CZ283055B6

CZ283055B6 - Bolus s plynulým uvolňováním účinný pro prodlouženou prevenci, ošetření nebo potlačení zamoření přežvýkavců nematody, akaricidy a endo- a ektoparazitickým hmyzem

Info

Publication number: CZ283055B6
Application number: CS90904A
Authority: CZ
Inventors: Irwin Boyden Wood; Richard Boardman Toothill; Joseph Charles Dietz
Original assignee: American Cyanamid Company
Priority date: 1989-02-28
Filing date: 1990-02-26
Publication date: 1997-12-17
Also published as: JP3033965B2; CS9000904A2; CN1035986C; HU901185D0; IE900699L; ES2062118T3; RU2014832C1; CA2010934C; JP2563139B2; PL163922B1; JPH02267351A; IL93226A; ATE103173T1; HUT53287A; DE69007515D1; DK0385106T3; EP0385106A1; ZA901497B; CN1045228A; IL93226A0

Abstract

Bolusový přípravek s plynulým uvolňováním obsahující profylakticky účinné množství sloučeniny vybrané ze skupiny, kterou tvoří LL-F28249 alfa, 23-/O-methyloxim/LL-F28249 alfa a jejich deriváty, který umožnuje způsob ochrany přežvýkavců po prodlouženou dobu proti zamoření nematody, akaricidy a endo- a ektoparazitickým hmyzem a který během této doby může také eliminovat počáteční populaci parazitů přítomných při ošetření. Řešení se také týká způsobu systemické kontroly zamoření přežvýkavců ektoparazitickým hmyzem orálním podáním bolusu s plynulým uvolňováním uvedeným zvířatům. Bolus obsahuje insekticidně účinné množství LL-F28249 alfa, 23-/O-methyloxim/LL-F28249 alfa nebo jejich derivátů, které se plynule uvolňují do bachoru ošetřeného zvířete v systemicky účinném množství LL-F28249 alfa, 23-/O-methyloxim/LL-F28249 alfa nebo jejich derivátů.ŕ

Description

Bolus s plynulým uvolňováním pro orální podání přežvýkavcům, účinný pro ochranu těchto zvířat po prodlouženou dobu před zamořením dospělci nebo larvami helmintů, endoparazitického hmyzu, ektoparazitického hmyzu a akaridy

Oblast techniky

Předložený vynález se týká bolusu s plynulým uvolňováním pro orální podání přežvýkavcům, účinného pro ochranu těchto zvířat po prodlouženou dobu před zamořením dospělci nebo larvami helmintů, endoparazitického hmyzu, ektoparazitického hmyzu a akaridy.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká bolusu s plynulým uvolňováním pro orální podání přežvýkavcům, účinného pro ochranu těchto zvířat po prodlouženou dobu před zamořením dospělci nebo larvami helmintů, endoparazitického hmyzu, ektoparazitického hmyzu a akaridy, který obsahuje hmotnostně 0,3 až 10 % LL-F28249a, 23-/0-methyloxim/LL-F28249a nebo jejich derivátů, 10 až 20 % glycerolmonostearátu, 3,0 až 10 % kamaubského vosku a 70,0 % až 85 % síranu bamatého nebo jemných částic barytu.

Ve výhodném provedení se předložený vynález týká bolusu s plynulým uvolňováním, který obsahuje hmotnostně 1,0 až 8,5 % 23-/O-methyloxim/LL-F28249a nebo LL-F282249a, 14 až 16% glycerolmonostearátu, 3,0 až 5,0 % kamaubského vosku a 70,0 % až 80 % síranu bamatého nebo jemných částic barytu.

Ve zvláště výhodném provedení se předložený vynález týká bolusu s plynulým uvolňováním, účinného pro potlačení nebo prevenci zamoření helminty u přežvýkavců, který obsahuje hmotnostně 0,3 až 1,0 % LL-F28249a nebo 23-/O-methyloxim/LL-F28249a, 14 až 16 % glycerolmonostearátu, 3,0 až 5,0 % kamaubského vosku a 78,01 % až 82,7 % síranu bamatého nebo jemných částic barytu.

Uvedené bolusy kontinuálně uvolňují do bachoru ošetřovaných zvířat po prodlouženou dobu terapeuticky nebo profylakticky účinné množství LL-F28249a, 23-/O-methyloxim/LL-F28249a nebo jejich derivátů.

Bylo zjištěno, že bolusy pro zvířata podle předloženého vynálezu jsou účinné pro provádění profylaktické kontroly parazitů, kteří napadají dobytek, a že taková kontrola je zjevně odvozena od kontinuální přítomnosti mimořádně nízkých hladin LL-F28249a nebo 23-/O-methyloxim/LL-F28249a. Je také možno pozorovat, že profylaktické ošetření přežvýkavců nejen zbavuje tato zvířata zamoření nematody, endoparazitickým hmyzem, ektoparazitickým hmyzem a akaridy, ale dále také významně zvyšuje přírůstky hmotnosti ve srovnání s neošetřenými zvířaty nebo zvířaty, ošetřenými jinými anthelmintickými, antibakteriálními nebo akaricidními činidly.

Profylaktické ošetření přežvýkavců /výjimečně nízkou denní dávkou/ působí překvapivě nejen při prevenci a/nebo kontrole nematodů, endo- a ektoparazitického hmyzu a akaridů, ale také výrazně zvyšuje hmotnostní přírůstky ve srovnání s neošetřenými zvířaty nebo zvířaty, ošetřenými jinými anthelmintickými, antibakteriálními nebo akaricidními činidly.

Příprava bolusů s kontrolovaným uvolňováním pro zvířata podle předloženého vynálezu se provede smísením /hmotnostně/ asi 0,3 % až 10 % účinné složky, asi 3,0 % až 10 % kamaubského vosku, asi 10 % až 20 % glycerolmonostearátu a asi 70 % až 85 % farmakologicky a farmaceuticky přijatelného plniva o vysoké hustotě, vybraného ze skupiny, tvořené síranem

- 1 CZ 283055 B6 bamatým a barytem, při teplotě pod teplotou tání vosku nebo směsi. Směs může být použita ve stupni odlévání jako taková, nebo může být tato směs peletizována nebo vločkována za použití extrudéru nebo vločkovacího zařízení a výsledné pelety nebo vločky mohou být použity pro odlévání.

Po míšení se směs vyjme a buď převede do peletizačního extrudéru, nebo přímo do vstřikovacího formovacího stroje. Jestliže je pro dosažení homogenity požadována peletizace, může být směs peletizována za použití třístupňového teplotního profilu, který zahrnuje stupeň plnění, prováděný při teplotě pod teplotou tání vosku, horký přechodný stupeň, prováděný při teplotě nad teplotou 10 tání vosku astearátu, a dávkovači stupeň, prováděný při teplotě pod teplotou tání vosku a stearátu, který je přímo spojený s matricí, opatřenou drticí deskou, matrice, opatřená drticí deskou, se udržuje na teplotě ve stejném rozmezí, jako je rozmezí teploty dávkovacího stupně.

Výsledný extrudovaný materiál se ochladí vzduchem a vyseká na pelety požadované velikosti. 15 Požadovaná homogenita může být také dosažena vločkováním směsi účinné složky, vosku a síranu bamatého nebo barytového plniva a pak hrudkováním nebo granulací vosku v běžně dostupném zařízení pro dosažení lepší homogenity.

Výsledné pelety a/nebo suchá směs materiálů se převedou do vstřikovacího formovacího 20 zařízení, které pracuje za použití třístupňového teplotního profilu, podobného tomu, který je používán při peletizaci; tj. stupeň plnění pod teplotou měknutí směsi, přechodný stupeň nad teplotou měknutí a stupeň vstřikování, při kterém je směs vstřikována do formy při teplotě pod teplotou měknutí směsi. Forma se ochladí pro ztuhnutí pilulek pro zvířata. Takto získané pilulky pro zvířata se pak z formy odstraní a balí.

Jestliže se výše uvedené postupy provádějí se síranem bamatým nebo jinými plnivy a přídavnými činidly, jsou preferovány jemné částice barytu. Použití barytových jemných částic má některé přednosti před použitím síranu bamatého stupně čistoty podle USP, například použití barytu zvyšuje tvrdost pilulek pro zvířata a snižuje stupeň eroze bolu /pilulky pro zvířata/. Bolus 30 tak vykazuje kontrolovanější stupeň eroze a lepší retardované uvolňování LL-F28245a nebo 23/O-methyloxim/LL-F28249a.

Během výroby směsí, obsahujících vosk, glycerolmonostearát a účinnou složku, bylo zjištěno, že použití jemných částic barytu v porovnáním se síranem bamatým stupně USP poskytuje méně 35 lepkavou a snadněji zpracovatelnou pevnou směs.

Příprava bolů podle předloženého vynálezu vstřikováním vyloučí nutnost kryogenního mletí pevné směsi nebo použití dalších lubrikantů, používaných často v jiných metodách, jako při lisování pevných látek do tablet. Další předností je to, že je vyloučeno recyklování částic, 40 zachycených na sítech s otvory o velikosti 0,149 mm. Lisování tablet vyžaduje materiál velikosti

0,149 mm, jelikož použití materiálu >0,149 mm vede k rychlejšímu uvolňování účinných složek z bolusu.

Ve výhodném způsobu přípravy LL-F28249a a 23-/O-methyloxim/LL-F28249a bolů podle 45 předloženého vynálezu vstřikováním se doba cyklu snižuje na asi 40 až 50 sekund. Plný výkon lze očekávat při udržování prováděcích podmínek pod 140 °C. Podmínky, vedoucí kvýše uvedeným skutečnostem, zahrnují: a/ zvýšení teplotního profilu, tj. okolí bubnu 90 °C teploty hubice; b/ dobu vstřiku 20 sekund; c/ vstřikovací tlak 70,3 kg/cm'; a d/ dobu chlazení 20 sekund. Tyto podmínky mají za následek teplotu tání mezi 89 až 90 °C, která je pod kritickou teplotou 50 rozkladu. Teplotně-časové studie ukázaly, že je možné kontinuální recyklování licími kanálky s rozváděcími kanálky vzhledem k vynikající stabilitě. Boly, připravené vstřikováním, mají vyšší hustotu, jsou tvrdší, a zdá se, že erodují nižší rychlostí /jak je stanoveno dezintegrací v methanolu/ než lité boly. Rheologické údaje ukazují, že lepší smáčitelnost barytu chrání účinnou složku před teplotním rozkladem.

Jelikož vstřikování je výhodnou metodou pro přípravu bolů podle předloženého vynálezu, bylo také prokázáno, že uvedené boly mohou být připraveny ručními vstřikovacími technikami. Bylo také třeba prokázat, že je možno výrazně měnit velikost bolů tak, aby byly získány velikosti, vhodné pro všechny velikosti a druhy přežvýkavců. Při použití ruční vstřikovací techniky se smísí monostearát a kamaubský vosk, taví se a zahřejí na 105 ± 5 °C. Ktéto tavenině se přidá účinná složka a smísí se na homogenní suspenze. Za kontinuálního míchání se přidá k této suspenzi baryt. V míchání se pokračuje až do získání homogenní krémovité směsi. Výsledný materiál se nalije do formy, nechá se zchladnout na teplotu místnosti a vyjme z formy. Velikost a hmotnost bolů je samozřejmě dána velikostí používaných forem.

Předložený vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které jej nikterak neomezují.

Příklad 1

Příprava inokula

Typické médium, použité pro růst různých stadií inokula, se připraví v následujícím složení:

dextróza dextrin extrakt z kvasnic NZ amin uhličitan vápenatý

1,0% 2,0 % 0,5 % 0,5 % 0,1 %

voda podle potřeby do 100 %

Médium se sterilizuje. 100 ml dávka tohoto sterilního média v láhvi se inokuluje myceliálním seškrabem Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus NRRL 15773 ze šikmého agaru. Médium se pak intenzivně třepe na rotační třepačce 48 až 72 hodin při 28 °C, získá se primární inokulum. Toto primární inokulum se pak použije pro inokulaci jednoho litru výše uvedeného sterilního média, které se pak kultivuje za aerobních podmínek při 28 °C po dobu 48 hodin, získá se sekundární inokulum.

Příklad 2

Fermentace

Připraví se fermentační médium následujícího složení:

dextrin sojový pepton melasa uhličitan vápenatý

1,0% 1,0% 2,0 % 0,1 %

voda podle potřeby do 100 %

Toto médium se sterilizuje a pak se jeho 30 litrová dávka inokuluje jedním litrem sekundárního inokula, připraveného postupem, popsaným v příkladu 1. Fermentace se provádí při 30 °C za průtoku sterilního vzduchu 30 litrů za minutu, tlaku 0,562 kg/cm² a míchání rotačním míchadlem při frekvenci otáčení 500 min'¹ po dobu 91 hodin, po této době byla příprava ukončena.

-3CZ 283055 B6

Příklad 3

Izolace LL-F28249a

Celkem 26 litrů rmutu, připraveného podle příkladu 2, se smísí s 1500 g diatomické hlinky a filtruje se. Myceliální koláč se promyje 5 litry vody a filtrát a voda se odloží. Myceliální koláč se jednu hodinu míchá s 10 litry methanolu, pak se filtruje a promyje 5 litry methanolu. Methanolový extrakt a methanol s promývání se spojí a odpaří na vodný zbytek objemu asi 1 až 2 litrů. Tento vodný zbytek se smísí s dvojnásobkem svého objemu methylenchloridu a míchá se půl hodiny. Methylenchloridová fáze se oddělí a pak se zahustí na sirup surového materiálu v množství 27 g.

Těchto 27 g surového materiálu se rozpustí ve směsi methylenchloridu a methanolu, zfiltruje se přes bavlnu a bezvodý síran sodný a pak se odpaří. Získá se 7,0 g oleje.

170 g silikagelu se rozmíchá v methylenchloridu s obsahem 12,5 % ethylacetátu a nalije se do sloupce o rozměrech 2,5 x 58 cm. Olej se rozpustí v methylenchloridu s obsahem 12,5 % ethylacetátu a nanese se na sloupec. Sloupec se vymývá stejnou směsí rozpouštědel. Mobilní fáze se pohybuje rychlostí 1,3 ml/minutu a shromažďují se 15minutové frakce. Po 10 frakcích se průtoková rychlost sníží asi na 0,5 ml/minutu, takže frakce 1 až 10 jsou 20 mililitrové, další asi 10 mililitrové a frakce 11 až 98 jsou asi 7 mililitrové. U frakce 99 se průtoková rychlost zvýší tak, že se za 10 minut získají 25mililitrové frakce. Shromáždí se celkem 105 frakcí. Tyto frakce se testují chromatografií na tenké vrstvě ve směsi ethylacetát:methylenchlorid /1:1/.

Frakce 55 až 62 se spojí a odpařením se získá 150 mg pevné látky, obsahující LL-F28249a a β.

150 mg pevné látky, obsahující LL-F28249a a β, se chromatografuje preparativní HPLC za použití sloupce s reverzní fází /Whatman C8, 2,2x50 cm/ a vytěsňováním 80%/obj./obj./ methanolu ve vodě. Průtoková rychlost je asi 10 ml/minutu a shromažďují se frakce po 2 minutách.

Frakce 58-69 se spojí, methanol se odpaří, přidá se terc.butanol a směs se lyofílizuje, získá se 60 mg čistého LL-F28249oc.

Tato sloučenina má následující vzorec:

-4CZ 283055 B6

Příklad 4

5-O-terc.butyldimethylsilyl-LL-F28249a

V 500 ml dichlormethanu se míchá 70 g LL-F28249a s 82,04 g imidazolu při 20 °C pod dusíkem. Pak se během 5 minut přidá 43 g terc.butyldimethylsilylchloridu ve 400 ml CH₂C1₂. Po hodině je reakce ukončena podle vysokotlakové kapalinové chromatografie /HPLC/, za použití 50 % CH3CN/5O % H₂O v gradientově eluci během 10 minut na koloně Whatman Partisil CCS/Cg při průtoku 8 ml/min. Přidají se další 3 g terc.butyldimethylsilylchloridu a po 3 hodinách směs obsahuje 92,3 % produktu, 0,3 % LL-F28249a a 1,16 % desilylovaného materiálu. Směs se zředí dichlormethanem a nalije se do 2 litrů vody. Oddělí se vrstva dichlormethanu. Vodná část se extrahuje 2 1 dichlormethanu a spojené organické vrstvy se suší síranem sodným. Dichlormethanová vrstva se odpaří ve vakuu, získá se 166 g titulní sloučeniny, která je identifikována hmotovou spektrometrií a nukleární magnetickou rezonancí /NMR/.

Příklad 5

5-O-terc.butyldimethylsilyl-23-oxo-LL-F2 8249a

V 5 litrech suchého dichlormethanu se míchá pod dusíkem 116 g 5-O-terc.butyldimethylsilyl LLF28249a a při 22 °C se přidá 540 gNaOAc, s následujícím přídavkem 172,5 g pyridiniumchlorchromátu /PCC/. Po jedné hodině se přidá dalších 15 g PCC, poněvadž reakce podle HPLC není ukončená. Po 2 hodinách se přidá dalších 10 g PCC a reakční směs se míchá celkem 5 hodin. Směs se nalije do 6 1 směsi led-voda a oddělí se dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje CH₂C1₂ a spojené vrstvy CH₂C1₂ se promyjí vodou a suší síranem sodným. CH₂C1₂ se odpaří ve vakuu, získá se 197,8 g surového produktu, který se rozpustí ve 2 litrech Et₂O a filtruje. Roztok Et₂O se promyje vodou /2 x 1000 ml/, suší se síranem sodným a odpaří se do sucha, získá se 60 g titulní sloučeniny, která je identifikována hmotovou spektrometrií a NMR spektroskopií.

Použití pyridiniumdichromátu místo pyridiniumchlorchromátu rovněž vede k titulní sloučenině.

Příklad 6

23-Oxo-LL-F28249a

V 1,5 1 MeOH se za zahřívání rozpustí 60 g 5-O-terc.butyldimethylsilyl-23-oxo-LL-F28249a a při 0 °C se přidá 30 g kyseliny p-toluensulfonové ve 300 ml MeOH. Směs se míchá 3 hodiny a nalije se do 6 litrů nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného v 6 litrech vody. Po míchání se směs extrahuje 4 1 EtOAc a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se nasytí NaCl a extrahuje se 2 x 6 1 EtOAc. První EtOAc vrstva se promyje nasyceným roztokem NaCl, spojí se s dalšími EtOAc extrakty a suší se síranem sodným. EtOAc se odpaří ve vakuu, získá se 148,1 g tmavého zbytku. Surový materiál se pak chromatografuje HPLC na 1200 g oxidu křemičitého za použití 1 % isopropanolu v CH₂C1₂ jako elučního činidla, monitoruje se ultrafialovým detektorem/254 nm filtr. Frakce 39 až 42 se spojí a odpaří se do sucha, získá se 12,65 g titulní sloučeniny, mající následující analýzu:

Pro C36H₅₀O₈: vypočteno: 70,79 % C, 8,25 % H, nalezeno: 70,33 % C, 8,31 % H.

Titulní sloučenina byla dále identifikována hmotovou spektrometrií a NMR spektroskopií.

- 5 CZ 283055 B6

Příklad 7

23-O-Methyloxím-LL-F28249a

Do 930 ml suchého dioxanu se při teplotě místnosti přidá 70 g 23-oxo-LL-F28249a, 11,8 g NaOAc, 11,8 CH₃ONH₂.HC1 a 2,1 ml HOAc. Směs se pod dusíkem míchá tři dny a když již není detegován HPLC žádný výchozí materiál, odpaří se za vakua 650 ml dioxanu. Zbytek se nalije do 5 litrů vody a produkt se extrahuje dichlormethanem /4x2 1/. Spojené extrakty se promyjí vodou, suší síranem sodným a odpaří do sucha. Zbytek se rozpustí v 1500 ml Et₂O, roztok se promyje vodou, suší síranem sodným a odpaří se do sucha. Získá se 11,84 g titulní sloučeniny, která se identifikuje hmotovou spektrometrií aNMR spektroskopií. Byla zjištěna následující elementární analýza:

Pro C₃₇H₅₃O₈N.1,5H₂O: vypočteno: 66,64 % C, 8,46 % H, 2,10 % N, nalezeno: 66,82 % C, 8,13 % H, 2,32 % N.

Tato sloučenina je představena následujícím vzorcem:

Příklad 8

Příprava bolů s plynulým uvolňováním

Boly se připraví tak, že mají následující složení:

Složky %

23-/O-methyloxim/LL-F28249a /89 % skuteč./ 0,34 glycerolmonostearát15,95 kamaubský vosk3,96 baryt79,75

Monostearát a kamaubský vosk se smísí, taví a zahřívají na 105 ± 5 °C. K této tavenině se přidá účinná složka a smísí se na homogenní suspenzi. K. této suspenzi se za nepřetržitého míchání přidá baryt. V míchání se pokračuje až do získání homogenní krémovité směsi. Vzniklý materiál se nalije do formy, nechá vychladnout na teplotu místnosti a vyjme z formy. Výsledné boly váží

-6CZ 283055 B6 mezi 51 a 53 gramy. Každý bolus je na obou koncích vypouklý a 19,05 mm silný při šířce 22,22 mm a délce 76,2 mm.

Specifikace pro glycerolmonostearát udávají, že tento materiál má být bílý prášek nebo zrnka, v podstatě prostá cizích látek. Velikost částic nemá přesáhnout 5 % na US standardním sítu č. 20 a má kyselost 2-3,0 a obsah vlhkosti ne větší než 1.5 %. Celkové monoglyceridy mají přesáhnout 40 %, ale volné kyseliny nemají přestoupit 1,5 %.

Kamaubský vosk má být žlutý prášek, v podstatě prostý cizích přísad. 100 % vosku by mělo být 2,0 - 6,0 a pryskyřičný materiál, rozpustný při 15 °C v acetonu, by neměl přesáhnout 5,0 %.

Baryt by měl být šedý prášek, v podstatě prosty cizích látek, o sypné hustotě asi 2,40 g/cm². Velikost částic by měla být taková, že na sítu č. 200 US standard se nezadrží více než 4 % materiálu a ne více než 80 % projde standardním sítem US č. 325. Chemická analýza pro přijatelný produkt je BaSO.», 90 - 94 %, SiO₂ 7 - 8 % a Fe₂C>3 0,1 až 0,2 %. Hustota bolů podle tohoto vynálezu má být asi mezi 2,35 a 2,6 ± 0,6.

Jiné bolové přípravky, připravené stejným způsobem jsou uvedeny v tabulce I.

Tabulka I

Bolové přípravky s pomalým uvolňováním

Složka	A	B	C	D	E	F	G	H
23-(O-methyloxim)LL-F28249 (89 % skut.) 23-(O-methyloxim)LL-F28249 (90 % skut.)	0,34	1,69	8,44	1,70	1,63	3,26	4,90	6,50
glycerolmonostearát	15,95	15,73	14,65	15,70	14,40	14,40	14,40	14,40
kamaubský vosk	3,96	3,93	3,66	3,90	3,60	3,60	3,60	3,60
baryt	79,75	78,65	73,25	78,70	80,37	78,74	77,10	75,50
	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0

Příklad 9

Stanovení erozní rychlosti bolů podle předloženého vynálezu

Rychlost uvolňování léčiva z bolů, označených A, B a C v tabulce I, se stanoví tak, že se nejprve stanoví, obsah sloučeniny 23-/O-methyloxim/LL-28249a v bolech, které budou podávány telatům, vybraným pro tento test. Tato analýza ukazuje, že boly, které byly hodnoceny, obsahují 0, 713, 1035 nebo 1260 mg 23-/O-methyloxim/LL-28249a. 50 až 53 gramové boly byly rozlomeny na polovinu, zváženy a podány orálně, jedna polovina bolu na každé tele. Ošetřená telata jsou pak označena a krmena a napájena způsoby, obvyklými při chování dobytka. Potrava pro všechny zvířata byla obvyklá pro dobytek.

V intervalech 70, 119 a 167 dní po podání byla čty ři zvířata z každé ošetřené skupiny pitvána, boly byly vyňaty a jejich povrch byl zkoumán, zda je drsný nebo hladký, a pak byly boly zváženy. Výsledky byly zaznamenány a vyhodnoceny. Tento postup se opakuje 119 dní po

- 7 CZ 283055 B6 ošetření ve druhé skupině zvířat z každého ošetření a pak se opakuje vždy 167 den se třetí skupinou zvířat z každého ošetření.

Výsledky, získané v každé ošetřené skupině, čtyři telata na skupinu, byly zprůměrovány a jsou přehledně uvedeny v tabulce II.

Tabulka II

Erosní rychlost bolů A, B a C z tabulky I

Průměrný	průměrná dny	průměrné	prům.	rychlost	prům. rychlost
obsah	počáteční odebrání	uvolňování 23-	hmotn.	uvolňování	mg/kg/den
23-(0-	hmotnost bolusu	(O-methyl-	zviř.	mg/kg/den	uvolňování
methyl-	bolusu	oxim)LL-	v období	23-(O-methyl-	23-(O-methyl-
oxim)-LL-	(mg)	F28249alfa	pokusu	oxim)LL-	oxim)LL-
F28249alfa		(mg)	(kg)	F28249alfa	F28249alfa
(mg)		(mg/zvíř./den)		za 1 den do	mezi dny
v bolusu				odebrání bolusu	70 až 119 a 119 až 167
713	26,7 70	6,07	113,4	0,054	-
713	26,7 119	4,95	119,6	0,041	0,028
713	27,1 167	3,45	122,4	0,028	0,0014
1035	26,2 70	8,59	121,8	0,071	-
1035	26,7 119	6,19	111,0	0,056	0,025
1035	26,1 167	5,31	129,7	0,041	0,0
1260	25,8 70	10,41	129,0	0,081	-
1260	25,6 119	6,67	113,3	0,059	0,012
1260	25,8 167	7,09	129,2	0,055	0,06

Příklad 10

Příprava bolů splynulým uvolňováním ajejich hodnocení při potlačování gastrointestinálních helmintů a klíšťů Boophilus microplus u hovězího dobytka

Bolové přípravky s plynulým uvolňováním, obsahující v podstatě 23-/O-methyloxim/LLF28249a, glycerolmonostearát, kamaubský vosk a baryt, se připraví smísením příslušných množství každé složky v mísiči, udržovaném na asi 80 °C po dobu 10 minut.

Po smísení se směs vyjme a přenese do peletizačního extrudéru a/nebo přímo do odlévacího zařízení.

Jestliže se provádí peletizace, směs se pak peletizuje za použití zvonovitě tvarovaného teplotního profilu, který má chlazenou plnicí sekci /50 až 60 °C/, horkou přechodovou sekci /100 až 110 °C/ a chlazenou dávkovači sekci /5 až 60 °C/ přímo spojenou s 3,175 mm matricí, opatřenou otvory o velikosti 0,84 mm a mřížkovou drticí deskou. Matrice je udržována při teplotě 55 až 60 °C. Výsledný vytlačený provaz se ochladí na vzduchu /proud vzduchu, přiváděný k otvorům matrice/ a řeže se za použití horkého nože na pelety, dlouhé 6,35 mm.

V případě přímého plnění do suchého mísiče může být použit plnicí systém, jako je Vibra-Screen pro dopravu materiálu do odlévacího systému, využívající horký dopravníkový systém a uzavírací hubice. Podmínky pro omdlévání by měly mít zvonovitý teplotní profil, popsaný výše pro peletizační

-8CZ 283055 B6 operaci, tj. doba plnění /10 až 20 s/, doba odlévání /10 až 20 s/, tlak při vstřikování 70,3 kg/cm³, a doba zdržení /5 až 10 s/. Výsledné boly váží asi 51 g každý a mají hustotu asi 2,5 g/cm³ a tvrdost, měřenou na Delamar-lisu, asi 77 až 80 kg.

Boly, připravené touto metodou, jsou uvedeny dále.

Bolové přípravky, připravené vstřikováním.

Složka	% hmotnostní
bolí	J	K	L
23-/O-methyloxim/LL-F28249a	0,0	3,24	4,84	6,46
glycerolmonostearát	14,40	14,40	14,40	14,40
kamaubský vosk	3,60	3,60	3,60	3,60
baryt	82,00	78,76	77,16	75,54

hmotnost v gramech

23-/O-methyloxim/LL-F28249a	0	28,49	42,15	26,49
glycerolmonostearát	125,28	125,28	125,28	59,04
kamaubský vosk	31,32	31,32	31,32	14,76
baryt	713,60	685,21	671,29	309,71

Pro vyhodnocení výše uvedených přípravků při hubení helmintů gastrointestinálního traktu a zamoření hovězího dobytka klíšti, byly provedeny následující testy.

Padesát dvě telata, ustájená a na pastvě /mladší jednoho roku/ byla zvolena pro hodnocení bolů, popsaných výše a označených I, J, K a L.

Boly obsahují 0,713, 1035 nebo 1260 mg 23-/O-methyl-oxim/LL-F28249a na 1/2 bolusu o hmotnosti asi 25 gramů.

Během týdne před ošetřením se telata zamoří dvěma různými počty vajíček nematodů /odděleně/ a odhadne se stupeň zamoření klíšti. Zvířata se opatří ušní visačkou, zváží a rozdělí se do čtyř ošetřených skupin, 12 telat na skupinu. Pátá skupina se také opatří ušními visačkami /4 zvířata/ a zváží. Tato skupina se použije pro studium možnosti znovuzavedení bolů, získaných po nekropsii jiných zvířat.

Různé počty vajíček nematodů se podávají jeden týden, dva týdny, jeden měsíc a měsíčně po dobu 5 měsíců, nebo dokud není další adekvátní kontrola.

Získané údaje jsou uvedeny v tabulkách III a IV dále, je zřejmé, že kontrolní zvířata, neošetřená po prvních 67 dní pokusu, jsou velmi silně zamořena dávkou v této periodě pokusu. Tato zvířata se pak ošetří levamisolem a zamoření nematody se velmi výrazně sníží. Zvířata, která dostala boly podle předloženého vynálezu, obsahující 713 až 1260 mg 23-/O-methyloxim/LL-F28249a, jsou v podstatě prosta zamoření nematody od 28 dní do 167 dní po ošetření.

Klíšti se odstraní během jednoho týdne po ošetření boly, obsahujícími 1035 mg až 1260 mg 23/O-methyloxim/LL-F28249a. Zvířata, která dostala boly, obsahující 713 mg účinné složky, se zbavila klíšťů za dva týdny. Kontrolní zvířata byla ponořena do roztoku, působícího proti klíšťům, pro prevenci mortality. Ošetřená zvířata jsou prosta klíšťů po dobu 97 dní až do období chladného počasí, ve kterém se kontrolní zvířata zbaví zamoření klíšti.

-9CZ 283055 B6

Tabulka III

Hodnocení bolů, obsahujících 23-(O-methyloxim)LL-F28249)alfa, pro prodloužené potlačení zamoření hovězího dobytka nematody

Dny po ošetření	0 mg bolus	713 mg bolus	1035 mg bolus	1260 mg bolus
zvířata WB/T1	prům. EPG	zvířata WB/T1	prům. EPG	zvířata WB/T1	prům. EPG	zvířata WB/T1	prům. EPG
0	12/12	519	12/12	873	12/12	552	12/12	381
28	11/11	1041	12/12	0	12/12	0	12/12	0
44	11/11	1465	12/12	0	12/12	0	10/10	0
65	10/10^x	2043	12/12	0	12/12	0	10/10	0
97	7/7	108	8/8	0	8/8	0	6/6	0
116	ΊΠ	308	7/8	25	8/8	0	6/6	0
140	3/3	317	4/4	25	5/5	0	3/3	0
167	2/3	717	4/4	0	3/5	0	1/3	100

WB/T1 = s boly/zvířata celkem x kontrolní zvířata, ošetřená levamisolem (3,75 mg/kg) po 67 dnech pokusu

EPG = vajíčka nematodů na gram výkalů

- 10CZ 283055 B6

Hodnocení bolů, obsahujících 23-(O-methyloxim)LL-F28249alfa při prodloužené kontrole populace nematodů u hovězího dobytka c

>N

T in

O <

o 'X o <

t—

G z Z) A <

o u

ω H

C/3

O 'X <

ζΛ u z o <

Ό o Q.

<U c o

o o o o o o o o

Q.

ζΛ O

Ό

Γ· o

ID o \O

ID

CN Γo

I o m

O O O Ofi o o o cn o o rT ó \D

CN σχ σχ θ' o o CN m cn id i

O \O

*D

o.

ΙΛ O Ό

Γ xO xO l o o o ’Τ *D i

O o 00 00 oó 00

rf

O O O o

	cn cn
CN	CN	un
	CN m	CN
σχ		cn cn ’Τ

o o o o

O 00

O oó — cr θ' ID cr m

CN

O O O O O O

O O o o


O		ID
O	·*τ	r-
		r· xC

_oCN O CT —

rn o r- o cr — rn m <σ

I cn m o o

CN *D

Γ

<n

Q\ σχ rxo ID σ» CN

Γ xO xO cr »D m cn O Tř cr

O ó — o

CN cn id m oo σχ οχ σχ

cn cn rf m cn. rn m rn

7d JQ cn m

CN «

CO ε yi

J3

O X

* *

O

O *D xO cn Dl O cn ♦ — ♦ r- o o o CN <D CD O cn * — * r- o

o r-

ΓΌ

Příklad 11

Hodnocení bolů s pomalým uvolňováním pro profylaxi psoroptického svrabu hovězího dobytka

Vstřikovací technikou, popsanou v příkladu 10, se připraví boly, obsahující v 1/2 bolusu 23-/0methyloxim/LL-F28249a. Připravené boly mají následující složení:

Složky	% hmotnostní	gramy
23-/O-methyIoxim/LL-F28249a	1,53	1,61
glycerolmonostearát	15,73	16,52
kamaubský vosk	3,93	4,12
baryt	78,81	82,75

100,00 105,00

Hovězímu dobytku, ošetřovanému boly, se podá polovina 50 gramového bolu, obsahujícího 750 mg 23-/0-methyloxim/LL-F28249a.

Pro pokus se vyberou jalovice. Zvířata se umístí na suchý pozemek a započne se s ozdravovacím programem pro ochranu před běžnými zdravotními problémy. Zvířata se označí ušní visačkou a umístí do stájových ohlávek, aby se zabránilo zamoření svrabem olizováním.

Živí roztoči se pak přenesou na každé zvíře. Přenos se provede přenesením seškrabu z těžce zamořených dárců na pokusná zvířata. Ze zvířat se vy berou náhodně čtyři nezamořená zvířata, která nebudou umístěna ve stodole. Tato čtyři zvířata jsou ošetřena boly a infikována o jeden týden později. Na každé z těchto zvířat se umístí roztoči, šestkrát během příštích dvou týdnů.

Dbá se na to, aby nedocházelo k přenosu infekce mezi zvířaty. Seškrab se provádí v týdenních intervalech a hodnotí se tentýž den.

Spočítají se roztoči za použití 20-30x dělicího mikroskopu. Bolus, obsahující 375 mg, chrání před psoroptickým svrabem hovězí dobytek, který dostal šest silných dávek roztočů.

Získané údaje jsou uvedeny v tabulce V.

- 12CZ 283055 B6

Tabulka V

Průměrný počet živých roztočů (Psoroptes ovis) na zvířata

Ošetření	1 den před ošetřením	8	16	22	Dny po ošetření
29	34	43	47	56
bolus, obsahující	XX	-	-	0	0	0	0	0	0
375 mg 23-/0-
methyloxim/LL-
F28249alfa
	XX	-	-	0	0	0	0	0	0
	XX	-	-	0	0	0	0	0	0
	XX	-	-	0	0	0	0	0	0
neošetřená	274	130	421	757	285	464	zemřelí
kontrola
	123	149	50	403	218	zemřelí
	69	66	39	20	6	27	14	16	14
	1	6	3	9	1	5	9	16	16

XX = skupina s boly nebyla zamořena během 1 týdne po počátku testu; pak bylo zjištěno, že kolonie roztočů se nemohou na zvířatech ošetřených boly vytvořit. Hodnoty jsou stanoveny ze vzorků 2 seškrabů z jednoho zvířete.

= kolonie roztočů se nemohou vytvořit.

Příklad 12

Hodnocení bolů, obsahujících 23-/0-methyloxim/LL-F28249a, na veš savou a stav výkalů

Boly, použité v tomto testu, byly připraveny vstřikovací technikou, popsanou v příklad 10. Připravené boly mají následující složení.

Bolus I II III

Složky	% hmotn.	gramy	% hmotn.	gramy	% hmotn.	gramy
23-/O-methyloxim/LL-	1,62	6,64	3,24	28,49	4,84	42,15
F28249a
glycerol-monostearát	14,40	59,04	14,40	125,28	14,40	125,28
kamaubský vosk	3,60	14,76	3,60	31,32	3,60	31,32
baryt	80,38	329,56	78,76	685,21	77,16	671,29

Pro hodnocení byly boly rozlomeny na polovinu.

Bolus I obsahuje 375 mg AI/půl bolusu

Bolus II obsahuje 750 mg AI/půl bolusu

Bolus III obsahuje 1125 mg AI/půl bolusu

AI = účinná složka

Před ošetřením byla všechny zvířata zvážena, opatřena ušními visačkami a prohlídkou u nich byly zjišťovány vši. Počet vší byl odhadnut na základě vizuální prohlídky 2-3 cm ochlupené části každého z následujících míst: uší, očí, čenichu, tlamy, hrudi, laloku, zad, zadku, ocasního konce a beder. Zvířata byla náhodně rozdělena do skupin po pěti, tři skupiny byly ošetřeny a jedna byla kontrolní. Skupiny I, II a III obdržely boly, obsahující pokusné sloučeniny, skupina 1 byla neošetřena. Všechna zvířata byla uzavřena na 2 akrových pozemcích a podle potřeby krmena

- 13 CZ 283055 B6 vojtěškou a minerálními přísadami. Vši na zvířatech byly odhadnuty po 7, 14, 28 dnech a vždy po dvou měsících v průběhu testu.

Odhad vší byl proveden tak, že zvířata byla držena v ohlávce za umělého osvětlení.

Vzorky výkalů /asi 10 g/ byly zkoumány na obsah nematodů 7., 28. den a každý měsíc později. Vzorky byly uchovány při -10 °C.

Všechny boly, použité při ošetření /375 mg, 750 mg a 1125 mg/, výrazně snížily počet vší Solenoptes capillatus 1 týden po ošetření.

Kompletní potlačení vši savé /Solenoptes capillatus/ u dobytka, ošetřeného boly, bylo dosaženo po 100 dnech.

Příklad 13

Hodnocení bolů s pomalým uvolňováním pro potlačení Hypoderma spp. u hovězího dobytka v prodloužené době

Boly, použité při tomto hodnocení, byly připraveny vstřikováním podle příkladu 10. Hodnocené boly mají následující složení:

Složky	hmotn.	gramy
23-/O-methyloxim/LL-F28249a	1,6	3,2
glycerolmonostearát	14,4	28,8
kamaubský vosk	3,6	7,2
baryt	80,4	160,8

100,0 200,0

V těchto testech byla narozená telata /nerozdělená podle pohlaví/, zamořená prvním instarstadiem Hypoderma spp., náhodně rozdělena do čtyř skupin po 4 telatech. Jedna skupina slouží jako neošetřená kontrola, jiná skupina dostala polovinu 50 až 54 gramového bolu, obsahujícího 375 mg 23-/O-methyloxim/LL-F28249a. Polovina bolusu se telatům podává kuličkovou pistolí.

Účinnost po podání se stanoví vizuálním hodnocením a palpací hřbetu telat po týdnech na přítomnost střečků. Ošetření 23-/O-methyloxim/LL-F28249a boly je plně účinné vůči Hypoderma spp. Žádné larvy nebyly zjištěny na zádech telat, která dostala 375mg boly, obsahující výše uvedenou sloučeninu během 72 dní pokusu; nicméně neošetřená kontrolní zvířata měla průměrně 12 /rozsah 4-19/ larev/tele při maximu počtu 58. den, a 8,8 po 72 dnech.

Příklad 14

Hodnocení bolů, obsahujících od 75 do 1875 mg LL-F28249a pro prodloužené potlačovaná nematodů a vší u hovězího dobytka

Boly pro hodnocení byly připraveny následovně:

Monostearát a kamaubský vosk byly smíseny, roztaveny a zahřátý na 105 ± 5 °C. K této tavenině se přidá účinná látka a promísí se na homogenní suspenzi. K této suspenzi se za plynulého míchání přidá baryt. V míchání se pokračuje až do získání homogenní krémovité směsi. Výsledný materiál se nalije do formy, nechá se vychladnout na teplotu místnosti a vyjme se

- 14 CZ 283055 B6 z formy. Výsledné boly váží mezi 51 a 53 gramy. Každý bolus je na obou koncích zaoblený a silný 19,05 mm, široký 22,225 mm a dlouhý 76,2 mm.

Polovina bolusu /hmotnost 25,5 až 27,0/ se podá telatům na pastvě. Účinnost se sleduje během 120 dní stanovením počtu vnitřních a vnějších parazitů.

Složení	% hmotn.	g	% hmotn.	g	% hmotn.	g
LL-F28249a	0,34	5,1	1,69	25,35	8,44	126,6
glycerol-monostearát	15,95	239,25	15,73	235,95	14,65	219,75
kamaubský vosk	3,96	59,40	3,93	58,95	3,66	54,90
baryt	79,75	1196,25	78,65	1178,75	73,25	1098,75

Bolus I obsahuje 75 mg LL-F28249a na polovinu bolusu, bolus II obsahuje 375 mg LL-F28249a na polovinu bolusu a bolus III obsahuje 1875 mg LL-F28249a na polovinu bolusu.

V tomto testu se zvířata na pastvě rozdělí náhodně do skupin po 5 zvířatech a označí ušními visačkami. Výkaly všech zvířat se zkouší před započetím testu za účelem stanovení průměrného počtu vajíček nematodů na gram výkalů testovaných zvířat. U všech telat bylo zjištěno mezi 2700 a 3000 vajíček na gram výkalů. Test začal tím, že všechna zvířata dostala polovinu bolusu o hmotnosti asi 25 až 27 gramů. Kontrolní zvířata dostala 3,75 mg/kg tělesné hmotnosti levamisolu na počátku testu a 62. den; jiné ošetřované skupiny dostaly polovinu bolů I, II nebo III, popsaných výše, obsahujících 75, 375 nebo 1875 mg LL-F28249a. Zvířata byla pak umístěna do individuálních ohrazených pastvin a v určitých intervalech po 120 dní testována. 7., 16., 32., 62., 91. a 106. den po ošetření byly shromážděny výkaly každého zvířete a byl stanoven průměrný počet vajíček nematodů na gram výkalů. Získané údaje dokazují, že 75mg bolus snižuje počet vajíček nematodů a zatížení nematody na nižší hladinu, než dvě ošetření levamisolem. 375mg a 1875mg boly poskytly 99,9% snížení nematodových vajíček během jednoho týdne a poskytly 99,9% snížení nematodů. Vynikající hmotností přírůstky u zvířat, která dostala 375 a 1875mg boly, jsou vysoce výrazné. Hmotnost zvířat, která dostala 75mg bolus, byla ekvivalentní kontrolnímu pokusu s levamisolem.

Tabulka VI

Hodnocení bolů, obsahujících 75, 375 a 1875 mg LL-F28249alfa, pro potlačení nematodů u hovězího dobytka

Průměrný počet vajíček nematodů na gram výkalů

Ošetření	x zvířat	dny	0 7	62	119
(doporučená dávka)	10	(2850)	5 (99,9 %)	755	146
levamisol
den 0 a den 62
bolus I (75 mg)	10	(2850)	940 (67 %)	205	5
bolus II (375 mg)	10	(2850)	0(100%)	0	5^X
bolus 111 (1875 mg)	10	(2850)	0(100%)	0	5

x 1 zvíře 25 EPG xx 6 zvířat s bolusem mělo 0 EPG; 4 zvířata bez bolusu měla pozitivní EPG.

- 15 CZ 283055 B6

Tabulka VII

Účinnost LL-F28249 bolusu vůči nematodům u hovězího dobytka, % kontroly nematodů

Ošetření x dobytka Haemonchus Ostertagia Cooperia Oesophlogostonum

75 mg bolus	10	92	100	0	25
375 mg bolus	10	100	100	97	99+
1875 mg bolus	10	100	100	99+	100
levamisol	10	2325	729	5937	117

kontrola prům. počet červů (odčerveno 57 dní předtím)

Tabulka VIII

Hmotností přírůstek hovězího dobytka, ošetřeného levamisolem 3,75 mg/kg v den 0 a 62, a boly, obsahujícími LL-F28249alfa a uvolňujícími 0,37 mg/zvíře/den, 1,96 mg/zvíře/den nebo 3,76 mg/zvíře/den LL-F28249alfa

Ošetření________________________________ levamisol (3,75 mg/kg na den 0 a den 62) bolus I 75 mg (0,0031 mg/kg/den) bolus II 375 mg (0,016 mg/kg/den) bolus III 1875 mg (0,031 mg/kg/den)

Průměrný hmotností přírůstek (kg) ode dne 0

dny 7	62	110
7	0	21
5	7	24
6	11	37
8	15	40

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Bolus s plynulým uvolňováním pro orální podání přežvýkavcům, účinný pro ochranu těchto zvířat po prodlouženou dobu před zamořením dospělci nebo larvami helmintů, endoparazitického hmyzu, ektoparazitického hmyzu a akaridy, vyznačující se tím, že obsahuje hmotnostně 0,3 až 10 % LL-F28249a, 23-/O-methyloxim/LL-F28249a nebo jejich derivátů, 10 až 20 % glycerolmonostearátu, 3,0 až 10 % kamaubského vosku a 70,0 % až 85 % síranu bamatého nebo jemných částic barytu.
2. Bolus s plynulým uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje hmotnostně 1,0 až 8,5 % 23-/O-methyloxim/LL-F28249a nebo LL-F282249a, 14 až 16% glycerolmonostearátu, 3,0 až 5,0 % kamaubského vosku a 70,0 % až 80 % síranu bamatého nebo jemných částic barytu.

- 16CZ 283055 B6
3. Bolus s plynulým uvolňováním, účinný pro potlačení nebo prevenci zamoření helminty u přežvýkavců, podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje hmotnostně 0,3 až 1,0 % LL-F28249a nebo 23-/O-methyloxim/LL-F28249a, 14 až 16 % glycerolmonostearátu, 5 3,0 až 5,0 % kamaubského vosku a 78,01 % až 82,7 % síranu bamatého nebo jemných částic