CZ282091B6

CZ282091B6 - 2,2-Dialkyl-2H-1-benzopyrany a 2,2-dialkyl-3,4-dihydro-3-hydroxy-2H-1-benzopyrany

Info

Publication number: CZ282091B6
Application number: CZ941767A
Authority: CZ
Inventors: Paul W. Manley
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1992-11-25
Filing date: 1992-11-25
Publication date: 1997-05-14
Also published as: CZ176794A3

Abstract

2,2-Di(C.sub.1-5.n.alkyl)-6-(pyridin-4-yl)-2H-1-benzopyrany a trans-2-2-di(C.sub.1-5.n.alkyl)-3,4-dihydro-3-hydroxy-6-(pyridin-4-yl)-2H-1-benzopyrany, například sloučeniny obecného vzorceI, kde R.sub.1.n.=R.sub.2.n.=H, alkyl, hydroxyalkyl nebo alkoxyalkyl, přičemž jeden z nich je jiný než H,R.sub.3.n.=například 2-piperidinonová skupina, R.sub.4.n.=H a R.sub.5.n.=OH nebo R.sub.4.n. + R.sub.5.n. = další vazba, a R.sub.6.n., R.sub.7.n. jsou alkyly a R.sub.8.n. je H nebo alkyl, a jejich N-oxidy, estery a soli, způsoby jejich přípravy a jejich použití pro přípravu léčiv a jejich použití jako léčiv, například jako látek způsobujících otvírání K.sup.+.n.-kanálků, bronchodilátorů a látek působících profylakticky na astma.ŕ

Description

6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany, způsob jejich přípravy, farmaceutické prostředky, které je obsahují, a jejich použití

Oblast techniky

Vynález se týká nových 2,2-dialkyl-6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranů a trans-2,2-dialkyl-3,4dihydro-3-hydroxy-6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranů a dále jejich solí, esterů aN-oxidů, způsobů jejich přípravy, jakož i jejich použití jako léčiv, a farmaceutických prostředků, které tyto sloučeniny obsahují.

Dosavadní stav techniky

Dokumenty EP 0 488 301 a EP 0 346 724 popisují rozsáhlou řadu benzopyranových a chromanových derivátů. Žádný z těchto dokumentů však nepopisuje ani nenavrhuje žádné benzopyranové deriváty, nesoucí v poloze 6 benzopyranového jádra substituovaný pyridylový zbytek.

Podstata vynálezu

Podstatou předloženého vynálezu v jeho nejširším aspektu jsou:

1. 2,2-dialkyl-6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany nebo trans-2,2-dialkyl-3,4-dihydro-3hydroxy-6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany, kde všechny alkylové skupiny obsahují 1 až 5 atomů uhlíku, přičemž tyto sloučeniny mají karboxamidovou skupinu v poloze 4 a skupina pyridin-4-yl je substituována v poloze 2 a/nebo 3 jedním nebo dvěma substituenty, vybranými ze skupiny, zahrnující alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a alkoxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové i alkylové části, nebo jejich N-oxidy, nebo fyziologicky hydrolyzovatelné a fyziologicky přijatelné estery těchto benzopyranů nebo N-oxidů, nebo soli s kyselinami nebo kvartemí amoniové soli těchto benzopyranů, N-oxidů nebo esterů.

Alkylové skupiny nebo části sloučenin, definovaných v odstavci l, mohou mít rozvětvený nebo přímý řetězec. Výhodné významy pro substituenty v poloze 2 benzopyranového jádra, jakož i v poloze 2 a/nebo 3 pyridinylové skupiny jsou uvedeny níže u sloučenin obecného vzorce I u skupin Rí a R₇ a Ri a R₂.

Jak bude dále popsáno, sloučeniny podle vynálezu, například jak jsou definovány v odstavci 1 výše, mají účinek na otvírání draslíkových (K⁺) kanálků /viz například Cook aj., Potassium Chanels: Structure, Classification, Function and Therapeutic Potenciál, vyd. N. S. Cook, Ellis Horwood, Chichester (1990), str. 181 až 255/. Benzopyranové deriváty, které jsou substituovány v poloze 4 karboxamidoskupinou a které se vyznačují účinkem na otvírání K*-kanálků, jsou rozsáhle po psány v literatuře a představují významnou a zřetelnou třídu sloučenin. Karboxamidová část ve sloučeninách podle vynálezu může zahrnovat jakékoliv z těchto známých a v literatuře s ohledem na otvírání K⁺-kanálků popsaných benzopyranů, včetně N-substituovaných, například cyklických, karboxamidových částí. Výhodné karboxamidové části, pokud jde o sloučeniny podle vynálezu, jsou skupiny vzorce -N(R₉)-COR|o, jak jsou definovány níže.

Je třeba si uvědomit, že benzopyranové jádro sloučenin, definovaných v odstavci 1, může obsahovat substituenty kromě těch, které již byly specificky definovány. Obzvláště mohou byl například substituovány v poloze 7 alkylovou skupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, zejména v poloze 7 methylovou skupinou, například jak bude uvedeno u sloučenin obecného vzorce I.

- 1 CZ 282091 B6

Podle vynálezu jsou výhodné 2,2-dialkyl-3,4-dihydro-3-hydroxy-6-(pyridin-4-yl)-2H-lbenzopyrany, kde alkylové skupiny obsahují 1 až 5 atomů uhlíku, a/nebo jejich N-oxidy, estery a soli, jak jsou definovány v odstavci 1 výše. 3-Hydroxyskupina a 4-karboxamidová skupina v těchto sloučeninách jsou v trans-konfiguraci, jak je uvedeno v odstavci 1. Z této skupiny sloučenin jsou obvykle výhodné (3S,4R)-enantiomery ať v čisté nebo v podstatě čisté formě nebo ve formě isomemí, například racemické, směsi, jak bude dále uvedeno u sloučenin obecného vzorce I.

Podle ještě specifičtějšího aspektu jsou podstatou vynálezu:

2. Sloučeniny obecného vzorce I

(I), kde

Ri a R₂ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku nebo alkoxyalkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové i alkylové části, přičemž alespoň jeden ze substituentů Rj a R₂ je jiný než atom vodíku, r₃ je skupina obecného vzorce -N(R₉)-CORio, kde R₉ je atom vodíku a Rio je pyridyl, nebo R₉a R₁₀ spolu dohromady tvoří 1,3-butadienylenovou skupinu, nebo znamenají skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n- nebo -(CH₂)_ra

kde n je celé číslo od 3 do 5 včetně a m je 1 nebo 2,

Rj je atom vodíku a Rj je hydroxyskupina v trans poloze vzhledem k Rj, nebo

R4 a Rj spolu dohromady znamenají další vazbu, jak je naznačeno tečkovanou čárou,

Rů a R₇ jsou nezávisle na sobě alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, a

Rg je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, nebo jejich N-oxidy, nebo fyziologicky hydrolyzovatelné a fyziologicky přijatelné estery těchto sloučenin nebo Noxidů, nebo soli s kyselinami nebo kvartemí amoniové soli těchto sloučenin, N-oxidů nebo esterů.

Alkylové skupiny, jako R_b R₂, Rs, R₇ a Rg, jakož i alkylové části hydroxyalkylových a alkoxyalkylových skupin, jako Ri a R₂, mohou mít rozvětvený nebo přímý řetězec.

Alkoxyalkylové skupiny jsou s výhodou alkoxymethylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxyskupině, zejména methoxymethylová skupina. Výhodnou hydroxyalkylovou skupinou je hydroxymethylová skupina. R« aR? znamenají oba s výhodou methylovou skupinu. R₈ je s výhodou atom vodíku nebo methylová skupina, nej výhodněji atom vodíku.

Ve výhodné skupině sloučenin obecného vzorce I má Ri jakýkoliv z významů, uvedených u obecného vzorce I a R? je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku (zejména methylová skupina), s výhodou atom vodíku.

V další výhodné skupině sloučenin obecného vzorce I v substituentu R₃ je R₉ atom vodíku a R₁₀pyridylová skupina (zejména 3-pyridyl), nebo R₉ a R_]0 spolu dohromady tvoří 1,3butadienylenovou skupinu, trimethylenovou skupinu nebo tetramethylenovou skupinu. Nej výhodněji tvoří R₉ a Ri₀ spolu dohromady tetramethylenovou skupinu.

Výhodně je R₄ atom vodíku a R₅ hydroxyskupina.

Benzopyrany podle vynálezu, například sloučeniny obecného vzorce I, tvoří N-oxidy, například na atomu dusíku 6-pyridinylové skupiny. Tyto N-oxidy mají srovnatelnou účinnost (jak bude níže popsáno) a snášitelnost se základními sloučeninami a tvoří také součást předloženého vynálezu.

Výrazem fyziologicky hydrolyzovatelný a fyziologicky přijatelný ester se rozumí ester, jehož hydroxyskupina (například ve vzorci I hydroxyskupiny R₅ a/nebo hydroxylové části jakékoliv hydroxyalkylové skupiny jako Ri a/nebo R₃) je esterifikována a který' je hydrolyzovatelný za fyziologických podmínek za vzniku kyseliny, která je sama o sobě fyziologicky snášitelná v dávkách, které se mají podávat. Je třeba si uvědomit, že tyto estery jsou proformou léku běžného typu a že mají srovnatelnou účinnost a snášenlivost k základním sloučeninám. Jako příklady takových esterů lze uvést například acetáty.

Soli s kyselinami například sloučenin obecného vzorce I, jejich N-oxidy ajejich definované estery zahrnují soli jak s anorganickými tak s organickými kyselinami. Tyto soli mají také srovnatelnou účinnost jako volné sloučeniny, N-oxidy a estery. Farmaceuticky přijatelné soli s kyselinami pro farmaceutické použití podle předloženého vynálezu, jak bude zde popsáno, zahrnují například soli s kyselinou chlorovodíkovou, s kyselinou sírovou a s kyselinou fumarovou.

Kvartemí amoniové soli například sloučenin obecného vzorce I, jejich N-oxidy ajejich definované estery zahrnují například soli s organohalogenidy, například s alkyihalogenidy. Farmaceuticky přijatelné kvartemí amoniové soli pro farmaceutické použití podle předloženého vynálezu, jak bude zde popsáno, zahrnují například takovéto soli s methyljodidem.

Pro farmaceutické použití podle předloženého vynálezu jsou výše uvedené esterové formy obvykle méně výhodné.

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých R4 je atom vodíku a R, je hydroxyskupina, jakož i jejich N-oxidy, estery a soli, jak byly výše popsány, mají konfiguraci (3S ,4R ), t. j. konfigurace skupin R₃ a R₅ v polohách 3 a 4 je trans. Sloučeniny podle vynálezu tak existují v enantiomemí formě, t. j. jako opticky aktivní antipody, mající /3S,4R/ nebo /3R,4S/ konfiguraci. Předložený vynález samozřejmě zahrnuje jak jednotlivé enantiomery (opticky aktivní, /3S,4R/ nebo /3R,4S/, antipody), tak i jejich směsi, například racemické směsi.

Při farmaceutickém využití prostředku podle vynálezu se předpokládá nebo převážně předpokládá použití /3S,4R/ enantiomerů, které jsou výhodné. Vhodně mohou být tyto /3S,4R/ enantiomery podle předloženého vynálezu použity v čištěné formě, t. j. že obsahují méně než

-3 CZ 282091 B6 % enantiomemích nečistot, mnohem vhodněji mohou být použity v čisté nebo v podstatě čisté formě, například že obsahují méně než 10 %, s výhodou 5 % nebo méně, například 1 nebo 2 % nebo méně /3R,4S/ enantiomemích nečistot.

Dále je podstatou vynálezu také:

3. Způsob přípravy benzopyranů, jak jsou definovány v odstavci 1 výše, například sloučenin obecného vzorce I, jak jsou definovány v odstavci 2 výše, nebo jejich N-oxidů, nebo fyziologicky hydrolyzovatelných a fyziologicky přijatelných esterů těchto benzopyranů nebo N-oxidů, nebo solí s kyselinami nebo kvartemích amoniových solí těchto benzopyranů, N-oxidů nebo esterů, který spočívá v tom, že

i) pro přípravu výše uvedených benzopyranů i¹) se nechá reagovat la,7b-dihydro-2,2-dialkyl-6-(pyridin-4-yl)-2H-oxireno/c//l/benzopyran, kde alkylové skupiny mají 1 až 5 atomů uhlíku a kde pyridin-4-yl-skupina je substituována v poloze 2 a/nebo 3 jedním nebo dvěma substituenty, vybranými ze skupiny, zahrnující alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a alkoxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové i alkylové části, například 20 sloučenina obecného vzorce II

kde R|, R₂, Ró, R? a R_g mají významy uvedené pro obecný vzorec I výše, se solí karboxamidové skupiny s alkalickým kovem, například se sloučeninou obecného vzorce III

Θ © r₁₀-co-n-r₉ m (III), kde R₉ a R_]0 mají významy uvedené pro vzorec I výše a M⁺ je ion lithia, sodíku nebo draslíku, nebo i²) se acyluje a, v případě potřeby, alkyluje aminoskupina 2,2-dialkyl-4-amino-6-(pyridin-4-yl)40 2H-l-benzopyranů nebo trans-2,2-dialkyl-3,4-dihydro-3-hydroxy-4-amino-6-(pyridin-4-yl)2H-I-benzopyranů, kde alkylové skupiny mají 1 až 5 atomů uhlíku a kde pyridin-4-ylskupina je substituována v poloze 2 a/nebo 3 jedním nebo dvěma substituenty, vybranými ze skupiny, zahrnující alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a alkoxyalkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové i alkylové 45 části, například se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce IV

-4CZ 282091 B6 (IV),

kde R|, R₂ a R4 až R₈ mají významy uvedené pro vzorec I, se sloučeninou obecného vzorce V, V nebo V

R'10-CO-X¹ (V)

X²-(CH₂)_n-COX‘

(V) (V) kde R'10 je pyridylová skupina a X¹ a X² jsou odštěpitelné skupiny, ii) pro přípravu benzopyran-N-oxidů nebo fyziologicky hydrolyzovatelných a fyziologicky přijatelných esterů výše uvedených benzopyranů nebo benzopyran-N-oxidů se esterifikuje benzopyran nebo benzopyran-N-oxid, jak jsou definovány v odstavci 1 výše, mající volnou hydroxyskupinu nebo hydroxylovou část, čímž se zavede příslušná esterová skupina, například se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce I, jak je definována výše, kde R₅ je hydroxyskupina a/nebo alespoň jedna ze skupin Ri a R₂ je hydroxyalkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, nebo její N-oxid, s příslušným halogenidem kyseliny nebo anhydridem kyseliny, a/nebo se oxiduje benzopyran nebo jeho fyziologicky hydrolyzovatelný a fyziologicky přijatelný ester, jak je definován v odstavci 1 výše, například se oxiduje sloučenina obecného vzorce I, jak je definována výše, nebo její fyziologicky hydrolyzovatelný a fyziologicky přijatelný ester, a získaný benzopyran, benzopyran-N-oxid nebo jeho fyziologicky hydrolyzovatelný a fyziologicky přijatelný ester se izoluje ve volné formě nebo ve formě soli s kyselinou nebo ve formě kvartemí amoniové soli.

Postup i¹) se může provádět známými metodami, například se reakce provádí při teplotě místnosti až teplotě varu v přítomnosti inertního rozpouštědla nebo ředidla, jako je tetrahydrofuran nebo dimethylsulfoxid. Vhodně se požadovaná sůl s alkalickým kovem, například sloučenina obecného vzorce III, připraví předem in šitu, například jak je popsáno v příkladech 1 až 11 a 21 dále. Použitím příslušných, například sodných solí, se získají benzopyrany i dihydrobenzopyrany podle vynálezu, například jak je popsáno v příkladech 11 a 12 dále. Použitím lithných solí se získají především nebo výhradně výhodné dihydrobenzopyrany podle vynálezu, jak je popsáno v příkladech 1 až 10 dále.

Postup i²) se také může provádět známými metodami. Vhodnou odštěpitelnou skupinou X¹ je halogen nebo aktivovaná esterová skupina a vhodnou odstupující skupinou X je halogen. Reakce se vhodně provádí při teplotách od 0 °C do 100 °C v inertním rozpouštědle nebo ředidle, jako je acetonitril nebo dichlormethan, s výhodou v přítomnosti činidla, které váže kyselinu, například trialkylaminu nebo uhličitanu alkalického kovu. Tento postup je popsán v příkladech 13 až 20 dále.

- 5 CZ 282091 B6

Postup ii) se může provádět běžnými acylačními/N-oxidačními postupy, například pro získání N-oxidů reakcí s peroxidem vodíku, m-chlorperbenzoovou kyselinou nebo činidlem dle Collina (CrO₃.Py₂), jak je dále popsáno v příkladu 23.

Nejprve vzniklé volné báze lze převést na soli s kyselinami nebo na kvartemí amoniové soli reakcí s kyselinami nebo například s alkylhalogenidy, jako je methylhalogenid, a naopak.

Použitím racemátů sloučenin obecného vzorce II a obecného vzorce IV se získají 4karboxamido-3,4-dihydro-3-hydroxybenzopyrany ve formě trans-racemátu /t. j. že obsahuje (3S,4R) plus (3R,4S) isomery/. Získané racemáty lze rozdělit na jednotlivé enantiomery, t. j. (3R,4S) nebo (výhodný) (3S,4R) enantiomer, například chromatograficky za použití chirální stacionární fáze. Mají-li se však připravit jednotlivé (3S,4R) enantiomery, je pak výhodné použít jako výchozí sloučeniny odpovídající isomery, t. j. pro sloučeninu obecného vzorce II 3S,4Santipod a pro sloučeninu obecného vzorce IV 3S,4R-antipod. Ty lze, jak je dále popsáno, vhodně připravit podle reakčního schématu A.

Je třeba si uvědomit, že lze použít varianty nebo alternativy výše popsaných postupů, které jsou známy ze stavu techniky, například pro vzájemnou přeměnu původně získaných sloučenin nebo pro zavedení alternativních karboxamidových skupin v poloze 4. Nestálé skupiny mohou být chráněny, například během acylačních postupů, použitím běžných chránících skupin, například skupin, chránících hydroxyskupiny. Dále mohou být v případě potřeby převedeny původně získané benzopyrany na odpovídající jiné benzopyrany dehydratací 3,4-vazby, a to opět známými metodami. Pracovníkům v oboru jsou zřejmé další možné alternativy.

Sloučeniny obecného vzorce II lze připravit podle následujícího obecného reakčního schématu A

-6CZ 282091 Β6

Stupně (iii) až (vi) lze provádět obvyklými způsoby, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladech 24.A.4, A.5, A.5'a, a A.5’b.

Výchozí sloučeniny obecného vzorce IV lze připravit zodpovídajících sloučenin obecného vzorce II reakcí s amoniakem, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladu 24.A.6'.

Provedením stupňů (iii) a (iv) se získá sloučenina obecného vzorce II jako cis-racemát, t. j. že obsahuje (3R,4R) a (3S,4S) antipody. Stupeň (v) zahrnuje zavedení příslušné chirální acylové skupiny /ve schématu A například (R)-alfa-methoxyfenylacetylové skupiny/. Chirální racemát obecného vzorce VIII lze snadno rozdělit chromatografií na koloně nebo frakční rekrystalizací na její jednotlivé (3R,4S) a (3S,4R) antipody. Použitím (3R,4S) antipodu a provedením stupně (vi) se získá výchozí sloučenina obecného vzorce II v čisté nebo v podstatě čisté (3S,4S) enantiomemí formě.

Sloučeniny obecného vzorce VI lze připravit podle následujícího obecného reakčniho schématu B

kde X je odštěpitelná skupina, vhodně atom halogenu, například atom chloru. Stupně (vii) až (ix) se mohou provádět běžnými způsoby, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladech 24. A.2 a A.3, stupně (viii) a (ix) se mohou provádět podle příkladu 24.A.3 bez čištění meziproduktu. Jako v příkladu 24.A.2 se stupeň (vii) vhodně provádí v aprotickém rozpouštědle, jako je aceton, v přítomnosti báze, jako je K₂CO₃, a v přítomnosti katalyzátoru, jako je K.I.

Sloučeniny obecného vzorce IX lze připravit různými způsoby, například jak je uvedeno v následujícím obecném reakčním schématu C

Stupně (x) a (xi) a stupně (xii) až (xiv) lze provádět běžnými způsoby, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladech 24.A.la a b a 24.A.la' a b'. Obecně jsou stupně (x) a (xi) výhodné pro syntézu ve větším měřítku.

Je-li zapotřebí připravit sloučeniny podle vynálezu, ve kterých R| a/nebo R₂ jsou hydroxyalkylové nebo alkoxyalkylové skupiny, pak toho lze také dosáhnout konverzí alkylových substituentů v R[/R₂. Podobně lze methylové skupiny jako R;/R₂ v případě potřeby převést na vyšší alkylové skupiny. Vhodně lze tyto konverzní reakce provádět ve stupni syntézy sloučeniny obecného vzorce VI za použití běžných metod, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladech 24.E.3, F.3, G.3a + G.3.b a H.3.a + H.3.b.

Sloučeniny obecného vzorce VI, ve kterých R₈ je jiné než atom vodíku, se vhodněji připraví podle následujícího reakčního schématu D

-8CZ 282091 B6

(XVII) (XVIII) r₆-^c0-r₇ o

(XIX)

v (VI) kde Hal je atom halogenu, například bromu, a Rg je alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku. Stupně (xv) až (xxi) lze provádět běžnými způsoby, například podle obecných postupů, popsaných dále v příkladu 24.1.

Meziprodukty popsané výše a v následujících příkladech, obzvláště meziprodukty obecných vzorců II, IV a VI až VIII, jsou nové. Tyto meziprodukty, zejména meziprodukty obecných vzorců II a IV, a způsoby jejich přípravy tvoří též součást předloženého vynálezu.

V následujících příkladech jsou blíže objasněny postupy podle předloženého vynálezu. Všechna NMR spektra jsou měřena při 360 MHz. Všechny teploty jsou udávány ve stupních Celsia a jsou nekorigovány.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava (-)-(3S,4R)-1 -/3,4-dihydro-2,2-dimethyl-3-hydroxy-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-yl/-2-piperidinonu /vzorec I: R; = R« = R₇ = CH₃, R₂ = R4 = Rg = H, R₅ = OH, : čistý nebo v podstatě čistý (3S,4R) enantiomer/.

-9CZ 282091 B6

Míchaný roztok 2-piperidinonu (19,8 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (400 ml) se při teplotě 10 °C nechá reagovat v atmosféře argonu s roztokem lithium-bis(trimethylsilyl)amidu (200ml/l,0 M) v tetrahydrofuranu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Vzniklá suspenze se smíchá s roztokem (-)-(3S,4S)-4-(la,7b-dihydro-2,2-dimethyl-2Hoxireno/c//l/-benzopyran-6-yl)-2-methylpyridinu (26,7 g, viz příklad 24.A.5' dále) v bezvodém tetrahydrofuranu (150 ml) a zahřívá se kvaru po dobu 31 hodin. Potom se směs ochladí na 15 °C, zpracuje se nasyceným vodným roztokem NH₄C1 (300 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2x150 ml). Spojené extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného (300 ml), vysuší se (Na₂SO₄) a přefiltrují. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt, který se čistí chromatografií (silikagel, 5 % C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a pentanu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 192 °C, /alfa/²⁰ _D = -83,2° (c = 1,06, C₂HjOH). Teplota tání hemimaleinátové soli 146 až 148 °C.

Analogicky se připraví následující sloučeniny obecného vzorce Ia

(Ia)

Příprava požadované oxirenové výchozí látky je popsána v příkladu, uvedeném v pravém sloupci následující tabulky .

Všechny sloučeniny, uvedené v následující tabulce, jsou ve formě trans-racemátu.

příklad	Ri	R₂	Rs	t.t. °C	výchozí sloučenina podle příkladu 24
2	ch₃	H	H	184-185	A.5
3	H	ch₃	H	205-206	D.5
4	c₂h₅	H	H	196-197	B.5
5	ho-ch₂	H	H	200-201	G.5
6	ch₃o-ch₂	H	H	182-183	H.5
7	nC₃H₇	H	H	178-179	E.5
8	iC₄H₉	H	H	210-211	F.5
9	ch₃	ch₃	H	201-202	C.5
10	ch₃	H	ch₃	219-221	1.5

Příklad 11

Příprava l-/2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-yl/-2-piperidinonu /vzorec I: R] = R^ = R₇ = CH₃, R₂ = R₈ = H, R₄ + R5 = další vazba, R₃ =

Míchaný roztok 2-piperidinonu (0,90 g) v bezvodém dimethylsulfoxidu (20 ml) se smíchá s NaH (0,48 g 55% disperze v oleji) a míchá se při teplotě 50 °C po dobu 30 minut v atmosféře argonu. Potom se směs ochladí na teplotu 10 °C a smíchá se s roztokem (±)-4-(la,7b-dihydro-2,2

- 10CZ 282091 B6 dimethyl-2H-oxireno-/c//l/benzopyran-6-yl)-2-methylpyridinu (2,67 g, viz příklad 24.A.5) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 14 hodin v atmosféře argonu. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se zpracuje nasyceným vodným NH₄C1 (200 ml) a extrahuje se CH₂C1₂ (3 x 100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují se a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá směs. Ta se rozdělí chromatograficky (silikagel, 2% C₂H₅OH v CH₂C1₂) za vzniku méně polárního produktu (A), který se překrystaluje ze směsi ethyletheru a pentanu, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, a více polární sloučeniny (B), která se překry staluje ze směsi CH₂C1₂ a diethyletheru, přičemž se získá tentýž produkt jako v příkladu 2 výše. Teplota tání pro sloučeninu, uvedenou v názvu, je 95 až 98 °C.

Příklad 12

Příprava l-/2,2-dimethyl-6-(3-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-yl/-2-piperidinonu /vzorec I: R₂ = R^ = R₇ = CH₃, R, = R₈ = H, R₄ + R, = další vazba, R₃ =

Vychází se z produktu podle příkladu 24.D.5., uvedeného níže, a postupuje se analogicky podle příkladu 11 výše, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, spolu s produktem podle příkladu 3 výše. Fyzikální charakteristiky pro sloučeninu, uvedenou v názvu, jsou následující:

¹ H-NMR (delta-d⁶ DMSO): 1,41 (s, 3H), 1,45 (s, 3H), 1,77 - 1,96 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,27 2,68 (m, 3H), 3,37 - 3,58 (m, 2H), 5,83 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 7,14 - 7,20 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 8,39 (d, lH)a8,45 (s, 1H).

Příklad 13

Příprava (+)-(3S,4R)-/3,4-dihydro-2,2-dimethyl-3-hydroxy-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran/-3-pyridinkarboxamidu /vzorec I: R, = Ré = R₇ = CH₃, R₂ = R4 = R_g = H, R₃ = C0-NHN-⁷ čistý nebo v podstatě čistý (3S,4R) enantiomer/.

M íchaný roztok (+)-(3 S,4R)-4-am ino-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-y 1)-2H-1 benzopyran-3-olu (0,65 g, viz příklad 24.A.6' níže), triethylaminu (0,50 g) a 4-dimethylaminopyridinu (0.002 g) v bezvodém CH₂C1₂ (30 ml) se zpracuje při teplotě 2 °C v atmosféře argonu s hydrochloridem nikotinoylchloridu (0,445 g). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin, načež se zpracuje vodným Na₂CO₃ (100 ml/2 M) a extrahuje se směsí 3 : 1 CH₂C1₂/CH₃OH (3 x 100 ml). Spojené extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá olej. Tento olej se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a diethyletheru, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, v enantiomemě čisté nebo v podstatě čisté formě, teploty tání 247 až 248 °C, /alfa/²⁰ _D = + 19,8 (c = 0,965, C₂H₅OH).

Analogicky se připraví následující sloučeniny obecného vzorce Ib

- 11 CZ 282091 B6

(Ib) přičemž příprava požadovaného výchozího 4-aminobenzopyran-3-olu se provádí podle příkladu, uvedeného v pravém sloupci v následující tabulce.

Všechny sloučeniny, uvedené v této tabulce, jsou ve formě trans-racemátu.

příklad	R_t	R₂	Rs	t.t. °C	výchozí sloučenina podle příkladu 24
14	ch₃	H	H	230-231	A.6
15	c₂h₅	H	H	192-193	B.6
16	ch₃och₂	H	H	206-208	H.6
17	nC₃H₇	H	H	206-207	E.6
18	iC₄H₉	H	H	240-241	F.6
19	ch₃	ch₃	H	239-241	C.6
20	ch₃	H	ch₃	234-236	1.6

Příklad 21

Příprava trans-(±)-l-/3,4-dihydro-2,2-dimethyl-3-hydroxy-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-y 1/-2( 1 H)-pyridinonu

P /vzorec I: R] = R, = R₇ = CH₃, R₇ = R, = R₈ = H, R₃ = .—/ jako trans racemát/.

O

Míchaný roztok 2-hydroxypyridinu (0,42 g) v bezvodém C2H5OH (20 ml) se smísí s NaH (0,21 g, 55% disperze voleji) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 15 minut v atmosféře argonu. Směs se potom ochladí na teplotu 2 °C a přidá se roztok (±)-4-(la,7bdihydro-2,2-dimethyl-2H-oxireno/c//l/benzopyran-6-yl)-2-methylpyridinu (1,07 g, viz příklad 24.A.5) a míchá se při teplotě místnosti po dobu 96 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se zpracuje nasyceným vodným NH4CI (100 ml) a extrahuje se CHiCf (3x100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt, který se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH VCH2CI2) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a diethyletheru. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 213 až 214 °C.

- 12CZ 282091 B6

Příklad 22

Příprava trans-(±)-2-/3,4-dihydro-2,2-dimethyl-3-hydroxy-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-yl/-2,3-dihydro-lH-isoindol-l-onu /vzorec I: R

jako trans racemát/.

K míchanému roztoku trans(±)-4-amino-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2Hl-benzopyran-3-olu (2,84 g, viz příklad 24.A.6) a methylesteru 2-brommethylbenzoové kyseliny (2,30 g) v bezvodém acetonitrilu (100 ml) se v atmosféře argonu přidá KI (0,84 g) a potom K₂CO₃ (4,20 g). Reakční směs se míchá při teplotě 20 °C po dobu 1 hodiny, při teplotě 60 °C po dobu 1 hodiny a potom při teplotě 85 °C po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se smísí sH₂O (300 ml) a extrahuje se 2 % CH₃OH v CH₂C1₂ (4 x 150 ml). Spojené extrakty' se promyjí roztokem thiosíranu sodného (100 ml/2 %), vysuší se (Na₂SO₄) a přefiltrují. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a získá se surový produkt, který se čistí chromatografii (silikagel, 5% C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a acetonu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 222 až 224 °C.

Příklad 23

Příprava (-)-(3 S,4R)-4-/3,4-dihydro-2,2-dimethy l-3-hydroxy-4-(2-oxopiperidin-1 -yl)-2H-1 benzopyran-6-yl/-2-methylpyridin-N-oxidu

Roztok produktu podle příkladu 1 (2,6 g) v CH₂C1₂ (40 ml) se smísí s 3-chlorperoxybenzoovou kyselinou (1,92 g, 90 %) a míchá se při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt, který se čistí chromatografii (silikagel, 5% C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi acetonu a diethyletheru. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 202 až 205 °C.

Příklad 24

Příprava výchozích sloučenin pro příklady 1 až 23

A. 1. Příprava 4-(4-methoxyfenyl)-2-methylpyridinu

A. 1 .a. Ethylester 4-(4-methoxyfenyl)-2-methyl-1 -(4H)-pyridinkarboxylové kyseliny

K míchané směsi 2-pikolinu (9,30 g) a jodidu měďného (0,77 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (150 ml) se v atmosféře argonu při teplotě -20 °C přidá ethylchlorformiát (10,85 g). Směs se míchá při teplotě -20 °C po dobu 3 hodin a potom se přikapává roztok 4-methoxyfenylmagnesiumbromidu, připravený z 4-bromanisolu (18,7 g) a hořčíkových hoblin (2,64 g), v bezvodém tetrahydrofuranu (100 ml) takovou rychlostí, že teplota zůstává mezi -15 °C a -20 °C. Reakční směs se míchá při teplotě -15 °C po dobu 1 hodiny, při teplotě 20 °C po dobu 16 hodin a potom se přidá nasycený vodný roztok NPLC1 (300 ml) a extrahuje se ethylacetátem (4 x 200 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografii (silikagel, 50% toluen v hexanu) a získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě světle žlutého oleje.

A. 1 .b. 4-(4-methoxyfenyl)-2-methylpyridin

- 13 CZ 282091 Β6

Produkt ze stupně A.l.a (16,9 g) a síra (2,0 g) v dekahydronaftalenu (100 ml) se míchají při teplotě 200 °C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (500 ml) a extrahuje se HC1 (3 x 200 ml 2 M). Spojené extrakty se promyjí ethylacetátem (2 x 100 ml), zalkalizují se pomocí NaOH na pH 11 za chlazení ledem a extrahují se CH₂CI₂ (3 x 200 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH/CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a ethylacetátu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 88 až 91 °C.

Sloučeninu, uvedenou v názvu, lze alternativně připravit následujícím způsobem:

A. 1 .a' 2,2',6'-trimethyl-4-oxo-1,1 '-(4'H)bipyridiniumtetrafluoroborát

K čerstvě připravenému roztoku hydroxylamin-O-sulfonové kyseliny (45,2 g, 90 %) v H₂O (260 ml) se při teplotě 0 °C přidá 2-methylpyridin (111,7 g). Směs se zahřeje na 95 °C, míchá se dále po dobu 45 minut, ochladí se na 10 °C a opatrně se zpracuje K₂CO₃ (55 g). Směs se promyje diethyletherem (2 x 100 ml) a voda se odpaří při teplotě 40 °C za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá C₂H₅OH (600 ml) a vysrážený K₂SO₄ se odstraní filtrací. Filtrát se zpracuje HC1 (120 ml 18 M) a za sníženého tlaku se při teplotě 50 °C odpaří k suchu, přičemž se získá zbytek, ke kterému se přidá dehydrooctová kyselina (68,6 g) a HC1 (150 ml 18 M) a zahřívá se k varu pod zpětným chladičem po dobu 90 minut. Roztok se odpaří k suchu za sníženého tlaku při teplotě 50 °C a zbytek se míchá s C₂H₅OH (200 ml) po dobu 15 minut, přefiltruje se a sraženina se promyje C₂H₅OH (200 ml). Spojené filtráty a promývací vody se zpracují tetrafluoroboritou kyselinou v ethyletheru (50 ml, 50 %) a zředí se diathyletherem (250 ml). Stáním vy krystaluje sloučenina, uvedená v názvu, odfiltruje se a vysuší za sníženého tlaku při teplotě 20 °C, teplota tání 206 až 208 °C.

A. 1 .b' 4-(4-methoxyfenyl)-2-methylpyridin

K míchanému roztoku 4-methoxyfenylmagnesiumbromidu, připravenému z 4-bromanisolu (56,1 g) a hořčíkových hoblin (7,92 g), v bezvodém tetrahydrofuranu (400 ml) se při teplotě 0 až 5 °C přidá produkt ze stupně A.l.a' (30,2 g) v atmosféře argonu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 48 hodin, promyje se nasyceným NH₄C1 (300 ml) a vodná fáze se extrahuje CH₂Cl₂ (3 x 100 ml). Spojený tetrahydrofuranový roztok a CH₂C1₂ extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový 4'-(4methoxyfenyl)-2,2',6'-trimethyl-/l,r-(4H,4'H)-bipyridin/-4-on. Surový produkt se rozpustí v bezvodém dimethylformamidu (400 ml) a zahřívá se k varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá zbytek, který se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se z C₂H₅OH za vzniku sloučeniny, uvedené v názvu, teploty tání 88 až 91 °C.

A.2. Příprava 4-(4-hydroxyfenyl)-2-methylpyridinu

Roztok produktu podle příkladu A.l. (6,45 g) v HBr (100 ml, 48 %) se zahřívá na teplotu 135 °C po dobu 3 hodin. Nadbytek HBr se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá zbytek, který se zneutralizuje vodným NaHCO₃ a extrahuje se směsí 3 : 1 CH₂C1₂/C₂H₅OH (3 x 150 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a získá se surový produkt. Ten se překrystaluje ze směsi C7H5OH a diethyletheru, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 203 až 204 °C.

A.3. Příprava 2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-1 -benzopyranu

Míchaná směs produktu podle příkladu A.2. (4,07 g), bezvodého K₂CO₃ (6,9 g) a KI (1,0 g) v bezvodém acetonu (75 ml) se v atmosféře argonu nechá reagovat s 3-chlor-3-methylbutinem

- 14CZ 282091 B6 (5,65 g) a zahřívá se k varu pod zpětným chladičem po dobu 120 hodin. Směs se přefiltruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá surový 4-/4-(l,l-dimethyl-2 propinyl)oxyfenyl/-2-methylpyridin. Ten se rozpustí v 1,2-dichlorbenzenu (50 ml) a zahřívá se na teplotu 170 °C po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surová sloučenina, uvedená v názvu, která se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₃OH v CH₂CI₂). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 37 až 40 °C.

Analogicky podle příkladu A.l až A.3 výše se připraví následující sloučeniny, a to buď provedením stupňů (A.l.a) + (A.l.b) nebo stupňů (A.l.a’) + (A.l.b’). Všechny získané sloučeniny jsou oleje.

B. 3. 2,2-dimethyl-6-(2-ethylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran,

C. 3. 2,2-dimethyl-6-(2,3-dimethylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran,

D. 3. 2,2-dimethyl-6-(3-methyIpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran.

E. 3. Příprava 2,2-dimethyl-6-(2-propylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranu

K. míchanému roztoku produktu podle příkladu A.3. (5,02 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml) se při teplotě -25 °C v atmosféře argonu přidá roztok n-butyllithia (12,5 ml, 1,6 M) v hexanu. Vzniklá směs se míchá při teplotě 10 °C po dobu 40 minut, ochladí se na -5 °C a přidá se ethyljodid (2,4 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, míchá se další 2 hodiny a potom se přidá nasycený vodný NH4CI (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí chromatografií (silikagel, 10% aceton v hexanu). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje.

F. 3. Příprava 2,2-dimethyl-6-(2-isobutylpyridin-4-yl)-2H-1 -benzopyranu

Sloučenina, uvedená v názvu, se připraví analogicky podle příkladu E.3. za použití isopropyljodidu místo ethyljodidu, přičemž se tato sloučenina získá ve formě oleje.

G. 3. Příprava 2,2-dimethyl-6-(2-hydroxymethylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranacetátu

G.3 .a 4-(2,2-dimethyl-2H-1 -benzopyran-6-yl)-2-methylpyridin-N-oxid

Roztok produktu podle příkladu A.3. (13,4 g) v CH₂C1₂ (200 ml) se smíchá s 3-chlorperoxybenzoovou kyselinou (13,5 g, 70 %) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a získá se zbytek, který se čistí chromatografií (silikagel, 5% C₂H₃OH v CH₂C1₂). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě světle žluté gumovité látky.

G. 3.b (2,2-dimethyl-6-(2-hydroxymethylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranacetát

Směs produktu podle stupně G.3.a (4,8 g) a acetanhydridu (50 ml) se zahřívá na teplotu 80 °C v atmosféře argonu po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt, který se čistí chromatografií (silikagel, 10% ethylacetát v toluenu). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje.

H. 3. Příprava 2,2-dimethyl-6-(2-methoxymethylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranu

H.3.a (2,2-dimethyl-2H-l-benzopyran-6-yl)-2-pyridinmethanol

- 15CZ 282091 B6

Směs produktu podle příkladu G.3. (69,5 g), Na?CO₃ (95,4 g), H₂O (160 ml) a C₂H₅OH (600 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 22 hodin. Potom se směs přefiltruje a filtrát se za sníženého tlaku odpaří k suchu a získaný zbytek se smíchá s H₂O (400 ml) a extrahuje se CH₂C1₂(3 x 150 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄) a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, ethylacetát) a překrystaluje se z pentanu. čímž se získá sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 86 až 88 °C.

H. 3.b (2,2-dimethyl-2H-l-benzopyran-6-yl)-2-methoxymethylpyridin

K. míchanému roztoku produktu ze stupně H.3.a (8,0 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (150 ml) se v atmosféře argonu za teploty 15 °C přidá NaH (0,90 g, 80% disperze v oleji) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 45 minut. Potom se přidá methyljodid (4,26 g) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Potom se přidá nasycený vodný NH₄C1 (200 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (2 x 200 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž vznikne surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 20% aceton v hexanu). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje.

I. Příprava 6-(2-methylpyridin-4-yl)-2,2,7-trimethyl-2H-l-benzopyranu

a. 4-brom-3-methylfenolacetát

K. míchané směsi 4-brom-3-methylfenolu (184,1 g) a vodného NaOH (850 ml, 2 M) se při teplotě 20 °C přidá acetanhydrid (136 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Suspenze se extrahuje diethyletherem (3 x 300 ml) a spojené extrakty se promyjí vodným NaOH (2 x 100 ml, 2 M), vysuší se (Na₂SO₄) a přefiltrují. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje.

b. l-(3-brom-2-hydroxy-5-methylfenyl)ethanon

Směs produktu ze stupně a (195,6 g) a chloridu hlinitého (152,6 g) se míchá v atmosféře argonu při teplotě 165 °C po dobu 45 minut. Ochlazená směs se zpracuje ledem chlazenou HCl (2000 ml, 2 M) a extrahuje se CH₂C1₂ (4 x 600 ml). Spojené extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 10% toluen v hexanu) a překrystaluje se ze směsi diethyletheru a hexanu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 81 až 82 °C.

c. 6-brom-3,4-dihydro-2,2,7-trimethyl-2H-1 -benzopyran-4-on

Směs produktu ze stupně b (48 g), acetonu (31 ml) a pyrrolidinu (21 ml) v bezvodém benzenu (500 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin a potom se zahřívá k varu pod zpětným chladičem, přičemž se vznikající voda odstraňuje pomocí Dean-Starkova zařízení. K. ochlazené směsi se přidá HCl (200 ml, 2 M), míchá se po dobu 10 minut, zalkalizuje se vodným NaOH (1 M) a extrahuje se CH₂C1₂ (3 x 300 ml). Spojené extrakty se vysuší (K.2CO3), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 50 % toluen v hexanu) a překrystaluje se ze směsi diethyletheru a pentanu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 95 až 96 °C.

d. 6-brom-3,4-dihydro-4-hydroxy-2,2,7-trimethyl-2H-1 -benzopyran

K. míchanému roztoku produktu ze stupně c (26,9 g) v C₂H₅OH (200 ml) se při teplotě 5 °C přidá borohydrid sodný (1,95 g) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 12 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a k vzniklému zbytku se přidá H₂O (500 ml) a extrahuje se

- 16CZ 282091 B6 diethyletherem (3 x 200 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Tento produkt se čistí chromatografií (silikagel, 10% aceton v hexanu) a překrystaluje se ze směsi diethyletheru a pentanu. Získá se sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 92 až 93 °C.

e. 6-brom-2,2,7-trimethyl-2H-l-benzopyran

K míchanému roztoku produktu ze stupně d (27,1 g) v bezvodém toluenu (300 ml) se přidá ptoluensulfonová kyselina (1,15 g) a směs se zahřívá kvaru pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin, přičemž se vznikající voda odstraňuje pomocí Dean-Starkova nástavce. Ochlazený roztok se promyje vodným roztokem uhličitanu sodného (100 ml, 2 M), vysuší se (Na₂SO₄), přefiltruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, hexan) a získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje.

f. 6-(2-methylpyridin-4-yl)-2,2,7-trimethyl-2H-l-benzopyran

Roztok produktu ze stupně e (7,60 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (30 ml) se přidá během 15 minut k míchané směsi hořčíkových hoblin (0,85 g) a jodu (0,06 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (25 ml) v atmosféře argonu při teplotě 45 °C. Směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin, pak se ochladí na 5 °C, přidá se bis(trifenylfosfin)nikl(II)chlorid (0,32 g) a roztok 4-brompikolinu (4,8 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Ke směsi se přidá HC1 (140 ml. 1 M) a extrahuje se diethyletherem (2 x 60 ml). Spojené etherové extrakty se promyjí HC1. Spojené kyselé roztoky se zalkalizují na pH 10 pomocí K₂CO₂, extrahují se diethyletherem (3 x 100 ml), vysuší se (Na₂SO₄), přefiltrují se a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku za vzniku surového produktu. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 10% aceton v hexanu). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje, který má následující fyzikální charakteristiky:

'H-NMR (delta-CDCb): 1,44 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 5,60 (d, IH), 6,31 (d, IH), 6,70 (s, IH), 6,82 (s, IH), 7,04 (dd, IH), 7,09 (d, IH) a 8,49 (d, IH).

A.4. Příprava trans-(+)-3-brom-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-lbenzopyran-4-olu

K míchanému roztoku produktu podle příkladu A.3. (2,50 g) v dimethylsulfoxidu (6 ml) a H₂O (0,36 ml) se při teplotě 0 °C po částech přidá n-bromsukcinimid (2,20 g). Po odeznění exotermické reakce se v míchání pokračuje další 1 hodinu a k reakční směsi se přidá nasycený vodný NHtCl (200 ml), načež se směs extrahuje CH₂C1₂ (3 x 100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt. Ten se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH v CH₂C1₂) a překrystaluje se ze směsi C₂H₅OH a diethyletheru, přičemž se získá sloučenina, uvedená v názvu, teploty tání 212 až 214 °C.

A.5. Příprava (±)-4-(la,7b-dihydro-2,2-dimethyl-2H-oxireno-/c//l/benzopyran-6-yl)-2-methylpyridinu

K roztoku produktu podle příkladu A.4. (3,5 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (80 ml) se přidá NaH (0,90 g, 55% disperze voleji) a reakční směs se míchá v atmosféře argonu při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Potom se přidá nasycený vodný roztok NH₄C1 (150 ml) a extrahuje se diethyletherem (3 x 100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, přičemž se získá zbytek, který se čistí chromatografií (silikagel, 2% C₂H₅OH v CH₂C1₂). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, ve formě oleje, který má následující

- 17CZ 282091 B6 fyzikální charakteristiky:

'H-NMR (delta-d⁶ DMSO): 1,23 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 3,75 (d, 1H), 4,14 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,19 (dd, 1H), 7,96 (d, 1H) a 8,47 (d, 1H).

Analogicky podle výše uvedených příkladů A4 a A5, ale provedením reakce v jedné nádobě, lze připravit následující sloučeniny obecného vzorce II, ve kterých R₆ a R₇ jsou každý methylové skupiny a R_b R₂ a R₈ mají významy, uvedené v následující tabulce. Tato reakce se provádí tak, že se zředí směs, získaná po exotermické reakci, a směs se míchá podle příkladu A.4 s dioxanem, přidá se vodný NaOH (0,6 M) a v míchání se pokračuje při teplotě místnosti další asi 1 hodinu. Čištění se potom provádí analogicky podle příkladu A.5 po odpaření dioxanu. Výchozí sloučeniny jsou v tabulce uvedeny ve sloupci 2. Všechny produkty se získají jako (±)-racemáty ve formě oleje.

příklad	výchozí sloučenina z příkladu	Ri	R₂	r₈
B5	B3	C₂H₅	H	H
C5	C3	ch₃	ch₃	H
D5	D3	H	CHj	H
E5	E3	n-C₃H₇	H	H
F5	F3	i-C₄H₉	H	H
G5	G3	hoch₂	H	H
H5	H3	ch₃och₂	H	H
15	I	ch₃	H	CHj

Charakteristická data

B. 5. 'H-NMR (delta-CDCl₃): 1,31 (s, 3H), 1,37 (t, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,89 (q, 2H), 3,56 (d,

1H), 3,99 (d, 1H). 6,91 (d, 1H), 7,28 (dd, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,54 (dd, 1H), 7,63 (d, 1H) a 8,54 (dd, 1H).

C. 5. 'H-NMR (delta-CDClj): 1,32 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,61 (s, 3H). 3,54 (d,

1H), 3,39 (d, 1H), 6,87 (d, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,17 (dd, 1H), 7,26 (d, 1H) a 8,32 (d, 1H).

D. 5. 'H-NMR (delta-CDClj): 1,33 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 3,55 (d, 1H), 3,95 (d,

1H), 6,89 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,23 (dd, 1H), 7,31 (s, 1H), 8,45 (d, 1H) a 8,49 (s, IH).

E. 5. 'H-NMR (delta-CDClj): 1,01 (t, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 1,82 (sex, 2H), 2,82 (t,

2H), 3,54 (d, 1H), 3,98 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,28 (dd, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,53 (dd, 1H), 7,63 (d, lH)a8,54 (d, 1H).

F. 5. 'H-NMR (delta-CDClj): 0,96 (d, 6H), 1,30 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,15 (dt, 1H), 2,70 (d,

2H), 3,54 (d, 1H), 3,93 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,22 - 7,30 (m, 2H), 7,53 (dd, 1H), 7,63 (d, lH)a8,54 (d, 1H).

G. 5. 'H-NMR (delta-CDClj): 1,31 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), 3,55 (d, 1H), 3,98 (d, 1H), 4,83 (s,

2H), 6,92 (d, 1H), 7,35 - 7,45 (m, 2H), 7,54 (dd, 1H), 7,64 (d, 1H) a 8,57 (d, 1H).

1.5. ‘H-NMR (delta-CDClj): 1,29 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 3,50 (d,

1H), 3,89 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,04 (dd, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,18 (s, 1H) a 8,50 (d, 1H).

A.5' Příprava (-)-(3S,4S)-4-(l a,7b-dihydro-2,2-dimethyl-2H-oxireno/c//l/benzopyran-6-yl)-2methylpyridinu

- 18CZ 282091 B6

A.5'.a 3-brom-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran-4-yl-ester/lR-/l-alfa-(3R,4S), 4-beta/- a /lR-/l-alfa-(3S,4R),4-beta/-alfa-methoxybenzenoctové kyseliny

K roztoku produktu podle příkladu A.4. (9,80 g), (-)-(R)-alfa-methoxyfenyloctové kyseliny (5,65 g) a 4-dimethylaminopyridinu (0,45 g) v bezvodém CH₂C1₂ (330 ml) se přidá N,Ndicyklohexylkarbodiimid (6,81 g) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 90 minut. Směs se přefiltruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá surová směs diastereoisomerů, která se čistí chromatografií (silikagel, 5% aceton v CH₂C1₂). Získá se méně polární produkt (A), který se překrystaluje ze směsi acetonu a pentanu, přičemž se získá lR-/l-alfa-(3R,4S),4-beta/isomer sloučeniny, uvedené v názvu, teploty tání 137 až 138 °C, /alfa/²⁰D = = -75,4° (c = 0,955, C2H5OH), a dále více polární produkt (B), /lR-/l-alfa-(3S,4R),4beta/isomer sloučeniny, uvedené v názvu, ve formě oleje, /alfa/²⁰D = -22° (c = 0,975, C₂H₅OH).

A.5'.b (-)-(3S,4S)-4-(Ia,7b-dihydro-2,2-dimethyl-2H-oxireno/c//l/benzopyran-6-yl)-2-methylpyridin

Roztok /lR-/l-alfa-(3R,4S),4-beta/isomeru produktu podle stupně (A,5'.a) (3,16 g) v dioxanu (75 ml) se při teplotě 20 °C smíchá s vodným NaOH (45 ml, 0,58 M) a reakční směs se míchá při teplotě 20 °C po dobu 10 minut. Dioxan se odpaří za sníženého tlaku a ke zbytku se přidá voda (100 ml) a extrahuje se CH₂C1₂ (3 x 100 ml). Spojené extrakty se vysuší (Na₂SO₄), přefiltrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku za vzniku zbytku, který se čistí chromatografií na koloně (silikagel, 5% C₂H₅OH v CH₂C1₂). Získá se sloučenina, uvedená v názvu, v čisté nebo v podstatě čisté enantiomemí formě jako bezbarvý olej, /alfa/²⁰ _D = -72° (c = 1,125, C₂H₅OH).

A.6'. Příprava (+)-(3 S,4R)-4-amino-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-6-(2-methylpyridin-4-yl)-2H-lbenzopyran-3-olu

Roztok produktu podle příkladu A.5' (0,64 g) se smíchá s nasyceným roztokem NH₃ v C₂H₅OH (15 ml) a směs se zahřívá v autoklávu na teplotu 80 °C po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí chromatografií (silikagel, 5% C₂HjOH v CH₂C1₂) a vznikne sloučenina, uvedená v názvu, ve formě pěny: /alfa/²°o + 100° (c = 1,00, C₂H₅OH).

Analogicky se z výchozích sloučenin, uvedených v následující tabulce, připraví následující sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterých R4 je H, R₅ je hydroxyskupina, R^ a R₇ jsou oba methylové skupiny a R_b R₂ aRg mají významy, uvedené v následující tabulce. Všechny sloučeniny jsou ve formě trans-racemátu a s výjimkou pro produkt podle příkladu B6 jsou ve formě oleje.

příklad	Ri	r₂	Rs	výchozí sloučenina podle příkladu
A6	ch₃	H	H	A5
B6	c₂h₅	H	H	B5
C6	ch₃	ch₃	H	C5
E6	n-C₃H₇	H	H	E5
F6	i-C₄H₉	H	H	F5
H6	ch₃och₂	ch₃	H	H5
16	ch₃	H	ch₃	15

- 19CZ 282091 B6

Fyzikální data

A. 6. 'H-NMR (delta⁶-DMSO): 1.12 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 2,06 (široký, 2H), 2,50 (s, 3H), 3,23 (dd, IH). 3,59 (d, IH), 5,47 (d, IH), 6,81 (d, IH), 7,43 (dd, IH), 7,51 (s, IH), 7,55 (dd. IH), 7,99 (m, lH)a8,44 (d, IH).

B. 6. teplota tání = 140 až 141 °C.

C. 6. ‘H-NMR (delta-CDCh): 1.27 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,2 - 2,5 (široký s,3H).

2,57 (s, 3H), 3,41 (d, IH), 3,71 (d, IH), 6,85 (d, IH), 6,99 (d, IH), 7,10 (dd, IH),7.31 (dd, lH)a8,31 (d, IH).

E. 6. 'H-NMR (delta-CDCh): 1,00 (t, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,55 (s, 3H), 1,80 (s, 2H), 2,0- 2,4 (široký s, 3H), 2,80 (t, 2H), 3,41 (d, IH), 3,74 (d, IH), 6,89 (d, IH), 7,25 - 7,36 (m,2H),

7.47 (dd, IH), 7,70 (d, IH) a 8,51 (d, IH).

F. 6. 'H-NMR (delta-DMSO): 0,90 (d, 6H), 1,13 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 2,0 - 2,2 (široký s, 2H).

2,09 (dt, IH), 2,65 (d, 2H). 3,24 (dd, IH), 3,63 (d, IH), 5,45 (široký d, IH), 6,84 (d, IH).

7.48 (m. 2H), 7,58 (dd, IH), 8,00 (d, IH) a 8,46 (d, IH).

1.6. 'H-NMR (delta-CDCl,): 1,24 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 2,1 - 2,4 (široký s, 3H), 2,20 (s, 3H). 2,60 (s, 3H), 3,38 (d, IH), 3,67 (d, IH), 6,73 (s, IH), 7,05 (d, IH), 7,10 (s, IH), 7,21 (s. lH)a8.49 (d, IH).

Benzopyrany a dihydrobenzopyrany, jak jsou definovány v odstavci 1 výše, například sloučeniny obecného vzorce I, jak jsou zde definovány, a jejich N-oxidy, a fyziologicky hydrolyzovatelné a fyziologicky přijatelné estery těchto sloučenin, jakož i farmaceuticky přijatelné soli s kyselinami nebo kvartemí amoniové soli těchto benzopyranů/dihydrobenzopyranů/ Noxidů/esterů (zde budou dále označovány jako sloučeniny podle vynálezu), jsou použitelné jako léčiva.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují účinek relaxantu hladkého svalstva a účinek otevírání draslíkových kanálků u plazmatických membrán, jak bylo prokázáno jejich vlivem při koncentracích 1 až 500 nM na tenzi a vymývání Rb’ z různých preparátů hladkého svalstva, a to metodou nebo analogicky podle metod, popsaných v Quast, Brit. J. Pharmac., 91, 569 až 578 (1987). Sloučeniny podle vynálezu je proto možno charakterizovat jako činidla, otvírající K' kanálky.

Sloučeniny podle vynálezu jsou proto použitelné pro léčení stavů nebo poruch, pro jejichž léčení jsou indikována činidla, otvírající K⁺ kanálky. Terapeutická použitelnost jako činidel otvírajících K⁺ kanálky může být dále prokázána při standardních farmakologických testech, například kardiovaskulárním účinkem, in vitro nebo in vivo. Tak vliv na krevní tlak může být demonstrován u anestetizovaných normotenzních krys s drenáží a následnou intraduodenální aplikací 1 hodinu po zavedení drenáže. Anti-ischemický účinek se může prokázat postupem podle metod, popsaných v práci Hof a j., Circ. Res., 62, 679 (1988). Sloučeniny podle vynálezu vykazují hypotenzivní účinek podle prvně popsané testovací metody při prahových dávkách od asi 0,03 do asi 1,0 mg/kg intraduodenálně a anti-ischemický účinek podle posledně uvedené metody v dávkách od asi 0,001 do asi 0,03 mg/kg intravenózně.

Sloučeniny podle vynálezu jsou proto použitelné například jako relaxanty hladkého svalstva, zejména jsou použitelné jako vasodilatační činidla, například pro léčení hypertenze nebo chronických srdečních nedostatečností. Jsou dále použitelné jako anti-ischemická a antivasospastická činidla, například pro léčení poruch zásobování krví, například do srdce, svalstva nebo mozku. Jsou také použitelné například pro léčení angíny pectoris, ischemie myokardu nebo

-20CZ 282091 B6 infarktu myokardu, jako činidla proti fibrilaci, pro léčení poruch periferní cirkulace, například přerušovaného kulhání, Raynaudovy nemoci nebo cévních vředů, jakož i pro léčení, včetně profy laxe, mozkové ischemie, stařecké demence, mrtvice, subarachnoidálního krvácení a jiných příbuzných nebo následných onemocnění nebo poruch.

Sloučeniny podle vynálezu se dále indikují pro použití jako antispastická činidla gastrointestinálního traktu, dělohy nebo močového traktu, například pro léčení duodenálních nebo peptických vředů, podráždění tlustého střeva, zánětu divertikulu, nebezpečí spontánního potratu po předčasné práci a neschopnosti udržet moč.

Sloučeniny podle vynálezu se dále indikují pro použití jako činidla, podporující růst vlasů, například pro léčení ztráty vlasů při stárnutí, například plešatosti mužů nebo holohlavosti, nebo onemocnění, spojených se ztrátou vlasů, například po infekci nebo poruše imunitního systému.

Vhodné dávky pro takovéto použití jsou samozřejmě různé, například závisí na příslušných stavech, které mají být léčeny, na typu sloučeniny podle vynálezu, způsobu podání a na požadovaném účinku. Obecně však vhodnou denní dávkou pro orální podávání například pro antihypertenzní použití je množství od asi 0,03 do asi 2,0 mg/kg a pro anti-ischemické použití od asi 0,015 do asi 0,3 mg/kg. Pro větší savce, například lidi, se podává orální denní dávka od asi 2 do asi 150 mg pro antihypertenzní použití, nebo od asi 1 do asi 20 mg pro anti-ischemické použití, přičemž se tato dávka podává najednou nebo v rozdělených dávkách dvakrát denně. Orální dávkové formy pro výše uvedené indikace tak s výhodou obsahují od asi 0,5 nebo 1,0 do asi 20 nebo 150 mg sloučeniny podle vynálezu spolu s vhodným farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Pro použití jako činidla, stimulujícího růst vlasů, se sloučeniny podle vynálezu aplikují topicky, například na bázi vhodného krému, gelu nebo emulze, nebo podobným způsobem, známým v daném oboru.

V souvislosti s předloženým vynálezem bylo nyní nalezeno, že sloučeniny podle vynálezu vykazují bronchodilatační účinek a snižují nebo ruší hyperaktivitu dýchacích cest. Tyto aktivity je možno demonstrovat ve farmaceutických modelech in vivo a in vitro, například následovně:

Testi. Bronchodilatační účinek.

1.1 Test na morčatech.

Morčata (Dunkin-Hartley, samci, 400 až 600 g) se anestetizují fenobarbitalem (100 mk/kg intraperitoneálně) a pentobarbitalem (30 mk/kg intraperitoneálně) a paralyzují se gallaminem (8 mg/kg intramuskulámě) a nechají se dýchat směs vzduchu a kyslíku (45 : 55, obj./obj.). Zvířata dýchají pomocí tracheální trubice (10 ml/kg, 1 Hz). Krevní tlak a srdeční tep se snímají z krční tepny. Dýchání se monitoruje průtokovým převodníkem. Při měření průtoku se současné změny tlaku v thoraxu monitorují přímo přes intrathorakální trokar, umožňující ukázat diference tlaku vzhledem k průdušnici. Z této informace se vypočítává rezistence a kompliance každého vdechu.

Intravenózní infuzí bombesinu (100 ng/kg/h) se indukuje trvalý bronchospasmus. Kapacita testované látky zvrátit odpověď při její aplikaci intratracheálním způsobem slouží jako měřítko účinnosti při revertování vyvolaného bronchospasmu. Odpověď bronchodilátoru se bere jako procentické snížení maximální reakce na bombesin, měřené v pravidelných intervalech.

Při výše popsaném testovacím modelu sloučeniny podle vynálezu ruší bronchospasmus při použití dávek od asi 0,001 do asi 1,0 mg/kg.

-21 CZ 282091 B6

1.2 Test u opic Rhesus

Opice Rhesus (samci a samice, tělesné hmotnosti 6,8 až 11,8 kg), které jsou známé normální reakcí na methacholin (MeCH), se anestetizují (nejprve ketaminem 20 mg/kg intramuskulámě, potom pro udržení thiopentalem 8 mg/kg/h intravenózně). Do trachey se jim potom zavede pediatrická endotracheální trubice (5,0 cm), opatřená manžetou (xylokain, topická aplikace u epiglotu) a měří se základní plicní rezistence.

Po těchto krocích se na hraně aplikují 2 ml xylokainu (1 % hmot./obj. roztok) pediatrickým fibroptickým bronchoskopem. Po 10 minutách se znovu změří plicní rezistence. Xylokain nemá žádný účinek na základní rezistenci. Potom se stejným způsobem, jako byla provedena aplikace xylokainu, podává testovaná sloučenina ve formě suspenze v laktózovém nosiči (1 mg/ml, dodává se 1 ml objemu) najednou v 30 minutových intervalech. V časovém bodu 15 minut se pro vyvolání odezvy aplikuje jedna dávka MeCH (0,6 až 2,5 mg/ml roztoku, která je vypočtená pro přibližně 50 až 100 % změnu od základu) a z reakce po aplikaci nosiče se vypočítává procento inhibice.

Sloučeniny podle vynálezu jsou účinné jako bronchodilátory závislé na dávce, ve výše popsaném testu jsou účinné v dávkách od asi 10 ng/kg do asi 10 pg/kg.

Test 2. Potlačování hyperaktivity dýchacích cest.

2.1 Hyperaktivita indukovaná PAF

Morčata se připraví pro monitorování plicních funkcí postupem, popsaným výše v testu 1.1. Intravenózní injekce histaminu (1,8 až 3,2 ng/kg) vyvolá citlivost dýchacích cest na spasmogen. Po infuzi PAF (destičky aktivující faktor) po dobu 1 hodiny (celková dávka 600 ng/kg) opakovaná injekce histaminu se projeví vývojem hyperaktivity dýchacích cest, která se může vhodně vyjádřit jako zdvojený rozdíl mezi amplitudou reakce před a po vystavení PAF.

Po aplikaci sloučenin podle vynálezu intratracheálně po podání PAF v dávkách od asi 0,1 do asi 100 pg/kg se pozoruje zvrat hyperaktivity dýchacích cest.

2.2 Hyperaktivita indukovaná imunním komplexem.

Morčata se připraví pro monitorování plicních funkcí postupem, popsaným výše v testu 1.1. Alergická reakce se iniciuje intravenózní injekcí předem připraveného imunního komplexu (připraví se přidáním 30 pg hovězího gama-globulinu v 0,05 ml solného roztoku k 0,05 ml morčecího anti-hovězího gama globulinového anti-séra) v pravidelných (10 minutových) intervalech po dobu 30 minut. Intravenózní injekce histaminu (1,0 až 3,2 pg/kg v 10 minutových intervalech) se použijí pro definování citlivosti dýchacích cest před a po poslední expozici imunního komplexu. Hyperaktivita dýchacích cest se vyjádří jako párová diference pro maximální hodnotu rezistence plic v odpovědi na histamin před a po opakované injekci imunního komplexu. Testované sloučeniny se aplikují intratracheálně.

Vyvolaná hyperaktivita dýchacích cest se signifikantně sníží při výše uvedené testovací metodě, podají-li se předem sloučeniny podle vynálezu v dávkách od asi 10 ng/kg do asi 10,0 pg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné zejména jako bronchodilatační činidla a jako činidla pro léčení hyperaktivity dýchacích cest, například jako činidla pro symptomatické, jakož i profylaktické ošetření obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest, zejména astmatu. Jako bronchodilatační činidla se sloučeniny podle vynálezu mohou použít zejména při záchranné terapii, pro léčení plicní konstrikce, například u astmatu. Navíc se může kontinuální

-22CZ 282091 B6 aplikace sloučenin podle vynálezu použít pro kontrolu, omezení nebo obrat hyperaktivity dýchacích cest nebo pro včasnou ochranu proti recidivě bronchokonstrikčního ataku následkem obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest, zejména astmatu. Výrazy léčení, jak jsou použity v popisu a v patentových nárocích ve vztahu k použití sloučenin podle vynálezu pro léčení obstruktivních nebo zánětlivých dýchacích onemocnění, zejména astmatu, je třeba chápat tak, že zahrnují jak profylaktickou tak symptomatickou (t. j. bronchodilatační) terapii, pokud ovšem není uvedeno jinak.

Podle toho, co bylo výše uvedeno, se předložený vynález také týká:

4. Způsobu léčení jakékoliv nemoci nebo stavu zde specifikovaného, zejména

4.a způsobu léčení obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest, včetně

4.a.l způsobu symptomatického léčení zánětlivých nebo obstruktivních onemocnění dýchacích cest, například ovlivňování bronchodilatace, nebo

4. a.2 způsobu profylaktického ošetření zánětlivých nebo obstruktivních onemocnění dýchacích cest, například pro léčení hyperaktivity dýchacích cest u subjektů, které toto ošetření potřebují, přičemž tento způsob spočívá v podávání účinného množství sloučeniny podle vynálezu těmto subjektům, nebo alternativně:

5. sloučeniny podle vynálezu pro použití jako léčiva, například pro použití k ošetření jakékoliv nemoci nebo stavu, jak byly výše specifikovány, zejména pro použití k léčení obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest, například jak bylo výše uvedeno v odstavcích

4.a. 1, 4.a.2, nebo

6. farmaceutického prostředku, obsahujícího sloučeninu podle vynálezu nebo použití sloučeniny podle vynálezu pro přípravu farmaceutického prostředku, použitelného pro ošetřování onemocnění nebo stavů, jak zde byly specifikovány, zejména pro použití podle odstavce 5 výše.

Zánětlivá nebo obstruktivní onemocnění, na která lze aplikovat předložený vynález, zahrnují astma jakéhokoliv typu nebo původu, včetně jak astmatu vnitřního, tak zejména astmatu vyvolaného z vnějšku. Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné pro léčení alergického astmatu buď atopického (t. j. způsobeného IgE) nebo neatopického, jakož i například průduškového astmatu, astmatu vyvolaného tělesnou námahou, astmatu vyvolaného povoláním, astmatu následujícího po bakteriální infekci a ostatních druhů nealergického astmatu. Léčení astmatu může také zahrnovat léčení subjektů, například méně než 4 nebo 5 let věku, vykazujícího sípavé symptomy, zejména v noci, a diagnozovaných nebo diagnozovatelných jako sípavý' kojenec, což je typická kategorie pacientů většiny lékařských zařízení, a která je nyní správněji nazývána jako počáteční nebo ranná fáze astmatu. (Pro zjednodušení je tento stav nazýván jako syndrom sípavého kojence).

Profylaktická účinnost v léčení astmatu je doložena sníženou četností nebo vážností symptomatického záchvatu, například akutního nebo bronchokonstrikčního záchvatu.

Může být dále doložena snížením požadavků na další symptomatickou terapii, t. j. na terapii, která je používána nebo zamýšlena používat pro omezení nebo přerušení symptomatického záchvatu, který již nastal, například protizánětlivá (například kortikosteroidy) nebo bronchodilatační (například beta2-adrenergní) terapie.

Profylaktický užitek u astmatu může být zejména zřetelný u osob se sklonem k ranním záchvatům. Ranní záchvaty se rozpoznávají jako astmatické syndromy, běžné pro podstatné

-23 CZ 282091 B6 procento astmatiků, které jsou charakteristické astmatickým záchvatem, například mezi 4. a 6. hodinou ranní, to je v době, která je v podstatě vzdálena od jakékoliv předcházející terapie symptomatického astmatu.

Zánětlivá nebo obstrukční onemocnění dýchacích cest, na která je předložený vynález aplikovatelný, také zahrnují pneumoconiosis (zánětlivé onemocnění plic, obvykle z povolání, často provázené obstrukcí dýchacích cest, buď chronické nebo akutní a vyvolané opakovanou inhalací prachů) jakéhokoliv typu nebo původu, včetně například onemocněni, jako jsou aluminóza, anthrakóza, azbestóza, chalikóza. ptilóza, sideróza, silikóza, tabakóza a zejména byssinóza.

Další zánětlivá nebo obstrukční onemocnění dýchacích cest a stavů, na které je předložený vynález aplikovatelný, zahrnují respirační tísňový syndrom u dospělých (ARDS), chronické obstrukční plicní nebo dýchací onemocnění (COPD nebo COAD) a bronchitidu, jakož i exacerbaci hyperaktivity dýchacích cest, následující po jiné léčebné terapii, zejména jiné inhalační terapii, například terapii beta-agonistovým bronchodilátorem, včetně použití sloučenin podle vynálezu jakožto bronchodilátoru pro léčení chronických nebo akutních obstrukcí dýchacích cest, jakož i dušnosti, spojené s kteroukoliv touto nemocí nebo stavem.

Pro použití při léčení zánětlivých nebo obstrukčních onemocnění dýchacích cest se sloučeniny podle vynálezu mohou aplikovat běžným způsobem, zejména enterálně, například orálně, například ve formě tablet nebo kapslí, nebo parenterálně, například ve formě injikovatelných roztoků nebo suspenzí. S výhodou se však aplikují pulmonálně, například inhalací příslušnými rozprašovači, inhalátory nebo podobnými zařízeními, známými ze stavu techniky.

Dávky použité pro léčení zánětlivých a obstrukčních onemocnění dýchacích cest se samozřejmě mohou měnit v závislosti například na příslušném stavu, který má být léčen, na konkrétní použité sloučenině podle vynálezu, na způsobu aplikace a na požadovaném efektu.

Obvykle se však pro pulmonální aplikaci u větších savců, například lidí, vhodná denní dávka, aplikovaná do plic, pohybuje řádově od asi 0,1 pg do asi 100 pg, zejména od asi 1,0 pg do asi 50,0 pg, přičemž tato dávka se vhodně aplikuje z inhalačního zařízení jednou nebo dvakrát až čtyřikrát denně v sérii 1 až 4 nádechů při každé aplikaci.

Při orální aplikaci je vhodná denní dávka obecně řádově od asi 0,1 do asi 30 pg/kg. Vhodná orální denní dávka pro větší savce, například lidi, se tak pohybuje řádově od asi 7 pg do asi

2,1 mg, podaná v jedné dávce, v rozdělených dávkách dvakrát až čtyřikrát denně nebo ve formě postupně uvolňovaného léku. Orální jednotkové dávkové formy pro takovéto použití tak obsahují vhodně od asi 1.75 pg do asi 2,1 mg sloučeniny podle vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

V této souvislosti je zejména nutno poznamenat, že sloučeniny podle vynálezu jsou obecně účinné jako bronchodilátory nebo jako činidla pro léčení hyperaktivity dýchacích cest, a to v dávkách, zejména v dávkách pro inhalaci, při kterých kardiovaskulární účinky, které by byly nežádoucí ve vztahu k této terapii, například hypotenzivní efekt nebo tachykardie, nejsou signifikantní nebojsou v přijatelných mezích ve vztahu k praktikované terapii.

Podle toho, co bylo výše uvedeno, se předložený vynález také týká:

7. Farmaceutického prostředku, který se vyznačuje tím, že obsahuje sloučeninu podle vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

-24CZ 282091 B6

Tyto prostředky se mohou připravovat běžným způsobem, například pro pulmonální aplikaci smísením sloučeniny podle vynálezu v jemně dispergované formě například s jemně práškovanou laktózou jako nosičem nebo ředidlem, přičemž se získá prášek vhodný pro inhalaci.

Jak již bylo uvedeno výše, požadavky na terapeutické dávky při praktickém uplatňování předloženého vynálezu jsou různé a závislé na řadě faktorů. Dávky pro konkrétní sloučeniny podle vynálezu jsou také závislé na jejich relativní účinnosti. Pro výhodnou sloučeninu podle vynálezu, jmenovitě pro produkt podle příkladu 1 v čisté nebo v podstatě čisté (3S,4R) enantiomemí formě, bylo při testu podle postupu 1.1 nalezeno ID₅₀ 0,02 mg/kg, i. t. Při stejném testu byla pro známý inhalační bronchodilátor - salbutamol - /alfa’-//(l,l-dimethylethyl)amino/methyl/-4-hydroxy-l,3-benzenmethanol/ nalezena hodnota ID₅o 0,001 mg/kg. Příslušné dávky sloučeniny podle příkladu 1 při inhalační aplikaci, například pro bronchodilatační účinek při léčení astmatu, jsou tak přibližně dvacetinásobkem běžně používaného salbutamolu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I (I), kde

Ri a R₂ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku nebo alkoxyalkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové i alkylové části, přičemž alespoň jeden ze substituentů Ri a R₂ je jiný než atom vodíku,

R₃ je skupina obecného vzorce -N(R₉)-CORio, kde R₉ je atom vodíku a Rio je pyridyl, nebo R₉a R₁₀ spolu dohromady tvoří 1,3-butadienylenovou skupinu, nebo znamenají skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n- nebo -(CH₂)_m kde n je celé číslo od 3 do 5 včetně a m je 1 nebo 2,

R4 je atom vodíku a R₅ je hydroxyskupina v trans poloze vzhledem k R₃, nebo

R4 a Rj spolu dohromady znamenají další vazbu, jak je naznačeno tečkovanou čárou,

Ró a R₇ jsou nezávisle na sobě alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku, a

R₈ je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku,

-25 CZ 282091 B6 nebo jejich N-oxidy, nebo fyziologicky hydrolyzovatelné a fyziologicky přijatelné acetáty těchto benzopyranů nebo N-oxidů, nebo soli s kyselinami nebo kvartemí amoniové soli těchto benzopyranů, N-oxidů nebo acetátů.
2. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterých

R4 je atom vodíku, R₅ je hydroxyskupina v poloze trans vzhledem k R₃, R^ a R₇ jsou oba methylové skupiny a

A) R₃ je skupina vzorce a

A¹) R, je methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, isobutylová skupina, hydroxymethylová skupina nebo methoxymethylová skupina a

R₂ a Rg jsou atomy vodíku, nebo

A²) Ri a Rg jsou atomy vodíku a

R₂ je methylová skupina, nebo

A³) RiaRg jsou methylové skupiny a

R₂ je atom vodíku, nebo

B) R₃ je skupina vzorce a

B¹) R, je methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, isobutylová skupina nebo methoxymethylová skupina a

R₂ a Rg jsou atomy vodíku, nebo

B²) R, a R₂ jsou methylové skupiny a

Rg je atom vodíku, nebo

-26CZ 282091 B6

B³) R! a Rg jsou methylové skupiny a

R? je atom vodíku, nebo

C) R₃ je skupina vzorce

I

I

N nebo

Ri je methylová skupina a

R₂ a Rg jsou atomy vodíku, nebo ve kterých

R, je methylová skupina a

R₂ je atom vodíku nebo

Ri je atom vodíku a

R₂ je methylová skupina,

Ré a R₇ jsou methylové skupiny,

Rg je atom vodíku,

R4a R₅ spolu dohromady znamenají další vazbu a

R₃ je skupina vzorce nebo jej ich N-oxidy, nebo fyziologicky hydrolyzovatelné a fyziologicky přijatelné acetáty těchto benzopyranů nebo N-oxidů nebo soli s kyselinami nebo kvartemí amoniové soli těchto benzopyranů, N-oxidů nebo acetátů.
3. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterých R_baR₇ představují vždy methylovou skupinu, R₂, R; aRg znamenají vždy atom vodíku, představuje hydroxylovou skupinu v trans poloze vzhledem k R₃, a R₃ znamená skupinu vzorce

-27CZ 282091 B6

CO-NHnebo jejich N-oxidy nebo adiční soli těchto benzopyranů nebo N-oxidů s kyselinami.
4. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterých

Ri představuje atom vodíku,

R₅ znamená hydroxyskupinu v poloze trans vzhledem k R₃ a symboly R, R₂, R₃, R«, R? a R₈maj í významy, uvedené v nároku 1, nebo jejich N-oxidy, acetáty nebo soli, jak jsou definovány v nároku 1, v (3S,4R)-enantiomemí formě.
5. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I podle nároku 3 v (3S,4R)enantiomemí formě.
6. Způsob přípravy 6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyranů, jejich N-oxidů, acetátů nebo solí, obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se

i) pro přípravu výše uvedených benzopyranů i¹) nechá reagovat la,7b-dihydro-2,2-dialkyl-6-(pyridin-4-yl)-2H-oxireno[c][l]benzopyran ve kterém mají symboly R_b R₂, Re, R₇ a R₈ významy uvedené výše v případě obecného vzorce I, se solí karboxamidové skupiny s alkalickým kovem obecného vzorce III

Θ ©

Rig- CO— N-Rg M (III), ve kterém mají symboly R₉ a R10 významy uvedené výše v případě obecného vzorce I a M znamená lithný, sodný nebo draselný ion, nebo se

-28CZ 282091 B6 >²) acyluje, a, v případě potřeby, alkyluje aminoskupina 4-amino-6-(pyridin-4-yl)-2H-lbenzopyranu obecného vzorce IV ve kterém mají symboly R_b R₂ a R4 až R_g významy uvedené výše v případě obecného vzorce I, reakcí se sloučeninou obecného vzorce V, V nebo V

Rjo-CO-X¹ (V)

X²-(CH₂)_n-COX‘ (V) (V) kde R' 10 představuje pyridvlovou skupinu a symboly X¹ a X² znamenají odštěpitelné skupiny, a ii) pro přípravu benzopyran-N-oxidů nebo acetátů výše uvedených benzopyranů nebo benzopyran-N-oxidů se acetyluje benzopyran nebo benzopyran-N-oxid, jak jsou definovány výše, mající volnou hydroxyskupinu nebo hydroxylovou část, pro zavedení acetylové skupiny, nebo/a se oxiduje benzopyran nebo jeho acetát, jak je definován výše, a získaný benzopyran, benzopyran-N-oxid nebo acetát se izoluje ve volné formě nebo ve formě soli s kyselinou nebo ve formě kvartemí amoniové soli.
7. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyrany obecného vzorce I, jejich N-oxidy, acetáty nebo farmaceuticky přijatelné soli, podle nároku 1, pro použití jako léčiva.
8. Farmaceutický prostředek pro použití k léčení obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest, vyznačující se tím, že obsahuje 6-(pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran obecného vzorce I, jeho N-oxid, acetát nebo farmaceuticky přijatelnou sůl, podle nároku 1, spolu s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
9. 6-(Pyridin-4-yl)-2H-l-benzopyran obecného vzorce I, jeho N-oxid, acetát nebo farmaceuticky přijatelná sůl, podle nároku 7, pro léčení obstruktivních nebo zánětlivých onemocnění dýchacích cest.