CZ284966B6

CZ284966B6 - Použití kreatinfosfátu a fosfoenolpyrohroznové kyseliny pro přípravu léčiv pro léčení nádorů a farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ284966B6
Application number: CZ941343A
Authority: CZ
Inventors: Nicole Bru; Victor Izrael
Original assignee: Nicole Bru; Victor Izrael
Priority date: 1991-12-03
Filing date: 1992-12-01
Publication date: 1999-04-14
Also published as: FR2684381A1; LV11821B; JPH07501534A; AU3260093A; HU9401656D0; DK0614366T3; RO115784B1; BG98825A; EP0614366A1; HU216826B; JP3437574B2; RU94030808A; DE69213757D1; ES2094522T3; CA2124793A1; GR3021876T3; CA2124793C; SK68394A3; SK280785B6; HUT68876A

Abstract

Řešení se týká použití sloučenin, které mají fosfoamidový zbytek nebo enolfosfátový zbytek, pro přípravu léčiv určených k léčení nádorů. Výhodně jsou tyto sloučeniny vybrány ze skupiny zahrnující kreatinfosfát a fosfoenolpyrohroznovou kyselinu. Toto použití podle vynálezu je zejména výhodné v případě léčení nádorů resistentních vůči chemoterapeutickému účinku.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká použití přinejmenším jedné sloučeniny vybrané ze skupiny zahrnující kreatinfosfát a farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny (to znamená skupina sloučenin, které mají fosfoamidové zbytky), konkrétně je možno uvést kreatinfosfát) pro přípravu léčiv vhodných pro léčení nádorů, zejména nádorů rezistentních vůči chemoterapeutickému účinku, například adenokarcinom, epidermoidní karcinomy a maligní melanom.

Dosavadní stav techniky

Tyto uvedené fosfoamidové zbytky (nebo se může rovněž jednat o enolfosfátové zbytky), obsažené v uvedených sloučeninách, patří do skupiny tak zvaných energeticky bohatých zbytků, neboli energeticky bohatých vazeb.

V evropských patentech EP-A-0 199 117 a EP-A-0 222 257 se zcela obecně popisuje použití fosfokreatinu a jeho sodné soli v krystalické formě k léčení srdečních onemocnění a zejména k léčení infarktu myokardu.

V mezinárodní patentové přihlášce PCT WO 83/02391 se zcela obecně popisují farmaceutické prostředky, které obsahují sůl fosfoenolpyrohroznové kyseliny ve směsi s adenosintrifosforečnou kyselinou (ATP), přičemž tyto prostředky jsou určeny k léčení a prevenci poškození buněk, které způsobuje ischemie.

V patentu Spojených států amerických č. 4 769 318 se uvádí roztoky, které obsahují různé deriváty fosfoenolpyrohroznové kyseliny, přičemž tyto roztoky jsou určeny ke konzervaci krve.

A nakonec je možno uvést evropský patent č. EP-A-239 357, ve kterém se popisuje použití sodné soli fosfoenolpyrohroznové kyseliny pro léčení srdečních nebo ledvinových onemocnění, které souvisí s ischemií.

Podstata vynálezu

Podle uvedeného vynálezu bylo zjištěno, a toto tvoří podstatu uvedeného vynálezu, že sloučeniny, které mají fosfoamidové zbytky nebo enolfosfátové zbytky, představují zejména cenné látky o dosud neznámých farmakologických vlastnostech, přičemž tyto sloučeniny projevují obzvláště významnou protinádorovou účinnost.

Podstatou předmětného vynálezu je použití přinejmenším jedné sloučeniny vybrané ze souboru zahrnujícího kreatinfosfát a farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny, zejména sodné soli, pro přípravu léčiva určeného k léčení nádorů.

Ve výhodném provedení se tyto sloučeniny používají pro přípravu léčiva určeného pro léčení nádorů vybraných ze souboru zahrnujícího adenokarcinom, epidermoidní karcinomy a maligní melanom.

Podle dalšího výhodného řešení je uvedeným léčivem prostředek ve formě dávkové jednotky obsahující 0,1 až 50 gramů účinné látky.

Podle dalšího výhodného provedení uvedené léčivo představuje injikovatelný přípravek.

-1 CZ 284966 B6

Vzhledem kvýše uvedenému objevu se tedy tento vynález hlavně týká použití přinejmenším jedné sloučeniny, která má energeticky bohatý zbytek, konkrétně fosfoamidový zbytek (přičemž se rovněž může jednat o enolfosfátový zbytek), pro přípravu léčiva určeného k léčení nádorových onemocnění.

V rámci uvedeného vynálezu se uvedenými sloučeninami, které mají fosfoamidové zbytky, míní libovolné různé sloučeniny, jejichž strukturní vzorec obsahuje skupinu:

OH —NH—P = O

I

OH

Jak příklad výhodných výše uvedených sloučenin je možno uvést kreatinfosfát, který je rovněž někdy označován jako fosfokreatin, přičemž tato látka patří k široce rozšířeným sloučeninám vyskytujícím se u obratlovců, zejména je tato látka obsažena v příčně pruhovaném svalstvu, ovšem není přítomna v krvi a extracelulámí tekutině. Jako další příklad těchto sloučenin je možno uvést argininfosfát, který se nachází ve svalstvu bezobratlích.

Podobně je možno uvést, že sloučeninami, které mají enolfosfátový zbytek, se míní libovolné sloučeniny, jejichž chemická struktura obsahuje skupinu:

OH

CH₂ OH

Jako příklad výhodných výše uvedených sloučenin je možno uvést fosfoenolpyrohroznovou kyselinu, která představuje přechodný endogenní metabolit podílející se na glykolýze, přičemž tato látka je za fyziologických podmínek z tohoto důvodu lokalizována v buňkách, přičemž není přítomna v krvi.

Podle zejména výhodného provedení podle vynálezu je výše uvedenou sloučeninou, která má energeticky bohatý zbytek, kreatinfosfát a farmaceuticky přijatelné soli odvozené od této sloučeniny, konkrétně je možno uvést sodné soli.

Uvedenou sloučeninou, která obsahuje energeticky bohatý enolfosfátový zbytek může být například fosfoenolpyrohroznová kyselina a farmaceuticky přijatelné soli odvozené od této sloučeniny, zejména se jedná o sodné soli.

Mezi druhy nádorových onemocnění, které je možno léčit pomocí léčiv získaných podle uvedeného vynálezu, je možno konkrétně zařadit nově vytvořené nádory nebo nádory, které se staly resistentní k chemoterapeutickému léčení, jako je například adenokarcinomy (nádor tračníku, slinivky, žaludku, průdušek, ledvin, prsou, dělohy, vaječníků, atd.), epidermoidní karcinomy (nádor respiračního-trávicího traktu, průdušek, močového ústrojí, řitě, kůže, atd.), maligní melanom, sarkomy měkké tkáně, leukémie, lymfomy a mnohotný myelom.

-2CZ 284966 B6

Léčiva podle uvedeného vynálezu je možno připravit obvyklými metodami běžně známými z dosavadního stavu techniky, přičemž je možno tato léčiva podávat intravenózně ve formě bolusu nebo přerušovanou nebo nepřerušovanou perfúzí, intraarteriálně, intraperitoneálně nebo intramuskulámě. Dávka těchto sloučenin se může pohybovat v rozmezí od 50 miligramů do 5 g/kg tělesné hmotnosti v průběhu 24 hodin.

Podle zejména vhodného provedení podle vynálezu představuje toto léčivo prostředek ve formě dávkové jednotky.

Ve výhodném provedení obsahuje tato dávková jednotka účinnou složku v rozmezí od 0,1 do 50 gramů.

Výhodně se toto léčivo formuluje do formy injikovatelného přípravku, který obsahuje 0,1 až 50 gramů účinné složky.

Podle jednoho z výhodných provedení je možno tuto výše uvedenou účinnou složku léčiva ředit v plnicí přísadě, která je kompatibilní se způsobem podávání. Tato plnicí činidla jsou odborníkům pracujícím vdaném oboru běžně známá, přičemž jako příklad zejména výhodných plnicích přísad je možno uvést následující látky.

- mannitol,

- sorbitol,

- fosfátový pufr obsahující bezvodý dihydrogenfosforečnan sodný/hydrogenfosforečnan sodný,

- citrátový pufr obsahující citrát sodný/kyselinu citrónovou,

- laktátový pufr obsahující laktát sodný/kyselinu mléčnou,

- chlorid sodný.

Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu se výše uvedená účinná složka ředí v rozřeďovacím rozpouštědle, které je vhodné pro účel konkrétního podávání.

Mezi tato rozřeďovací rozpouštědla patří běžná rozpouštědla používaná odborníky pracujícími v daném oboru pro podobná použití. Jako příklady těchto rozpouštědel je možno uvést následující látky:

- voda pro injikovatelné přípravky,

- 0,9% roztok chloridu sodného,

- 5% až 15% roztok glukózy,

- 20% až 30% roztok sorbitolu,

- roztok citronanu troj sodného.

Při prováděném léčení se danému subjektu podává terapeuticky účinné množství přinejmenším jedné sloučeniny, která má fosfoamidový zbytek nebo enolfosfátový zbytek.

Farmakologické vlastnosti sloučenin, které mají fosfoamidové zbytky nebo enolfosfátové zbytky, byly prokázány pomocí různých testů, při kterých byly vyhodnocovány účinky kreatinfosfátu na nádorové buňky různého druhu.

Dosahované účinky zcela nepopiratelně souvisí s přítomností fosfoamidového zbytku v molekule testované sloučeniny.

Dodatečně provedené testy s fosfoenolpyrohroznovou kyselinou ukázaly, že analogické farmakologické účinky je možno rovněž dosáhnout se sloučeninami, které mají enolfosfátový zbytek.

Experimentální postupy a získané výsledky, na kterých je možno demonstrovat farmakologické vlastnosti sloučenin, které mají fosfoamidový zbytek nebo enolfosfátový zbytek, budou v dalším popsány podrobněji.

-3 CZ 284966 B6

Použitá metoda

- Podstata této metody

Testované nádory byly vytvořeny u nahých myší subkutánní inokulací nádorotvomých buněk. Intraperitoneální injekce kreatinfosfátu, v tomto textu označovaného UP 999-247, nebo chloridu sodného byly prováděny 6 nebo Ί dní v týdnu jeden týden po provedené inokulaci. Během tohoto léčení byla zvířata vážena, přičemž rozměr nádoru byl zjišťován každý týden.

- Testovací postup (1) Vyvolání nádoru lidského původu u nahých myší.

Nahé myši (Swiss strain) stáří 4 týdnů byly umístěny do izolovaného prostoru (sterilní prostředí) pod tlakem.

Linie lidských nádorových buněk, konkrétně Caco2 (tračník), SK-MEL5 (melanom), Capan-1 (slinivka) aNCl-H69 (malobuněčný karcinom plic), byly kultivovány v různých médiích obsahujících 10 až 20 % fetálního telecího séra a 1 % nepodstatných aminokyselin.

Potom byly buňky v množství 5.10⁶ (SK-MEL5), 9.10⁶ (Caco2), 2.10⁵ (Capan-1) a 2.10⁶ (NC1H69) v PBS inokulovány subkutánně do pravého boku každé myši. Tato operace byla provedena pod krytem za sterilních podmínek.

Po inokulaci byla zvířata každý týden vážena a velikost nádoru byla měřena posuvným měřítkem.

Objem nádoru (poloelipsoidního tvaru) byl zjištěn pomocí následujícího vztahu (viz. Dethlefsen L. A., Prwitt J.M.S., Mendelsohn M. L., Analysis of tumor growth curves. J. Nati. Cancer Institute, 1968, 40, 389-408; Radulovic S., Miller G., Schally A. V., Inhibition of growth of HT29 human colon cancer xenografts in nudě mice by treatment with bombesin/gastrin releasing peptide antagonist (RC-3095), Cancer Res., 1991, 51, 6006-6009:

šířka x délka x výška x π objem nádoru =----------------------6 (2) Test účinku UP 999-247 na růst nádoru.

Léčení bylo zahájeno 7 dní po inokulaci a spočívalo v intraperitoneální injekci UP 999-247 (léčená skupina) nebo isotonického roztoku (kontrolní skupina). V každé skupině bylo 10 až 15 myší. Každá jednotlivá myš byla identifikována tetováním na zadní části, přičemž skupiny byly umístěny do makrolonových klecí.

Délka léčení závisí na cíli léčení pro každou sérii prováděných testů.

Po ukončení léčení byly nádory vyjmuty a uchyceny v ouinovu fixačním zařízení, kde byla provedena anatomicko-patologická analýza.

(3) Režim podávání

Při testování látek bylo použito 0,9 % roztoku chloridu sodného, který byl sterilizován za pomoci 0,2 pm filtru. Tento roztok byl podáván intraperitoneálně v objemu 1 mililitr/myš.

-4CZ 284966 B6

Kontrolní skupina dostávala 1 mililitr 0,9 % roztoku chloridu sodného.

Dávkovači schéma bylo následující: 0,04 mmolu, 0,1 mmolu, 0,2 mmolu a 0,4 mmolu na myš a na injekci.

Tyto dávky byly zvoleny podle maximální dávky, kterou je možno použít při intraperitoneálním podávání a podle koncentrace plazmy stanovené předem při farmakokinetických testech.

(4) Vyhodnocení výsledků.

Při jednotlivých měřeních byly vyhodnocovány následující parametry:

- tělesná hmotnost v gramech se střední±standardní odchylkou, která byla měřena každý týden,

- objem nádoru v mm³ se střední ± standardní odchylkou, která byla měřena každý týden.

Výsledky

Zjištěné výsledky jsou uvedeny v následujících tabulkách.

Tabulka č.l

Test UP 999-247 na růst melanomu (SK-MEL5) u nahých myší. 0,4 mmol/myš. Objem nádoru (v mm³)	Sledování účinku dávky
Skupina	• Týden 1	1 2	i 3	! 1 : 4 ;
Kontrolní zvířata:	59,1±3,1	: 65±6,50	: 97±14	: 128 ±25,9 :
Ošetřená zvířata:	• 55 ±4,4	: 37±7	: 49±11	: 50,7±13,2 :

n = 6 až 10

Objem nádoru (v mm³)

• Skupina 1 J	: Týden : : : 1 ^J 1 1 J
5	: 6 :	7 :
: Kontrolní zvířata:	: 182,8±25,9	: 209,l±28,4 :	264,1±41
'· Ošetřená zvířata:	: 50,7±13,2	: 64,3±16,2 :	86,3±19
n = 6 až 10
Tělesná hmotnost (gramy)
Skupina	j Týden : 1	1 1 1 1 : 2 :	3	1 1 1 1 : 4 :
• Kontrolní zvířata: Ošetřená zvířata:	: 20,9±08 : 20,6±0,5	i 20,8±0,65 i : 20,4±0,5 :	21,5±0,7 21,9±0,5	: 21,5±0,8 : i 22,l±0,5 ;

n = 6 až 10

- 5 CZ 284966 B6

Tabulka č. 1 (pokračování)

Tělesná hmotnost

Skupina	Týden i	1 1 7 :
i 5	i 6 :
: Kontrolní zvířata: k........................	: 22,3+0,6	: 22,0+0,8 !	: 22,6+0,8 :
Ošetřená zvířata:	22,5+0,9	: 22,5+0,7 i	i 23,7+0,3 ·

n = 6 až 10

Tabulka č. 2

Test UP 999-247 na růst lidského melanomu (SK-MEL5) u nahých myší.

Sledování účinku v závislosti na dávce

Objem nádoru (v mm³)

Skupina	Týden : 1	1 i 2	: i : 3 :
Kontrolní zvířata:	j 38,7+7,3	: 40,6+5,2	: 57,3+8,5 :
Ošetřená zvířata:
- 0,04 mmolu	: 33,8+3,9	: 27,4+4,5	: 40,8+8,5 :
- 0,1 mmolu	: 36,7+2,7	: 32,8+2,6	: 36,5+7,5 :
- 0,4 mmolu	36,1+2,6	: 32,4+2,0	: 29,9+4,0 i

Objem nádoru (v mm³)

: Skupina	: Týden • 4	1 > • 5 :	t 6 i
• Kontrolní zvířata:	; 84,5+21,0	i 120,0+39,0 :	174,0+56,0 :
: Ošetřená zvířata:			1
- 0,04 mmolu	i 64,9+17,0	: 93,0+25,0 i	150,0+52,0 i
i - 0,1 mmolu	: 44,5+10,1	: 83,0+31,0 :	105,0+36,0 :
- 0,4 mmolu	: 32,5+ 4,4	i 50,0+10,0 ;	48,0+11,0 :

n = 5 až 9

Objem nádoru (v mm³)

: Skupina	: Týden : : 7 : 8	1 1 i ⁹ i
: Kontrolní zvířata:	ί 273,0+85,0 : 366,0+123,0	: 468,0+142,0 :
Ošetřená zvířata:	1 1	i <
- 0,04 mmolu	: 202,0+68,0 ; 302,0+96,0	: 421,0+125,0 i
• - 0,1 mmolu	• 138,0+49,0 : 198,0+82,0	: 220,0+102,0 :
: - 0,4 mmolu	: 63,0+13,0 : 85,0+18,0	: 93,0+ 15,0 :

-6CZ 284966 B6

Tabulka č.2 (pokračování)

Objem nádoru (v mm³)

• Skupina	; Týden : : 10 : 11	í i : 12 :
Kontrolní zvířata:	i 677,0±188,0 : 819,0±218,0	: 1115,0±247,0 :
Ošetřená zvířata:
: - 0,04 mmolu	: 432,0± 126,0 : 719,0±219,0	: 1073,0±305,0 :
1-0,1 mmolu	·; 304,0±147,0 ! 411,0±212,0	: 597,0±340,0 :
- 0,4 mmolu	; 123,0± 39,0 : 130,0± 40,0	: 212,0± 59,0 :

n = 5 až 9

Objem nádoru (v mm³) • Skupina : Týden : ::

ΐ____________________________________j 13 ; 14 : 15i [Kontrolnízvířata: · 1335,0±288,0 1581,0±348,0 1988,0±443,0 :

I-----....---- ----....-------_r -------------------J----------------«---μ---- - - ----....! Ošetřená zvířata: ! : ::

í Γθ’θί ňioju T Ϊ9Ϊ6,Ο±3 3>0,0 '[ ’ Ϊ703,0±5 04,θ’ ’ 2072,Ó±6Í£0’ ’ :

[: θΐ Í^moíu ’ ’ f 683 ,Ó±4Ó9,0 ’ i 027 ’ ±565,0' ’ Ϊ i Ϊ1 ^Ó±600’Ó’ ’:

: - 0Λ~mmolu..............257,0± 94,0' 296,0±í06,0~' 295,0± 90,b:

Objem nádoru (v mm³)

: Skupina i	Týden · : : 16 : 17 :
: Kontrolní zvířata:	: 2285,0±535,0 : 3136,0±708,0 :
: Ošetřená zvířata: μ........................ - 0,04 mmolu • - 0,1 mmolu : - 0,4 mmolu	1 1 : 2215,0±649,0 : 2701,0±787,0 : ; 1395,0±779,0 : 1856,0±975,0 : : 388,0±147,0 : 501,0±225,0 :

n = 5 až 9

Tělesná hmotnost (gramy)

• Skupina 1	: Týden ! 1	1 : 2	1 1 • 3 :
! Kontrolní zvířata:	: 17,9±0,3	: 20,3±0,3	: 21,2±0,5 :
! Ošetřená zvířata: k........................ • - 0,04 mmolu :-0,1 mmolu	1 16,3±0,6 : 16,0±0,4	1 : 19,9±0,4 : 19,2±0,3	1 1 : 20,5±0,4 : • 20,3±0,3 :
: - 0,4 mmolu	: 17,7±0,4	: 19,8±0,3	: 20,7±0,5 :

-7 CZ 284966 B6

Tabulka č. 2 (pokračování)

Tělesná hmotnost (gramy)

• Skupina	; ^Tý^den ί ί Í
• 4	: 5	: 6 :
! Kontrolní zvířata:	: 21,3±0,4	: 21,7±0,5	: 21,8±0,6 '
Ošetřená zvířata:
: - 0,04 mmolu	: 21,6±0,4	: 21,5±0,5	: 20,7±0,4 :
‘-0,1 mmolu	: 20,9±0,3	! 21,6±0,4	: 21,l±0,4 :
! - 0,4 mmolu L ^?_________________________________	: 21,5±0,4	: 22,2±0,4	: 21,7±0,5 :

n = 7 až 11

Tělesná hmotnost (gramy)

: Skupina	: Týden 7	1 8	1 1 : 9 :
• Kontrolní zvířata:	; 21,7±0,6	: 22,3±0,6	22,5±0,7 :
: Ošetřená zvířata:
! - 0,04 mmolu	: 21,2±0,4	: 21,6±0,4	: 21,8±0,4 :
- 0,1 mmolu	: 21,7±0,4	: 22,l±0,4	: 21,8±0,4 :
- 0,4 mmolu	: 23,4±0,5	i 23,6±0,3	í 24,l±0,3 :

Tělesná hmotnost (gramy)

• Skupina	! Týden : 10	l : 11	l 1 i ¹² i
: Kontrolní zvířata	: 22,l±0,6 i	; 21,9±0,5	22,2±0,4 :
! Ošetřená zvířata	; ;
: - 0,04 mmolu	' 21,l±0,3 '	21,7±0,3	: 22,0±0,5 :
• - 0,1 mmolu	• 21,9±0,3	l 22,6±0,4	22,6±0,5 :
: - 0,4 mmolu	: 22,9±0,6 :	: 25,4±0,5	25,5±0,6 :

n = 7 až 11

Tělesná hmotnost (gramy) j Skupina Týden

1	i ¹³	i ¹⁴	: 15 :
• Kontrolní zvířata:	: 23,5±0,4	: 23,5±0,5	: 23,5±0,4 :
: Ošetřená zvířata:	1	•
• - 0,04 mmolu	j 22,5±0,4	: 22,8±0,4	: 23,2±0,4 :
:-0,1 mmolu	: 23,l±0,4	: 23,7±0,6	: 23,9±0,7 :
: - 0,4 mmolu	: 26,0±0,6	: 27,5±0,5	: 27,0±0,8 :

-8CZ 284966 B6

Tabulka č. 2 (pokračování)

Tělesná hmotnost (gramy)

• Skupina 1	Týden : :
: 16	: 17 :
: Kontrolní zvířata:	: 23,9±0,3	: 24,7±0,4 :
• Ošetřená zvířata:	1
: - 0,04 mmolů,	: 23,6±0,6	: 24,4±0,8 :
:-0,1 mmolů	: 14,0±l,0	; 24,8±0,2 :
- 0,4 mmolů	: 26,3±0,7	: 26,6±0,6 ·

n = 7 až 11

Tabulka č. 3

Test UP 999-247 na růst nádoru tračníku (Caco2) u nahých myší. Sledování účinku v závislosti na dávce

Objem nádoru (mm³)

: Skupina	: Týden : 1	1 : 2	1 1 : 3 :
: Kontrolní zvířata: : Ošetřená zvířata:		51,1±3,7	: 55,9±5,8	• 71,1±9,9 :
: - 0,04 mmolů		52,3±7,9	' 55,8±5,9	: 49,5±5,5 :
• - 0,1 mmolů		41,6±5,5	: 40,8±5,4	^!· 49,6±6,5 :
• - 0,2 mmolů	....4...	45,0±3,0	: 49,1 ±4,3	: 48,9±7,3 :
: - 0,4 mmolů		36,3±2,2	: 49,1±3,1	: 58,5±5,5 :

Objem nádoru (mm³)

• Skupina	: Týden		» 1
	; ^{4 :}·	5	I 6 :
: Kontrolní zvířata: μ........................	: 63,0± 7,0 : ---- +...... b--	74,8±9,5	: 100,2±13,5 : --F.......-......\|
: Ošetřená zvířata:
• - 0,04 mmolů	: 42,7± 8,0 :	51,4±6,0	: 84,0±16,0 :
:-0,1 mmolů	: 35,8± 5,0 :	32,5±2,7	: 48,3± 8,0 :
: - 0,2 mmolů μ----....................	: 51,0±ll,0 :	45,4±6,6	: 68,4±13,7 :
: - 0,4 mmolů	• 42,3± 4,0 :	37,0±4,7	: 41,8± 6,7 :

n = 8 až 10

-9CZ 284966 B6

Tabulka č. 3 (pokračování)

Tělesná hmotnost (gramy)

• Skupina	: Týden : 1	: 2	i i : 3 :
: Kontrolní zvířata: l·........................ Ošetřená zvířata: ! - 0,04 mmolu	: 19,9±0,5 : 19,2±0,5	: 22,7±0,4 : 22,2±0,6	: 23,l±0,5 : --k.......------......1 : 22,8±0,5 :
:-0,1 mmolu	: 19,7±0,5	: 22,3±0,6	22,8±0,6 :
• - 0,2 mmolu - 0,4 mmolu	: 20,l±0,5 ; 20,6±0,5	: 22,6±0,6 : 23,l±0,6	: 22,8±0,6 : i 22,9±0,5 !

Tělesná hmotnost (gramy)

: Skupina	: Týden :	1 1 i ⁶ i
i ⁴	• 5
: Kontrolní zvířata:	i 23,l±0,5	: 23,7±0,6	i 24,3±0,5 :
! Ošetřená zvířata: 1-........................ - 0,04 mmolu	: 22,8±0,5	: 23,0±0,5	• 23,7±0,6 :
:-0,1 mmolu	; 22,9±0,7	: 23,4±0,5	24,3±0,7 :
: - 0,2 mmolu	23,l±0,7	: 23,6±0,5	• 25,2±0,7 :
: - 0,4 mmolu	: 23,6±0,5	: 24,0±0,7	i 25,3±0,8 :

n = 8 až 10

Tabulka č. 4

Test UP 999-247 na růst malobuněčného plicního nádoru (NC1-H69) u nahých myší.

Sledování účinku dávky 0,4 mmol/myš.

Tělesná hmotnost (gramy)

: Skupina	: Týden = i	i 1 i ²	1 1 1 1 i ³ i
: Kontrolní zvířata:	: 19,3±0,5	: 20,l±0,4	: 21,4±0,5 :
: Ošetřená zvířata:	: 17,7±0,2	: 18,7±0,4	: 20,3±0,4 :

n = 13 až 15

Tělesná hmotnost (gramy)

Skupina	• Týden :	6 ·
4	: 5
Kontrolní zvířata:	: 21,7±0,3	: 22,7±0,3	22,5±0,4 :
Ošetřená zvířata:	• 20,7±0,4	21,6±0,4	22,2±0,5 :

η = 13 až 15

- 10 CZ 284966 B6

Tabulka č. 4 (pokračování)

Objem nádoru (mm³)

Skupina	Týden : 1	: i : 2 :	3
Kontrolní zvířata:		I 29,5±1,5 :	94±48
Ošetřená zvířata:	: 15	J 25:	25

η = 1 až 6

Objem nádoru (mm³)

Skupina	: Týden : 4	1 1 : ⁵ ί	1 ⁶ i
Kontrolní zvířata:	: 246 ±110	: 533 ±183 :	941±235 i
Ošetřená zvířata:	: 18,7± 6,2	: 36,5± 16,6 ;	107± 43 :

η = 1 až 6

Tabulka č. 5

Test UP 999-247 na růst nádoru tračníku (Capan-1) u nahých myší.

Sledování účinku dávky 0,4 mmol/myš.

Tělesná hmotnost (gramy)

Skupina	Týden : 1	I 1 ! 2 I	1 1 3 :
! Kontrolní zvířata: J..........................	I 18,8±0,4	: 20,2±0,4	: 21,3±0,4 :
Ošetřená zvířata:	: 17,9±0,3	i 19,3±0,7 i	20,3±0,6 ;

η = 11 až 16

Tělesná hmotnost (gramy)
Skupina	1 Týden 'i ⁴	1 • 5	6
Kontrolní zvířata:	: 21,4±0,15	: 22,6±0,4	13,3±0,4
Ošetřená zvířata: *	: 21,2±0,5	: 22,4±0,6	13,3±0,7

η = 11 až 16

Objem nádoru (mm³)

Skupina	Týden : 1	2	i ; 3
Kontrolní zvířata:	: 17±3	33±8	: 111 ±17
Ošetřená zvířata:	: 18±1 _____________i_______________________________________________________________	23±3	: 54,5± 9

n = 8 až 15

- 11 CZ 284966 B6

Tabulka č. 5 (pokračování)

Objem nádoru (mm³)

Skupina	: Týden ; 4 :	5	1 1 : 6 :
Kontrolní zvířata:	: 201 ±23 :	442±62	: 671± 67 :
Ošetřená zvířata:	: I16,3±19 :	253±47	: 499±103 :

n = 8 až 15

Z výše uvedených výsledků je patrné, že po podání kreatinfosfátu nahým myším s různými vyvolanými nádory bylo dosaženo inhibování růstu těchto nádorů.

Tento inhibiční účinek je závislý na podávané dávce účinné látky.

Během prováděných experimentálních testů byla sledována změna tělesné hmotnosti a chování pozorovaných zvířat.

Po usmrcení zvířat bylo provedeno biochemické a hematologické vyhodnocení plazmy a krve.

Při daných použitých experimentálních podmínkách, uvedených výše, nebyla zaznamenána úmrtnost při použití kreatinfosfátu.

Změny byly pozorovány u skupin zvířat, které byly ošetřovány nejvyššími testovanými dávkami, které způsobovaly mírné zvýšení transaminázy a sodíku a snížení alkalické fosfatázy a vzniklých krevních elementů.

Ostatní modifikace odpovídaly obvyklým změnám běžně se vyskytujících u krys.

Kreatinfosfát projevoval vynikající biologickou toleranci při dávkách, které se pohybovaly až do 2400 mg/kg, které byly podávány intravenózně.

Podobným způsobem projevovala biologickou toleranci kyselina fosfoenolpyrohroznová, která byla podávána krysám v dávkách až do 500 mg/kg, přičemž při těchto dávkách nebyla zaznamenána úmrtnost.

Příklady provedení vynálezu

Použití uvedených sloučenin a farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny, které mají fosfoaminový zbytek nebo enolfosfátový zbytek podle uvedeného vynálezu budou v dalším ilustrovány pomocí příkladů provedení, které jsou pouze ilustrativní a nijak neomezují rozsah tohoto vynálezu.

Kreatinfosfát je možno pro tyto účely použít buďto ve formě sterilního roztoku k okamžitému použití nebo ve formě sterilního prášku nebo produktu po lyofilizaci. V těchto případech je možno výhodně použít plnicí přísadu, která neprojevuje žádnou farmakologickou účinnost, kterou je možno zvolit ze souboru zahrnujícího laktózu, mannitol, fosfátový pufr obsahující bezvodý dihydrogenfosforečnan sodný a hydrogenfosforečnan sodný, citrátový pufr obsahující citronan sodný a kyselinu citrónovou, laktátový pufr obsahující laktát sodný a kyselinu mléčnou, chlorid sodný nebo směsi těchto plnicích látek v libovolných množstvích, přičemž tyto látky je možno použít obvyklým způsobem známým z dosavadního stavu techniky.

- 12 CZ 284966 B6

Jako rozřeďovacího rozpouštědla je možno použít buďto rozpouštědel používaných běžným způsobem pro injekce (0,9% roztok chloridu sodného, 5 % nebo 15 % roztok glukózy, 20 až 30% roztok sorbitolu, roztok citronanu trojsodného nebo injikovatelný přípravek) nebo je možno použít libovolných jiných obvykle používaných perfuzních rozpouštědel.

Ve výhodném provedení mají tyto farmaceutické prostředky formu sterilního lyofilizátu obsahujícího 25 gramů kreatinfosfátu, který se rozředí ve 100 mililitrech 0,9% roztoku chloridu sodného.

Příklad 1

- Citrátový pufr: pH 7

- kyselina citrónová 0,0329 %

- Na2HPO₄.2 H₂O 0,253 %

- glukóza	5 %
- voda pro injikovatelné přípravky:	zbytek do 100 %

V případě, že se použije lyofilizát, potom je rozřeďovacím rozpouštědlem voda pro injikovatelné přípravky.

Příklad 2

- Fosfátový pufr: pH 7,2

- Na₂HPO₄.2 H₂O 0,768 %

-NaH₂PO₄ 0,184 %

-NaCl	0,44 %
- voda pro injikovatelné přípravky:	zbytek do 100 %

Příklad 3

- Mannitol	5%
- voda pro injikovatelné přípravky:	zbytek do 100 %

Příklad 4

- Glukóza	5%
- voda pro injikovatelné přípravky:	zbytek do 100 %

Příklad 5

-KH₂PO₄ 0,178 %

- Na₂HPO₄.2 H₂O 0,953 %

- 13 CZ 284966 B6

- glukóza

- voda pro injikovatelné přípravky:

5% zbytek do 100 %

Claims

1. Použití přinejmenším jedné sloučeniny vybrané ze souboru zahrnujícího kreatinfosfát a farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny, zejména sodné soli, pro přípravu léčiva určeného k léčení nádorů

2. Použití podle nároku 1 pro přípravu léčiva určeného pro léčení nádorů vybraných ze souboru zahrnujícího adenokarcinom, epidermoidní karcinomy a maligní melanom.

3. Použití podle některého z nároků 1 nebo 2, přičemž uvedeným léčivem je prostředek ve formě dávkové jednotky obsahující 0,1 až 50 gramů účinné látky.

4. Použití podle některého z nároků 1 až 3, přičemž uvedené léčivo představuje injikovatelný přípravek.