CZ241499A3 - Peptid a farmaceutický prostředek - Google Patents
Peptid a farmaceutický prostředek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ241499A3 CZ241499A3 CZ19992414A CZ241499A CZ241499A3 CZ 241499 A3 CZ241499 A3 CZ 241499A3 CZ 19992414 A CZ19992414 A CZ 19992414A CZ 241499 A CZ241499 A CZ 241499A CZ 241499 A3 CZ241499 A3 CZ 241499A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lipase
- colipase
- peptide
- terminal
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 102000005311 colipase Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108020002632 colipase Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 claims abstract description 8
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 claims abstract 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 34
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 34
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 34
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 34
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 claims description 32
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 9
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 claims 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 abstract description 10
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 23
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 23
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 23
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 19
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 8
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 8
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 8
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 8
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 6
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000876022 Homo sapiens Colipase Proteins 0.000 description 4
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 4
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 4
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 3
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 3
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031416 Gastric triacylglycerol lipase Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 235000013367 dietary fats Nutrition 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 108010091264 gastric triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229940045946 sodium taurodeoxycholate Drugs 0.000 description 2
- YXHRQQJFKOHLAP-FVCKGWAHSA-M sodium;2-[[(4r)-4-[(3r,5r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,12-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 YXHRQQJFKOHLAP-FVCKGWAHSA-M 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 229940127328 Cholesterol Synthesis Inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 102100036045 Colipase Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229940127470 Lipase Inhibitors Drugs 0.000 description 1
- AHLBNYSZXLDEJQ-UHFFFAOYSA-N N-formyl-L-leucylester Natural products CCCCCCCCCCCC(OC(=O)C(CC(C)C)NC=O)CC1OC(=O)C1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 101000875947 Sus scrofa Colipase Proteins 0.000 description 1
- RDFCSSHDJSZMTQ-ZDUSSCGKSA-N Tos-Lys-CH2Cl Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)CCl)C=C1 RDFCSSHDJSZMTQ-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000003367 kinetic assay Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N n-[(3s)-7-amino-1-chloro-2-oxoheptan-3-yl]-4-methylbenzenesulfonamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.CC1=CC=C(S(=O)(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)CCl)C=C1 YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229960001243 orlistat Drugs 0.000 description 1
- 229950010604 pancreas powder Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká peptidů, které jsou specifickými inhibitory pankreatické lipázy a jejich použití k léčení a prevenci onemocnění srdce a cév, hyperlipemie a obezity, mimoto je peptidy možno použít jako diagnostické látky a při řízené lipolýze triglyceridů.
Dosavadní stav techniky
Tuky v potravě představují účinný zdroj energie pro organismus. Množství energie, metabolizované z lipidů je podstatně vyšší než množství energie, metabolizované z uhlohydrátů nebo bílkovin. Avšak za předpokladu, že jsou všechny lipidy v potravě v organismu využity, může přebytek lipidů způsobit podstatné zdravotní poruchy. Jde zejména o poruchy srdečního a cévního systému, hyperlipemii a obezitu.
Tyto poruchy jsou často pozorovány v průmyslově vyspělých státech, kde obyvatelstvo má ve stravě obvykle příliš vysoké množství nasycených tuků.
Aby bylo možno odstranit tyto patologické stavy, je důležité omezit tuky v potravě, toto opatření však není vždy dostatečné. Některé tuky je totiž možno z potravy snadno odstranit, jde například o máslo, oleje a podobně, jiné tuky jsou však integrovány do potravy, například do masa, mléčných produktů a podobně a jejich odstranění je nesnadné.
V případě zjištění, že dietní opatření není dostatečné, navrhuje se farmakologické léčení. Většina postupů si klade za cíl snížit hyperlipemii například použitím inhibitorů syntézy cholesterolu.
V současné době se výzkum soustředí na získání látek, které by vyvolaly obecnější inhibici využití tuků.
• · • · · ·
-2Jedním ze směrů, který byl zvláště sledován, je inhibice pankreatické lipázy, která je klíčovým enzymem při štěpení triglyceridů v potravě. Štěpení látek typu triglyceridů, které tvoří přibližně 95 % lipidů začíná u člověka lipázou ze žaludku a pak pokračuje ve střevě působením pankreatické lipázy. Tento enzym štěpí triglyceridy na volné mastné kyseliny a na 2-monoglyceridy, polárnější produkty hydrolýzy, které jsou schopné projít membránou enterocytů po začlenění do směsných micel žlučových solí a fosfolipidů.
Pankreatická lipáza proto hraje úlohu při vzniku chorob, spojených s přítomností přebytku lipidů, jako jsou srdeční a cévní choroby, hyperlipemie a obezita vzhledem k tomu že umožní asimilaci všech triglyceridů z potravy. Mimoto zahajuje tento enzym vstřebávání cholesterolu, protože také rozpustnost cholesterolu se zvyšuje ve směsných micelách s vysokým obsahem mastných kyselin.
Působení pankreatické lipázy probíhá v několika stupních. Jde o adsorpci enzymů ve střevě na povrch tuků v přítomnosti žlučových solí a kolipázy, jejichž úlohou je zakotvit lipázu na povrchu, na čež dochází k hydrolýze sm-1,3-esterové vazby triacylglycerolu, podle publikace C. Chapus a další, FEBS Letters, 1975, 58, 1, 155-158.
Při trávení triglyceridů tedy dochází k interakcím lipázy a kolipázy na povrchu lipidů.
Například lipáza vepřového původu je glykoprotein s obsahem 449 aminokyselin, jehož glykanové řetězce jsou vázány na zbytek asparaginu Asn v poloze 166. Enzym obsahuje dvě oblasti oddělené vazbou Phe336-Ala337 podle publikace M. Bousset-Risso a další, FEBS Letters, 1985, 182, 2, 323-326. Každá doména obsahuje rozpoznávací místo, a to N-koncová doména • · • · · ···· ···· • · ···· ···· • ··· · ···· ··· ···
místo pro rozpoznání povrchu nebo rozhraní lipidů a místo pro hydrolýzu jako takovou a rozpoznávací místo pro pomocný enzym kolipázu v C-koncové oblasti. N-koncová oblast, tvořená zbytky 1-335, která nese účinnou oblast enzymu, je oddělena od C-koncové oblasti, tvořené zbytky 336-449 úzkou oblastí, která je velmi odolná proti proteolýze. Tato organizace do dvou oblastí odpovídá dvěma svrchu uvedeným specifickým funkcím. N-terminální oblast je zodpovědná za katalýzu, kdežto C-terminální oblast se účastní rozpoznávání kolipázy podle A. Abousalham a další, Protein Engineering, 1992, 5, 1, 105-111.
Kolipáza je malá molekula s molekulovou hmotností 10000, která je vysoce zesítěná vzhledem k přítomnosti., pěti disulfidových můstků. Nese tři rozpoznávací místa, podstatná pro funkci enzymu, a to rozpoznávací místo povrchu nebo rozhraní podle H. van Tilbeurgh a další, Nátuře, 1993, 362, 814-820, rozpoznávací místo pro lipázu podle C. Chaillan a další, FEBS Letters, 1989, 257, 2, 443-446 a H. van Tilbeurgh a další, Nátuře, 1992, 359, 159-162 a místo pro rozpoznání micel podle J. Hermoso a další, ΕΝ'ΜΒΟ J. , 1,997, 16, 18, 5531-5536. Tato tři místa jsou topologicky odlišena.
Rozsáhlé výzkumy, prováděné po řadu let, umožnily lépe porozumět vztahům mezi strukturou a funkcí v systému pankreatické lipázy a kolipázy podle svrchu uvedené publikace C. Chaillan a dalších, 1989.
Další strukturní výzkumy obou typů lidské lipázy (Winkler F. K. a další, Nátuře, 1990, 343, 771-774) a koňské lipázy (B. Kerfelec a další, Eur. J. Biochem., 1992, 206, 279-287 a Y. Bouřné a další, J. Mol. Biol., 1994, 238, 709-732) umožnily potvrdit existenci obou svrchu uvedených oblastí v lipázách různého původu.
• · · ·
-4Rozeznání lipázy a kolípázy zvláště zahrnuje hydrofobní interakce (N. Mahé-Gouhier a další, BBA, 1988, 962, 91-97) a elektrostatické interakce.
Pokusy s kovalentní vazbou mezi pankreatickou lipázou a kolipázou a oddělení trojrozměrné struktury komplexu lipázy a kolipázy v oblasti 3,1 A vedly k identifikaci rozpoznávacích oblastí obou molekul v roztoku.
K inhibici pankreatické lipázy a dosažení léčebného účinku pří hyperlipemii a obezitě byly navrhovány různé přístupy.
Jedním z nich bylo použití kovalentních inhibitorů, schopných se vázat na účinnou část enzymu. Je možno uvést například tetrahydrolipstatin, THL, (US 4 598 089; P. Hadvary a další, J. Biol. Chemistry, 1991, 226, 4, 2021-2027; D. Hermier a další, FEBS Letters, 1991, 286, 1, 186-188), úplné inhibice lipolytické účinnosti je možno dosáhnout dávkou 1 mol THL/mol enzymu nebo dávkou 10 až 400 mg dvakrát denně (J. Hauptman a další, Am. J. Clin. Nutr., 1992, 55, 309S-313S), tento postup však má celou řadu nevýhod z nichž hlavní je nedostatek specifičnosti. Účinná látka totiž není specifická pro pankreatickou lipázu a vyvolává inhibici dalších lipáz, jako karboxylesterlipázy, lipázy ze žaludku a lipázy, stimulované žlučovými solemi v lidském mléce.
Další možností byla modifikace povahy povrchu nebo rozhraní přidáním amfifilních bílkovin (Gargouri Y. a další,
J. Biol. Chem., 1985, 260, 2268-2273), smáčedel (Gargouri Y. a další, J. Lip. Res., 1983, 24, 1336-1342) nebo vláknitých materiálů (Borel P. a další, Am. J. Clin. Nutr., 1989, 49, 1192-1202), tento postup však má jen relativní účinnost.
• · · · • · • ·
-5Mimoto nesou s sebou oba přístupy vysoké riziko nežádoucích účinků, jako jsou nucení zvracení a podobně.
Vynález si proto klade za úkol navrhnout nový inhibitor pankreatické lipázy, který by lépe odpovídal potřebám praktické aplikace než dosud známé inhibitory lipázy, zejména by měl být skutečně specifický pro pankreatickou lipázu.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří peptid, který obsahuje C-terminální fregment pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu. Tento peptid je určen pro použití k léčebným účelům, zvláště pro léčení hyperlipemií, srdečních a cévních onemocnění a obezity.
Podle výhodného provedení vynálezu jde o C-terminální fragment pankreatické lipázy, která se volí z čištěné nebo rekombinantní pankreatické lipázy člověka, vepře nebo koně.
Zcela neočekávaně umožňuje C-terminální peptid těchto různých pankreatických lipáz kompetici mezi peptidem a nativní lipázou o kolipázu, čímž podstatně snižuje lipolytíckou účinnost lipázy.
Podávání takového peptidu tedy snižuje účinnost pankreatické lipázy a překvapivě vyvolává alespoň částečnou inhibici hydrolýzy triglyceridů v potravě. Inhibiční účinek C-terminálního peptidu na lipolýzu tedy způsobí, že triglyceridy nebudou vstřebávat.
Afinita tohoto C-terminálního peptidu in vitro je vzhledem ke kolipáze v roztoku řádu 106 M a na lipidovém rozhraní řádu 2 x 108 M.
K dosažení požadovaného účinku, tzn. afinity na rozhraní řádu 2 x 10® M se s výhodou podává C-terminální peptid v dávkách 0,5 až 10 mg/den rozděleně v 1 až 3 dílčích • · • · · · · · · · · • · · · ···· ··· ··· • · · · · · · dávkách, což odpovídá dávce 0,2 - 10 mg·. na jednu dílčí dávku.
Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek obsahující C-terminální peptid pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu a nejméně jeden farmaceuticky přijatelný nosič.
Farmaceutický prostředek podle vynálezu je s výhodou ve formě, obsahující jednotlivou dávku a je s výhodou vhodný pro perorální podání, může jít o kapsle z měkké nebo tvrdé želatiny, tablety, roztoky, suspenze a emulze.
Farmaceutický prostředek tohoto typu je s výhodou určen pro perorální podání a současně upraven tak, aby, k jeho vstřebávání došlo až za žaludkem.
Vynález předpokládá také jiné použití C-terminálního peptidů pankreatické lipázy, například jako diagnostický prostředek, zejména při provádění imunoenzymatických zkoušek na lipázu kompetitivního typu a při uskutečnění řízené lipolýzy triglyceridových substrátů.
Vynález bude podrobněji popsán v souvislosti s přiloženými výkresy.
Přehled obrázků na výkrese
Obr. 1 a 2 znázorňují křivky, získané z
C-terminálního peptidů s kolipázou nebo bez ní ve vodném roztoku na obr. 1 a v přítomnosti tributyrinu a vody na obr. 2.
Obr. 3 a 4 znázorňují inhibici účinnosti lipázy
C-termínálním peptidem, substrátem je triolein, fosfolípídy a žlučové soli, a to v nepřítomnosti (obr. 3) nebo přítomnosti (obr. 4) kyseliny olejové.
• · · · • · • · • 9
-7► » 9 <
I * · <
• 9 · · · I • <
• · 9 9
Vynález bude osvětlen následujícími příklady, které nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Izolace C-terminálního pektidu vepře
Nejprve se uskuteční čištění pankreatické lipázy a kolipázy.
Pankreatická lipáza vepře se čistí podle publikace Rovery M. a další, Biochim. Biophys. Acta, 1987, 525, 373-379 z práškového acetonového extraktu slinivky břišní.
Kolipáza vepře se čistí podle publikace C. Chapus a další (Eur. J. Biochem., 1982, 115, 99-105).
Koncentrace bílkoviny se stanoví při 280 nm při použití molekulového absorpčního koeficientu 6,65 x 104/M/cm pro lipázu a 0,4 x 104/M/cm pro kolipázu.
Dále se provádí čištění a analýza C-terminálního peptidu pankreatické lipázy vepře.
100 mg lipázy vepře se rozpustí ve 20 ml pufru 60 mM hydrogenuhličitanu amonného o pH 8,5 s obsahem 1 mM benzamidinu.
mg chymotrypsinu, zpracovaného působením tosyllysinchlormethylketonu, TLCK, se přidá ke svrchu uvedené směsi, která se pak inkubuje 18 hodin při 37 °C. V různých časových intervalech se odebírají podíly směsi, která se analyzují SDS-PAGE a podrobí zkouškám na účinnost lipázy.
Působení chymotrypsinu se zastaví přidáním 0,2 mM fenylmethylsulphonyl fluoridu, PMSF.
Štěpená směs se nechá projít molekulovým sítem na sloupci ultrogel AcA 54 (2,5 x 200ml), v rovnovážném stavu v pufru 10 mM Tris-HCL o pH 7,5 s obsahem 0,2 M NaCl a 1 mM benzamidinu, k eluci se užije tentýž pufr.
• « · · • · • · * • ·· · ··· · · · • · · • · · · · ·
Analýza aminokyselin se provádí automatickým analyzátorem Beckman 6300 po 24 hodinách hydrolýzy vzorků v uzavřených zkumavkách s obsahem 6 M třikrát destilovaná HCI. N-terminální sekvence peptidu se získá edmanovou degradací při použití analyzátoru sekvence (Applied Biosystems 470A). Získané fenylthiohydantoiny se analyzují pomocí HPLC (sloupec C18, Brownlee, 5 mikrometrů, 2,1 x 220 mm. K eluci se užije gradient 10-46 % metanolu v pufru s 5 mM octanem sodným o pH 4,84 .
Získané fregmenty se podrobí elektroforéze na gelu (SDS-PAGE) podle Laemmli, Nátuře, 1970, 227, 680-685. Bílkoviny a peptidové fragmenty se barví briliantovou modří. Coomassie, řezy gelu se odbarví směsí ethanolu, kyseliny octové a vody v objemovém poměru 5:7,5:87,5.
Peptidy, vzniklé proteolytickým štěpením se ve dvojím provedení nanesou na 18% polyakrylamidový gel a dělí elektroforézou v přítomnosti SDS.
Po přenesení na polyvinylidendifluorid, PVDF, se jedna dráha barví ke zjištění polohy C-terminálního peptidu, druhá dráha se vyřízne k provedení analýzy sekvence.
Analýza izolovaného a čištěného C-terminálního peptidu pomocí SDS-PAGE a analýza aminokyselin prokazuje, že peptid má očekávanou molekulovou hmotnost a očekávanou sekvenci aminokyselin podle svrchu uvedených publikací N. Mahé-Gouhier a další, 1988, a M. Bousset-Riso a další, 1985. Analýzou sekvence N-terminální části řetězce je možno prokázat následující sekvenci zbytků aminokyselin:
Ala-Arg-Trp-Arg-Tyr-Lys-Val-Ser, což prokazuje, že chymotripsin štěpí sekvenci v místě vazby Phe336-Ala337 , to znamená ve spojení C- a N-terminální oblastí pankreatické lipázy.
• · · ·
-9Příklad 2: Průkaz interakce C-terminálního peptidu s kolipázou ve vodném roztoku.
Interakce C-terminální oblasti s kolipázou ve vodném prostředí bez lipidu byla měřena spektrofluorometricky.
Emisní fluorescenční spektra C-terminálního peptidu byla zaznamenána spektrofluorometrem kontron SMF 235, opatřeným komůrkou s termostatem a magnetickým míchadlem. Mimoto byl spektrofluorometr spojen s počítačem Apple Ile.
Všechny pokusy byly prováděny při 25 °C a při pH 7,5. Byla zvolena excitační vlnová délka 290 nm vzhledem k tomu, že pankreatická kolipáza vepře neobsahuje žádné tryptofonové zbytky a že tedy emise fluorescence pochází pouze z tryptofonových zbytků C-terminálního peptidu v případě jeho interakce s kolipázou.
Emisní fluorescenční spektrum C-terminálního peptidu v konečné koncentraci 0,26 χ 10~6 M v 10 nM Tris-HCl pufru o pH 7,5 s obsahem 0,1 M NaCl se měří mezi 300 a 400 nm. Zásobní roztok kolipázy se připraví v tomtéž pufru. Koncentrace kolipázy se mění v rozmezí 2,8 x 1CV8 až 1,4 x 10D M.
Vyhodnocení disociační konstanty se provádí při použití následující Scatchardovy rovnice
Lb nP0 Lb
Lf Kb Kd kde Lb a Lf jsou koncentrace vázané kolipázy a volné kolipázy v rovnovážném stavu, Po je celková koncentrace C-terminálního peptidu a Kó je disociační konstanta.
Výsledky
Diferenciální spektra /(kolipáza-C-terminální peptid) - C-terminální peptid/ mají sníženou emisi fluorescence.
• ·
-10Scatchardovy křivky, získané z těchto spekter, umožňují vyhodnotit disociační konstantu kolipázy a C-terminálního peptidu při koncentraci ΙΟ'6 M v roztoku za svrchu uvedených podmínek, jak je znázorněno na obr. 1.
Na obr. 1 je na ose x množství vázaného C-terminálního peptidu (komplex kolipázy a C-terminálního peptidu, TC) a na ose y je poměr vázaného a volného C-terminálního peptidu, TC/T.
Příklad 3:
Průkaz interakce C-terminální oblasti lipázy vepře s kolipázou a inhibiční účinek in vitro na lipázu na rozhraní při použití tributyrinu jako substrátu.
Dále jsou uvedeny podmínky pro měření inhibice účinností lipázy a kolipázy působením C-terminálního peptidu lipázy.
Účinnost lipázy se měří titrací při 25 °C v prostředí tvořeném pufrem 1 mM Tris-HCl o pH 7,5 s obsahem 0,1 M NaCl < 5 mM chloridu vápenatého ve přítomnosti taurodeoxycholátu sodného, NaTDC v konečné koncentraci 1 mM.
Účinnost kolipázy se měří za týchž podmínek, avšak v přítomnosti 4 mM NaTDC.
Konečný objem je 15 ml. Použitým substrátem je emulgovaný tributyrin v konečné koncentraci 0,11 M.
Účinnost se měří v nepřítomnosti a pak v přítomnosti zvyšujících se množství zásobního roztoku C-terminálního pep· tidu 10'6 M.
Inhibice účinnosti lipázy C-terminálním peptidem lipázy.
Molární poměr lipázy a kolipázy = 1 a konečná koncentrace lipázy i kolipázy je 0,19 x 109 M.
• ·
-11Koncentrace C-terminálního peptidu se mění v rozmezí 0,2 x 10’9 až 30 x 10'9.
Maximální inhibice účinnosti lipázy za uvedených podmínek je 50 %.
Dále byla zkoumána inhibice účinnosti kolipázy C-terminálním peptidem lipázy.
Molární poměr lipázy a kolipázy je 0,75 (lipáza 0,19 x 10'9 M, kolipáze 0,25 x ΙΟ'9 Μ) , koncentrace C-terminálního peptidu se mění jako svrchu. Maximální inhibice účinnosti kolipázy je rovněž 50%. Disociační konstanta odvozená z Scatchardovy křivky je 2 x 10'8 M (obr. 2).
Tyto výsledky prokazují, že v roztoku je afinita kolipázy pro C-terminální peptid téhož řádu jako afinita lipázy pro kolipázu a tato afinita se zvyšuje o faktor 50 až 100 v přítomnosti rozhraní mezi tributyrinem a vodou.
Příklad 4:
Průkaz interakce C-terminální oblasti lipázy s kolipázou v přítomnosti rozhraní tukových látek a inhibice účinnosti lipázy in vitra v přítomnosti emulgovaného trioleinu jako fyziologického substrátu.
Kinetické zkoušky na inhibici lipázy C-terminální oblastí byly prováděny v přítomnosti většího množství rozhraní lipidů než v příkladu 3, substrátem byl emulgovaný triolein.
Účinnost lipázy byla měřena titrací při udržování stálého pH při 25 °C v emulzy trioleinu za podmínek, při nichž je účinnost enzymu přísně závislá na přítomnosti kolipázy.
• · · « · • · 9 · 9 t I f » • · · · · ·*·· ·*» · ···· ··· ···
Reakční prostředí, použité v množství 15 ml obsahovalo 8 mM trioleinu, 4 mM taurodeoxycholátu sodného a 1 mM tris/HCl o pH 7,5 s 5 mM CaCl2 a 0,1 M NaCl.
Pokusy na kompetici byly prováděny v přítomnosti nativní lipázy a kolipázy a v přítomnosti C-terminální oblasti, získané štěpením bílkoviny.
Dále bude popsána inhibice účinnosti lipázy C-terminální oblastí.
Konečná koncentrace lipázy a kolipázy byla 1,7 x 109 M a 1, 4 χ 109 M.
Molární poměr lipázy a kolipázy byl 1,2. Pro koncentraci C-terminální oblasti 2 x 10' M byla maximální inhibice přibližně 50 %.
Příklad 5: Průkaz interakce C-terminální oblasti lipázy vepře s kolipázou a inhibiční účinnost na lipázu in vitro na rozhraní za fysiologičtějších podmínek (substrát: trioleín, fosfolipidy a žlučové soli) .
Inhibice účinnosti lipázy C-terminálním peptidem lipázy se měří jako v příkladu 3, avšak použitý substrát je tvořen emulzí triglyceridů s dlouhým řetězcem (10 mM trioleinu) v přítomnosti fosfolipidů (poměr trioleinu k lecithinu = 20) a směsi žlučových solí (6 mM) v nepřítomnosti (obr. 3) nebo v přítomnosti (obr. 4) kyseliny olejové (5 mM). Kyslina olejová je produkt lipolysy. Jakmile se potrava dostane do dvanáctníku, část triglyceridů je hydrolyzována a ve dvanáctníku jsou přítomny mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, jako kyselina olejová. Tyto volné mastné kyseliny se budou mísit se žlučí a budou se také zčásti nacházet na lipidovém rozhraní. Hrají tedy svou úlohu při lipolyse.
• ·
-13Výsledky
Ve všech případech bylo dosaženo 50% inhibice lipolysy v přítomnosti 2 χ 10“7 M C-terminálního peptidů, což znamená pětinásobné zvýšení afinity C-terminální oblasti pro kolipázu v přítomnosti lipidového rozhraní ve srovnání s hodnotami, získanými v nepřítomnosti lipidového rozhraní (obr. 1) ·
Z toho, co bylo uvedeno, je zřejmé, že vynález nemůže být omezen na některá výhodná provedení, která byla podrobněji popsána. Bylo by možno provést ještě řadu úprav, modifikací a variant, rovněž spadajících do rozsahu vynálezu.
OKY
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁR1. Peptid, tvořený C-terminálním fragmentem pankreatické lipázy včetně rozpoznávacího místa pro kolipázu pro použití k léčebným účelům,
- 2. Peptid podle nároku 1, který je fragmentem pankreatické lipázy ze skupiny čištěné nebo rekombinantní lipázy člověka, vepře nebo koně.
3. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení hyperlipemie. 4. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení obesity. 5. Peptid podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčení sr dečních a cévních ' onemocnění - 6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje peptid podle některého z nároků 1 až 5 spolu s alespoň jedním farmaceutickým nosičem.
- 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že obsahuje 0,2 až 10 mg peptidu podle některého z nároků 1 až 5.
- 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že má formu jednotky, určené pro perorální podávání ze skupiny kapslí z tvrdé nebo měkké želatiny, tablet, roztoků, suspenzí nebo emulsí.
- 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že jednotka, určená pro perorální podávání je odolná proti působení žaludeční šťávy.• · · · • v • · · » · · ··· · ··· ··· • · · • · · · · ·
- 10. Použití peptidů podle nároku 1 nebo 2 pro výrobu diagnostického prostředku.
- 11. Použití peptidů podle nároku 1 nebo 2 pro výrobu farmaceutického prostředku pro inhibici lipolysy triglyceridových substrátů.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9700071A FR2758143B1 (fr) | 1997-01-07 | 1997-01-07 | Inhibiteurs specifiques de la lipase pancreatique et leurs applications |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ241499A3 true CZ241499A3 (cs) | 2000-01-12 |
CZ294206B6 CZ294206B6 (cs) | 2004-10-13 |
Family
ID=9502405
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19992414A CZ294206B6 (cs) | 1997-01-07 | 1998-01-06 | Peptid a farmaceutický prostředek |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6432400B1 (cs) |
EP (1) | EP0970118B1 (cs) |
CN (1) | CN1248264A (cs) |
AT (1) | ATE273995T1 (cs) |
AU (1) | AU727469B2 (cs) |
BR (1) | BR9806857A (cs) |
CA (1) | CA2277778C (cs) |
CZ (1) | CZ294206B6 (cs) |
DE (1) | DE69825733T2 (cs) |
FR (1) | FR2758143B1 (cs) |
HU (1) | HUP0001458A3 (cs) |
NZ (1) | NZ337087A (cs) |
WO (1) | WO1998030588A1 (cs) |
ZA (1) | ZA9894B (cs) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000226335A (ja) * | 1998-12-04 | 2000-08-15 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 経口用酵素製剤、酵素含有食材及び酵素製剤の服用方法 |
US6697668B2 (en) | 2001-01-25 | 2004-02-24 | Iomed, Inc. | Ocular iontophoretic device and method for using the same |
FR2824334B1 (fr) | 2001-05-03 | 2003-10-10 | Coletica | Procede pour tester une substance eventuellement active dans le domaine de la lipolyse et son utilisation principalement cosmetique |
US20040018197A1 (en) * | 2002-04-26 | 2004-01-29 | Promega Corporation | Treatment for weight loss |
US20040077530A1 (en) * | 2002-10-18 | 2004-04-22 | Robert Portman | Composition for reducing caloric intake |
EP1616194A2 (en) * | 2003-04-08 | 2006-01-18 | Genova, Ltd. | Secreted polypeptide species associated with cardiovascular disorders |
SE0302253D0 (sv) | 2003-08-21 | 2003-08-21 | Forskarpatent I Syd Ab | Lipase-colipase inhibitor |
GB0920633D0 (en) | 2009-11-25 | 2010-01-13 | Rdbiomed Ltd | Inhibition of pancreatic lipase |
FR2966734B1 (fr) | 2010-10-29 | 2014-07-18 | Max Rombi | Composition comprenant au moins une enzyme proteolytique pour son utilisation pour empecher la synthese des triglycerides |
US20130144540A1 (en) * | 2011-12-06 | 2013-06-06 | Palo Alto Research Center Incorporated | Constrained de novo sequencing of peptides |
WO2017079299A1 (en) * | 2015-11-03 | 2017-05-11 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Using colipase inhibitors to treat pancreatitis |
JP7224331B2 (ja) | 2017-07-12 | 2023-02-17 | メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ | 脂肪毒性損傷の低減のための化合物 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5248598A (en) * | 1989-05-25 | 1993-09-28 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
-
1997
- 1997-01-07 FR FR9700071A patent/FR2758143B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-01-06 WO PCT/FR1998/000009 patent/WO1998030588A1/fr active IP Right Grant
- 1998-01-06 BR BR9806857-1A patent/BR9806857A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-01-06 HU HU0001458A patent/HUP0001458A3/hu unknown
- 1998-01-06 EP EP98902026A patent/EP0970118B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-06 CZ CZ19992414A patent/CZ294206B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-01-06 NZ NZ337087A patent/NZ337087A/xx unknown
- 1998-01-06 CN CN98801703A patent/CN1248264A/zh active Pending
- 1998-01-06 AT AT98902026T patent/ATE273995T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-01-06 DE DE69825733T patent/DE69825733T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-06 AU AU58686/98A patent/AU727469B2/en not_active Ceased
- 1998-01-06 US US09/341,184 patent/US6432400B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-06 CA CA2277778A patent/CA2277778C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-07 ZA ZA9894A patent/ZA9894B/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2758143A1 (fr) | 1998-07-10 |
ZA9894B (en) | 1998-07-08 |
US6432400B1 (en) | 2002-08-13 |
ATE273995T1 (de) | 2004-09-15 |
HUP0001458A2 (hu) | 2000-10-28 |
CN1248264A (zh) | 2000-03-22 |
WO1998030588A1 (fr) | 1998-07-16 |
BR9806857A (pt) | 2000-03-14 |
AU727469B2 (en) | 2000-12-14 |
DE69825733D1 (de) | 2004-09-23 |
DE69825733T2 (de) | 2005-09-01 |
FR2758143B1 (fr) | 1999-02-19 |
EP0970118A1 (fr) | 2000-01-12 |
EP0970118B1 (fr) | 2004-08-18 |
CA2277778C (fr) | 2013-07-02 |
CA2277778A1 (fr) | 1998-07-16 |
AU5868698A (en) | 1998-08-03 |
CZ294206B6 (cs) | 2004-10-13 |
NZ337087A (en) | 2001-01-26 |
HUP0001458A3 (en) | 2001-04-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Liao et al. | Fat digestion by lingual lipase: mechanism of lipolysis in the stomach and upper small intestine | |
Gargouri et al. | Studies on the inhibition of pancreatic and microbial lipases by soybean proteins. | |
Stafforini et al. | Human plasma platelet-activating factor acetylhydrolase. Purification and properties. | |
Fernandez et al. | Comparative study on digestive lipase activities on the self emulsifying excipient Labrasol®, medium chain glycerides and PEG esters | |
VAHOUNY et al. | Sterol carrier and lipid transfer proteins | |
Eling et al. | A role for phospholipids in the binding and metabolism of drugs by hepatic microsomes. Use of the fluorescent hydrophobic probe 1-anilinonaphthalene-8-sulphonate | |
JP3072853B2 (ja) | 治療用に、組換方法で生産されたリパーゼ | |
CZ241499A3 (cs) | Peptid a farmaceutický prostředek | |
JP2003524421A (ja) | リパーゼ含有組成物およびこれらの使用方法 | |
CZ295329B6 (cs) | Použití fosfolipidů nebo směsí lipidů obsahujících fosfolipidy jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů | |
De Caro et al. | Characterization of pancreatic lipase-related protein 2 isolated from human pancreatic juice | |
Guerrieri et al. | Age-dependent changes in the mitochondrial F0F1 ATP synthase | |
Lairon et al. | Effects of bile lipids on the adsorption and activity of pancreatic lipase on triacylglycerol emulsions | |
Sayari et al. | Characterization of turkey pancreatic lipase | |
Crenon et al. | Pancreatic lipase-related protein type I: a specialized lipase or an inactive enzyme. | |
Bernbäck et al. | Bovine pregastric lipase: a model for the human enzyme with respect to properties relevant to its site of action | |
Bernbäck et al. | Human gastric lipase: The N‐terminal tetrapeptide is essential for lipid binding and lipase activity | |
Novotná et al. | Purification and characterisation of rape seed phospholipase D | |
Ehle et al. | Alkaline phosphatase of the calf intestine hydrolyzes phospholipids | |
Shirai et al. | Immunological studies on bovine milk lipoprotein lipase Effects of Fab fragments on enzyme activity | |
MITSUYAMA et al. | Purification and properties of galactosylceramide sulfatase activator from human liver | |
Shaw et al. | Identification in bovine liver plasma membranes of a Gq-activatable phosphoinositide phospholipase C | |
JPH10510166A (ja) | コレステロール吸収を減少するための方法および組成物 | |
EP0311163A2 (en) | Use of site-specific modified lipolytic enzymes for the selective hydrolysis of organized lipid structures | |
Rice | Secretory type II phospholipase A2 and the generation of intrauterine signals |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 19980106 |