CZ283400B6 - Avirulentní vakcina proti vzteklině - Google Patents
Avirulentní vakcina proti vzteklině Download PDFInfo
- Publication number
- CZ283400B6 CZ283400B6 CZ931402A CZ140293A CZ283400B6 CZ 283400 B6 CZ283400 B6 CZ 283400B6 CZ 931402 A CZ931402 A CZ 931402A CZ 140293 A CZ140293 A CZ 140293A CZ 283400 B6 CZ283400 B6 CZ 283400B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mutant
- strain
- avirulent
- sad
- double
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 title abstract description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims abstract description 17
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 13
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 9
- 102100024342 Contactin-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 101000690440 Solanum lycopersicum Floral homeotic protein AGAMOUS Proteins 0.000 claims description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 6
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 101100162403 Arabidopsis thaliana ALEU gene Proteins 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-3-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C(F)=CNC(=O)N1C1C2=CC=CC=C2C(=O)O1 LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700179 Apodemus Species 0.000 description 1
- 241001359030 Arvicola amphibius Species 0.000 description 1
- 241000711515 Berne virus Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000466354 Myodes Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101900083372 Rabies virus Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Avirulentní vakcina proti vzteklině, obshující avirulentní mutant SAD kmene viru vztekliny, jehož glykoprotein obsahuje v poloze 333 přirozeně se vyskytující aminokyselinu, jejíž kodon se liší od kodonu argininu alespoň dvěma nukleotidy. Vakcina je použitelná pro vakcinaci vůči vzteklině.ŕ
Description
Vynález se týká nové vakcíny proti vzteklině, dvojitého avirulentního mutantu SAD kmene viru vztekliny a způsobu získání těchto dvojitých mutantů.
Dosavadní stav techniky
Virus vztekliny je rhabdovirus, obsahující pět proteinů, včetně jednoho vnějšího proteinu, jmenovitě glykoproteinu, který spouští syntézu neutralizujících protilátek u inokulovaných živočichů. Injekce purifikovaného glykoproteinu chrání živočichy proti superinfekci. Kmeny viru vztekliny, které jsou nejčastěji používané, zejména CVS kmen a BRA kmen, od kterých jsou odvozeny SAD kmeny jako SAD Berne a SAD B19, jsou popsány v publikaci: Rabies Viruses H. F. Clarkem aT. J. Wiktorem Strains of Human Viruses, publikované Majer and Plotkin Karger. Basilej, 1972, sír. 177-182. Aminokyselinová sekvence glykoproteinu CVS kmene byla popsána v publikaci: Yelverton a kol. Rabies virus glykoprotein analogs biosynthesis in Escherichia coli, Science, 219, 614 - 620.
Tento glykoprotein má dvě zřetelná hlavní antigenní místa spojená s neutralizací viru (místa II a III). Místo III v poloze 330 - 340 obsahuje arginin 333, který determinuje virulenci kmene.
Aminokyselinové sekvence glykoproteinu SAD Berne kmene nebyla úplně stanovena. Nicméně je možné stanovit, že antigenické místo III glykoproteinu SAD Berne kmene je identické glykoproteinovému místu CVS kmene.
Vakcíny proti vzteklině při běžném použití jsou buď vakcíny vyrobené z inaktivovaných virů, nebo vakcíny, obsahující virové kmeny, jejichž virulence byla oslabena, nebo rekombinantní viry (například tato vakcína).
Virus může být inaktivován různými metodami, zvláště chemickými metodami jako je zpracování s formaldehydem nebo β-propiolaktonem.
Hlavní nevýhodou takového způsobu výroby vakcíny je zacházení s virulantními kmeny, které vyžaduje velmi přísné operační podmínky a přináší nebezpečí kontaminace pro pracovníky.
Navíc inaktivované vakcíny podané perorálně nemají ochrannou schopnost.
Zeslabení virulance virových kmenů představuje dobře známou metodu, může být provedena například postupným procházením virových kmenů hostitelem, který se liší od vektorových druhů (například králík nebo myš) nebo v buněčných kulturách. Tímto způsobem se získají kmeny, které jsou špatně adaptovatelné k původnímu hostiteli a jsou méně patogenní vůči němu, zatímco si současně udržují svoji vakcinační kapacitu.
SAD kmeny, jako je SAD B19 a SAD Berne kmeny, které jsou běžně dostupné, představují zeslabené kmeny, které byly již v Evropě testovány při vakcinaci lišek. Mohou být smíseny s návnadami pro perorální podání. Nicméně se tyto kmeny prokázaly být patogenními vůči jiným živočišným druhům a lidem. Existuje zde tak možné nebezpečí kontaminace, což podstatně snižuje hodnotu těchto kmenů pro perorální vakcinaci.
- 1 CZ 283400 B6
Například perorální podání SAD Berne kmene skupině 23 divokých hlodavců vybraných ze skupiny zahrnující Apodemus flavicolus asylvaticus, Arvicola terrestris, Clethrionomys clareolus a s Minotus agresti, způsobilo smrt dvou zvířat v důsledku vztekliny.
Testy na myších také ukázaly, že SAD Berne kmen je patogenní vůči těmto druhům jak při intracerebrálním podání tak při intramuskulámím podání, jak je ukázáno na křivkách na připojených obrázcích la a lb, kde
- na obr. la je křivka mortality u dospělých myší jako funkce dávek (v plakotvomých 10 jednotkách) při intracelebrálním podání, a
- na obr. lb je křivka mortality u dospělých myší jako funkce dávek (v plakotvomých jednotkách) při intramuskulámím podání.
10% mortalita byla pozorována u myší při dávce 105,sPFU podané orálně.
Proto je SAD Berne kmen nebezpečný pro divoce žijící zvířata a lidi, jestliže se používá v akcích vakcinace lišek. Totéž platí i pro SAD B19 kmen.
Byla již navržena avirulentní protivzteklinová vakcína za účelem odstranění této nevýhody. Tato vakcína, popsaná v evropské patentové přihlášce EP 350398, obsahuje aviruletní mutant SAD kmene viru vztekliny, ve kterém arginin 333 glykoproteinu byl nahrazen aminokyselinou jinou než je lysin, například glycinem, isoleucinem nebo serinem.
Tento mutant je získán změnou jediného nukleotidu v kodonu argininu 333.
Bohužel se ovšem tento mutant může zvrátit na rodičovský kmen jednoduchou reverzní mutací.
Tato vakcína, která se používá pro orální podání, není proto úplně bez nebezpečí pokud se jedná 30 o jiné živočišné druhy.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká účinné vakcíny, která umožňuje zmírnění uvedených nevýhod.
Avirulentní vakcína proti vzteklině obsahuje avirulentní mutant SAD kmene viru vztekliny, glykoprotein, který obsahuje v poloze 333 přirozeně se vyskytující aminokyselinu, jejíž kodon se liší od kodonu argininu alespoň dvěma nukleotidy.
Ve výhodném provedení je aminokyselinou v poloze 333 glutamová kyselina.
Uvedeným mutantem je výhodně mutant SAD Berne kmene, nejvýhodněji mutant uložený v Collection Nationale de Cultures de Microorganismes - INSTITUT PASTEUR (C.N.C.M.) 45 Francie 9. července 1992 pod číslem 1-1238.
Podstata dvojitého avirulentního mutantu SAD kmene viru vztekliny spočívá vtom, že jeho glykoprotein obsahuje v poloze 333 přirozeně se vyskytující aminokyselinu, jejíž kodon se liší od kodonu arginininu dvěma nukleotidy.
Výhodně je uvedenou aminokyselinou v poloze 333 glutamová kyselina.
Uvedeným dvojitým avirulentním mutantem je výhodně mutant SAD Berne kmene, nejvýhodněji dvojitý avirulentní mutant SAD Berne kmene, uložený v Collection Nationale de Cultures de
-2CZ 283400 B6
Microorganismes (C.N.C.M.) - INSTITUT PASTEUR - Francie 9. července 1992 pod číslem I1238.
Podstata způsobu získání dvojitých mutantů podle vynálezu spočívá v tom, že zahrnuje:
(i) výběr, z SAD kmene viru vztekliny, takových mutantů, které nejsou neutralizovány monoklonální protilátkou, neutralizující uvedený SAD kmen, ale neneutralizující TAG1 kmen, (ii) izolaci, sekvenováním 333 oblasti glykoproteinu mutantů vybraných ve stupni (i), mutanta, který obsahuje lysin v poloze 333, (iii) přípravu monoklonální protilátky, která neutralizuje jak uvedený SAD kmen tak mutant získaný ve stupni (ii), ale ne neutralizuje TAG1 kmen a (iv) provedení druhého výběru z mutantů získaných ve stupni (i) za pomoci monoklonální protilátky připravené ve stupni (iii).
Vakcína podle vynálezu obsahuje avirulentní mutant SAD kmene viru vztekliny, ve kterém arginin 333 glykoproteinu byl nahrazen přirozeně se vyskytující aminokyselinou, jejíž kodon se liší dvěma nukleotidy od kodonu, který kóduje arginin.
Vynález se dále týká avirulentních mutantů SAD kmene viru vztekliny, ve kterých arginin v poloze 333 glykoproteinu byl nahrazen aminokyselinou, jejíž kodon se liší od kodonu argininu dvěma nukleotidy.
Monoklonální protilátky použité pro výběr mutantů podle vynálezu se získávají fůzí myelomových buněk s buňkami produkujícími protivirové protilátky, hybridizační technikou popsanou v publikaci: KOHLER aMILSTEIN, NÁTUŘE, Vol. 256 495-497 (1975), za pomoci metody, která je v tomto oboru z dosavadního stavu techniky běžně známa.
Tato technika může být použita pro fúzování buněk, pocházejících z odlišných druhů, nicméně je výhodné použít buněk pocházejících ze stejných živočišných druhů. Například je výhodné použít na jedné straně myší myelomové buňky a na druhé straně buňky sleziny myši imunizované kmenem viru vztekliny podle uvedeného protokolu.
Obecně vyjádřeno, tato hybridizační metoda, popsaná ve vztahu k myším buňkám, zahrnuje následující stupně:
(1) imunizace myši daným množstvím viru inaktivovaného β-propiolaktonem, (2) odstranění sleziny imunizované myši a oddělení splenocytů, (3) fuze takto získaných splenocytů s myším myelomovými buňkami za přítomnosti promotoru fúze, (4) kultivace hybridních buněk získaných v selektivním médiu, ve kterém se nefuzované myelomové buňky nevyvíjejí, a za přítomnosti vhodných složek a (5) výběr buněk produkujících požadovanou protilátku a klonování takových buněk.
Imunizační protokol obsahuje intraperitoneální injekci Balb-C myši za použití 100 pg CV5 viru inaktivovaného β-propiolaktonem, spolu s FREUNDOVÝM kompletním adjuvans a intravenozní booster-dávku 4 dny před fúzí po klidové periodě 1 měsíce.
-3 CZ 283400 B6
Splenocyty imunizované myši se získají po odstranění sleziny obvyklým postupem.
Myší myelomové buňky použité pro získávání neutralizující monoklonálních protilátek jsou Balb-C myší myelomové buňky pocházející z SP2O linie. Tyto myelomové buňky byly vybrány pro jejich citlivost k aminopterinu a kultivovány ve vhodném médiu jako je Eagle-základní médium modifikované pomocí DULBECCO (Dulbecco Modified Eagle médium), dále zde označovaném jako DMEM, ke kterému bylo přidáno 15 % hříběcího séra.
Myelomové buňky byly fúzovány se splenocyty smísením 5.107 myelomových buněk s5.107 slezinných buněk imunizované myši, za přítomnosti fuzního promotoru jako je, například, polyethylenglykol.
Po inkubaci při 37 °C byly buňky promyty v DMEM, resuspendovány a pak kultivovány v selektivním médiu, vhodném pouze pro růst hybridních buněk. Takové médium obsahuje hypoxanthin, aminopterin a thymidin.
Supematanty kultury pak byly děleny, 7 až 20 dní po fúzi, uvedením supematantů do kontaktu se suspenzí CVS viru a výběrem protilátek, které neutralizují uvedenou suspenzi.
Protilátkami, neutralizujícími virus jsou míněny protilátky, které, při uvedení do kontaktu se suspenzí uvedeného viru, inhibují jeho virulenci.
Neutralizační síla monoklonálních protilátek získaných výše se stanoví běžnou metodou dobře známou odborníkům v oboru. Tato metoda zahrnuje uvedení do kontaktu 100 μΐ suspenze viru, obsahující 1000 PFU viru se 100 μΐ supematantu hybridomové kultury, infikování buněčné kultury touto směsí a po 4 dnech inkubace, spočtení lýze plaků pod agarem metodou popsanou BUSSEREAUem aspol., 1982, J. Virol. Méth., sv. 4, str. 277-282. Protilátka je neutralizující, jestliže inhibuje plně tvorbu plaků pod agarem za výše popsaných podmínek.
Potom jsou z těchto protilátek vybrány ty, které neneutralizují TAG1 avirulentní mutant odvozený od CVS kmene, uložený vCollection Nationale de Culture de Micro-organismes (C.N.C.M.) INSTITUT PASTEUR - FRANCE, 12. dubna 1985 pod číslem 1-433.
Výsledné monoklonální protilátky, které neutralizují CVS kmen, ale neneutralizují TAG1 avirulentní mutant, umožňují vybrat avirulentní mutanty zjakýchkoliv kmenů viru vztekliny, který je neutralizován těmito monoklonálními protilátkami.
Monoklonální protilátky takto získané jsou protilátky, které také neutralizují SAD kmeny viru vztekliny, takže jsou vhodné pro uskutečnění první selekce způsobu podle vynálezu.
Sekvenování 333 oblasti glykoproteinu mutantů vybraných ve stupni 1) se provádí obvyklou metodou dobře známou odborníkům v oboru (SANGER aspol., 1977, Proč. Nat. Acad. Sci. USA, sv. 74, str. 5463-5467).
Toto sekvenování umožňuje izolovat mutant, který obsahuje lysin v poloze 333 glykoproteinu; tento mutant je zde dále označován jako SK mutant.
Kodon (AAA) této aminokyseliny (lysin) se liší jediným nukleotidem od kodonu argininu v poloze 333 SAD kmene, kodonu argininu v poloze 333 SAD kmene, který je AGA.
Následuje příprava monoklonální protilátky, která neutralizuje jak SAD kmen tak výše získaný mutant.
- 4 CZ 283400 B6
Tato monoklonální protilátka se získá výběrem zvýše monoklonálních protilátek, které neutralizují SAD kmen a neneutralizují TAG1, takových monoklonálních protilátek, které také neutralizují lysinový mutant nebo SK mutant získaný výše.
Patogenická potence mutantů vzniklých z tohoto druhého výběru je pak testována intracerebrální injekcí na dospělých myších s 105PFU. Mutanty, které neusmrcují při této dávce a tomto injekčním způsobu podání, jsou považovány za avirulentní.
Výše uvedená monoklonální protilátka umožňuje provést druhý výběr (stupeň 4) způsobu podle vynálezu.
Mutanty podle vynálezu jsou dvojité avirulentní mutanty SAD kmene, jako zejména SAD Berne kmene, vzniklé ze dvou po sobě jdoucích selekcí za pomoci výše definovaných monoklonálních protilátek.
Mutanty podle vynálezu mohou také obsahovat jiné mutace, například mutaci propůjčující odolnost k monoklonální protilátce specifické pro antigenické místo II, která umožňuje rozpoznání možné virulentního zvratu SAD kmenů použitých pro orální vakcinaci lišek.
Mutanty podle vynálezu mohou být multiplikovány v BHK 21 buňkách ledvin křečků za přítomnosti GEM (minimální esenciální médium modifikované pomocí Glasgoe, dostupné od FLOW) a 2% telecího séra, při 33 °C a ve vlhké atmosféře, obsahující 5 % CO2.
Titrují se obvyklými metodami, například stanovením 50% letální dávky (LD5o) na mladých myších, imunofluorescencí nebo spočítáním lyží pod agarem. Mohou být uchovávány při -70 °C.
Analýza nukleotidové sekvence glykoproteinu těchto mutantů ukázala, že kodon aminokyseliny v poloze 333 se liší alespoň dvěma nukleotidy od všech možných kodonů argininu. Z mutantů, kteří splňují tuto podmínku, je mutant, který obsahuje glutamovou kyselinu v poloze 333 zvláště výhodný, protože se multiplikuje dobře v buněčné kultuře, je méně patogenický vůči novorozeným myším a má dobrou ochrannou sílu.
Dvojitý mutant, nesoucí glutamovou kyselinu, jejíž kodon je GAA místo argininu v poloze 333, získaný výše uvedenou metodou z SAD Berne kmene a označený zde jako SAG2, byl uložen vCollection Nationale de Cultures de Microorganismes (C.N.C.M.) INSTITUT PASTEUR FRANCE, 9. července 1992 pod číslem 1-1238. Tento mutant obsahuje další mutace, jmenovitě rezistenci k monoklonální protilátce specifické pro antigenické místo 11, která slouží jako další markér kmene.
Vynález bude nyní detailněji popsán vzhledem k SAG2 mutantu, aniž by vynález byl tak omezován na tento samotný mutant.
Příklady provedení vynálezu
A - Testy genetické stability kmene během pasážování v mozcích mladých myší
Šest 4 dny starých myší bylo injektováno 103PFU SAG2. Když zvířata onemocněla (D6), byla usmrcena utětím hlavy. Bylo připraveno šest individuálních základních přípravků; každý základní přípravek byl titrován a 3 dospělé myši (kontrola patogenicity) a jedna mladá myš (příští pasáž) byly injektovány 30 μΐ 1/10 ředění. 6 mladých myší takto umožnilo provést 6 nezávislých sérií 3 pasáží.
-5CZ 283400 B6
Titry mozků v PFU/ml jsou uvedeny v tabulce:
Série
1. pas.
2. pas.
.pas.
| A | B | C | D | E | F |
| 5.1Ο7 | 1,5.107 | 107 | 106 | 106 | 106 |
| >5.107 | 2,5.107 | >5.107 | >5.107 | >5.107 | >5.10 |
| >5.107 | >5.1O7 | >5,107 | >5.107 | >5.107 | >5.10 |
Všichni dospělí (tj. 54 myší) injektovaných po 1., 2. nebo 3.pasážování přežívají, což vykazuje nepřítomnost reverze.
B - Chrániči síla SAG2
Myši byly injektovány intracerebrálně SAG2 mutantem a chránící síla tohoto mutanta byla stanovena intramuskulámím testováním 100 LD50 CVS kmene.
Získané výsledky jsou uvedeny na obr. 2, který je grafem, udávajícím chránící sílu (%) na ordinátě jako funkci množství injektovaného mutanta, vyjádřenou v PFU/myg (log). Byl opakován tentýž test s SK mutantem, obsahujícím lysin v poloze 333.
Bylo zjištěno, že chránící síla SK a SAG2 je 100 % při 104 PFU/myš a výše.
C - Patogenicita SAG2 při intracerebrálním podání
Myši byly injektovány SAG2 mutantem v dávkách v rozmezí od 10'0,5 až 106 PFU/myš a nebyla pozorována žádná mortalita během období 28 dnů.
Paralelně byl tentýž pokus proveden s virem SAD BERNE nebo SK mutantem.
Výsledky jsou uvedeny na obr. 3, který je grafem, uvádějícím % mortality (na ordinátě) jako funkci množství mutanta injektovaného na myš (na abscisa).
Bylo zjištěno, že SAG2 mutant nepůsobí žádnou mortalitu, zatímco SK mutant má slabou zbytkovou patogenickou účinnost.
D - Patogenicita SAG2 při intramuskulámím podání
Výše uvedený test byl opakován s tím rozdílem, že podání bylo intramuskulámí. Získané výsledky jsou uvedeny na obr. 4, který udává % mortality (na ordinátě) jako funkci dávky podané v PFU/myš (na abscise).
Je zřejmé, že SAG2 a SK mutant nevyvolává žádnou mortalitu.
Mutanty podle vynálezu mohou být podány jako živá vakcína jakýmkoliv způsobem obvykle používaným pro vakcinaci a zejména intramuskulámím nebo orálním podáním. Mutanty jsou obvykle ředěny ve farmaceuticky přijatelném, inertním vehikulu jako je isotonický roztok.
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Avirulentní vakcína proti vzteklině, vyznačující se tím, že obsahuje avirulentní mutant SAD kmene viru vztekliny, glykoprotein, který obsahuje v poloze 333 přirozeně se vyskytující aminokyselinu, jejíž kodon se liší od kodonu argininu alespoň dvěma nukleotidy.
- 2. Avirulentní vakcína podle nároku 1, vyznačující se t í m , že aminokyselinou v poloze 333 je glutamová kyselina.
- 3. Avirulentní vakcína podle jednoho z nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že mutantem je mutant SAD Berne kmene.
- 4. Avirulentní vakcína podle kteréhokoliv z nároků laž3, vyznačující se tím, že mutantem je mutant s ukládacím číslem CNCMI - 1238.
- 5. Dvojitý avirulentní mutant SAD kmene viru vztekliny, jehož glykoprotein obsahuje v poloze 333 přirozeně se vyskytující aminokyselinu, jejíž kodon se liší od kodonu arginininu dvěma nukleotidy.
- 6. Dvojitý avirulentní mutant podle nároku 5, kde aminokyselina v poloze 333 je glutamová kyselina.
- 7. Dvojitý avirulentní mutant podle jednoho z nároků 5 nebo 6, kterým je mutant SAD Berne kmene.
- 8. Dvojitý avirulentní mutant SAD Berne kmene, podle nároků 5 až 7 s ukládacím číslem CNCMI - 1238.
- 9. Způsob získání dvojitých mutantů podle kteréhokoliv z nároků 5až8, vyznačující se t í m , že zahrnuje:(i) výběr, z SAD kmene viru vztekliny, takových mutantů, které nejsou neutralizovány monoklonální protilátkou, neutralizující uvedený SAD kmen, ale neneutralizující TAG1 kmen, (ii) izolaci, sekvenováním 333 oblasti glykoproteinu mutantů vybraných ve stupni (i), mutanta, který obsahuje lysin v poloze 333, (iii) přípravu monoklonální protilátky, která neutralizuje jak uvedený SAD kmen tak mutant získaný ve stupni (ii), ale neneutralizuje TAG1 kmen a (iv) provedení druhého výběru z mutantů získaných ve stupni (i) za pomoci monoklonální protilátky připravené ve stupni (iii).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9208947A FR2693655B1 (fr) | 1992-07-20 | 1992-07-20 | Vaccin antirabique avirulent. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ140293A3 CZ140293A3 (en) | 1994-02-16 |
| CZ283400B6 true CZ283400B6 (cs) | 1998-04-15 |
Family
ID=9432070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ931402A CZ283400B6 (cs) | 1992-07-20 | 1993-07-14 | Avirulentní vakcina proti vzteklině |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5853735A (cs) |
| EP (1) | EP0583998B1 (cs) |
| AT (1) | ATE175877T1 (cs) |
| BG (1) | BG61066B1 (cs) |
| BR (1) | BR9302910A (cs) |
| CA (1) | CA2100591C (cs) |
| CZ (1) | CZ283400B6 (cs) |
| DE (1) | DE69323130T2 (cs) |
| FI (1) | FI933210A (cs) |
| FR (1) | FR2693655B1 (cs) |
| HR (1) | HRP931065B1 (cs) |
| HU (1) | HU219266B (cs) |
| MA (1) | MA22938A1 (cs) |
| MX (1) | MX9304349A (cs) |
| PL (1) | PL172853B1 (cs) |
| RO (1) | RO112582B1 (cs) |
| RU (1) | RU2128519C1 (cs) |
| SI (1) | SI9300392A (cs) |
| SK (1) | SK280104B6 (cs) |
| TN (1) | TNSN93083A1 (cs) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ID28968A (id) * | 1998-11-27 | 2001-07-19 | Akzo Nobel Nv | Mutan-mutan virus rabies yang dilemahkan dan stabil, serta kehidupan vaksin daripadanya |
| JP3471778B2 (ja) | 1999-06-03 | 2003-12-02 | 日本水産株式会社 | 三環性縮合複素環化合物、その製造方法および用途 |
| WO2001070932A2 (en) | 2000-03-23 | 2001-09-27 | Thomas Jefferson University | Genetically engineered rabies recombinant vaccine for immunization of stray dogs and wildlife |
| HUP0500722A2 (hu) * | 2001-07-20 | 2005-11-28 | The University of Georgia Research Foundation, Inc@Á | Attenuált veszettség vírus, a veszettség elleni vakcináláshoz és a központi idegrendszer génterápiájához egy nukleoprotein mutációval a foszforilezés helyén |
| DE60114420T2 (de) * | 2001-10-04 | 2006-07-13 | Centrum Voor Onderzoek In Diergeneeskunde En Agrochemie | Abgeschwächter Mutantenstamm eines Virus der Newcastle-Krankheit für eine in Ovo Impfung und dessen Benutzung |
| US7223584B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-05-29 | Thomas Jefferson University | Recombinant rabies vaccine and methods of preparation and use |
| EP1415665A3 (en) * | 2002-11-01 | 2004-06-30 | ID-Lelystad, Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheid B.V. | BHV5 mutants |
| RS51371B (en) | 2004-07-12 | 2011-02-28 | Thomas Jefferson University, Office Of Technology Transfer | MIXTURES OF RECOMBINANT RABIJES VIRUS |
| EP1945780B1 (en) | 2005-10-14 | 2015-09-16 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Rabies virus vector systems and compositions and methods thereof |
| FR2944292B1 (fr) | 2009-04-08 | 2013-08-23 | Sanofi Pasteur | Procede de purification du virus rabique |
| RU2694836C1 (ru) * | 2018-12-14 | 2019-07-17 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Способ получения антигена вируса бешенства для серологической диагностики |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2580176B1 (fr) * | 1985-04-12 | 1988-02-26 | Centre Nat Rech Scient | Vaccin antirabique avirulent |
| FR2633832B1 (fr) * | 1988-07-05 | 1991-05-31 | Virbac | Vaccin antirabique avirulent |
-
1992
- 1992-07-20 FR FR9208947A patent/FR2693655B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-07-14 CZ CZ931402A patent/CZ283400B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-07-14 FI FI933210A patent/FI933210A/fi not_active Application Discontinuation
- 1993-07-16 EP EP93401843A patent/EP0583998B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-16 AT AT93401843T patent/ATE175877T1/de active
- 1993-07-16 BG BG97964A patent/BG61066B1/bg unknown
- 1993-07-16 DE DE69323130T patent/DE69323130T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-19 RU RU93048174A patent/RU2128519C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-07-19 MX MX9304349A patent/MX9304349A/es unknown
- 1993-07-19 SK SK761-93A patent/SK280104B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-07-19 BR BR939302910A patent/BR9302910A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-07-19 HR HR9208947A patent/HRP931065B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1993-07-19 MA MA23238A patent/MA22938A1/fr unknown
- 1993-07-20 HU HU9302091A patent/HU219266B/hu unknown
- 1993-07-20 PL PL93299739A patent/PL172853B1/pl unknown
- 1993-07-20 CA CA002100591A patent/CA2100591C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-20 RO RO93-01010A patent/RO112582B1/ro unknown
- 1993-07-20 TN TNTNSN93083A patent/TNSN93083A1/fr unknown
- 1993-07-20 SI SI9300392A patent/SI9300392A/sl not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-01-17 US US08/785,616 patent/US5853735A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ140293A3 (en) | 1994-02-16 |
| BR9302910A (pt) | 1994-02-16 |
| FR2693655B1 (fr) | 1994-10-14 |
| MA22938A1 (fr) | 1994-04-01 |
| EP0583998B1 (fr) | 1999-01-20 |
| SK76193A3 (en) | 1994-06-08 |
| CA2100591A1 (en) | 1994-01-21 |
| FR2693655A1 (fr) | 1994-01-21 |
| DE69323130D1 (de) | 1999-03-04 |
| FI933210A0 (fi) | 1993-07-14 |
| HUT69961A (en) | 1995-09-28 |
| MX9304349A (es) | 1994-06-30 |
| BG97964A (bg) | 1994-04-29 |
| HRP931065B1 (en) | 1999-12-31 |
| US5853735A (en) | 1998-12-29 |
| PL172853B1 (pl) | 1997-12-31 |
| TNSN93083A1 (fr) | 1994-03-17 |
| EP0583998A1 (fr) | 1994-02-23 |
| HRP931065A2 (en) | 1995-02-28 |
| SI9300392A (en) | 1994-06-30 |
| SK280104B6 (sk) | 1999-08-06 |
| CA2100591C (en) | 2003-02-18 |
| RU2128519C1 (ru) | 1999-04-10 |
| BG61066B1 (bg) | 1996-10-31 |
| FI933210A (fi) | 1994-01-21 |
| HU219266B (en) | 2001-03-28 |
| DE69323130T2 (de) | 1999-06-17 |
| ATE175877T1 (de) | 1999-02-15 |
| RO112582B1 (ro) | 1997-11-28 |
| HU9302091D0 (en) | 1993-11-29 |
| PL299739A1 (en) | 1994-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tuffereau et al. | Arginine or lysine in position 333 of ERA and CVS glycoprotein is necessary for rabies virulence in adult mice | |
| Holland et al. | Antigenic variants of herpes simplex virus selected with glycoprotein-specific monoclonal antibodies | |
| Lafay et al. | Vaccination against rabies: construction and characterization of SAG2, a double avirulent derivative of SADBern | |
| US5275813A (en) | Methods and compositions for vaccinating against feline immunodeficiency virus | |
| Perry et al. | Role of CD4+ and CD8+ T cells in murine resistance to street rabies virus | |
| Eloit et al. | Identification of the pseudorabies virus glycoprotein gp50 as a major target of neutralizing antibodies | |
| US5853735A (en) | Avirulent anti-rabies vaccine | |
| Kuwert et al. | Rabies in the tropics | |
| Carrascosa et al. | African swine fever virus attachment protein | |
| EP0402029B1 (en) | Monoclonal antibodies for post exposure treatment of rabies | |
| Le Blois et al. | Oral immunization of foxes with avirulent rabies virus mutants | |
| Hamilton et al. | A humanized antibody against human cytomegalovirus (CMV) gpUL75 (gH) for prophylaxis or treatment of CMV infections | |
| Nitayaphan et al. | Neutralizing monoclonal antibodies to Theiler's murine encephalomyelitis viruses | |
| Matheise et al. | Antigenic analysis of the F protein of the bovine respiratory syncytial virus: identification of two distinct antigenic sites involved in fusion inhibition | |
| Shimizu et al. | Monoclonal antibodies with neutralizing activity to equine herpesvirus 1 | |
| Montaño-Hirose et al. | Protective activity of a murine monoclonal antibody against European bat lyssavirus 1 (EBL1) infection in mice | |
| US5196516A (en) | Pseudorabies virus vaccine | |
| WO1994020622A1 (en) | Polypeptide fragment capable of inducing neutralising antibodies against feline immuno-deficiency virus | |
| DK170393B1 (da) | Avirulent rabies-vaccine samt avirulent mutant af stammen SAD Berne | |
| Shibuta et al. | Differences in bovine parainfluenza 3 virus variants studied by monoclonal antibodies against viral glycoproteins | |
| Vincent et al. | Immunological relationships between rabies virus and rabies-related viruses studied with monoclonal antibodies to Mokola virus | |
| EP0920449B1 (en) | Morbillivirus-derived peptides | |
| Neutralizing | Novel Human Monoclonal Antibody | |
| Xuan et al. | Induction of antibodies to canine herpesvirus in mice by immunization with anti-idiotypic antibodies | |
| Coulon et al. | Molecular approach to virulence: isolation and characterization of avirulent mutants of rabies virus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20130714 |