CZ285893B6

CZ285893B6 - Antiandrogenní sloučenina, její prekursor a farmaceutický prostředek ji obsahující

Info

Publication number: CZ285893B6
Application number: CZ942824A
Authority: CZ
Inventors: Fernand Labrie; Yves Merand; Shankar M. Singh
Original assignee: Endorecherche Inc.
Priority date: 1993-05-17
Filing date: 1993-05-20
Publication date: 1999-11-17
Also published as: FI945458A7; DE69329649D1; EP0650495A1; CZ287991B6; FI945458A0; JP2741286B2; ATE197458T1; WO1994026767A1; RU2141966C1; TW259791B; SK139194A3; RU94046463A; CZ282494A3; KR100241228B1; PL307333A1; FI945458L; CA2136303A1; EP0650495B1; JPH08510988A; HUT69408A

Abstract

Je popsána antiandrogenní sloučenina obecného vzorce I, v němž čárkované čáry značí případně vazby .PI., R.sup.4.n. značí -H nebo -CH.sub.3.n., R.sup.6.n. značí -H, -CH.sub.3.n., -CH.sub.2.n.CH.sub.3.n. nebo halogen a R .sup.17.alfa..n. je vybrán ze skupiny zahrnující A) nenasycenou uhlovodíkovou část, která má alespoň jeden atom uhlíku oddělený od kruhu D alespoň třemi zprostředkujícími atomy a která nemá žádný atom uhlíku oddělený od uvedeného kruhu D více než čtyřmi zprostředkujícími atomy, B) halogenovanou nenasycenou uhlovodíkovou část, která má alespoň jeden atom halogenu oddělený od uvedeného kruhu D alespoň třemi zprostředkujícími atomy a která nemá žádný atom uhlíku oddělený od uvedeného kruhu D více než čtyřmi zprostředkujícími atomy a C) halogenalkylovou část, která má alespoň jeden atom halogenu oddělený od uvedeného kruhu D alespoň třemi zprostředkujícími atomy a která nemá žádný atom uhlíku oddělený od uvedeného kruhu D více než čtyřmi zprostředkujícímu atomy, s tou výhraŕ

Description

Antiandrogenní sloučenina, farmaceutický přípravek ji obsahující a její použití

Oblast techniky

Vynález se týká antiandrogenní sloučeniny, farmaceutického přípravku ji obsahujícího a jejího použití. Antiandrogenní sloučeniny jsou inhibitory aktivity sexuálních hormonů vykazující vysokou antagonistickou účinnost, přičemž podstatně snižují agonistické účinky. Zejména jsou výhodné sloučeniny podle vynálezu odvozené od některých analogů testosteronu, které mají vysokou afinitu vůči androgenovým receptorům, přičemž neaktivují tyto receptory. Některé antiandrogeny mohou dále inhibovat tvorbu sexuálních steroidů nebo jejich prekurzorů.

Dosavadní stav techniky

Během léčení některých nemocí závislých na androgenu je důležité podstatně snížit, nebo, je-li to možné, eliminovat účinky způsobené androgenem. Pro tento účel je žádoucí blokovat přístup k androgenovým receptorům pomocí „antiandrogenů“ a tak chránit androgeny před vázáním a aktivací těchto receptorů a také snížit koncentraci androgenů, vhodných k aktivaci těchto receptorů. Je možné, že i v nepřítomnosti androgenů mohou být neobsazené receptory androgenu biologicky aktivní. Proto antiandrogeny, které vážou a blokují receptory, mohou vykazovat lepší léčebné výsledky, než léčba, při které se pouze inhibuje tvorba androgenu.

Antiandrogeny mohou vykazovat významný terapeutický účinek, spočívající ve snížení nebo zastavení postupu nemocí závislých na androgenu, např. nemocí, jejichž počátek nebo vývoj je způsoben aktivací receptorů androgenu.

Je žádoucí, aby antiandrogen, používaný k léčbě za účelem snížení aktivace receptorů androgenu, měl jak dobrou afinitu k receptorů androgenu, tak podstatně nízkou inherentní androgenní účinnost. První se týká schopnosti antiandrogenů vázat se k receptorů androgenu, a tak blokovat přístup k receptorů androgeny, druhý se týká vlivu antiandrogenů na receptor po navázání na něj. Některé antiandrogeny mohou vykazovat inherentní androgenní účinnost („agonistická účinnost“), která v nežádoucím smyslu aktivuje právě receptoiy androgenu, jejichž aktivaci mají zabraňovat. Jinými slovy, antiandrogen s intersní androgenní účinností může být úspěšně vázán k receptorům androgenu, v žádoucím smyslu blokovat přístup k těmto receptorům přírodními androgeny a může v nežádoucím smyslu sám aktivovat receptor.

Známé nesteroidní antiandrogeny, jako je flutamid a anandron, postrádají nežádoucí nadrogenní aktivitu, ale nemají afinitu k receptorů tak dobrou, jako steroidní antiandrogeny (tj. androgenní deriváty se steroidním jádrem modifikovaným tak, aby vykazovaly antiandrogenní aktivitu). Steroidní antiandrogeny nicméně vykazují nežádoucí agonistické vlastnosti.

V přihlášce, publikované 24. 1. 1991 pod č. WO 91/00732, se popisují nové steroidní antiandrogeny, zahrnující sloučeniny se steroidním jádrem, které mají nové substituenty v poloze 17a. Tato přihláška zahrnuje 17a-halogenalkinyl substituenty. Jako příklady řady 17ajodalkinylsubstituentů jsou uvedeny jodpentinyl až joddodecinyl. Jak je uvedeno dále, bylo nyní nalezeno, že celková účinnost antiandrogenních sloučenin je zvýšena pečlivým řízením velikosti, konfigurace a identity 17a-substituentu a zejména jeho vymezením, jak je uvedeno v nárocích přihlášky vynálezu.

Některé nostestosterony s určitými 17a-halogenalkinylovými postranními řetězci byly použity pro různé účely mimo obor farmacie Salmonem a kol. ((1); J. Steroid Biochem, díl 33, č. 1, str. 25-31 (1989); a (2); J. Steroid Biochem, díl 26, č. 3, str. 383-91 (1987)).

-1 CZ 285893 B6

Mezinárodní přihláška WO 92/05763 popisuje určité 16,16-disubstituované androstenové sloučeniny pro léčení nemoci kůže, závislých na androgenu.

Evropský patent č. 435 321 popisuje určité 17-substituované A-norsteroidní karboxylové kyseliny, používané k inhibici aktivity 5a-reduktázy u savců.

Uvedené nedostatky dosavadního stavu techniky jsou z převážné části odstraněny u tohoto vynálezu.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je antiandrogenní sloučenina obecného vzorce I

ve kterém přerušované čáry značí případné pí vazby,

R⁴ je-H nebo-CH₃,

R⁶ je -H, -CH₃, -CH₂CH₃ nebo halogen, značí však vodík, je-li v poloze 6, 7 přítomná pí vazba, a substituent

R¹⁷“ je vybrán ze skupiny, zahrnující

A) halogenovaný nenasycený uhlovodíkový zbytek, mající alespoň jeden halogenový atom, který je oddělen od kruhu D alespoň 4 zprostředkujícími atomy, a nemající žádný uhlíkový atom oddělený od kruhu D více, než 4 zprostředkujícími atomy, a

B) halogenalkylový zbytek mající alespoň jeden halogenový atom oddělený od kruhu D alespoň 3 zprostředkujícími atomy a nemající žádný uhlíkový atom oddělený od kruhu D více, než 4 zprostředkujícími atomy, s tou výhradou, že R¹⁷“ má jiný význam než -CsC-(CH2)₃X, značí-li substituenty R⁴ a R⁶ vodíky, přičemž X je halogen.

Výhodnými konkrétními sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou:

a-(4'-j odbutinyl)-17 p~hydroxy-4-androsten-3-on

17a-(4'-chlorbutinyl)-l Ί [3-hydroxy-4—androsten-3-on

17a-(5 '-chlorpentinyl)-17 P-hydroxy-6-androsta-4,6-dien

Užší výhodnější skupinou sloučenin uvedeného obecného vzorce I j sloučeniny obecného vzorce antiandrogenní

ve kterém n je 2 nebo 3,

X je chlor, brom nebo jod a

R⁴ a R^s mají shora uvedené významy.

-3CZ 285893 B6

Jiným předmětem vynálezu je farmaceutický přípravek k léčení nebo prevenci akné, hirsutismu, seborrhoei, alopecie a předčasné plešatosti mužů, který jako účinnou látku obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné antiandrogenní sloučeniny obecného vzorce I ve spojení s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

S výhodou farmaceutický přípravek jako účinnou látku obsahuje uvedenou sloučeninu EM-250 ve spojení s ředidlem nebo nosičem vhodnými pro topické použití.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je použití antiandrogenní sloučeniny obecného vzorce I pro výrobu léčiva k léčení nebo prevenci akné, hirsutismu, seborrhoei, alopecie a předčasné plešatosti mužů.

Pokud není uvedeno jinak, mají substituenty na steroidních jádrech antiandrogenů stereochemickou konfiguraci α nebo β. Případné pí vazby označené v molekulové struktuře přerušovanými čarami jsou nezávislé na jakýchkoliv dalších vazbách nacházejících se v této struktuře, jejich přítomnost není závislá na přítomnosti nebo nepřítomnosti dalších vazeb, ledaže mocenství vyžaduje vzájemnou závislost. Sloučeniny podle vynálezu mohou být formulovány jako prekurzory léčiv, které jsou převedeny in vivo na žádané aktivity sloučeniny. Atomy steroidních jader, které nenesou žádné substituenty, mohou být případně dále substituovány (pokud to mocenství dovoluje) v takové míře, že není podstatně a nepříznivě ovlivněna afinita sloučenin k receptoru androgenu a získané sloučeniny nejsou podstatně více androgenní.

Termín „nižší“ je zde použit pro chemickou část, mající 8 nebo méně atomů. Např. „nižší alkyl“ znamená Cj-Cg alkyl. Jakákoliv část obsahující více než dva atomy může být přímá nebo rozvětvená, pokud není uvedeno jinak.

Antiandrogeny a farmaceutické přípravky je obsahující mohou být využity podle vynálezu k léčení nemocí závislých na androgenu, jehož zvýšení je způsobeno aktivací receptorů androgenu, jako je např: rakovina prostaty, benigní prostatická hyperplasie, akné, seborrhea, hirsutismus, androgenní alopecie, předčasná plešatost u mužů apod.

17a-substituent antiandrogenů podle vynálezu může být rozvětvený nebo přímý řetězec. Je výhodné, když délka řetězce je 4 až 5 atomů uhlíku, přičemž rovné řetězce jsou výhodné. Nenasycené řetězce jsou rovněž výhodné, pokud se jedná o halogenované řetězce. Je výhodné, když délka řetězce je 4 až 5 atomů uhlíku, přičemž rovné řetězce jsou výhodné. Nenasycené řetězce jsou rovněž výhodné, pokud se jedná o halogenované řetězce. Je výhodné, když je nenasycený řetězec nenasycen alespoň v poloze α, β ke steroidnímu D-kruhu. Jobsubstituované 17a řetězce (např. EM 250 uvedený dále) jsou rovněž výhodné.

Halogenované řetězce mohou být halogenovány ve více než jedné poloze. Podobně nenasycené řetězce mohou být násobně nenasyceny, např. -CsC-CH=CH2. Je výhodné, když je přítomna případně dvojná vazba v poloze 4 steroidního kruhu A. Výhodné R^17asubstituenty zahrnují, nikoliv však s omezením, butinyl, butenyl, pentinyl, pentenyl, halobutinyl, halobutenyl, halopentinyl, halopentenyl, halobutyl a halopentyl. Další výhodné řetězce, nikoliv však s omezením, zahrnují CH2CH₂CH=CHX a

(CH₂)_nR¹⁰⁰ kde R¹⁰⁰ je vybrán ze skupiny obsahující H, F, Cl, Br a I a kde n znamená 2 nebo 3 a kde čárkovaná čáraje případně pí vazba. Halobutinyl a halobutenyl jsou zvlášť výhodné.

-4CZ 285893 B6

EM 250 je obzvláště vhodným antiandrogenem pro lokální použití, protože se má za to, že nemá žádné systémové antiandrogenní účinky při výrazných antiandrogenních účincích při lokálním použití. Tudíž jakýkoliv nechtěný průnik kůží, který se může objevit při lokálním použití EM 250, nezpůsobí žádné systémové účinky.

Některé neomezující příklady výhodných aktivních sloučenin a výhodných modifikací prekurzorů léčiv jsou uvedeny dále společně s výhodnými způsoby přípravy.

Příklad provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava 17a-(4'-chlorbutinyl)-17|3-hydroxy-4-androsten-3-onu (EM 248):

Příprava je popsána ve schématu 1.

Thioketal 2

K roztoku testosteronu 1 (288,43 g, 10 mol) (dostupný od fy Schering A.G.) v ledové kyselině octové (2,5 I) se přidá při teplotě 10 °C ethandithiol (85 ml, 1,06 mol) a etherát fluoridu boritého (800 ml). Směs se míchá při této teplotě 1 hodinu a nalije se na led (2 kg). Z vodné fáze se oddělí bílý pevný produkt, ten se odfiltruje, promyje vodou (2x 2 1) a suší na vzduchu. Krystalizaci z methanolu se získá čistý thioketal 2. Výtěžek 328,28 g (90 %).

’H NMR δ (CDClj, 300 MHz, TMS): 0,74 (s, 3H, 18CH₃), 1,03 (s, 3H, 19CH₃, 3,14-3,42 (m, 4H, SCH₂), 3,60 (t, 1H, J 8,4 Hz, 17aH), 5,47 ($, 1H, C-4H).

Keton 3

Způsob A: Roztok thioketalu 2 (182,3 g, 0,5 mol) v suchém dichlormethanu (1,5 1) se přidá po kapkách a při teplotě místnosti k roztoky pyridiniumchlorchromanu (150 mg, 0,7 molu), molekulárním sítům 3A (200 g) a acetátu sodnému (25 g). Jakmile je přidávání ukončeno směs se míchá 16 hodin a poté se zředí diethyletherem (2 1) a filtruje se přes silikagel na fritové nálevce. Filtrát se zahustí ve vakuu a vznikající pevná látka se krystalizuje z methanolu a získá se čistý keton 3. Výtěžek 158,7 g (87 %).

*H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,86 (s, 3H, 18CH₃), 1,02 (s, 3H, 19CH₃), 3,12-3,42 (m, 4H, SCH₂), 5,49 (s, 1H, C-4H).

Způsob B: Thioketal 2 (182,3 g, 0,5 mol) se rozpustí v roztoku 4-methylmorfolin N-oxidu (NMO) (87,9 g, 0,75 mol) v suchém dichlormethanu (1,5 I). Poté se přidá 200 g práškových molekulárních sít 4 A. Každých 5 minut se přidá po 1 g částech katalyzátor tetrapropylamoniumperruthenát (TOAP) (6 g, 3,5 % mol). Po 1 hodině se výchozí látky spotřebují. Pevná látka se odfiltruje přes polštářek se silikagelem a 4-methylmorfolin se odstraní promytím filtrátu zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (IN). Po sušení MgSO₄ se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Pevná látka se rozpustí ve směsi (500 ml) ethylacetátu a chloridu uhličitého (4/6). Roztok se přelije přes polštářek se silikagelem a eluuje se stejnou směsí rozpouštědel. Odpaří se rozpouštědlo a po vysušení se získá keton 3 (137 g, 75 %).

-5CZ 285893 B6

Tetrahydropyranylether 4

2-(3-butinyloxy)tetrahydro-2H-pyran (112,5 g, 0,729 mol) se přidá po kapkách k roztoku methyllithia (500 ml MeLi 1,4M v etheru, 0,7 mol) v 1 1 bezvodého THF při teplotě -30 °C pod atmosférou dusíku v 5 1 baňce. Jakmile se přidávání skončí, odstraní se ochlazovací lázeň a roztok se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Roztok se opět ochladí na teplotu -30 °C a po kapkách se přidá roztok ketonu 3 (75 g, 0,2 mol) v 2,5 1 bezvodého THF. Po skončení přidávání se odstraní ochlazovací lázeň a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 1 hodin. Ke směsi se přidá 100 ml solanky a roztok se zředí ethylacetátem, promyje solankou a suší se bezvodým MgSO₄. Rozpouštědlo se odpaří a po krátké době začne krystalizace. K dokončení vysrážení se přidá hexan. Pevná látka se filtruje a promyje hexanem. Sloučenina 4 se použije bez dalšího čištění v příštím kroku. Výtěžek 95,8 g (90 %).

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,82 (s, 3H, 18CH₃), 1,01 (s, 3H, 19CH₃), 2,52 (t, 2H, J 6,8Hz, CCCH₂), 3,15-3,44 (m, 4H, SCH₂), 3,50-3,56 (m, 2H, CH₂OTHP), 3,75-3,90 (m, 2H, pyran OCH₂), 4,66 (s, 1H, OCHO), 5,47 (s, 1H, CMH).

Alkohol 5

Směs sloučeniny 4 (100 g, 0,19 mol) a methyljodidu (250 ml, 3,8 mol) v 95% methanolu (2,5 1) se zahřívá pod refluxem po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a surová směs se zředí ethylacetátem (2,5 1). Organická fáze se promyje 3% NaOH (3 x 750 ml) a suší se přes MgSO₄. Po odpaření rozpouštědla se pevná látka promyje diethyletherem, filtruje na fritové nálevce a opět se promyje diethyletherem. Sloučenina 5 může být použita bez dalšího čištění v následujícím kroku. Výtěžek 45,5 g (66 %). Vzorek rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a hexanu a získá se následující látka:

Teplota tání: 179 až 181 °C ‘H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,85 (s, 3H, 18CH₃), 1,17 (s, 3H, 19CH₃), 1,17 (s, 3H, 19CH₃), 2,45 (t, 2H, J=6,0 Hz, CCCH₂), 3,70 (t, 2H, J=6,1 Hz, CH₂OH), 5,71 (s, 1H, C-4H).

17a-(4'-chlorbutinyl)-17[3-hydroxy-4-andosten-3-on (EM 248)

Směs alkoholu 5 (15 g, 0,04 mol), trifenylfosfinu (21 g, 0,08 mol) a chloridu uhličitého (9,3 g, 0,06 molu) se zahřívá pod refluxem v 1 1 bezvodého dichlormethanu po dobu 10 hodin. Po odpaření rozpouštědla se surová směs absorbuje na silikagelu a chromatografuje na tomto gelu (mžiková chromatografie) směsí diethyletheru a hexanu (70:30). Sloučenina se dále čistí krystalizaci v diethyletheru.

Výtěžek 85 %.

Teplota tání 120 až 121 °C.

'H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,87 (s, 3H, 18CH₃), 1,19 (s, 3H, 19CH₃), 2,69 (t, 2H, J=7,0 Hz, CCCH₂), 3,58 (t, 2H, J=7 Hz, CH₂C1), 5,72 (s, 1H, C-4H).

Hmotnost spektrometrie s vysokou rozlišovací schopností (dále HRMS)

HRMS: vypočteno pro C₂₃H₃iO₂C1: 374,2013 nalezeno: 374,20153

Analýza vypočtená: C 73,68; H 8,33; Cl 9,46 nalezená: C 73,65; H 8,45; Cl 9,58

-6CZ 285893 B6

Schéma 1

Příklad 2

Příprava 17a-(4'-jodobutinyl)-17p-hydroxy-4-androsten-3-onu (EM 250)

Příprava A

Ke směsi trifenylfosfinu (7,87 g, 30 mmol) a jodu (7,61 g, 30 mmol) v suchém dichlormethanu (500 ml) se přidá při teplotě místnosti imidazol (2,04 g, 30 mmol). Po chvíli se vysráží pevná látka. Pak se při teplotě místnosti přidá alkohol 5 (7,13 g, 20 mmol). Po 30ti minutovém mícháni se roztok zředí etherem (100 ml) a pevná látka se filtruje na fritové nálevce. Filtrát se odpaří a zbytek se chromatografuje na silikagelu (mžiková chromatografie) směsí diethyletheru a heanu (70/30) jako eluentu. Sloučenina (EM 250) se dále čistí krystalizací v diethyletheru. Výtěžek

6,34 g (68 %).

Teplota tání: 124,5 až 125,5 °C.

IČcm’¹ (KBr) 1611, 1653, 2873,2948, 3380 a 3510.

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,86 (s, 3H, 18 CH₃), 1,17 (s, 3H, 19 CH₃), 2,80 (t, 2H, J=7,l Hz, CCH), 3,21 (t, 2H, J=7,l Hz, CH₂, 5,71 (s, 1H, C-4H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 2,5, 12,7, 20,8, 23,2, 23,9, 31,5, 32,7, 33,9, 35,7, 36,3, 38,6, 38,9, 46,8, 49,8, 53,5, 65,8, 79,8, 84,8, 85,7, 123,9, 171,2, 199,5.

Hmotové spektrum m/e: 467 (M⁺), 426, 369, 339, 321, 245, 149, 123, 105, 79(100).

HRMS vypočteno pro C₂₃H₃iO₂I: 466,1369. nalezeno: 466,1382.

Analýza vypočtená: C 59,23; H 6,70; I 27,21 nalezená: C 59,22; H 6,55; 127,05

Příprava B

3- methoxyandrosta-3,5-dien-l 7-on (6)

4- androsten-3,17-dion (15 g, 52 mmol) (dostupný od fy Aldrich Chemical Co, Milwaukee, Wis, USA) v THF (100 ml) se zpracuje (MeO)₃CH (17 g, 156 mmol) a p-TSA.H₂O (450 mg, 2,37 mmol). Směs se míchá 2,5 hodiny a zpracuje se Et₃N (2,1 ml, 15,6 mmol) a poté H₂O (4 ml). Po odstranění rozpouštědla se získá žlutý koláč, který se míchá s vodou (100 ml) po dobu 10 minut a poté se filtruje. Pevná látka se promyje vodou (4 x) a suší se při 80 °C ve vysokém vakuu po dobu 12 hodin a získá se produkt (15,6 g, 100 %).

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,93 (s, 3H, 18-CH₃), 0,99 (s, 3H, 19-CH₃), 3,57 (s, 3H, OCH₃), 5,13 (s, 1H, C₄-H), 5,25 (bs, 1H, C₆-H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 220,83, 155,36, 140,92, 117,31, 98,35, 54,20, 51,89, 48,38, 47,58, 35,78, 35,23, 33,68, 31,46, 31,41, 30,66, 25,18, 21,76, 20,44,18,99, 13,61.

β-hydroxy-l 7 a-(4'-hydroxybutinyl)-4-androsten—3-on (7)

-8CZ 285893 B6

Ke směsi diisopropylaminu (0,14 ml, 5 % 19,98 mmol) a 3-butin-l-olu (1,5 ml, 19,98 mmol) v THF (30 ml) se při teplotě -40 °C přidá n-butyllithium (7,9 ml 19,78 mmol). Směs se míchá 1 hodinu a poté se přidá chlortrimethylsilan (2,5 ml, 19,98 mmol) a směs se míchá další hodinu (úplnost reakce se kontroluje NMR). Po kapkách se přidá n-BuLi (7,9 ml, 19,78 mmol). Po jedné hodině se přidá steroid 6 (2 g, 6,6 mmolu) v THF (35 ml) a směs se míchá 90 minut (chromatografie na tenké vrstvě ukazuje nepřítomnost výchozích látek) při teplotě -40 °C. Přidá se voda (30 ml) a konc. HC1 (3 ml) a obsah se refluxuje 1 hodinu (hydrolýza se kontroluje chromatografií na tenké vrstvě). Odstraní se THF a vodný roztok se extrahuje CH₂C1₂ (5 x 40 ml). Organická vrstva se promyje postupně nasyc. NaHCO₃ a solankou. Sušením a odstraněním rozpouštědla (vodní vývěva a poté vysoké vakuum) se získá surový produkt (2,4 g), který rekrystalizuje ze směsi n-hexanu a ethylacetátu (obsah se udržuje před filtrací v chladné místnosti po dobu 24 hodin) a získá se čistý produkt (2,01 g, 85 %).

*H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,84 (s, 3H, I8-CH3), 1,16 (s, 3H, 19-CH₃), 3,14 (bs, 1H, OH), 3,30 (s, 1H, OH), 3,68 (t, 2H, J=5,87 Hz, CH₂OH), 5,71 (s, 1H, C₄-H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 199,58, 171,42, 123,48, 85,71, 82,69, 79,27, 60,75, 53,17, 49,59, 46,35, 38,64, 38,38, 35,96, 35,36, 33,62, 32,54, 32,39, 31,22, 22,87, 22,78, 20,47, 17,13, 12,58.

17f3-hydroxy-l 7a-(4'-tosyloxybutinyl)-4-androsten-3-on (8)

Do 100 ml tříhrdlé baňky opatřené míchadlem a teploměrem se dá 17a-hydroxy-17[3-(4hydroxy-l-butinyl)-androst-4-en-3-on (4,0 g, 11,22 mmol) a pyridin (10,65 g, 134,64 mmol). Baňka se ochladí na 0 °C. Při této teplotě se přidá p-toluensulfonylchlorid (2,35 g, 12,34 mmol) po částech během 20 až 30 minut nebo takovou rychlostí, že teplota nepřestoupí 20 °C. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu .12 hodin a poté se zředí 30 ml kyseliny chlorovodíkové v 70 ml ledové vody. Vodný roztok se extrahuje methylenchloridem (3 x 100 ml). Spojená organická fáze se promyje solankou a vysuší se. Odstraněním rozpouštědla vodní vývěvou při 40 °C se získá pevná látka, která se dále suší ve vysokém vakuu po dobu 3 hodin a získá se produkt (4,84 g, 93 %). Analýza ’Η-NMR spektra indikovala směs tosylátu (75 %) a chloridu (25 %).

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,84 (s, 3H, 75 % 18-CH₃), 0,85 (s, 3H, 25 % 18-CH₃), 1,16 (s, 6H, 2CH₃), 2,41 (s, 3H, ArCH₃), 2,57 (t, 2H, J=6,8, 6,8 Hz, 75 % CH₂), 2,7 (t, 2H, J=6,7, 6,8 Hz, 25 % CH₂), 3,55 (t, 2H, J=6,7, 6,7 Hz, 25 % CH₂), 4,06 (t, 2H, J=6,8, 6,8 Hz, 75 % CH₂), 5,70 (s, 1H, C₄H), 7,31 (d, 2H, J=8,2 Hz, ArCH₂,Hó,), 7,75 (d, 2H, J=8,3 Hz, ArH₃,H₅,).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 199,6, 171,4, 145,0,133,0,129,9,127,8,123,8, 86,1, 80,3, 79,6, 67,8, 53,5, 53,2, 49,8, 46,7, 42,1 (C₄, Cl), 38,8, 38,6, 36,2, 35,7, 35,6, 33,9, 32,8, 32,5, 31,5, 31,4,23,0, 21,7 (ArCH₃), 20,7,19,9, 17,4, 12,8.

17p-hydroxy-17a-(4^,-jod-l-butinyl)-4-androsten-3-on (EM 250)

Výše uvedená směs (2,2 g, 4,45 mmol) a Nal (1,33 g, 4,45 mmol) v 2-butanonu (12 ml) se refluxuje při 100 °C po dobu 12 hodin. Po 1 hodině byla chromatografií na tenké vrstvě stanovena úplná konverze tosylátu na jodid, nicméně konverze chloridu na jodid potřebovala 12 hodin (NMR). Odstraněním rozpouštědla se získá zbytek, který se rozpustí ve vodě (50 ml) a extrahuje se methylenchloridem (3 x 80 ml). Spojená organická fáze se promyje 1 % vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného (80 ml) a poté solankou a vysuší se. Odstraněním rozpouštědla při sníženém tlaku a při 40 °C se získá surový produkt, který se čistí na koloně za použití hexanu a acetonu (4/1) a získá se produkt (1,97 g, 95 %). Rekrystalizací ze směsi hexanu a acetonu se získá čistý produkt který je identický se sloučeninou ze syntézy A.

-9CZ 285893 B6

Teplota tání 124,5 až 125,5 °C.

Schéma 3

Způsobem podobným způsobu popsanému v příkladech 1 a 2 se připraví sloučeniny popsané v tabulce 1 za použití různých tetrahydropyranyloxyalkinů a různých halogenidů uhličitých jako alkylačních činidel

-10CZ 285893 B6

Tabulka I

Název

EM 248

EM 249

EM 250

EM 263

EM 583

EM 264

Cl2

Br2

I2

Cl1

F1

Br1

Příklad 4

Příprava 17[3-hydroxy-17a-(4'-jodbut-T(E)-enyl)-4-androsten-3-onu (EM 816)

Cetoenol 6 (300 mg, 1 mmol) a chlormethylfenylsulfon (191 mg, 1 mmol) v suchém tetrahydrofuranu se zpracují 1M ter. butoxidem draselným (1,3 ml) při teplotě místnosti v atmosféře argonu. Jakmile se výchozí látky spotřebují (stanoveno chromatografií na tenké vrstvě) přidá se voda a extrakcí s etherem se získá epoxysulfon 9.

Surový epoxysulfon 9 (360 mg, 0,8 mmol) v suchém tetrahydrofuranu se zpracuje pod argonem po dobu 2 hodin při teplotě místnosti terč, butoxidem draselným (890 mg, 8 mmol) a vodou (43 mg, 2,4 mmol). Extrakcí etherem se získá surový hydroxyaldehyd 10, který se rozpustí v triethylaminu (10 ml), acetanhydridu (150 μΐ) a 4-(dimethylamino)pyridinu (10 mg). Po několika dnech se pod argonem přidá methanol a směs se míchá 30 minut a koncentruje se ve vakuu. Acetoxyaldehyd 11 se extrahuje etherem a čistí se mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

Acetoxyaldehyd 11 (188 mg, 0,5 mmol) vtetrahydrofuranu se přidá pod dusíkem klidovému komplexu LiBr připraveném in šitu z 3-brom(tetrahydro-2'H-pyran-2'yl)oxypropanu, trifenylfosfinu, bromidu lithného a n-butyllithia ve stejném rozpouštědle při nízké teplotě. Po několika hodinách se přidá fenyllithium (0,5 ml), poté terč, butylalkohol a roztok se zahřívá do ukončení reakce. Přidá se voda a adukt 12 se extrahuje etherem a čistí se mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

K roztoku aduktu 12 (350 mg, 0,7 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (5 ml) se přidá pod argonem při 0 °C terč, butoxid draselný (110 mg, 1 mmol) v terč, butylalkoholu. Po 40ti minutovém míchání se roztok vlije do ledové vody a extrahuje se ethylacetátem. Zbytek se rozpustí v methanolu (10 ml) a přidá se několik kapek koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se zahřívá pod refluxem 2 hodiny, koncentruje se ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem. Cetodiol 13 se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

Ke směsi trifenylfosfinu (196 mg, 0,75 mmol) a jodu (190 mg, 0,75 mmol) v suchém dichormethanu (10 ml) se přidá při teplotě místnosti imidazol (51 mg, 0,75 mmol). Po krátkém

-11CZ 285893 B6 čase se vysráží pevná látka. Poté se přidá při teplotě místnosti cetodiol 13 (234 mg, 0,5 mmolu), směs se míchá 30 minut a zředí se etherem. Vzniklá pevná látka se filtruje. Filtrát se odpaří a zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi hexanu a etheru jako eluentu a získá se jodid EM 816.

Schéma 4

Příklad 5

Způsob podobným způsobu popsanému v příkladu 4 se připraví sloučeniny uvedené v tabulce 2 za použití různých brom-(tetrahydro-2^,H-pyran-2'yl)oxyalkanů nebo různých halogenidů uhličitých místo jodu.

-12CZ 285893 B6

Tabulka 2

Cl

Název

EM 810

EM 812

EM 816

EM 850

EM 851

Příklad 6

Příprava 17a-(4'-brombut-l '(Z)-enyl)-l 7[3-hydroxy-4-androsten-3-onu

Tato příprava je popsána ve schématu 5.

Hydroxyketal 14

Testosteron (50 g, 0,17 mol) (dostupný od fy Schering, A.G.) se zpracuje v zařízení vybaveném systémem Dean-Stark diethylenglykolem (100 ml) v toluenu (11) v přítomnosti katalytického množství p-toluensulfonové kyseliny (1 g) pod refluxem po dobu 16 hodin. Po ochlazení a přidání etheru se organická fáze promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se a odpařuje a získá se hydroxyketal 14.

Cetoketal 15

K. hydroxyketalu 14 (40 g, 0,12 mol) v suchém methylenchloridu (11) se přidá pyridiniumdichroman (90 g, 0,24 mol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a filtruje se na silikagelu předběžně zpracovaném 1% triethylaminem za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

Butinyl-adukt 16

Do plamene vysušené baňky se pod atmosférou argonu dá (tetrahydro-2'H-pyran-2'yl)oxybutin (77 g, 0,5 mol) a bezvodý tetrahydrofuran (1 1). Roztok se ochladí na -78 °C a přidá se 2,5N BuLi (200 ml) a roztok se míchá při této teplotě po dobu 2 hodin. Poté se přidá cetoketal 15 (33 g, 0,1 mol) v tetrahydrofuranu (1 1). Po 2 hodinách se přidá voda a směs se zahřeje na teplotu místnosti. Roztok se koncentruje ve vakuu a extrahuje se etherem. Organická fáze se promyje vodou, suší a odpaří se. Zbytek se čistí na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

Z-butenyl-adukt 17

K. butinyl-aduktu 16 (43,7 g, 0,9 mol) rozpuštěném v 500 ml suchého acetonu a 120 ml suchého pyridinu se přidá 5% palladium s obsahem malého množství olova na uhličitanu vápenatém (3 g) (Lindlarův katalyzátor, dostupný od fy Aldrich Chemical Co, Milwaukee, Wis, USA). Po

-13CZ 285893 B6 trojnásobném propláchnutí vodíkem se směs míchá pod vodíkem a při atmosférickém tlaku během alespoň 15 minut a poté se filtruje na celitu. Pevná látka se promyje směsí methanolu a methylenchloridu a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

17a-(4'-brombut-l '(Z)-enyl)-l 7fJ-hydroxy-4-androsten-3-on (18)

Za použití postupu popsaného A. Wagnerem a kol. (Tetrahedron Letters 30, 557-558, 1989) se převede tetrahydropyranyloxyskupina na bromid. Tak se přidá pod argonem při teplotě místnosti 10 CBr₄ (31,5 g, 0,095 mol) k roztoku Z-butenyl-aduktu 17 (25,2 g, 0,06 mol) vbezvodém methylenchloridu (300 ml). Po 10ti minutovém míchání se roztok ochladí na 0 °C a přidá se trifenylfosfin (44,5 g, 0,17 mol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a filtruje se přes silikagel. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi (500 ml) methanolu a vody (9:1) a přidá se několik kapek HC1. Směs se zahřívá několik minut, ochladí se, odpaří a extrahuje se 15 ethylacetátem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, suší se a odpaří se do sucha. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

-14CZ 285893 B6

Schéma 5

Příklad 7

Příprava 17a-(4'-jodbut-l'(Z)-enyl-17p-hydroxy-4-androsten-3-onu (19)

Výše uvedená sloučenina 18 (2,1 g, 5 mmol) a Nal (1,5 g, 5 mmolu) v 2-butanonu (12 ml) se io refluxuje po dobu 12 hodin. Odstraněním rozpouštědla se získá zbytek který se rozpustí ve vodě (50 ml) a extrahuje se methylenchloridem (3 x 80 ml). Spojená organická fáze se promyje 1% vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného, poté solankou a vysuší se. Odstraněním rozpouštědla při sníženém tlaku a teplotě 40 °C se získá surový produkt, který se čistí na koloně za použití směsi hexanu a acetonu jako eluentu a získá se čistý produkt (4,75 mmol, 95 %.).

-15CZ 285893 B6

Příklad 8

Způsobem podobným způsobu uvedenému v příkladech 6 a 7 se získají sloučeniny popsané v tabulce 3 za použití různých (tetrahydro-2'H-pyran-2'-yl)oxyalkinů nebo různých halogenidů uhličitých jako reagentů.

Tabulka 3

Název	X	n
EM 821	Cl	2
EM 831	Br	2
EM 817	I	2
EM 849	Cl	3
EM 848	I	3

Příklad 9

Příprava 17a-(5'-chlorpentinyl)-173-hydroxy-6a-methyl-4-androsten-3-onu (EM 339) Tato příprava je popsána ve schématu 6.

Epoxid 20

Kcetalu 14 (40 g, 0,21 mol) v isopropanolu (500 ml) se přidá monoperoxyftalová kyselina, hořečnatá sůl (MMPP) (89,6 g, 0,18 mol) ve vodě (250 ml). Směs se zahřívá na teplotu 50 °C po dobu 3 hodin a poté se odpaří a filtruje. Filtrát se extrahuje ethylacetátem a organická fáze se promyje vodou, suší a odpaří. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu směsí ethylacetátu a hexanu (4 : 6) a získá se β-isomer (20 g) a a-isomer (17 g).

Cetoalkohol 21

K methylmagnesiumchloridu (20 ml, 6M v THF) se po kapkách přidá pod argonem a-isomer epoxidu 20 (7,0 g, 0,02 mol) v bezvodém etheru (250 ml). Směs se zahřívá pod refluxem 1 hodinu a míchá se při teplotě místnosti 3 hodiny a přidá se chlorid amonný. Směs se extrahuje diethyletherem. Organická fáze se promyje vodou, suší a odpaří se do sucha.

Ke zbytku rozpuštěném v suchém methylenchloridu (400 ml) se přidá celit (18g) a pyridiniumdichroman (18 g) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Reakční směs se poté vlije do diethyletheru a filtruje přes florisil povlečený vrstvou celitu. Odpařením rozpouštědla se získá surový cetoalkohol 21 který se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu směsí ethylacetátu a hexanu (4 : 6).

-16CZ 285893 B6

Adukt 22

V 1 1 baňce se přidá po kapkách pod atmosférou argonu při -60 °C 2-(4-pentyloxy)tetrahydro2H-pyran (13,8 g, 0,083 mol) k roztoku methyllithia (59 ml MeLi 1,4M v etheru, 0,08 molu) ve 200 ml bezvodého THF. Jakmile je přidávání ukončeno chladicí lázeň se odstaví a roztok a nechá stát 5 hodin. Roztok se opět ochladí na -60 °C a po kapkách se přidá roztok cetoalkoholu 21 (6 g, 0,017 mol) ve 150 ml bezvodého THF. Po skončení přidávání se odstaví chladicí lázeň a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. K této směsi se přidá 20 ml solanky a roztok se zředí ethylacetátem, promyje solankou a suší bezvodým MgSO₄. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se čistí sloupcovou chromatografii na silikagelu směsí ethylacetátu a hexanu (0 : 10 až 4 : 6) a získá se adukt 22 (7,5 g, 0,014 mol).

Cetotriol 23

Adukt 22 (6,2 g, 12 mmol) se rozpustí ve směsi kyseliny octové, acetonu, THF a vody (4:2:2:1) a zahřívá se pod refluxem po dobu 24 hodin. Poté se směs koncentruje na polovinu svého objemu, ochladí a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje solankou, suší a odpaří. Rekrystalizací zbytku směsí benzenu a hexanu se získá surový cetotriol 23 (3,1 g, 7,7 mmol).

Enondiol 24

K cetotriolu 23 (1,0 g, 2,8 mmol) rozpuštěném v methanolu (150 ml) se přidá 0,lM NaOH (10 ml) a roztok se zahřívá na teplotu 50 °C po dobu 24 hodin. Po neutralizaci zředěnou kyselinou chlorovodíkovou se přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se promyje vodou, suší se a odpaří do sucha. Zbytek se čistí mžikovou chromatografii na silikagelu za použití směsi acetonu a hexanu (0 : 10 až 2 : 8) jako eluentu a získá se enondiol 24 (784 mg, 2,0 mmol).

Teplota tání 153 až 154 °C.

17a-(5'-chlorpentinyl)-17P-hydroxy-6cc-methyl-4-androsten-3-on (EM 339)

Směs enondiolu 24 (102 mg, 0,27 mmol), trifenylfosfinu (130 mg, 0,5 mmol) a chloridu uhličitého (40 mg, 0,26 mmol) se zahřívá pod refluxem v 20 ml bezvodého dichlormethanu po dobu 10 hodin. Po odpaření rozpouštědla se surová směs absorbuje mžikově na silikagelu a eluuje se směsí ethylacetátu a hexanu (0 : 10 až 3: 7) a získá se EM 339 (66 mg, 0,16 mmol).

Teplota tání 56 až 58 °C.

IČ cm'¹ (KBr) 1606,4, 1663,1, 2871,9, 2947,6, 3414,4 *HNMR δ (CDClj, 300 MHz, TMS): 0,88 (s, 3H, 18-CH₃), 1,07 (d, 3H, J=6,43 Hz, 6-CH₃), 1,19 (s, 3H, 19-CH₃), 2,42 (t, 2H, J=6,85 Hz, CCCH₂), 3,63 (t, 2H, J=6,37 Hz, CH₂C1), 5,79 (s, 1H, C-4H).

¹³CNMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 12,8, 16,3, 18,4, 20,9, 23,0, 31,4, 32,7, 33,7, 33,8, 36,0, 36,1, 39,0, 39,2, 40,6, 43,6, 46,8, 49,9, 53,8, 77,2, 79,8, 84,4, 121,3, 174,2 a 199,8.

Hmotové spektrum m/e: 402 (Mj, 369,259,137, 105, 91(100), 79, 67, 55.

-17CZ 285893 B6

Schéma 6

Příklad 10

Příprava 17a-(5'-jodpentinyl)-17P-hydroxy-6a-methyl—4-androsten-3-onu (EM 371):

ίο 17a-(5'-brompentinyl)-l 7|3-hydroxy-6a-methyl-4-androsten-3-onu (EM 304):

Tato sloučenina se připraví způsobem podobným způsobu popsanému v příkladu 9 za použití bromidu uhličitého místo chloridu uhličitého.

-18CZ 285893 B6

IČ cm’¹ (KBr) 1600, 1650, 2890,2950, 3400.

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,88 (s, 3H, 18-CH₃), 1,07 (d, 3H, J=6,44 Hz, 6-CH₃), 1,20 (s, 3H, 19-CH₃), 2,42 (t, 2H, J=5,28 Hz, CCCH₂), 3,50 (t, 2H, J=4,98 Hz, CH₂Br), 5,79 (s, 1H, C—4H).

^,3C NMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 12,8, 17,5, 18,3, 20,9, 23,0, 31,4, 32,3, 32,6, 33,6, 33,8, 35,9, 36,0, 38,9, 39,1, 40,5, 43,6, 46,7, 49,8, 53,7, 79,7, 84,2, 121,2,174,4 a 199,8.

Hmotové spektrum m/e: 448, 446 (M⁺), 433, 431, 340, 259, 137 (100), 91, 55.

17a-(5'-jodpentinyl)-17P-hydroxy-6a-methyl—4—androsten-3-on (EM 371):

K EM-304 (140 mg, 0,32 mmol) v acetonu (20 ml) se přidá Nal (75 mg, 0,5 mmol) a směs se zahřívá přes noc pod refluxem. Po ochlazení a odstranění rozpouštědla se přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se promyje 1% hydrogensiřičitanem sodným a vodou, suší se a odpaří se do sucha. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití směsi acetonu a hexanu (0 : 10 až 1 : 9) a získá se EM-371 (79 mg, 0,16 mmol).

Teplota tání: 68 až 70 °C.

IČ cm'¹ (KBr) 1605,9,1683,1, 2491,3, 3423,3.

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,87 (s, 3H, 18-CH₃), 1,06 (d, 3H, J=6,32 Hz, 6-CH₃), 1,18 (s, 3H, 19-CH₃), 1,96 (q, 2H, J=6,7 Hz, CH₂CH₂I), 3,27 (t, 2H, J=6,80 Hz, CH₂I), 5,78 (s, 1H, C-4H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 75 MHz, TMS): 5,2, 12,8, 18,3, 19,8, 20,9, 22,9, 29,6, 31,3, 31,8, 32,6, 33,6,

Hmotové spektrum m/e: 494 (M⁺), 479, 367, 300, 259, 137, 105, 91, 79, 67 (100), 55.

Tabulka 4		OH 5·.....
název	ch₃ X n
EM-304	Br 3
EM-371	I	3

-19CZ 285893 B6

Příklad 11

Příprava 17a-(5'-chlorpentinyl)-17|3-hydroxy-6-methylandrosta-4,6-dien-3-onu (EM 683):

KEM-339 (100 mg, 0,25 mmol) v benzenu (20 ml) se přidá kyselina p-toluensulfonová (4,72 mg, 0,025 mmol) a chloranil (74 mg, 0,29 mmol). Směs se zahřívá v systému Dean-Stark pod refluxem 2 hodiny. Po ochlazení se přidá ether a organická fáze se promyje NaHS₂O₃ a vodou, suší na MgSO₄ a odpaří se do sucha. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografíí na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu a získá se žádaná sloučenina (48 mg, 48% výtěžek).

IČ cm'¹ (KBr) 1070, 1577, 1624, 2870, 2943, 3421.

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,92 (s, 3H, 18-CH₃), 1,09 (s, 3H, 19-CH₃), 1,83 (s, 3H, 6-CH₃), 1,95 (q, 2H, J=6,53 Hz, CH₂CH₂C1), 2,41 (t, 2H, J=6,87 Hz, CCCH₂), 3,62 (t, 2H, J=6,32 Hz, CH₂C1), 5,86 (s, IH, C-4H), 5,94 (s, IH, C-7H).

Příklad 12

Způsobem podobným způsobu popsanému v příkladu 11 se připraví sloučeniny popsané v tabulce 5 za použití různých sloučenin připravených podle příkladu 9 a 10 jako výchozích látek.

Tabulka 5

OH

J.iCsC(CH₂)_nX název

EM 902

EM 832

EM 911

EM 789

EM 834

Cl Br

I Br

I

-20CZ 285893 B6

Příklad 13

Příprava 17a-(but-3-en-l-ynyl)-17|3-hydroxy-4-androsten-3-onu (EM 656):

K EM-250 (466 mg, 1 mmol) v benzenu (25 ml) se přidá fluorid česný (759 mg, 5 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin, poté se promyje vodou, suší a odpaří do socha. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi diethyletheru a hexanu (6 : 4) jako eluentu a získá se žádaná sloučenina (186 mg, 0,55 mmol).

'HNMR δ (CDC1₃, 300 MHZ, TMS): 0,90 (s, 3H, 18-CH₃), 1,20 (s, 3H, 19-CH₃), 5,46 (dd, 1H, J=10,97 Hz, J=l,82 Hz, =CH₂), 5,61 (dd, 1H, J=17,4 Hz, =CH₂), 5,73 (s, 1H, CMH), 5,83 (dd, 1H, J=17,4 Hz, J=10,97 Hz, CH=CH₂).

Příklad 14

Příprava 17a-(pent—4-en-I-ynyl)-173-hydroxy-4-androsten-3-onu:

Tato sloučenina se připraví z EM-159 způsobem podobným způsobu uvedenému v příkladu 13.

Příklad 15

Příprava 17a-(4'-jodbutyl)-l 7p-hydroxy-4-androsten—3-onu:

Tato syntéza je popsána ve schématu 7.

Hydroxyketal 25

Androstanolon (50 g, 0,17 mol) (dostupný od fy Aldrich Chemical Co, lne., Milwaukee, Wis., USA) se zpracuje v zařízení opatřené Dean-Starkovým systémem diethylenglykolem (100 ml) v toluenu (1 1) v přítomnosti katalytického množství p-toluensulfonové kyseliny (1 g) pod refluxem po dobu 16 hodin. Po ochlazení a přidání etheru se organická fáze promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší a po odpaření se získá hydroxyketal 25.

Cetoketal 26

K hydroxyketalu 25 (40 g, 0,12 mol) v suchém methylenchloridu (1 1) se přidá pyridiniumdichroman (90 g, 0,24 mol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a filtruje se na silikagelu předběžně zpracovaném 1% triethylaminem za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

Butinyl-adukt 27

Do plamenem vysušené baňky se pod atmosférou argonu dá (tetrahydro-2'H-pyran2'yl)oxybutin (77 g, 0,5 mol) abezvodý tetrahydrofuran (1 1). Roztok se ochladí na -78 °C a přidá se 2,5N BuLi (200 ml) a roztok se míchá při této teplotě po dobu 2 hodin. Poté se přidá cetoketal 26 (33 g, 0,1 mol) v tetrahydrofuranu (1 1). Po 2 hodinách se přidá voda a směs se zahřeje na teplotu místnosti. Roztok se koncentruje ve vakuu a extrahuje se etherem. Organická fáze se promyje vodou, suší a odpaří se. Zbytek se čistí na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

-21CZ 285893 B6

Cetoalkohol 28

K butinyl-aduktu 27 (43,7 g, 0,09 mol) rozpuštěném v 500 ml ethanolu se přidá 5% palladium na aktivním uhlí. Po trojnásobném propláchnutí vodíkem se směs míchá pod vodíkem a při atmosférickém tlaku alespoň 60 minut a poté se filtruje na celitu. Pevná látka se promyje směsí methanolu a methylenchloridu a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v methanolu a několika kapkách koncentrované kyseliny chlorovodíkové a zahřívá se pod refluxem 1 hodinu. Po ochlazení a odpaření části rozpouštědla se cetoalkohol 28 extrahuje ethylacetátem, promyje 10 se vodou, suší se a čistí se mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

17a-(4'-jodbutyl)-17(3-hydroxy-4-androsten-3-on (29)

K míchanému roztoku cetoalkoholu 28 (1,8 g, 5 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) obsahující katalytické množství monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové (100 mg, 0,5 mmol) se přidá při teplotě místnosti během 8 hodin bromid (880 mg, 5,5 mmol) ve stejném rozpouštědle (10 ml). Směs se vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje 1% vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného a vodou, suší se a odpaří. Ke zbytku rozpuštěném 20 v dimethylformamidu (50 ml) se přidá uhličitan litný (1,0 g) a bromid litný (1,0 g) a směs se zahřívá pod refluxem několik hodin. Po ochlazení se směs vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje 1% vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného a vodou, suší a odpaří. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu. Takto získaný čistý enonalkohol se přidá při teplotě místnosti 25 ke směsi trifenylfosfinu (1,3 g, 5 mmol), jodu (1,26 g, 5 mmol) a imidazolu (0,34 g, 5 mmol).

Směs se míchá 30 minut a poté se zředí etherem. Pevná látka se filtruje na fritové nálevce. Filtrát se odpaří a zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu.

-22CL 285893 B6

Schéma 7

Příklad 16

Příprava 17a-(5'-chlorpentinyl)-17[3-hydroxy-6-fluor-4-androsten-3-onu (EM 649):

Tato příprava je popsána ve schématu 8.

-23CZ 285893 B6

Fluoketal 30

K α-isomeru epoxidu 20 (1 g, 2,9 mmol) v bezvodé směsi etheru a benzenu (1 : 1) se přidá při teplotě 5 až 10 °C BF₃OEt₂ (1 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se a odpaří a získá se bílý pevný produkt (380 mg, výtěžek 36 %).

Fluoralkohol 31

Roztok fluorketalu 30 (320 mg, 0,87 mmol) v suchém dichlormethanu (15 ml) se po kapkách při teplotě místnosti a za stálého míchání přidá k roztoku pyridiniumchlorchromanu (0,6 g, 0,7 mol), molekulárním sítům 3A (0,5 g) a acetátu sodnému (100 mg). Po ukončení přidávání se směs míchá 16 hodin a poté se zředí diethyletherem (100 ml) a filtruje přes silikagel na fritové nálevce. Filtrát se koncentruje ve vakuu a zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu směsí ethylacetátu a hexanu a získá se fluoralkohol 31 (270 mg, výtěžek 84 %).

Fluordiol 32

2-(4-pentyniloxy)tetrahydro-2H-pyran (4,61 g, 0,027 mol) se přidá po kapkách při teplotě -78 °C pod atmosférou argonu k roztoku methylithia (19,6 ml MeLi 1,4M v etheru, 0,028 mol) v 100 ml bezvodého etheru v 0,5 1 baňce. Po skončení přidávání se odstraní chladicí lázeň a roztok se nechá stát 2 hodiny. Roztok se opět ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá roztok fluoralkoholu 31 (2 g, 5,48 mmol) v 100 ml bezvodého THF. Po skončení přidávání se chladicí lázeň odstraní a směs se nechá stát při teplotě místnosti 16 hodin. Ktéto směsi se přidá 20 ml solanky a roztok se zředí ethylacetátem, promyje solankou a suší se bezvodým MgSO₄. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu směsí ethylacetátu a hexanu (0 : 10 až 4 : 6) a získá se fluordiol 32.

Fluortriol 33

Směs fluordiolu 32 (410 mg, 0,776 mmol), kyseliny octové (40 ml), THF (20 ml), acetonu (20 ml) a vody (10 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 8 hodin. Po ochlazení se směs vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší a odpaří. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi acetonu a hexanu jako eluentu a získá se fluortriol 33 (181 mg, výtěžek 57 %).

17a-(5'-chlorpentinyl)-17[3-hydroxy-6-fluor-4-androsten-3-on (EM 649)

Směs fluortriolu 33 (100 mg, 0,246 mmol), trifenylfosfinu (129 mg, 0,492 mmol) a chloridu uhličitého (5 ml) se zahřívá pod refluxem v 20 ml bezvodého dichlormethanu po dobu 3 hodin. Po odpaření rozpouštědla se surová směs adsorbuje na silikagelu a chromatografuje na tomto gelu (mžikově) směsí acetonu a hexanu (0 : 10 až 3 : 7).

IČ cm'¹ (KBr) 1670, 2943, 3422.

*H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,91 (s, 3H, 18-CH₃), 1,32 (d, 3H, >1,5 Hz, 19-CH₃), 1,96 (q, 2H, >6,5 Hz, CH₂CH₂C1), 2,43 (t, 2H, >6,9 Hz, CCCCH₂), 3,64 (t, 2H, >6,5 Hz, CH₂C1), 4,99 (d, 1H, >49,1 Hz, C-6H), 5,88 (d, 1H, >4,8 Hz, C-4H).

-24CZ 285893 B6

Schéma 8

EM-649

Příklad 17

Příprava 17a-(4^,-chlorbutiny 1)-17 β-hydroxy-androsta-1,4-dienu

Směs EM-248 (187 mg, 0,5 mmol), DDQ (170 mg, 0,75 mmol dichlordikyanobenzochinonu), pnitrofenolu (5 mg) a toluenu (3 ml) se zahřívá 12 hodin. Po ochlazení se přidá ether (150 ml) a roztok se promyje NaHSO₃, IN NaOH a vodou, suší se a odpaří. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi etheru a hexanu (7:3) jako eluentu. Rekrystalizací se získá žádaná sloučenina (56 mg, 30% výtěžek).

Příklad 18

Příprava 17a-(4'-jodbutinyl)-l 7(3-hydroxy—4-methyl-4-androsten-3-onu

-25CZ 285893 B6

Tato sloučenina se připraví způsobem podobným způsobu přípravy 17a-(4'-jodbutinyl)-17|3hydroxy-4-androsten-3-onu (EM 250) popsaném v syntéze B příkladu 2 za použití 4-methyl4-androsten-3,17-dionu místo 4-androsten-3,17-dionu jako výchozí látky.

Příprava 4-methyl-4-androsten-3,17-dionu se provede následovně:

Směs estosteronacetátu (dostupný od fy Steraloids lne. Wilton, N.H. USA) (3,3 g, 10 mmol), vodného formaldehydu (1 ml) a thiofenolu (0,9 g, 8 mmol) se míchá při teplotě 110 °C pod atmosférou argonu v triethanolaminu (30 ml). Po 4 hodinách se přidá další vodný formaldehyd (0,7 ml) a thiofenol (0,5 mg). Po ochlazení se směs vlije do solanky a extrahuje se methylenchloridem. Organická fáze se promyje zředěný roztokem hydroxidu sodného, vodou, suší se a odpaří. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu. Vyčištěný zbytek v acetonu (15 ml) se přidá kRanevodě niklu (35 g) v acetonu (60 ml) který je zahříván pod refluxem 1 hodinu.

Reflux pokračuje po dobu 15 minut. Horká organická fáze se dekantuje a kov se promyje horkým acetonem. Spojené filtráty se koncentrují a čistí se mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu. Vyčištěný zbytek se rozpustí v metanolickém roztoku hydroxidu draselného (50 ml, 3 %) a udržuje se při teplotě místnosti pod atmosférou argonu po dobu 4 hodin. Po koncentrování se směs vlije do vody a extrahuje se methylenchloridem. Organická fáze se promyje solankou, suší a odpaří se do sucha. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu, rozpustí se v acetonu (30 ml) a zpracuje se při 0 °C slabým přebytkem Jonesova činidla (8N oxid chromitý) (do červené barvy). Po 15 minutách se přidá isopropanol (1 ml) a směs se vlije do solanky a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje solankou, suší se a odpaří do sucha. Čištěním zbytku mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu jako eluentu se získá čistý 4-methyl-4-androsten-3,17-dion.

Antiandrogeny podle vynálezu, které zahrnují prekurzoiy léčiv, jsou výhodně formulovány s farmaceuticky použitelnými ředidly nebo nosiči na farmaceutické přípravky při koncentracích antiandrogenů, obvykle používaných ve stavu techniky. Ošetřující lékař může přizpůsobit koncentraci a/nebo dávku se zvláštním zřetelem na každého pacienta. Je výhodné, když ošetřující lékař, zejména na počátku léčby, kontroluje odezvu u jednotlivých pacientů a úroveň antiandrogenů v séru (v porovnání k výhodným koncentracím séra uváděným výše) a kontroluje pacientovu reakci na léčbu a kde jsou metabolismus pacienta nebo reakce na léčbu atypické, upraví dávky. Mohou být použity také kapsle mající antiandrogeny uváděné zde. Jak se uvádí podrobněji dále, nosiče nebo ředidla zahrnují pevné látky nebo kapaliny. Jestliže se přípravek připravuje pro jiné účely než pro bezprostřední použití, obvykle se použije ochrana známá ze stavu techniky, např. benzylalkohol. Nové farmaceutické přípravky podle vynálezu se mohou používat pro léčení nemocí souvisejících s androgenem. Jestliže se podávají pravidelně (např. pro léčení rakoviny prostaty, mírné prostatické hyperplasie a jiných nemocí primárně nepůsobících na kůži) používají se ředidla nebo nosiče známé ze stavu techniky a které jsou farmaceuticky použitelné pro pravidelné používání, např. fyziologický roztok, voda, vodný ethanol, olej apod. Nosič je často směsí několika složek.

Když se formulují pro pravidelné používání, antiandrogeny se připraví pro podání obvyklými způsoby, jako je orální podání nebo injekce. Antiandrogen se může podávat např. orální cestou. Sloučeniny podle vynálezu mohou být formulovány s obvyklými farmaceutickými excipienty (např. laktosa sušená rozprašováním a stearát hořečnatý) do tablet nebo kapslí pro orální podání. V případě forem pro orální podání mohou být také přidány látky zlepšující chuť. Když jsou žádány kapsle pro orální přijímání, mohou být kterékoliv kapsle známí ze stavu techniky naplněny aktivními složkami podle vynálezu s nebo bez dalších ředidel a ostatních aditiv uváděných zde.

-26CZ 285893 B6

Aktivní substance mohou být zpracovány do tablet nebo dražé smícháním s pevnými práškovitými nosiči, jako je citrát sodný, uhličitan vápenatý nebo fosforečnan vápenatý a pojivý jako je polyvinylpyrrolidon, želatina nebo deriváty celulosy. Mohou být přidána také mazadla, jako stearát hořečnatý, laurylsíran sodný, „Carbovax“ nebo polyethylenglykol.

Jako další formy mohou být použity zátkové kapsle, např. z tvrdé želatiny, dále uzavřené želatinové kapsle zahrnující změkčovadlo nebo plastifikátor, např. glycerin. Zátkové kapsle obsahují aktivní látky výhodně ve formě granulátu, např. ve směsi s plnidly, jako je laktosa, sacharosa, mannitol, škroby, jako je bramborový škrob nebo amylopektin, deriváty celulosy nebo vysoce dispergované kyseliny křemičité. V želatinových kapslích jsou výhodně aktivní látka rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných kapalinách, jako jsou rostlinné oleje nebo kapalné polyethylenglykoly.

K sušení se může používat systém popsaný v US patentech č. 3 742 951, 3 797 494 nebo 4 568 343.

Alternativně může být aktivní složka umístěna do transdermálních náplastí, které mají struktury známé ve stavu techniky, např. jako jsou struktury popsané v EP č. 0 279 982.

Rozpouštědla nebo zařízení popsané v US patentech č. 5 064 654, 5 071 644 nebo 5 071 657 mohou být rovněž použita pro usnadnění transdermálního průniku, jestliže jsou požadovány účinky týkající se tělesné soustavy. Jestliže jsou použity k léčení nemocí týkajících se tělesné soustavy, mělo by být místo aplikace na kůži měněno, aby nedošlo k přebytku místní koncentrace steroidů.

Ve výhodném provedení jsou inhibitory podle vynálezu použity k léčení nemocí kůže souvisejících s androgenem, jako je akné, seborrhea, hirsutismus, androgenní alopecia a předčasná plešatost u mužů. Při použití pro kterýkoliv z těchto účelů jsou antiandrogeny výhodně podávány lokálně, společně s obvyklými nosiči nebo ředidly. Při lokálním podání je výhodné, když ředidlo nebo nosič neurychluje transdermální pronikání aktivních složek do krevního oběhu nebo ostatních tkání, kde by mohly způsobit nežádoucí účinky.

Jestliže se sloučenina podá v nosiči nebo ředidle pro kožní nebo lokální aplikaci, jsou nosič nebo ředidlo vybrány z mnoha materiálů, známých v kosmetice nebo medicíně, např. jakýkoliv gel, krém, lotion, mast, kapalný nebo nekapalný nosič, emulgátor, rozpouštědlo, kapalné ředidlo nebo podobné vehikulum, které nevykazuje škodlivý účinek na kůži nebo na ostatní živočišné tkáně. Nosič nebo ředidlo je obvykle směs několika složek zahrnující, ale bez omezení, kapalné alkoholy, kapalné glykoly, kapalné polyalkylenglykoly, vodu, kapalné amidy, kapalné estery, kapalný lanolin a deriváty lanolinu a podobné materiály. Alkoholy zahrnují mono a polyhydroxylové alkoholy, jako jsou ethanol, glycerol, sorbitol, isopropanol, diethylenglykol, propylenglykol, ethylenglykol, hexylenglykol, mannitol a methoxyethanol. Typické nosiče mohou také zahrnovat ethery, např. diethyl a dipropylether, methoxypolyexyethyleny, uhlíkaté vosky, polyethylenglyceroly, polyoxyethyleny a sorbitoly. Obvykle nosič pro místní podání obsahuje vodu a alkohol, čímž se dosáhne maximální hydrofilní a lipofilní rozpustnosti, např. obsahuje směs ethanolu nebo isopropanolu s vodou.

Nosič pro lokální podání může zahrnovat také řadu jiných složek obvykle používaných v mastích a lotionech a velmi dobře známých v kosmetice a medicíně. Např. mohou být přítomny voňavé látky, antioxidany, parfémy, gelující činidla, zahušťovadla, jako jsou karboxymethylcelulosa, povrchově aktivní činidla, stabilizátory, změkčovadla, zbarvovací činidla a ostatní podobná činidla.

-27CZ 285893 B6

Koncentrace aktivní složky v masti, krému, gelu nebo lotionu je obvykle 3 až 20 procent, výhodně 5 až 10 procent a nej výhodněji 5 procent (hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost lotionu, krému, gelu nebo masti). Použitím vyšších koncentrací v rámci vhodných rozsahů se dosáhne vhodných dávek, což má za následek použití menšího množství lotionů, mastí, gelů nebo krémů nebo použití těchto látek v delších časových frekvencích.

Následující příklady, které v žádném případě neomezují rozsah vynálezu, popisují přípravu typických krémů, lotionů, gelů a mastí. Odborníci mohou vybrat i další vehikulu za účelem dosažení specifických kožních účinků.

Příklad 19

Lotion pro lokální podání

Složka___________________________________

Antiandrogen (např. EM-250) podle vynálezu Ethanol

Propylenglykol

Příklad 20

Krém pro lokální podání

Složka___________________________________

Antiandrogen (např. EM-250) podle vynálezu

Ethanol

Emulgační vosk

Lehký minerální olej

Čištěná voda

Methylparaben

Kyselina citrónová

Propylparaben USP

Germal 115 (dostupný od fy Anisol Canada) hmot. % v přípravku

5,0

47,5

47,5 hmot. % v přípravku

15,5

9,45

34,55

0,2

3,7

0,2

0,4

Příklad 21

Gel pro lokální podání

Složka	hmot. % v přípravku
Antiandrogen (např. EM-250) podle vynálezu	5,0
Ethanol	50,0
Glycerin	11,0
Karbopol 940 (polyakrylová kyselina)	1,0
Triethanolamin	0,2
Čištěná voda	32
Methylparaben USP	0,4
Propylparaben USP	0,4

-28CZ 285893 B6

Jestliže jsou antiandrogeny podávány pravidelně, jsou výhodně podávány orálně nebo parenterálně. Lokální podání je výhodné v případě, že žádaným místem je kůže. Koncentrace aktivního prostředku se mění a u známého způsobu závisí na způsobu podání farmaceutického přípravku. Přípravek vhodný pro orální podání může výhodně obsahovat alespoň jeden inhibitor antiandrogenů, kde celková koncentrace všech takových antiandrogenů v uvedeném farmaceutickém přípravku je od 1 do 95 % na hmotnost přípravku, výhodně od 5 do 20 %. Jestliže se použije kombinace antiandrogenů, měl by být celkový součet všech antiandrogenů rovný rozsahu uvedenému výše. Hladina antiandrogenů v krvi je výhodným měřítkem pro přiměřené dávky, které berou v úvahu individuální odchylky v absorpci metabolismu. Farmaceuticky přijatelné ředidlo je obvykle škrob nebo laktosa (s tetrazinem nebo bez tetrazinu).

Jestliže je připravován přípravek pro parenterální injekce, antiandrogen se výhodně přidává v koncentraci od 1,0 mg/ml do 100 mg/ml (výhodně 2,0 mg/ml až 10 mg/ml).

Jestliže je požadována systémová účinnost, je nezbytné, aby antiandrogen byl podáván takovým způsobem a v takovém dávkovacím množství, aby koncentrace v krevním séru dosáhla žádané úrovně. Koncentrace antiandrogenů v séru by měla být udržována na hodnotě 10 až 2000 mikrogramů na litr, výhodně na hodnotě 100 až 1000 mikrogramů na litr, nej výhodněji na hodnotě 200 až 500 mikrometrů na litr. Přiměřené úrovně v séru mohou být také stanoveny odezvami pacientů na léčbu.

Pro typické pacienty je při orálním podání vhodná dávka antiandrogenů k dosažení žádané koncentrace v séru mezi 10 až 2000 mg aktivní složky za den na 50 kg hmotnosti pacienta. Jestliže je přípravek podáván injekcí, je také dávka 1 až 2000 mg za den na 50 kg hmotnosti pacienta, přičemž doporučená dávka je 10 až 100 mg.

Při lokálním použití by měly být lotiony, masti, gely nebo krémy důkladně vetřeny do kůže až téměř do zmizení přípravku a je výhodné nemýt kůži alespoň 30 minut. Použité množství by mělo být alespoň 0,02 mg antiandrogenů na čtvereční centimetr (výhodně 0,1 až 1 mg/cm²) na jedno použití. Při lokální podání je účinné přípravek aplikovat 1 až 6 krát denně, např. 3 krát denně v pravidelných intervalech. V některých případech podle vynálezu jsou antiandrogeny použity v kombinaci s jinými aktivními složkami, které tvoří část kombinační léčby. Např. nový antiandrogen může být použit společně s inhibotorem 5a-reduktázy, který může být přidán do stejného farmaceutického přípravku, jako je antiandrogen, nebo může být podán odděleně. Aktivní sloučenina může vykazovat jak antiandrogenní účinnost, tak inhibiční účinnost vůči 5areduktáze a může být doplněna dalšími sloučeninami za účelem zvýšení jedné nebo obou účinností (např. jiný antiandrogen nebo jiný inhibitor 5a-reduktázy). Kombinační léčba může také zahrnovat léčbu jednou nebo více sloučeninami, které inhibují tvorbu testosteronu nebo jeho prekurzorů. V některých výhodných provedeních podle vynálezu farmaceutický přípravek pro lokální podání dále zahrnuje inhibitor účinnosti steroidní 5a-reduktázy. Jeden takový inhibitor („Proscar“) je komerčně dostupný od fy Měrek Sharp a Dohme. Ostatní takové inhibitory jsou EM-735 a EM-638 jejichž příprava je následující:

-29CZ 285893 B6

EM-735 (pro systémové použití) EM-638 (pro lokální použití)

Příprava 17[3-hydroxy-17a-butyl-4-aza-5a-androst-l-en-3-onu (EM-735) podle vynálezu 17|3-hydroxy-5-oxo-A-nor-3,5-sekoandrostan-3-ová kyselina (a).

K míchané směsi testosteronacetátu (dostupný od fy Steraloids lne., Wilton, NH, USA) (200 g, 0,605 mol) v terč, butylalkoholu (2 1) se přidá roztok uhličitanu sodného (96,3 g, 0,908 mol) ve 460 ml vody. Směs se přivede k refluxu a postupně (během 1 hodiny) se přidá roztok jodistanu sodného (893,8 g, 4,17 molu) a manganistanu draselného (70,8 g, 0,45 mol) v horké vodě (75 °C), přičemž se udržuje teplota refluxu. Reakce se ochladí na 30°C a po 15 minutách se odfiltruje pevná látka. Pevná látka se promyje 800 ml vody a kombinované filtráty se koncentrují při sníženém tlaku za účelem odstranění většiny terč, butylalkoholu (konečný objem 1 1). Vodný zbytek se ochladí a okyselí se roztokem koncentrované kyseliny chlorovodíkové na pH 3,0. Vodný roztok se extrahuje methylenchloridem (4 x 800 ml) a spojené organické fáze se promyjí vodou, suší a odpaří se do sucha. Získaná pevná látka se podrobí acetátové hydrolýze refluxováním s NaOH (34,3 g, 0,857 mol) v methanolu (2 1) po dobu 12 hodin. Reakční směs se koncentruje na obsah 400 ml, zředí se vodou (600 ml) a okyselí se na pH 3. Pevná látka se filtruje, promyje vodou a suší. Filtrát se extrahuje methylenchloridem (3 x 1,0 1) a spojené organické fáze se zkoncentrují za vzniku syrupu. Obě sraženiny a syrup se třepou s vroucím EtOAc, ochladí se na 0 °C přes noc a získá se 125 g (67% výtěžek) bezbarvých krystalů, teploty tání 205 až 207 °C.

p-hydroxy-4-methyl—4-azandrost-5-en-3-en (b).

Ve Schlenkově trubce se při teplotě místnosti probublává až do nasycení MeNH₂ do směsi sekokyseliny (8,0 g, 25,98 mmol) v ethylenglykolu (80 ml). Čistý nažloutlý roztok se postupně zahřeje (3 °C/min) na teplotu 180 °C a při této teplotě se udržuje 1 hodinu. Reakční směs se ochladí na 10 °C a poté se za míchání přidá yoda (80 ml). Pevná látka se odfiltruje, promyje vodou (20ml) a po vysušení se získá 6,1 g sloučeniny b (81 %), teploty tání 181 až 183C.

17|3-hydroxy-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-on (c).

Roztok sloučeniny b (6 g, 20,7 mmol) v kyselině octové (99,9%, 130 ml) se hydrogenuje v přítomnosti oxidu platičitého (600 mg) při tlaku 3,164 kg/cm² tak, že se začne při teplotě místnosti a pak se zahřívá na 60 °C po 12 hodin. Reakční směs se ochladí a filtruje. Katalyzátor se promyje kyselinou octovou (30 ml) a spojené filtráty se koncentrují do vzniku pevné látky (5,5 g, 91 %), teploty tání 178 až 180 °C.

4-methyl-4-aza-5a-androstan-3,17-dion (d).

K míchanému roztoku sloučeniny c (7,3 g, 25 mmol) v methylenchloridu (260 ml) se přidá pyridiniumchlochroman (8,1 g, 37 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Obsah se nechá projít přes Florisil (30 až 60 mesh), čímž se odstraní sraženina a filtrát se promyje vodou (2 x 200 ml) a suší se. Vzniklý zbytek se čistí mžikovou sloupcovou chromatografií a získá se dion d (4,4 g, 61 %), teploty tání 126 až 128 °C.

17(3-hydroxy-l 7α-( 1 '-butinyl)-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-on (EM-728)

K roztoku diisopropylaminu (8,35 g, 82,51 mmol) v suchém n-hexanu (150 ml) se při -20°C přidá n-butyllithium (33ml, 82,5 mmol; 2,5M v hexanech) a poté se přidá 100 ml suchého diethyletheru. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě -20 °C pod atmosférou argonu. Do diethyletheru (10 ml) se nechá při teplotě -50 °C bublat 1-butin (rychlost asi l,0g/min). Ochlazený roztok 1-butinu v diethyletheru (5,5 ekv.) se přidá při -50 °C k roztoku LDA. Po 10ti

-30CZ 285893 B6 minutách se přidá při -50 °C roztok 1—butinyllithia k roztoku 4-methyl—4-aza-5a-androstan3,17-dionu d (5,0 g, 16,50 mmol) v diethyletheru (250 ml). Po 1 hodině se reakční směs ohřeje na 0 °C a míchá se 12 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí nasyceným vodným chloridem amonným (5 ml) a zředí se vodou (100 ml). Organická fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 80 ml). Spojená organická fáze se suší přes bezvodý síran hořečnatý, filtruje se a koncentruje a získá se surová směs která se čistí mžikovou sloupcovou chromatografií (C₆H]₄: CH₃COCH₃:EtOAc, 75:10:15-55:30:15) a získá se 4,20 g EM-728 v 71% výtěžku.

Teplota tání: 155 až 157 °C.

IČ cm'¹ (KBr) 3335, 2947, 2870, 1624, 1609, 1444, 1399, 1316, 1240, 1052, 1024.

*HNMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,84 (s, 3H, 18-CH₃), 0,90 (s, 3H, 19-CH₃), 0,78-1,01 (m, 1H), 1,15 (t, >7,6, 7,6 Hz, 3H, 4'-CH₃), 1,25-1,49 (m, 9H), 1,50-1,69 (m, 4H), 1,78-1,92 (m, 2H), 1,96 (dd, J=2,0, 2,1 Hz, 1H), 2,00 (ddd, >3,0, 7,4, 12,0 Hz, 2H), 2,21 (ddd, >3,0, 5,1, 10,3 Hz, 1H), 2,24 (q, >7,6 Hz, 2H, 3'-CH₂), 2,44 (dd, >4,7, 9,5 Hz, 2H), 2,93 (s, 3H, 4-NCH₃), 3,14 (s, 1H, OH), 3,03 (dd, >3,6, 12,6 Hz, 1H, 5a-H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 170,8, 87,8 (2'-C), 82,9 (17-C), 79,8 (l'-C), 65,8, 51,7, 49,9, 47,0, 39,1, 36,5, 35,0, 33,0, 32,7, 31,6, 29,8, 29,1, 25,3, 23,0, 22,6, 20,9, 14,1, 12,9, 12,5.

EI-MS m/s (relativní intenzita) 357.(M⁺, 94), 342 (100), 328 (48), 262 (94), 248 (27), 206 (22), 138 (25), 124 (63), 112 (61), 96 (33), 79 (24), 70 (85).

HRMS vypočteno pro C₂₃H₃₅O₂N: 357, 2668, nalezeno 357,2662.

17p~hydroxy-l 7a-butyl—4-aza—5a-androstan-3-on (EM-700).

K míchanému roztoku EM-728 (1,0 g, 2,80 mmol) v ethylacetátu (60 ml) se přidá 0,10 g palladia na aktivním uhlí (obsah palladia 10%). Baňka se evakuuje při 22 mm Hg a 3x se propláchne vodíkem. Směs se míchá pod tlakem vodíku naplněném v demižonu po 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se filtruje přes Celit^R 521 a promyje se ethylacetátem. Odstraněním rozpouštědla se získá surový produkt který se zpracuje mžikově na silikagelové koloně eluentem (C6Hi₄:CH₃COCH₃, 7:3) a získá se 0,96 g sloučeniny EM-700 v 95% výtěžku.

Teplota tání: 147 až 149 °C.

IČ cm’¹ (KBr) 3417, 2948, 2866, 1628, 1457,1429, 1395, 1305,1237, 1112, 1026.

’Η-NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,88 (s, 3Η, 18-CH₃), 0,90 (s, 3Η, 19-CH₃), 0,93 (t, >7,1, 7,0 Hz, 3H, 4'-CH₃), 0,79 (ddd, >2,9, 4,3, 8,4, Hz, 1H), 1,14-1,26 (m, 1H), 1,27-1,61 (m, 18H), 1,78-1,87 (m, 2H), 1,98-2,04 (m, 2H), 2,44 (dd, >4,7, 9,5 Hz, 2H), 2,93 (s, 3H, 4NCH₃) 2,96 (dd, >3,5, 12,6 Hz, 1H, 5a-H).

^,3C-NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 170,8, 83,2, 65,8, 52,0, 50,1, 46,6, 36,5 (2C), 35,3, 34,4, 33,0, 31,5, 30,0, 29,1, (2C), 25,8, 25,4, 23,6 (2C), 20,8, 14,5, 14,2, 12,4.

EI-MS m/s (relativní intenzita) 361 (M⁺, 86), 346 (18), 332 (47), 304 (66), 286 (49), 262 (85), 248 (56), 234 (57), 140 (40), 124 (65), 113 (84), 95 (31), 70 (100).

HRMS vypočteno pro C₂₃H₃9O₂N: 361,2980, nalezeno 361,2979.

-31CZ 285893 B6

17[3-hydroxy-l7a-butyl-4-aza-5a-androst-l-en-3-on (EM-735):

Do 50 ml tříhrdlé baňky s kulatým dnem opatřené přívodem argonu, zpětným chladičem, nálevkou, mechanickým míchadlem a ponorným teploměrem se vloží 25 ml dioxanu a poté se přidá po částech za míchání 0,96 g (2,6 mmol) EM-700. K této suspenzi se přidá po částech 0,73 g (3,19 mmol) 2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4-benzochinonu (DDQ). Baňka se evakuuje a 3x se promyje argonem. Ktéto míchané suspenzi se přidá bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid (BSTFA, 1,98 g, 7,72 mmol) nálevkou rychlostí 5 ml/min. Teplota se během 30ti minut pomalu zvýší z 22 °C na 25 °C až se většina pevných látek rozpustí a vytvoří čirý roztok. Roztok se dále míchá při teplotě 22 °C po dobu 18 hodin (po této době bylo pozorováno chromatografií na tenké vrstvě tvoření dvou diastereomemích aduktů). Roztok se poté zahřívá na olejové lázni při udržování mírného refluxu (teplota lázně 120 °C, vnitřní teplota 108 °C). Po 16ti hodinách se reakční směs ochladí na 22 °C a vlije se do směsi 50 ml methylenchloridu a 9,2 ml 1% vodného roztoku hydrogensiřičitanu sodného. Heterogenní směs se míchá 15 minut a filtruje se k odstranění vysráženého hydrochinonu.Tmavě červená organická vrstva se oddělí a promyje 20 ml 6N roztoku chlorovodíku a poté nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a koncentruje. Surová směs se rozpustí ve směsi tetrahydrofuranu (25 ml), vody (12,5 ml) a kyseliny octové (ledová, 25 ml) a míchá se při teplotě 55 °C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní a získá se zbytek, který se zředí 40 ml vody a extrahuje se dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojená organická fáze se promyje 50 ml nasyceného chloridu sodného, suší a koncentruje se. Vzniklý zbytek se čistí chromatografií na silikagelu (C₆Hi4:CH₃COCH₃, 95:5 až 70:30) a získá se 0,412 g (výtěžek 43 %) žádaného produktu EM-735.

Teplota tání 194 až 196 °C.

IČ cm'¹ (KBr) 3397, 2946, 2866, 1658, 1602, 1434, 1400, 1099, 1013, 820.

’H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,89 (s, 3H, 18-CH₃), 0,93 (s, 3H, 19-CH₃), 0,94 (t, J=7,6, 7,9 Hz, 3H, 4'-CH₃), 0,90-1,01 (m, 1H), 1,25 (dd, J=2,8, 2,4 Hz, 1H), 1,39 (dd, J=6,7, 11,7 Hz, 1H), 1,35-1,53 (m, 9H), 1,55-1,60 (m, 4H), 1,61-1,66 (m, 2H), 1,78 (dd, >3,3, 11,7 Hz, 1H), 1,85 (dd, >3,4, 13,2 Hz, 1H), 1,97 (t, J=3,0, 3,3 Hz, 1H), 1,97 (dd, >4,2, 8,5 Hz, 1H), 2,95 (s, 3H, 4-MCH₃), 3,32 (dd, >3,7, 13,1 Hz, 1H, 5a-H), 5,84 (d, >9,6 Hz, 1H, 2-H), 6,69 (d, >9,9 Hz, 1H, 1-H).

¹³C NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 165,6, 148,7, 123,2, 83,2, 63,9, 50,0, 47,9, 46,7, 39,6, 36,5,35,6, 34,4, 31,5, 29,8, 27,6, 24,4,23,6 (2 C), 21,0, 14,6, 14,2, 12,2.

EI-MS m/s (relativní intenzita) 359 (M\ 86), 344 (12), 302 (32), 284 (15), 260 (81), 246 (27), 232 (26), 137 (44), 124 (100), 113 (46), 70 (53).

HRMS vypočteno pro C₂₃H₃₇O₂N: 359, 2824, nalezeno 359, 2805.

Příprava 17(2',3'a)-2',5'-dihydrofuran—4-methyl—4-aza-5a-androstan-3-onu (EM-638).

17[3-hydroxy-17a-(3'-hydroxy-l'-propenyl)-4-inethyl-4-aza-5a-androstan-3-on:

Kalkinu (100 mg, 0,288 mmol) v 10 ml bezvodého pyridinu se přidá Pd/CaCO₃. Roztok se propláchne 3 x vodíkem za střídání vakua a poté se hydrogenuje během 3 hodin při teplotě místnosti a při atmosférickém tlaku. Když žádné výchozí látky nereagují, reakční směs se filtruje přes Celit a získá se surový produkt který se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití CH₂C1₂:CH₃OH (9:1) jako eluentu a získá se 73 mg produktu (73 %).

17(2',3'a)-2',5'-dihydrofuran-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-on (EM-63 8).

-32CZ 285893 B6

K roztoku 17|3-hydroxy-l 7a-(3'-hydroxy-l '-propenyl)-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-onu (730 mg, 2,0 mol) v 30 ml bezvodého pyridinu se přidá p-TsCl (800 g, 4,0 mmol) a míchá se 6 hodin při teplotě místnosti. Pyridin se odpaří a reakční směs se extrahuje CH2CI2. Surová směs se čistí mžikovou chromatografií za použití CH₂C1₂:CH₃OH (9:1) jako eluentu a získá se 420 mg EM-638 v 88% výtěžku.

IČ cm'¹ (KBr) 3045 (dvojná vazba), 1646 (amid).

'H NMR δ (CDC1₃, 300 MHz, TMS): 0,87 (s, 3H, 18-CH₃), 0,88 (s, 3H, 19-CH₃), 2,41 (dd, J=4,5, 9,3 Hz, 2H), 2,90 (s, 3H, 4-NCH₃), 3,0 (dd, J=3,5, 12,5, Hz, 1H, 5a-H), 4,52 (m, 2H, OCH₂), 5,78 (m, 2H, CH=CH).

^,3C NMR (CDClj) d 170,8, 132,1, 124,4, 100,6, 74,4, 65,8, 52,0, 50,8, 45,8, 36,4, 35,5, 34,8, 32,9, 32,9 (2 C), 29,8, 29,1, 29,0, 25,3, 23,1, 20,6, 14,2, 12,3.

HRMS vypočteno pro C₂₂H₃₃O₂N: 343, 2502, nalezeno 343,2524.

Inhibitor 5a-reduktázy se formuluje při konvenčních koncentracích a podává se v konvenčních dávkách, např. při stejných koncentracích a stejných dávkách, jak bylo uvedeno výše u antiandrogenu.

Kombinační léčba zahrnující inhibitor 5a-reduktázy a antiandrogen má prospěšný účinek na inhibiční aktivaci receptorů androgenu dvěma různými mechanizmy bez podstatného snížení úrovně testosteronu, které by mohlo způsobit nežádoucí účinky na některé pacienty. Ve vhodných případech, tj. kde rakovina prostaty nebo ostatní nemoci závislé na androgenu nereagují přijatelně na léčbu, může být použita souběžná léčba za účelem zvýšení úrovně testosteronu (např. chirurgická nebo chemická kastrace, např. podáním LHRH agonistů nebo antagonistů známých ve stavu techniky).

Vynález je popsán konkrétními příklady provedení a odborníkům bude zřejmé, že existuje řada modifikací a variací uvedených provedení. Vynález, jak je definován v nárocích, není omezen na specifické příklady zde popsané.

Claims

1. Antiandrogenní sloučenina obecného vzorce I (I),

-33CZ 285893 B6 ve kterém přerušované čáry značí případné pí vazby,

5 R^{3 4} je-Hnebo-CHj,

R⁶ je -H, -CH₃, -CH₂CH₃ nebo halogen, značí však vodík, je-li v poloze 6, 7 přítomna pí vazba, a substituent ío R¹⁷“ je vybrán ze skupiny, zahrnující

A) halogenovaný nenasycený uhlovodíkový zbytek, mající alespoň jeden halogenový atom, který je oddělen od kruhu D alespoň 4 zprostředkujícími atomy, a nemající žádný uhlíkový atom oddělený od kruhu D více, než 4 zprostředkující atomy, a

B) halogenalkylový zbytek mající alespoň jeden halogenový atom oddělený od kruhu D alespoň 3 zprostředkujícími atomy a nemající žádný uhlíkový atom oddělený od kruhu D více, než 4 zprostředkujícími atomy, stou výhradou, že R¹⁷“ má jiný význam, než -C=C-(CH2)3X, značí-li substituenty R⁴ a R⁶ vodíky, přičemž X je halogen.

2. Antiandrogenní sloučenina podle nároku 1, kterou je 17a-(4'-jodbutinyl)-17[3-hydroxy-4androsten-3-on

3. Antiandrogenní sloučenina podle nároku 1, vybraná ze skupiny zahrnující

17 a-(

4'-chlorbutinyl)-17 (3-hydroxy-4-androsten-3-on • c= c(CH₂)₂a

EM-248

-34CZ 285893 B6

17a-(5'-chlorpentinyl)-17(3-hydroxy-6-androsta—4,6-dien

OH ve kterém n je 2 nebo 3,

X je chlor, brom nebo jod a

R⁴ a R⁶ mají shora uvedené významy.

5. Farmaceutický přípravek k léčení nebo prevenci akné, hirsutismu, seborrhoei, alopecie a předčasné plešatosti mužů, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné antiandrogenní sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 ve spojení s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

6. Farmaceutický přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu vzorce EM-250 podle nároku 2 ve spojení s ředidlem nebo nosičem, vhodnými pro topické použití.

7. Použití antiandrogenní sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva k léčení nebo prevenci akné, hirsutismu, seborrhoei, alopecie a předčasné plešatosti mužů.