oblastí odpovídá dvěma svrchu uvedeným specifickým funkcím. N-terminální oblast je zodpovědná za katalýzu, kdežto C-terminální obast se účastní rozpoznání kolipázy podle A. Abousalham a další, Protein Engineering, 1992, 5, 1, 105-111.

Kolipáza je malá molekula s molekulovou hmotností 10000, která je vysoce zesítěná vzhledem k přítomnosti pěti disulfidových můstků. Nese tři rozpoznávací místa, podstatná pro funkci enzymu, a to rozpoznávací místo povrchu nebo rozhraní podle H. van Tilbeurgh a další, Nátuře, 1993, 362, 814-820, rozpoznávací místo pro lipázu podle C. Chaillan a další, FEBS Letters, 1989, 257, 2, 443^146 a H. van Tilbergh a další, Nátuře, 1992, 359, 159-162, a místo pro rozpoznání micel podle J. Hermoso a další, ΕΝ'ΜΒΟ J., 1997, 16, 18, 5531-5536. Tato tri místa jsou topologicky odlišena.

Rozsáhlé výzkumy, prováděné po řadu let, umožnily lépe porozumět vztahům mezi strukturou a funkcí v systému pankreatické lipázy a kolipázy podle svrchu uvedené publikace C. Chaillan a dalších, 1989.

Další strukturní výzkumy obou typů lidské lipázy (Winkler F. K. a další, Nátuře, 1990, 343, 771-774) a koňské lipázy (B. Kerfelec a další, Eur. J. Biochem., 1992, 206, 279-287 a Y. Bouřné a další, J. Mol. Biol., 1994, 238, 709-732) umožnily potvrdit existenci obou svrchu uvedených oblastí v lipázách různého původu.

Rozeznání lipázy a kolipázy zvláště zahrnuje hydrofobní interakce (N. Mahé-Gouhier a další, BGA, 1988, 962, 91-97) a elektrostatické interakce.

Pokusy s kovalentní vazbou mezi pankreatickou lipázou a kolipázou a oddělení trojrozměrné struktury komplexu lipázy a kolipázy v oblasti 3,1 A vedly k identifikaci rozpoznávacích oblastí obou molekul v roztoku.

K inhibici pankreatické lipázy a dosažení léčebného účinku při hyperlipemii a obezitě byly navrhovány různé přístupy.

Jedním z nich bylo použití kovalentních inhibitorů, schopných se vázat na účinnou část enzymu. Je možno uvést například tetrahydrolipstatin, THL, (US 4 598 089; P. Hadvary a další, J. Biol. Chemistry, 1991, 226, 4, 2021-2027; D. Haermier a další, FEBS Letters, 1991, 286, 1, 186-188), úplné inhibice lipolytické účinnosti je možno dosáhnout dávkou 1 mol THL/mol enzymu nebo dávkou 10 až 400 mg dvakrát denně (J. Hauptman a další, Am. J. Clin. Nutr., 1992, 55, 309S313S), tento postup však má celou řadu nevýhod z nichž hlavní je nedostatek specifičnosti. Účinná látka totiž není specifická pro pankreatickou lipázu a vyvolává inhibici dalších lipáz, jako karboxylesterlipázy, lipázy ze žaludku a lipázy, stimulované žlučovými solemi vlidském mléce.

Další možností byla definice povahy povrchu nebo rozhraní přidáním amfifilních bílkovin (Gargouri Y. a další, J. Biol. Chem., 1985, 260, 2268-2273), smáčedel (Gargouri Y. a další, J. Lip. Res., 1983, 24, 1336-1342), nebo vláknitých materiálů (Borel P. a další, Am. J. Clin. Nutr., 1989, 49, 1192-1202), tento postup však májen relativní účinnost.

Mimoto nesou s sebou oba přístupy vysoké riziko nežádoucích účinků, jako jsou nucení zvracení a podobě.

-2CZ 294206 B6

Vynález si proto klade za úkol navrhnout nový inhibitor pankreatické lipázy, který by lépe odpovídal potřebám praktické aplikace než dosud známé inhibitory lipázy, zejména by měl být skutečně specifický pro pankreatickou lipázu.

Podstata vynálezu

Postatu vynálezu tvoří peptid, který obsahuje C-terminál fragment pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu. Tento peptid je určen pro použití k léčebným účelům, zvláště pro léčení hyperlipemií, srdečních a cévních onemocnění a obezity.

Podle výhodného provedení vynálezu jde o C-terminální fragment pankreatické lipázy, které se volí z čištěné nebo rekombinantní pankreatické lipázy člověka, vepře nebo koně.

Zcela neočekávaně umožňuje C-terminál peptid těchto různých pankreatických lipáz kompetici mezi peptidem a nativní lipázou o kolipázu, čímž podstatně snižuje lipolytickou účinnost lipázy.

Podávání takového peptidu tedy snižuje účinnost pankreatické lipázy a překvapivě vyvolává alespoň částečnou inhibici hydrolázy triglyceridů v potravě. Inhibiční účinek C-terminálního peptidu na lipolýzu tedy způsobí, že triglyceridy nebudou vstřebávat.

Afinita tohoto C-terminálního peptidu in vitro je vzhledem ke kolipáze v roztoku řadu 10⁶ a na lipidovém rozhraní řádu 2 x 10⁸ M.

K dosažení požadovaného účinku, tzn. afinity na rozhraní řádu 2 x 10⁸ M se s výhodou podává C-terminální peptid v dávkách 0,5 až 10 mg/den rozděleně v 1 až 3 dílčích dávkách, což odpovídá dávce 0,2-10 mg na jednu dílčí dávku.

Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek obsahující C-terminální peptid pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu a nejméně jeden farmaceuticky přijatelný nosič.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu je s výhodou ve formě, obsahující jednotlivou dávku a je s výhodou vhodný pro perorální podání, může jít o kapsle z měkké nebo tvrdé želatiny, tablety, roztoky, suspenze a emulze.

Farmaceutický prostředek tohoto typu je s výhodou určen pro perorální podání a současně upraven tak, aby k jeho vstřebávání došlo až za žaludkem.

Vynález předpokládá také jiné použitá C-terminálního peptidu pankreatické lipázy, například jako diagnostický prostředek, zejména při provádění imunoenzymatických zkoušek na lipázu kompetitivního typu a při uskutečnění řízené lipolýzy triglyceridových substrátů.

Vynález bude podrobněji popsán v souvislosti s přiloženými výkresy.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 a 2 znázorňují křivky, získané z C-terminálního peptidu s kolipázou nebo bez ní ve vodném roztoku na obr. 1 a v přítomnosti tributyrinu a vody na obr. 2.

Obr. 3 a 4 znázorňují inhibici účinnosti lipázy C-terminálním peptidem, substrátem je trioleion fosfolipidy a žlučové soli, a to v nepřítomnosti (obr. 3) nebo přítomnosti (obr. 4) kyseliny olejové.

- J CZ 294206 B6

Vynález bude osvětlen následujícími příklady, které nemají sloužit komezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Izolace C-terminálního peptidu vepře

Nejprve se uskuteční čištění pankreatické lipázy a kolipázy.

Pankreatická lipáza vepře se čistí podle publikace Rovery M. a další, Biochim. Biophys Acta, 1987, 525, 373-379 z práškového acetonového extraktu slinivky břišní.

Kolipáza vepře se čistí podle publikace C. Chapus a další (Eur. J. Biochem., 1982, 115, 99-105).

Koncentrace bílkoviny se stanoví při 280 nm při použití molekulového absorpčního koeficientu 6,65 x 10⁴/M/cm pro lipázu a 0,4 x 10⁴/M/cm pro kolipázu.

Dále se provádí čištění a analýza C-terminálního peptidu pankreatické lipázy vepře.

100 mg lipázy vepře se rozpustí ve 20 ml pufru 60 mM hydrogenuhličitanu amonného o pH 8,5 s obsahem 1 mM benzamidinu.

mg chymotrypsinu, zpracovaného působením tosyllysinchlormethylketonu, TLCK, se přidá ke svrchu uvedené směsi, která se pak inkubuje 18 hodin při 37 °C. V různých časových intervalech se odebírají podíly směsi, které se analyzují SDS-PAGE a podrobí zkouškám na účinnost lipázy.

Působení chymotrypsinu se zastaví přidáním 0,2 mM fenylmethylsulphonyl fluoridu, PMSF.

Štěpená směs se nechá projít molekulovým sítem na sloupci ultrogel AcA 54 (2,5 x 200ml), v rovnovážném stavu v pufru 10 mM Tris-HCl o pH 7,5 s obsahem 0,2 NaCl a 1 mM benzamidinu, k eluci se užije tentýž pufr.

Analýza aminokyselin se provádí automatickým analyzátorem Beckman 6300 po 24 hodinách hydrolázy vzorků v uzavřených zkumavkách s obsahem 6 M třikrát destilovaná HC1. N-terminální sekvence peptidu se získá edmanovou degradací při použití analyzátoru sekvence (Applied Biosystems 470A). Získané fenylthiohydantoiny se analyzují pomocí HPLC (sloupec Cl8, Brownlee, 5 mikrometrů, 2,1 x 220 mm. K eluci se užije gradient 10-46% metanolu v pufru s 5 mM octanem sodným o pH 4,84.

Získané fragmenty se podrobí elektroforéze na gelu (SDS-PAGE) podle Laemmli, Nátuře, 1970, 227, 680-685. Bílkoviny a peptidové fragmenty se barví briliantovou modří Coomassie, řezy gelu se odbarví směsí ethanolu, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 5:7,5:87,5.

Peptidy, vzniklé proteolytickým štěpením se ve dvojím provedení nanesou na 18% polyakrylamidový gel a dělí elektroforézou v přítomnosti SDS.

Po přenesení na polyvinylidendifluorid, PVDF, se jedna dráha barví ke zjištění polohy C-terminálního peptidu, druhá dráha se vyřízne k provedení analýzy sekvence.

Analýza izolovaného a čištěného C-terminálního peptidu pomocí SDS-PAGE a analýza aminokyselin prokazuje, že peptid má očekávanou molekulovou hmotnost a očekávanou sekvenci aminokyselin podle svrchu uvedených publikací N. Mahé-Gouhier a další, 1988, a M. BoussetRiso a další, 1985. Analýzou sekvence N-terminální části řetězce je možno prokázat následující sekvenci zbytků aminokyselin;

-4CZ 294206 B6

Ala-Arg-Trp-Arg-Tyr-Lys-Val-Ser, což prokazuje, že chymotripsin štěpí sekvenci v místě vazby Phe³³⁶-Ala³³⁷, to znamená ve spojení C- a N-terminální oblasti pankreatické lipázy.

Příklad 2: Průkaz interakce C-terminálního peptidů s kolipázou ve vodném roztoku.

Interakce C-terminální oblasti s kolipázou ve vodném prostředí bez lipidu byla měřena spektrofluorometricky.

Emisní fluorescenční spektra C-terminálního peptidů byla zaznamenána spektrofluorometrem kontrol SMF 235, opatřeným komůrkou s termostatem a magnetickým míchadlem. Mimoto byl spektrofluorometr spojen s počítačem Apple Ile.

Všechny pokusy byly prováděny při 25 °C a při pH 7,5. Byla zvolena excitační vlnová délka 290 nm vzhledem k tomu, že pankreatická kolipáza vepře neobsahuje žádné tryptofonové zbytky a že tedy emise fluorescence pochází pouze z tryptofonových zbytků C-terminálního peptidů v případě jeho interakce s kolipázou.

Emisní fluorescenční spektrum C-terminálního peptidů v konečné koncentraci 0,26 x ΙΟ'⁶ M v 10 nM Tris-HCl pufru o pH 7,5 s obsahem 0,1 M NaCl se měří mezi 300 a 400 nm. Zásobní roztok kolipázy se připraví v tomtéž pufru. Koncentrace kolipázy se mění v rozmezí 2,8 x 10'⁸až 1,4 x ΙΟ’⁶ M.

Vyhodnocení disociační konstanty se provádí při použití následující Scatchardovy rovnice

Lb ΓΙΡθ Lb

L_f K_d K_d kde Lb a Lf jsou koncentrace vázané kolipázy a volné kolipázy v rovnovážném stavu, P_o je celková koncentrace C-terminálního peptidů a K_d je disociační konstanta.

Výsledky

Diferenciální spektra /(kolipáza-C-terminální peptid)-C-terminální peptid/ mají sníženou emisi fluorescence.

Scatchardovy křivky, získané z těchto spekter, umožňují vyhodnotit disociační konstantu kolipázy a C-terminálního peptidů při koncentraci ΙΟ⁶ M v roztoku za svrchu uvedených podmínek, jak je znázorněno na obr. 1.

Na obr. 1 je na ose x množství vázaného C-terminálního peptidů (komplex kolipázy a C-terminálního peptidů, TC) a na ose y je poměr vázaného a volného C-terminálního peptidů, TC/T.

Příklad 3:

Průkaz interakce C-terminální oblast lipázy vepře s kolipázou a inhibiční účinek in vitro na lipázu na rozhraní při použití tributyrinu jako substrátu.

Dále jsou uvedeny podmínky pro měření inhibice účinnosti lipázy a kolipázy působením Cterminálního peptidů lipázy.

-5 CZ 294206 B6

Účinnost lipázy se měří titrací při 25 °C v prostředí tvořeném pufrem 1 mM Tris-HCI o pH 7,5 s obsahem 0,1 M NaCl a 5 mM chloridu vápenatého v přítomnosti taurodeoxycholátu sodného, NaTDC v konečné koncentraci 1 mM.

Účinnost kolipázy se měří za týchž podmínek, avšak vpřítomnosti 4 mM NaTDC.

Konečný objem je 15 ml. Použitým substrátem je emulgovaný tributyrin v konečné koncentraci 0,11 M.

Účinnost se měří v nepřítomnosti a pak v přítomnosti zvyšujících se množství zásobního roztoku C-terminálního peptidů 10'⁶ M.

Inhibice účinnosti lipázy C-terminálním peptidem lipázy.

Molární poměr lipázy a kolipázy = 1 a konečná koncentrace lipázy i kolipázy je 0,19 x 10⁹ M.

Koncentrace C-terminálního peptidů se mění v rozmezí 0,2 x 10'⁹ až 30 x 10'⁹.

Maximální inhibice účinnosti lipázy za uvedených podmínek je 50%.

Dále byla zkoumána inhibice účinnosti kolipázy C-terminálním peptidem lipázy.

Molární poměr lipázy a kolipázy je 0,75 (lipáza 0,19 x 10'⁹ M, kolipáza 0,25 x ΙΟ’⁹ M), koncentrace C-terminálního peptidů se mění jako svrchu. Maximální inhibice účinnosti kolipázy je rovněž 50%. Disociační konstanta odvozená z Scatchardovy křivky je 2 x 10'⁸ M (obr. 2).

Tyto výsledky prokazují, že v roztoku je afinita kolipázy pro C-terminál peptid téhož řádu jako afinita lipázy pro kolipázu a tato afinita se zvyšuje o faktor 50 až 100 v přítomnosti rozhraní mezi tributyrinem a vodou.

Příklad 4:

Průkaz interakce C-terminální oblasti lipázy s kolipázou v přítomnosti rozhraní tukových látek a inhibice účinnosti lipázy in vitro v přítomnosti emulgovaného trioleinu jako fyziologického substrátu.

Kinetické zkoušky na inhibici lipázy C-terminální oblastí byly prováděny v přítomnosti většího množství rozhraní lipidů než v příkladu 3, substrátem byl emulgovaný triolein.

Účinnost lipázy byla měřena titrací při udržování stálého pH při 25 °C v emulzi triolenu za podmínek, při nichž je účinnost enzymu příště závislá na přítomnosti kolipázy.

Reakční prostředí, použité v množství 15 ml obsahovalo 8 mM trioleinu, 4 mM taurodeoxycholátu sodného a 1 mM tris/HCl 7,5 s 5 mM CaCU a 0,1 M NaCl.

Pokusy na kompetici byly prováděny v přítomnosti nativní lipázy a kolipázy a v přítomnosti C-terminální oblasti, získané štěpením bílkoviny.

Dále bude popsána inhibice účinnosti lipázy C-terminální oblastí.

Konečná koncentrace lipázy a kolipázy byla 1,7 x ΙΟ’⁹ M a 1,4 x 10“⁹ M.

-6CZ 294206 B6

Molární poměr lipázy a kolipázy byl 1,2. Pro koncentraci C-terminální oblasti 2 x ΙΟ'⁷ M byla maximální inhibice přibližně 50 %.

Příklad 5: Průkaz interakce C-terminální oblasti lipázy vepře s kolipázou a inhibiční účinnost na lipázu in vitro na rozhraní za fyziologičtějších podmínek (substrát: triolein, fosfolipidy a žlučové soli).

Inhibice účinnosti lipázy C-terminálním peptidem lipázy se měří jako v příkladu 3, avšak použitý substrát je tvořen emulzí triglyceridů s dlouhým řetězcem (10 mM trioleinu) v přítomnosti fosfolipidů (poměr trioleinu k lecitinu = 20) a směsi žlučových solí (6 mM) v nepřítomnosti (obr. 3) nebo v přítomnosti (obr. 4) kyseliny olejové (5 mM). Kyselina olejová je produkt lipolýzy. Jakmile se potrava dostane do dvanáctníku, část triglyceridů je hydrolyzována a ve dvanáctníku jsou přítomny mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, jako kyselina olejová. Tyto volné mastné kyseliny se budou mísit se žlučí a budou se také zčásti nacházet na lipidovém rozhraní. Zrají tedy svou úlohu při lipolýze.

Výsledky

Ve všech případech bylo dosaženo 50% inhibice lipolýzy v přítomnosti 2 x 10'⁷ M C-terminálního peptidu, což znamená pětinásobné zvýšení afinity C-terminální oblasti pro kolipázu v přítomnosti lipidového rozhraní ve srovnání s hodnotami, získanými v nepřítomnosti lipidového rozhraní (obr. 1)

Z toho, co bylo uvedeno, je zřejmé, že vynález nemůže být omezen na některá výhodná provedení, která byla podrobněji popsána. Bylo by možno provést ještě řadu úprav, modifikací a variant, rovněž spadajících do rozsahu vynálezu.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Peptid, tvořený C-terminálním fragmentem pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu pro použití k léčebným účelům.

2. Peptid podle nároku 1, který je fragmentem pankreatické lipázy ze skupiny čištěné nebo rekombinantní lipázy člověka, vepře nebo koně.

3. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení hyperlipemie.

4. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení obezity.

5. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení srdečních a cévních onemocnění.

6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsa- huje peptid podle některého z nároků 1 až 5 spolu s alespoň jedním farmaceutickým nosičem.

7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že obsahuje v dávkové jednotce 0,2 až 10 mg peptidu podle některého z nároků 1 až 5. ⁸

8. Farmaceutický prostředek podle nároku 6 nebo 7, vy z n ač u j í c í se tím, že má formu jednotky, určené pro perorální podávání ze skupiny kapslí z tvrdé nebo měkké želatiny, tablet, roztoků, suspenzí nebo emulzí.

9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vy z n a č u j í c í se tím, že jednotka, určená pro perorální podávání, je odolná proti působení žaludeční šťávy.

5

10. Použití peptidu podle nároku 1 nebo 2 pro výrobu diagnostického prostředku.

11. Použití peptidu podle nároku 1 nebo 2 pro výrobu farmaceutického prostředku pro inhibici lipolýzy triglyceridových substrátů.