CZ289942B6 - Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicid a biofungicidní prostředek jí obsahující, způsob výroby biofungicidního prostředku, způsob inhibování houbové infekce u rostlin a pouľití biofungicidu - Google Patents
Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicid a biofungicidní prostředek jí obsahující, způsob výroby biofungicidního prostředku, způsob inhibování houbové infekce u rostlin a pouľití biofungicidu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289942B6 CZ289942B6 CZ19962190A CZ219096A CZ289942B6 CZ 289942 B6 CZ289942 B6 CZ 289942B6 CZ 19962190 A CZ19962190 A CZ 19962190A CZ 219096 A CZ219096 A CZ 219096A CZ 289942 B6 CZ289942 B6 CZ 289942B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- dsm
- fungal
- fungal strain
- seeds
- treatment
- Prior art date
Links
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 title claims abstract description 57
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 241000142490 Clonostachys pityrodes Species 0.000 title claims abstract description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 title claims description 7
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 title claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 6
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 title abstract description 5
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 title description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 101150090280 MOS1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 101100401568 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MIC10 gene Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims abstract 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 9
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 9
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 9
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 7
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 5
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 94
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 85
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 39
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 38
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 37
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 33
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 33
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 25
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 24
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 24
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 24
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 21
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 17
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 16
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 15
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- BAZVSMNPJJMILC-UHFFFAOYSA-N triadimenol Chemical compound C1=NC=NN1C(C(O)C(C)(C)C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 BAZVSMNPJJMILC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 12
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 7
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 7
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 7
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 6
- 230000000853 biopesticidal effect Effects 0.000 description 6
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- PXMNMQRDXWABCY-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenyl)-4,4-dimethyl-3-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)pentan-3-ol Chemical compound C1=NC=NN1CC(O)(C(C)(C)C)CCC1=CC=C(Cl)C=C1 PXMNMQRDXWABCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 4
- 241000190150 Bipolaris sorokiniana Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241001459558 Monographella nivalis Species 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- PZBPKYOVPCNPJY-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(allyloxy)-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]imidazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1C(OCC=C)CN1C=NC=C1 PZBPKYOVPCNPJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 2
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 2
- 241000896533 Gliocladium Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 2
- 241001632427 Radiola Species 0.000 description 2
- 239000005846 Triadimenol Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- GYSSRZJIHXQEHQ-UHFFFAOYSA-N carboxin Chemical compound S1CCOC(C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 GYSSRZJIHXQEHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N pentachloronitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241001103808 Albifimbria verrucaria Species 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 239000005746 Carboxin Substances 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241001149504 Gaeumannomyces Species 0.000 description 1
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 241000735439 Heterobasidion annosum Species 0.000 description 1
- 241001529455 Mammut Species 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 241001634106 Phlebiopsis gigantea Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000190503 Pyrenophora trichostoma Species 0.000 description 1
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 241000722093 Tilletia caries Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- VJTAZCKMHINUKO-UHFFFAOYSA-M chloro(2-methoxyethyl)mercury Chemical compound [Cl-].COCC[Hg+] VJTAZCKMHINUKO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000003967 crop rotation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229910000514 dolomite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010459 dolomite Substances 0.000 description 1
- 239000011363 dried mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000000459 effect on growth Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- QWUGXIXRFGEYBD-UHFFFAOYSA-M ethylmercuric chloride Chemical compound CC[Hg]Cl QWUGXIXRFGEYBD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000005506 phthalide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Biologicky ist kultury houbov²ch kmen Nectria pityrodes Montagne J76 s slem ulo en DSM 7522, J1431 s slem ulo en DSM 8805, J1432 s slem ulo en DSM 8806, MOS1 s slem ulo en DSM 8807 a ROS2 s slem ulo en DSM 8808. D le se popisuje biofungicid obsahuj c tyto biologicky ist kultury a biofungicidn prost°edek obsahuj c tyto biologicky ist kultury ve spojen s nosi i a/nebo p° sadami. e en rovn zahrnuje zp sob v²roby biofungicidn ho prost°edku p°i n m se a) houbov² kmen nech r st v r stov m m diu, bun n hmota se odd l a p°idaj se k n nosi e a/nebo p° sady, na e se v²sledn hmota vysu a rozm ln na prach, nebo se b) houbov² kmen nech r st v r stov m m diu obsahuj c m p° davek oxidu k°emi it ho, k z skan hmot se pop° pad p°idaj nosi e a/nebo p° sady a v²sledn hmota se vysu a rozm ln na prach, jako i pou it houbov ho kmene Nectria pityrodes Montagne jako pesticidu.\
Description
Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicid a biofungicidní prostředek ji obsahující, způsob výroby biofungicidního prostředku, způsob inhibování houbové infekce u rostlin a použití biofungicidu
Oblast techniky
Vynález se týká biologicky čisté kultury houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicidu a biofungicidního prostředku ji obsahujících, způsobu výroby biofungicidního prostředku, způsobu inhibování houbové infekce u rostlin a použití biofungicidu
Dosavadní stav techniky
Zemědělské plodiny jsou napadány různými houbovitými, bakteriálními a virovými onemocněními stejně jako četnými hmyzími škůdci. Pro jejich regulaci při kultivaci bylo vyvinuto mnoho technických, chemických a biologických způsobů regulace. Účelem těchto způsobů je zabránit kvalitativní a kvantitativní ztrátě plodin způsobené nemocemi rostlin a dalšími škůdci.
Pojem biologická regulace onemocnění rostlin obecně znamená regulaci rostlinných patogenů jinými organismy, které lze nazývat biologickými regulačními činidly (BCA). Produkty, které jsou od BCA odvozeny, se často nazývají biopesticidy. Mechanismy biologické regulace rostlin jsou různé. Často je účinek založen na současném působení mnoha různých mechanismů. Regulační účinek může být založen na inhibičních metabolitech produkovaných regulačním činidlem. Někdy může parazitovat patogen nebo soutěžit s ním o dostupné místo a/nebo živiny.
Potřeba objevení nových biologických regulačních činidel je zvýšena skutečností, že se ukázalo, že mnoho tradičních chemických regulačních činidel je škodlivých pro životní prostředí a pro člověka. Nevýhodou chemikálií je také skutečnost, že mnoho škůdců se stalo rezistentními na jedno nebo dokonce na četná regulační činidla. Vývoj rezistence na biopesticidy je však nemožný, protože jejich účinek je založen na četných mech různých typů. Chemikálie obvykle působí lychleji a účinněji než biopesticidy. Biopesticidy často působí déle než chemikálie, protože jejich účinek je založen na živém a reprodukovatelném mikroorganismu.
Nejdůležitější skupinou biopesticidů jsou bakteriální produkty směrované proti hmyzu. Nejobvykleji se používají bioinsekticidy na bázi bakterie Bacillus thuringiensis. Biofungicid na bázi aktinomycet Streptomyces, který je účinný proti četným houbovitým onemocněním pocházejícím ze země nebo semen rostlin, se vyrábí ve Finsku. Produkt, který je schopen bránit šíření hniloby kořene (způsobené Heterobasidion annosum) v jehličnatých lesích, byl vyvinut zhouby Phlebia gigantea způsobující neškodné hnití dřeva.
Mnoho studií bylo věnováno bakterii rodu Pseudomonas fluorescens, které mají fungicidní aktivitu. Viz např. publikovaná patentová přihláška WO 92/18613, finský patent č. 92 1722, spis WO 90/01327 a také evropský patent 228 457.
Při hledání mikroorganismů shodných pro biologickou kontrolu jsou obvykle pro kontrolu aktivity nebo jinou vlastnost testována velká množství mikrobiálních kmenů. Některé způsoby testování jsou popsány v patentových spisech.
V USA patentu 4 647 533 je popsán třístupňový způsob testování, při němž se bakterie nejdříve izoluje ze země, která obsahuje četné spory škodlivé houby Pythium. V druhém stupni se izolované bakterie testují ve skleníku pěstováním semen obilí v zemi, která obsahuje velké množství spor Pythium se suspenzí bakterie, která je testována, a bez bakterie (kontrolní test). Na základě tohoto testu se vyberou ty bakterie, v jejichž přítomnosti mají rostliny největší listy a také jinak rostou nejvýše. Ve třetím stupni se vybrané bakterie dále vybírají na poli v podobném testu
-1 CZ 289942 B6 jako je skleníkový test. Také v tomto stupni se vyberou ty bakterie, v jejichž přítomnosti rostliny nejlépe rostou.
Ve finském patentovém spisu 92 1722 se však používá následující postup. Nejdříve se mycelium kmene Pythium nechá růst ve vhodném růstovém médiu. Na mycelium se položí vrstva sterilní země, k níž se přidá mikroorganismus, který má být testován. Vyhodnotí se jeho vliv na růst Pythium. Ve druhém stupni se vzorek země naočkuje kmenem Pythium, který způsobuje ztlumení, semena rostliny citlivé na houbovou infekci se vysejí do země a stanoví se vliv testovaného organismu na růst rostliny. Pro další testy se vyberou ty látky, které jsou inhibitory Pythia v obou shora uvedených testech.
Uvedené nedostatky dosavadního stavu jsou z převážné části odstraněny u předmětu tohoto vynálezu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou biologicky čisté kultuiy těchto houbových kmenů:
Nectria pityrodes Montagne J76 s číslem uložení DSM 7522,
Nectria pityrodes Montagne J1431 s číslem uložení DSM 8805,
Nectria pityrodes Montagne J1432 s číslem uložení DSM 8806, Nectria pityrodes Montagne MOS1 s číslem uložení DSM 8807 a Nectria pityrodes Montagne ROS2 s číslem uložení DSM 8808.
Jiným předmětem tohoto vynálezu je biofungicid, který obsahuje alespoň jeden houbový kmen vybraný ze skupiny zahrnující houbové kmeny Nectria pityrodes Montagne J76, J1431, J1432, MOS1 a ROS2, které mají čísla uložení DSM 7522, DSM 8805, DSM 8806, DSM 8807 a DSM 8808.
Dalším předmětem vynálezu je biofungicidní prostředek, který obsahuje alespoň jeden houbový kmen vybraný ze skupiny zahrnující houbové kmeny Nectria pityrodes Montagne J76, JI431, J1432, MOS1 a ROS2, které mají čísla uložení DSM 7522, DSM 8805, DSM 8806, DSM 8807 a DSM 8808, ve spojení s nosiči a/nebo přísadami.
Biofungicidní prostředek podle vynálezu obsahuje výhodně nosiče a přísady vybrané ze skupiny zahrnující oxid křemičitý, mléčný prášek, karboxymethylcelulózu, sacharózu, kyselinu askorbovou a škrob.
Ještě jiným předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby biofungicidního prostředku podle vynálezu, při němž se
a) houbový kmen podle vynálezu nechá růst ve vhodném růstovém médiu, buněčná hmota se oddělí a přidají se k ní nosiče a/nebo přísady, načež se výsledná hmota vysuší a rozmělní na prach, nebo se
b) houbový kmen podle vynálezu nechá růst ve vhodném růstovém médiu obsahujícím přídavek oxidu křemičitého, k takto získané hmotě se popřípadě přidají nosiče a/nebo přísady a výsledná hmota se vysuší a rozmělní na prach.
Dalším předmětem vynálezu je způsob inhibování houbové infekce u rostlin, při němž se na rostliny nebo na jejich semena aplikuje biofungicid podle vynálezu nebo biofungicidní prostředek podle vynálezu, nebo se biofungicid nebo biofungicidní prostředek přidají do růstového média před zasetím semen nebo po něm.
-2CZ 289942 B6
Posledním předmětem tohoto vynálezu je použití houbového kmene Nectria pityrodes Montagne podle vynálezu jako pesticidu.
V popise tohoto vynálezu se uvádí také nový postup vyhledávání houbových kmenů, v němž se používá sekvence třístupňového testu, který zahrnuje testování v písku, v rašelině a v zemi z pole.
V každém tomto testu se houbové kmeny, které se ukáží neúčinné, odstraňují z dalších testů. Houbové kmeny, které jsou nej lepší při testování ve skleníku, se pak přenesou do vyhledávacích testů v polních podmínkách.
V další části spisu jsou stručně popsány přiložené výkresy.
Obrázek 1: Odpověď na dávku J76 v létě 1992. Procenta onemocněných výhonků semen naočkovaných houbou F. culmorum. K znamená neošetřeno, B znamená ošetření Baytanem, J76-0 znamená suspenzi spor J76 (1,2.107 jtk/ml), J—76—1 znamená suspenzi spor J76 (1,2.106 jtk/ml), J-76-2 znamená suspenzi spor J76 (1,2.105 jtk/ml) a J—76—3 znamená suspenzi spor J76 (1,2.104 jtk/ml).
Obrázek 2: Odpověď na dávku J76 v létě 1992. Procenta onemocněných výhonků, jestliže se použijí zdravá semena. Zkratky znamenají jako na obr. 1.
Obrázky 3a až 3d: Histogramy ukazující účinek houbových izolátů, vyřazených v různých stupních testování ve skleníku, na zdraví výhonků v polních podmínkách. K znamená neošetřeno, B znamená ošetření Baytanem I.
Dále jsou podrobně popsány houbové kmeny podle vynálezu. Je uvedena jejich izolace, charakterizace a testování jejich účinnosti v polních podmínkách. Dále jsou popsány přípravy biofungicidních prostředků vyrobených z těchto kmenů, vlastnosti prostředků a testy účinnosti těchto prostředků. Je popsán také způsob vyhledávání houbových kmenů izolovaných ze vzorků země.
Vzorky země, z nichž byly izolovány houbové kmeny podle vynálezu, byly sebrány v letech 1989, 1990 a 1991, celkem šlo o 190 vzorků. Tyto vzorky byly sebrány v různých oblastech Finska, hlavně ve výzkumných stanicích MTT (Zemědělské výzkumné středisko), šlo o různé typy země a různé typy rotací plodin. Vzorky byly odebrány z vrstvy kořenů (hloubka 0 až 15 cm). Z každého pole bylo odebráno několik podvzorků, které byly spojeny do jednoho vzorku o objemu 1 až 2 litry.
Izolace byly prováděny buď způsobem zřeďování (izolace ze země) nebo způsobem izolace z rostlin pro krmivo (izolace z kořenů). Tato provedení jsou popsána podrobně níže v části způsoby.
Houbové kmeny izolované ze vzorků země byly testovány způsobem vyhledávání podle vynálezu, který je popsán níže v části způsoby. Bylo nalezeno 5 kmenů, které dávaly velmi dobré výsledky. Tyto kmeny, které byly pojmenovány J76, J1431, J1432, MOS1 a ROS2, byly charakterizovány ve středisku Cetraalbureau voor Schimmelcultures, Baam, Nizozemí. Tyto kmeny byly uloženy v depozitáři DSM (Deutsche Sammlung von Mikroorganismem und Zellkulturen GmbH) podle Budapešťské dohody pod čísly uložení DSM 7522 (15. března 1993), DSM 8805 (10. prosince 1993), DSM 8806 (10. prosince 1993), DSM 8807 (10. prosince 1993), DSM 8808 (10. prosince 1993).
Morfologické vlastnosti mikroorganismů jsou následující:
Morfologie: Sporodochie bez marginálních sterilních hyf. Konidiofory opakovaně rozvětvené s několika větvemi kolem každého nodu. Poslední větve nesou víry fíalid uspořádaných ve vrstvě podobající se palisádě. Fialidy jsou válcovité, dlouhé až 15 pm, s apikálním pórem. Konidie byly
-3 CZ 289942 B6 produkovány v řetězcích nebo ve slizovitých kuličkách, elipsoidních až kapkovitých, s krátkým hilem, 7,8 krát 4 pm, s hladkými stěnami, bez přídatné části.
Vlastnost kolonie: Kolonie na agaru ovesných vloček vyrostlá do průměru 40 mm při 22 °C během 7 dnů, průhledný mycel, sporulující oblasti vytvářející sporodochie, zelené uspořádané v soustředných kruzích. Vůně nijak zvláštní, kolonie měnící bezbarevnost, exudát omezený, jasný.
Struktura konidioforu kmene J76 je podobná jako u Myrothecium verrucaria, ale liší se od těchto druhů produkcí nemarginátní sporodochie, konidie v suchých řetězcích a bez typicky vějířovité přídatné části.
Představitelé rodu Gliocladium se od nových kmenů liší v tom, že pro Gliocladium je typická produkce jednotlivých štětičkovitých konidiofor.
Kmeny J76, JI 431, JI 432, MOS1 a ROS2 byly tedy identifikovány jako druhy Nectria pityrodes Montagne.
Z těchto kmenů lze připravit nekazící se prostředky, které se snadno rozstřikují na plantáže, kde je potřeba regulovat onemocnění. Prostředek se může vyrobit například ve formě prášku. Kultivace mikrobu může začínat od inokula, kterým je PDA peleta obsahující spory, a které je udržováno na -80 °C. Mikrob může být kultivován buď jako kapalná kultura nebo na pevném nosiči. Prostředí média obsahuje cukr, např. sacharózu, dusík a také malá množství dalších živin. Při kultivacích se mohou použít nespecifické živiny, např. CSL (Com Steep Liquor), nebo specifické živiny, např. GYM (4 g glukózy na litr, 4g kvasinkového extraktu na litr, 10 g sladového extraktu na 1) nebo PDB (živné prostředí s dextrózou a bramborovým extraktem). pH je 6,0. pH se upraví na začátku před sterilizací. Kultivace se provádí třepáním od 1 do 2 týdnů. Hmota buněk se od živného prostředí oddělí buď odfiltrováním filtračním papírem nebo odstřeďováním. Jestliže se používá kapalinová kultivace, hmota buněk se smíchá s nosičem, např. oxidem křemičitým, mléčným práškem a/nebo CMC (karboxymethylcelulózou). Tato hmota se vysuší za teploty místnosti a rozemele se na prášek.
V další části spisu jsou popsány způsoby používané podle tohoto vynálezu. Nejdříve jsou popsány způsoby izolování mikrobů.
a) Způsob ředěním (izolace ze země): 10 g země se smíchá se 100 ml 0,5 % (hmot.) vodného agaru (Bactoagar). Ze směsi se odeberou tři 10 ml vzorky a každý se dvěma ředěními (101 a 10“2) přenese do 0,5 % vodného agaru. Tato ředění se třepou v třepačce ve vodní lázni 20 až 30 minut. Do prázdné Petriho misky se odpipetuje 1 ml ředění a na něj se nalije 20 ml LOA agaru (Littman Oxgall Agar). Misky se inkubují 3 až 7 dnů za teploty místnosti, jednotlivé houby se izolují do čisté kultur na PDA (bramborový dextrózový agar).
b) Způsob izolace z rostliny pro krmení (izolace z kořenů): 15 kelímků v řadě desky s květináči (řada desek květináčů Vefi-VP 96 s 50 ml kelímky) se naplní jedním vzorkem země. Do jednoho kelímku se vysejí 4 semena pšenice, čtyři semena ječmene nebo 15 semen vodnice. Pro každý druh rostliny se použije 5 kelímků. Semena se pokryjí pískem a kelímky se zalévají a inkubují v růstové komoře při +15 °C s délkou dne 14 h. Po dvou týdnech kultivace se rostliny odeberou, promyjí se tekoucí vodou nebo se vyčistí kartáčem bez vody. Z kořenů se nařežou malé kousky a položí se na desky. Použitá prostředí: LOA (10 g peptonu, 10 g dextrózy, 15 g Bacto-Oxgallu, 0,01 g krystalové violeti B, 0,03 g streptomycinu, 20 g agaru, voda do 1000 ml), PCNB (15 g peptonu, 1 g KH2PO4, 0,5 g MgSO4.7 H2O, 2 g Avicolu, 3 ppm streptomycinu, 20 g agaru, doplnit vodou do 1000 ml) a PDA-streptomycin (39 g PDA-přípravku, 300 ppm streptomycinu, doplnit vodou do 1000 ml). Po několika dnech inkubace se izolují jednotlivé houby a subkultivují se na PDA deskách.
-4CZ 289942 B6
Kmeny se skladují na PDA peletách vampulích (Nalgene 5000-0012, PS Sterile, 1,2 ml) při -80 °C.
Způsob vyhledávání testy ve skleníku se provádí následovně.
Pískový test: Semena obilovin se vysejí na vrstvu písku. Nejdříve mycelia a spory patogenu a potom spory testované houby se odpipetují ve vodné suspenzi na semena a na růstový substrát, načež se semena pokryjí pískem. Po dvou a půl týdnech se zkoumá intenzita příznaků onemocnění výhonků. Z dalších pokusů se odstraní ty houby, které neovlivňují intenzitu onemocnění nebo které jsou samy patogenní.
Rašelinový test: Semena obilovin se namočí v suspenzi spor patogenu a vysuší se. Potom se semena namočí suspenzí spor testované houby, vysuší a vysejí. Jako růstový substrát se použije spařená rašelina. Po dvou a půl týdnu kultivace se pozoruje zdraví výhonků. Houbové kmeny, které zřetelně zabraňují onemocnění, se vezmou pro polní testování v zemi.
Polní testy v zemi: Obdělaná a zvlhčená zem z pole se dá do 1,5 1 kelímků. Do každého kelímku se vyseje 36 semen obilovin. Zpracování semen se provede stejně jako v rašelinovém testu. Pro každé zpracování se provedou tři opakování s kelímky. Po čtyřech týdnech kultivace se zkoumají příznaky na výhoncích.
Kmeny, které byly hodnoceny v těchto testech jako dobré, se použijí pro polní testy, které dávají konečnou jistotu biopesticidního účinku vybraných mikrobiálních izolátů.
Patogenicita houbových kmenů: Byly zkoumány možné škodlivé účinky houbového kmene J76. Dosud získané výsledky ukazují, že tato houba není pro rostliny patogenní. Bylo testováno 33 druhů rostlin.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady ilustrují využití tohoto vynálezu. V položce (A) je popsáno použití suspenzí spor Nectria pityrodes kmenů J76, JI431, JI432, MOS1 a ROS2 podle vynálezu pro regulaci onemocnění rostlin způsobených hlavně Fusarium spp. V položce (B) je popsána příprava a použití prostředků vyrobených z těchto kmenů. V položce (C) jsou popsány pokusy, kterými byl zkoumán způsob působení houbového kmene J76 a v položce (D) je popsáno provedení a vyhodnocení způsobu vyhledávání podle vynálezu.
(A) Použití houbových kmenů jako suspenzí spor
Pokusy se suspenzí spor kmene J76
V létě 1992 byl zkoumán vliv suspenzí spor kmene J76 ve třech testovaných místech. V těchto testech byla použita dvoje různá semena: pšenice uměle naočkovaná Fusarium culmorum a ječmen přirozeně infikovaný F. nivale.
Výsledky testu na pšenici jsou uvedeny v tabulce 1. Výsledky výnosu uměle naočkované pšenice jsou uvedeny v tabulce 2.
Pozorování na výhoncích ječmene jsou uvedena v tabulce 3. Onemocnění nemělo statisticky významný účinek na výnos ječmene.
-5CZ 289942 B6
Tabulka 1
Pokusy testů na třech místech v létě 1992 s uměle infikovanou pšenicí. Klíčení a nemocnost výhonků
| ošetření | počet výhonků na metr řádku | nemocnost (% silně nemocných výhonků) | |
| Jokioinen | zdravá semena | 50 | 5,2 |
| neošetřena | 11 | 48 | |
| Baytan-ošetření | 45 | 10 | |
| J76 | 47 | 7,2 | |
| Mietoinen | zdravá semena | 45 | 7,3 |
| neošetřena | 10 | 42 | |
| Baytan-ošetření | 39 | 3,8 | |
| J76 | 33 | 13 | |
| Pálkáne | zdravá semena | 50 | 3,0 |
| neošetřena | 15 | 57 | |
| Baytan-ošetření | 51 | 24 | |
| J76 | 45 | 11 |
Tabulka 2 ío Pokusy testů na třech místech v létě 1992 s uměle infikovanou pšenicí. Výsledky výnosů (kg/ha)
| ošetření | Jokioinen | Mietoinen | Palkane |
| zdravá semena | 3650 | 3190 | 5290 |
| neošetřena | 1830 | 1690 | 1950 |
| Baytan-ošetření | 3270 | 3190 | 4940 |
| J76 | 3530 | 2950 | 4900 |
Tabulka 3
Pokusy testů na třech místech v létě 1992 s uměle infikovaným ječmenem (F.nivale). Klíčení a nemocnost výhonků
| ošetření | počet výhonků na metr řádku | nemocnost (% silně nemocných výhonků) | |
| Jokioinen | neošetřeno | 39 | 7,7 |
| Baytan-ošetření | 40 | 1,2 | |
| J76 | 40 | 0,9 | |
| Mietoinen | neošetřeno | 42 | 7,4 |
| Baytan-ošetření | 42 | 1,4 | |
| J76 | 43 | 2,8 | |
| Palkane | neošetřeno | 42 | 26 |
| Baytan-ošetření | 42 | 9,4 | |
| J76 | 44 | 6,3 |
-6CZ 289942 B6
Test odpovědi na dávku kmene J76 v létě 1992
Jelikož J76 vykazoval dobré výsledky při pozorování výhonků počátkem léta 1992, byl v tomto pokusu testován vliv aplikační dávky na účinek regulace. Pokus byl proveden se semeny vysetými před středem léta. Byla použita jak zdravá semena pšenice tak semena uměle naočkovaná Fusarium culmorum.
V tomto pokusu byla použita malá políčka o ploše 2 m2. U výhonků bylo pozorováno klíčení a příznaky onemocnění. Vzorky výhonků pro onemocnění byly sbírány současně na čtyřech různých místech. Tyto vzorky byly odebrány pro každé ošetření pro každý vzorek ze čtyř kelímků odděleně osetých. Pozorovaná množství výhonků jsou uvedena v tabulce 4. Procenta nemocných výhonků jsou uvedena v tabulce 5 odděleně pro nemocná a zdravá semena. Data z tabulky 5 jsou graficky znázorněna na obrázku 1 a obrázku 2.
Tabulka 4
Pokus odpovědi na dávku J76 v létě 1992. Klíčivost
| ošetření* | počet výhonků na metr řádku |
| Semena infikovaná Fusarium: | |
| neošetřena | 18 |
| Baytan-ošetření | 57 |
| J76 suspenze spor, 1,2.107 jtk/ml | 74 |
| J76 suspenze spor, 1,2.106 jtk/ml | 58 |
| J76 suspenze spor, 1,2.105 jtk/ml | 51 |
| J76 suspenze spor, 1,2.104 jtk/ml | 20 |
| Zdravá semena: | |
| neošetřena | 71 |
| Baytan-ošetření | 66 |
| J76 suspenze spor, 1,2.107 jtk/ml | 80 |
* jtk (cfu) znamená jednotek tvořících kolonie
Tabulka 5
Pokus odpovědi na dávku J76 v létě 1992. Procenta nemocných výhonků u semen infikovaných
P. culmorum a zdravých semen. Zkratky znamenají stejně jako v obr. 2
| ošetření | 10 | počet dnů o 17 | d vzklíčení 30 | 44 |
| Semena infikovaná Fusarium: | ||||
| K | 75,4 | 82,8 | 79,5 | 85,1 |
| B | 15,9 | 60,9 | 65,3 | 78,2 |
| J76-0 | 10,1 | 50,0 | 66,6 | 70,3 |
| J76-1 | 23,1 | 51,8 | 55,5 | 62,9 |
| J76-2 | 36,4 | 64,7 | 76,0 | 78,0 |
| J76—3 | 68,6 | 72,8 | 77,1 | 76,2 |
| Zdravá semena: | ||||
| K | 54,7 | 71,8 | 67,7 | 85,1 |
| B | 8,4 | 50,4 | 58,3 | 73,6 |
| J76-0 | 14,3 | 48,0 | 69,9 | 73,8 |
Polní pokusy se suspenzí spor J76 v létě 1993
Tyto pokusy byly prováděny v Jokioinen, Mietoinen a Pálkane. V pokusech bylo použito šest vzorků semen:
- pšenice „Luja“ přirozeně infikovaná houbou F. culmorum
- pšenice „Luja“ uměle infikovaná houbou F. culmorum
- pšenice „Luja“ zdravá
- pšenice „Laari“ zdravá
- ječmen „Kustaa“, přirozeně infikovaný různými Fusarium houbami a houbou Bipolaris sorokiniana
- oves „Yty“ přirozeně infikovaný houbou F. avenaceum
Vzorky zdravé pšenice byly vysety pouze v Jokioinen, pokusy s dalšími čtyřmi druhy semen byly prováděny v každé ze tří testovaných oblastí. Pro pokusy byly osety pozemky o velikosti 10 m2 se šesti opakováními pro každé ošetření.
Ošetření semen bylo shodné pro všechny vzorky semen. Zkratky ošetření znamenají:
K znamená neošetřenou kontrolu,
B znamená chemickou kontrolu, Baytan I ošetření a J76S znamená suspenze spor J76 z kultury rostlin (8,4.109 jtk/kg semen).
V tabulce 6 je uvedena intenzita poškození onemocněním odděleně pro každé ošetření a pro každý vzorek semen. Výsledky výnosů jsou souhrnně uvedeny v tabulce 7.
Tabulka 6
Polní pokusy se suspenzí spor J76 v roce 1993. Procenta silně nemocných výhonků
| ječmen | oves | přir. infik. pšenice | uměle infik. pšenice | zdravá „Luja“ | zdravá „Laari“ | |
| Jokioinen | ||||||
| K | 6,0 | 10,1 | 7,4 | 34,2 | 20,6 | 5,7 |
| B | 0,9 | 2,0 | 2,1 | 1,0 | 1,4 | 0,7 |
| J76S | 0,9 | 1,4 | 0,7 | 1,0 | 3,3 | 5,7 |
| Mietoinen | ||||||
| K | 12,8 | 3,5 | 20,4 | 62,0 | ||
| B | 1,3 | 0,6 | 5,7 | 6,6 | ||
| J76S | 5,4 | 0 | 7,1 | 7,3 | ||
| Pálkane | ||||||
| K | 9,6 | 7,4 | 10,9 | 26,9 | ||
| B | 2,5 | 3,3 | 2,1 | 0,6 | ||
| J76S | 2,4 | 3,6 | 2,3 | 0 |
-8CZ 289942 B6
Tabulka 7
Polní pokusy se suspenzí spor J76 v roce 1993. Výsledky výnosů (kg/ha)
| ječmen | oves | přir. infík. pšenice | uměle infík. pšenice | zdravá „Luja“ | zdravá „Laari“ | |
| Jokioinen | ||||||
| K | 7460 | 6650 | 6060 | 2950 | 6100 | 6360 |
| B | 7500 | 6790 | 5870 | 5690 | 5940 | 6060 |
| J76S | 7840 | 6650 | 6050 | 6040 | 6150 | 6570 |
| Mietoinen | ||||||
| K | 5900 | 5780 | 4920 | 3890 | ||
| B | 6070 | 5200 | 4910 | 4990 | ||
| J76S | 6120 | 5440 | 4670 | 4810 | ||
| Palkane | ||||||
| K | 4670 | 5560 | 3630 | 2950 | ||
| B | 4550 | 5220 | 4190 | 4000 | ||
| J76S | 4710 | 5430 | 3710 | 3650 |
Testování J76 na mazlavou sněť pšenice a hnilobu kořenů ječmene
V létě 1993 byl J76 zahrnut do polního pokusu, kde bylo pro ošetření semen obilovin použito 9 chemických fungicidů, které byly testovány na mazlavou sněť pšenice (způsobenou Tilletia caries). J76 se aplikuje jako konidiální suspenze a chemikálie se aplikují podle pokynů pro použití. Byly použity plochy o velikosti 0,1 m2 s pěti opakováními (tabulka 8).
Tabulka 8
Vliv ošetření na mazlavou sněť pšenice
| ošetření | účinnost regulace (%) (= pokles množství ovlivněných klasů) |
| Táyssato S kapalina | 78 |
| Baytan WS | 100 |
| Beret 050 | 100 |
| Fungazil C | 100 |
| Panoctine 35 | 100 |
| prášek Raxil I | 100 |
| kapalina Raxil 1 | 100 |
| Přelude LS | 100 |
| Vitavax 200 FF | 100 |
| J76 | 85 |
Účinnou složkou Baytanu je triadimenol. Baytan I je směs, která obsahuje triadimenol a imizalil. Táyssato S obsahuje carboxin a Imixalil. Účinnou složkou Panoctinu je guazatin.
V polním testu, při kterém byla testována chemická regulační činidla na hnilobu kořene (Bipolaris sorokiniana) ječmene, bylo zahrnuto také ošetření semene sporami J76. Při pokusu se používaly plochy o velikosti 10m2 se čtyřmi opakováními. Mezi různými ošetřeními nebyly nalezeny žádné rozdíly při klíčení. J76 zřetelně snižuje příznaky (tabulka 9), i když patogen je velmi odlišný při srovnání s houbou Fusarium, proti které byl vybrán.
-9CZ 289942 B6
Tabulka 9
Vliv ošetření na hnilobu kořene ječmene účinnost regulace (%) (= pokles množství nemocných výhonků)
| Přelude LS | 85 |
| Dividend 37,5 (400 ml) | 84 |
| Dividend 37,5 (200 ml) | 81 |
| Baytan I | 81 |
| Beret Speciál (400 ml) | 74 |
| prášek Raxil I | 70 |
| kapalina Tayssato S | 66 |
| Panoctine plus | 66 |
| Fungazil C | 66 |
| Beret Speciál (200 ml) | 65 |
| kapalina Raxil 1 | 64 |
| Beret FS 050 | 49 |
| PNL210 | 39 |
| J76 | 69 |
(B) Prostředky připravené z houbových kmenů a jejich účinek v polních pokusech
Práškované prostředky z houbového kmene J76 se připravují následujícím způsobem.
Prostředek 1
Kultivace se provádí v 1 1 Erlenmeyerově baňce obsahující 0,5 1 média s živinami, které obsahuje 4 g sacharózy v 11, 4 g kvasinkového extraktu v 1 1 a 10 g/1 sladového extraktu. Před sterilizací v autoklávu se pH upraví na hodnotu 6,0. Jako inokulum se použije agarová peleta obsahující spory, které byly skladovány při -80 °C (bramborové dextrózové agarové médium). Rychlost otáčení třepačky byla 150 ot. za minutu, teplotou byla teplota místnosti (22 °C) a doba kultivace byla 7 až 12 dnů. Buňky byly odděleny zfiltrováním filtračním papírem. Ke hmotě buněk byl přimíchán oxid křemičitý, mléčný prášek a CMC (karboxymethylcelulóza) v následujících množstvích:
buňky 20 % hmotn., oxid křemičitý 55 % hmotn., mléčný prášek 15 % hmotn. a
CMC (7 % (hmotn.) vodný roztok) 10 % hmotn.
Tato směs byla sušena 2 dny za teploty místnosti v otevřených Petriho miskách ve sterilním vzduchu. Tloušťka vrstvy byla 1 až 2 cm. Vysušená směs byla rozemleta na prášek. Životaschopnost prostředku byla 107 jtk/g.
Jtk (jednotka tvořící kolonie) znamená jednotku, která se používá pro stanovení životaschopnosti mikrobů. Zředěná suspenze mikrobů se rozstříká na agarové desky a po několika dnech se spočítají kolonie. Jestliže je známo zředění, lze spočítat množství kolonií nebo množství mikrobiálních buněk v původním vzorku.
Prostředek 2
Buňky se kultivují podobně jako v prostředku 1, při čemž se oxid křemičitý, mléčný prášek, CMC a kyselina askorbová smíchají s hmotou buněk v následujících množstvích:
-10CZ 289942 B6 buňky oxid křemičitý mléčný prášek
CMC (7 % (hmotn.)) kyselina askorbová % hmotn., % hmotn., % hmotn., % hmotn. a % hmotn.
Tato směs byla sušena stejným způsobem jako v prostředku 1. Potom byla rozemleta na prášek. Životaschopnost byla 107 jtk/g.
Prostředek 3
Buňky se kultivují podobně jako v prostředku 1, při čemž se sacharóza a škrob smíchají s hmotou buněk v následujících množstvích:
buňky 20 % hmotn., sacharóza 25 % hmotn. a škrob 55 % hmotn.
Tato směs byla sušena stejným způsobem jako v prostředku 1. Potom byla rozemleta na prášek. Životaschopnost byla 107 jtk/g.
Prostředek 4
Kmen J76 se kultivuje přímo na pevném médiu obsahujícím oxid křemičitý jako nosič. Jako živné prostřední se použije 8 % (hmotn.) sladový extrakt (Maltax MP10, Lahden Polttimo). 120 g živného prostředí se smíchá v kádince s 50 g prášku oxidu křemičitého a autoklavuje se 20 minut při 120 °C. Ochlazená médium se naočkuje 10 gramy suspenze spor J76, která se získá seškrabáním spor z PDA desky do sterilní vody. Médium se inkubuje 20 dnů při 16 °C, potom se suší dva dny za teploty místnosti. Životaschopnost vysušeného prostředku byla 107 jtk/g.
Podobným způsobem lze připravit prostředky ze zbylých kmenů podle vynálezu.
Účinek práškovaných prostředků v polních pokusech
V následujícím textu budou popsány pokusy provedené Ústavem pro ochranu rostlin v Zemědělském výzkumném středisku (MTT) ve Finsku v létě 1993 s práškovaným prostředkem kmene J76. Pokusy bylo provedeny v MTT v Jokioinen, Mietoien a Pálkáne. V pokusech byly použity vzorky šesti druhů semen:
- pšenice „Luja“ přirozeně infikovaná houbou F. culmorum
- pšenice „Luja“ uměle infikovaná houbou F. culmorum
- pšenice „Luja“ zdravá
- pšenice „Laari“ zdravá
- ječmen „Kustaa“, přirozeně infikovaný různými Fusarium houbami a houbou Bipolaris sorokiniana
- oves „Yty“ přirozeně infikovaný houbou F. avenaceum
Vzorky zdravé pšenice byly vysety pouze v Jokioinen, pokusy s dalšími čtyřmi druhy semen byly prováděny v každé ze tří testovaných oblastí. Pro pokusy byly osety pozemky o velikosti 10 m se šesti opakováními pro každé ošetření.
-11 CZ 289942 B6
Ošetření semen bylo shodné pro všechny vzorky semen. Zkratky ošetření znamenají:
K znamená neošetřenou kontrolu,
B znamená chemickou kontrolu, Baytan I ošetření,
J76PK znamená prášek J76 jako suché ošetření (8,4.108 jtk na kg semen, tj. největší množství přijaté semeny) a
J76PK znamená prášek J76 jako kapalné ošetření (8,4.108 jtk na kg semen).
V tabulce 10 je uvedena intenzita poškození onemocněním odděleně pro každé ošetření a pro každý vzorek semen. Výsledky výnosů jsou souhrnně uvedeny v tabulce 11.
Tabulka 10
Polní pokusy se suspenzí spor J76 v roce 1993. Procenta silně nemocných výhonků
| ječmen | oves | přir. infik. pšenice | uměle naočk. pšenice | zdravá „Luja“ | zdravá „Laari“ | |
| Jokioinen | ||||||
| K | 6,0 | 10,1 | 7,4 | 34,2 | 20,6 | 5,7 |
| B | 0,9 | 2,0 | 2,1 | 1,0 | 1,4 | 0,7 |
| J76PK | 2,2 | 1,5 | 2,7 | 7,0 | 6,2 | 2,8 |
| J76PN | 1,2 | 1,9 | 3,9 | 1,3 | 5,7 | 4,6 |
| Mietoinen | ||||||
| K | 12,8 | 3,5 | 20,4 | 72,0 | ||
| B | 1,3 | 0,6 | 5,7 | 6,6 | ||
| J76PK | 10,1 | 0 | 17,2 | 42,5 | ||
| J76PN | 9,1 | 0,3 | 13,7 | 14,3 | ||
| Pálkane | ||||||
| K | 9,6 | 7,4 | 10,9 | 26,9 | ||
| B | 2,5 | 3,3 | 2,1 | 0,6 | ||
| J76PK | 5,3 | 2,6 | 4,8 | 6,1 | ||
| J76PN | 3,9 | 3,8 | 3,9 | 2,7 |
Tabulka 11
Polní pokusy se suspenzí spor J76 v roce 1993. Výsledky výnosů
| ječmen | oves | přir. infik. pšenice | uměle naočk. pšenice | zdravá „Luja“ | zdravá „Laari“ | |
| Jokioinen | ||||||
| K | 7460 | 6650 | 6060 | 2950 | 6100 | 6360 |
| B | 7500 | 6790 | 5870 | 5690 | 5940 | 6060 |
| J76PK | 7610 | 6940 | 6060 | 5140 | 6400 | 6320 |
| J76PN | 7610 | 6970 | 6040 | 6020 | 6000 | 6400 |
-12CZ 289942 B6
Tabulka 11 - pokračování ječmen oves přir. uměle zdravá zdravá infík. naočk. „Luja“ „Laari“ ______________________________________________pšenice pšenice______________________ Mietoinen
| K | 5900 | 5780 | 4920 | 3890 |
| B | 6070 | 5200 | 4910 | 4990 |
| J76PK | 6000 | 5670 | 4770 | 4620 |
| J76PN | 6110 | 5760 | 4790 | 4950 |
| Pálkane | ||||
| K | 4670 | 5560 | 3630 | 2950 |
| B | 4550 | 5220 | 4190 | 4000 |
| J76PK | 4730 | 5560 | 3600 | 3390 |
| J76PN | 4870 | 5470 | 3660 | 3760 |
Regulační účinek různých prostředků připravených z kmene J76 na různé houby byl testován v roce 1993. Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulkách 12 až 18.
Tabulka 12
Regulační účinek J76 v pískové zemi infikované houbou Gaeumannomyces na pšenici Polkka. Test v kelímku, stíněný
| ošetření | % klíčivosti | procento plně zdravých | index nemoci (0-3) | čerstvá hmotn. | |
| g/repl. | g/výhon. | ||||
| kontrola, nemoc, neošetřeno J76 | 78,7 | 65,3 | 0,76 | 5,8 | 0,28 |
| ošetření suchým J76KF, 8 g/kg | 81,3 | 76,0 | 0,55 | 10,1 | 0,46 |
| ošetření kapalným J76 1 06 jtk/ml | 90,7 | 81,3 | 0,31 | 10,4 | 0,43 |
KF znamená prostředek v pevné fázi (prostředek 4).
Index onemocnění:
znamená zdravý znamená mírně nemocný znamená silně nemocný znamená nevyklíčeno
Tabulka 13
Regulační účinek prostředků J76 na houbu Fusarium culmorum na pšenici Polkka. Kelímkový test, rašelina jako substrát. KF znamená vyrostlé v pevné fázi (prostředek 4), R znamená kultivace třepáním v kapalině (prostředek 1), M znamená mikrob jako takový z agarové kultury
| ošetření | procenta klíčivosti | procenta plně zdravých | index nemoci (0-3) | zelená hmotnost v g/repl. |
| zdravá | 91 | 84 | 0,37 | 16,2 |
| nemocná, kontrola | 30 | 5 | 2,54 | 4,5 |
| ošetření J76KF 40/931 kapalinou, 106 jtk/ml | 72 | 44 | 1,17 | 14,0 |
| ošetření J76R 10/2 C kapalinou, 106 jtk/ml | 71 | 49 | 1,21 | 13,0 |
| J76M, 106 jtk/ml | 76 | 58 | 0,99 | 14,8 |
-13CZ 289942 B6
Index onemocnění:
znamená zdravé mírně nemocné silně nemocné nevyklíčeno
Tabulka 14
Účinek J76 na houbu Pythium u okurky. Výsledky znamenají střední hodnoty ze tří kelímkových testů (pH 6,2, 6,9 a 7,4)
| ošetření | procenta žijících sazeniček | index nemoci (0-3) | zelená hmotnost v g/repl. |
| zdravá | 98 | 0,04 | 12,1 |
| nemocná, kontrola | 47 | 0,63 | 5,4 |
| ošetření J76 kapalinou 106 jtk/ml | 58 | 0,52 | 6,9 |
Index onemocnění: 0 znamená zdravé mrtvé nevyklíčeno
Tabulka 15
Regulační účinek houbového kmene J76 na květák v pískové zemi zamořené houbou Rhizoctonia solani. Kelímkový test ve skleníku
| ošetření | procenta klíčivosti | procenta plně zdravých | zelená hmotnost | |
| g/repl. | g/výhon. | |||
| neošetřeno | 92,7 | 52,0 | 21,7 | 0,79 |
| ošetření J76 kapalinou, 107 jtk/ml | 94,7 | 72,0 | 24,1 | 0,84 |
Tabulka 16
Regulační účinek houbového kmene J76 na ječmen „Kustaa“ v pískové zemi naočkované houbou Fusarium nivale. Kelímkový vnější test, stíněno
| ošetření | procenta klíčivosti | procenta plně zdravých | index nemoci (0-3) | zelená hmotnost v g/repl. |
| zdravá | 93,3 | 37,3 | 0,91 | 8,9 |
| nemocná, kontrola | 73,3 | 29,3 | 1,43 | 7,8 |
| ošetření J76KF kapalinou, 106 jtk/ml | 80,0 | 52,0 | 0,91 | 9,7 |
| ošetření J76 kapalinou, 106 jtk/ml | 81,3 | 52,0 | 0,93 | 10,3 |
Index onemocnění:
znamená zdravé mírně nemocné silně nemocné nevyklíčeno
-14CZ 289942 B6
Tabulka 17
Regulační účinek houbového kmene J76 na houbu Altemaria brassicicola u květáku. Výsledky jsou střední hodnoty pokusů při třech různých teplotách (15 °C, 20 °C a 25 °C)
| ošetření | procenta vyklíčení | index nemoci (0-3) | zelená hmotnost v g/repl. |
| zdravá | 96 | 0,17 | 33,2 |
| nemocná, kontrola | 50 | 2,01 | 21,8 |
| ošetření J76 kapalinou 106 jtk/ml | 96 | 0,22 | 35,4 |
Index onemocnění:
znamená zdravé mírně nemocné silně nemocné mrtvá nebo nevyklíčeno
Výsledky pokusů regulačního účinku pěti kmenů Nectria pityrodes podle vynálezu (J76, JI431, J1432, MOS1 a ROS2) na Fusarium culmorum na pšenici jsou uvedena v tabulce 18. Výsledky jsou uvedeny jako střední hodnoty ze dvou pokusů, v jednom byla jako substrát použita rašelina, ve druhém zem z pole.
Tabulka 18
Regulační účinek pěti kmenů Nectria pityrodes podle vynálezu (J76, J1431, J1432, MOS1 a ROS2) na Fusarium culmorum na pšenici. Výsledky jsou uvedeny jako střední hodnoty ze dvou pokusů v kelímku (rašelina a polní zem)
| ošetření | procenta plně zdravých | index nemoci (0-3) | zelená hmotnost v g/repl. |
| nemocná, kontrola | 23 | 2,06 | 3,0 |
| ošetření J76 kapalinou 107 jtk/ml | 73 | 0,66 | 8,0 |
| ošetření JI431 kapalinou 107 jtk/ml | 80 | 0,51 | 8,5 |
| ošetření J1432 kapalinou 107Jtk/ml ošetření MOS1 kapalinou 10'jtk/ml | 72 | 0,78 | 8,0 |
| 76 | 0,66 | 8,8 | |
| ošetření ROS2 kapalinou 107 jtk/ml | 76 | 0,66 | 8,3 |
Index onemocnění: 0 znamená zdravé mírně nemocné silně nemocné nevyklíčeno (C) Způsob působení J76
Předběžná zjištění, která se týkají způsobů, kterými J76 působí jako antagonista na jiné houby, byla získána mikroskopem a některými laboratorními testy.
Jelikož interakce hyf J76 a houby F. culmorum byly pozorovány mikroskopem, bylo možné velmi rychle zjistit, že první rozdílné reakce jsou velmi rychlé. V místech kontaktu mycelia se buňky hyf Fusarium začaly znatelně rozpadat asi 1 h po kontaktu. Nejdříve buněčné stěny ztratily svůj tvar, potom se buňky vyprázdnily a nakonec se úplně rozpadly také buněčné stěny. Z míst
-15CZ 289942 B6 kontaktu se rozklad hyf Fusarium pomalu rozšiřoval dál. Jestliže se J76 a rostoucí F. culmorum míchají několik dnů, hyfy houby Fusarium nelze zjistit. Také její spory (jak konidie tak chlamydospoiy) se účinkem J76 rozkládají, ale pomaleji než hyfy. Obvykle se J76 hyfa ukládá těsně kolem spor Fusarium před jejich rozkladem. Neexistuje žádné pozorování, podle kterého by J76 skutečně pronikala do hyf Fusarium.
Na základě mikroskopického pozorování lze uzavřít, že J76 pravděpodobně sekretuje do svého okolí biologicky aktivní látky. Povahou může jít o látky podobné enzymům nebo antibiotikům. Jejich produkce může být také hlavním způsobem působení J76, protože nebylo nalezeno, že přímo parazitují na jiných houbách. A protože rostou pomalu, je zřejmé, že nemohou velmi účinně soutěžit o živiny. Náznaky produkce metabolitů ovlivňujících růst jiných hub byl získán také v celofánovém testu.
Jestliže J76 a F. culmorum rostou vedle sebe na velmi tenkém růstovém substrátu, vytvoří se inhibiční zóna, ve které se růst Fusarium zastaví. Na substrátu normální tloušťky tento jev nebyl zjištěn. K tomu dochází pravděpodobně proto, že do substrátu difundují malé koncentrace látek. Bylo také zjištěno, že těkavé látky sekretované J76 mají slabý růst regulující účinek na F. culmorum.
Celofánový test: Na růstový substrát se položí celofánový film. Na tomto filmu se kultivuje kmen J76. Po 10 dnech kultivace se film a sním J76 odstraní. Látky, které byly sekretovány J76 a transportovány filmem, zůstaly v substrátu. Jako kontrola byly použity desky, které měly pouze celofánový film bez J76. Výsledky celofánového testu jsou uvedeny v tabulce 19.
Tabulka 19
Vliv metabolitů produkovaných houbou J76 na růst F. culmorum v celofánovém testu, rychlost růstu v mm/den
J76 kontrola
2,5
6,2 (D) Provedení způsobu vyhledávání a vyhodnocení výsledků
Pískové testy
Vysévací substrát
Jako vysévací substrát byl použit písek, velikost zrna 0,2 až 0,7 mm (Kauniston Sora Oy, Loimaa). Písek byl zvlhčen smícháním 4 dílů písku s 1 dílem vody. Ze seriálových desek s kelímky (Vefi-VP 96) byly nařezány desky s 5 * 7 kelímky (po 50 ml), které byly vloženy do krabice z umělé hmoty. Kelímky byly naplněny zvlhčeným pískem tak, aby 1 až 1,5 cm od horního okraje zůstalo volno. Do každého kelímku se zasejí tři semena jarní pšenice „Luja“.
Ošetření
Infekce Fusarium cumorum: F. culmorum vyrostlo na PDA deskách za teploty místnosti během 1 měsíce (dokud nesporuluje). Mycelium se sporami se oddělí z desky a smíchá se s destilovanou vodou homogenizerem Ultra-Turrax. Množství spor se upraví tak, aby v 1 ml bylo 106 spor. Roztok se pak zmrazí jako 30 ml podíly v sáčcích Minigrip na -20 °C. Pro test se zmrazené roztoky nechají roztát a promíchají se. Roztok se pak použije jako takový (základní roztok) nebo v ředění 10~2. Patogeničnost kmenů Fusarium se uchovává tím, že se nechají cirkulovat rostlinami (semena pšenice se naočkují suspenzí Fusarium a patogen se znovu izoluje z nemocných výhonků).
-16CZ 289942 B6
Suspenze antagonisty: PDA peleta odebraná z mrazáku a obsahující antagonistu se rozdělí na tři díly a nechá se růst na třech PDA deskách. Tyto desky se inkubují za teploty místnosti (ve tmě) tři týdny. Základní roztok suspenze antagonisty se připraví tak, že se dvě desky s antagonistou seškrabou do 50 ml destilované vody. Potom se tato směs promíchá v homogenizeru UltraTurrax. Ze základního roztoku se připraví ředění od 10“1 do 10-3.
Ošetření semen: Nejdříve se na semena vysetá do sérií kelímků na desce odpipetuje 1 ml suspenze F. culmorum a potom se přidá 1 ml suspenze antagonisty. 15 semen v 5 50ml kelímcích se ošetří všemi šesti kombinacemi suspenzi s různou hustotou spor (dvě ředění suspenzí F. cumorum x tři ředění suspenzí antagonisty).
Kontrolní ošetření: Každá deska s kelímky použitá pro jednu houbu má dalších 15 semen v 5 kelímcích, které byly ošetřeny jenom základním roztokem testovaných hub.
V pískovém testu bylo současně testováno 15 až 30 kmenů hub. Každý den testů byla oseta také jedna oddělená deska s kelímky, která pomohla zkontrolovat zdraví semen a také patogeničnost inokula F. culmorum. Tři kontrolní ošetření vysetá na oddělené desce byla následující: neočkováno (pouze voda), naočkováno základním roztokem F. culmorum a naočkováno ředěním základního roztoku F. culmorum (l--2). Pro každé z těchto třech ošetření bylo do deseti kelímků vyseto 30 semen.
Růstové podmínky: Po odpipetování houbové suspenze byla semena pokryta zvlhčeným pískem. Krabice s deskami kelímků byly obaleny průhlednou umělou hmotou a přeneseny do růstové komory (10 až 15 °C, 14 h světlo).
Pozorování: Po 16 až 18 dnech růstu byly sazeničky omyty tekoucí vodovodní vodou. Byly zjišťovány příznaky onemocnění. Výhonky, jejichž buňky kořenů nebo koleoptilu neztmavly, anevyklíčená semena, která zůstala tvrdá, byly považovány za zdravé. Výhonky, které měly různé příznaky, a nevyklíčená semena, která změkla, byly považovány za nemocné.
Nejdříve byly zkoumány kontrolní rostliny. Jestliže ze semen, která byla ošetřena vodou, se vyvinuly jenom zdravé rostliny, a z obojího ošetření patogenem se získaly různé příznaky onemocnění, byl test považován za přijatelný a bylo rozhodnuto provést pozorování rostlin ošetřených testovaným kmenem hub.
V pískovém testu byl stupeň pro každý izolovaný houbový kmen dán počtem ošetřených rostlin považovaných za nemocné. Jestliže klíčení rostlin ošetřených testovanými houbami bylo při srovnání se zdravou kontrolou zřetelně sníženo nebo jestliže byly zjištěny jiné příznaky, byly houby považovány za nevhodné pro další testy. Jestliže nebyla zjištěna poškození, byla každé ze šesti kombinací hustot spor patogenu a hustot spor testovaných hub odděleně vyhodnocena podle stupnice:
znamená všech 15 rostlin zdravých, znamená ne více než 2 poškozené rostliny, znamená 3 až 5 poškozených rostlin, znamená 6 až 9 poškozených rostlin, znamená 10 až 13 poškozených rostlin a znamená ne více než 1 zdravá rostlina.
Na základě shora uvedených 6 stupňů byly vybrány testované houbové kmeny pro další stupeň testování, tj. pro rašelinové testy. Pokračovalo se stěmi kmeny, které získaly alespoň třikrát stupeň hodnocení 0 a 1. Jestliže houba nezískala stupeň hodnocení 0, pokračovalo se pouze tehdy, jestliže alespoň čtyřikrát získala stupeň 1.
- 17CZ 289942 B6
Rašelinové testy
Růstový substrát
Jako růstový substrát byla použita propařená, pohnojená a provápněná rašelina. Až do podzimu 1992 byla používána neprosetá surová rašelina zTorronsuo, potom již prosetá surová rašelina z Eurajoki (hnojení: 800 g dolomitového vápna a 100 g rašelinového Y-lannos/100 1 rašeliny (Ylannos je obchodní značka finského univerzálního hnojivá)). Zvlhčená rašelina byla rozprostřena v krabicích z umělé hmoty (28,5*49,5*9,4 cm, Weibulls Robusta „Mammut“ box, Muoviyhtyma Oy) jako 5 cm vrstva. Na dně každé krabice byl film z umělé hmoty.
Ošetření
T znamená zdravé, neinfikované semeno letní pšenice „Luja“. Zaléváno destilovanou vodou.
F znamená semeno infikované F. culmorum. Tato semena byla namočena v základním roztoku F. cumorum (tento roztok byl použit v nadbytku) obsahujícím 106 spor/ml (kultivace Fusarium: viz pískový test). Po ošetření byla semena nechána vyschnout přes noc rozprostřená na papíru.
FO znamená infikování F. culmorum jako při F-ošetření. Když byla semena vysušena, byla zvlhčena základním roztokem antagonisty. Základní roztok byl připraven seškrabáním mycelia a spor zjedné desky antagonisty do 25 ml destilované vody. Toto ošetření bylo provedeno třepáním semen a roztoku antagonisty v malé láhvi z umělé hmoty. Po ošetření byla semena vysušena na papíru.
F2 znamená infikování F. culmorum jako při F-ošetření. Ošetření antagonistou jako při FOošetření 10-2 zředěním základního roztoku antagonisty.
Do rašeliny bylo vyseto 10 řádků, 30 semen/řádek. Pořadí výsevu bylo následující: ochranná řádka, F, FO, F2, T, F, FO, F2, T, ochranná řádka. Po vysetí byla semena pokryta rašelinou a krabice byly zvlhčeny.
Podmínky růstu
Sazeničky byly nechány růst ve skleníku při teplotě 15 °C. Během tmavé sezóny bylo přidáváno světlo vícekovovými lampami po dobu 12 h/den. Jestliže bylo potřeba, sazeničky byly zalévány vodou. Doba kultivace byla 18 dnů.
Hodnocení
Výhonky byly umyty a byly zjišťovány příznaky jejich onemocnění stejně jako v pískovém testu. Na základě pozorování z T- a F-ošetření bylo rozhodnuto, jestli byl test přijatelný. Zdravá kontrola (T) neměla více než celkem 12 nemocných rostlin (ze 60 zasetých semen). Patogenní kontrola (F) měla alespoň 52 nemocných rostlin (ze 60 semen). Testovaný houbový kmen byl přijat pro další fázi testování (pokusy s polní zemí), jestliže ze semen ošetřených jednou ze dvou koncentrací roztoku (po 60 semenech) nebylo získáno více než 19 nemocných rostlin.
Testy s polní zemí
Vysetí substrátu
Použitá země (pískový jíl) byla přinesena z polní pokusné plochy v Jokioinen. Země byla zbavena hrudek buď rukou nebo (v zimě 1992 až 1993) plochým sítem o velikosti ok 1*1 cm. 1,5 1 kelímky z umělé hmoty (o průměru 14 cm) byly naplněny tak, aby 3 až 4 cm od horního okraje zůstaly prázdné. Na dně kelímku byl filtrační papír.
-18CZ 289942 B6
Ošetřování
1. Zdravá semena. Zvlhčena pouze destilovanou vodou.
2. Fusarium kontrola. Semena byla navlhčena inokulantem Fusarium (prostředek, viz pískové testy), který měl 106 spor v ml. Tento roztok byl použit v nadbytku.
3. Inokulace jako u Fusarium kontroly. Když semena vyschla, byla ošetřena suspenzí antagonisty, která se připraví smícháním mycelia a spor jedné desky s 25 ml destilované vody. Ošetření se provede v láhvi z umělé hmoty, do které se vloží 130 semen (120 až 150 semen) a 1 ml (nebo 1,5 ml) suspenze antagonisty.
4. Fungicidní kontrola. Inokulace jako Fusarium kontrola. Když semena uschla, byla ošetřena 2 g prášku Baytan I na 1 kg semen. Dříve bylo používáno také ošetření prostředky Ceresan a Táyssato.
Ošetřená semena byla vyseta do kelímků, 36 semen/kelímek, tři opakování/ošetření. Vysetá semena byla pokryta polní zemí. Podmínky růstu jako v rašelinovém testu. Doba kultivace 4 týdny.
Zkoumání a hodnocení
Výhonky byly umyty a jejich onemocnění bylo vyhodnoceno:
znamená zcela zdravé, znamená mírné poškození Fusarium, znamená mírné až silné poškození onemocněním a znamená zhnědlé až zcela odumřelé výhonky.
Účinnost ve skleníkových testech
V létě 1993 byla v jednom pokusu na poli testována účinnost vybraných způsobů podle vynálezu.
V testu bylo zkoumáno, jestli byly pro další testování během výběrové série testů mezi říjnem 1991 a únorem 1993 vybrány správné druhy izolovaných houbových kmenů. Bylo zvoleno ošetření 60 z těch kmenů, které byly opuštěny v pískových testech a které nebyly patogenní u pšenice. Z kmenů, které byly opuštěny v rašelinových testech, jich bylo 92 vzato do testu. Všech 58 hub vybraných pro testy v zemi bylo vzato do testu. 43 z nich bylo opuštěno v zemním testu a 15 bylo vybráno na základě polních pokusů.
Vedle shora uvedených 210 ošetření zahrnoval test také 6 kontrolních ošetření: neošetřeno (K), ošetřeno prostředkem Baytan I (B) a čtyři houbové kmeny studované většinou v předcházejících testech, mezi jinými J76.
V testu byla použita pšenice „Luja“ přirozeně infikovaná houbou F. culmorum. Jako jednotka pozorování sloužil řádek výhonků dlouhý 1,4 m, pro jehož vysetí bylo použito 5,5 g semen. U všech 216 ošetření bylo vyseto 6 opakování (replikací). Náhodný výběr byl prováděn podle experimentální trojrozměrné mřížky. Tímto způsobem byla snížena variace chyby připisovaná faktorům týkajícím se země. Po 5 týdnech vysetí byly výhonky vykopány ze země a spočítány a byly studovány příznaky jejich onemocnění.
Výsledky testu jsou ilustrovány čtyřmi histogramy na obr. 3a až 3d. Mezi izoláty odstraněnými v rašelinovém testu a nepatogenními izoláty odstraněnými v pískovém testu nebyly zjištěny žádné rozdíly. Rašelinový test byl zřejmě velmi dobře vypracován. Kmeny, které z něj byly vzaty do dalších testů, byly v průměru zřetelně lepší než houby v něm odstraněné.
-19CZ 289942 B6
Celkové bylo v pískovém a rašelinovém testu opuštěno relativně málo hub, které neměly být odstraněny. Na druhou stranu, na základě testu se zemí bylo opuštěno podstatné množství velice dobrých izolátů, ale z těch, které byly vzaty pro polní pokusy, byly pouze dva z 15 defektní v polních podmínkách.
Z těchto výsledků lze uzavřít, že na základě pískových a rašelinových testů lze dobře zvolit nej lepší antagonisty pro další studie, ale v testech s polní zemí lze odstranit dokonce i dobré kandidáty na antagonisty.
Testování houbového kmene JI431 ve vybraných testech
Z houbových kmenů podle vynálezu byl JI431 testován ve všech třech vybraných pokusech prováděných ve skleníku.
V pískovém testu získal JI431 hodnocení 0, 0,1,1,1 a 2 a byl vzat pro další testy.
V rašelinovém testu získal J1431 následující výsledky:
T: 3 nemocné,
F: 36 nemocných,
FO: 3 nemocné a
F2: 7 nemocných.
V testu s polní zemí, v němž byl JI431 zahrnut, byla procenta nemocných výhonků podle různého ošetření následující:
zdravé 66 %, kontrola Fusarium 87 %, ošetření Baytan I 31 % a
J1431 19%.
Na základě zvolených testů byl JI431 vzat do polního testu s 61 dalšími houbovými kmeny v létě 1993. V testu byla použitá letní pšenice „Luja“ uměle infikovaná suspenzí spor houby F. culmorum. Semena byla vyseta na políčka 1 řádku (1,4 m). Test měl 6 opakování. Po 34 dnech od vysetí byly výhonky vykopány ze země, promyty a byly zjišťovány příznaky jejich onemocnění. Při různých ošetřeních byla získána následující množství zdravých výhonků na metr řádku:
| Fusarium kontrola ošetření Baytan I J76 J1431 jiné testované kmeny | 5,9, 56, 61, 65 a 30 až 68. |
Testování houbového kmene JI432 ve vybraných testech
JI432 byl testován ve všech třech vybraných testech prováděných ve skleníku.
V pískovém testu získal JI432 hodnocení 0, 0, 0, 1,1 a 2 a byl vzat pro další testy.
V rašelinovém testu získal JI432 následující výsledky:
T: 10 nemocných,
F: 60 nemocných,
-20CZ 289942 B6
FO: 10 nemocných a
F2: 37 nemocných.
V testu s polní zemí, v němž byl J1432 zahrnut, byla procenta nemocných výhonků podle různého ošetření následující:
zdravé 56 %, kontrola Fusarium 98 %, ošetření Baytan I 18 % a
J1432 38 %.
Na základě výsledků testů se zemí z pole nebyl J1432 vzat do polních testů.
Uložené mikroorganismy.
Podle Budapešťské dohody byly DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1 b, D-38124 Braunschweig, Německo, uloženy následující mikroorganismy:
| mikroorganismus | číslo uložení | datum uložení |
| Nectria pityrodes Montagne J76 Nectria pityrodes Montagne JI431 Nectria pityrodes Montagne JI 432 Nectria pityrodes Montagne MOS1 Nectria pityrodes Montagne ROS2 | DSM 7522 DSM 8805 DSM 8806 DSM 8807 DSM 8808 | 15. března 1993 10. prosince 1993 10. prosince 1993 10. prosince 1993 10. prosince 1993 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (11)
1. Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne J76 s číslem uložení DSM 7522.
2. Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne J1431 s číslem 25 uložení DSM 8805.
3. Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne J1432 s číslem uložení DSM 8806.
30
4. Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne MOS1 s číslem uložení DSM 8807.
5. Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne ROS2 s číslem uložení DSM 8808.
6. Biofungicid, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jeden houbový kmen vybraný ze skupiny zahrnující houbové kmeny Nectria pityrodes Montagne J76, J1431, J1432, MOS1 a ROS2, které mají čísla uložení DSM 7522, DSM 8805, DSM 8806, DSM 8807 a DSM 8808.
40
7. Biofungicidní prostředek, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jeden houbový kmen vybraný ze skupiny zahrnující houbové kmeny Nectria pityrodes Montagne J76, J1431, J1432, MOS1 a ROS2, které mají čísla uložení DSM 7522, DSM 8805, DSM 8806, DSM 8807 a DSM 8808, ve spojení s nosiči a/nebo přísadami.
-21 CZ 289942 B6
8. Biofungicidní prostředek podle nároku 7, vyznačený tím, že obsahuje nosiče a přísady vybrané ze skupiny zahrnující oxid křemičitý, mléčný prášek, karboxymethylcelulózu, sacharózu, kyselinu askorbovou a škrob.
9. Způsob výroby biofungicidního prostředku podle nároku 7 nebo 8, vyznačený tím, že se
a) houbový kmen podle kteréhokoliv nároku 1 až 5 nechá růst ve vhodném růstovém médiu, buněčná hmota se oddělí a přidají se k ní nosiče a/nebo přísady, načež se výsledná hmota vysuší a rozmělní na prach, nebo se
b) houbový kmen podle kteréhokoliv nároku 1 až 5 nechá růst ve vhodném růstovém médiu obsahujícím přídavek oxidu křemičitého, k takto získané hmotě se popřípadě přidají nosiče a/nebo přísady a výsledná hmota se vysuší a rozmělní na prach.
10. Způsob inhibování houbové infekce u rostlin, vyznačený tím, že se na rostliny nebo na jejich semena aplikuje biofungicid podle nároku 6 nebo biofungicidní prostředek podle nároku 7 nebo 8, nebo se biofungicid nebo biofungicidní prostředek přidají do růstového média před zasetím semen nebo po něm.
11. Použití houbového kmene Nectria pityrodes Montagne podle kteréhokoli nároku 1 až 5 jako pesticidu.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI940463A FI95598C (fi) | 1994-01-31 | 1994-01-31 | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ219096A3 CZ219096A3 (en) | 1996-10-16 |
| CZ289942B6 true CZ289942B6 (cs) | 2002-04-17 |
Family
ID=8539845
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19962190A CZ289942B6 (cs) | 1994-01-31 | 1995-01-27 | Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicid a biofungicidní prostředek jí obsahující, způsob výroby biofungicidního prostředku, způsob inhibování houbové infekce u rostlin a pouľití biofungicidu |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5811090A (cs) |
| EP (1) | EP0742816B1 (cs) |
| JP (1) | JPH09508274A (cs) |
| KR (1) | KR100361473B1 (cs) |
| CN (1) | CN1102958C (cs) |
| AT (1) | ATE227339T1 (cs) |
| AU (1) | AU686311B2 (cs) |
| BG (1) | BG63169B1 (cs) |
| BR (1) | BR9507052A (cs) |
| CA (1) | CA2182364A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ289942B6 (cs) |
| DE (1) | DE69528753T2 (cs) |
| DK (1) | DK0742816T3 (cs) |
| EE (1) | EE03243B1 (cs) |
| ES (1) | ES2185694T3 (cs) |
| FI (1) | FI95598C (cs) |
| HU (1) | HU220838B1 (cs) |
| LV (1) | LV11746B (cs) |
| MD (1) | MD1651G2 (cs) |
| NO (1) | NO963178L (cs) |
| NZ (1) | NZ278907A (cs) |
| PL (1) | PL179895B1 (cs) |
| PT (1) | PT742816E (cs) |
| RU (1) | RU2154381C2 (cs) |
| SK (1) | SK280507B6 (cs) |
| UA (1) | UA44889C2 (cs) |
| WO (1) | WO1995020646A1 (cs) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU768778B2 (en) * | 1999-01-29 | 2004-01-08 | Australian National University, The | A method of controlling fungal pathogens, and agents useful for same |
| AUPP839499A0 (en) | 1999-01-29 | 1999-02-25 | Australian National University, The | A method for controlling plant pathogens, and agents useful for same |
| FI119597B (fi) * | 2004-12-31 | 2009-01-15 | Verdera Oy | Stabiilit mikrobisiirrosteet ja menetelmät niiden valmistamiseksi |
| RU2305927C2 (ru) * | 2005-06-09 | 2007-09-20 | Федеральное государственное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" | Способ защиты растений |
| RU2458503C1 (ru) * | 2011-03-18 | 2012-08-20 | Государственное научное учреждение Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт садоводства и виноградарства Россельхозакадемии | Способ защиты многолетних культур от инфекционных заболеваний |
| CN103525707B (zh) * | 2013-04-19 | 2017-04-12 | 西南林业大学 | 一株丛赤壳属真菌及其在制备菌纹木中的应用 |
| MX365159B (es) | 2013-09-11 | 2019-05-24 | Bee Vectoring Tech Inc | Cepa aislada de clonostachys rosea para usarse como un agente de control biologico. |
| MD902Z (ro) * | 2014-09-03 | 2015-12-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de tratare a grâului de primăvară |
| RU2644338C1 (ru) * | 2017-05-18 | 2018-02-08 | Общество с ограниченной ответственостью "ЭКОГЕН" | Штамм микроорганизма Clonostachys rosea f. catenulata в качестве биофунгицида, стимулятора роста растений и продуцента метаболитов для сельскохозяйственного применения |
| CN113163764A (zh) * | 2018-11-29 | 2021-07-23 | 罗地亚经营管理公司 | 瓜尔豆（瓜尔）胶用于微生物生长的用途 |
| WO2020109585A1 (en) * | 2018-11-29 | 2020-06-04 | Rhodia Operations | Use of guar derivatives for microorganisms growth |
| WO2020109591A1 (en) * | 2018-11-29 | 2020-06-04 | Rhodia Operations | Use of guar derivatives in biofungicide compositions |
| US20220022460A1 (en) * | 2018-11-29 | 2022-01-27 | Rhodia Operations | Use of guar derivatives in biofungicide compositions |
| WO2020109581A1 (en) * | 2018-11-29 | 2020-06-04 | Rhodia Operations | Use of guar derivatives for microorganisms growth |
| CN109511484A (zh) * | 2019-01-07 | 2019-03-26 | 黑龙江省农业科学院经济作物研究所 | 亚麻的栽培方法及其在亚麻生产中的应用 |
| CN111269838B (zh) * | 2020-04-30 | 2023-06-09 | 福建省南平市农业科学研究所 | 利用感染赤霉病菌的大麦粒诱导分离土壤中拮抗菌的方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4456684A (en) * | 1982-09-08 | 1984-06-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by Gaeumannomyces graminis |
| US4818530A (en) * | 1983-06-22 | 1989-04-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preparation of pellets containing fungi for control of soilborne diseases |
| IL69368A (en) * | 1983-07-28 | 1990-03-19 | Yissum Res Dev Co | Fungicidal compositions containing trichoderma harzianum t-35 active against fusarium and method for using them |
| US4647533A (en) * | 1984-09-14 | 1987-03-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of Pythium spp. on small grain crops |
| CA1335363C (en) * | 1985-07-02 | 1995-04-25 | Imperial Oil Limited | Emergence-promoting rhizobacteria |
| CA1327333C (en) * | 1988-08-03 | 1994-03-01 | Jennifer L. Parke | Biological inoculant effective against aphanomyces |
| US4996157A (en) * | 1988-11-14 | 1991-02-26 | Cornell Research Foundation, Inc. | Biological control of phytophthora by trichoderma |
| GB8923407D0 (en) * | 1989-10-17 | 1989-12-06 | Ici Plc | Antifungal microorganism |
| GB9107678D0 (en) * | 1991-04-11 | 1991-05-29 | Ici Plc | Antifungal micro-organism |
-
1994
- 1994-01-31 FI FI940463A patent/FI95598C/fi not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-01-27 UA UA96083413A patent/UA44889C2/uk unknown
- 1995-01-27 CN CN95192307A patent/CN1102958C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-27 CA CA002182364A patent/CA2182364A1/en not_active Abandoned
- 1995-01-27 HU HU9602091A patent/HU220838B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 CZ CZ19962190A patent/CZ289942B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 AU AU15386/95A patent/AU686311B2/en not_active Ceased
- 1995-01-27 RU RU96117327/13A patent/RU2154381C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 EE EE9600100A patent/EE03243B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 DK DK95907021T patent/DK0742816T3/da active
- 1995-01-27 AT AT95907021T patent/ATE227339T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 US US08/682,624 patent/US5811090A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-27 KR KR1019960704155A patent/KR100361473B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-27 BR BR9507052A patent/BR9507052A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-01-27 SK SK973-96A patent/SK280507B6/sk unknown
- 1995-01-27 ES ES95907021T patent/ES2185694T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-27 JP JP7519905A patent/JPH09508274A/ja not_active Withdrawn
- 1995-01-27 EP EP95907021A patent/EP0742816B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-27 WO PCT/FI1995/000042 patent/WO1995020646A1/en active IP Right Grant
- 1995-01-27 PT PT95907021T patent/PT742816E/pt unknown
- 1995-01-27 DE DE69528753T patent/DE69528753T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-27 PL PL95315659A patent/PL179895B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 MD MD96-0242A patent/MD1651G2/ro unknown
- 1995-01-27 NZ NZ278907A patent/NZ278907A/en unknown
-
1996
- 1996-07-30 NO NO963178A patent/NO963178L/no unknown
- 1996-08-20 BG BG100790A patent/BG63169B1/bg unknown
- 1996-08-30 LV LVP-96-350A patent/LV11746B/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2127521C1 (ru) | Штамм актиномицета streptomyces lydicus для защиты растений от грибковой инфекции, композиция для защиты растений от грибковой инфекции (варианты), способ снижения чувствительности растения к грибковой инфекции (варианты) | |
| US10531666B2 (en) | Compositions and methods to reduce the population of wheat-stem sawfly and hessian fly | |
| CZ289942B6 (cs) | Biologicky čistá kultura houbového kmene Nectria pityrodes Montagne, biofungicid a biofungicidní prostředek jí obsahující, způsob výroby biofungicidního prostředku, způsob inhibování houbové infekce u rostlin a pouľití biofungicidu | |
| US5260302A (en) | Antifungal microorganism | |
| US5165928A (en) | Biological control of phytophthora by gliocladium | |
| WO1995020646A9 (en) | Microorganisms for biological control of plant diseases | |
| US6133196A (en) | Biological control of plant disease on roots of conifer seedlings | |
| US5968504A (en) | Fungus Gliocladium catenulatum for biological control of plant diseases | |
| CA2183275C (en) | Biological control of plant disease on roots of conifer seedlings | |
| Booth et al. | Fusarium diseases of cereals: XI. Growth and saprophytic activity of Fusarium nivale in soil | |
| Duponnois et al. | Effect of different West African species and strains of Arthrobotrys nematophagous fungi on Meloidogyne species | |
| KR0153138B1 (ko) | 향균성 미생물제제 및 그 제조방법 | |
| KR100236546B1 (ko) | R.solani에 길향력이 있는 세균 및 그를 이용한 식물병원균 구제용 미생물 제제 | |
| Chattannavar | Management of Wilt and Root Rots of Cotton with Special Reference to Bio-fungicide | |
| MXPA96002967A (es) | Microorganismos para el control biologico de lasenfermedades de las plantas | |
| JP2742137B2 (ja) | イネ科有用植物の病害防除剤及び防除方法 | |
| Anilkumar | Evaluation of Biocontrol Agents Agianst Collar Rot Pathogen (Sclerotium Rolfsii Sacc.) of Brinjal (Solanum Melongena L.) | |
| Rajkumar | Biocontrol of Post-harvest diseases of solanaceous vegetables | |
| JP2003231606A (ja) | アブラナ科植物病害の防除方法 | |
| CA2066309A1 (en) | Antifungal microorganism |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20050127 |