CZ22497A3

CZ22497A3 - Biologically compatible hydrogel

Info

Publication number: CZ22497A3
Application number: CZ97224A
Authority: CZ
Inventors: Boris Ivanovich Pavlyk
Original assignee: Maloe Vnedrencheskoe Predpr In
Priority date: 1994-08-10
Filing date: 1994-08-12
Publication date: 1997-07-16
Also published as: KR970704483A; RU2067873C1; EP0742022B1; NO970330L; USRE38913E1; JPH10503950A; RU95100525A; CZ297126B6; KR100316212B1; CN1058639C; FI970315A0; CA2195957C; BG62915B1; NO310446B1; JP3359036B2; ES2145841T3; CA2195957A1; NO970330D0; DK0742022T3; HU9603434D0

Description

Oblast technikv «

Vynález ss týká složení biokompatibi1 ních hydrogelů pro lékařské použití a které mohou být použity:

v endoprotetické praxi cestou funkčních injekcí pro výhodné napravení těch defektů- u lidí, které jsou následkem traumatických, vrozených nebo stářím způsobených deformací tvaru a rozměrů nebo následkem ztráty tvarové stálosti některých orgánů, tvořených měkkými tkáněmi, např.:

- v plastické chirurgii na korigování tvaru a rozměrů obličeje a ostatních části těla a specificky v plastické chirurgii prsu (výhodně v případě aplazie nebo hypomástie ) ,

- v otolaryngologické praxi pro oéetřování larynxu při nápravě tvaru a objemu hlasivek,

- v mužské sexuologii (v případě chabé erekce) pro zlepšová— ní potence pomocí injikování elastického média do houbovité vaskulární tkáně penisu;

v endoprotetické praxi kombinované s kožní chirurgií, při předtvarováni endoprotetických pomocných produktů a při jejich implantaci na operované místo;

v dlouhodobé terapii (např. abscesů nebo nádorů) pro poskytnutí mleta uvnitř těla pro ukládání dlouhodobě působících léků uvnitř nebo blízko léčeného orgánu;

pro tamponáž kavit, vzniklých po různých onemocněních (např. tuberkulózové kaverny) nebo zraněních;

jako fyziologicky neutrální elektrovodivé imerzni médium mezi pacientovou tkání a elektrodami v případě:

- dlouhodobého monitorování systémových elektroíyziologických proměnných (např. kardiakálni a cerebráiní aktivity),

- perkutánnich elektroforetických injekcí léčiv; jako základ pro zejména medicinální masti, jejichž disperzním médiem je voda.

Dosavadní stav techniky

Požadavky na zlepšení tvaru tělesných orgánů a funkčnosti, tak jak bylo uvedeno shora a i v jiných podobných případech, se staly široce rozšířenými a jsou často zdůvodňovány jen pacientovým přáním. Rovněž rozšířené jsou požadavky na elektrofyziologickou diagnostiku, léčbu léky, včetně míst pro ukládání léku a na konzervační fyziologicky efektivní tamponáž různých kaveren.

toho důvodu by měly biokompatibilni materiály pro shora uvedené aplikace vyhovovat určitým požadavkům, které jsou jenstěží slučitelné. Mezi nejdůležitější požadavky patří:

dlouhodobé (výhodně po celý Život) zachování tvaru a rozměrů orgánu, do kterého byla endeprotéza vložena, nehledě na stáří operovaného pacienta.

maximálně možná biokompatibilita, t.j absence karcinogenity, alergických reakci (včetně krátkodobých, následujících ihned po injikováni vybraného materiálu do těla nebo po jeho aplikaci na kůži a, zejména, slizovou membránu), absence tvrdých pouzder nebo odmítání endoprotéz, tamponů nebo míst pro ukládání léků, aby bylo uvedeno jen několik příkladů, zajištění ničím nezatížených metabolických pochodů na místě, kde je biokompatibilni materiál umístěn;

minimální výskyt traumatu a nejkratěí možné zavádění biokompatibilního materiálu, zejména ve velkých aplikačních dávkách (až do iOOG ml).

Pro odborníka není problém vyhovět těmto požadavkům, jsou-li kladené jako samostatné nebo u některých kombinacích.

Tak fluoroplastová (teflonová) pasta na bázi glycerolu jako biokompatibilni materiál pro léčení larynxu dává značně stabilní klinický efekt (viz: Beck C.L. Unsere Erfahrungen mit / ;:· ·* . - - -³ 7.·..* ...

*· -·· . . · · U. · * ',*.·· - , ·· - r i . ' ., · derintralaryngealeri Teíioninjektión - NaSe zkušenosti ε intra “lá-ryngeál-n Ϊm--· i n j i kování m =-te f i οήυ^-^Lary.ng.ol•.,.Bhinp.l...Qtp.l^ - 1.9.81 sv. 59, č: il, str, 715-,718; Lewy R.B. Teíion injection oí the voeal corď: Complicationserrors and precautions,- Teflonová^ injekce'hlasivek; komplikace, chyby a příčiny - .Ann.Otol.-1983 sv. 52', č.5 str. IC- 473-474;' Berghans A. Veríahřen zut: »· .Unterfitterung von Stimmlippen --.Postup léčení hlasivek -H.N.O-19S7, sv. 35, č. 5., str. 223-3) . ^? /· ‘v ·..

0’g'lý'cerolu' je známo, že’má vyŠSí 'viskozitu než voda a z toho důvodu je pasta při skladování dosti stabilní. Ale je-li iň ji kováři, tak glycerol působí.'? jako mazivo..

Jelikož je dobře rozpustný, ve vodě a v kapalinách s obsahem vody, tak je v krátké-době. (během ,několika ^Jhodin až λ

jednoho dne) odstraněn z operovaného místa; A dále, není nemožné.·,, aby teflonové mikročástečky by ly--odtamtud-. postupně odplaveny lymfatickým a krevním oběhem. Takovéto odstraňování má za následek zmenšeni objemu protézy a podstatně malou terapeutickou účinnost. Proto, ačkoliv teflon je biochemicky neaktivní, tak by operace, kterými jsou vkládány endoprotézy z teflonu, musely být v klinicky stanovených intervalech ~ opakovány.

Rovněž částečky teflonu, protože jsou tvrdé, mechanicky poěkozují tkáň, která je v kontaktu s endoprotézou a vyvolávají, prakticky ve všech případech, mániíestační aseptickou. zánětlivou reakci a případně, larypgostenózu s naléhavě nutnou tracheotomi í .

důvodu vyhovět shora uvedeným požadavkům, je praktické používat gelující biokompatibilní materiály.

Skutečně minimální výskyt traumatu a nejkratěí možné zavá dění bidkompatibiiního materiálu, absence karcinogenity a mini málni alergická reakce jsou dosaženy použitím ve vodě rozpustného hovězího kolagenu, který je vysoce vyčištěným a částečně depolymerizovaným produktem, měnícím se při teplotě pod 37°C na elastický a mechanicky stálý hydrogel, injikovaný do ošetřovaného orgánu, aby tak vytvořil žádaný tvar a objem (viz Ford Ch., Martin D.M., Warner Th.F Injactable collagen in laryngeal rehabilitation - Injikovatelný kolagen v laryngeální léčbě - LftRYNGOSCOPE, 1984, 94, str. 513-518).

Jelikož kolagen je protein, tak se však v poměrně velmi krátké době (za méně než půl roku) v pacientově těle zcela resorbuje.

toho důvodu je proto jeho použití vhodné v endoprotetické praxi zejména v případech, kdy je přijatelná kompletní substituce endoprotézy spojovací tkání nebo jestliže pacient, podle lékařská indikace, potřebuje jen dočasnou endoprotézu.

Rovněž je třeba poznamenat, že hovězí kolagenový roztok, následkem své resorbční schopnosti a intra- a intertkártové migrace, není účinný pro ukládání léčebných preparátů a ježto je náchylný k enzymovému ataku a má nízkou elektrickou vodivost, je prakticky nevhodný pro aplikace jako imerzní médium.

Po zvážení shora uvedeného vyplývá, že gelovací biokompatibilni materiály, založené na syntetických polymerech jsou výhodnější.

Tak biokompatibilní gelovací materiál ve íormě hydroíilních esterů polyglykolŮ a kyseliny methakrylové je známý pro aplikaci v endoprotetické praxi (Kresa L., Rems T., Wichterle 0. Hydron gel implantát in vocal cord - Hydrogelový implantát pro hlasivky - Otollaryngol. Hed Neck Surg. - 1988 , sv. 98, Č. 3, str. 242-245).

Požadovaná dávka takovéhoto suchého materiálu se sekcí implantuje do oblasti kosmetického nebo funkčního ošetření a potom se operativní rána saturuje. Následně materiál nabotná

-,5••m · absorbcí vody ž okolní tkáně a tak'se zajistí lokální zvětšení ^Lobjemu- korigovaného- orgánu,-.-např-- hlasivek, ⁱ' ' */ '^ř * v ,. * s- ... λ

T-ento biokompatibilní materiál je charakterizován vysokou r biochemickou stálostí'.

' 'Při aplikaci je však trvalý terapeutický efekt.dosažen na úkor traumatického, chirurgického zásahu,, spo j eného. ίβ '©démy * , ^Λί· j'^{! 1} . ^x 1*1· ' v , '

.. I a aseptickými záněty; jeho použiti pro místo- pro inťratkáhové uk íádárii^r Téči va při náěí ’ značné obtí že na? j eho -nepouž i te 1 ný j akó>základ pro vodivé imerzní médium . .;. </ / -’

Próto pro endóprotetickóu praxi*a pro jiné shora uvedené ¹ <1. ·’·· B·,- * L fc - ^;· <’* ní ' ií ' íY * ¹ ’ >

aplikace jsou nejslibnějěií/kómérčhl' i říj ikovat elné ^kapalné ‘ > Λ' biokompatibi lni’ gelovácí materiály

-i Jakor,pří klad může - ppsl-.ouž-i t- -biokompát i bil ní.^gelovácí- materiál jako roztok obsahující’ ve vodě rozpustné polymery, mezi nimi nezesítované akrylonitrilově polymery nebo jejich kopolymery, polyvinylacetaty a lineární nebo nízce rozvětvené polymery nebo kopolymery 2-hydroxyethy1-akrylatu a, methylakrylatu, poly-n-vinyliminokarbonylu .a ’ dimethylsulfoxidu nebo jiná poláí >. *·,·#· 4,.^; .· i . rf r ni, s vodou dobře mísitelná rozpouštědla (Stoy V., Chvapi1 M.

US Patent Č. 4,631,198; 1986)., Při získáváni kopolymerů mohou být využity další monomery jako akrylamid (včetně ^-substituovaného) , akrylhydrazid (včetně N-subetituovaného), kyselina akrylová a akrylaty, glutarimid a vinylsulfon; a polárně s .vodou ochotně mísitelná rozpouštědla mohou být glycerol a jeho mono- nebo diacet-aty, méthanol, ethanol, propanol a 2-propanol, dimethylformamid, glykoly a jiná vhodná rozpouštědla.

Tento materiál je velmi efektivní při ošetřování menších kosmetických-nebo-f unkčních _def ektů, speciálně _rtů_a jiných části obličeje, shora zmíněných hlasivek, atd.

AvĚak při tamponáži objemných kaveren·nebo při korekci prsních tvarů a objemů pomocí endoprotéz může být potřeba až litr materiálu. V takových případech množství organického rozpustidla, infikovaného spolu s gelovacim polymerem podstatné překračuje fyziologicky přípustné minimum s následkem ©rytému a v nékterých případech i alergického Soku. Rovněž následkem lineární struktury použitého gelovacího polymeru se zjiSťuje, že endoprotézy mají nízkou stálost tvaru, vétSÍ objemovou, menSí co do jakosti.

Proto nejvýhodnéjSí jsou takové komerční hydrogely, které neobsahují alergeny.

Mezi nimi, nejúžeji se dotýkající vynálezu, je biokompatibilní hydrogel, který obsahuje 3,0 % hmotnostní polymeru na bázi akrylamidového produktu při použití volnoradiálového polymerizačni hé> iniciátoru (specificky persulíat amonný) v disperz-·, ním médiu, jako je apyrogenická redestilovaná voda (vynáležecký certifikát SSSR 1,697,756). ,_ř

Tento hydrogel je ve skutečnosti plné biokompatibilní , s lidskými tkánémi a kapalinami ve věech shora uvedených aspek-_;těch a proto mftže být aplikován ve značných (až do 1 litru) množstvích, přičemž nepůsobí vyložené negativní biochemické a biologické následné efekty. V oblasti injikování (vkládání endoprotéz, tamponování atd.) vytváří strukturu ochotné propustnou nejenom pro vodu, ionty; kyslík, ale rovněž i pro nízkomolekulární metabolity. Hydrogelové implantáty jsou napadány značné velkou rychlostí (za 5-6 měsíců) mladou vláknitou tkání příjemce. Tento důsledek je zejména cenný v (mikro)alloplastii larynxu.

Tento hydrogel věak má nízkou viskozitu a proto nízkou pružnost a vysokou pohyblivost. Voda obsažená v hydrogelu je volně vázaná S makromolekulami polyakrylamidu a je snadno odstranitelná z implantátů, což se projevuje jejich smršťováním a značným snížením kosmetického nebo terapeutického efektu.

Proto v případě vkládání objemných (např. vnítroprsních) endoprotéz, tamponovaných kaveren a při poskytování dlouhodo7 bychintra-tkáňových míst'ukládání,léčiv vykazuji implantáty iní.zkou^odolnost.J‘.v.Ůč.i:_±iyně,jší m ^deformačním _tzatížením _ta smrštitel nost na 'jejich původní objem. ^f / , . p ’/'/ » . < * * j , '.,- ... Λ .-.,¹ i

Po svou .vysokou tekutost je tento hydroge 1 ^:máto efektivní' jako elektřovodivé imerzní médium pró .vnější aplikace.‘í .' •i..

Podstata vynálezu . · - ^J' .

ϊ Proto je předmětem vynálezu^poskytnout biokompatibilni hýdrógél, který byzlepšením pólyakryiamidového prostředku zajišťoval~'pružriost, udržování -tvaru'a stálost objemných *»' » / >/ ·. ' _V ' -··' . . ' , y·:..

implantátů' a nabízel lepší' terapeutické akosmetické výsledky výhodně-·v přípádě vkládánírréndoprotéz r-'·- i··

Shora/.uvedený problém, by 1. .vyřešen poekytnutím._bi.p.kpntpatibilního hydrogelu, obsahujícího polymer na bázi^;: .akry ί amrdu,' připravený s použitím iniciátoru radikálové polymerizacev apyrogenické vodě jako disperzním médiu, vekterém.v souladu s vynálezem .řečený polymer je zesilovaný polyakryíamid, připra vený pomočí biokompatibilniho zesíťovacího. činidla.

' ' ' ,, ,. •‘•'t , i

Pro vodu, inonty, kyslík a nízkomolekulární metabolity 'í propustný a pro aplikace injikováním vhodný hydrogeí podle vynálezu má pravidelnější a výhodnější strukturu vázající vodu, následkem Čehož může poskytovat' objemné, vysoce pružné a tvar udržující implantáty (např. vnitroprBní endoprotézy, podpůrná tělesa v houbovité vaskulární tkáni penisu, tampony v plicních kavernách), které jsou napadány měkkou vysoce vaskularizovanou propojovací tkání extrémně pomalou rychlostí (měsíce až roky). Zásluhou strukturálních, biochemických, anatomických a íyziolo gických výhod, tak jak byly popsány shora, je existence podstatné kosmetického a/nebo rovněž terapeutického eíektu v endoprotetické praxi á při tamponačnich aplikacích a zvýšeni trvanlivosti takovýchto efektů.

Podle prvního dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompatibilni hydrogel zesíťované pólyakrylamidy, připravené použitím methylen-bis-akrylamidu jako zesíťovacího činidla a směsi persulíatu amonného a tetramethylendiaminu jako iniciátoru polymerizace. Methylen-bis-akrylamid je analogem základního monomeru (akrylamidu) jak svým složením, tak biokompatibilitou, zatímco použití směsi polymerizačních iniciátorů je příznivé pro zcela pravidelné zesíťování polyakrylamidových řetězcových molekul pro zajištění pružné prostorové sítě, vhodné pro injikování hydrogelu.

Podle druhého dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompat i bil ní hydrogel od. 3,5 do 9,0 ss hmotnostních ze-, síťovaného polyakrylamidu. Toto rozmezí koncentrací poskytuje maximum terapeutického a kosmetického eíektu v injekční endo-_;protetické praxi nebo tamponování. Koncentrace pod 3,5 % hmotnostních činí hydrogel nestabilní, použitelný jen jako základpro medicinální masti nebo elektrovodivé imerzní médium pro kardio- a encefalograíi i, zatímco koncentrace nad 9 3á hmotnostních snižují tekutost hydrogelu praktický na nulu, použitelnou pro použití, v některých případech, pro předpřípravu endopro-, téz, které vyžaduji operační přístup do oblasti vložení takovéto endoprotézy.

Podle třetího dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompat ibi lni hydrogel .fyziologicky neutrální, ve vodě rozpustnou sůl, néjvýhodněji použitelnou jako elektrovodivé imerzní médium.

Podle čtvrtého dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompatibilnl hydrogel komerčně dostupný chlorid sodný jáko fyziologicky neutrální, ve vodě rozpustnou sůl.

- 9· ·. ·<·

Vynález t·ί. mit o odha 1 ύ j e :

.'As Γ’;' .> ‘ popis výchozích reagencií, způsobu přípravy nového biokom* . _t »· · » -. <’ + ·. ·. j, .·· >ř patibilního hydrogelu, příklady provedení > způsobu a výsledky., laboratorních zkoušek hydrogelu;

?· · •ΐpříklady formulaci .biokompatibilního hydrogelu;

^ζ popis způsobů a výsledky chemických, biochemických

.. ¹ í .

a lékařských sťúďrí nového biokompatibilního.’ hydrogelu;

popis cest nápravy kosmetických a funkčních deiektů i

lidského těla pomoci íunkdnich injekcí s .novým biokompatibiIním ,·. . ^Λ. »»'„. . * A -1 Λ -«..''., .-Λ ·»·* Z' · 'i'· ‘ '' q hydrogelem a informace o jeho>praktických aplikacích.

Příklady provedeni vynálezu

Pro přípravu použiti nového biokompatibilního hydrogelu byly použity reagencie, uvedené v Tabulce 1.

Tabulka 1

reagencie a	-Γ spotřeba v g\|	kontrolovatelné
empirický	na 100 g i	jednotky	a meze
vzorec	hydrogelu i I	7
akrylamid	1 3,5 - 9,0 \|	teplota tání :	84,5 ± 0,5 °C
C₃ Hs no	' 1	hustota:	1,222 g/cm³
	1	základní součást:	ne menší než
•	1 .... '!		98 hmotnostních
methy1en-bis-	I 0,01 - 1,00 í	teplota tání:	184 ± 1,0 oC
akrylamid	1	základní součást:	ne menší než
C& Hi o N2 Oz	1 !		96 Sí hmotnostních
— TMED	I 0,001 - 1,00\|	hustota;	0,78 g/cm³
tetramethy1-	1	základní součást:	ne menši než
ethylendiamin	1		98 & hmotnostních
C« Hi ₆ Nz	t t
persulíat	f 0,001 - 1,00I	hustota:	1,98 g/cm³
amonný	1	teplota rozkladu:	120 °C
( NH4 ) 2 Sz Og	1	základní součást:	ne menší než
(peroxodisí-	1		98 % hmotnostních
ran amonný	1 ........ 1
redestilovaná	^!Γ dováženo \|	i ndex 1omu:	1,3329
apyrogenická	I
voda 1 1 :1_L

Kromě redestilované vody byly v-pokusech.použity pod l·· .

obchodním názvem ,^ANÁL^;TMaďars~kor komerčně dostupné reagencie a to: akrýlamid a methylen-bis-akřylamid vě formě bílých krystalů, terťramethylethylendiamin jako bílá olej ovitá- kapali— “na“a^pere oTf a t~~ amonný—ve—formě—bezbarvých-kry-s.talů . _ · * Λ, ' * · :· · ' , * ' \ ' z·.' * ':* Ť ' Ύ <·. -4 *

Obecně se nový biokómpatibilni; gel'připravuje následujícím ' .z'.,' ’ -, * ' . · - ' způsobem: «'· ,·'^Λ'*ζ' 7'' .....* '··· -·· -: ·’·*· - jř -—< >?

,._2a- asep.ťických-.l.ab.or,atqrriích podmlneX^se vloží do sterilní skleněné nádoby vypočítaná množství akrylamidu a zředěných vodný cli roztoků zesíťovac í'ho~č inidl^_a—^_ (met-hy-1— b í-s—a-kry-1 amidu )-—.--_—

a. i nic i átoru/. polymerace (persul fátu amonného a.TMED). Tyto rea— lát# . * .L· .^X ·' . - ;* < . * . . ' v , gencie ’sé důkladně .promíchají,: potom se zředí vodou _;(alternativně fyziologickým roztokem, 'alternativně ' jiným zředěným vodným roztokem fyziologicky neutrální soli, např.· octanem sodným) ; směs ^se potom přefiltruje a filtrát se nechá stát až ^ďo^ískáhí^zesTťbvahěho—polyakryi-ami-du—(-nadá_;l-e^-zde—oznáč'í5vaného. j ako CL PAA) .

U připraveného CL PAA hydrogelu se kontrolují následující hodnoty-', '·. ” .

· ’^Έ' .... · Tfc.1, .

- vzhled (hydrogel. by měl být transparentní / bezbarvý, bez nečistot); .....

-'index lomu (má být v mezích 1,334 až 1,350);

- pH (má být v mezích 7,0 až 9,0);

- obsah těžkých kovů (má být menSí než 0,001 36 hmotnostních) a

- sterilita.

Vynález bude snadno pochopen po přečtení následujících příkladů.

Přiklad Γ: Příprava biokompatibilního hydrogelu o nízké koncentraci

20,3 g akrylamidu, 3,7 ml methylen-bis-akrylamidového vodného roztoku·o koncentraci 2 %, 7,5 ml vodného roztoku TMED ' o koncentraci 1 % a 15 ml vodného roztoku persulíatu amonného o koncentraci 4 % se smísí v litrové skleněné nádobě. Potom se přidá voda do dosažení celkového objemu 580 ml, směs sé přefiltruje přes skleněný filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut do vytvoření hydrogelu CL PAA o koncentraci 3,5 %.

Přiklad 2: Příprava biokompatibilního gelu o vysoké koncentraci ¹ i

-T

34,2 g akrylamidu, 50 ml vodného roztoku methylen-bisákrylamidu o koncentraci 1 %, 5 ml vodného roztoku TMED o kon- , centraci 1 35 á 25 ml persulíatu amonného o koncentraci 0,48 % se smísí v jednolitrové nádobě. Potom se přidá voda do dosaženi celkového objemu 380 ml, směs sé přefiltruje přes skleněný

V, filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut do vytvoření

-rt hydrogelu CL PAA o koncentraci 9

Příklad 3: Příprava biokompatibilního gelu o střední koncentraci g akrylamidu, 50 ml vodného roztoku methylen-bisakry lamidu o koncentraci 1 %, 25 ml vodného roztoku TMED o koncentraci 1 as a 50 ml roztoku persulíatu amonného o koncentraci 1,3 3S se smísí v jednol i trové nádobě. Potom se přidá voda do dosažení celkového objemu 350 ml, směs se přefiltruje přes Skleněný filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut, dokud vytvoření hydrogel CL PAA o koncentraci 5 ss.

- 13 - —V? Příklad 4: Příprava elektřovodivého biokompatibilního hydrogelu / . i, ¹¹ ' ’ ' Γ . ·'. ^r

...φ^_ni * koncemtraci-· - i* ’· . ·. £3 , , ^Γ i —'τ· -«γτ» *>7č’*«ií8*..*í-«sí

- i-asr.·* Γ_ , .·,

-irjHydrogel CL PÁA se připraví jako v přikladu 1 ε tou výjim• k s a _t *· .·.’>··. . ·. ,. „ rkóu-,—2e-xmíg.t.o—vL.o.dy_i-e použit, fyziologický roztok.

Příklad 5: Příprava elektřovodivého biokompatibilního hydrogelu * '? · · ^s ’ ¹ ·>

_r-. .... ... ........ .._o. vysoké -koncentraci. \-._í4í,.

s',. ,’*: --+¹¾ -♦

Hydrogel ^lKL PAA’se připraví jako v přikladu '2 s tou výjim*»£*·'·· kou, .že místo vody je použit vodný roztok octanu sodného o* koncentrac i ? V pokusech bylý_epoužity, íormulace CL PAA biokompa.tibilního hydrogelu Aáále označován BCH), jak ukazuje Tabulka 2.

ť-v ď

Tabulka 2

PŘÍKLADY SPECIFICKÝCH FORMULACÍ .NOVÉHO BIOKOMPATIBI LNÍHO HYDROGELU CL PAA složky íormulace a koncemtrace, % hmotnostní .r y - τ

BCHl 1 BCH2 i BC.H3 | BCH4 j BCH5 i BCH6 í BCH7 | BCH3 | BCH9 i | CL PAA h,0 |3,5 |e,0 |g,0 Í9,5 Í4,0 |7,0 Í5,o ls.0 i

I-——i-1-i-H-—H—i-ί - ι — I-1 | chlorid sodný )- | - | - I - | - 1 - i - JO,9 í0,9 ] l·--+—i— I-i-í-1—4-i-H-H octan sodný

0,9 |0,9 I - I i j L voda dováženo

Jak je možno vidět z Tabulky 2, tak íormulace BCH2, BCH3 a BCH4, BCH6, BCH7 BCH8 a BCH9 mají v hydrogelu výhodné koncentrace CL PAA, BCH2 a BCH4 jsou ve shodě s výhodnými mezemi kon14 centracl CL PAA v hydrogelů, zatím co vSechny ostatní formulace odrážejí mezilehlé koncentrace a nejvýhodnějěí koncentrace. Na rozdíl od toho, formulace BCH1 A BCH5 představují koncentrace CL PAA v hydrogelů, které jsou použitelné ve velmi omezeném počtu aplikaci.

Laboratorní studie nového hydrogelů byly prováděny ve vztahu k chemickým, biochemickým a lékařským a biologickým vlastnostem. Tyto studie nebyly přísné vymezeny a prakticky se opíraly o konvenční metody a techniky.

Tak byl studován suchý zbytek, aby se stanovila přesná koncentrace substance v pravém nebo koloidním roztoku.

Potom <oy1 suchý zbytek studován ve shodě se státním standardem SSSR GOST 15.013-86 Medical devices - Lékařská zařízení” podle techniky stanovené v praktické směrnici, nazvané Metody analiza akrilatov i metakrilatov - Metody analýzy akryiatO a metakrylatft -nakladatelství Chimia, Moskva, 1972.

Přesná koncentrace CL PAA v hydrogelů je obvykle stanovována ze suchého zbytku. Tato metoda zahrnuje zvážení vzorku hydrogelů a potom suěení vzorku do konstantní hmotnosti (20 hodin při 35 °C a zbytkovém tlaku 12 až 15 mm Hg) a následný konvenční výpočet procent CL PAA v hydrogelů.

Tato metoda byla použita pro vyhodnoceni chemické stálosti nového hydrogelů.

2a tím účelem byl připraven hydrogel, obsahujíc! poměrně volně zesíťovaný (použitím 0,25 % methylen-bis-akrylamidu na hmotnost akrylamidu) CL PAA s vypočtenou koncentrací 5

Pět vzorků, každý o objemu 20 ml, takovéhoto hydrogelů bylo podrobeno čtyřem po sobě jdoucím zkouSkám a to:

- 15 -Zkouška 1. Vzorky se zváží a suší při35®C a zbytkovém tlaku , · ' v >· ♦ » · !^i- . ' s- , 'až 15nmT Hgaž do dosažen/'konstant ní ¹ hmotnosti • (20 hodin) . /-'' - ' < ' '

Zkouška—2-t—Vzor ky-se—zváží-,—ponoři_sé—do_redest.ilc_vané_vpdy_,_ vaří’se 15 minut a suší se jako při zkoušce 1.

Zkouška’3. “Vzorky se zváží / ponoří-se- do-redestilované vody j—*v . -*j.^e < * 1 ¹ f ‘ '

- objem se vždy doplní na 200 „ml u každého vzorku,^λ ' - nechají se nasakovat 7 dhí, , voda se,' mění každý den

-------*·<—-------- ------- - -----A..... - .. ...------ ' . a suší Se jako u zkoušky 1. '

Zkouška 4. Vzorky se*zváží, nasakuji se vodou po 7 dni jako při /’ _v , zkoušce' 3 , . vaří se 15 minut jako, pi*i ;zkoušce. 2 .··<'' Γ , , '·'* . . ; .i. - ^; ' ( .

L.ánPgtóm se suší.-jako při .zkoušce ;1. j ,-/'Procenta polymeru v hrubé hmotě hydrogelu byla pro všechny vzorky—počí-tána—konvenčnímL-nietoďam-i-.^Výs-ledky^gsouLuvěcfěny^---v Tabulce 3.

Tabulka 3.

⁵ · . ' , ^π -«..“V ,i y, , - . M. ’ r , : . ’ , _s

VYHODNOCENÍ CHEMICKÉ STÁLOSTI. NOVÉHO BIOKOMPATIBILNIHO - HYDROGELU CL PAA NA ZÁKLADĚ SUCHÉHO ZBYTKU průměrná hmotnost vzorku, g (průměr ± stř.odchylka) j zkouška <p před zkouškou i po zkoušce

1	1 20,84	+	0,96	) 0,983	+	0,0048
2	1’ 20,15	+	0,87	t 0,951	+	0,0076
3	í 20/65	+	0,83	\| 0,923	±	0,0065
- _ -----—	--- 1		.............	1 ·
4	1 20,41	+	0,63	I .0,913	±	0,0095

Jak je možno z Tabulky 3 vidět, dokonce ani nasakováni s následným vařením nezpůsobujícím destrukcí CL PAA v hydrogei ukazuje, že může být tepelně sterilizován (kdykoliv tato potře ba vznikne) a charakterizuje stálost, navzdory volnému zasíťování.

Dále byl akrylamid zkoumán co do své schopnosti migrovat do biotkání, přičemž se vycházelo z chrakteristik stálosti základního (CL PAA) hydrogelů podle vynálezu ve vodném médiu v souladu s P.ukovod j aěči je metodičeskije matěriali po toksiko logo-gigijeničeskim issledovánijam polimernych matěrialov i izdělij dlja endoprotezipovánija - Směrné metodické materiá ly pro toxikologicko-hygienická studia polymerních materiálů a výrobků pro endoprotetiku - Ministerstvo zdravotnictví SSSR, 1987, str. Í13-25.

Tato schopnost byla stanovována metodou HPLC (highly ρβτ— formance iiguid chromatography - vysokoúčinné kapalinové chromatograíie) využitím detekce absorpce UV záření v oboru 190 až 210 nm, typickým pro monomer a s použitím chromatografu LIQUOCHBOM (Maďarsko).

I

Za tím účelem byly extrakty z nového hydrogelů získávány nasákávánlm vzorku po dobu 14 až 30 dni při teplotě 40 °C a po měru 100 ml extraktantu (redestilované vody) na 1 ml hydrogelů Vzorky pro metodu HPLC se připravovaly suSenim podílů 5 ml extraktu při teplotě místnosti a zbytkovém tlaku 12 - 15 mm Hg a jednou eluováním zbytku rychlosti 0,2 ml/min 2 ml směsi 1:1 vody a methanolu ve 150 mm dlouhé koloně o průměru 4 mm, naplněné Borbentem Separon C18 a zavedením 20 mikrolitrů eluatu do vstřikovací smyčky.

Minimum detekované koncentrace akrylamidů metodou HPLC bylo 0,000001 mg/1, zatím co jeho maximální přípustná koncentrace ve vodném extraktu z materiálu z implantátu byla

0,02 mg/1.

-. .

v *

Akrylamid nebyl metodou HPLC ve vodných extraktech z hydrogel u metodou. Zde popsanou detekováni, což značí, žě vcelku jak

CL.PAA,’ tak i⁷ biokompat i bi lni hydrogel podle vynálezu jsou chemicky stálé. ; ' .Ve .vztahu k (lékařským a biologickým vlastnostem byly .

. »'·.,· ' ' ·: ' Ί ... ' ·’ '····.·*<'. ' ' · ’ vzorky CL PAA hydrogelů, připravené zde popsanou 'metodou, byly ' zkoušený ,_tv Táborátorní čh “podmi rikách” na .—b.i.o.chemi.cko.u^á^hé.mo.lyticko.u. aktivitu, ^{1 J} - . . - - . / i._t embriotoxickou.aktivitu,

- -mut agennl áktivrťu—a í karcinogenní aktivitu.

Eiochemi.cká^a.Lhemolyt.ická aktivita· CL PAA hydrogelů- byla vyhodnocována z.„variací chemického složení plazmy a krevních buněk samečků bílých krys linie Wistar, tělesné hmotnosti 300 zkušébnidh^a-^konťroLnLch^-skupi n -po—1’6—ž i voči-ších -.- - — Před pokusem byla do každé krysy ze zkušební skupiny vpravena injekcí intraperitonealně dávka 5 ml 5 %.ního hydrogelů podle vynálezu.

Krysy byly normálně krmeny. ’ ' . Po dvou týdnech byly krysám odebrány vzorky krve a byl zkoumány na obsah iontů Na,· K, Ca a Cl; močoviny, dusíku krevní močoviny a kyseliny močové; kreatininu a enzymů (amylasy, alkalické iosíatasy, alanin- a aspartataminotransíerasy (dále označovaných jako A1AT a As AT), laktatdehydrogenasy (dále označované jako LDG) a kreatininfosfokinasy) pomocí biochemického analyzátoru KOfiNING (Švédsko). V těchto případech byly obsah —· draslíku a močoviny stanovovány bio-testem LACHEMA (Česká republika). Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 4.

i

Tabulka 4

VLIV IMPLANTÁTU 2 BIOKOMPATIBILNIHO HYDROGELU CL PAA NA BIOCHEMICKÉ SLOŽENÍ KREVNÍ PLA2MY KRYS

1 ] biochemické veličiny	1 1 i Výsledky	t zkoušek i
1 a jejich jednotky	i i	i 1
1 I	\| kontrolní i 1	i zkušební j ί 1
1 \| sodík, mmol/1	i 1 ! 151 i	! 148 )
\| draslík, mmol/1	i 8,20 !	6,82 ]
í vápník, mmol/1	i 0,97 \|	1 0,90 \|
1 chloridy, mmol/1	1 97,5 i	t 102,1 t
f močovina, mmol/1	I 4,8 i	1 4,8 (
l dusík krlvní močoviny, mmol/1	{ 2,2 I	1 2,2 i
{ kreaHtinin, mmol/1	I 0,05 1	0,05* \|
i amy 1 asa. mg3S	1 89,1 \|	83,33 i
f alkalická fosíatasa, mmol/1	ί 84,5 \|	55,9 i
i AsAT, mmol/1	! 133 !	130 i
i A1AT, mmol/1	í 41 !	51,7 \|
i LDG (celkem), mmol/1	i 217 1	189 t
i kreatininíosíokinasa, jednotky	ί 5960 \|	5685 í
I kyselina močová, mmol/1	i 0,14 I l(1	0,10' 1 _______!
jak je možno vidět z Tabulky 4,	tak hlavní veličiny výměny
iontů ukazují, Že nedochází k manííestačnímu poškození buněč-
ných membrán. Aktivita ATPasy je rovněž normální.
Stálost veličin dusíkové výměny	ukazuje normální metabo-

lismus včetně purinové výměny a, společně s kreatinovou stálostí, funkční stálost urogenitálního systému v přítomnosti CL PAA v lidském těle.

Normální aktivita A1AT a AsAT představují stálost hepatocytů a náležitý stav miokardu, které, usuzujíce z aktivity kreatininíosíokinetasy, jenž je normální, nejsou vystaveny měřitelnému přetíženi.

_ l >

:-19 , Dostatečná aktivita alkalické íosíatasy je důkazem, že v ' . ; > . . · ' ,.,··’*·.,· * . ' ' ; ¹endotheliu v žlučníkových ‘kanálcích není^zánét. . ....._ *« * . ’ ··?<’' ._Λ ·. v <

U těchže krys bylo rovnBž provedeno sčítáni krevních ' ^u ~ - ⁵ Λ ' buněk..jak ie uvedeno v Tabulce 5. . ( . ·

Tabulka 5

VLIV IMPLANTÁTŮ Z BIOKOMPATIBILNIHO HYDROGELU' CL PAA, ,·

NA SLOŽENÍ KREVE KRYS

-vel-ϊč i ny-E l ožení _. krey_ní.ch bunék a jejich jednotky ‘ -...• . ·* · ,

Výsledky zkoušek .

kontrolní i zkušební

I leukocyty, IQ^{* 3 4}/mm³ (thsd/mcl) t erythocyty, 10$/mm³ (min/mel) |- hemoglobin—gZ.1--JL ______ i hematokrit, X i erytrocyty střední průměr, nm j hémoglobím průměrný obsah per p e.rytrocyt, pg

I thrombocyty, . l-Q³/mm³ (thsd/mcl) , ' I 1.

| throbocyty střední průměr, nm

Ί 3,5+0,2 ' i 5,4 . t

Í 6,86+0,43) 7,02+0,3l|

I 125+l 2 *-|l 39+.9 ' 1 t _Λ . . | JD,U+±,O i 51,0+0,2 1 i 35,7+0,3

1.992+12.

) 8+1> 5

J ! 36,5+1,3 ! 52,0+1,5

I ) 38,1+0,5

j.694+50 | 14,25+1,6 JJak je vidět z Tabulky 5, tak leukocyty při pokusu nepodstatně překračují normální obsah, který je 4,5*1000/mm³, zatím co erytrocyty a hemoglobin v erytrocytech naznačují normální okysličování. Z hlediska hematokritu je možno tvrdit, že tekutinová-a-elektrolytová rovnováha je přibližně normální.

Data, která jsou dostupná nepřímo, naznačují, že biochemická stálost a biokompatibi1ita CL PAA jako takové,“ jsou dobře přijatelné.

Embriotoxická aktivita hydrogel© CL PAA byla stanovována podle 'RukovodjaSěi je metodiěeskije matěríali po eksperimentalnotnu i kliničeskomu izučeniju nových lekarstvennych sredstv

- Směrné metodické materiály pro experimentální a klinické studium nových lékařských prostředků - Ministerstvo zdravotnictví SSSR, 1987.

V pokusu byly použity tři skupiny, každá skupina o 16 zvířatech, samic hybridních bílých krys o tělesné hmotnosti 180 - 200 g.

Krysám v první skupině bylo intraperitoneálně injikováno 2 ml nového 5 %-ního hydrogelu a byly za týden spářeny.

Krysám ve druhé skupině byly rovněž injikovány 2 ml nového 2 %-ního hydrogelu ve třetím dnu březosti.

Březí intaktní krysy tvořily třetí skupinu.

. U dvou krys první skupiny se březost neprojevovala. 14 krys v první skupině a všech 16 krys ve druhé a v třetí skupině vrhlo normální zdravá mláďata jako důkaz, Že nový hydrogel není embriotoxický.

Mutagenní aktivita hydrogel© CL PAA byla zjišťována podle, směrnic ministerstva zdravotnictví SSSR Ocenka mutagennoj aktivnosti chimičeekich veščestv míkrojadernym metodom Vyhodnocení mutagenní aktivity chemických látek mikrojadernou metodou'¹, Moskva 1984, s.14, na retikulocytěch z kosterního morku myší linie C3H1 (obou pohlaví) ve stáří dvou měsíců ve dvou skupinách, z nichž v každé bylo 10 zvířat.

Pokusným zvířatům bylo injikováno 0,01 % tělesné hmotností z 30-ti denního vodného extraktu, získaného při teplotě

40°C a poměru 100 ml extraktantu na 1 g gelu z 9 ss-nlho hydrogelu CL PAA.

Po 24 hodinách byly pokusné a intaktní myši usmrceny . zlomením' míchy .'V dalším byly roztěry íemorálního morku, zředě' né séřem čerstvé’néstabi1 izované lidské krve skupin AE· (IV), , . „ * - · ' ' · konvenčně preparovány pro následný test zbarvení podle , .

Papperihftiaa. . ^{* 1 * * * V} ... ; ·., , . ... t «·., . , ...

Pod mikroskopem byly v nátěru spočítány retikulocyt-y -s mikronukleem . -.Bylo zj ištěno, že odchpylky. v . počtu retikulocy- tů; napočtených v morkových rozt.ěrech jak experimentálních, tak

I k I i intaktních myší, v zorných polích, z nichž každé obsahovalo

1000 buněk, nepřekračují 2,3 To je důkaz, že hydrogel CL PAA ř · ‘; · ·* · ' ' ./ *· , ' · · · , —se—ne pro j evuje-mutagenně. -—————----------_—·* . i.. . » \ ’ , · .Karcinogenní aktivita hydrogelu CL PAA bylavyhodnocována j , \ \ Yí f”’ -^ť imunodetekcí nedostupných ε .nádorem spojených antigenů.* ¹ * ,

Tento typ vyhodnocování zahrnuje stanovení elektroíoréznl —pohyblivosti—í-e-lectrophóřetic-7mdbi .1 .i.ty_nadálěMj.ěnLEP.MjlYstabi

1izovaných a taninem ošetřených erytrocytů; které jsou senzibilované na s nádorem spojený antigen rhabdomiosarkomu a, kromě toho, na nepřítomný embryonální antigen, kterýžto posledně jmenovaný je indikátorem progresivního nádorového růstu, když. EPM-test je pozitivní. EPM-testy jsou obvykle pozitivní,· jestliže elektroíorézní pohyblivost buněk-indikátorů se sníží o 20 -nebo více.

V pokusu bylo použito 12 neliniových samců bílých krys o tělesné hmotnosti 180-200 g, tvořících zkušební skupinu a kontrolní skupinu, z nichž každá měla 6 zvířat.

Krysám ve zkušební skupině bylo injekčně při lokální anestezi vpraveno po 4 ml 6 3s-ního hydrogelu CL PAA do íemorálního svalu. Potom byly krysy obou skupin živeny 18 měsíců normální dietou. Potom byly všem'odebrány vzorky krve z ocasní vény, ze vzorků byly,izolovány erytrocyty a senzibilovány shora uvedenými antigeny pro provedeni EPM-testŮ. ,_r

Bylo zjištěno následující snížení EPM senzibilovaných erytrocytů ve srovnání s nesenzibi1ovánými:

4,17+1,58 3í pro rhabdómiosarkomový antigen a 1,67+0,95 % pro nepřítomný embrionální antigen u testovaných zvířat a

1,50+0,52 % rhabdomioblastomový antigen a 1,83±1,28 5e pro nepřítomný embrionální antigen u kontrolní skupiny.

toho důvodu se zkouška EPM jevila jako negativní pro krysy obou skupin, což ukazuje na skutečnost. Že nový hydrogel CL PAA neprojevuje karcinogenní aktivitu.

Podrobnější lékařský a biologický výzkum použitelnosti nového biékompatibilniho hydrogelu CL PAA v endoprotetické pra^, xi a pro tamponování byl prováděn na hybridních psích samcích tělesné hmotnosti 25 až 30 kg, starých tři až čtyři roky. Psi byli za sterilních podmínek podrobeni zkoušce vložení endoprotéz, následující po dezinfekci pokožky kryjící penis 10 3s-ni jodovou tinkturou a lokální anestezi, z čehož:

' * at;

psů dostalo subkutánně jednou injekci 5 ml 3,5 %-ního >/ hydrogelu CL PAA; > » rovněž 6 psů dostalo endoíascialně, s vyloučením penetrace pod tunica albuginea, injekce 9 5s-ního hydrogelu CL PAA do třech segmentů po délce penisu na protilehlých stranách v množství do 1,5 ml na segment do celkového objemu 8,0 ml a dalších 6 psů dostalo injekce intrakavernálně, včetně penetrace pod tunica albuginea a hlavně do trabecula corporum cavernósum, ale s vyloučením, poranění močové trubice 6 3£~ního hydrogelu CL PAA do třech segmentů podél penisu na protilehlých stranách v množství do i , 5 ml na segment do celkového množství 8,0 ml.

Čtvrtá skupina o třech psech byla jako skupina kontrolní.

<· , l ) _(r psí byli postupně jeden pó druhém utraceni intreavenozni ¹ -jM'němbut-aiwou' injekcí-t akt ------- - —-...

testovaná zvířata pq 1, 7 ;a 14 dnech a i, 3 a 6 měších·od implantace, hydrogelů CL PAA;

kontrolní po 1, » 3 a. 6 měsících. ··» a.

Exc.idoyané kousky celoprůřezových plátků penisu, lokální místní uzliny a plíce PSŮ, společně s kontrolními plátky byly fixovány v 10 a 6 %-ním neutrálním formalinu a v CarnoitcvéXa-—pal-i.ně____dehv-dr-at.ovány v alkoholu vzrůstající koncentrace'a byly ' *· , . .. J. ‘ ,· pokryty parafinem. . ^v i*

Preparáty byly obarveny hemátoxýlinem a eosinem, metodou ..... /-,-.../ ... · ~·- - , ‘ ,·.·. ...

van Gison pyřoíuchEinem, metodou Weigert na elasticitu atuluidinovou modří při různém pH barvicího roztoku pro následnou), -détekc)iJhTýko~sámihoÍírý)káhŮ~Chemickými' a'. enzymatickými metodami .

Glykoproteiny a glykogen byly detekovány McManus- periodickou ^lkyseiou Schifiovou reakcí (v dalěim jako PAS-reakce), soli vápníku byly detekovány von Kóssovou metodou, PNA (nukleo* '?- · - «· . * . . ,ί . . . · vé kyseliny) *byly detekpvány Brachetovou metodou (pomocí ribonukleasy)..... .

Studována byla aktivita následujících enzymů:

i,-.

- malatdehydrogenasy (dále jen MDGj;

—sukcinatdehydrogenasy (dále jen SDG) metodou Nachlass;

- 1aktatdehydrogenasy (dále jen LDG); .

- glukoso-6-fosíatdehydrogenasy (dále jen G-6-PDG), NADa NADPdiaforasy metodami Hesse, resp. Scarpelliho a resp. Pearce;

-“alka!) ické ~í osf atasý’ (čiálě jen ÁP)~ Gomoriho metodou a

- adenosintrifosfatasy (dále jen ATPase) metodou

.... -í

Wachste.in-Meisel. . _ý

Nervové tkáně byly impregnovány dusičnanem stříbrným metodou Bielschowsky-Gross.

Histochemícké reakce byly prováděny a řízeny podle doporučeni v příručce Pearce E.: Histochemistry - Histochemie (ruské vydání Gistochimija, překlad z anglického, 2. vyd., Moskva 1962).

Studie odhalily, že:

A. V případě subkutánní injekce hydrogelů. CL PAA;

následující den byl na místě vpichu injekcí pozorován otok tvaru rukávu měkce elastické konzistence s určitým zeslabením kůže (u j4dnoho psa se vyvinul zanedbatelný edém a hyperémie tkání obklopujících implantát s malou íokálni hemoragií, která, se rozpouštěla, takže sedmý den byla považovatelná za manipu- ·, lační zranění; ;

po 7 dnech neexistovaly vizuálně znatelné hemodynamické, změnu působící a zánětlivé reakce. Při histologickém zkoumání se implantát jevil jako velká světlemoďrá vakuola, obklopená pouzdrem tenké spojovací tkáně, oddělující hydrogei CL PAA a fascii penisu a kožní povlak. Pouzdro se skládalo ze dvou vrstev mladých íibroblastů s jemnými kolagenovými a elastickými vlákny, která byla vidět kolem. Pyroninoíilie a zvýšená aktivita redox enzymů (SDG, MDG, NAD- NADPdiaforás, LDG) a AP jsou typické pro cytoplazmU ve fibroblastech. EvýSená aktivita G-6-PDG odhalila aktivaci pentosového metabolismu. Volná infiltrace leukocytů a makroíágŮ byla pozorována ve vrstvě blízko povrchu hydrogelů. Pouzdro mělo periferií granulované tkáně mírného počtu nově narostlých cév, pokrytých zduřelými epitelovými buňkami, jejichž lumeny byly lokálně zvětšené a naplněné krev tvořícími elementy. Proliíeračni fibroblasty, histiocyty a osamomocené plazmatické buňky byly detekované v adventicii cév. u žádného z případů nebyla pozorována reakce abnormálně velkých buněk. Při žádné hodnotě pH použitých roztoků nebyla

- 25'6 po, zbarvení toluidinovou modří.detekována žádná metachromatická r. . . .. t . * *,· i / , ohni ska. -Malý počet onervových vl áken ^^impregnovaných rdus i čnaríem střibrným/^Vykazoval různé změny, 'jako.lokální žduření .axónů, ^j ; <· * * · ztrátu jejich vláknité struktury, vakoulizaci, varikózitu, . x τ*. »_r '7 ^x' hypo- nebo hyperimpregnaci. Občas byla pozorována akumulace .

exoplázmy kolem nervových vláken nebo ná jejich koncích, :>·· , ? , · * · .---- r *·' · ' ' částečná nerovnoměrnost myelinové membrány;a její rozklad, na krátké.ía. dlouhé .fragmenty.... ..Tyto j změny -jsou—typické- -pro- nervová T ‘ í ' ‘ ' ,.₄' vlákna při jejich kompenzačně-adaptivním*restruktuřováníjako. odezva na tlak pouzdra ’na hydrógel CL PAA;

_po 14 dnech mákKCtf.ágffitz.l-g.ukocv.tová_reakceLv—tká n í ch—v—okol-1iimplantátu „hydrogelu CL PAA nevýznamně vzrostla; byla pozorová-¹¹ , . ,.'*..·.,. ' ť» I- ‘ , t na vysloveně.; í ibroblaétbvá .reakceý/yčetňě, pokračující tyorby '<' · “ 7' . v·' '' ,.ΐ ’? ' ' J·'’.......: ' « , $ . ’ propojovacího'tkáňového pouzdraíkolem vakuoly; pouzdro.se lokálně jevilo?' jakcv náhodně/ uspořádaná; kolagenová'-'a elastická' 'ifc , * vlákně./¹· maj ící mladé’' í ibroblasty' a mezi tím nově .vy tvořené kapilár/·; -žáťímcgj.najj6^:gtá'tníčhLml sťechLjakdTžřale’j.Š’í2spoj/wacíL- — * ¹ .^r ? tkáň, skládající se z několika řad kolagenových a elastických vláken uspořádaných vedle.sebe a rovněž proliíeračních íibroblastů. Obsah; RNA v cytoplazmě' a nukleu se zvýšil a rovněž ¹ · Ϊ aktivita redox a hydrolytických enzymův Fibroblastová-^; cytoplaz. .. ·. . · ·· -·. '. . .· / ’ ma se obohatila o metachromatické granule^, které^;jsou snadno .detekovatelné toluidinovou modří při pH 2,8 jako důkaz zvýšení syntézy glykosaminoglykanů. Počet, nově narostlých cév se ostře snížil v tkanině obklopující pouzdro a buňky hystiogenního typu, produkující glykošoaminglykany a kolagen, převažovaly. Abnormálně velké buftky se vyskytovaly extrémně málo. 2měny nervových vláken byly takové, jak již bylo shora uvedeno.

jeden měsíc po injekcích sé okolo vakuoly hydrogelu CL PAA vyvinulo pouzdro zralé propojovací tkáně, skládající se z kruhově uspořádaných kolagenových a elastických vláken a mezi tím šdozrálými^-í ibřoBIasty/obsahujícími mírné množství RNA a výěších sulíatoglykosaminoglykanů, detekovaných toluidinovou modří při pH 2,8. Aktivita redox a hydrolytických enzymů ve fibrocyi tové cytoplazmě byla normální. Občas byla pozorována na povrchu hydrogelu reakce buněk, která se jevila jako volná diluzní infiltrace makrofágu a a plazmatických buněk. Struktura tkáně obklopující implantát byla zcela normalizována a nebyla rozdílná od podobné tkáně intaktních zvířat. Reaktivní změny v citlivých nervových vláknech se začaly snižovat a objevovaly se hlavně jako nepravidelná zvětšení nebo zeslabení axonů a v jejich fokální hypo- nebo hyperimpregnaci.

o 6 měsíců později zůstávaly tvar a rozměry implantátu prakticky takové, jaké byly během prvních 24 hodin po injikování hydrogelu CL PAA. Histologicky se implantát jevil jako integrálně dobře zapouzdřená tmavomodrá vakuola. Pouzdro se skládalo z jednoho nebo dvou polí fibrocytů a řádně uspořádaných kolagenových a elastických vláken, ve kterých nebyly von Kossovou mátodou detekovány žádné soli vápníku. Tkáně obklopu,*í.

jící implantát nejevily Žádné reaktivní, hemodynámické, dystroΛ íické, nekrotické, zánětlivé nebo jiné změny ani tkáňové a buněčné nepravidelnosti. Po impregnaci dusičnanem stříbrným se _:nervová vlákna jevila jako normální.

Β, V případě endoíasciálni injekce hydrogelu CL PAA: ₊ následující den a po 7 dnech se penis jevil rovnoměrně zduřelý a vykazoval zvýšenou resilienci. Tělesná teplota psů byla normální, zbarveni kůže na místech vpichu injekci bylo obvyklé, lokální zánět nebyl pozorován. Histologicky se implantáty na místech vpichu injekcí jevily jako světlemodré vakuoly. Po sedmi dnech bylo pozorováno uzavření vakuol hydrogelu CL PAA do ténkostěnných pouzder, skládajících se hlavně z jedné nebo dvou vrstev mladých íibroblastů, a jemných propojujících vláken a stejně nově vytvořených kapilár, obklopujících íibroblastové vrstvy, zatímco leukocyty a makroíágy byly pozorovány na povrchu hydrogelu. Obsah RNA v cytoplazmě a nukleu se zvýšil a rovněž sé zvýšila aktivita SDG,' MSG, NAD- a NADTdiaforásy,

LDG a G-6-PDG v cytoplazmě. Granulačni tkáň, obklopující pouzdro měla nově vytvořené kapiláry se slabě rozšířenými, krví naplněnými lumeny a zduřelým endotheliem. V adventicii krevních , ’ ' - 27 . '.......... ' : /·*. ^;. ;·

.. , ^?· '< ·.^!* ·

- ř cév byly nalezeny prolilerační’ fibroblasty a některé plazmatic- ·-> — ké buňky. Hi stochemičké reakce potvrdí ly, že dystroí ické,a, nšHto7^_někřdbiotické' změny^ve-f-aecíálni^tkáni,,^obklopující .

' implantát. a^? implantátem vytlačené,*nebyly.detekovány . · Takto, po zbarvení preparátů roztokem toluidinové modří, při libovolném , ' ,í;_t- ' ^{: :} ' : ’ ' ;V ''—~^Í;r —“r r— rr/· -_:, -_Ί - , . : .. . J '·,

J. ./ pH; nebyly zjištěny metacHromatická(ohniska, která by ukazovala ,-~ ^: , - ha destrukci hydrogelu CL PAA. ¹ Permeabilita c?év zůstala nořmál.. ,.ní,._nebot'.nebyl detekován-PAS-pozitivní materiál, který je:, sta-...

. bilní vůči amylase a v- .perivaskulárních. prostorech, a rovněž ve , stěnách malých a středněvelkých cév/'kdežto,aktivita AP. · a ATPasy^ ve stěnáčíťmi'krooběhbvéhb’ lůžka zůstávala- nízká. ---/ ' .f - ‘ ' * ’ -__v některých případech bylo zj ištěno,'.že nervová vlákna, impregnovaná dusičnanem-stříbrným a -zkoušená Spi eímey.erovou metodou,

F _a v byla vlnovitého nebo spirálovitého tvaru a, v jiných případech, ;

‘ byla na kořících zduřelá. Demyelinační místa se vyskytovala 7 . Ί málo, stejně ., jako řídké byio.fiokální .rozšíření nervových vlá- 7 • r ♦ ' ken, tvořících smyčkové struktury. Byla pozorována nečetná pro__________-tiijerácé^-hypéřtrof-i-ckýc-h»Schwannový.ch<,buněk. Zrněny^je^.třěJoa .

brát jako odezvu, nervových vláken na tlak, vyvolaný ' implantátem; '7 , po 14 dnech .reakce makroíágu poblíž implantátů byla poněkud intensivnější ,/.ale-mimořádně,velké buňky nebyly pozorované.

Byla pozorována zřetelná fibroblastová reakce a růst pouzder propojovací tkáně kolem vakuol; některá pouzdra, skládající se s náhodně uspořádaných kolagenových.a elastických vláken s mla— ,dými fibroblasty mezi nimi a vysokým obsahem PNA v cytoplazmě a zvýšená redox aktivita enzymů. Na jiným místech bylá zjištěna zralejší propojovací tkáň, skládající se z několika polí kolagenových a elastických vláken a buněk fibroblastového typu.

V granulační tkáni, sousedící s pouzdry, byl pozorován zvýšený počet histiogennich buněk a enížený poěet nově narostlých cév,

Endothelium a střední membránová struktury, adventicie cév a hěmodymamické f aktory-se-nezmění ly , -zatímco změny, nervových buněk byly takové, jak bylo popsáno v předchozím;

'i po měsíci se implantátová pouzdra skládala z buněčných elementů fibroblastových řad, íibrocyty s mírně pyroninoíilní cytoplazmou byly převládající. Obarvení methylenovou modři při pH 2,3 ukázalo ve íibroblastech mírný počet výše sulfátovaných glycosaminoglykanS. Enzymová aktivita ve íibrocytové cytoplazmě souhlasila s kontrolní. Podpovrchová vrstva hydrogelu CL PAA byla do určitého stupně infiltrována makrofágy a plazmatickými buňkami. Nebylo pozorováno ani porušení krevního toku, zánět, degenerace ani nekróza tkání, sousedících s implantáty. Ještě byly pozorovány změny v nervových vláknech, jak byly zmíněny dříve;

měsíce po injikování bylo pozorováno zvýšeni basoíilie hydrogelu CL PAA. Gelové vakuoly byly od fascie dobře definované tenkým pftouzdrem propojovací tkáně kolagenových a elastických vláken s íibrocyty mezi tím. Krevní cévy byly normální. Nebyla pozorována žádná odezva tkání penisu (íascie, jako u kontrolních, se jevila jako kruhovitě uspořádaná, dobře definovaná kolagenová a elastická vlákna bez ztráty integrity a bez kalciíikace mikro- i makrohladin, nervová vlákna byla normální);

po 6 měsících byl penis psQ co do tvaru a rozměrů při vi&

zuální prohlídce podobný tomu, co bylo pozorováno druhý-sedmý den. Histologicky se implantáty jevily jako integrální, dobře' zapouzdřené tmavomodré vakuoly. Pouzdra se skládala z jednoho nebo dvou polí íibrocytů a správně uspořádaného tenkého kolagenu a elastických vláken a nabyly zjištěny žádné soli ani makroskopickou nebo mikroskopickou von Kossovou metodou. Ve tkáni sousedící s implantátem nebyla zjištěna Žádná reaktivní, hemodynamická, degenerativní, nekrotická, zánětlivá nebo jiná změna, ani tkáňové nebo buněčné nepravidelnosti. Nervové tkáně, impregnované dusičnanem stříbrným, byly jak u pokusných, tak u kontrolní zvířat virtuálně identické. V místních lymfatickýcb uzlinách, intra.-trabeculárních a trabeculárních místech corpus carvernosum penisu, penisových cévách a v plicích nebyly zjištěny částečky hydrogelu;

JT

- 29V případě intrakavernových injekcí'hydrogelů CL PAA:

V__T -Ca; ·«· ···* ? » · * ' * ' ' ’pol^a- 7’óhěch“obarvení-hematoxyli-nem.--a«eosinembOdhaliicu hydrogei CL PAA, vypadající jako homogenní světíemodré^vakuoly, - , , . ' . . ¹. -» * ;

které, běhemšédmí dnů, byly Obklopeny tenkými*pouzdry propojovací tkáně, které způsobovaly 'posunutí a lehkou kompresi t-rabe/ v ^T j - ' t * .

culí corporum cavernosum penisu¹tuniky.albuginea. Pouzdra seskl.adala jz .Xenkých, většinou kolagenových vláken a jednoho nebo dvo.u poli fibroblásťů. Propojovací tkáně trabeculů corporum * <

cavernosum penisu 'sousedící s pouzdry byly obvyklé struktury.

mající jasně definované hladkě'svály' s malým' Počtem- elastických vláken bez/jakýchkoliv známek degenerace nebo nekrózy při histochemí cké a histologické kontrole.’ Na i povrchu implantátů hydrogelů -CL.PAA by ly· pozorovány méně-ivýznamné shluhy leukocytů . . * ’·' '>,/ * , -„.· . , t; - ' ·' ‘ v .

·, '' :* ·. ř ‘ '· · a makroíágčř; Intra-trabeculární mí sta byla vyplněna méně vý-

v. . ' ^r' znamným množstvím krve a endotheiiúm bylo lehce.'zduřelé. Menší.,arterie á vény byly mírně naplněny krví a měly lehce zesílené ..

.šjtíěny (pr imárňě následkem - zduření endothel i a -, a proli-íe^ací íibroblastů, histiocytů a plazmat i ckých buněk v advent i-qiáT nich membránách). Bylo zjišťováno, že pouzdra jsou obklopena, granulatíní tkání, skládající se z malého počtu tenkostěnných, nově narostlých cév a různých buněk, hlavně histiogenniho původu, jako :fibroblas.t.ů, histiocytů. Některá^Tnervová vlákna po impregnování _;a zkoumání Spielmeyerovou metodou vykazovala změny axonu, myelinové membrány a Schwannových buněk. Nebyly pozorovány žádné mimořádně veliké, buňky jako následek rozkladu cizí látky. Pozorováno bylo zkroucení, lokální zduření a nepravidelné tloušťky nervových tkání, jakož i varikózita a ztráta vláknité struktury v axonu, sférické a kyjovitá zvětšení ná jejich koncích a lokální demyelinace. Byla zjištěna reaktivní proliferace Schwannových buněk, z nichž některé byly hypertrofované;

po 14 dnech leukocytové a makroíágové reakce kolem implantátů hydrogelů CL PAA poněkud- z intenzívněly-,- ..ale .mimořádně velké buňky, schopné rozkládat cizí látku, jak již bylo zmíněno, nebyly zjištěny. Propojovací tkáně pouzder kolem implantátů byly, v některých případech, lehce porézní a skládaly se z náhod30 ně uspořádaného kolagenu a elastických vláken a mladých fibroblastů a některé z nich se jevily jako zralejší a skládaly se hlavně že souběžných kolagenových vláken, včetně elastických vláken a fibroblastických elementů. Periíokální granulačni tkáň se skládala z malého počtu zploštěných, nově narostlých cév a íibroblastů, obsahujících mírné množství RNA a granulí vysoce sulfatovaných glykosaminoglykanů. Změny v nervových tkáních probíhaly jako lokálně zduřelé axony, ztráta vláknité struktury v nich, vakuolizace, varikézita, hypo- a hypeimpregnace a, . případně, lokální nahromadění oxoplazmy, buď podél nervových vláken nebo na jejich koncích, částečné zhrubnutí myelinové membrány a její dezintegrace na krátké a dlouhé fragmenty, což lze považovat za kompenzačně-adaptivní odezvu na kompresi. V míst- nich lymfatických uzlinách intertrabeculárnich místech corporum cavernósum'! vénách penisu a v plicích nebyly detekovány částečky hydrogelu CL PAA; ’’ po měsíci byly implantáty hydrogelu CL PAA obklopeny tenkým, zralými pouzdry propojovací tkáně, skládajícími se z kruhově uspořádaných kolagenových a elastických vláken s dozrálými fibrobiastovými elementy, které byly zjištěny v jejich polích. Nevýznamná diíúzní infiltrace makrofágů a plazmatických buněk·; byla pozorována ve vrstvách implantátů sousedících s jejich povrchem. Trabecule propojovací tkáně corporum cavernósum nebyly strukturně odlišné od kontrolních a byly pokryty normálním endotheliem. V intei—trabeculárních prostorech bylo možno zjistit malé množství krve. Stěny vén a artérií corporum cavernósum nejevily viditelné strukturální změny. Reaktivní změny v nervových vláknech, ve srovnání s předchozím obdobím, byly méně výrazné a projevovaly se jako nepravidelné zesílení nebo zeslabení axonů a lokální hypo- nebo hyperimpregnace;

po třech měsících byl hydrogel hustější a stal se basoíilním. Implantáty byly odděleny od okolních tkání tenkostěnnými pouzdry souběžných kolagenových a elastických vláken s malým počtem fibrocytů mezi nimi. Na povrchu implantátů nebyly pozorovány buňečné elementy. Sousední tkáně s krevními cévami měly . Jr TfrX tf

- 31 - ......

. · Z.’ r

Λ , * i-τ r.. ..._. f normální strukturu. Gly kosami noglykany v základní, int.erst íciál*- '* ní šubstanciv’- vláknité- formace a^buněěné elementy^ propoj ovaci tkání? Sy íy' vi rtuáíné ’ iďénti čkě? s kontrol ní mi' ^£-Změny - v_ř-ňě-rvoyýGh- , vláknech nebyly pozorovány; ' ” ř-. ’* , . ' . . * '· ' ·’ ·'· po 6 měsících měl penis psů tvar a rozměry podle vizuální-.

J .? . \ , , , <

ho pozorování-podobné,' jako byl pozorovány druhý-sedmý den,. / ; '*Λ v . . J·- '

-Histologickyise^impiantáty jsyily jako.integrálnídobře za ' · V '.....ΐττ- :^,_s------“ř- ' - pousdřené, tmavomodré vakuoly. Ppuzdra se skládala z. jednoho nebo dvou polí íibrocytů a pravidelně uspořádaných'tenkých.ko-......, , _____. . <__7______ .. ¹ lagenových' a ^;e'lastických^L'v.láken a žádné “sol i\íápn'í ku“ňě'byTy ~ __^-.j7.;j_Ť štěny ani makroskopickou, árii mikroskopickou von Kossovou .

metodou) Ve tkáni sousedící s implantátem nebyly pozorovány žádné'reaktivní, hemodynamické, degeneratiyní, nekrotické, zá- . 'nětlivé*a. Ji-né. změny,'vCetně tkáňových a buněčných nepravidelnosti . Po impregnaci dusičnanem stříbrným se..nervová vlákna-.

.ukázala být virtuálně identická u pokusných ikontrolních zví-.

__L—lřat—VůmlstOÍk:.h_íyml at ických-uzl^ňách^v. v^ -inter-trabecu 1 ární-eh^: ·. mí stech cqrporum cavernosum a ve vénách penisu a rovněž.i-v plicích nebyl zjištěny částečky hydrogelu CL PAA.

Podobná’ moří ologická. data byly získána, klinickým pokusem,.

- Jako zkušební materiál.'byl .použit biotopický vzorek hypodermické buněčné tkáně, odebrané zdravému 4.5-ti letému mužskému dobrovolníku, kterému 6 let před biopsii bylo intrádermálně injikováno 10 ml nového hydrogelu o koncentraci 8 % CL PAA.

Biotopický vzorek byl fixován v 10 & formalínu, dehydratován v alkoholu vzrůstající.koncentrace a byl vložen do parafinu. Preparáty byly obarveny hematoxylinem a eosinem; kolagenová vlákna byla stanovena van Gisonovou metodou a elastická v.lákna resorcin—fuchsinem Weigertovou metodou; glykosaminoglykany byly stanoveny roztoky toluidinové modři při různých hodnotách pH použitím požadované chemické a enzymatické kontrolykoncentrace glykoproteidu a glykógenu byly stanovovány pomoci *

PAS-reakce metodou McManus.

Makroskopicky byl biotopícký vzorek oválného tvaru, měkce elastický, světle růžové barvy, bez jakýchkoliv viditelných změn, které by ho odlišovaly od sousedních tkání.

Při mikroskopickém zkoumání všechny vzorky po obarvení hel 4 matoxylinem a eosinem nabyly modrou barvu různého stupně intenzity. Hydrogelový implantát byl prostoupen dobře cévně prokrvenou jemnou propojovací tkání, skládající se hlavně z řádně uspořádaných kolagenových a elastických vláken a základní substance, která obsahovala nevýznamné množství buněčných prvků (zpravidla jako neaktivní fibroblasty, protože při'obarvení toluidinovou modři při pH 2,8 žádné stopy metachromasy, prokazované glykosamí nglykanynebyly detekovány v cytoplazmě těchto íibroblastů a například solitérních mononuklearních makrofágů).

í

Tato propojovací tkáň měla cévy situované jako skupiny a se stěnami nepravidelné tloušťky se zploštělým endotheliem.

Znaky akutního a chronického zánětu, například polymorfonukleárni leukocyty, epitheloidní buňky, abnormálně velké buňky, schopné rozrušovat cizí materiál a lymfatické i histiócy.tové infiltráty se vůbec nevyskytovaly, absentovaly i příznaky , alergických reakcí, například lymfocyty, makroíágy a histiocyty, a rovněž příznaky hemodynámických poruch, jako pletora.cév, pre-stáza,‘hemostáza, trombóza a malignita, např. buněčné nebo tkáňové nepravidelnosti a buněčná proliferace. Soli vápníku nebyly v preparátech detekované ani makro- ani mikroskopicky, *

Alterativni, t.zn. dystrofické nebo nekrotické změny nebyly zjištěny.

Nebylo pozorováno vláknité pouzdro, obklopující implantát.

Základní metoda nápravy kosmetických nebo funkčních vady lidského těla s použitím nového biokompatibilního hydrogelu CL

PAA spočívá v následujícím33 na základě anamnézy, prohlídek a, je-li třeba,,na základě ^řlabórátořrtichTstudii Obecně--přijatelných pro¹ pacienty, „„kteří.,. _ ' ' - .. ,_ř ...... ‘ mají být 'ošetřeni chirurgicky (zejména /^individuální'odezvuna ant-biotika) , se načrtnou předběžné následující závěry:

- za prvé,^fdefinuje ee orgán,-který má být ošetřen co do _?r , -V _ř * jeho tvaru, .rozměrů a funkční působnosti a . ' ,

- za druhé, rozsah, takti ka , a' forma ‘ (ambulantní,“nebo hospitalizace) budoucího ošetřování; <·* · · .·-£.' ···

-předr-in ji kován í m . nového ..hydrogelů se navodí anestézie , '⁴. 5(zpravidla lokální infiltrace);'

- f.·' ' Ster i l/ňí hydrogel Clí PAA,.doplňkově * saturovaný antibakte. ř- - · · · ·· - - ,' .,..

riální preparací, se vštřiku-je pomalu (obvykle, nadvakrát nebo natřikrát) do'místa, které má být ošetřeno, pří přibližně, nor- mální—tě ie s né—teplotě—L3'6-3.7^-C_)_^T.L ' _

Tato metoda je nejčastěji aplikovatelná v plastické chirurgii prsu (výhodně v případě aplazienebo. hypomastíe) a v plastické chirurgii penisu v případě ’ ímpotence.«manifestova ’ . ΓΒ ·· T . IT·** . . .... - . . . _s . .

né chabou^-erekcí následkem stáří neboho úrazu.. . ., ......

Tak v plastické chirurgii prsu se hydrogel CL PAA, který má výhodně koncentraci v mezích 5,0 až 6,0 a nejvýhodněji v mezích 5-, 0 až 6,0 iň j iku je retromammalně, intrakapsulárně a/nebo subfasciálně ve dvou nebo třeéh stupních v závislosti na individuální anatomii prsu, obvykle v množství 40 až 160 ml (ale nikoliv více než 200 ml) na jeden prs a stupeň.

V plastické chirurgii penisu se hydrogel, který má výhodně koncentraci 4,5 až 6,0 ^6 a nejvýhodněji 5,0 zpravidla intra— kavernálně injikuje do třech ťřábečulárníčh segmentů z obou stranpodél penisu. Celkové množství hydrogelů CL PAA, potřebné pro jednu faloplastickou operaci, je výhodně v mezích 40 až 60 ml. Specifické množství hydrogelů, které se má injektovat.

se vypočítává z kritéria přijatelného objemu a resilience penisu, s vyloučením možné komprese močové trubice.

' š'

Nový biokompatibilni hydrogeí byl klinicky vyzkoušen.

Specificky byl aplikován pro kosmetické opravy faciálnich vrozených vad a v plastické chirurgii prsu v případech apiazie a hypomastie u Žen.

Na příkladech jsou předloženy následující zprávy pacientů:

(1) Pacient M. (.zpráva o případu č. 15D), nar. 1965.

Diagnóza: Vrozená pravostranná mandibulo-neuro-muskulárni * craniofacialní mikrosomie. _t

Ošetření: (celková anestézie: intravenózně a NLA) první stupeň (listopad 1993):

dvě injekce 10 ml 3,5 %-ního hydrógelu CL PAA intramuskulárně;

druhý stupeň (červen 1994):

injekce a hydrogeí (15 ml) jako v prvním stupni.

Zaznamenané zlepšeni: pravá a levá strana obličeje se jeví symetrické.

(2) Pacientka L. (zpráva o případu Č. 12), nar. 1967, rodila

Diagnóza: Symetrická aplasie prsů._

Ošetření: ve třech stupních (lokální anestézie: 0,5 % roztok novokainu, 30 ml): první stupeň (leden 1991):

intramuskulární, retromammární a subcapsulární injekce 140 ml 6,0 %-ního CL PAA do obou prsů; druhý stupeň (březen 1991):

injekce a hydrogeí (40 ml) jako v prvním stupni; třetí stupeň (květen 1991):

injekce a hydrogeí (60 ml) jako v předchozích stupních.

* i;Zaznamenané zlepšení ; prsy pacientky, mají tvar a rozměr odpor! X ' ’ .. 4 '

- - _v vídající postavě; jejich pružnost je '^podobná^přírodnimMněkkým .tkáním (3).. Pacientka N.. (zpráva o případu č . 73), nar. :1969, nerodila

Diagnóza; . Symetrická hy pomást 'i®/-_% ' \M / ^J' *_r . \ , *,

Ošetření;., .(.lokální., anestézie: 0,5 %· roztok novokainu, ,80 ml):

* V ‘ 'ή “ · · i *

- . první stupeň (únor 1993) » _L ’ * ’ r» · ¹ ¹ - F · 3 .... ‘ ¹ * · . intramuskulární) retřomammárňF a subcapsulární ' ^injekce. 130'mí 6, Ó^rŽ-ňi'fib7’C17‘PA'A.^_'doobóu^prsůj^-—·· ·.- _druhý stupeň (březen 1993)·- injekce a hydrogel (100 ml)' jako v prvním stupni;

y..T ·. i . .

Zaznamenané zlepšení: prsy pacientXy máji tvar a rozměr odpo·+ . -i , t - „ ? - · ” . · ' .!-· , · Τ'··»· < vídající postavě;, jejich, pružnost je v;

podobná pří rodním měkkým tkáním.- ^; *'··*’ ·’ · ff j /I , ^(-4)Ů.PáoiěřÍtká^'K. /(zpřáva-p - případu-či7„L.-}· vna.r,. _19 67, r.odi 1 a.,

Diagnóza: Symetrická hypomastie.

Ošetření': (lokální anestézie: 0,5 Šs roztok novokainu, 80 ml):

první, stupeň, (leden 1994):. , ,

- intramuskulární , re-tromammárni-a subcapsulární

.....- injekce, Í30 ml 6,0 %-ního CL PAA do obou prsů;

^ř .druhý stupeň (červenec Í994)^!:

injekce a hydrogel (60 ml) jako v prvním stupni;

Zaznamenané zlepšení: prsy pacientky mají tvar a rozměr odpovídající postavě; jejich pružnost je podobná přírodním měkkým tkáním.

Efekt ošetřeni v tomto případě by.l kromě toho vyhodnocován z dat, která byly získána počítačovou axiální tomografií hrudi na tomografu SIEMENS SONATBON CR” (Německo) skanováním sekcí po 8 mra'“hloubky“ošetřeného prsu -v—poloze—vieže_.naznak. Dva toq mogřamy z mnohých, které byly sejmuty, jsou zde reprodukovány »'

Obr. 1 ilustruje levý prs po ošetření malformace a korekce velikosti;

Obr. ilustruje nápravu tvaru a velikosti pravého prsu.

Jak je možno na vyobrazeních vidět, oba prsy po ošetřeni byly shledány v normálním stavu a mají pravidelný tvar. Tloušťka kůže nepřekračuje 2,0 mm, bradavky a areoly jsou normální (nedoíormované a nezatažené). Hypoplastická žlaznatá tkáň obou prsů je ventrálně posunuta hydrogelem CL PAA (rozdílná hustota ve srovnáni s hustotou tkáně) injikovaným do retromammarniho prostoru (hustota Slaznaté tkáně je +3,0 až +4,0, hustota hydrogelu je +4,6 až +7,2 a hustota hypodermní tukové buněčné tkáně je -73 až -95 jednotek Hu).

Rozm ěrV glandula mammaria po ošetření jsou následující: příčně: 7,4 cm. pravostranně a 8,0 cm levostranně;

předozadně: 5,0 cm pravostranně a levostranně.

Místní lymfatické uzliny nejsou zvětšené, kostní tkáně prsních kosti a žeber jsou ormálně strukturované.

Laboratorní, pokusná a klinická data umožňuji učinit závěr, Se nový hydrogel CL PAA je chemicky á biologicky stálý, inertní, biokompatibilní a perfektně vhodný pro implantace endoprctéz, pro tamponování kaveren a pro vytváření vnitrotkáňových míst pro ukládání lékařských preparátů s prodlouženou dobou působnosti.

Nový biokompatibilní hydrogel byl zkoušen jako médium pro dlouhodobou kardio- a enceíalograíi i na vzorcích, majících koncentraci CL PAA v mezích 4,0 až 8,0 % a připravených z 0,9 %-niho vodného roztoku chloridu sodného a octanu sodného-

Zkoušky zahrnovaly následující:

měřeni elektrického měrného odporu hydrogelu, uspořádaného jako 1 mm vrstva mezi elektrografickou elektrodou deskového \

- 37 - ·· typu (typ. EKMK-6) ó průměru '9 mm tloušťce 3 mmjs pocínovanou, ? poměděnou - nebo.poh li ní kovanou Kontaktním plochou > ?

„. . .. . ; ' ·. -4 “ ..... ....... ** -· “;· ‘••''•-i

--,15, •ei-jú:.-;..-jc-suzsr-.«pisf · 4?: *.«šwŮ4siei-isfWBW

J * ' ^ť ’ . ' ' 1 -rf < . “ ₄ -5' ' .

V měření elektrického odporu co do jeho 24-hodinové , stability a ' - - . *'

...... ^J <' ' - ^? ' ’ -...... -^i.r· ---- Ý .· . * · ' , : _{d r} ' ”· . . ' .

stanovení schopnosti snášet „prodlouženou (i, -7-a 15 denní

ϊ. j '· ί ' « ΰ .pozorování) apli_kaci_ v'oblastikůže na předloktí- bl ízko: .lokte na. skupině dobrovolníků z lékařského personálu, r skládá jící se '' i „ ‘ ze dvou mužů a dvou žen.-’ r

Elektrický měrný odpor byl oď S,0-do 9,0 ,kOhm/cm u: vzorků.

BCH6 a BCH7 a od 10,0 der 20,0 kOhm/cm u-vzorkůBCH8 a BCH9;.

. ř *

a. zůstával nezměněnou každého ze vzorků po dobu 24 hodin, měřeΆ ' '*· ·'···'- ' ^A ‘^Γ ’·*' .£*' “ ·' * t Γ ‘ · '<* í ní byla opaíkována s komerční'elektrodovou'pastou od í.irmy.

'' . · _t'... 'j ’ ·*'.*. .... . .

SIEMENS AG, která má elektrickýůměrný’ odpor'3,0,. kOhm/cm, » j /'edvšech''zkóůěkáčh--byd-a -polari-zovatel-nost -pocínovaných elektrod 450 mV, „poměděiiých elektrod 150 mV a oohliníkovaných elektrod 700 mV. Při měření elektrického měrného odporu nebyla pociťována parazitní polarizace.

Při vizuálním“ pozorování Žádné ‘z¹ aplikačních míst na-kůži .. ^r„ i ” * během.sledovaných. Časových úseků nevykazovalo viditelné podráždění (zčervenání nebo svědění) a, co více, ani poranění kůže (maceraci). 15-tý den v jednom případě u jedné ženy kůže kolem náplasti, kryjící hydrogelovou aplikaci, zrůžověla.

Spontánní vytěkání hydrogelu CL PAA s viskbzitou 1 až 1,1 Pa.s (10 až 11 poisě), z prostoru mezi horizontálně uspořádanými měřicími elektrodami nebo zpod náplastí nebylo pozorováno.

Táto “data ukazují-, že nový -hydr-oge-I-CL PAA je aplikovatelný jako imerzní médium pro monitorování elektrolýzaologických parametrů lidského organismu a pró elektroíoretické injikování léků přes kůži ,

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Biokompatibilní hydrogel obsahující polymer na základě akrylamidv, připravený s použitím iniciátoru radikálové polymerizace v apyrogenní vodě jako disperzním médiu, vyznačující se tím, Že polymer je zesíťovaný polyakry1amid, připravený s použitím biokompatibilniho zeslťovaciho činidla.
2. Biokompatibilní hydrogel .jako v nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje zesíťovaný polyakrylamid, připravený s použitím methylen-bis-akrylamidu jako zeslťovaciho Činidla a směsi persulíatu amonného a tetramethylendiaminu jako iniciátoru polyáerizace.
3. Biokompatibilní hydrogel jako v nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje od 3,5 do 9,0 as hmotnostních zesiťovaného polyakrylamidu.

.
4. Biokompatibilní hydrogel jako v nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje íyziologicky neutrální ve vodě rozpustnou sól.
5. Biokompatibilní hydrogel jako v nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje chlorid sodný jako íyziologicky neutrální ve vodě rozpustnou sfil.