CZ280415B6 - Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů - Google Patents
Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ280415B6 CZ280415B6 CS893078A CS307889A CZ280415B6 CZ 280415 B6 CZ280415 B6 CZ 280415B6 CS 893078 A CS893078 A CS 893078A CS 307889 A CS307889 A CS 307889A CZ 280415 B6 CZ280415 B6 CZ 280415B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lysergol
- elymoclavin
- medium
- fructosides
- sucrose
- Prior art date
Links
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 229930182479 fructoside Natural products 0.000 title claims description 18
- 150000008132 fructosides Chemical class 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 9
- DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N elymoclavine Natural products C1=CC(C2C=C(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N Isochanoclavine I Natural products C1=CC(C(C(NC)C2)C=C(C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- BIXJFIJYBLJTMK-UHFFFAOYSA-N Lysergol Natural products C1=CC(C2=CC(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 BIXJFIJYBLJTMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 14
- BIXJFIJYBLJTMK-MEBBXXQBSA-N lysergol Chemical compound C1=CC(C2=C[C@@H](CO)CN([C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 BIXJFIJYBLJTMK-MEBBXXQBSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 claims abstract description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 241000124232 Claviceps fusiformis Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 abstract description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 abstract description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 abstract description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 abstract description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract 2
- SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N chanoclavine-I Chemical compound C1=CC([C@H]([C@H](NC)C2)\C=C(/C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N 0.000 abstract 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 abstract 1
- IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N elymoclavine Chemical compound C1=CC=C2[C@H]3C=C(CO)CN(C)[C@@H]3CC3=CN=C1[C]32 IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N 0.000 abstract 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000006097 fructosylation Effects 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 11
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 11
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- -1 Elymoclavin fructosides Chemical class 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 4
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 4
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 241000221760 Claviceps Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- XGZRAKBCYZIBKP-UHFFFAOYSA-L disodium;dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Na+].[Na+] XGZRAKBCYZIBKP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000000451 chemical ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000006455 gy-medium Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 125000000075 primary alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Způsob přípravy fluktocidů námelových alkaloidů elymoklavinu, chanoklavinu, lysergolu a DH-lysergolu, který spočívá v tom, že na tyto námelové alkaloidy se působí volným nebo imobilizovaným myceliem houby kmenů Claviceps purpurea nebo Claviceps fusiformis v mediu s 50 - 100 g sacharosy/l na pH 5,8 až 7,0 obsahujícím anorganické sole například dusičnan vápenatý, kyselý fosforečnan draselný, chlorid vápenatý, síran hořečnatý, chlorid draselný, síran amonný a/nebo biologicky aktivní látky například kvasničný autolyzát, kukuřičné máčecí vody, načež meziprodukt se z media sorbuje na bentonit a po desorpci se dělí, s výhodou několinásobnou kapalinovou chromatografií na kolonách s reverzní fází C-18 a mobilní fází směsí methanolu, vody a amoniaku.ŕ
Description
Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu přípravy fruktosidů námelových alkaloidů elymoklavinu, chanoklavinu, lysergolu a DH-lysergolu.
Dosavadní stav techniky
Objevem elymoklavin-O-B-D-fruktosidů Flossem a kol.(Z.Naturforsch. 22b, 339, 1967) a elymoklavin-O-B-D-fruktofuranosyl (2—1)-O-B-D-fruktofuranosidu (Flieger a kol. J. Nat. Prod. 1989a), analogických fruktosidů chanoklavinu (Flieger a kol. J. Nat. Prod., 1989b), lysergolu a DH-lysergolu (Křen a kol. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1989) byla formována nová skupina námelových alkaloidů - glukosidy námelových alkaloidů.
Elymoklavin fruktosid je syntetizován ze sacharósy a elymoklavinu účinkem enzymu B-D-fruktofuranosidasy (Dickerson Biochem. J. 129, 363, 1972), který štěpí sacharózu na glukózu, utilizovanou organismem k růstu a fruktózu, která je přenášena na akceptor s primární alkoholickou skupinou, tj. např. na elymoklavin. Elymoklavin difruktosid vzniká z monofruktosidu přenosem fruktózy na volnou hydroxymethyl skupinu fruktózového zbytku. Analogicky vznikají i další fruktosidy námelových alkaloidů.
Tyto látky nebyly dosud získány ve větším množství, které by umožnilo studium jejich biologických aktivit a případně jejich využití ve farmacii. U elymoklavin-fruktosidů je možno předpokládat jisté imunomodulační účinky, které byly nalezeny u jejich aglykonu elymoklavinu (Šterzl a kol. Cz. Med. 1, 90, 1989), případně je možné jejich využití jako substrátu pro přípravu derivátů námelových alkaloidů.
Nevýhodou kmenů, které byly dosud popsány jako producenti těchto substancí, je nízká produkce a dlouhá kultivační doba, potřebná k jejich fermentativní přípravě. Kromě toho např. fruktosidy chanoklavinu, lysergolu a DH-lysergolu nelze připravit jinak než konverzí - fruktosylací - přeformovaných alkaloidů.
Jedním z důležitých parametrů glykosylační aktivity u C. purpurea je koncentrace donoru fruktózy, tj. koncentrace sacharózy. Při nižších koncentracích sacharózy se projevuje nedostatek saturace substrátem, při vyšších koncentracích sacharóza sama kompetuje s alkaloidem o přenos fruktózy. Dalším důležitým parametrem pro funkci invertas je pH. O některých bifunkčních invertasách je známo, že jejich hydrolytická aktivita je vyšší v kyselém prostředí (ve směru štěpení glykosidů), naopak jejich syntetická aktivita (ve směru glykosylace) vzrůstá směrem k neutrálnímu až slabé bázickému pH.
Pro glykosylaci elymoklavinu platí tato závislost striktně; při posuvu od pH 5 - 5,5 k neutrální oblasti pH 6,5-6,7 se glykosylační aktivita zvyšuje asi 5x.
pH-optimum pro glykosylaci chanoklavinu je však odlišné - asi pH 5,8. Souvisí to zřejmě s rozdílnými disociačními kons
-1CZ 280415 B6 tantami elymoklavinu a chanoklavinu. Při uvedených pH-optimech obou alkaloidů je poměr disociované složky ku nedisociované roven přibližně 1. Optimalizací pH lze tedy docílit několikanásobného zvýšení výtěžku glykosidu námelových alkaloidu.
Dalším faktorem je vývojová závislost aktivity invertasy s věkem kultury. Maximální aktivity glykosylace se dosahuje asi 15. den věku produkční kultury. Tato závislost je způsobena jednak vyšší aktivitou enzymu v diferencovaném stadiu, ale i vyšší schopností kultury v tomto období neutralizovat médium.
Podstata vynálezu
Uvedené nevýhody, tj. nízké výtěžky fruktosidů elymoklavinu a obtížné získání fruktosidů alkaloidů, odstraňuje způsob podle vynálezu, jehož podstatou je, že se na námelové alkaloidy elymoklavin, chanoklavin, lysergol a DH-lysergol působí volným nebo imobilizovaným myceliem houby kmenů Claviceps purpurea nebo Claviceps fusiformis v médiu s 50 - 100 g sacharózy a pH 5,8 až 7,0, obsahujícím anorganické soli, například dusičnan vápenatý, kyselý fosforečnan draselný, chlorid vápenatý, síran horečnatý, chlorid draselný, síran amonný a/nebo biologicky aktivní látky, například kvasniční autolyzát, kukuřičné máčecí vody, načež meziprodukt se z média sorbuje na bentonit a po desorpci se dělí s výhodou několikanásobnou kapalinovou chromatografii na kolonách s reverzní fází C-18 a mobilní fází směsí methanolu, vody a amoniaku.
Příklady provedení vynálezu
Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů je doložen následujícími příklady, aniž by předmět vynálezu byl jakkoliv omezen.
Příklad 1
Fruktosylace elymoklavinu
Pro fruktosylaci námelových alkaloidů byl použit kmen Claviceps purpurea 88-EP-47, který byl vyšlechtěn na vysokou glykosylační aktivitu.
Pro glykosylaci alkaloidů bylo použito promyté mycelium kmene C. purpurea 88-EP-47, narostlé na půdě TI (viz. tab. 1). Mycelium bylo za sterilních podmínek resuspendováno v médiu NP (viz. tab. 1) pro zamezení dalšího růstu a produkce alkaloidů de novo. Alkaloidy byly přidávány jako sterilní roztok ve formě citrátu v konc. 1,5 g/1. Pro fruktosylaci elymoklavinu byla přidána sacharóza v koncentraci 75 g/1. Na obrázku č.l je znázorněna závislost glykosylační aktivity mycelia kmene C. purpurea na koncentraci sacharózy v médiu NP. Na ose S je vynesena koncentrace sacharózy v g/1, na ose K jsou vynesena procenta biokonverze elymoklavinu na celkové fruktosidy elymoklavinu (-o-) a na elymoklavin monofruktosid (-o-). pH pro konverzi elymoklavinu bylo udržováno na hodnotě 6,5. Na obrázku č.2 je znázorněna závislost glykosylační aktivity mycelia kmene C. purpurea na pH média NP (při konc. sacharózy 100 g/1). Na ose x je vyneseno pH média NP, na ose K
-2CZ 280415 B6 jsou % biokonverze elymoklavinu na celkové fruktosidy elymoklavinu (-o-) a na elymoklavin monofruktosid (-o-). V tomto případě lze s výhodou použít mycelium z desetidenního inokula na půdě TI, nebo mycelia z produkční kultivace na půdě CS2 (viz. tab. 1).
Separace alkaloidů:
Alkaloidy byly separovány z kultivační tekutiny po úpravě pH amoniakem na hodnotu 7,5 adsorpcí na bentonit (Lachema, Brno) (2 x 50/500 ml), desorbovány methanolem (3 x 100 ml) a směs alkaloidů byla odpařena na vakuové odparce na celk. objem 10 ml. Roztok byl nanesen (5 x 2 ml) na preparační nízkotlakou chromatografickou kolonu, plněnou Separonem SGX C18 (35g, 25 x 2,0 cm, zrnění 50 μιη) a eluován směsí methanol-voda-konc. čpavek (30:70:0,34). Detekce byla prováděna UV světlem při 288 nm, první frakce obsahovala směs glykosidů elymoklavinu. Další dělení bylo prováděno na HPLC Sepron SGX C18 (25 x 0,8 cm, zrnění 7 μιη) za podmínek jako při stanovení.
Identifikace byla provedena hmotovou spektrometrií na přístroji Finigan MAT 90 technikou Dl-ci a DCI, teplota na vstupu 250 °C, teplota vzorku rostla od 25 do 300 ’C rychlostí 1 °C/min, iontový tok 0,2 mA, urychlovací napětí 5 kV, chem. ionizace NH3. Cims elymoklavin difruktosidu (m/z - rel. int. %) :417-33, 416-22, 254-23, 253-30, 237-100, 236-85, 223-9, 207-6,
167-9, 154-6, 127-1. Cims elymoklavinu difruktosidu (m/z - rel.
int. %) 597-25, 578-8, 416-10, 254-60, 253-45, 237-100, 236-93,
223-7, 207-3, 167-9, 154-10, 127-24.
Příklad 2
Fruktosylace chanoklavinu
Fruktosylace chanoklavinu se provádí stejně, jak je uvedeno v příkladu 1, pouze s tím rozdílem, že pH média NP bylo udržováno na hodnotě 5,8.
Dělení a charakterizace chanoklavin fruktosidů bylo prováděno obdobně jako v příkladu 1.
Cims chanoklavin monofruktosidu (m/z - rel. int. %) 154-19, 183-62, 239-71, 257-82, 418-47, 419-100.
Cims chanoklavin difruktosidu (m/z - rel. int. %) 154-14,
163-29, 183-39, 239-56, 257-53, 418-28, 419-100, 502-14, 582-29.
Příklad 3
Fruktosylace lysergolu
Fruktosylace lysergolu byla prováděna za stejných podmínek, jako v příkladu 1, pouze s tím rozdílem, že bylo použito lysergolu ve formě sterilního roztoku citrátu, upraveného na finální konc. 1,5 g/1, médium NP s obsahem sacharózy 75 g/1 a pH 6,5.
Výtěžky konverze jsou uvedeny v tabulce 2. Glykosidy lysergolu
-3CZ 280415 B6 byly analyzovány, jak je uvedeno v příkladu 1, a identifikace byla provedena pomocí HPLC. Fruktosidy lysergolu po hydrolýze kvasničnou invertázou dávají odpovídající aglykon, který se identifikuje srovnáním se standardem.
Příklad 4
Frutosylace DH-lysergolu
Fruktosylace DH-lysergolu byla prováděna stejně, jako v příkladu 3, pouze s tím rozdílem, že pro fruktosylaci byl použit DH-lysergol. Výsledky konverze jsou uvedeny v tabulce 2. Dělení a identifikace fruktosidů DH-lysergolu byly prováděny, jak je uvedeno v příkladu 3.
Příklad 5
Fruktosylace kmene Claviceps fusiformis
Biokonverze námelových alkaloidů se provádí, jak je uvedeno v příkladech 1 až 4, pouze s tím rozdílem, že jako biologický materiál (mycelium) se použije kmene Claviceps fusiformis, s výhodou kmen W1 (A.O. 248612), kultivovaný postupem, jak je uvedeno v příkladu 1.
Příklad 6
Fruktosylace elymoklavinu imobilizovaným myceliem kmene Claviceps purpurea.
Pro biokonverzi elymoklavinu bylo použito imobilizovaných buněk kmene Claviceps purpurea, s výhodou kmen 88-EP-47. Pro imobilizaci bylo použito mycelium z inokulační kultury na médiu TI (9. den). Mycelium se imobilizuje do Ca-alginátu (s výhodou Protanal LF 10/60 (Protan, Dramen, Norsko) v A.O. 250474, popř. v práci Křena a kol. (Appl. Microbiol. Biotechnol. 26, 219, 1987). Koncentrace alginátu v biokatalyzátoru byla 3 %, koncentrace biomasy cca 70 mg vlhké váhy/ml biokatalyzátoru. Erlenmayerovy baňky (300 ml) obsahovaly 20 ml biokatalyzátoru v 60 ml média JCS-GY (tab. 1). Elymoklavin byl přidán jako roztok sukcinátu, sterilizovaný filtrací do finální koncentrace 1000 až 4000 mg/1 (viz. tab. 3). Každých 22 dní bylo médium s elymoklavinem nahrazeno novým. Kultivace probíhala na třepačce za podmínek, uvedených v příkladu 1. Výsledky biokonverze jsou uvedeny v tabulce 3 .
Příklad 7
Biokonverze chanoklavinu, lysergolu a DH-lysergolu imobilizovaných myceliem kmene Claviceps purpurea.
Bylo postupováno stejně, jako v příkladu 6, pouze s tím rozdílem, že ke konverzi byly použity roztoky chanoklavinu nebo lysergolu nebo DH-lysergolu v koncentracích 1 500 mg/1.
-4CZ 280415 B6
Dále je uvedena tabulka 1, ve které je uvedeno složení použitých médií.
Tabulka 1
| komponenta [g/1] | NL8 29 | TI | NP | CS2 | JCSGY |
| sacharóza | 100 | 100 | 100* | 100 | 60 |
| L-asparagin | 10 | 10 | - | - | - |
| Ca(N03)2·4H2O | 1 | 1 | - | - | |
| kh2po4 | 0,25 | 0,25 | - | 0,25 | - |
| CaCl2 | - | - | 1,2 | 1,2 | 1,2 |
| L-cystein.HC1 | - | 0,1 | - | - | — |
| Kys. citrónová | |||||
| monohydr. | - | - | 16,8 | 16,8 | 2 |
| Kys. jantarová | - | - | - | - | 8,2 |
| MgSO4.7H2O | 0,3 | 0,3 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
| KC1 | 0,1 | - | 0,12 | 0,12 | 0,12 |
| Kvas, autolyzát | 0,1 | - | - | - | - |
| (nh4)2so4 | — | 10 | - | 10 | - |
| FeSO4.7H2O | 0,02 | - | 0,02 | 0,02 | 0,02 |
| ZnSO4.7H2O | 0,02 | 0,02 | 0,015 | 0,015 | 0,015 |
| pH | 5,5 | 5,5 | 5,5* | 5,5 | 6,5 |
| báze k úpravě pH | nh4oh | NaOH | NaOH | NaOH | NaOH |
| agar | 25 | — | — | - | |
| * hodnota platí, | pokud není | v textu uvedeno jinak | |||
| V tabulce 2, která je uvedena dále, | jsou výtěžky fruktosylace | ||||
| lysergolu a DH-lysergolu myceliem kmene | Claviceps | purpurea | • | ||
| Tabulka 2 | |||||
| %a | |||||
| alkaloid | pb | Ic | |||
| Lysergol | 7,7 | 0,5 | |||
| DH-lysergol | 2,8 | 13,3 |
a konverze na celkové fruktosidy (mono- + oligo-) k biomasa z produkční kultivace na médiu CS2 (14. den), 6 g sušiny/1, doba konverze 50 dní.
c biomasa z inokulační kultivace na TI (9. den), 6 g sušiny/1, doba konverze 50 dní.
Dále je uvedena tabulka 3, ve které jsou výsledky glykosylace elymoklavinu imobilizovanými buňkami Claviceps purpurea.
-5CZ 280415 B6
Tabulka 3
| elymoklavin [mg/1] | 1000 | 2000 | 4000 | ||
| pa | Ib | P | P | ||
| cyklus | trvání cyklu | ||||
| č. | [dny] | ||||
| 1. | 22 | 62,1 | 48,0 | 36,4 | 24,9 |
| 2. | 22 | 38,4 | 50,8 | 18,7 | 17,2 |
| 3 . | 22 | 23,7 | 10,8 | 13,5 | 20,7 |
aP - mycelium pro imobilizaci bylo CS2 (14. den), bI - mycelium pro imobilizaci bylo TI (9. den).
z produkční kultivace na médiu z inokula, narostlého na médiu
Claims (1)
- Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů elymoklavinu, chanoklavinu,lysergolu a DH-lysergolu, vyznačuj icí se tím, že na tyto námelové alkaloidy se působí volným nebo imobilizovaným myceliem houby kmenů Claviceps purpurea nebo Claviceps fusiformis v médiu s 50 - 100 g sacharózy/1 a pH 5,8 až 7,0, obsahujícím anorganické soli, například dusičnan vápenatý, kyselý fosforečnan draselný, chlorid vápenatý, síran hořečnatý, chlorid draselný, síran amonný a/nebo biologicky aktivní látky, například kvasniční autolyzát, kukuřičné máčecí vody, načež meziprodukt se z média sorbuje na bentonit a po desorpci se dělí, s výhodou několikanásobnou kapalinovou chromatografií na kolonách s reverzní fází C-18 a mobilní fází směsí methanolu, vody a amoniaku.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK307889A SK307889A3 (en) | 1989-05-23 | 1989-05-23 | Preparation method of fructosides ergot alkaloids |
| CS893078A CZ280415B6 (cs) | 1989-05-23 | 1989-05-23 | Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS893078A CZ280415B6 (cs) | 1989-05-23 | 1989-05-23 | Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ307889A3 CZ307889A3 (en) | 1993-03-17 |
| CZ280415B6 true CZ280415B6 (cs) | 1996-01-17 |
Family
ID=5369820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS893078A CZ280415B6 (cs) | 1989-05-23 | 1989-05-23 | Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ280415B6 (cs) |
| SK (1) | SK307889A3 (cs) |
-
1989
- 1989-05-23 CZ CS893078A patent/CZ280415B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1989-05-23 SK SK307889A patent/SK307889A3/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK278685B6 (sk) | 1998-01-14 |
| CZ307889A3 (en) | 1993-03-17 |
| SK307889A3 (en) | 1998-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6558943B1 (en) | Method for propagating fungi using solid state fermentation | |
| CZ280901B6 (cs) | Způsob kultivace bakterií | |
| Zhang et al. | Development of a defined medium fermentation process for physostigmine production by Streptomyces griseofuscus | |
| CN113774002A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌培养基及其应用 | |
| US20210130768A1 (en) | Salt formulations for the fermentation of marine microorganisms | |
| KR101579766B1 (ko) | 일종의 사이클릭 리포펩티드 화합물의 제조방법 | |
| EP0547898A2 (en) | Microbial process for the production of trans-4-hydroxy-L-proline | |
| CA2025678C (en) | Natural delta-lactones and process of the production thereof | |
| CZ280415B6 (cs) | Způsob přípravy fruktosidů námelových alkaloidů | |
| CA1154699A (en) | FERMENTATION PROCESS FOR THE PREPARATION OF ERGOT ALKALOIDS, PRIMARILY ERGOCORNINE AND .beta.- ERGOCRYPTINE | |
| US5070191A (en) | Demethylallosamidin and a process for production thereof | |
| Tassi et al. | Effect of glucose on glutamate dehydrogenase and acid phosphatase and its reversal by cyclic adenosine 3′: 5′‐monophosphate in single cell cultures of Asparagus officinalis | |
| CN110468051B (zh) | 一种k252a发酵培养基及其制备方法 | |
| HU182255B (en) | Process for producing mycophenolic acid derivatives | |
| Venkateswarlu et al. | Production of rifamycin using Amycolatopsis mediterranei (MTCC14) | |
| Selim et al. | Specific long-chain fatty acids promote optimal growth of Frankia: accumulation and intracellular distribution of palmitic and propionic acid | |
| Křen et al. | Glycosylation of ergot alkaloids by free and immobilized cells of Claviceps purpurea | |
| ŠIMÚTH et al. | Nucleic acid degradation products of Streptomyces aureofaciens | |
| KR830002916B1 (ko) | 발효에 의한 세팔로스포린 제법 | |
| KR900007642B1 (ko) | 스트렙토마이세스 아우레우스 hb601과 이를 이용한 항생물질 테트라낙틴의 제조방법 | |
| KR960016707B1 (ko) | 스트렙토마이세스 가수가엔시스 kccb 101 및 이를 이용한 농용항생물질의 제조방법 | |
| JPS62195295A (ja) | 発酵法によるクリプトスポリンの製造法 | |
| CS272206B2 (en) | Method of alpha-ergocryptine production | |
| Mukhtar et al. | Enhanced lincomycin production by Streptomyces lincolnensis through optimization of culture conditions | |
| CZ248489A3 (en) | Process for preparing simple derivatives of lysergic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20000523 |