CZ2011103A3 - Pyrimiddinové slouceniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, zpusob výroby a použití - Google Patents

Pyrimiddinové slouceniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, zpusob výroby a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ2011103A3
CZ2011103A3 CZ20110103A CZ2011103A CZ2011103A3 CZ 2011103 A3 CZ2011103 A3 CZ 2011103A3 CZ 20110103 A CZ20110103 A CZ 20110103A CZ 2011103 A CZ2011103 A CZ 2011103A CZ 2011103 A3 CZ2011103 A3 CZ 2011103A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
amino
pyrimidine
dichloro
group
aryl
Prior art date
Application number
CZ20110103A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ305457B6 (cs
Inventor
Jansa@Petr
Holý@Antonín
Zídek@Zdenek
Kmonícková@Eva
Janeba@Zlatko
Original Assignee
Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR v. v. i.
Ústav experimentální medicíny Akademie ved CR, v.v.i.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR v. v. i., Ústav experimentální medicíny Akademie ved CR, v.v.i. filed Critical Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR v. v. i.
Priority to CZ2011-103A priority Critical patent/CZ305457B6/cs
Priority to EP12710650.8A priority patent/EP2680847A1/en
Priority to EP17158250.5A priority patent/EP3195867B1/en
Priority to US14/000,461 priority patent/US8883798B2/en
Priority to PCT/CZ2012/000020 priority patent/WO2012116666A1/en
Publication of CZ2011103A3 publication Critical patent/CZ2011103A3/cs
Publication of CZ305457B6 publication Critical patent/CZ305457B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/34—One oxygen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/38—One sulfur atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Predmetem vynálezu jsou pyrimidinové slouceniny obecného vzorce I, snižující produkci oxidu dusnatého (NO) a zároven prostaglandinu PGE2, které v koncentracích, které snižují produkci techto faktoru o 50 %, nemají negativní vliv na životnost bunek, zpusob prípravy techto sloucenin, farmaceutický prostredek s jejich obsahem a jejich použití pro lécbu zánetlivých a nádorových onemocnení.

Description

Vynález se týká polysubstituovaných pyrimidinových derivátů vykazujících duální snížení produkce oxidu dusnatého (NO) a prostaglandinu E2 (PGE2) a jejich použití jako léčiva.
Dosavadní stav techniky
V odborné literatuře existují spolehlivé údaje o tom, že dlouhodobě a výrazně zvýšené koncentrace prostaglandinu E2 (PGE2) a oxidu dusnatého (NO) se vyskytují u mnohých závažných lidských onemocnění. I když jejich přesná úloha v etiopatogenezi nemocí není dosud přesně rozpoznána, dosavadní experimentální a klinické nálezy dokumentují, že jak PGE2, tak i NO jsou právem středem pozornosti při vývoji nových léčiv.
PGE2 je biologicky aktivní prostanoid, vznikající několikastupňovou enzymatickou přeměnou kyseliny arachidonové, která je součástí buněčných membrán. Konečnou a rozhodující úlohu v tvorbě PGE2 má enzym cyklooxygenasa COX-2. Za normálních okolností je aktivita tohoto proteinu ve tkáních a buňkách zanedbatelná. K prudkému nárůstu aktivity dochází za patologických stavů a v reakci na různé impulsy biologické, chemické nebo fyzikální povahy. Významnými aktivátory jsou prozánětlivé cytokiny, zvláště interleukin-1β (IL-Ιβ), faktor nekrózy nádorů (TNF-α) a interferon-y (IFN-γ) [viz např. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 20, 677-682, 2000, a Clin. Exp. Allergy 30, 1275-1284, 2000], dále také infekce a UV záření.
NO je produkt transformace aminokyseliny L-argininu enzymem NO syntasou (NOS). Existují tři izoformy tohoto enzymu. Dvě z nich (endotheliální a neuronální NOS; tj. eNOS a nNOS) produkují konstitutivně velmi malá množství NO. Jejich funkcí je regulace cévního tonusu a neurotransmise. Inducibilní NOS (iNOS) se nachází v téměř všech buňkách a tkáních organizmu, ale za normálních okolností nevykazuje žádnou aktivitu. Stejně jako v případě COX-2 dochází k aktivaci iNOS a následně k velmi intenzivní produkci NO za různých patologických podmínek, např. při hypoxii. Nej významnější mi stimulatory aktivity iNOS jsou bakteriální produkty (lipopolysacharid, lipoteichoová kyselina, peptidoglykany) a některé cytokiny. NO má zásadní význam v imunitní obraně proti virům, bakteriím a jiným parazitům. Poškození regulace, kdy za ~2~ · ·..· ··· ··· ···· ·· ·· ·♦·· patologických stavů dochází k trvalé aktivaci iNOS a tím k dlouhodobé nadprodukci NO, má však pro organizmus velmi nepříznivé důsledky. Zvýšené koncentrace vyvolávají fatální hypotenzi a podílejí se na etiopatogenezi zvláště zánětlivých a nádorových onemocnění. Plynný NO je nestabilní a přeměňuje se na toxické produkty, jako je peroxynitrit a další. Dlouhodobé zvýšení NO produkce vede posléze k poškození DNA.
Velmi účinným inhibitorem aktivity COX-2 jsou glukokortikoidy, které jsou však silně imunosupresivní. V praxi se používají jak neselektivní (ibuprofen, indomethacin), tak i selektivní inhibitory COX-2, např. celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib; tzv. „coxiby“. Umožňují poměrně účinnou léčbu zánětlivých onemocnění, především revmatoidní artritidy a osteoartritidy. Problémem jsou, nebo mohou být, jejich vedlejší účinky na kardiovaskulární systém, které byly zjištěny v případě rofecoxibu, což bylo příčinou jeho stažení z farmaceutického trhu.
PGE2 se považuje za příčinu bolestí a horeček souvisejících s procesem zánětu. Předpokládá se, že aktivita COX-2 a zvýšená produkce PGE2 hrají důležitou úlohu také v patogenezi neurodegenerativních nemocí se zánětovou složkou [ J. Mol. Neurosci. 33, 94-99, 2007]. Selektivní COX-2 inhibitory proto snižují riziko Alzheimerovy [ Brain 131, 651-664, 2008] a Parkinsonovy choroby a pravděpodobně i astmatu. Se zvýšenými hladinami PGE2 je spojena také ateroskleróza. V tomto případě se však podávání dosud známých selektivních inhibitorů COX-2 nedoporučuje vzhledem k výše zmíněné kardiotoxicitě a i z toho důvodu se v současné době hledají nové typy inhibitorů [Curr. Drug Targets Cardiovasc. Haematol. Disord. 5, 303311,2005].
Inhibice PGE2 se považuje za jeden z velmi perspektivních přístupů nejen u arthritických onemocnění, ale i v terapii nádorových onemocnění [ W.K. Wu, J.J. Yiu Sung, C.W. Lee, J. Yu, C.H. Cho, Cancer Lett. 2010, elektronicky zveřejněno před publikací tiskem]. Zvýšená aktivita enzymu COX-2 a nadměrná produkce PGE2 byly nalezeny v nádorech tlustého střeva [Gastroenterology 107, 1183-1188, 1994], žaludku [Cancer Res. 57, 1276-1280, 1997], plic [Cancer Res. 58, 3761-3764, 1998] a prsu [Int. J. Oncol. 10, 503-507, 1997]. Z mechanizmů, které se podílejí na pro-kancerogenním vlivu PGE2, jsou popsány účinky anti-apoptické a angiogenní [J. Cancer Res. Clin. Oncol. 127, 411-417, 2001]. V souvislosti s možným protinádorovým využitím inhibitorů produkce PGE2 se nej častěji uvažují nádory tlustého střeva [ Biochim. Biophys. Acta 1766. 104-119, 2006]; možnosti jejich využití budou však zřejmě širší ~3~ ·:· ·:·
[Oncogene 29, 781-788, 2010], Inhibice COX-2 snižuje např. i riziko vzniku ne-melanomových kožních nádorů po ozáření UV paprsky [Photochem. Photobiol. 84, 322-329, 2008]. Dva z inhibitorů COX-2, konkrétně celecoxib a refecoxib, byly povoleny FDA jako doplněk při standardní léčbě pacientů s familiární adenomatózní polyposis [Front. Biosci. 9, 2697-2713, 2004],
Podle současných, experimentálně podložených výsledků se předpokládá, že léčba zánětlivých a nádorových onemocnění je účinnější, pokud se inhibitory PGE2 podávají současně s inhibitory NO, byť oba vykazují protinádorové účinky již samy o sobě. Např. selektivní inhibitor COX-2 nimesulid a inhibitor iNOS L-NG-nitroarginin redukují karcinom tlustého střeva u potkanů [Biofactors 12, 129-133, 2000]. Maximální protektivní účinek vůči rozvoji experimentální ulcerativní kolitidy u potkanů byl popsán při současném podání COX-2 inhibitoru rofecoxibu a inhibitoru iNOS aminoguanidinu [Inflammopharmacology 15, 188-195, 2007]. Za nej pravděpodobnější mechanizmus příznivého účinku melatoninu na kolitidu u experimentálních zvířat je rovněž považováno jeho současné inhibiční působení na produkci NO a PGE2 [World J. Gastroenterol. 9, 1307-1311, 2003].
Inhibitor PGE2 (celecoxib) a také selektivní inhibitory iNOS (aminoguanidin a SC-51) omezují rozvoj nádoru tlustého střeva, experimentálně vyvolaného u potkanů. Protinádorová účinnost se výrazně zvyšuje, jsou-li oba typy inhibitorů podány současně [Cancer Res. 62, 165-170, 2002]. Současným inhibičním vlivem na produkci NO a PGE2 se vysvětlují i protinádorové účinky některých látek přírodního původu, např. získaných z ostružiníku západního [Cancer Res. 66, 2853-2859, 2006],
V rámci předkládaného vynálezu bylo zjištěno, že nové 5-substituované pyrimidinové deriváty podle předkládaného vynálezu jsou schopné duálního snížení produkce NO i PGE2, a jako takové mohou být využity pro léčbu některých zánětlivých a nádorových onemocnění.
Substituované pyrimidiny jsou látky dobře známé z literatury [např. přehledový referát: Rewcastle, G.W. Pyrimidines and their Benzo Derivatives; Comprehensive Heterocyclic Chemistry III, 2008, 8, 117 - 272. Elsevier, Oxford]. Pro jejich přípravu se často využívá 2,4dihalogenpyrimidinů, jejichž atomy halogenů jsou následně modifikovány pomocí široké palety reakcí. Tyto 2,4-dihalogenpyrimidny byly zkoumány především jako meziprodukty při přípravě dalších substituovaných pyrimidinů a jejich biologická aktivita nebyla většinou testována.
Z literatury jsou např. známé protivirové aktivity 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinu [Annals of the New York Academy of Sciences 284. 294-304, 1977; Experientia 35(3), 321-322, 1979], Některé práce se dokonce zabývaly testováním protizánětlivé aktivity pyrimidinových derivátů, ale na vlastní 4,6-dihalogenpyrimidiny bylo pohlíženo jako na meziprodukty a jejich biologická aktivita nebyla proto studována [Československá farmacie 10. 433-439, 1986]. Atomy halogenu v polohách 4 a 6 nabízejí navíc možnost přípravy příslušných mono či diaryIpyrimidinů pomocí postupů popsaných v literatuře [Journal of Medicinal Chemistry 50, 2060-2066, 2007; Journal of Heterocyclic Chemistry 46, 960, 2009].
5-Substituované 4,6-dihalogenpyrimidiny jsou z literatury známy jen velice málo. Výjimkou je 2,5-diamino-4,6-dichlorpyrimidin, který se hojně používá jako meziprodukt při přípravě purinových derivátů [např. Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 19( 1,2), 297-327, 2000].
Z literatury jsou známy tyto další příklady použití 5-substituovaných pyrimidinových derivátů:
1) Sloučeniny následujícího vzorce jako inhibitory glykogen synthasy kinasy (typ 3) - tento enzym je jeden z hlavních regulačních enzymů obratu glykogenu [WO 2007/040440]:
kde Rs a Ro jsou pouze H, CN a halogeny.
2) Sloučeniny následujícího vzorce jako neselektivní inhibitory tvorby celé škály cytokinů jako TNF-α, IL-1, IL-6, IL-Ιβ, IL-8, IL-12 a jako neselektivních inhibitorů celé řady enzymů jako thromboxan-synthasa a cyklooxygenasy (typ 1, 2 a 3):
kde R5 je pouze vodík, -OH, -NH2, -N3, alkyl, alkyloxy, aryloxy, heteroaryloxy, -SR^, -S(O)nR7, haloalky!, aminocykloalkyl, aminoalkyl, aminodialkyl, -NH(Ci-C5)nX , -NH(CH2)nOH, -NHNH2 a alkylhydraziny.
~5~ ·»
Látky tohoto vzorce vykazují velmi vysokou toxicitu v koncentracích použitých pro stanovení produkce cytokinů [WO 2007/031829] a podstatou jejich působení tedy může být pouhý cytocidní účinek na buňky imunitního systému. Terapeutický potenciál takových látek je prakticky nulový.
3) Sloučeniny následujícího vzorce jako silná kancerostatika [WO 2006/079556]. Tyto sloučeniny jsou vysoce cytoxické už v nanomolámích koncentracích:
η(υ-Ο1 f y n^r4 * kde X je pouze NR1R2, OR či SR.
4) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky stimulující imunitní systém pomocí interakce s TLR 7 receptorem [WO 2009/067081]:
NR3R4
Ri N^NH2 kde Ri je pouze alkyl, alkoxy, alkylthio a kde R3 je pouze vodík či alkyl.
5) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky inhibující širokou paletu kinas a fosfatas s cytotoxickým účinkem pro použití jako kancerostatika [US 2009/0318446]:
R2 kde R3 a R4 jsou libovolné uhlovodíkové substituenty či OR, COR, COOR, CN, CONR]R2, NRiR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR1R2, R, halogen, CF3, NO2 či alicyklický substituent. Všechny látky obsahují indolový kruh připojený přímo ke kruhu pyrimidinovému.
~6~
6) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky inhibující fosfoinositid-3-kinasu (PI3Ks) s cytotoxickým účinkem pro použití jako kancerostatika [WO 2009/120094]:
r5 kde Ri a R2 jsou nezávisle aryl, heteroaryl či heterocykloalkyl; R5 je pouze halogen či -OSO2R; Q je libovolný linker; T je pouze -CO-, -CS-, -SO2-; X, Y a Z jsou nezávisle dusík či CR, R je vodík či malý alkyl.
Podstatou biologické aktivity těchto látek je přítomnost chemicky reaktivní alkylační skupiny T-C-R5.
7) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky inhibující (protein-tyrosin)kinasu pro použití jako kancerostatika [WO 2006/000420]:
kde Ri, R2, R3, R4 a R5 jsou prakticky jakékoliv substituenty; X, Y a Z jsou nezávisle dusík či CR5. Mezi substituenty X a Zje ale možná pouze libovolně substituovaná fenylaminokarbonylamino skupina.
8) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky inhibující HMG-CoA-reduktasu, což vede ke snížení rychlosti biosyntézy cholesterolu [WO 2005/030758]:
kde Ri, R2, R3 a R4 jsou prakticky jakékoliv substituenty; X je dusík či CR5. Z jsou ale pouze fragmenty odpovídající těmto vzorcům:
9) Sloučeniny následujícího vzorce jako látky inhibující produkci IL-1, IL-6, IL-8, TNF-α a TNF-β k léčbě onemocnění vyvolaných těmito cytokiny [US 2000/006096748]:
R4 Ri^An r2^n^r3 kde R3 a R4 jsou pouze NR5R0, NHS(O)2R7, NRioC(Z)Rg, NR]oC(Z)NR5Rí, NRi0C(=NRii)ORio či NR10C(Z)NR5R6.
10) Sloučeniny následujícího vzorce jako stimulátory produkce nervového růstového faktoru pro léčbu neurodegenerativních chorob [WO 99/19305]:
R1 kde R] je pouze aminoskupina substituovaná jedním či dvěma alkylovými zbytky, které mohou být dále substituované. Tyto alkylové zbytky mohou společně tvořit i kruh, ovšem tento kruh může být pouze heterocykloalkyL
11) Sloučeniny následujícího vzorce pro použití jako kancerostatika [CA 2093203]:
R7 r6
Ri Rs \ / R5
R2—/ NH R4 / N r3 kde R2 a R3 jsou pouze vodík či malý alkyl.
12) Sloučeniny následujícího vzorce jako inhibitory aktivace transkřípěních faktorů (jako např. NF-κΒ a AP-1) pro použití jako protizánětlivé léky [US 5811428]:
~8~
R2 kde R4 a Rě jsou téměř jakékoliv substituenty a R5 je pouze -C(O)NRaRb, C(S)NRaRb. -NRaC(O)Rb a -NRaC(S)Rb.
Tyto látky inhibují produkci široké palety cytokinů a dalších signálních molekul, jako jsou IL-1, IL-2, IL-8, TNF-α, TAP-1, MHC, E-selectin, VCAM-1, ICAM-1. c-mys, ras a p53. Tyto faktory (NF-κΒ a AP-1) mají i další přirozené biologické funkce jako např. účast NF-κΒ při přenosu nervového signálu (synaptická plasticita) či ukládaní paměti [Synapse 35 (2), 151-159, 2000], Uvedené látky s ne selektivním účinkem mají malý terapeutický potenciál.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou póly substituované pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce I,
kde
Xi je vybrán ze skupiny zahrnující -Cl, -Br, -I, aryl, heteroaryl, přičemž u substituentů aryl a heteroaryl je aromatický kruh přímo spojen s kruhem pyrimidinovým;
X2 je vybrán ze skupiny zahrnující -Cl, -Br, -I, aryl, heteroaryl, přičemž u substituentů aryl a heteroaryl je aromatický kruh přímo spojen s kruhem pyrimidinovým;
Ri je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, NH2, OH, SH, NHNH2, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl;
R2 je vybrán ze skupiny zahrnující halogen, -NH2, -OH, -NHNH2, -NO, -NO2, -N3, -SH, -SO3H, SO2NH2, -SCN, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl a fosfono;
kde ~9~ ..............
alkyl je lineární nebo rozvětvený Cj až CI0, s výhodou C2 až C6, nejvýhodněji C3 až C5 alkylový řetězec, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -0-, -Snebo -NRc- skupinou, kde Rc je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, přičemž alkyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =O, =NH, =S, $N, halogen, aryl, heteroaryl, -NH2, -CN, -COORa, kde R^ je vodík nebo Ci až C6 alkyl;
alkenyl je lineární nebo rozvětvený C2 až C10, s výhodou C2 až C6, nej výhodněji C3 až C5 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -0-, -S- nebo -NRC- skupinou, kde R< je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina může být nahrazena =N- skupinou, přičemž alkenyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, =N. halogen, -NH2, aryl, heteroaryl, -CN a -COORf, kde Rf je vodík nebo C| až Cf, alkyl;
alkynyl je lineární nebo rozvětvený C2 až C10, s výhodou C2 až C&, nejvýhodněji C3 až C5 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu trojnou vazbu, který může případně obsahovat i dvojnou vazbu, v tomto uhlovodíkovém řetězci může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -0-, -S- nebo -NRg- skupinou, kde Rg je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina může být nahrazena =Nskupinou, přičemž alkynyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =O, =NH, =S, =N, halogen, NH2, -CN, aryl, heteroaryl a -COORh, kde Rh je vodík nebo Ci až Cé alkyl;
cykloalkyl je lineární nebo rozvětvený C3 až C10, s výhodou C3 až Cg, nejvýhodněji C5 až Cg uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jeden cyklus, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -0-, -S- nebo -NRj- skupinou, kde Rj je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, přičemž cykloalkyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =O, =NH, =S, ξΝ, halogen, -NH2, -CN, aryl, heteroaryl, a -COORj, kde Rj je vodík nebo Ci až C6 alkyl;
~ιο~ ............
cykloalkenyl je lineární nebo rozvětvený C4 až C10, s výhodou C4 až Cg, nejvýhodněji C5 až Cg uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu a alespoň jeden cyklus, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -O-, -S- nebo NRk- skupinou, kde Rk je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina nahrazena =N- skupinou, přičemž cykloalkenyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, =N, halogen, -NH2, -CN, aryl, heteroaryl a -COORm, kde Rm je vodík nebo Ci až C& alkyl;
alkoxy je skupina -0Ra, kde Ra je skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, jak jsou definovány výše;
alkylthio je skupina -SRb, kde Rb je skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, jak jsou definovány výše;
aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 14 uhlíkových atomů, s výhodou 6 až 12 uhlíkových atomů, a obsahující alespoň jedno aromatické jádro, a aryl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, ξΝ, halogen, Ci až Có alkyl, Ci až Cé alkoxy, Ci až Ce alkylthio, -NH2, -CN a -COORn, kde Rn je vodík nebo Ci až Cé alkyl. S výhodou je aryl vybrán ze skupiny zahrnující fenyl, benzyl, nafty!. Aryl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, halogen, C] až Có alkyl, Ci až Cň alkoxy, -NH2, -CN a -COORo, kde Ro je vodík nebo C] až C& alkyl;
heteroaryl je uhlovodíková skupina obsahující 2 až 14 uhlíkových atomů, s výhodou 4 až 10 uhlíkových atomů, a alespoň jeden heteroatom, s výhodou jeden až dva heteroatomy, vybrané ze skupiny zahrnující O, S, N, a obsahující alespoň jedno aromatické jádro. S výhodou je aryl vybrán ze skupiny pyrrol, furan, thiofen, imidazol, thiazol, oxazol, indol a pyridin. Heteroaryl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, =N, halogen, Ci až Cé alkyl, Ci až C6 alkoxy, Ci až C6 alkylthio, -NH2, -CN a -C00Rp, kde Rp je vodík nebo C] až Cg alkyl;
halogen je vybrán ze skupiny zahrnující -F, -Cl, -Br, -I.
fosfono je skupina obsahující O až 8 uhlíkových atomů, -P(O)ORWORX, kde Rw a Rx jsou stejné nebo různé skupiny vybrané ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl jak jsou definovány výše;
kde jednotlivé substituenty mají významy uvedené výše, přičemž
Xi či X2 je aryl či heteroaryl, jak je popsáno výše, kromě nesubstituovaného či libovolně substituovaného indolu, který je polohou 3 indolového kruhu přímo připojen k pyrimidinovému kruhu;
R2 je substituent, jak je popsáno výše, s výjimkou skupin -C(O)NRaRb, -C(S)NRaRb, -NRaC(O)Rb a -NRaC(S)Rb, kde Ra a Rb jsou libovolné substituenty a s výjimkou skupiny ^CN i následujících skupin:
HO^ R7 '^'l^'COORe OH HO_ r7 '^K^COORe OH O.,.-, O- . .OH Jr7 0^ 0.... .oh J>7
ΛΛΛ/
/vw
kde R$ a R7 je libovolný substituent;
Ri je substituent, jak je popsán výše, s výjimkou substituentu -Q-T-C-R5, kde R5 je halogen či -OSO2R; Q je libovolný linker; T je pouze -CO-, -CS-, -SO2- a C je libovolně substituovaný uhlík a dále s výjimkou libovolně substituované feny laminokar bony lamino skupiny;
nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití jako léčiva.
Substituované pyrimidinové deriváty podle předkládaného vynálezu účinně snižují produkci NO a prostaglandinu E2 (PGE2). Tento duální účinek je činí vhodnými zejména pro léčbu onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2. Takovými onemocněními jsou zejména, nikoliv však výhradně, zánětlivá a nádorová onemocnění.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou póly substituované pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce I pro použití jako duální inhibitory produkce NO a prostaglandinu E2.
~ 12~
Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují soli s alkalickými kovy, soli s anorganickými či organickými anionty, soli s anorganickými či organickými kationty a adiční soli s anorganickými či organickými kyselinami či bázemi, a další soli vhodné pro farmaceutické podání,
S výhodou je Ri vybrán ze skupiny zahrnující NH2, formylamino, dimethylamino, (dimethylamino)methylenamino, OH, SH, Cj-Cg alkoxy, Cj-Cg alkylthio, Ci-Cé alkyl, vodík.
S výhodou jsou Xi a X2 nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující halogen, fenyl, pyridyl, furanyl, thiofenyl, pyrrolyl, imidazolyl, benzofuranyl, benzothienyl, naftyl, přičemž aromatické a heteroaromatické skupiny mohou být substituovány jedním nebo více substituenty vybranými z halogenu,, Ci-Cé alkoxy a NO2.
S výhodou je R2 vybrán ze skupiny zahrnující Ci-Ců alkyl, C2-C& alkenyl, C2-Ců alkynyl, NH2, fenyl, benzyl, přičemž uvedené skupiny mohou být substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, NO2, Cj-C6 alkoxy.
Ve výhodném provedení jsou předmětem vynálezu následující sloučeniny obecného vzorce I:
Cl II J H2N N Cl 2-amino-4,6'dichlor-5-methylpyrimidin
\ ° O—^^Z Z~ý z CM T 2-amino-5-ethyl-4,6-dichlorpyrimidin
M Z — / 2-amino-4,6-dichlor-5-propylpyrimidin
Cl Λ X H2N N Cl 2-amino-5-butyl-4,6-dichlorpyrimidin
Cl ji J h2nz'k'Ci 2-ammo-4,6-dichlor-5-pentylpyrimidin
\ a o—# z z 04 X 2-amino-5-hexyl-4,6-dichlorpyrimidin
~ 13 ~
ci i nA/\ A A H2N N CI 2-amino-4,6-dichlor-5-isopropylpyrimidin
Cl A nA^ A A H2N N CI 2-amino-5-(sec-butyI)-4,6-dichlorpyrimidin
Cl , nAA\ A A H2N N Cl 2-amino-5-(ter/-butyl)-4,6-dichlorpyrimidin
A X) NY«YZ A Λ H2N N Cl 2-amino-5-fenyl-4,6-dichlorpyrimidin
I M z Az <x o 2-amino-4,6-dichlor-5-(4-chlorfenyl)pyrimidin
CM o z Ca□ όΧ z=< z CM X 2 -amino-4,6-dichlor-5 -(4 -nitrofeny l)pyr imidin
x rrF A A H2N N Cl 2-amino-5-(4-fluorfenyI)-4,6-dichlorpyrimidin
Cl n^-/^ A JL h2n nAi 5-allyl-2-amino-4,6-dichlorpyrimidin
Cl A Λ h2n n ci 2-amino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin
Cl νΛ^Τ01 a A II H2N N Cl 2-amino-4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)pyrimidm
ί X kJ z ZM^Q - / w 2-amino-5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidin
Cl n a A tA H2N N Cl Cl 2-amino-4,6-dichlor-5-(4chlorbenzyl)pyrimidin
I z yAQ — / Ο 2-amino-5-(4-fluorbenzyI)-4,6dichlorpyrimidin
I M z ý=z — / 2-amino-4,6-dichlor-5-(4methylbenzyl)pyrimidin
Cl Λ A LA H2N N Cl OCH3 2-amino-4,6-dichlor-5 -(4methoxybenzyl)pyrimidin
Cl a5t^0l H2N N Cl ^''N02 2-amino-4,6-dichlor-5-(4nitrobenzyl)pyrimidin
Cl Aoci H2N N^CI ^'Br 2-amino-5 -(4-brombenzyl)-4,6dichlorpyrimidin
Cl „A^Y^OCHa A A LA H2N N CI γ ''OCH3 OCH3 2-amino-4,6-dichlor-5-(3,4,5trimethoxybenzy l)pyrimidin
tsi T _ z 0 O—^^Z A z tsi I 2,5 -diamino-4,6-dichlorpyrimidin
1 X AA A A H2N N I 2-amino-5-sec-butyl-4,6-dijodpyrimidin
1 a5oo h2n n^i 2 -amino- 5 -benzy 1-4,6-dij odpyrimidin
Br X N AA\ A A H2N N^Br 2-amino-5-5ec-butyl-4,6-dibrompyrimidin
Br Aoo H2N N Br 2-amino-5-benzyl-4,6-dibrompyrimidin
0 T A h2n n Cl 2-amino-5-buty 1-4-feny 1-6-chlorpyrimidin
O Λ A h2n N Cl 2 -amino- 5 -buty l-4-chlor-6-(pyridin-3yl)pyrimidin
N Q Λ Λ H2N N Cl 2-amino-5-butyl-4-chloro-6-(pyridin-4yl)pyrimidin
Cl 0 A A h2n n ci 2 -amino - 5 -buty I-4-chlor- 6-(4chlorfenyl)pyrimidin
no2 0 A A HZN N Cl 2 -amino- 5 -buty l-4-chlor-6-(4nitrofenyl)pyrimidin
F A A H2N N Cl 2-amino-5-butyl-4-(4-fluorfenyl)-6chlorpyrimidin
F f^a^f I T F'^f'F A A h2n N Cl 2 -amino - 5 -buty l-4-(perfluorfeny 1)-6chlorpyrimidin
oA N A A HjN N Cl 2-amino-5-butyl-4-(furan-2-yl)-6chlorpyrimidin
~ 16-
\ ° z O^=< z CM IE 2-amino-5-butyl-4-(furan-3-yl)-6chlorpyrimidin
O A Λ H2N N Cl 2-amino- 5 -buty 1-4 -chlor- 6-(thiofen-3 yl)pyrimidin
I Ni Z Az ω> zkjA%J - / 2-amino- 5 -buty 1-4-chlor- 6-(thiofen-2 yl)pyrimidin
hna ΝΑγ^\/\ jl A h2n νΆι 2 -amino- 5 -buty l-4-chlor-6-( 1 /7-pyrrol-2yl)pyrimidin
hnA nA/X/V. A A H2N N Cl 2-amino-5 -butyl-4-chlor-6-( 177-pyrrol-3 yl)pyrimidin
An a A H2N N Cl 2-amino-5 -buty 1-4-chlor-6-(1 //-imi dazol-4yl)pyrimidin
hnAn A A H2N N Cl 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(l//-imidazol-2yl)pyrimidin
z N> >=\/oaA y/AJU - / 2-amino-4-(benzofuran-2-yl)-5-butyl-6chlorpyrimidin
0 aAO H2N hAci 2-amino-5-benzyl-4-fenyl-6-chlorpyrimidin
~ 17 ~
||J ϊ 1ΊΠ) H2N N CI 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(pyridm-3yl)pyrimidin
N πΌ h2n N Cl 2-amino- 5 -benzy 1-4 -chloro- 6-(pyridin-4yl)pyrimidin
\ α o—$ C z 04 X 2-amino - 5 -benzy l-4-chlor-6-(4chlorfenyl)pyrimidin
no2 Ϊ iO h2n N Cl 2 -amino- 5 -benzy 1-4 -chlor-6-(4 nitrofenyl)pyrimidin
F 0 Λ Λ Ο H2N N Cl 2-amino-5-benzyl-4-(4-fluorfenyl)-6chlorpyrimidin
F F^J^F F^^r^F jóco H2N N Cl 2-amino-5-benzyl-4-(perfluorfenyl)-6chlorpyrimidin
X M - / 2-amino-5-benzyl-4-(furan-2-yl)-6chlorpyrimidin
11ΊΟ HzN^N^CI ''' 2-amino-5-benzyl-4-(furan-3-yl)-6chlorpyrimidin
~ 18 ~
O h2n N CI 2-amino- 5 -benzy l-4-chlor-6-(thiofen- 3 yl)pyrimidin
I ho z )=z (ZL - / 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(thiofen-2yl)pyrimidin
I hJ KA y/AJ — / o 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(lZ/-pyrrol-2yl)pyrimidin
Z-NH ajOO H2N NXI 2-amino-5 -benzy 1-4-chlor- 6-( 1 //-pyrrol-3 yl)pyrimidin
N J jóoo HjN N CI 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(l H-imidazol-4yl)pyrimidin
hnAn IYO h2n n ci 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(l/7-imidazol-2yl)pyrimidin
I M Z ^V'^A yJ^AAJ - / 2-amino-4-(benzofuran-2-yl)-5-benzyl-6chlorpyrimidin
1 Λ A HZN N Cl 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-jodpyrimidin
1 Aco H2N N Cl 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-jodpyrimidin
~ 19~
I Kj z >=* /=\ 2-amino-5-butyl-4?6-difenylpyrimidin
ν'Ά |i 1 I zl Λ h2n Ν'γ^ι 2-amino-5-butyl’4,6-di(pyridin-3-yl)pyrimidin
Ο,Α h2n N^~y°\ 2-amino-4,6-di(benzofuran-2-yl)-5butylpyrimidin
1 i 1 X M Z \Η/ 2-amino-5-benzy 1-4,6-difeny Ipyrimidin
ΝΆ T O A Á H2N N^Tp^i 'r< 2-amino-5-benzyl-4,6-di(pyridin-3yl)pyrimidin
° γ N'^1—č H2N Ν^'Ύθχ__ Μ^Λ 2-amino-4,6-di(benzofuran-2-yl)-5benzylpyrimidin
Cl A Λ o^ N N Cl H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-methylpyrimidin
Cl N -'A“'- A Λ O^N N Cl H 5-ethyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin
~20~
Cl A A CT N N Cl H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-propylpyrimidin
Cl N Ax\^^ A A O' N N Cl H 5-butyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin
Cl nAzx— A A CTN N Cl H 2-formy lamino-4,6-dichl or- 5 -penty Ipyrimidin
Cl A A N N Cl H 2-formylamino-5-hexyl-4,6-dichlorpyrimidin
ci 1 νΆΑ\ A A Cr N N Cl H 2-formylamÍno-4,6-dichlor-5isopropylpyrimidin
ci A ΝΆγΑ\ A A oA N CI 5-(sec-butyl)-2-formylamino-4,6dichlorpyrimidin
Cl \ n^A a A N N Cl H 5-(te^butyl)-2-formylamino-4,6di chlorpyrimidin
Os ω— ZT 5-fenyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin
ci AYN°2 N A A N N Cl H 2-formy lamino-4,6-dichlor-5 - (4nitrofeny l)pyrimidin
XjA N AA^^ /x A A N N Cl H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4chlorfenyl)pyrimidin
TZ ZH^Q Q ζΛ 5-(4-fluorfenyl)-2-formylamino-4,6dichlorpyrimidin
~21 ~
Cl A Λ Cr N N Cl H 5-allyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin
Cl \'ΑΆ. A j (A N CI H 2-formy lamino-4,6-dichlor-5 - (prop-2 ynyl)pyrimidin
Cl nAs^A A A Cl N N Cl H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(2chloral ly l)pyrimidin
Cl Aon O^'N N CI H 5-benzyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin
Cl Aoq O^N N Cl Cl H 2-formy lamino-4,6-dichlor-5-(4chlorbenzyl)pyrimidin
Cl _ A A L A O'' N N Cl -' F H 5-(4-fluorbenzyl)-2-formylamino-4,6dichlorpyrimidin
Cl AoO. 0^'V'O'CI H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4methylbenzy l)pyrimidin
Cl nAAO a A 11 CT N N Cl ^^OCH3 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4methoxybenzyl)pyrimidin
Cl aAQ N N Cl N02 H 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4nitrobenzyl)pyrimidin
Cl aXXI N N Cl γ OCH3 H OCH3 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(3,4,5trimethoxybenzyl)pyrimidin
Cl Acq N N Cl Br H 5-(4-brombenzyl)-2-formylamino-4,6dichlorpyrimidin
~22~
/ —z z o ' 4,6-dichlor-5-methyl-2- {[(dimethylamino)methylen] amino }pyrimidin
Cl ^N^tAtAci 1 5-ethyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino } pyrimidin
Cl _ ji A N^N N Cl 1 4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamíno)methy len] amino }-5propylpyrimidin
/ —z > z >H X - / 5 -butyl-4,6 -dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin
Cl nA/n/\/ ^N^N^N^CI 4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino] -5pentylpyrimidin
Cl x - Λ A. Ν 'Ν N Cl 1 5 -hexy l-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino } pyrimidin
Cl I nAA ^N^N^N^CI 1 4,6-dichlor-5-isopropyl-2- {[(dimethylamino)methylen]amino} pyrimidin
/ —z >/ z A* yAQ — /—\ 1 5-(sec-butyl)-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino } pyrimidin
ci χ nAA A A N N N Cl 5-(terributyl)-4,6-dichlor-2{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin
A jO A A N N N Cl 1 5-fenyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethylammo)methylen]amino} pyrimidin
/ —z >/ z zpAQ Q\I) z O hJ 4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methylen]amino} -5-(4nitrofeny l)p y rimidin
~ 23
ci Aycl A Á N^N N Cl 1 4,6 -dichlor-5 - (4-chlorfeny l)-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin
? nrF - Al N N N Cl 1 5 -(4-fluorfenyl)-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin
Cl N Αγχχ^ A Λ N^N N Cl 1 5-allyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy 1 en]amino} pyrimidin
Cl nA^Xx A Λ ΝΌΜ ΙΜ Ό 1 4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methy len] amino} -5-(prop- 2 -ynyl)pyrimidin
/ —z >/ z Az M 4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin
/ —z >/ z >z ζρ^Ω o / w 5-benzyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimi din
/ —z >/ z >z - / o 4,6-dichlor-5-(4-chlorbenzyl)-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimi din
/ —z >/ z Az zp^Q 1 q/) Π 5 -(4-fluorbenzyl)-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin
Cl X a5?Cl N N N Cl 1 4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methylen]amino} -5-(4methylbenzyl)pyrimidin
Cl ,α5α> N N N Cl OCH3 4,6-dichlor-5-(4-methoxybenzyl)-2- {[(dimethy lamino)methylen] amino} pyrimidin
Cl .χϊχ'ϋ, N N N Cl NOZ 4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino )methy len] amino} -5-(4nitro benzy l)pyrimidin
--24--
Cl . aAOQ N N N Cl Y OCH3 1 och3 4,6-dichlor- 5 -(3,4,5 -trimethoxy benzyl )-2- {[(dimethylamino)methylen]amino} pyrimidin
/ z >/ z >=\ yA- / CD “Ί 5-(4-brombenzyl)-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methylen]amino} pyrimidin
Cl n. A N Cl 5 -buty 1-4,6 -dichlorpyrimidin
Cl A Λ N Cl 5 -buty 1-4,6-dichlor-2-methylpyrimidin
Cl N'Av^s^x\ Λ A N CI 1 5 -buty 1-4,6-dichlor-2 (dimethylamino)pyrimidin
Cl A A H3CO N Cl 5-butyl-4,6-dichlor-2-methoxypyrimidin
Cl A A HO N Cl 5-butyl-2-hydroxy-4,6-dichlorpyrimidin
Cl A A H3CS N Cl 5-butyl-4,6-dichlor-2-(methylthio)pyrimidin
Cl ČOQ N Cl 5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidin
Cl Aoq N Cl 5-benzyl-4,6-dichlor-2-methylpyrimidin
Cl jÓOO N CI 5-benzyl-4,6-dichlor-2(dimethylamino)pyrimidin
ΛΑ \ $ Q— zK 0 0 rt X 5-benzyl-4,6-dichlor-2-methoxypyrimidin
Cl JČOO HO N Cl 5-benzyl-2-hydroxy-4,6-dichlorpyrimidin
\ ° H=< to X 5 -benzyl-4,6-dichlor-2- (methylthio)pyrimidin
pro použití jako léčiva.
Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu, nesoucích 2-formylamino skupinu, které se připravují selektivní hydrolýzou příslušných 2-[(dimethylamino)methylen] derivátů v organickém rozpouštědle za přítomnosti vody, silikagelu a kyseliny octové při laboratorní teplotě. S výhodou se jako organické rozpouštědlo použije ethylacetát a reakce se provádí při teplotě v rozmezí od 10 do 30 °C.
Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek, obsahující pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Sloučenina obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu může být ve farmaceutickém prostředku obsažena ve volné formě nebo formě farmaceuticky přijatelných solí a s výhodou farmaceutický prostředek dále obsahuje farmaceutické nosiče, excipienty a/nebo diluenty.
Předmětem tohoto vynálezu je také farmaceutický prostředek, který obsahuje pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, jako aktivní složku.
Předmětem vynálezu je dále farmaceutický prostředek, jehož aktivní složkou je pyrimidinová sloučenina obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití k léčbě onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, a to zejména zánětlivých nebo nádorových onemocnění.
Dalším předmětem předkládaného vynálezu je i použití pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro přípravu léčiva ~ 26 ~ k léčbě onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, a to zejména zánětlivých nebo nádorových onemocnění.
Zánětlivé stavy u savců včetně lidí mohou být inhibovány, zmírněny nebo jim lze předcházet. Příklady zánětlivých onemocnění u savců, která mohou být léčena podáním jedné nebo více pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu zahrnují, avšak bez omezení: artritické stavy, jako jsou ankylózující spondylitida (Bechtěrovova choroba), cervikální artritida, fibromyalgie, dna, revmatoidní artritida, lumbosakrální artritida, osteoartritida, osteoporóza, psoritická artritida, revmatické onemocnění, revmatoidní artritida; ekzém, psoriáza, dermatitida a zánětlivé stavy, jako úpal; zánětlivé stavy očí, jako jsou uveitida a konjunktivitida; zánětlivé stavy srdce, jako je myokarditida; zánětlivá onemocnění ženských pohlavních orgánů; zánětlivá onemocnění prostaty; zánětlivá onemocnění ledvin; zánětlivá onemocnění šlach a svalů; plicní onemocnění spojená se zánětem, jako jsou astma, cystická fibróza a bronchitida; stavy gastrointestinálního traktu zahrnující vředy, gingivitidu, Crohnovu nemoc, atrofíckou gastritidu, ulcerativní kolitidu, celiakii, regionální ileitidu, cholecystitidu, peptickou ulceraci, pyrézu, a jiná poškození Gl traktu, například způsobené Helicobacter pylori; viscerální zánět, jako jsou podráždění močového měchýře a cystitida; zánětlivé neurologické poruchy centrálního nebo periferního nervového systému, jakož i bolestivé a horečnaté stavy, jako jsou příznaky chřipky a dalších virových onemocnění, včetně nachlazení, bolesti v bederní a krční páteři, bolesti hlavy a zubů, bolesti ve svalech po námaze, záněty svalů, záněty kloubů a šlach, neuropatické bolesti jako jsou diabetická neuropatie, nespecifická bolest v kříži, bolest při roztroušené skleróze, bolest ve svalech, neuropatie při HIV infekci a neuralgie; roztroušená skleróza; zánětlivé neuropatie a neurologická komplikace AIDS, zánět spojený s autoimunitním onemocněním, s traumatem vyvolaným operací, infekcemi, metabolickými poruchami a tumory, imunologickými událostmi a poruchami jako jsou například sepse, septický šok, endotoxický šok, gramnegativní sepse, syndrom toxického šoku, reakce štěpu proti hostiteli a reakce hostitele vůči štěpu, Alzheimerova choroba nebo pyresis, restenosis, silikóza, plicní sakróza, nemoci vstřebávání kostní tkáně, další nemoci spojené s poruchami funkce imunitního systému jako jsou cukrovka závislá na inzulínu, cukrovka nezávislá na inzulínu, lupus erythematoidis a progresivní retinální atrofie; nemoci spojené s poškozením buněk vlivem vzniku volných radikálů a tedy i oxidativního stresu, jako jsou mrtvice, epilepsie, epileptické záchvaty včetně grand mal, petit mal, myoklonické epilepsie a částečných záchvatů.
Popsané sloučeniny jsou dále použitelné jako antiangiogenní, imunomodulační, antiproliferační a protinádorové látky, použitelné pro léčbu nemocí a stavů, jako jsou, ale bez omezení, rakoviny hematologické, např. leukémie, lymfomy, myelom, nebo pevné rakoviny, například rakovina prsu, prostaty, jater, měchýře, plic, jícnu, žaludku, kolorektální, močo-pohlavní, gastrointestinální, kožní, pankreatická, mozku, dělohy, tlustého střeva, hlavy, krku, vaječníku, melanomu, astrocytomu, malobuněčná rakovina plic, gliom, karcinom bazálních a šupinatých buněk, sarkom jako Kaposiho sarkom a osteosarkom, nebo ošetření poruch tvorby T-buněk jako jsou například aplastická anémie, DiGeorgeův syndrom a Gravesova-Basedowova nemoc.
Dalším aspektem vynálezu je, že pyrimidinové sloučeniny vzorce (I) jsou použitelné v lidské nebo veterinární medicíně, zvláště pro léčení stavů zprostředkovaných COX-2 a iNOS.
Použití pyrimidinů vzorce (I), popsaných v tomto vynálezu, překvapivě nedoprovázejí nepříznivé vedlejší účinky, které jsou obvykle vyvolány použitím klasických protizánětlivých léčiv, např. nesteroidních protizánětlivých léčiv jako je indomethacin, nebo COX-2 inhibitorů.
Podstatou předkládaného vynálezu je překvapivé současné snížení tvorby dvou klíčových signálních molekul (NO a prostaglandinu E2). Tohoto efektu se dosahuje použitím pyrimidinů vzorce (I) podle tohoto vynálezu. Klíčový vliv na biologickou aktivitu sloučenin dle předkládané přihlášky vynálezu má přítomnost substituentu R2. Látky nesoucí vodíkový atom v této poloze vykazují pouze velmi slabé snížení tvorby NO bez efektu na tvorbu prostaglandinu E2 (či dokonce tvorbu tohoto prostaglandinu zvyšují). Oproti tomu zde uváděné látky, mající např. alkylový, arylový či heteroarylový substituent v poloze R2 (či jeho substituovaná analoga), vykazují aktivitu, kterou je překvapivé a terapeuticky velice důležité současné snížení produkce NO a prostaglandinu E2. Je překvapivé, že důležitá je samotná přítomnost substituentu R2, přičemž jako funkční se ukazuje velmi široký rozsah substituentů v poloze R2.
Pod pojmem „léčení“, „léčba“ či „terapie“ se rozumí jak léčení již vyvinutých příznaků, tak i preventivní podávání.
Vynález dále zahrnuje uvedené pyrimidinové sloučeniny vzorce (I), pro podání jako účinné látky farmaceuticky přijatelného prostředku, který může být vyroben pomocí obvyklých postupů, známých v oboru, například tak, že se účinná látka naváže na farmaceuticky přijatelný, terapeuticky inertní organický a/nebo anorganický nosič či excipient, nebo se s ním smíchá.
~28~ ..............
Sloučeniny vzorce (I) podle tohoto vynálezu lze rovněž používat ve formě prekurzoru (proléčiva) nebo v jiné vhodně upravené formě, která uvolňuje aktivní látku in vivo. Takové prekurzory poskytnou například výhodné modifikace substituentu Ri sloučenin vzorce (I), kde lze maskováním [Advanced Drug Delivery Reviews 59, 677-694, 2007; Nature Reviews Drug Discovery 7, 255-270, 2008] funkcionalizované aminoskupiny získat látky s vyšší rozpustností ve vodě a/nebo vyšší orální biologickou dostupností; toto maskování za podmínek in vivo následně uvolní vlastní aktivní látku.
Pyrimidiny vzorce (I) podle vynálezu mohou být podávány v různých lékových formách, např. orálně ve formě tablet, pastilek, tobolek, tablet potažených cukrem nebo jiným filmem, kapalných roztoků, emulzí nebo suspenzí, rektálně ve formě čípků, parenterálně např. pomocí intramuskulámí nebo intravenózní injekce nebo infuze, a transdermálně ve formě náplasti, masti, emulze, pleťové vody, roztoku, gelu, krému a nosního spreje či aerosolových směsí. Farmaceutický prostředek může mít také formu, umožňující řízené uvolňování sloučeniny obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu. Uváděné sloučeniny mohou být také zpracovány na depotní prostředek. Tyto prostředky s dlouhodobým účinkem mohou být podávány ve formě implantátu, například podkožního nebo nitro svalového nebo ve formě nitrosvalové injekce. K tomuto účelu je možno sloučeniny podle vynálezu zpracovávat spolu s vhodnými polymemími nebo hydrofobními materiály, například do formy emulze v přijatelném oleji nebo spolu s iontoměničovými pryskyřicemi.
Farmaceuticky přijatelné, terapeuticky inertní organické a/nebo anorganické nosiče nebo excipienty, které jsou vhodné pro výrobu tohoto prostředku, zahrnují například vodu, želatinu, arabskou gumu, laktózu, škrob, celulózu, glukózu, stearan hořečnatý, talek, rostlinné oleje, polyalkylengylykoly, oxid titaničitý a podobně. Pyrimidiny vzorce (I) podle tohoto vynálezu mohou být sterilizované a mohou obsahovat další složky, které jsou dobře známé v oboru, jako jsou například konzervační látky, barviva, sladidla, ochucovadla, aromatizéry, rozpouštědla, antioxidanty, stabilizátory, smáčecí nebo emulgační prostředky, např. parafínový olej, manid monooleát, soli na úpravu osmotického tlaku, tlumivé roztoky a podobně.
Kromě toho mohou pevné orální formy společně s účinnou látkou obsahovat diluenty, např. laktózu, dextrózu, sacharózu, celulózu, kukuřičný škrob nebo bramborový škrob; lubrikanty, např. oxid křemičitý, talek, kyselinu stearovou, stearan hořečnatý nebo stearan vápenatý a/nebo polyethylen glykoly; pojivé prostředky, např. škroby, arabskou gumu, želatinu, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu nebo polyvinylpyrrolidon; rozvolňovací prostředky, např. škrob, kyselinu alginovou, algináty nebo sodný glykolát škrobu; bobtnající směsi; barviva; sladidla; smáčecí prostředky, jako je lecitin, polysorbáty, laurylsulfáty; a obecně netoxické a farmakologicky inaktivní látky používané ve farmaceutických formulacích. Farmaceutické přípravky mohou být vyrobeny jakýmkoli známým způsobem, například prostřednictvím smíchání, granulace, tabletování, potahování cukrem nebo potahování filmem.
Orální aplikace zahrnují též formulace s postupným uvolňováním, které mohou být vyrobeny obvyklým způsobem, například pomocí aplikace potahování tablet a granulí enterickým povlakem.
Kapalné disperze pro orální podávání mohou být např. sirupy, emulze a suspenze. Sirupy mohou dále jako nosič obsahovat například sacharózu s glycerinem a/nebo manitol a/nebo sorbitol. Suspenze a emulze mohou jako obsahovat například přírodní gumu, agar, alginát sodný, pektin, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu nebo póly viny lalkohol. Suspenze nebo roztoky pro intramuskulámí injekce mohou společně s aktivní sloučeninou obsahovat farmaceuticky přijatelný nosič, např. sterilní vodu, olivový olej, ethyl oleát, glykoly, např. propylen glykol, a v případě potřeby vhodné množství lidokainu hydrochoridu. Roztoky pro intravenózní injekce nebo infuze mohou jako nosič obsahovat například sterilní vodu nebo mohou být výhodně ve formě sterilních, vodných či izotonických solných roztoků.
Čípky mohou společně s aktivní látkou obsahovat farmaceuticky přijatelný nosič, např. kakaové máslo, polyethylen glykol, polyoxyethylen sorbitan ester mastné kyseliny, surfaktant nebo lecitin.
Optimální terapeuticky účinné dávky, které se mají podávat, mohou být snadno stanoveny odborníky v oboru a budou se měnit, v zásadě podle koncentrace přípravku, podle způsobu podání a vývoje zánětlivého stavu nebo léčeného onemocnění. Kromě toho faktory spojené s příslušným pacientem, který se podrobí léčbě, zahrnující věk pacienta, hmotnost, předepsanou stravu a dobu podání, budou vyžadovat úpravy léčebné dávky na vhodné terapeuticky účinné množství. Obecně se budou denní dávky sloučenin obecného vzorce (I) podle tohoto vynálezu s výhodou pohybovat v rozmezí 0,001 mg/kg až 500 mg/kg, zvláště výhodně v rozmezí 0,01 mg/kg až 100 mg/kg. Přesná dávka bude záviset na výše uvedených faktorech.
Předmětem vynálezu jsou dále póly substituované pyrimidinové sloučeniny nesoucí v poloze 5 jiný substituent než vodík obecného vzorce (I)
N X2 (I), kde
a) pro Xi = X2 = Cl a Ri = NH2 je R2 zvolen ze skupiny, zahrnující: propyl, pentyl, hexyl, isopropyl, sec-butyl, řerř-butyl, 2-chlorallyl, 4-fluorbenzyl, 4chlorbenzyl, 4-methylbenzyl;
b) pro Xi = X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
c) pro Xi = X2 = Br a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
d) pro Xi = Cl, X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
e) pro Xi = Cl, X2 = Br a R| = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
f) pro Xi = Br, X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
g) pro Xi = Br, X2 = aryl či heteroaryl a R| = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
h) pro Xi = I, X2 = aryl či heteroaryl a R, = NH2 je R2 = alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
i) pro Ri = formylamino, Xi = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl aX, = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
~3i~ .................
j) pro Ri = alkylkarbonylamino, arylkarbonyíamino, heteroarylkarbony lamino, Xi ~ Br, I, aryl či heteroaryl, X2 = Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
k) Pro Ri = Λ'Λ-dialkylaminomethylenamino, Xi = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl, X2 = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
1) pro Ri = AJV-di alky lamino-1 -alkylmethylenamino, Λ'.Λ-dialky lamino-1-arylmethylenamino, MAMialkylamino-1 -heteroarylmethylenamino, Xi = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl, X2 = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
kde jednotlivé substituenty mají významy uvedené výše, přičemž
Xi či X2 je aryl či heteroaryl, jak je popsáno výše, kromě ne substituovaného či libovolně substituovaného indolu, který je polohou 3 indolového kruhu přímo připojen k pyrimidinovému kruhu;
R2 je substituent, jak je popsáno výše, s výjimkou libovolně substituovaného fenylú připojeného přímo k pyrimidinovému kruhu, dále s výjimkou skupin -C(O)NRaRb, -C(S)NRaRb, -NRaC(O)Rb a -NRaC(S)Rb, kde Ra a Rb jsou libovolné substituenty a s výjimkou skupiny -CN i následujících skupin:
kde Rb a R? je libovolný substituent;
Ri je substituent, jak je popsán výše, s výjimkou substituentu -Q-T-C-R5, kde R5 je halogen či -OSO2R; Q je libovolný linker; T je pouze -CO-, -CS-, -SO2- a C je libovolně substituovaný uhlík a dále s výjimkou libovolně substituované fenylaminokarbonylamino skupiny;
nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Vynález je znázorněn následujícími příklady, které ho ovšem žádným způsobem neomezují.
~
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 dokumentuje vliv sloučeniny 51 na závažnost adjuvantní artritidy u potkanů, modelu lidské revmatoidní artritidy. Znázorňuje změny v objemu tlapek potkanů po aplikaci kompletního Freundova adjuvans (FCA), v závislosti na čase. Skupiny jsou označeny následovně: O skupina kontrolní, zvířatům bylo aplikováno pouze FCA; · skupina kontrolní, zvířatům bylo aplikováno FCA a podávána 0,5% methylcelulóza (tj. vehikulum); O pokusná skupina, zvířatům bylo aplikováno FCA a sloučenina 51. S aplikací bylo začato 9. den, ukončena byla 16. den po indukci artritidy (vyznačeno šipkami na ose x). Hvězdičkami je označeno statisticky významné snížení otoku tlapek na hladině pravděpodobnosti P < 0.05 (*) nebo P < 0.001 (♦♦*).
Obr. 2A-D dokumentuje léčebnou účinnost sloučenin č. 28 a 51 podle vynálezu na akutní kolitidu, indukovanou u myších samic dextransulfátem sodným. Účinnost byla hodnocena po podávání samotné methylcelulosy (·) jako placeba, sloučeniny č. 28 (□) a sloučeniny 51 (), rozpuštěných vždy v 0,5 % roztoku methylcelulosy a 6-thioguaninu (V) v 0,5 % roztoku methylcelulosy jako positivní kontroly. Statistická významnost: * p < 0.05; ** p < 0.01; ***p < 0.001.
Na obr. 2A je znázorněn účinek podávaných látek na délku střeva (na ose y), na obr. 2B je znázorněn účinek podávaných látek na závažnost onemocnění podle bodové škály (na ose y) , obr. 2C ukazuje účinek podávaných látek na hmotnost sleziny (na ose y) a obr. 2D ukazuje účinek podávaných látek na závažnost onemocnění podle histologického hodnocení (na ose y).
Obr. 3 znázorňuje rychlost hydrolýzy sloučenin podle vynálezu, nesoucích dimethylaminomethylenamino skupinu v poloze 2 pyrimidinového kruhu, na odpovídající 2formylaminopyrimidiny za fyziologických podmínek (reakce pseudoprvního řádu). Na ose x je vynesen čas v minutách, na ose y zbytkové množství výchozí sloučeniny, zjištěné měřením UV absorbance.
Obr. 4 znázorňuje grafickou interpretaci naměřených rentgenových struktur látky 48 ve formátu ORTEP (Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot).
Obr. 5 znázorňuje výsledky testování mutagennosti sloučeniny 28 za použití bakteriálního rodu Salmonella typhimurium TA 100 za použití metabolické aktivace (+MA I) i bez ní (-MA 1). Na ose x je vynesena dávka testované sloučeniny nanášené na plotnu, na ose y počet vzniklých revertantů.
Příklady provedení vynálezu
I . Syntéza sloučenin vzorce (I) podle tohoto vynálezu
GC/MS analýzy byly měřeny na plynovém chromatografu 6890N (Agilent, Santa Clara, CA, USA) připojeném ke kvadrupólovému hmotnostnímu detektoru. Pro analýzy byla použita kapilára s označením HP 5ms (30 m x 0,25 mm; 0,25 pm; Agilent). Nosným plynem bylo hélium s průtokem 1 ml/min.
El hmotnostní spektra byla měřena na přístroji GCT Premier (Waters) v sestavě OA-TOF.
FAB hmotnostní spektra byla měřena na přístroji s označením ZAB-EQ spectrometer (VG Analytical) s využitím FAB (ionizace pomocí Xe, urychlující napětí 8 kV, glycerolová matrice). Elementární složení připravených sloučenin bylo určeno pomocí automatického analyzátoru PE 2400 Series II CHNS/O (Perkin Elmer, USA, 1999).
Bod táni by stanoven pomocí přístroje Stuart SMP3.
TLC bylo prováděno na destičkách TLC aluminium sheets silica gel 60 F254 (MERCK KGaA, Germany).
NMR spektra byla měřena na FT NMR spektrometru (Bruker Avance II 500) v DMSO-í4 (’H při 500 MHz, 13C při 125,7 MHz a 19F při 188,2 MHz), chemické posuny jsou uváděny v částech z milionu, ppm, a interakční konstanty J v Hz.
X-ray struktura byla získána pomocí přístroje Xcalibur PX X-ray diffractometer (Oxford Diffraction).
Základní pyrimidinový kruh sloučenin dle tohoto vynálezu se připraví známou kondenzací diesterů kyseliny malonové s guanidinem v bazickém prostředí. Tato reakce je dobře známa z literatury [Chemische Berichte, 96, 2786, 1963; Journal Organic Chemistry Vol. 40, 37133716, 1975; U.S. Pat. Appl. Publ. No., 2004204386; PCT Int. Appl., 9208705,], ale její provedení má klíčový vliv na výtěžek a čistotu produktu.
Příklad 1: Příprava 5-substituovaných 2-amino-4,6-dihydroxypyrimidinů ~ 34 ~
V 300 ml absolutního ethanolu bylo pod inertním plynem (argonem) rozpuštěno 12,9 g (0,56 mol) kovového sodíku za intenzivního míchání hřídelovým míchadlem. Reakční nádoba byla opatřena kondenzačním chladičem s chlorkalciovým uzávěrem, tak aby nedocházelo k tlakování reakční směsi vlivem masivního vývoje vodíku a rychlého ohřívání rozpouštědla, které přechází až ve var. Po rozpuštění veškerého sodíku a po ochlazení reakční směsi na teplotu místnosti bylo za intenzivního míchání přidáno 21,02 g (0,22 mol) hydrochloridu guanidinu a následně 0,2 mol příslušného diesteru mono-substituované malonové kyseliny (např. 43,26 g diethyl butylamonátu). Reakční směs byla dále intenzivně míchána vzhledem k vylučování pevného produktu, které je tak masivní, že po 2 hodinách už prakticky míchání znemožňuje. Po uplynutí dalších 2 hodin bylo přidáno 200 ml absolutního ehanolu a rekční směs byla za míchání zahřívána k varu jednu hodinu. Poté bylo na vakuové rotační odparce odpařeno cca 200-300 ml ethanolu a k reakční směsi bylo přidáno 500 ml vody. Po promíchání došlo k částečnému rozpuštění produktu (který se nachází ve formě sodné soli). Tato suspenze byla následně neutralizována přikapáním kyseliny octové za okamžitého vyloučení kýženého produktu ve formě sraženiny. Ta byla následně refluxována 10 minut a poté ochlazena na laboratorní teplotu. Toto refluxování a chlazení bylo opakováno ještě 2x za vzniku dobře filtrovatelného pevného produktu. Po odsátí a promytí 2x50 ml vody, 2x50 ml ethanolu a 2x50 ml acetonu byl produkt sušen ve vakuové sušárně při 60 °C a tlaku 0,1 mbar dva dny. Získaná čistota takto připraveného produktu je dostatečná pro následující reakci a dle analýz obsahuje pouze krystalickou vodu.
-am ino-4,6-dihydroxy-5-methy 1-pyrimidin (1)
Bylo získáno 30,86 g (91 % teor. výtěžku); bod tání (dále jen b.t.) >250 °C. 'H NMR (DMSOdey. 10,701 bs, 2H, (2xOH); 6.88 bs, 2H, (NH2); 1.57 s, 3H, (H-Γ). 13C NMR (DMSO-J6): 164,97 (C-4 a 6); 152,53 (C-2); 84,06 (C-5); 8,11 (C-Γ). Pro C5H7N3O2 + 1,6 H2O vypočteno: 35,34 % C, 6,05 % H, 24,72 % N; nalezeno: 35,57 % C, 6,15 % H, 24,59 % N.
2-amino-5-ethy 1-4,6-dihydroxypyrimidin (2)
Bylo získáno 32,54 g (88 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. ’H NMR (DMSO-íZ6): 10,30 bs, 2H, (2xOH); 6,30 bs, 2H, (NH2); 2,14 q, 2H, 7(Γ,2') = 7,3 (H-Γ); 0,88 t, 3H, J(2',l') = 7,3 (H-2'). 13C NMR (DMSO-4): 164,47 (C-4 a 6); 152,54 (C-2); 91,88 (C-5); 15,62 (C-Γ); 13,89 (C-2’). Pro C6H9N3O2 + 1,7 H2O vypočteno: 38,79 % C, 6,73 % H, 22,62 % N; nalezeno: 38,83 % C, 7,90 %H, 22,41 %N.
2-amino-4,6-dihydroxy-5-propylpyrimidin (3) ~ 35 Bylo získáno 33,86 g (94 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. fH NMR (DMSO-dň): 10,30 bs, 2H, (2xOH); 6,31 bs, 2H, (NH2); 2,10 t, 2H, J(r,2') = 7,5 (H-Γ); 1,32 m, 2H, (H-2’); 0,80 t, 3H, J(3’,2’) - 7,4 (H-31). 13C NMR (DMSO-íZ6): 164,75 (C-4 a 6); 152,57 (C-2); 90,20 (C-5); 22,44 (C-Γ); 21,89 (C-2’); 14,17 (C-3r). Pro C7HnN3O2 + 0,6 H2O vypočteno: 46,71 % C, 6,83 % H, 23,35 % N; nalezeno: 46,80 % C, 6,79 % H, 23,32 % N.
2-amino-4,6-dihydroxy-5-isopropylpyrimidm (4)
Bylo získáno 32,36 g (93 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. 'H NMR (DMSO-fl^): 10,45 bs, 2H, (2xOH); 6,62 bs, 2H, (NH2); 2,96 sept, 1H, J(CH,CH3) = 7,1 (H-CH); 1,08 d, 6H, J(CH3,CH) = 7,1 (2xCH3). !3C NMR (DMSO-<76): 164,19 (C-4 a 6); 152,40 (C-2); 94,80 (C-5); 22,94 (CH); 20,96 (CH3). Pro C7HnN3O2 + 0,3 H2O vypočteno: 48,16 % C, 6,70 % H, 24,07 % N; nalezeno: 48,11 % C, 7,62 % H, 23,98 % N.
5-allyl-2-amino-4,6-dihydroxypyrimidin (5)
Bylo získáno 38,57 g (95 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. rH NMR (DMSO-ók): 10,35 bs, 2H, (2xOH); 6,40 bs, 2H, (NH2); 5,73 ddt, 1H, J(2’,l’) = 6,1, J(2’,3’C1S) = 10,0,7(2-,3^) = 17,2 (H2'); 4,87 ddt, 1H, J(3'trans,l') = 1,6, J(gem) = 2,3, ^(3'tranS,2') = 17,2 (H-3’trans); 4,79 ddt, 1H, J(3'ci5,r) = 1,6, ./(gem) = 2,3, J(3'cis,2') = 10,0 (H-3’cis); 2,85 dt, 2H, J(l',3') = 1,6, J(l’,2’) = 6,1 (H-Γ). I3C NMR (DMSO-í/6): 164,36 (C-4 a 6); 152,71 (C-2); 137,73 (C-2’), 113,32 (C-3'), 87,73 (C-5); 26,67 (C-Γ). Pro C7H9N3O2 + 2 H2O vypočteno: 41,38 % C, 6,45 % H, 20,68 % N; nalezeno: 41,44 % C, 6,17 % H, 20,47 % N.
2-amino-4,6-dihydroxy-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin (6)
Bylo získáno 33,47 g (96 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. 'HNMR (DMSO-c^f 10,55 bs, 2H, (2xOH); 6,79 bs, 2H, (NH2); 2,95 d, 2H, Χ(Γ,3') = 2,6 (H-Γ); 2,43 t, lH,J(3',r) = 2,6 (H-3’). 13C NMR (DMSO-<4): 163,69 (C-4 a 6); 152,69 (C-2); 89,05 (C-2'); 84,97 (C-5); 68,02 (C-3’); 12,06 (C-Γ). Pro C7H7N3O2 + 0,5 H2O vypočteno: 48,28 % C, 4,63 % H, 24,13 % N; nalezeno: 48,09 % C, 4,33 % H, 24,23 % N.
2-ammo-5-butyl-4,6-dihydroxypyrimidin (7)
Bylo získáno 39,61 g (97 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. [H NMR (DMSO-^): 10,30 bs, 2H, (2xOH); 6,32 bs, 2H, (NH2); 2,12 t, 2H, .7(1 ’,2') = 7,1 (H-Γ); 1,28 m, 2H a 1,23 m, 2H, (H-2' a H3'); 0,85 t, 3H, J(4',3’) = 7,2 (H-4'). I3C NMR (DMSO-í/6): 164,67 (C-4 a 6); 152,54 (C-2); 90,36 (C-5); 31,04 (C-Γ); 22,32 (C-2'); 21,98 (C-3'); 14,22 (C-4'). Pro C8Hi3N3O2 + 1,2 H2O vypočteno: 46,91 % C, 7,58 % H, 20,52 % N; nalezeno: 47,15 % C, 7,69 % H, 20,36 % N. 2-amino-5-(perdeutero-butyl)-4,6-dihydroxypyrimidin (8)
Z 58 mmol výchozí látky bylo získáno 8,93 g (74 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. *H NMR (DMSO-J6): 10,30 bs, 2H, (2xOH); 6,34 bs, 2H, (NH2). 13C NMR (DMSO-J6): 164,79 (C-4 a 6);
« ·♦ · · · · +, .· i : : : · :
···· ·· ·· »··· ··· ·
152,59 (C-2); 90,35 (C-5); 29,81 m (C-2'); 21,20 m (C-Γ a 3’); 13,00 m (C-4'). Pro ^Η4Ο9Ν3Ο2 + 0,9 H2O vypočteno: 46,09 % C, 11,50 % H (+D), 20,16 % N; nalezeno: 46,17 % C, 7,62 % H, 20,05 % N (dopočet % H na H+D 11,58 %).
2-amino-5-sec-butyI-4,6-dihydroxypyrimidin (9)
Bylo získáno 36,89 g (93 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. ’H NMR (DMS(W6): 10,20 bs, 2H, (2xOH); 6,31 bs, 2H, (NH2); 2,70 m, 1H, (Η-Γ); 1,65 m, 1H a 1,40 m, 1H, (H-2'); 1,06 d, 3H, 7(1,Γ) = 7,0 (H-l); 0,721, 3H, J(3',2') - 7,4 (H-3’). 13C NMR (DMSO-<76): 164,46 (C-4 a 6); 152,47 (C-2); 93,61 (C-5); 31,08 (C-Γ); 27,09 (C-2’); 19,00 (C-l); 13,03 (C-3'). Pro CgHi3N3O2 + 0,8 H2O vypočteno: 48,62 % C, 7,45 % H, 21,26 % N; nalezeno: 48,57 % C, 7,47 % H, 21,18 %N,
2-amino-5-hexyl-4,6-dihydroxypyrimidin (10)
Z 49 mmol výchozí látky bylo získáno 8,35 g (79 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. ’H NMR (DMSO-í/6): 10,25 bs, 2H, (2xOH); 6,28 bs, 2H, (NH2); 2,11 m, 2H, (Η-Γ); 1,31-1,19 m, 8H (H2', 3’, 4', 5’); 0,84 t, 3H, J(6’,5') = 7,0 (H-6’). 13C NMR (DMSO-<4>): 164,73 (C-4 a 6); 152,57 (C2); 90,49 (C-5); 31,60 (C-4'); 28,98 a 28,79 (C-2' a 3'); 22,41 a 22,35 (C-Γ a 5'); 14,26 (C-6'). Pro C|0Hi7N3O2 + 0,2 H2O vypočteno: 55,90 % C, 8,16 % H, 19,56 % N; nalezeno: 55,84 % C, 8,19 % H, 19,63 %N.
2-amino-5-benzyl-4,6-dihydroxypyrimidin (11)
Bylo získáno 43,21g (91 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. !H NMR (DMSO-íZů): 10,42 bs, 2H, (2xOH); 7,18 m, 4H a 7,07 m, 1H (fenyl); 6,46 bs, 2H, (NH2); 3,44 s, 2H, (CH2). 13C NMR (DMSO-íZů): 164,47 (C-4 a 6); 152,68 (C-2); 143,10, 128,31, 127,90 a 125,20 (C-fenyl); 94,51 (C-5); 28,12 (CH2). Pro CnHHN3O2 +1,1 H2O vypočteno: 55,74 % C, 5,61 % H, 17,73 % N; nalezeno: 55,71 % C, 5,54 % H, 17,60 % N.
2-amino-5-fenyl-4,6-dihydroxypyrimidin (12)
Bylo získáno 41,43 g (94 % teor. výtěžku); b.t. >250 °C. rH NMR (DMSO-<4): 10,60 bs, 2H, (2xOH); 7,50 d, 2H, 7,191, 2H a 7,02 t, 1H (fenyl); 6,74 bs, 2H, (NH2). 13C NMR (DMSO-t/6): 162,84 (C-4 a 6); 152,02 (C-2); 135,40, 130,26, 126,84 a 124,19 (C-fenyl); 106,11 (C-5). Pro Cl0H9N3O2 + 1 H2O vypočteno: 54,29 % C, 5,01 % H, 19,00 % N; nalezeno: 54,17 % C, 5,19 % H, 18,82 % N.
Druhým stupněm syntézy sloučenin dle předkládaného patentu je funkční záměna dvou hydroxylových skupin za dva atomy chloru. Pro tyto reakce se obecně používají chloridy minerálních kyselin jako POC13, PCI5, SOC12 či COC12 s různými aditivy jako pyridin, 2methylpyridin, difenylamin či triethylamin. Pro přípravu kýžených 5-substituovaných 2-amino37-
4,6- dihalogenpyrimidinů se ukázaly tyto klasické postupy jako nevhodné vzhledem k velmi nízkým, max. 30% izolovaným výtěžkům. Tento syntetický problém byl vyřešen aplikováním upravené syntetické procedury pro přípravu 4,6-dichlor-2,5-bis{[(dimethylamino)methy len] amino }pyrimidinu [viz Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 19(1,2), 297-327, 2000] za použití Vilsmeier-Haack-Arnoldova činidla.
Příklad 2: Příprava 5-substituovaných 4,6-dichlor-2-{[(dímethylamino)methylen]amino}pyrimidinů
Výchozí 5-substituovaný 2-amino-4,6-dihydoxypyrimidin byl před reakcí znovu sušen ve vakuové sušárně při 80 °C a tlaku 0,1 mbar jeden den. Přítomná krystalická voda totiž zvyšuje množství Vil smeier-Haack-Arnoldova činidla, které je nutné pro plnou konverzi.
Následně bylo 0,1 mol 5-substituovaného 2-amino-4,6-dihydoxypyrimidinu (např. 18,32 g 2amino-5-butyI-4,6-dihydoxypyrimidinu) suspendováno pod inertní atmosférou v 400 ml 2 mol.l'1 roztoku Vilsmeier-Haack-Arnoldova činidla v chloroformu (0,8 mol = 8 ekvivalentů). Při důkladném vysušení výchozí látky a reakční nádoby je možné snížit množství reagentu až na 6 ekvivalentů. Místo chloroformu lze použít další (pro tuto reakci inertní) rozpouštědla jako např. dichlormethan, tetrahydrofuran či toluen. Reakční směs byla následně refluxována 4 hodiny. Během této doby došlo k úplnému rozpuštění výchozí látky a zbarvení reakční směsi na žlutou až červenou barvu. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla reakční směs nalita na led a rychle neutralizována NaHCO3. Získaná směs byla rychle přenesena do dělicí nálevky a okamžitě extrahována 3 x 100 ml chloroformu. Organické frakce byly spojeny a sušeny pomocí MgSO4. Takto získaný chloroformový roztok byl přefiltrován přes malou vrstvu (cca. 0,5 cm) neutrálního silikagelu a následně důkladně odpařen na vakuové odparce za vzniku olejovitého produktu žluté barvy, který postupně prokrystaluje v bílé krystaly pokryté žlutým až načervenalým olejem. Takto získaný produkt byl po přidání 50 ml směsi hexan a ether vystaven působení ultrazvuku po dobu 10 min. Po ochlazení ledovou lázní byly vyloučené krystaly odsáty a 2x promyty směsí hexan a ether. Izolovaný produkt byt sušen ve vakuové sušárně při laboratorní teplotě a tlaku 0,1 mbar jeden den.
4,6-dichIor-5-methyl-2-{[(dimethylamino)methyIen]amino}pyrimidin (13)
Bylo získáno 21,78 g (93 % teor. výtěžku); b.t. 84-86 °C. ’H NMR (DMSO-íZů): 8,55 s, 1H, (CH); 3,16 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3); 2,27 s, 3H, (H-Γ). I3C NMR (DMSO-</6): 163,87 (C2); 160,86 (C-4 a 6); 159,21 (NCH); 118,89 (C-5); 40,94 a 35,02 (2xNCH3); 15,41 (C-Γ). Pro ~38~ ··♦· «· ·· ·«·· ···
C8HioCI2N4 vypočteno: 41,22 % C, 4,32 % H, 30,42 % Cl, 24,04 % N; nalezeno: 41,29 % C, 4,42 % H, 30,56 % Cl, 24,27 % N. MS (El), m/z (%): 232 a 234 [M+] (100).
5-ethyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamiiio)inethylen]ainino}pyrimidin (14)
Bylo získáno 22,45 g (91 % teor. výtěžku); b.t. 78-80 °C. 'H NMR (DMSO-í/ó): 8,56 s, 1H, (CH); 3,17 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3); 2,70 q, 2Η,7(Γ,2’) = 7,4 (H-Γ); 1,111, 3Η,7(2',Γ) = 7,4 (H-2'). 13C NMR (DMSO-76): 163,97 (C-2); 160,58 (C-4 a 6); 159,24 (NCH); 123,86 (C-5); 40,89 a 34,98 (2xNCH3); 22,78 (C-Γ); 12,51 (C-2'). Pro C9Hi2C12N4 vypočteno: 43,74 % C, 4,89 % H, 28,69 % Cl, 22,67 % N; nalezeno: 43,53 % C, 4,98 % H, 28,43 % Cl, 22,89 % N. MS (El), m/z (%): 246 a 248 [M+] (100), 231 a 233 [M+-Me] (53).
4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5-propylpyriiiiidiii (15)
Bylo získáno 23,61 g (90 % teor. výtěžku); b.t. 76-78 °C. *HNMR (DMSO-t/e): 8,58 s, 1H, (CH); 3,15 s, 3H a 3,05 s, 3H, (2xNCH3); 2,72 t, 2H, 7(1',2') = 7,7 (H-Γ); 1,56 m, 2H, (H-2’); 0,961, 3H, 7(3',2’) = 7,3 (H-3'). 13C NMR (DMSO-76): 163,57 (C-2); 160,31 (C-4 a 6); 159,22 (NCH); 126.53 (C-5); 40,93 a 34,95 (2x NCH3); 31,00 (C-Γ); 20,96 (C-2'); 13,81 (C-3'). Pro Ci0Hi4C12N4 vypočteno: 45,99 % C, 5,40 % H, 27,15 % Cl, 21,45 % N; nalezeno: 45,87 % C, 5,32 % H, 27,11 % Cl, 21,37 % N. MS (El), m/z (%): 260 a 262 [M+] (100). MS (FAB+), m/z (%): 261 a 263 [M+H+] (100).
4,6-dichlor-5-isopropyl-2-{[(dimethyIamino)inethylenJainino}pyrimidiii (16)
Bylo získáno 22,83 g (87 % teor. výtěžku); b.t. 77-78 °C. 'Η NMR (DMSO-7e): 8,55 s, 1H, (CH); 3,55 sept, 1H,7(CH,CH3) = 7,2 (CH); 3,17 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3); 1,32 d, 6H, 7(CH3,CH) = 7,2 (2xCH3). 13C NMR (DMSO-76): 163,51 (C-2); 160,43 (C-4 a 6); 159,23 (NCH); 126.49 (C-5); 40,90 a 34,98 (2xNCH3); 38.87 (CH); 19,51 (CH3). Pro Ci0Hi4C12N4 vypočteno: 45,99 % C, 5,40 % H, 27,15 % Cl, 21,45 % N; nalezeno: 46,22 % C, 5,63 % H, 27,43 % Cl, 21,18 % N. MS (El), m/z (%): 260 a 262 [M+] (100).
5-allyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)niethylen]amiiio}pyriinidin (17)
Bylo získáno 24,75 g (96 % teor. výtěžku); b.t. 80-81 °C. ’H NMR (DMSO-í4): 8,58 s, 1H, (CH); 5,86 ddt, 1H, Γ) = 5,8, 7(2',3’cis) = 10,1,7(2^3^) = 17,2 (H-2'); 5,08 dq, 1H, J(3’cis,r) = J(gem) = 1,6, 7(3'cis,2') = 10,1 (H-3'cis); 4,98 dq, 1H, 7(3'trans,l’) = 7(gem) = 1,7, JU’trans^') = 17,2 (H-3'trans); 3,45 dt, 2H, 7(1',3') = 1,7, 7(1’,2') = 5,8 (H-Γ); 3,18 s, 3H a 3,04 s, 3H, (2xNCH3). I3C NMR (DMSO-76): 164.28 (C-2); 161,16 (C-4 a 6); 159,36 (NCH); 132,99 (C-2'); 120,02 (C-5); 116,70 (C-3'); 40,93 a 35,01 (2xNCH3); 33,08 (C-Γ). Pro Ci0Hi2C12N4 vypočteno: 46,35 % C, 4,67 % H, 27,36 % Cl, 21,62 % N; nalezeno: 46,86 % C, 4,89 % H, 27,12 % Cl, 21,33 % N. MS (El), m/z (%): 258 a 260 [M+] (100).
4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5-(prop-2-ynyI)pyrimidin (18) ~39~
Bylo získáno 23,69 g (92 % teor. výtěžku); b.t. 82-83 °C. ’H NMR (DMSO-í/6): 8,59 s, 1H, (CH); 3,62 d, 2H, J(1 ',3') = 2,6 (H-l'); 3,18 s, 3H a 3,05 s, 3H, (2xNCH3); 3,01 t, 1H, J(3',r) = 2,6 (H-3’). 13C NMR (DMSO-í76): 164,50 (C-2); 160,65 (C-4 a 6); 159,57 (NCH); 118,09 (C-5); 79,28 (C-2'); 72,30 (C-3'); 41,00 a 35,07 (2x NCH3); 19,40 (C-2'). Pro CtoHioCl2N4 vypočteno: 46,71 % C, 3,92 % H, 27,58 % Cl, 21,79 % N; nalezeno: 46,78 % C, 3,86 % H, 27,39 % Cl, 21,52 % N. MS (El), m/z (%): 256 a 258 [M+] (100).
5-butyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen] amino] pyrimidin (19)
Bylo získáno 26,13 g (95 % teor. výtěžku); b.t 65-67 °C. JH NMR (DMSO-<Á): 8,55 s, 1H, (CH); 3,16 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3); 2,66 m, 2H, 1,46 m, 2H a 1,35 m, 2H (3x CH2); 0,90 t, 3H, J(4',3') = 7,3 (H-4'). 13C NMR (DMSO-<76): 163,92 (C-2); 160,75 (C-4 a 6); 159,21 (NCH); 122,71 (C-5); 40,89 a 34,98 (2x NCH3); 30,03, 28,83 a 22,12 (C-Γ, 2' a 3'); 13,78 (C-41). Pro CiiHi6C12N4 vypočteno: 48,01 % C, 5,86 % H, 25,77 % Cl, 20,36 % N; nalezeno: 47,80 % C, 5,82 % H, 25,49 % Cl, 20,12 % N. MS (El), m/z (%): 274 a 276 [M+] (41), 231 a 233 [M+-Pr] (100). GC/MS-EI (RT21,76 min), m/z (%): 274 a 276 [M+] (43), 231 a 233 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
5-(perdeutero-butyl)-4,6-dichlor-2-{[(dimethylammo)methylen]animo}pyriinidin (20) Z 20 mmol výchozí látky bylo získáno 4,87 g (86 % teor. výtěžku); b.t. 66-68 °C. *H NMR (DMSO-í4): 8,55 s, 1H, (CH); 3,16 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3). I3C NMR (DMSO-tZ6): 163,97 (C-2); 160,79 (C-4 a 6); 159,74 (NCH); 122,74 (C-5); 40,92 a 34,96 (2x NCH3); 28,83 m, 28,04 m a 20,85 m (C-Γ, 2’ a 3'); 12,67 m (C-41). Pro C11H7D9CI2N4 vypočteno: 46,48 % C, 8,86 % H (+D), 24,95 % Cl, 19,71 % N; nalezeno: 46,60 % C, 5,63 % H, 24,76 % Cl, 19,52 % N (dopočet % H na H+D 8,80 %). MS (El), m/z (%): 283 a 285 [M+] (20), 233 a 235 [M+-per.D-Pr] (100). 5-5e<?-butyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethyiamino)inethylen]aniino}pyrimidin (21)
Bylo získáno 25,64 g (93 % teor. výtěžku); b.t. 67-68 °C. ’Η NMR (DMSO-í/6): 8,55 s, 1H, (CH); 3,30 m, 1H, (H-l'); 3,17 s, 3Ha3,O3 s, 3H, (2xNCH3); 1,90 m, IHa 1,68 m, lH(H-2'); 1,29 d, 3H, 7(1,Γ) = 7,2 (H-l); 0,77 t, 3H, J(3',2') = 7,4 (H-3'). i3C NMR (DMSO-ď6): 163,64 (C-2); C-4 a C-6 nenalezeny; 159,28 (NCH); 125,07 (C-5); 40,90 a 36,03 (2xNCH3); 34,97 (CΓ); 26,49 (C-2'); 17,78 (C-l); 15,50 (C-3'). Pro CHH16C12N4 vypočteno: 48,01 % C, 5,86 % H, 25,77 % Cl, 20,36 % N; nalezeno: 48,21 % C, 5,81 % H, 25,59 % Cl, 20,24 % N. MS (El), m/z (%): 274 a 276 [M+] (100).
5-hexyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen|amino}pyrimidin (22) ~ 40 ~
Z 28 mmol výchozí látky bylo získáno 6,94 g (82 % teor. výtěžku); b.t. 59-60 °C. ’H NMR (DMSO-4,): 8,55 s, 1H, (CH); 3,16 s, 3H a 3,03 s, 3H, (2xNCH3); 2,66 m, 2H, (Η-Γ); 1,49 m, 2H, (H-2'); 1,33 m, 2H, (H-3'); 1,30-1,25 m, 4H, (H-4' a 5’); 0,85 m, 3H, (H-6'). 13C NMR (DMSO-t/6): 163,93 (C-2); 160,76 (C-4 a 6); 159,22 (NCH); 122,75 (C-5); 40,89 a 34,97 (2x NCH3); 31,04 (C-4'); 29,10 (C-Γ); 28,59 (C-3'); 27,79 (C-2'); 22,16 (C-5'); 14,05 (C-6'). Pro Ci3H2oCl2N4 vypočteno: 51,49 % C, 6,65 % H, 23,38 % Cl, 18,48 % N; nalezeno: 51,56 % C, 6,62 % H, 23,61 % Cl, 18,38 % N. MS (El), m/z (%): 302 a 304 [M+] (17), 231 a 233 [M+-Pn] (100).
5-benzyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin (23)
Bylo získáno 28,74 g (93 % teor. výtěžku); b.t. 63-65 °C. *H NMR (DMSO-í/6): 8,59 s, 1H, (CH); 7,30 t, 2H, 7,21 t, 1H a 7,16 d, 2H, (fenyl); 4,10 s, 2H, (CH2); 3,18 s, 3H a 3,05 s, 3H, (2xNCH3). 13C NMR (DMSO-í/6): 164,36 (C-2); 161,55 (C-4 a 6); 159,46 (NCH); 137,63, 128,77, 127,99 a 126,68 (fenyl); 121,24 (C-5); 40,95 a 35,04 (2x NCH3); 34,49 (CH2). Pro C14H14CI2N4 vypočteno: 54,38 % C, 4,56 % H, 22,93 % Cl, 18,12 % N; nalezeno: 54,14 % C, 4,37 % H, 22,75 % Cl, 18,41 % N. MS (El), m/z (%): 308 a 310 [M+] (100). GC/MS-EI (RT 26,85 min), m/z (%): 308 a 310 [M+] (100), min. 99,5% čistota.
5-fenyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylammo)methylen]ainino}pyrimidin (24)
Bylo získáno 26,31 g (89 % teor. výtěžku); b.t. 67-68 °C. ‘H NMR (DMSO-í4): 8,66 s, 1H, (CH); 7,47 t, 2H, 7,43 t, 1H a 7,35 d, 2H, (fenyl); 3,20 s, 3H a 3,08 s, 3H, (2xNCH3). 13C NMR (DMSO-í/6): 164,74 (C-2); 160,08 (C-4 a 6); 159,56 (NCH); 134,01, 130,10, 128,73 a 128,63 (fenyl); 124.11 (C-5); 41,02 a 35,12 (2x NCH3). Pro C13HI2C12N4 vypočteno: 52,90 % C, 4,10 % H, 24,02 % Cl, 18,98 % N; nalezeno: 52,83 % C, 4,27 % H, 24,21 % Cl, 18,84 % N. MS (El), m/z (%): 294 a 296 [M+] (100).
Příklad 3: Příprava 5-substituovaných 2-amino-4,6-dkhlorpyrimidinú
Substituované 4,6-dÍchlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidiny byly podrobeny odchránění (dimethylamino)methylen chránící skupiny z aminoskupiny v poloze 2 pyrimidinového kruhu. Pro tuto reakci bylo využito postupu popsaného v literatuře [Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids 19(la2). 297-327, 2000], jenž byl inovativně modifikován, tak aby bylo možné produkt z reakční směsi pouze odfiltrovat.
Do baňky bylo předloženo 50 mmol substituovaného 4,6-dichlor-2{[(dimethy lamino)methylen]amino}pyrimidinů, 200 ml 99% ethanolu a 20 ml konc. HC1.
~4i~ .:.
Reakční směs byla následně zahřívána na 50 °C po dobu 2 hodin, během kterých se začínal vylučovat krystalický produkt přímo z reakční směsi. Poté bylo přidáno 300 ml vody a reakční směs byla intenzivně míchána 10 minut za kvantitativního vyloučení žádaného produktu, který byl následně odsát a promyt 2x 50 ml směsi voda/ethanol (1/1), lx 5% vodným roztokem NaHCO3 a lx 50 ml směsi voda/ethanol (1/1). Produkt byl následně překrystalován v 99% ethanolu. Po důkladném vychlazení na 0 °C byly vyloučené bílé krystaly odsáty, promyty lx 50 ml směsi voda/ethanol (1/1) a sušeny ve vakuové sušárně.
2-amino-4,6-dichlor-5-methylpyrimidin (25)
Bylo získáno 8,53 g (96 % teor. výtěžku); b.t. 189-190 °C. 'H NMR (DMSOA): 7,26 bs, 2H, (NH2); 2,17 s, 3H, (H-Γ). 13C NMR (DMSOA): 161,01 (C-4 a 6); 160,78 (C-2); 113,60 (C-5); 14,93 (C-Γ). Pro C5H5C12N3 vypočteno: 33,73 % C, 2,83 % H, 39,83 % Cl, 23,60 % N; nalezeno: 33,53 % C, 2,78 % H, 40,02 % Cl, 23,42 % N. MS (El), m/z (%): 177 a 179 [M+] (100). MS (ESI+), m/z (%): 178 a 180 [M+H+] (100).
2-amino-5-ethyl-4,6-dichlorpyriinidm (26)
Bylo získáno 9,4 g (98 % teor. výtěžku); b.t. 183-185 °C. ‘H NMR (DMSO-í/6): 7,32 bs, 2H, (NH2); 2,61 q, 2H, J(l',2') = 7,4 (Η-Γ); 1,071, 3H, J(2',l') = 7,4 (H-2'). I3C NMR (DMSOA): 160,83 (C-2); 160,76 (C-4 a 6); 118,90 (C-5); 22,41 (C-Γ); 12,92 (C-2'). Pro C6H7C12N3 vypočteno: 37,52 % C, 3,67 % H, 36,92 % Cl, 21,88 % N; nalezeno: 37,59 % C, 3,73 % H, 36,76 % Cl, 21,77 %N. MS (El), m/z (%): 191 a 193 [M+] (100).
2-amino-4,6-dichlor-5-propylpyrimidin (27)
Bylo získáno 9,86 g (96 % teor. výtěžku); b.t. 182-183 °C. 'H NMR (DMSO-í/6): 7,52 bs, 2H, (NH2); 2,69 t, 2H, J(1 ',2') = 7,6 (H-Γ); 1,52 m, 2H, (H-2'); 0,91 t, 3H, J(3',2') = 7,2 (H-3'). 13C NMR (DMSO-c/6): 160,78 (C-2); 160,69 (C-4 a 6); 119,20 (C-5); 31,12 (C-Γ); 20,86 (C-2'); 13,75 (C-3'). Pro C7H9C12N3 vypočteno: 40,80 % C, 4,40 % H, 34,41 % Cl, 20,39 % N; nalezeno: 40,79 % C, 4,32 % H, 34,15 % Cl, 20,19 % N. MS (El), m/z (%): 205 a 207 [M+] (100).
2-ammo-5-butyI-4,6-dichlorpyrimidin (28)
Bylo získáno 10,83 g (98 % teor. výtěžku); b.t. 169-170 °C. 'H NMR (DMSO-íZ6): 7,29 bs, 2H, (NH2); 2,59 m, 2H, 1,45 m, 2H a 1,33 m, 2H (3x CH2); 0,91 t, 3H, J(4',3') = 7,3 (H-4'). 13C NMR (DMSOA): 160,78 (C-2); 160,76 (C-4 a 6); 117,71 (C-5); 30,37, 28,46 a 22,04 (C-Γ, 2'a 3’); 13,81 (C-4'). Pro C8HhC12N3 vypočteno: 43,66 % C, 5,04 % H, 32,22 % Cl, 19,09 % N;
nalezeno: 43,70 % C, 4,93 % H, 32,24 % Cl, 18,87 % N. GC/MS-EI (RT 16,03 min), m/z (%); 219 a 221 [M+] (18), 176 a 178 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
~42~
2-amino-4,6-dichlor-5-isopropylpyrimidin (29)
Bylo získáno 10,07 g (98 % teor. výtěžku); b.t. 175-176 °C. *H NMR (DMSO-76): 7,31 bs, 2H, (NH2); 3,46 sept, 1H, 7(CH,CH3) = 7,2 (CH); 1,28 d, 6H, 7(CH3,CH) = 7,2 (2xCH3). 13C NMR (DMSO-76): 160,62 (C-2); 160,32 (C-4 a 6); 121,65 (C-5); 28,57 (CH); 19,82 (CH3), Pro C7H9C12N3 vypočteno: 40,80 % C, 4,40 % H, 34,41 % Cl, 20,39 % N; nalezeno: 40,57 % C, 4,54 % H, 34,69 % Cl, 20,67 % N. MS (El), m/z (%); 205 a 207 [M+] (100).
2-amino-5-(sec-butyl)-4,6-dichlorpyrimidin (30)
Bylo získáno 10,64 g (97 % teor. výtěžku); b.t. 159-160 °C. *H NMR (DMSO-^): 7,33 s, 2H, (NH2); 3,23 m, 1H, (Η-Γ); 1,83 m, lHal,64 m, lH(H-2'); 1,25 d, 3H,7(1,Γ) = 6,2 (Η-Γ'); 0,771, 3H, 7(3',2') = 7,4 (H-3'). 13C NMR (DMSO-76): 163,64 (C-2); C-4 a C-6 nenalezeny; 120,12 (C-5); 35,72 (C-Γ); 26,67 (C-2'); 18,13 (C-l); 12,53 (C-3'). Pro C8HnCl2N3 vypočteno: 43,66 % C, 5,04 % H, 32,22 % Cl, 19,09 % N; nalezeno: 43,63 % C, 4,82 % H, 32,17 % Cl, 18,86 % N. MS (El), m/z (%); 219 a 221 [M+] (100).
2-amino-5-fenyl-4,6-dichlorpyrimidin (31)
Bylo získáno 11,57 g (96 % teor. výtěžku); b.t. 193-195 °C. *HNMR (DMSO-Té): 7,60 bs, 2H, (NH2); 7,44 t, 2H, 7,401, 1H a 7,30 d, 2H, (fenyl). 13C NMR (DMSO-^): 161,46 (C-2); 160,26 (C-4 a 6); 134,24, 130,47, 128,55 a 128,46 (fenyl); 119,71 (C-5). Pro Ci0H7C12N3 vypočteno: 50,03 % C, 2,94 % Η, 29,53 % Cl, 17,50 % N; nalezeno: 49,86 % C, 2,82 % H, 38,44 % Cl, 17,23 % N. MS (El), m/z (%); 239 a 241 [M+] (100).
5-allyl-2-amino-4,6-dichlorpyrimidin (32)
Bylo získáno 9,96 g (98 % teor. výtěžku); b.t. 175-177 °C. *H NMR (DMSO-7é): 7,40 bs, 2H, (NH2); 5,83 ddt, 1H, 7(2',Γ) - 5,8,7(2',3'cis) = 10,1, 7(2',3'trans) = 17,1 (H-2'); 5,06 dq, 1H, 7(3’cis,r) = 7(gem)= 156,7(3'α5,2’)= 10,1 (H-3'cis); 4,96 dq, ΙΗ^'^,Γ) = 7(gem) = 1,7, 7(3'trans,2') = 17,1 (H-3'trans); 3,36 dt, 2H, 7(1 ',3') = 1,7, 7(1’,2’) = 5,8 (Η-1'). 13C NMR (DMSOd& 161.33 (C-4 a 6); 161,08 (C-2); 133,57 (C-2’); 116,28 (C-3'); 115,01 (C-5); 32,70 (C-Γ). Pro C7H7C12N3 vypočteno: 41,20 % C, 3,46 % H, 34,75 % Cl, 20,59 % N; nalezeno: 41,12 % C, 3,37 % H, 34,54 % Cl, 20,56 % N. MS (El), m/z (%): 203 a 205 [M+] (100).
2-amino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin (33)
Bylo získáno 9,76 g (97 % teor. výtěžku); b.t. 159-161 °C. *H NMR (DMSO-<4): 7,50 bs, 2H, (NH2); 3,52 d, 2H, 7(1',3') = 2,7 (Η-Γ); 2,96 t, 1Η,7(3',Γ) = 2,7 (H-31). ,3C NMR (DMSO-76): 161,20 (C-2); 160,84 (C-4 a 6); 113,30 (C-5); 79,86 (C-2'); 71,96 (C-3'); 19,03 (C-2’). Pro C7H5C12N3 vypočteno: 41,61 % C, 2,49 % H, 35,09 % Cl, 20,80 % N; nalezeno: 41,41 % C, 2,48 % H, 34,96 % Cl, 20,55 % N. MS (El), m/z (%); 201 a 203 [M+] (100).
2-amino-5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidin (34)
-43 ~
Bylo získáno 12,48 g (98 % teor. výtěžku); b.t. 196-197 °C 'H NMR (DMSO-e/6): 7,46 bs, 2H, (NH2); 7,29 t, 2H, 7,20 t, 1H a 7,15 d, 2H (fenyl); 4,01 s, 2H, (CH2). I3C NMR (DMSO-rf6): 161,75 (C-4 a 6); 161,15 (C-2); 138,16, 128,72, 127,92 a 126,56 (C-fenyl); 116,29 (C-5); 34,15 (CH2). Pro CuH9Cl2N3 vypočteno: 51,99 % C, 3,57 % H, 27,90 % Cl, 16,54 % N; nalezeno: 51,92 % C, 3,66 % H, 28,02 % Cl, 16,68 % N. MS (El), m/z (%): 253 a 255 [M+] (100).
-amino-5-(perdeutero-butyl)-4,6-dichlorpyrimidin (35)
Z 5 mmol bylo získáno 1036 mg (90 % teor. výtěžku); b.t. 170-171 °C. 'H NMR (DMSO-íZ6): 7,29 bs, 2H, (NH2). i3C NMR (DMSO-í76): 160,82 (C-2); 160,71 (C-4 a 6); 117,53 (C-5); 28,97 m, 28,21 m a 21,41 m (C-Γ, 2' a 3'); 13,20 m (C-4'). Pro C8H2D9C12N3 vypočteno: 41,93 % C, 8,79 % H (+D), 30,94 % Cl, 18,34 % N; nalezeno: 41,86 % C, 4,76 % H, 30,76 % Cl, 18,17 % N (dopočet % H na H+D 8,65 %). GC/MS-EI (RT 15,89 min), m/z (%): 228 a 230 [M+] (18), 178 a 180 [Μ+-ρεΓ·θ·ΡΓ1 (1θθ)> min. 99,5% čistota.
Příklad 4: Příprava 4,6-dihalogenpyrimidinů s jinými halogeny než dvěma atomy chloru
Pro přípravu 4,6-dijodpyrimidinů bylo využito Finkelsteinovy reakce 4,6-dichlorpyrimidinů s jodidem sodným a kyselinou jodovodíkovou v suchém acetonu. Vzhledem k tomu, že nedošlo k plné konverzi, byly získány i příslušné 4-chlor-6-jodpyrimidiny.
Do banky bylo předloženo 2 mmol 5-substituovaného 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinu, 1,5 g (10 mmol) jodidu sodného, 5 ml kyseliny jodovodíkové (57%) a 30 ml suchého acetonu. Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě po dobu 12 hodin. Následně nalita na led a pevný produkt byl odsát a promyt 50% vodným acetonem. Takto získaná směs dvou látek byla dělena pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu s mobilní fází hexan/ethyl-acetát (gradient z 100/0 až 50/50). Po rekrystalizaci z methanolu byly získány vždy bílé krystaly produktu.
Z 440 mg 2-amino-5-(5cc-butyl)-4,6-dichlorpyrimidinu bylo získáno:
A) 452 mg 2-amino-5-(5ec-butyl)-4,6-dijodpyrimidinu (36); b.t. 173-174 °C. *H NMR (DMSO-^): 7,10 s, 2H, (NH2); 3,11 m, 1H, (H-F); 2,00 m, 1H a 1,60 m, 1H (H-2'); 1,25 d, 3H, 7(1,Γ) = 7,3 (Η-Γ); 0,78 t, 3H, J(3',2') = 7,5 (H-3’). 13C NMR (DMSO-4): 159,93 (C-2); 140,94 (C-4 a 6*); 130,01 (C-5); 127,21 (C-4 a 6*); 44,21 (C-Γ); 26,90 (C-2'); 18,44 (C-Γ); 12,52 (C-31). * Látka vykazuje vlivem atropoisomerie a přítomného chirálního centra (sec-Bu) dva rozdílné signály pro uhlíky 4 a 6 pyrimidinového kruhu. Pro CgHi (I2N3 vypočteno: 23,84 % C, 2,75 % H, 62,98 % I, 10,43 % N; nalezeno: 23,67 % C, 2,59 % H, 62,70 % I, 10,35 % N. GC/MS-EI (Rr20,36 min), m/z (%): 403 [M+] (36), 374 [M+-Et] (100), min. 99,5% čistota.
~44~ ·*«* ·* ·* ···· ·*♦
B) 136 mg 2-amino-5-(sec-butyl)-4-chlor-6-jodpyrimidinu (37); b.t. 166-168 °C. ’H NMR (DMSO-tA): 7,11 s, 2H, (NH2); 3,17 m, 1H, (Η-Γ); 2,05 m, 1H a 1,63 m, 1H (H-2'); 1,21 d, 3H, 7(Γ',Γ) = 7,3 (H-l); 0,77 t, 3H,J(3',2') = 7,4 (H-3'). I3C NMR (DMSO-c/6): 159,90 (C-2);
155,23 (C-4); 138,50 (C-6); 130,12 (C-5); 44,21 (C-Γ); 26,86 (C-2'); 18,41 (C-l); 12,63 (C-3’). Pro C8HhC1IN3 vypočteno: 30,84 % C, 3,56 % Η, 11,38 % Cl, 40,73 % I, 13,49 % N; nalezeno: 30,68 % C, 3,74 % H, 13,37 % N. GC/MS-EI (Rr 17,97 mín), m/z (%): 311 a 313 [M+] (23), 282 a 284 [M+-Et] (100), min. 99,5% čistota.
Z 508 mg 2-amino-5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidinu bylo získáno:
A) 495 mg 2-amino-5-benzyl-4,6-dijodpyrimidinu (38); b.t. 198-199 °C. *H NMR (DMSO-ak): 7,30 m, 2H, (H-3’); 7,25 bs, 2H, (NH2); 7,21 m, 1H, (H-4'); 7,11 m, 2H, (H-2'); 4,14 s, 2H, (CH2). 13C NMR (DMSO-í4): 160,62 (C-2); 137,99 (C-Γ), 135,56 (C-4 a 6); 128,66 (C-3');
128,12 (C-5); 128,04 (C-2'); 126,40 (C-4'); 45,70 (CH2). Pro CnH9I2N3 vypočteno: 20,23 % C, 2,08 % H, 58,08 % I, 9,62 % Ν; nalezeno: 20,46 % C, 2,27 % Η, 57,86 % I, 9,40 % N. GC/MSEI (RT24,39 min), m/z (%): 437 [M+] (100), min. 99,5% čistota.
B) 153 mg 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-jodpyrimidinu (39); b.t. 184-184 °C. ‘HNMR (DMSO-í/6): 7,36 m, 2H, (H-3’); 7,27 bs, 2H, (NH2); 7,15 m, 1H, (H-4'); 7,13 m, 2H, (H-2'); 4,18 s, 2H, (CH2). i3C NMR (DMSO-<76): 160,96 (C-2); 138,54 (C-Γ), 157,63 (C-4); 138,96 (C-6); 128,36 (C-3'); 128,27 (C-5); 128,00 (C-2'); 126,39 (C-4'); 45,43 (CH2). Pro ChH9C1IN3 vypočteno: 38,23 % C, 2,63 % H, 10,26 % Cl, 36,72 % I, 12,16 % N; nalezeno: 38,49 % C, 2,90 % H, 12,02 %N. GC/MS-EI (RT 22,40 min), m/z (%): 345 a 347 [M+] (100), min. 99,5% čistota. Pro přípravu 4,6-dibrompyrimidinů bylo využito reakce 4,6-dihydroxypyrimidinů s POBr3 v organickém rozpouštědle za katalýzy NEt3.
Do baňky bylo pod argonem předloženo 4 mmol příslušného 4,6-dihydroxypyrimidinu, 6,88 g (24 mmol) POBr3 a 50 ml toluenu. Za intenzivního míchání bylo pomalu přikapáno 810 mg (8 mmol) triethylaminu za vzniku žluté suspenze, která byla dále zahřívána na 120 °C po dobu 6 hodiny. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla reakční směs nalita na led a produkt extrahován chloroformem a následně čištěn pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu s mobilní fází hexan/ethyl-acetát (gradient 100/0 až 50/50). Po odpaření organických rozpouštědel byl produkt rekrystalován ze směsi hexan/ethyl-acetát.
2-amino-5-benzyl-4,6-dibrompyrimidin (40)
Bylo získáno 273 mg (20 % teor. výtěžku); b.t. 154-155 °C 'Η NMR (DMSO-í4): 7,48 bs, 2H, (NH2); 7,21 t, 2H, 7,22 t, 1H a 7,30 d, 2H (feny!); 4,21 s, 2H, (CH2). 13C NMR (DMSO-J6): 161,25 (C-2); 146,83 (C-4 a 6); 138,17, 128,70, 127,98 a 126,63 (C-fenyl); 118,43 (C-5); 34,22 ~ 45 ~ ···· *♦ ·· ···· ♦·· (CH2). Pro CuH9Br2N3 vypočteno: 38,52 % C, 2,64 % H, 46,59 % Br, 12,25 % N; nalezeno: 38,59 % C, 2,81 % H, 46,23 % Br, 12,05 % N. GC/MS-EI (RT 22,25 min), m/z (%): 341, 343 a 345 [M+] (100), min. 99,5% čistota.
Příklad 5: Příprava 5-substituovaných 2-amino-4-aryl-6-chlorpyrimidinů
Pro přípravu 5-substituovaných 2-amino-4-aryl-6-chIorpyrimidinů bylo využito postupu popsaného v literatuře [Journal of Medicinal Chemistry 50, 2060-2066, 2007], jenž byl modifikován tak, aby docházelo preferenčně k výměně jednoho atomu halogenu a potlačil se tak maximálně vznik příslušných diaryl derivátů. Reakce byla prováděna pouze s jedním ekvivalentem činidla pro zavádění arylového zbytku ve směsi toluen/ethanol, v níž má přídavek ethanolu příznivý vliv na selektivitu reakce.
Do baňky bylo předloženo vždy 2 mmol 5-substituovaného 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinu, 2 mmol příslušné arylboronové kyseliny, 92 mg (0,08 mmol) Pd[P(C6H3)3]4 (tetrakis(trifenylfosfin)palladium) a 234 mg (2,2 mmol) Na2CO3. Reakční nádoba byla uzavřena šeptem a následně velmi pečlivě vysycena argonem. Po přidání 10 ml ethanolu a 30 ml touluenu pomocí jehly skrze septum byla reakční směs zahřívána na 70 °C po dobu 4 hodin. Po ochlazení byla odpařena organická rozpouštědla na vakuové rotační odparce a produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií s mobilní fází hexan/ethyl-acetát (gradientově z 100/0 až do 60/40). Po rekrystalizaci ze směsi hexan/ethyl-acetát a vychlazení krystalizačního roztoku na 0 °C byly izolovány bílé krystaly, které by promyty 5 ml hexanu a sušeny ve vakuové sušárně 1 den při teplotě místnosti a tlaku 0,1 mbar.
2-amino-5-butyl-4-fenyl-6-chlorpyrimidin (41)
Bylo získáno 494 mg (94 % teor. výtěžku); b.t. 183-185 °C. 'H NMR (DMSO-í/6): 7,50-7,40 m, 5H, (H-2, 3 a 4); 6,93 bs, 2H, (NH2); 2,46 m, 2H, 1,35 m, 2H a 1,13 m, 2H (3x CH2); 0,72 t, 3H, J(4',3') = 7,4 (H-4'). 13C NMR (DMSO-t/ó): 168,81 (C-4); 161,27 a 161,13 (C-2a6); 138,72 (C-l); 128,91 (C-4); 128,26 a 128,14 (C-2 a C-3); 118,10 (C-5); 31,35, 27,67, 21,99 (C-l', 2' a 3'); 13,54 (C-4’). Pro C14H16C1N3 vypočteno: 64,24 % C, 6,16 % H, 13,54 % Cl, 16,05 % N; nalezeno: 64,18 % C, 6,28 % H, 13,70 % Cl, 15,88 %N. GC/MS-EI (Rr 20,50 min), m/z (%): 261 a 263 [M+] (28), 218 a 220 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(thiofen-3-yl)pyrimidin (42)
Bylo získáno 428 mg (80 % teor. výtěžku); b.t. 154-155 °C. ’Η NMR (DMSO-í4): 7,78 dd, 1H, J(2,5) = 2,9, J(2,4) = 1,3 (H-2); 7,63 dd, 1H, J(5,4) = 5,0, J(5,2) = 2,9 (H-5); 7,31 dd, ~46~
1H, 7(4,5) = 5,0, 7(4,2) = 1,3 (H-4); 6,88 bs, 2H, (NH2); 2,58 m, 2H, 1,41 m, 2H a 1,23 m, 2H (3x CH2); 0,80 t, 3H, 7(4’,3’) = 7,3 (H-4'). ,3C NMR (DMSO-76): 163,40 (C-6); 161,55 (C-4); 161,16 (C-2); 139,34 (C-3); 128,45 (C-4); 126,63 (C-2); 126,36 (C-5); 118,03 (C-5); 31,37, 27,89, 22,13 (C-Γ, 2’ a 3'); 13,65 (C-4’). Pro Ci2Hi4C1N3S vypočteno: 53,82 % C, 5,27 % H, 13,24 % Cl, 15,69 % N, 11,97 % S; nalezeno: 53,57 % C, 5,44 % H, 13,35 % Cl, 15,89 % N, 11,70 % S. GC/MS-EI (7řr 20,98 min), m/z (%): 267 a 269 [M+] (35), 224 a 226 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(pyridin-3-yl)pyrimidin (43)
Bylo získáno 336 mg (64 % teor. výtěžku); b.t. 189-190 °C. *HNMR (DMSO-76): 8,66 dd, 1H, 7(6,5) = 4,9,7(6,4) = 1,7 (H-6); 8,65 d, 1H, 7(2,4) = 2,2 (H-2); 7,89 dt, 1H, 7(4,5) = 7,8, 7(4,6) - 7(4,2) = 2,0 (H-4); 7,51 dd, 1H, 7(5,4) = 7,8,7(5,6) = 4,9 (H-5); 7,04 bs, 2H, (NH2); 2,45 m, 2H, 1,35 m, 2H a 1,13 m, 2H (3x CH2); 0,711, 3H, 7(4',3') = 7,4 (H-41). 13C NMR (DMSO-Te): 165,90 (C-6); 161,49 a 161,22 (C-2 a 4); 149,95 (C-6); 148,62 (C-2); 135,87 (C4); 134,45 (C-3); 125,37 (C-5); 118,53 (C-5); 31,35,27,61,21,95 (C-Γ, 2'a3’); 13,53 (C-4’). Pro Ci3H15C1N4 vypočteno: 59,43 % C, 5,76 % H, 13,49 % Cl, 21,32 % N; nalezeno: 59,68 % C, 5,58 % H, 13,24 % Cl, 21,19 % N. GC/MS-EI (RT21,16 min), m/z (%): 261, 262, 263 a 264 [M+] (57), 219 a 221 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
2-amino-4-(beiizofuran-2-yI)-5-butyl-6-chlorpyriiiiidin (44)
Bylo získáno 412 mg (68 % teor. výtěžku); b.t. 195-196 °C. ’H NMR (DMSO-76): 7,78 m, 1H, (H-4’); 7,63 m, 1H, (H-7'); 7,52 d, 1H, 7(3',7') = 0,9 (H-3'); 7,43 m, 1H, (H-6'); 7,33 m, 1H, (H5’); 7,03 bs, 2H, (NH2); 2,90 m, 2H, 1,53 m, 2H a 1,41 m, 2H (3x CH2); 0,93 t, 3H, 7(4,3) = 7,3 (H-4). 13C NMR (DMSO-76): 162,77 (C-6); 161,16 (C-2); 155,66 (C-4); 154,84 (C-7a’); 153,52 (C-2'); 127,51 (C-3a'); 126,47 (C-6'); 123,80 (C-5'); 122,52 (C-4'); 117,68 (C-5); 111,62 (C-7'); 110,01 (C-3’); 31,69, 27,70, 22,33 (C-l, 2 a 3); 13,83 (C-4). Pro Ci6Hi6C1N3O vypočteno: 63,68 % C, 5,34 % Η, 11,75 % Cl, 13,92 % N; nalezeno: 63,45 % C, 5,17 % Η, 11,98 % Cl, 13,80 % N. GC/MS-EI (RT 24,04 min), m/z (%): 301 a 303 [M+] (38), 258 a 260 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
Další obdobné 5-substituované 2-amino-4-aryl-6-chlorpyrimidiny jsou pro přehlednost uvedeny v tabulce 1 a tabulce 2.
Příklad 6: Příprava symetrických 5-substituovaných 2-amino-4,6-diarylpyrimidinů ~
Pro přípravu 5-substituovaných 2-amino-4,6-diarylpyrimidinů bylo využito postupu popsaného v literatuře [Journal of Heterocyclic Chemistry 46, 960, 2009 a Journal of Combinatorial Chemistry 11 (4), 519-522, 2009], jenž byl mírně modifikován tak, aby docházelo pouze ke vzniku příslušných diaryl derivátů. Reakce byla prováděna se třemi ekvivalenty činidla pro zavádění arylového zbytku ve směsi toluen/ethanol.
Do baňky bylo předloženo vždy 2 mmol 5-substituovaného 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinu, 6 mmol příslušné arylboronové kyseliny, 184 mg (0,16 mmol) Pd[P(C6H5)3]4 (tetrakis(trifenylfosfm)palladium) a 636 mg (6 mmol) Na2CO3. Reakční nádoba byla uzavřena šeptem a následně velmi pečlivě vysycena argonem. Po přidání 10 ml ethanolu a 30 ml touluenu pomocí jehly skrze septum byla reakční směs zahřívána na 80 °C po dobu 4 hodin. Po ochlazení byla odpařena organická rozpouštědla na vakuové rotační odparce a produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií s mobilní fází hexan/ethyl-acetát (gradientově z 100/0 až do 60/40). Po rekrystalizaci ze směsi hexan/ethyl-acetát a vychlazení krystalizačního roztoku na 0 °C byly izolovány bílé krystaly, které by promyty 10 ml hexanu a sušeny ve vakuové sušárně 1 den při teplotě místnosti a tlaku 0,1 mbar.
2-amino-5-butyl-4,6-difenylpyrimidin (45)
Bylo získáno 574 mg (95 % teor. výtěžku); b.t. 154-155 °C. !H NMR (DMSO-A): 7,41-7,49 m, 10H, (H-2, 3 a 4); 6,51 bs, 2H, (NH2); 2,45 m, 2H, 0,95 m, 2H a 0,81 m, 2H (3x CH2); 0,43 t, 3H, J(4',3') = 7,3 (H-4'). I3C NMR (DMSO-A): 167,84 (C-4 a 6); 161,24 (C-2); 139,84 (C-Γ1); 128,46 (C-4); 128,37 a 128,21 (C-2 a C-3); 118,37 (C-5); 31,98, 26,66, 21,75 (C-Γ, 2'a 3'); 13,29 (C-4'). Pro C20H2iN3 vypočteno: 79,17 % C, 6,98 % H, 13,85 % N; nalezeno: 79,32 % C, 7,08 % H, 13,56 % N. GC/MS-EI (RT23,91 min), m/z (%): 303 [M+] (34), 260 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
2-amino-5-butyl-4,6-di(pyridin-3-yl)pyrimidin (46)
Bylo získáno 530 mg (87 % teor. výtěžku); b.t. 173-174 °C. ]H NMR (DMSO-í/6): 8,72 dd, 2H, J(2,4) = 2,3, J(2,5) = 0,7 (H-2); 8,66 dd, 2H, J(6,5) = 4,9, J(6,4) = 1,7 (H-6); 7,95 ddd, 2H, J(4,5) = 7,9, J(4,2) = 2,3, J(4,6) = 1,7 (H-4); 7,52 ddd, 2H, J(5,4) = 7,9, J(5,6) = 4,9, J(5,2) = 0,7 (H-5); 6,75 bs, 2H, (NH2); 2,44 m, 2H, 0,97 m, 2H a 0,85 m, 2H (3x CH2); 0,45 t, 3H, J(4',3') = 7,3 (H-4'). ,3C NMR (DMSO-í/6): 165,20 (C-4 a 6); 161,43 (C-2); 149,66 (C-6); 148,86 (C-2); 135,98 (C-4); 135,20 (C-3); 123,38 (C-5); 119,12 (C-5); 32,00, 26,48, 21,64 (C-Γ, 2' a 3'); 13,23 (C-4'). Pro C18H19N5 vypočteno: 70,80 % C, 6,27 % H, 22,93 % N; nalezeno: 70,55 % C, 6,42 % H, 22,70 % N. GC/MS-EI (Rr 25,31 min), m/z (%): 304 a 305 [M+] (100), 262 [M+-Pr] (98), min. 99,5% čistota.
··*· ·· · · ···♦ *♦·
2-amino-4,6-di(benzofuran-2-yl)-5-butylpyrimidin (47)
Bylo získáno 613 mg (80 % teor. výtěžku); b.t. 142-144 °C. ’HNMR (DMSO-t/6): 7,80 ddd, 2H, J(4',5') = 7,8, J(4',6') = 1,4, J(4’,7') = 0,9 (H-4'); 7,67 dq, 2H, = 8,3, J(7',5') = J(7’,4') = 0,9 (H-7'); 7,53 d, 2H, J(3',7') = 1,0 (H-3'); 7,44 ddd, 2H, J(6',7’) = 8,3, = 7,2, J(6',4’) = 1,4 (H-6'); 7,34 ddd, 2H, J(5',4') - 7,8, J(5',6') = 7,2, J(5',7') = 0,9 (H-5'); 6,80 bs, 2H, (NH2); 3,14 m, 2H, 1,58 m, 2H a 1,42 m, 2H (3x CH2); 0,901, 3H, J(4,3) = 7,4 (H-4). !3C NMR (DMSOd6): 161,52 (C-2); 156,77 (C-4 a 6); 154,74 (C-7a'); 154,23 (C-2'); 127,68 (C-3a'); 126,15 (C-6'); 123,71 (C-5'); 122,36 (C-4'); 118,60 (C-5); 111,59 (C-7'); 109,35 (C-31); 33,16,26,92, 22,41 (C1, 2 a 3); 13,79 (C-4). Pro C24H2iN3O2 vypočteno: 75,18 % C, 5,52 % H, 10,96 % N; nalezeno: 75,03 % C, 5,68 % H, 10,75 % N. GC/MS-EI (RT 30,67 min), m/z (%): 383 [M+] (34), 340 [M+-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
Další 5-substituované 2-amino-4,6-diarylpyrimidiny jsou pro přehlednost uvedeny v tabulce 1 a tabulce 2.
Tabulka 1: Látky připravené z 2-amino-5-butyl-4,6-dichlorpyrimidinu;
hodnoty naměřených MS (El), m/z.
X, Xi=
0 Pyr Φ Pyr OCHj Φ Pyr Φ“ Pyr Pyr Φ Pyr φ Pyr A Pyr 9 Pyr φ Pyr Pyr y Pyr Pyr
x2= Q Pyr 303 321 333 304 304 304 309 293 293 309 343 359 353
Φ Pyr i 339 351 322 322 322 327 311 311 327 361 377 371
och3 Φ Pyr i i 363 334 334 334 339 323 323 339 373 389 383
Q Pyr i i i 305 305 305 310 294 294 310 344 360 354
iAa Pyr i i i i 305 305 310 294 294 310 344 360 354
Pyr i i i i i 305 310 294 294 310 344 360 354
Pyr i i i i i i 315 299 299 315 349 365 359
A Pyr i i i i i i i 283 283 299 333 349 343
O Pyr i i i i i i i i 283 299 333 349 343
O Pyr i i i i i i i i i 315 349 365 359
i i i i i i i i i i 383 399 393
~ 49 ~
Pyr i i i i i i i i i i i 415 409
QO fy i i i i i i i i i i i i 403
Cl 261 279 291 262 262 262 267 251 251 267 301 317 311
i - identická kombinace jako ve vrchní půlce tabulky
Tabulka naměřených MS (El), m/z: hodnota udává nalezený signál odpovídající M+. Ve spektru byl vždy přítomen signál menší o 43 jednotek (většinou se 100% intenzitou) odpovídající [M+-Pr] stejně jako u všech dalších připravených 5-butylpyrimidinů (viz výše). U pyridinem substituovaných derivátů byl ještě pozorován signál s hmotou o jednotku nižší [M+-H] což pravděpodobně odpovídá disociaci přítomného obojetného iontu. U derivátů obsahujících chlor byl pozorován vždy ještě signál s hmotou o 2 vyšší (přibližně třetinovou intenzitou) odpovídající druhému isotopu chloru (a jemu přirozenému zastoupení). Symetrické diarylpyrimidiny byly připraveny dle postupu v příkladu 8. Monoarylpyrimidiny byly připraveny dle postupu v příkladu 7. Nesymetrické diarylpyrimidiny byly připraveny z monoarylpyrimidinů pomocí stejných navážek reaktantů jako v příkladu 8.
Tabulka 2: Látky připravené z 2-amino-5-benzyl-4,6-dichlorpyrimÍdinu;
hodnoty naměřených MS (El), m/z.
X' N^AA/A ji A 11 J HjN N X2 X1=
Q Pyr F Ír OCHa Xr 9 Pyr Q Pyr 9 Pyr ·? pyr A Pyr 9 Pyr 9 Pyr Pyr Q v Pyt Pyr
X2= 9 Pyr 337 355 367 337 337 337 343 227 227 343 377 393 387
Φ Pyr i 373 385 356 356 356 361 345 345 361 395 411 405
OCH, Φ Pyr i i 397 368 368 368 373 357 357 373 407 423 417
Q Pyr i i i 339 339 339 344 328 328 344 378 394 388
9 Pyr i i i i 339 339 344 328 328 344 378 394 388
Pyr i i i i i 339 344 328 328 344 378 394 388
Pyr i i i i i i 349 333 333 349 383 399 393
9 Pyr i i i i i i i 317 317 333 367 383 377
9 Pyr i i i i i i i i 317 333 367 383 377
9 Pyr i i i i i i i i i 349 383 399 393
5 py i i i i i i i i i i 417 433 427
Pyr i i i i i i i i i i i 449 443
Φ Pyr i i i i i i i i i i i i 437
Cl 295 313 325 296 296 296 301 285 285 301 335 351 345
i - identická kombinace jako ve vrchní půlce tabulky
Tabulka naměřených MS (El), m/zt hodnota udává nalezený signál odpovídající [M+]. Tento signál byl i ve většině případů signálem s největší intenzitou. U pyridinem substituovaných derivátů byl ještě pozorován signál s hmotou o jednotku nižší [M+-H] což pravděpodobně odpovídá disociaci přítomného obojetného iontu. U derivátů obsahujících chlor byl pozorován vždy ještě signál s hmotou o 2 vyšší (přibližně třetinovou intenzitou) odpovídající druhému isotopu chloru (a jemu přirozenému zastoupení). Symetrické diarylpyrimidiny byly připraveny dle postupu v příkladu 8. Monoarylpyrimidiny byly připraveny dle postupu v příkladu 7. Nesymetrické diarylpyrimidiny byly připraveny z mohoarylpyrimidinů pomocí stejných navážek reaktantů jako v příkladu 8.
Příklad 7: Příprava 5-substituovaných 2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidinů
Selektivní přípravy 5-substituovaných 2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidinů bylo dosaženo pomocí inovativního postupu částečné hydrolýzy 5-substituovaných 4,6-dichlor-2{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidinů. Pro tento postup byla testována řada různých systémů kyselé či bazické hydrolýzy. Po důkladné optimalizaci byl v předkládané přihlášce vynálezu pro látky podle tohoto vynálezu popsán způsob selektivní hydrolýzy 5-substituovaných 4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidinů na 5-substituované 2formylamino-4,6-dichlorpyrimidiny, který je dostatečně selektivní a umožňuje přípravu látek podle tohoto vynálezu i v průmyslovém měřítku. Zmíněný způsob využívá překvapivého zjištění, že silikagel (Merck 9385, 230-400 mesh) je schopen selektivně katalyzovat popisovanou reakci. Předpokládanou podstatou tohoto jevu je kyselost a vhodná prostorová struktura použitého silikagelu. Účinkem uvolňujícího se dimethyl aminu je ovšem silikagel postupně neutralizován a rekce se začíná dramaticky zpomalovat. Pro úplnou konverzi by z toho důvodu bylo potřeba použít velká množství silikagelu, což omezuje průmyslovou aplikovatelnost tohoto postupu. Inovativním řešením je přidání necelého jednoho ekvivalentu kyseliny octové, která poutá ~
vznikající dimethylamin do dimethylamoniové soli. Silikagel tak zůstává katalyticky aktivní a celá reakce proběhne do téměř plné konverze. Použití samotné kyseliny octové zdaleka nemá takový katalytický účinek jako směs siligagel a kyselina octová. Použití silnějších kyselin (jako např. zředěné kyseliny chlorovodíkové) vede ke vzniku 5-substituovaných 2-amino-4,6dichlorpyrimidinů.
Selektivní přípravy 5-substituovaných 2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidinů:
Do baňky bylo předloženo 2 mmol 5-substituovaného 4,6-dichlor-2{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidinu, 0,5g silikagelu, 40 mg (2,2 mmol) vody, 15 ml ethyl-acetátu a 114 mg (1,9 mmol) ledové kyseliny octové. Tato směs byla míchána za teploty místnosti po dobu dvou dnů za téměř 100% konverze výchozí látky selektivně na žádaný 5substituovaný 2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin. Následně byla reakční směs odpařena (při tlaku 2 mbar a teplotě lázně 45 °C) na rotační vakuové odparce a pevný odparek byl nasypán na fritu, která již obsahovala 1 g silikagelu. Obsah frity byl následně promyt 10 ml hexanu. Žádaný produkt byl poté eluován směsí ethyl-acetát/hexan (20/80). Po odpaření organických rozpouštědel byl produkt rekrystalován ze směsi ethyl-acetát hexan za vzniku bílých (až průhledných) krystalů. Po důkladném vychlazení celé směsi na 0 °C byly vyloučené krystaly odsáty na fritě a promyty 3x 5 ml studeného hexanu. Produkt byl následně sušen jeden den ve vakuové sušárně při laboratorní teplotě a tlaku 0,1 mbar.
2-formylamino-4,6-dichlor-5-methylpyrimidin (48)
Bylo získáno 329 mg (80% teor. výtěžku); b.t. 123-124 °C. *Η NMR (DMSO-ďe): 11,36 bs, 1H, (NH); 9,20 bs, 1H, (CHO); 2,31 s, 3H, (H-Γ). 13C NMR (DMSO-4): 163,12 (CHO); 161,41 (C4 a 6); 155,00 (C-2); 122,68 (C-5); 15,54 (C-Γ). Pro C6H5C12N3O vypočteno: 34,98 % C, 2,45 % H, 34,42 % Cl, 20,40 % N; nalezeno: 34,74 % C, 2,43 % H, 34,71 % Cl, 20,09 % N. GC/MS-EI (Rr 17,13 min), m/z (%): 205 a 207 [M+] (21), 177 a 179 [M+-CHO] (100), min. 99,5% čistota. Vyřešena též X-Ray struktura krystalu látky 55 viz obr. 4.
5-ethyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin (49)
Bylo získáno 345 mg (78% teor. výtěžku); b.t 116-118 °C. !H NMR (DMSO-c/6): 11,36 bs, 1H, (NH); 9,20 s, 1H, (CHO); 2,74 q, 2H, J(l',2’) = 7,5 (H-T); 1,12 t, 3H, J(2',l') = 7,5 (H-2'). 13C NMR (DMSO-í/6): 163,05 (CHO); 161,18 (C-4 a 6); 155,18 (C-2); 127,41 (C-5); 22,91 (C-Γ); 12,09 (C-2'). Pro C7H7CI2N3O vypočteno: 38,21 % C, 3,21 % H, 32,22 % Cl, 19,10 % N; nalezeno: 38,13 % C, 3,22 % H, 32,66 % Cl, 19,04 % N. GC/MS-EI (RT 17,13 min), m/z (%):
~ 52 ~
219 a 221 [M+] (10), 191 a 193 [M+-CHO] (49), 176 a 178 [M+-CHO a Me] (100), min. 99,5% čistota.
2-formylamino-4,6-dichlor-5-propylpyrimidin (50)
Bylo získáno 412 mg (88% teor. výtěžku); b.t. 92-94 °C. ]H NMR (DMSO-í4): 11,37 bs, 1H, (NH); 9,21 bs, 1H, (CHO), 2,72 m, 2H, (Η-Γ); 1,56 m, 2H, (H-2'); 0,961, 3H, J(3',2') = 7,4 (H3'). 13C NMR (DMSO-J6): 163,09 (CHO); 161,46 (C-4 a 6); 155,18 (C-2); 126,09 (C-5); 31,03 (C-Γ); 21,00 (C-21); 13,84 (C-3'). Pro C8H9C12N3O vypočteno: 41,05 % C, 3,88 % H, 30,29 % Cl, 17,95 % N; nalezeno: 41,02 % C, 3,92 % H, 30,57 % Cl, 17,67 % N. GC/MS-EI (RT 18,02 min), m/z (%): 233 a 235 [M+] (9), 205 a 207 [M+-CHO] (37), 176 a 178 [M+-CHO a Et] (100), min. 99,5% čistota.
5-butyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin (51)
Bylo získáno 423 mg (85% teor. výtěžku); b.t. 82-83 °C. *H NMR (DMSO-t4): 11,36 bs, 1H, (NH); 9,20 bs, 1H, (CHO); 2,73 m, 2H, (Η-Γ); 1,50 m, 2H, (H-2'); 1,38 m, 2H (H-31); 0,92 t, 3H, J(4',3') = 7,2 (H-4'). I3C NMR (DMSO-c/Ď): 163,03 (CHO); 161,34 (C-4 a 6); 155,14 (C-2);
126,29 (C-5); 29,62 (C-2r); 28,90 (C-Γ); 22,10 (C-3'); 13,79 (C-4’). Pro C9HnCl2N3O vypočteno: 43,57 % C, 4,47 % H, 28,58 % Cl, 16,94 % N; nalezeno: 43,69 % C, 4,35 % H, 28,39 % Cl, 16,65 % N. GC/MS-EI (RT 17,56 min), m/z (%): 247 a 249 [M+] (8), 219 a 221 [M+-CH0] (43), 176 a 178 [M+-CHO a Pr] (100), min. 99,5% Čistota.
5-(perdeutero-butyl)-2-formyIamino-4,6-dichlorpyrimidin (52)
Bylo získáno 476 g (93% teor. výtěžku); b.t. 83-84 °C. 'Η NMR (DMSO-íZ6): 11,37 bs, 1H, (NH); 9,20 s, 1H, (CHO). 13C NMR (DMSO-</6): 163,06 (CHO); 161,34 (C-4 a 6); 155,17 (C-2); 126,27 (C-5); 28,29 m, 28,29 m a 20,88 m (C-Γ, 2' a 3'); 12,72 m (C-4'). Pro C9H2D9C12N3O vypočteno: 42,03 % C, 7,83 % H (+D), 27,57 % Cl, 16,34 % N; nalezeno: 42,15 % C, 4,18 % H, 27,39 % Cl, 16,14 % N (dopočet % H na H+D 7,60 %). GC/MS-EI (RT 17,61 min), m/z (%): 256 a 258 [M+] (7), 228 a 230 [M+-CHO] (41), 178 a 180 [M+-CHO a derD-Pr] (100), min. 99,5% čistota.
2-formylamino-4,6-dichlor-5-isopropylpyrimidin (53)
Bylo získáno 417 mg (89% teor. výtěžku); b.t. 95-96 °C. 'H NMR (DMSO-Í4): 11,36 bs, 1H, (NH); 9,20 s, 1H, (CHO); 3,58 sept, 1H, J(CH,CH3) = 7,2 (CH); 1,33 d, 6H, J(CH3,CH) = 7,2 (2xCH3). 13C NMR (DMSO-J6): 163,06 (CHO); 161,10 (C-4 a 6); 154,83 (C-2); 129,97 (C-5); 29,10 (CH); 19,16 (CH3). Pro C8H9C12N3O vypočteno: 41,05 % C, 3,88 % H, 30,29 % Cl, 17,95 % N; nalezeno: 40,84 % C, 3,90 % H, 30,58 % Cl, 17,70 % N. GC/MS-EI (RT 17,84 min), m/z (%): 233 a 235 [M+] (7), 208 a 207 [M+-CHO] (56), 190 a 192 [M+-CHO a Me] (100), min. 99,5% čistota.
~ 53 5-(sec-butyl)-2-formylamino-4,6-dichlorpyrim idin (54)
Bylo získáno 435 mg (88% teor. výtěžku); b.t. 92-93 °C. 'H NMR (DMSO-76): 11,37 bs, 1H, (NH); 9,21 s, 1H, (CHO); 3,37 m, 1H, (Η-Γ); 1,89 m, 1H a 1,71 m, 1H (H-2'); 1,31 d, 3H, 7(1, Γ) = 7,2 (Η-Γ'); 0,80 t, 3H, 7(3',2') = 7,4 (H-3'). ,3C NMR (DMSO-76): 163,04 (CHO); 154,96 (C-2); C-4 a C-6 nenalezeny; 128,63 (C-5); 36,23 (C-Γ); 26,28 (C-2'); 17,42 (C-l); 12,47 (C-31). Pro C9Hi]Cl2N3O vypočteno: 43,57 % C, 4,47 % H, 28,58 % Cl, 16,94 % N; nalezeno: 43,51 % C, 4,46 % H, 28,50 % Cl, 16,86 % N. GC/MS-EI (Rr 18,67 min), m/z (%): 247 a 249 [M'] (12), 219 a 221 [M+-CHO] (63), 190 a 192 [M+-CHO a Et] (100), min. 99,5% čistota.
2-fo rmyla mino-5-hexy 1-4,6-dichlo rpyrimidin (55)
Bylo získáno 483 mg (87% teor. výtěžku); b.t. 80-81 °C. *H NMR (DMSO-de): 11,37 bs, 1H, (NH); 9,20 bs, 1H, (CHO); 2,72 m, 2H, (Η-Γ); 1,51 m, 2H, (H-2'); 1,36 m, 2H (H-3'); 1,26-1,32 m, 4H, (H-4' a 5'); 0,86 m, 3H, (H-6'). 13C NMR (DMSO-76): 163,03 (CHO); 161,33 (C-4 a 6); 155,15 (C-2); 126,28 (C-5); 31.04 (C-4’); 29,19 (C-Γ); 28,56 (C-3'); 27,42 (C-2'); 22,16 (C5’); 14,08 (C-6’). Pro CnHi5Cl2N3O vypočteno: 47,84 % C, 5,47 % H, 25,68 % Cl, 15,22 % N; nalezeno: 47,94 % C, 5,41 % H, 25,68 % Cl, 15,05 % N. GC/MS-EI (RT 19,73 min), m/z (%): 275 a 277 [M+] (5), 247 a 249 [M+-CHO] (32), 176 a 178 [M+-CHO a Pn] (100), min. 99,5% čistota.
5-fenyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyriinidm (56)
Bylo získáno 467 mg (87% teor. výtěžku); b.t. 95-96 °C. *Η NMR (DMSO-í/ů): 11,55 bs, 1H, (NH); 9,30 bs, 1H, (CHO); 7,53-7,45 m, 3H a 7,38 m, 2H, (fenyl). 13C NMR (DMSO-76): 163,13 (CHO); 160,90 (C-4 a 6); 156,06 (C-2); 133,18, 129,83, 129,21 a 128,86 (fenyl); 127,49 (C-5). Pro CiiH7C12N3O vypočteno: 49,28 % C, 2,63 % H, 26,45 % Cl, 15,67 %N; nalezeno: 49,53 % C, 2,70 % H, 26,29 % Cl, 15,44 % N. GC/MS-EI (RT20,31 min), m/z (%): 239 a 241 [M+-CH0] (100), min. 99,5% čistota.
5-allyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin (57)
Bylo získáno 385 mg (83% teor. výtěžku); b.t. 85-86 °C. *H NMR (DMSO-7fi): 11,42 bs, 1H, (NH); 9,22 s, 1H, (CHO); 5,86 ddt, 1H, 7(2’, Γ) = 5,7,7(2’,3'cis) = 10,2,7(2’,3’trans) = 17,2 (H-2'); 5,11 dq, 1H, 7(3^,1-) = 7(gem) = l,6,7(3'trans,2’) = 17,2 (H-3'Uans); 5,02 dq, lH,7(3'cis,r) = 7(gem)= 1,6,7(3'C1S,2')= 10,2 (H-3’CIS); 3,50 dt, 2H, 7(1',3’) = 1,7,7(1',2’) = 5,7 (H-Γ). ,3C NMR (DMSO-76): 163,14 (CHO); 161.80 (C-4 a 6); 155,59 (C-2); 132,29 (C-2'); 123,64 (C-5); 117,20 (C-3’); 33,13 (C-Γ). Pro C8H7C12N3O vypočteno: 41,40 % C, 3,04 % H, 30,55 % Cl, 18,11 % N; nalezeno: 41,32 % C, 3,30 % H, 30,37 % Cl, 18,08 % N. GC/MS-EI (RT 18,10 min), m/z (%): 231 a 233 [M+] (14), 203 a 205 [M+-CHO] (100), min. 99,5% čistota.
~54~
2-formy lam ino-4,6-d ich lor-5-(prop-2-ynyl)py rimidin (58)
Bylo získáno 386 mg (84% teor. výtěžku); b.t. 127-128 °C. 'Η NMR (DMSO-J6): 11,46 bs, 1H, (NH); 9,22 s, 1H, (CHO); 3,69 d, 2H, J(1 ',3') = 2,7 (Η-Γ); 3,05 t, 1H, J(3',l') = 2,7 (H-3'). 13C NMR (DMSO-í/6): 163,18 (CHO); 161,32 (C-4 a 6); 155,87 (C-2); 121,78 (C-5); 78,56 (C-2'); 72,79 (C-3’); 19,51 (C-Γ). Pro Ο8Η5α2Ν3Ο vypočteno: 41,77 % C, 2,19 % H, 30,82 % Cl, 18,27 % N; nalezeno: 41,65 % C, 2,13 % H, 30,89% Cl, 18,12 % N. GC/MS-EI (Rr 18,18 min), m/z (%): 229 a 231 [M+] (6), 201 a 203 [M+-CHO] (100), min. 99,5% čistota.
5-benzy 1-2-fo rmylamino-4,6-d ichlo rpy rimidin (59)
Bylo získáno 460 mg (82% teor. výtěžku); b.t. 93-95 °C JH NMR (DMSO-í/6): 11,45 bs, 1H, (NH); 9,24 s, 1H, (CHO); 7,30 m, 2H, 7,22 m, 1H a 7,19 m, 2H (fenyl); 4,16 s, 2H, (CH2). 13C NMR (DMSO-J6): 163,17 (CHO); 162,17 (C-4 a 6); 155,68 (C-2); 136,87, 128,82, 128,10 a 126,86 (C-fenyl); 124,76 (C-5); 34,54 (CH2). Pro CI2H9C12N3O vypočteno: 51,09 % C, 3,22 % H, 25,13 % Cl, 14,89 % N; nalezeno: 50,88 % C, 3,26 % H, 25,41 % Cl, 14,68 % N. GC/MS-EI (Rr23,00 min), m/z (%): 281 a 283 [M+] (37), 253 a 255 [M+-CHO] (100), min. 99,5% čistota.
Do baňky bylo předloženo 2,02 g (10 mmol) 2-amino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidinu a 10 ml 2 mol.!'1 roztoku (20 mmol) Vilsmeier-Haack-Arnoldova činidla v chloroformu. Reakční směs byla refluxována 8 hodin. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla reakční směs nalita na led a rychle neutralizována NaHCO3. Získaná směs byla rychle přenesena do děličky a okamžitě extrahována 3 x 20 ml chloroformu. Organické frakce byly spojeny a sušeny pomocí MgSO4. Reakční směs obsahovala dle TLC krom 4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5(prop-2-ynyl)pyrimidinu ještě další látku. Získaná směs proto byla dělena pomocí sloupcové chromatografie s mobilní fází hexan/ethyl-acetát (80/20 až 50/50). Po odpaření organických rozpouštědel bylo izolováno 686 mg 4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5-(prop2-ynyl)pyrimidinu, 317 mg 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidinu a 458 mg 2formylamino-4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)pyrimidinu, který vzniká adicí kyseliny chlorovodíkové (vyvíjené během reakce) na přítomnou trojnou vazbu. K hydrolýze na 2-formylamino deriváty docházelo až během chromatografie.
2-formylamino-4,6-dichlor-5-(2-chloraliyl)pyrimidin (60)
B.t. 113-115 °C. 'H NMR (DMSO-c/é): 11,48 bs, 1H,(NH); 9,24 s, 1H, (CHO); 5,38 dt, IH, J(3'a,T) = 1,2, ./(gem) = 2,3 (H-3’a); 5,31 dt, 1H, J(3’b,T) =1,5, ./(gem) = 2,3 (H-3'b); 3,84 t, 2H, J(l',3') = 1,4 (H-Γ). I3C NMR (DMSO-4): 163,19 (CHO); 162,32 (C-4 a 6); 156,07 (C-2); 136,04 (C-2'); 121,46 (C-5); 115,29 (C-3'); 38,40 (C-Γ). Pro C8H6C13N3O vypočteno: 36,05 %
--55*·** ·« ·· ·«*« »··
C, 2,27 % Η, 39,91 % Cl, 15,77 % N; nalezeno: 36,19 % C, 2,08 % H, 39,63 % Cl, 15,49 % N. GC/MS-EI (RT 19,77 min), m/z (%): 265, 267 a 269 [M+] (7), 237, 239 a 241 [M+-CHO] (100), min. 99,5% čistota.
Příklad 8: Další modifikace polohy 2 na pyrimidinovém kruhu
8A. Příprava derivátů nesoucích v poloze 2 pyrimidinového kruhu atom vodíku či alkylovou nebo arylovou skupinu:
mmol 5-substituovaného 4,6-dihydroxypyrimidinu [připraveného dle: patentu US 6248571] bylo suspendováno pod inertní atmosférou v 40 ml 2 mokr1 roztoku Vilsmeier-Haack-Arnoldova činidla (0,08 mol = 8 ekvivalentů) v chloroformu. Reakční směs byla následně refluxována 4 hodiny. Během této doby došlo k úplnému rozpuštění výchozí látky a zbarvení reakční směsi na žlutou až červenou barvu. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla reakční směs nalita na led a rychle neutralizována NaHCO3. Získaná směs byla rychle přenesena do dělicí nálevky a okamžitě extrahována 3x 50 ml chloroformu. Organické frakce byly spojeny a sušeny pomocí MgSO4. Takto získaný chloroformový roztok byl přefiltrován přes malou vrstvu (cca. 0,5 cm) neutrálního silikagelu a následně důkladně odpařen na vakuové odparce za vzniku olej ovitého produktu žluté barvy. Takto získaný produkt byl po přidání 10 ml směsi hexan a ether vystaven působení ultrazvuku po dobu 10 min. Po ochlazení ledovou lázní byly vyloučené krystaly odsáty a 2x promyty směsí hexan a ether. Izolovaný produkt byt sušen ve vakuové sušárně při teplotě místnosti a tlaku 0,1 mbar jeden den.
5-butyl-4,6-dichlorpyrimidin (61)
Bylo získáno 1,56 g (76 % teor. výtěžku); b.t. 62-63 °C. *H NMR (DMSO-76): 8,83 s, 1H, (H-l); 2,36 m, 2H, 1,32 m, 2H a 1,24 m, 2H (3x CH2); 0,82 t, 3H, 7(4',3') = 7,2 (H-4’). I3C NMR (DMSO-76): 163,24 (C-2); 158,12 (C-4 a 6); 120,71 (C-5); 30,47, 28,53 a 22,13 (C-Γ, 2'a 3'); 13,60 (C-41). Pro C8H1OC12N2 vypočteno: 46,85 % C, 4,92 % H, 34,57 % Cl, 13,66 % N; nalezeno: 46,78 % C, 4,83 % H, 34,37 % Cl, 13,42 % N. MS (El), m/z (%): 204 a 206 [M+] (34), 161 a 163 [M+-Pr] (100).
5-butyl-4,6-dichlor-2-methylpyrimidin (62)
Bylo získáno 1,78 g (81 % teor. výtěžku); b.t. 50-51 °C. ’H NMR (DMSO-^e): 2,86 s, 3H, (CH3); 2,32 m, 2H, 1,37 m, 2H a 1,28 m, 2H (3x CH2); 0,76 t, 3H, 7(4',3') = 7,3 (H-4'). ,3C NMR (DMSO-76): 168,43 (C-2); 161,43 (C-4 a 6); 119,58 (C-5); 30,64, 28,47 a 22,11 (C-Γ, 2’a 3');
~ 56 ~
25,76 (CH3); 13,56 (C-4’). Pro C9Hi2Cl2N2 vypočteno: 49,33 % C, 5,52 % H, 32,36 % Cl, 12,79 % N; nalezeno: 49,20 % C, 5,67 % H, 32,40 % Cl, 12,63 % N. MS (El), m/z (%): 218 a 220 [M+] (44), 175 a 177 [M+-Pr] (100).
8B. Příprava derivátů nesoucích v poloze 2 pyrimidinového kruhu substituovanou či nesubstituovanou NH2, OH či SH skupinu pomocí nukleofílní aromatické substituce:
Výchozí 5-substituované 2,4,6-trichlorpyrimidiny byly připraveny dle [Chemical & Pharmaceutical Bulletin 54(9), 1248-1253, 2006].
Do baňky bylo pod inertní atmosférou předloženo 10 mmol 5-substituovaného 2,4,6trichlorpyrimidinu 50 ml suchého acetonitrilu a tato směs byla ochlazena na -30 °C. Poté byl pomalu přikapáván roztok nukleofilu, tak aby teplota reakční směsi nepřesáhla -25 °C.
Pro zavádění substituované NH2 skupiny bylo použito vždy 21 mmol příslušného aminu (2,1 ekvivalentů, kdy se jeden ekvivalent spotřebovává na poutání vznikajícího HC1) v 20 ml ethanolu.
Pro zavádění substituované OH skupiny bylo použito 10 mmol příslušného alkoholátu sodného v 20 ml odpovídajícího alkoholu.
Pro zavádění OH skupiny bylo použito 400 mg (10 mmol) NaOH v 20 ml ethanolu.
Pro zavádění substituované SH skupiny bylo použito roztoku obsahujícího 10 mmol příslušného alkyl či arylthiolu a 680 mg (10 mmol) ethanolátu sodného v 20 ml ethanolu.
Reakce byla míchána do konstantní konverze (dle TLC); vždy okolo 3 hodin. Směs produktů byla následně dělena pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu s mobilní fází hexan/chloroform/methanol (gradient 100/0/0 do 50/45/5). Takto byla rozdělena směs 2 a 4 substituovaných derivátů.
5-butyl-4,6-dichlor-2-(dimethylamino)pyrimidin (63)
Bylo získáno 513 mg (21 % teor. výtěžku); b.t. 42-45 °C. ’H NMR (DMSO-76): 3,09 s, 6H, (CH3); 2,39 m, 2H, 1,34 m, 2H a 1,21 m, 2H (3x CH2); 0,83 t, 3H, 7(4',3') = 7,4 (H-4’). 13C NMR (DMSO-76): 160,95 (C-4 a 6); 160,87 (C-2); 112,31 (C-5); 37,02 (CH3); 30,75, 28,34 a 22,12 (CT, 2' a 3’); 13,63 (C-4'). Pro Ci0H15Cl2N3 vypočteno: 48,40 % C, 6,09 % H, 28,57 % Cl, 16,93 % N; nalezeno: 48,23 % C, 6,31 % H, 28,42 % Cl, 16,68 % N. MS (El), m/z (%): 247 a 249 [M+] (32), 204 a 206 [M+-pr] (100) + mono a di demethylované fragmenty (tzn. -15 a -29). Dále bylo izolováno 750 mg (30 % teor. výtěžku) druhého isomeru.
5-butyl-4,6-dichlor-2-methoxypyrimidin (64)
Bylo získáno 477 mg (20 % teor. výtěžku) olejovitého produktu. 'H NMR (DMS0-7&): 3,78 s, 3H, (CH3); 2,42 m, 2H, 1,37 m, 2H a 1,20 m, 2H (3x CH2); 0,861, 3H, 7(4',3') = 7,3 (H-4'). 13C NMR (DMSO-76): 165,16 (C-2); 161,45 (C-4 a 6); 116,31 (C-5); 53,61 (CH3); 30,77, 28,32 a 22,13 (C-Γ, 2' a 3’); 13,67 (C-4'). Pro C9H12Ci2N2O vypočteno: 45,98 % C, 5,14 % H, 30,16 % Cl, 11,91 % N; nalezeno: 45,74 % C, 5,18 % H, 30,31 % Cl, 11,67 % N. MS (El), m/z (%); 234 a 236 [M^ (28), 191 a 193 [M+-Pr] (100) + mono demethylované fragmenty (tzn. -15), Dále bylo izolováno 692 mg (29 % teor. výtěžku) druhého isomeru.
5-butyl-2-hydroxy-4,6-dichlorpyrimidin (65)
Bylo získáno 414 mg (19 % teor. výtěžku); b.t. 73-75 °C. 'H NMR (DMSO-76): 8,63 s, 1H, (OH či NH); 2,37 m, 2H, 1,36 m, 2H a 1,24 m, 2H (3x CH2); 0,83 t, 3H, 7(4',3') - 7,3 (H-4'). ,3C NMR (DMSO-76): 164,52 (C-2); 160,37 (C-4 a 6); 108,47 (C-5); 31,03, 28,36 a 22,05 (C-l', 2' a 3'); 13,53 (C-4'). Pro C8H10Cl2N2O vypočteno: 43,46 % C, 4,56 % H, 32,07 % Cl, 12,67 % N; nalezeno: 43,27 % C, 4,47 % H, 32,16 % Cl, 12,42 % N. MS (El), m/z (%); 220 a 222 [M+] (36), 177 a 179 [M+-Pr] (100). Dále bylo izolováno 540 mg (24 % teor. výtěžku) druhého isomeru. 5-butyl-4,6-dichlor-2-(methylthio)pyrimidin (66)
Bylo získáno 817 mg (32 % teor. výtěžku) olejovitého produktu. 'H NMR (DMSO-Te): 2,44 s, 3H, (CH3); 2,37 m, 2H, 1,36 m, 2H a 1,32 m, 2H (3x CH2); 0,82 t, 3H, 7(4',3') = 7,4 (H-4'). 13C NMR (DMSO-76): 169,6 (C-2); 161,23 (C-4 a 6); 121,26 (C-5); 30,36, 28,84 a 22,37 (C-Γ, 2' a 3'); 15,4 (CH3); 13,84 (C-4'). Pro C9Hi2Cl2N2 vypočteno: 49,33 % C, 5,52 % H, 32,36 % Cl, 12,79 % N; nalezeno: 49,20 % C, 5,67 % H, 32,40 % Cl, 12,63 % N. MS (El), m/z (%): 218 a 220 [M+] (44), 175 a 177 [M+-Pr] (100). Dále bylo izolováno 540 mg (24 % teor. výtěžku) druhého isomeru.
IL Biologické aktivity
Jn vitro
V podmínkách in vitro byl účinek pyrimidinových sloučenin podle tohoto vynálezu testován vzhledem k produkci oxidu dusnatého (NO) a vzhledem k produkci prostaglandinu E2 (PGE2) v kulturách peritoneálních buněk myší.
Příklad 9
NO je produkt metabolismu L-argininu, rychle se mění na dusitany, které jsou pak měřeny pomocí Griseova reagens. Produkce NO je za normálních podmínek prakticky nulová. Dochází k ní až po určité stimulaci. V těchto pokusech bylo jako stimulátoru použito interferonu-gamma (IFN-γ) a bakteriálního lipopolysacharidu (LPS). Hodnoty takto indukovaného NO se v
-58jednotlivých pokusech pohybovaly v rozmezí od 52 až do 89 pmol.l'1; pro účely srovnání mezi pokusy byly považovány za 100%. Produkce NO po aplikaci látek byla vyjádřena v procentech vzhledem ke kontrolním hodnotám. (Čím menší je hodnota, tím větší je inhibiční účinek látek na produkci NO.) IC50 jsou koncentrace látek, snižující produkci NO o 50 % vzhledem ke kontrolám. Výsledky jsou shrnuty v Tabulce 3.
Příklad 10
Ovlivnění produkce prostaglandinu E2 (PGE2) in vitro působením pyrimidinových sloučenin podle předkládaného vynálezu bylo stanoveno v kulturách peritoneálních buněk myší pomocí komerčního kitu (R&DSystems). Koncentrace PGE2 po stimulaci lipopolysacharidem (LPS) dosahovaly v jednotlivých pokusech hodnot v rozmezí 22 až 91 ng.ml'1 a pro účely srovnání mezi pokusy byly považovány za 100%. Vliv látek na produkci PGE2 byl vyhodnocen v procentech vzhledem ke kontrolním hodnotám.
Životnost buněk byla stanovena standardně pomocí kitu WST-1 (Roche). Hodnoty životnosti kontrolních buněk byly pro účely srovnání mezi pokusy považovány za 100%. Vliv látek na životnost buněk byl vyhodnocen v procentech vzhledem ke kontrolním hodnotám. Výsledky jsou shrnuty v Tabulce 3.
Tabulka 3
Produkce oxidu dusnatého Produkce prostaglandinu Životnost buněk
Látka číslo v % kontrol IC50 (gmolT1) průměrná hodnota a rozmezí hodnot v % kontrol v % kontrol
13 21,39+4,78 (n=4) nestanoveno 59,98+1,82 (n=2) 77^9+3,69 (n=8)
14 23,24+6,78 (n=12) 13,6/11,8-15,7/ 30,40+0,80 (n=2) 162,93+14,68 (n=24)
15 8,42+4,75 (n=6) 14,9 /9,7-23,0/ 14,76+0,52 (n=4) 109,35+8,88 (n=12)
16 732+2,68 (n=8) 8,6 /6,6-11,9/ 32,10+2,31 (n=6) 134,83+16,51 (n=12)
17 6,2+0,91 (n= 4) 3,3/2,7-4,1/ 15,72+0,46 (n= 4) 136,13+11,32 (n=12)
18 0,90+0,22 (n=2) 4,2 /3,5-5,2/ 78,55+0,38 (n=2) 67,89+7,41 (n=8)
19 2,99+0,53 (n=6) 5,1 /4,2-6,3/ 14,93+3,11 (n=4) 123,21+21,43 (n=16)
20 7,49+13,51 (n=4) nestanoveno nestanoveno nestanoveno
~ 59 ~
21 0,69+0,12 (n=4) 2,6 /2,1-3,1/ 8,14+0,07 (n=2) 122,65+14,39 (n= 12)
22 61,34+3,91 (n=4) nestanoveno nestanoveno nestanoveno
23 4,41+0,59 (n=4) 3,4 /2,9-4,0/ 3,05+1,26 (n=6) 9634+11,9 (n=12)
24 4,97+2,00 (n=6) 7,1/4,7-10,7/ 18,45+13,68 (n=4) 80,00+11,61 (n=16)
25 4730+13,48 (n=6) nestanoveno nestanoveno 98,55+17,60 (n=8)
26 48,59+9,49 (n=10) 146/99-213/ nestanoveno 91,53+10,78 (n=8)
27 46,98+10,25 (n=6) nestanoveno 31,73+4,35 (n=2) 87,86+9,18 (n=8)
28 53,23+5,79 (n=20) nestanoveno 13,14+0,13 (n=2) 100,42+5,77 (n=12)
29 36,97+8,22 (n=10) nestanoveno nestanoveno 91,18+9,90 (n=8)
30 47,48+6,22 (n=10) 160/62-413/ nestanoveno 111,90+9,63 (n=12)
31 36,11+8,38 (n=10) nestanoveno nestanoveno 82,53+8,73 (n=12)
32 41,72+9,27 (n=8) 145/173-289/ 90,81+5,95 (n=2) 93,55+19,55 (n=8)
33 35,98+14,08 (n=6) nestanoveno nestanoveno 90,58+17,05 (n=8)
34 50,57+9,31 (n=12) 403 /171-948/ 3,71+2,00 (n=6) 105,92+20,65 (n=12)
36 2,80+1,28 (n=4) 11,0/5,7-21,5/ nestanoveno nestanoveno
37 6,67+5,15 (n=4) 14,0 /8,0-24,6/ nestanoveno 49,11+3,29 (n=4)
38 34,80+0,31 (n=2) nestanoveno nestanoveno 78,60+5,33 (n=4)
39 18,30+7.66 (n=4) 24,6/16,7-36,1/ nestanoveno 67,81+3,08 (n=4)
40 32,45+10,99 (n=4) 26,1 /16,9-40,3/ nestanoveno 90,18+3.75 (n=4)
41 47,82+6,08 (n=10) 443/20,9-94,1/ nestanoveno 108,24+7,40 (n=4)
42 63,18+0,89 (n=4) 85,6/48,5-150,9/ nestanoveno 157,36+5,16 (n=4)
43 58,68+0,92 (n=4) 67,8/44,4-103,7/ nestanoveno 166,77+22,51 (n=4)
44 62,62+0,19 (n=4) 68,6 /39,0-120,7/ nestanoveno 147,78+5,90 (n=4)
45 73,29+1,40 (n=4) 111,8/62,3- 200,7/ nestanoveno 29733+23,17 (n=4)
46 70,00+4,82 (n=4) 92,5/42,8-199,5/ nestanoveno 107,08+2,94 (n=4)
47 41,23+18,49 (n=4) 20,5/12,1-34,8/ nestanoveno 75,01+13,63 (n=4)
48 1,35+0,01 (n=4) nestanoveno 3631+1,99 (n=2) 66,37+8,13 (n=8)
~ 60 ~
49 5,76-2,48 (n=6) 11,5 /8,0-16,4/ 20,58±2,13 (n=2) 111,37± 10,44 (n=8)
50 3,95±2,27 (n=4) 11,6 /8,5-15,8/ 14,20±7,00 (n=4) 98,59±6,59 (n=8)
51 8,37±2,77 (n=8) 3,9 /2,8-5,4/ 5,22±2,66 (n=4) 92,15±9,90 (n=12)
52 10,40±2,79 (n=10) 7,7/4,1-14,6/ nestanoveno 123,88±12,50 (n=4)
53 0,70±0,22 (n=6) 2,8/1,8-4,2/ 8,57±0,99 (n=2) 60,02±0,29 (n=12)
54 0,17±0,17 (n=4) 3,3 /2,3-5,0/ 30,48±l,79 (n=2) 77,51± 14,73 (n=8)
55 14,77±9,19 (n=8) 12,6 /6,9-23,2/ nestanoveno 144,97± 18,27 (n=4)
56 0,80±037 (n=8) 2,8/1,9-3,9/ 46.40±0,28 (n=2) 48,49±4,44 (n=16)
57 l,21±0,28 (n=6) 1,1/1,0-1,3/ 16,42±0,64 (n=2) 9537±15,40 (n=20)
58 0,69±0,26 (n=6) 1,9/1,3-2,9/ 12,30±0,54 (n=2) nestanoveno
59 0,15±0,01 (n=6) 2,9 /2,3-3,7/ 3,84±0,ll (n=2) 58,75±5,34 (n=20)
60 0,13±0,13 (n=2) nestanoveno nestanoveno 37,13±1,27 (n=4)
61 2738±1,88 (n=2) nestanoveno nestanoveno 73,73±0,99 (n=4)
62 41,21±5,50 (n=2) nestanoveno nestanoveno 80,93±0,84 (n=4)
63 64,97±2.92 (n=2) nestanoveno nestanoveno nestanoveno
Hodnoty uváděné v tabulce představují účinky látek, testovaných v koncentraci 50 pmol.l'1.
Látky se vyznačují unikátním selektivním účinkem. Inhibují produkci oxidu dusnatého a prostaglandinu PGE2, ale neinhibují produkci cytokinů. Sekrece těchto základních medíátorů imunity byla stanovena v podmínkách in vitro u peritoneáiních buněk myší, které byly kultivovány stejně, jak bylo popsáno v případě produkce oxidu dusnatého. Produkce cytokinů byla navozena pomocí bakteriálního lipopolysacharidu (LPS, E. coli). Koncentrace cytokinů v supematantech buněk byla stanovena metodou ELISA, která využívá komerčně dostupných imunochemikálií a je popsána v literatuře [Eur. J. Pharmacol. 574. 2007, 77-81; Nitric Oxide 17, 2007, 160-169], Látky uváděné v tabulce 3 nezměnily produkci následujících cytokinů a chemokinů: faktor nekrózy nádorů-alfa (TNF-oc), interleukin-1 beta (IL-Ιβ), interleukin-6 (IL-6), RANTES a MIP-la a vykazují tak vysoce selektivní účinek pouze na snížení produkce NO a prostaglandinu E2.
~61 ~
Příklad 11
U sloučeniny č. 28 byla hodnocena její případná mutagenita (genotoxicita) za použití standardního testu bakteriální reversní mutace. Podle Nařízení Rady (ES) č. 440/2008, kterým se stanoví zkušební metody podle nařízení Evropského parlamentu a Rady (ES), byla použita metoda B. 13/14, Mutagenita - test reversní mutace za použití bakterií, která je shodně popsána i směrnicí testu OECD č. 471.
Použity byly dva indikátory rodu Salmonella typhimurium (druhy TA 98 a TA 100) a jeden indikátor rodu Escherichia coli WP2 uvrA v množství 20 až 2000 pg, nanášeném na plotny v objemu 0,1 ml. Experimenty byly prováděny jak bez použití metabolické aktivace, tak po aktivaci supematantem S9 z jater potkanů a směsí kofaktorů (NADP and glucoso-6-fosfát) pro zjištění mutagenity metabolických produktů testované sloučeniny. Supernatant S9 byl připraven dle literatury [ Mutat. Res. 113, 173 -215, 1983],
Principem testu je detekce případných revertantů vzniklých zpětnou mutací, kterou by v bakteriální kultuře indukovala testovaná sloučenina. Používají se speciálně konstruované bakteriální rody, nesoucí mutaci v místě pro his (trp), které nejsou schopné vytvářet kolonie na minimálních plotnách bez histidinu nebo tryptofanu. Vzniklí revertanti se od těchto originálních mutantů liší schopností syntetizovat histidin (tryptofan) a následně růst na plotnách se selektivním minimem glukózy. Mutagenní potenciál je dán rostoucím počtem revertantů v ovlivňovaných skupinách ve srovnání s negativní kontrolou, a/nebo závislostí rostoucího počtu revertantů na dávce testované sloučeniny.
Bakteriální testery, druhy Salmonella typhimurium TA 98 (CCM 3811) a Escherichia coli WP2 uvrA (CCM 4751) byly získány z České sbírky mikroorganismů Masarykovy University, Brno a rod Salmonella typhimurium TA100 (CIP 103796, lot č. 1008) z „Biological Resource Center“ Pasteurova Institutu v Paříži (CRBIP. Druh TA 98 prokazuje mutace typu frame shift (posun čtecího rámce), rod TA 100 slouží k detekci mutací způsobených substitucí páru baží a rod E.coli WP2 uvrA deteguje síťující (cross-linking) mutageny.
Ve výše popsaném uspořádání byly testované sloučeniny č. 28, 34 a 51 nemutagenní pro všechny zmíněné bakteriální rody a pro všechny testované koncentrace jak za použití metabolické aktivace, tak bez této aktivace. Pro dokreslení viz obr. 5; ve stejném uspořádání
-62vykazovaly negativní kontrola (volně rostoucí bakterie) hodnoty 112-133 a pozitivní kontroly pro -MA I hodnoty >500 (po aplikaci 1,5 pg azidu sodného) a pro +MA I hodnoty >1300 (po aplikaci 10 pg 2-aminofluorenu).
In vivo
V podmínkách in vivo byl testován účinek pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) na adjuvantní arthritidu u potkanů albínů (což je zvířecí model onemocnění lidské revmatoidní artritidy) a na experimentální kolitidu u myší.
Příklad 12 Adjuvantní artritida
Adjuvantní artritida byla indukována u samic potkanů inbredního kmene Lewis, zakoupených u firmy AnLab spol. s.r.o., Praha. Zvířata pochází z chovu laboratorních zvířat firmy Charles River Deutschland (Sulzfeld, Německo). V akreditovaném zvířetníku Ústavu experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. byla držena v průhledných chovných akváriích na hoblinové podestýlce ve skupinách po 5 zvířatech. Rytmus osvětlení byl 12 hodin tma (18 h - 06 h)/ 12 hodin světlo. Teplota se pohybovala v rozmezí 21-23 °C. Zvířata měla po celou dobu pokusu volný přístup ke standardní peletované dietě a k pitné vodě.
Pro pokus byly použity samice potkanů inbredního kmene Lewis. Byly vytvořeny tři skupiny po 5 zvířatech. Zvířatům v kontrolní skupině bylo aplikováno pouze Freudovo kompletní adjuvans (FCA); zvířatům v druhé kontrolní skupině bylo aplikováno FCA a podávána 0,5% methylcelulóza (tj. vehikulum), zatímco zvířatům v pokusné skupině bylo aplikováno FCA a podávána látka 51.
FCA se skládalo z Mycobacterium tuberculosis kmene H37 Ra (Difco Labs, Detroit, MI, USA) a parafinového oleje (Acros Organics, New Jersey, USA) (0,5 mg/1 ml). Suspenze byla injikována podkožně do levé zadní (ipsilaterální) tlapky v objemu 0,1 ml. Den podání byl označen jako „den 0“. Objem neinjikováných (tzn. kontralaterálních) tlapek, který indikuje tíži artritického onemocnění, tj. sekundárních leží, byl měřen pomocí plethysmometru UgoBasil 7150 (Varese, Itálie).
Aktivní látka byla připravena jako jemná suspenze v 0,5% methylcelulóze (Methocel 90HG, šarže 050510BT, Sigma-Aldrich, Praha). Roztoky byly podávány orálně pomocí žaludeční sondy, v dávce 50 mg/kg a v objemu 1 ml/200 g hmotnosti zvířete. Aplikací byla zahájena v den 9, ukončena byla v den 16 po indukci artritidy. Pokus byl ukončen v den 19 po indukci onemocnění.
Efekt látky byl statisticky vyhodnocen pomocí analýzy variance a následně Bonferroniho testem. Ve srovnání se skupinou kontrolních zvířat, kterým byla podávána jen methycelulóza, bylo pozorováno výrazné (statisticky významné) snížení tíže onemocnění u zvířat, kterým byla podávána aktivní látka 51. Výsledky jsou znázorněny na obr. 1.
Příklad 13. Experimentální kolitida
Testované sloučeniny byly rozpuštěny v 0,5% metylcelulose (MC, Bio-test s.r.o., Konárovice, Česká republika; šarže: 050510BT) k zisku konečné koncentrace 2 mg/ml (cca 10 mg/kg). K dosažení homogennosti suspense byly látky v MC dezintegrovány ultrazvukem (sonikovány: 20 s, λ=0. Ipm). Čerstvé suspenze byly připravovány každý den.
Zvířata a uspořádání
Samice myší kmene BALB/c ve stáří 13 týdnů byly získány z chovu Fyziologického ústavu AV ČR, v.v.i.. Kolitida u nich byla indukována podáváním 3% roztoku (hm./objem) dextransulfátu sodného (DSS, mol. hmotnost 36- 50 kDa; MP Biomedicals, lne.) v pitné vodě po dobu 7 dní [Gastroenterology 98, 694-7, 1990]. Počínaje dnem 1 podávání DSS byla po dobu 7 dní podávána žaludeční sondou také dávka testované sloučeniny, rozpuštěné ve 100 μΐ MC (kontrolním zvířatům pouze dávka methylcelulózy).
Hodnocení závažnosti kolitidy
Závažnost kolitidy byla hodnocena poslední den experimentu bodováním klinické aktivity, histologických parametrů a měřením délky střeva.
Délka střeva
Celé střevo bylo odebráno post mortem, bez napnutí umístěno na pravítko a změřeno. Zkrácení střeva je nepřímým markérem zánětu (čím kratší střevo, tím závažnější zánět).
Index aktivity choroby
Bodování klinické aktivity představuje sumu jednotlivých ohodnocení od 0 do 4 a bylo vypočteno za použití následujících parametrů: Snížení tělesné hmotnosti (žádné = 0 bodů, snížení o 1 až 5 % = 1 bod, o 5-10 % = 2 body, od 10 do 20 % = 3 body, o 20 % = 4 body), konzistence stolice (pevná = 0 bodů; nepevná, ale nelepící se na řitní otvor = 2 body; tekutá, lepící se na řitní otvor = 4 body) a krvácení (žádné = 0 bodů, kladná guajaková reakce = 2 body, silné krvácení = 4 body). Tato bodová hodnocení byla sečtena a dělena třemi k zisku celkového ~
indexu aktivity onemocnění, který byl v rozmezí od 0,0 (zdraví jedinci) do 4,0 (maximální aktivita kolitidy), jak popsal Cooper se spoluautory [Lab. Invest. 69, 238-49, 1993].
Histologické zhodnocení
Sestupný tračník byl fixován v pufrovaném roztoku 4% formaldehydu a zalit do parafínu pro histologické stanovení. Řezy byly barveny v soustavě hematoxylin/eosin. Pro každý vzorek byly testovány čtyři příčné řezy, které byly od sebe odděleny úseky o délce 100 mm. Histologické hodnocení bylo vypracováno pro každý řez dvěma patology ve slepém uspořádání, čímž bylo získáno hodnocení, kombinující stupeň infiltrace leukocytů do vrstvy lamia propria (slizniční vazivo) a do podslizničního vaziva spolu s rozsahem poškození sliznice (viz Tabulka 1). Celkové hodnocení představuje průměr hodnocení čtyř řezů, který byl v rozmezí od 0 (žádné známky kolitidy) do 3 (těžká kolitida).
Tabulka 4: Popis jednotlivých histologických úrovní
Úroveň Poškození Popis
0 norm, sliznice Stěna tenkého střeva bez otoku či infiltrace, krypta bez poruch, dobře uchovaná produkce hlenu.
0,5 hraniční Oddělená ložisková infiltrace do základů krypt bez poruch sliznice. Výskyt i u některých kontrol, zvířat.
1,0 mírné Rozšíření buněčného infiltrátu do svrchní vrstvy vaziva a podslizniční vrstvy. Slabý otok slizničního vaziva a zploštění krypt bez defektů výstelky.
1,5 střední Souběh zánětlivých buněk a otoku ve slizničním vazivu a nepravidelný infiltrát v podslizničním vazivu. Vazivo je znatelně ploché s oddělenými erozemi či vředy, zaujímají čími méně než 10 % průměru střeva.
2,0 střední až těžké Totéž co výše, ale vředy zaujímají 10 až 50 % průměru, většinou s hnisavým exudátem. Krypty jsou na ústupu, produkce hlenu je potlačena.
2,5 velmi těžké Totéž co výše, vředy pokrývají 50 % průměru střeva. Silná zánětlivá infiltrace a otok ve slizniční i podslizniční vrsvě s pseudohnisavými vředy a intra vaskulámí leukostází.
3,0 extremní Totéž co výše, ale s pseudocelkovým/celkovým obnažením sliznice.
65~ .:.
Statistická analýza
Rozdíly v délce střeva, DAI (disease activity index; index aktivity onemocnění) a histologického hodnocení vícečetných skupin byly srovnány s kontrolní skupinou (MC/DSS) za použití jednocestné analýzy rozdílů s Dunnettovým testem násobného srovnání. Rozdíly byly považovány za statisticky významné při P<0,05.
Sloučeniny č. 28 a 51 byly suspendovány v 0,5 % methylcelulóze (MC, Bio-test s.r.o., Konárovice, Česká republika, šarže: 050510BT) do koncentrace 2 mg/ml (přibližně 10 mg/kg). Sterilní 0,5% MC byla použita jako placebo a dávka 40 mg/jedno podání 6-thioguaninu (6TG) v 0,5% MC jako pozitivní kontrola. Podávané suspenze byly připravovány čerstvé každé 2 dny.
Podáním sloučeniny č. 28 či 51 došlo k statisticky významnému zmírnění průběhu naindukované (závažné formy) experimentální kolitidy u myší (viz obr. 2). Léčebný účinek byl minimálně rovnocenný s účinkem 6-TG (velmi toxické kancerostatikům a imunosupresivum, které vykazuje jednu z největších aktivit v tomto testu léčby experimentální kolitidy). Účinek nižší dávky 2,5 mg /kg není uveden, měl však obdobný průběh. Lze říci, že sloučeniny č. 28 a 51 v denní, orálně podávané dávce 2,5 mg/kg či 10 mg/kg chrání myši před těžkými formami akutní experimentální kolitidy.
III. Fyzikální a jiné vlastnosti
Příklad 14
Látky nesoucí dimethylaminomethylenamino skupinu v poloze 2 pyrimidinového kruhu se za fyziologických podmínek hydrolyzují na odpovídající 2-formylaminopyrimidiny. Tato vlastnost byla prokázána pomocí sledování rychlosti této přeměny za použití HPLC s UV detektorem. Popsané vlastnosti může být použito pro řízené uvolňování aktivních 2-formylaminopyrimidinů. Rychlost hydrolýzy látky č. 19 (v živném médiu použitém pro in vitro pokusy) na látku č. 51. Rychlost reakce byla sledována za podmínek pseudo prvního řádu (tyto podmínky odpovídají koncentracím v in vitro testech), viz obr. 3.
Po linearizaci (log (množství látky)) byla získána přímková závislost s regresním koeficientem 0,9996. Ze směrnice přímky byl určen poločas přeměny látky č. 19 na látku č. 51 jako T1/2 = 58,7 hodin.
~ 66
Průmyslová využitelnost
Deriváty pyrimidinu podle předkládaného vynálezu snižují produkci oxidu dusnatého (NO) a zároveň prostaglandinu E2, a jejich další předností je skutečnost, že v koncentracích, které snižují produkci těchto faktorů o 50%, nemají negativní vliv na životnost zdravých buněk; nejsou cytotoxické. Jsou tedy vhodné pro použití pro léčbu onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, zejména pak zánětlivých a nádorových onemocnění.
~ 67 ~

Claims (10)

  1. ~ 67 ~
    PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce I,
    R2
    R< N X2 (I) kde
    Xi je vybrán ze skupiny zahrnující -Cl, -Br, -I, aryl, heteroaryl, přičemž u substituentů aryl a heteroaryl je aromatický kruh přímo spojen s kruhem pyrimidinovým;
    X2 je vybrán ze skupiny zahrnující -Cl, -Br, -I, aryl, heteroaryl, přičemž u substituentů aryl a heteroaryl je aromatický kruh přímo spojen s kruhem pyrimidinovým;
    Ri je vybrán ze skupiny zahrnující vodík, NH2, OH, SH, NHNH2i alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl;
    R2 je vybrán ze skupiny zahrnující halogen, -NH2, -OH, -NHNH2, -NO, -NO2j -N3, -SH, -SO3H, SO2NH2, -SCN, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl a fosfono;
    kde
    - alkyl je lineární nebo rozvětvený Ci až C10, s výhodou C2 až C6, nej výhodněji C3 až C5 alkylový řetězec, v němž může být kterákoliv -CH2- skupina případně nahrazena -0-, -Snebo -NRc- skupinou, kde Reje vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, přičemž alkyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, ΞΝ, halogen, aryl, heteroaryl, -NH2, -CN, -COORa, kde Rd je vodík nebo Ci až Cé alkyl;
    - alkenyl je lineární nebo rozvětvený C2 až C10, s výhodou C2 až CY. nej výhodněji C3 až C5 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -O-, -S- nebo -NRc- skupinou, kde Re je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina může být nahrazena =N- skupinou, přičemž alkenyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH,
    68 ~ =S, =N, halogen, -NH2, aryl, heteroaryl, -CN a -COORf, kde Rf je vodík nebo Cj až C6 alkyl;
    alkynyl je lineární nebo rozvětvený C2 až Ciq, s výhodou C2 až C&, nejvýhodněji C3 až C5 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu trojnou vazbu, který může případně obsahovat i dvojnou vazbu, v tomto uhlovodíkovém řetězci může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -O-, -S- nebo -NRg- skupinou, kde Rg je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina může být nahrazena =Nskupinou, přičemž alkynyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S. =N, halogen, NH2, -CN, aryl, heteroaryl a -COORh, kde Rh je vodík nebo Ci až Cý alkyl;
    cykloalkyl je lineární nebo rozvětvený C3 až C10, s výhodou C3 až C8, nejvýhodněji C5 až C8 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jeden cyklus, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -0-, -S- nebo -NR,- skupinou, kde Rj je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, přičemž cykloalkyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, =N, halogen, -NH2, -CN, aryl, heteroaryl, a -COORj, kde Rj je vodík nebo Ci až Có alkyl;
    cykloalkenyl je lineární nebo rozvětvený C4 až C10, s výhodou C4 až C8, nej výhodněji C5 až C8 uhlovodíkový řetězec obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu a alespoň jeden cyklus, v němž může případně být kterákoliv -CH2- skupina nahrazena -O-, -S- nebo NRk- skupinou, kde Rk je vodík nebo skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl, heteroaryl jak jsou zde definovány, a kterákoliv =CH- skupina nahrazena =N- skupinou, přičemž cykloalkenyl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =O, =NH, =S, =N, halogen, -NH2, -CN, aryl, heteroaryl a-COORm, kde Rm je vodík nebo C] až CÝ alkyl;
    alkoxy je skupina -0Ra, kde Ra je skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, jak jsou definovány výše;
    alkylthio je skupina -SRb, kde Rb je skupina vybraná ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, jak jsou definovány výše;
    aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 14 uhlíkových atomů, s výhodou 6 až 12 uhlíkových atomů, a obsahující alespoň jedno aromatické jádro, a aryl může být
    -69- .:.
    nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, ξΝ, halogen, Ci až C6 alkyl, Ci až C6 alkoxy, Ci až C6 alkylthio, -NH2, -CN a -COORn, kde Rn je vodík nebo Ct až C6 alkyl. S výhodou je aryl vybrán ze skupiny zahrnující fenyl, benzyl, naftyl. Aryl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, halogen, Ci až C6 alkyl, Ci až C6 alkoxy, -NH2, -CN a -COORq, kde R« je vodík nebo C] až C6 alkyl;
    heteroaryl je uhlovodíková skupina obsahující 2 až 14 uhlíkových atomů, s výhodou 4 až 10 uhlíkových atomů, a alespoň jeden heteroatom, s výhodou jeden až dva heteroatomy, vybrané ze skupiny zahrnující O, S, N, a obsahující alespoň jedno aromatické jádro. S výhodou je aryl vybrán ze skupiny pyrrol, furan, thiofen, imidazol, thiazol, oxazol, indol a pyridin. Heteroaryl může být nesubstituovaný nebo substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, -SH, =0, =NH, =S, =N, halogen, Ci až C6 alkyl, Ci až C6 alkoxy, Ci až Cý alkylthio, -NH2, -CN a -COORP, kde Rp je vodík nebo Ci až C& alkyl;
    halogen je vybrán ze skupiny zahrnující -F, -Cl, -Br, -I.
    fosfono je skupina obsahující O až 8 uhlíkových atomů, -P(O)ORWORX, kde Rw a Rx jsou stejné nebo různé skupiny vybrané ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl jak jsou definovány výše;
    kde jednotlivé substituenty mají významy uvedené výše, přičemž
    Xi či X2 je aryl či heteroaryl, jak je popsáno výše, kromě nesubstituovaného či libovolně substituovaného indolu, který je polohou 3 indolového kruhu přímo připojen k pyrimidinovému kruhu;
    R2 je substituent, jak je popsáno výše, s výjimkou skupin -C(O)NRaRb, -C(S)NRaRb, -NRaC(0)Rb a-NRaC(S)Rb, kde Ra a Rbjsou libovolné substituenty a s výjimkou skupiny -CN i následujících skupin:
    kde R6 a R? je libovolný substituent;
    Ri je substituent, jak je popsán výše, s výjimkou substituentu -Q-T-C-R5, kde R5 je halogen či -OSO2R; Q je libovolný linker; T je pouze -CO-, -CS-, -SO2- a C je ~ 70 ~ libovolně substituovaný uhlík a dále s výjimkou libovolně substituované fenylaminokarbonylamino skupiny;
    nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití jako léčiva.
  2. 2. Pyrimidinové sloučeniny podle nároku 1 pro použití jako duální inhibitory produkce NO a prostaglandinu E2.
  3. 3. Pyrimidinové sloučeniny podle nároku 1 pro použití při léčbě onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, zejména zánětlivá a nádorová onemocnění.
  4. 4. Pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující 2-amino-4,6-dichlor-5-methylpyrimidin,
    2 -amino- 5 -ethyl -4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-propylpyrimidin,
    2-amino-5 -buty 1-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5 -pentylpyrimidin,
    2-amino-5-hexyl-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-isopropylpyrimidin,
    2-amino-5-(sec-butyl)-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-5-(/er/-butyl)-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-5-fenyl-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(4-chlorfenyl)pyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(4-nitrofenyl)pyrimidin,
    2-amino-5-(4-fluorfenyl)-4,6-dichlorpyrimidin,
    5-allyl-2-amino-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)pyrimidin,
    2-amino-5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(4-chlorbenzyl)pyrimidin,
    2-amino-5-(4-fluorbenzyl)-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(4-methylbenzyl)pyrimidin,
    2-amino-4,6-dichlor-5-(4-rnethoxybenzyl)pyrimidin, 2-amino-4,6-dichlor-5-(4-nitrobenzyl)pyrimidin, 2 -amino-5 -(4-brombenzy l)-4, 6-dichlorpyrimidin, 2-amino-4,6-dichlor-5-(3,4,5-trimethoxybenzyl)pyrimidin, 2,5-diamino-4,6-dichl orpyrimidin,
    2-amino-5 -sec-buty 1-4,6- d ij odpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4,6-dijodpyrimidin, 2-amino-5-sec-butyl-4,6-dibrompyrimidin, 2-amino-5 -benzy 1-4,6-dibrompyrimidÍn, 2-amino-5-butyl-4-fenyl-6-chlorpyrimidÍn, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(pyridin-3-yl)pyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-chloro-6-(pyridin-4-yl)pyrimidins 2-amino- 5 -buty 1-4 -chlor- 6-(4-chlorfeny l)pyrimidin, 2-amino- 5 -buty 1-4 -chlor- 6-(4-nitrofeny l)pyrímidin, 2-amino-5-butyl-4-(4-fluorfenyl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-(perfluorfenyl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-(furan-2-yl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-(furan-3-yl)-6-chlorpyrimÍdin, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(thiofen-3-yl)pyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(thiofen-2-yl)pyrimÍdin, 2-amino-5-buty l-4-chlor-6-( 1 //-pyrrol-2-yl)pyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(lZ7-pyrrol-3-yl)pyrimidin, 2-amino-5 -butyl-4-chlor-6-( 1 /f-imidazol-4-yl)pyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-(l//-imidazol-2-yl)pyrimidin, 2-amino-4-(benzofuran-2-yl)-5-butyl-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-fenyl-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(pyridin-3-yl)pyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-chloro-6-(pyridin-4-yl)pyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(4-chlorfenyl)pyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(4-nitrofenyl)pyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-(4-fluorfenyl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-(perfluorfenyl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-(furan-2-yl)-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-(furan-3-yl)-6-chlorpyrimidin, ~ 72 ~
    2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(thiofen-3-yl)pyrimÍdin, 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(thiofen-2-yl)pyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4-chlor-6-(l/f-pyrrol-2-yl)pyrimidin, 2-amino- 5 -benzy 1-4 -chlor-6-(l //-pyrrol-3 -y l)pyrimidin, 2-amino- 5 -benzy 1-4 -chlor-6 -(1 //- imidazol-4-yl)pyrimidin, 2-amino-5 -benzy l-4-chlor-6 -(1//- imidazol -2 -yl)pyrimidin, 2-ammo-4-(benzofúran-2-yl)-5-benzyl-6-chlorpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4-chlor-6-jodpyrimidin, 2 -amino -5 -benzy l-4-chlor-6-j odpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4,6-difenylpyrimidin, 2-amino-5-butyl-4,6-di(pyridin-3-yl)pyrimidin, 2-amino-4,6-di(benzofuran-2-yl)-5-butylpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4,6-difenylpyrimidin, 2-amino-5-benzyl-4,6-di(pyridin-3-yl)pyrimidin, 2-amÍno-4,6-di(benzofuran-2-yl)-5-benzylpyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-methylpyrimidÍn) 5-ethyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formy lamino-4,6-di chlor-5-propy Ipyrimidin, 5-buty 1-2-formy lamino-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formylarnino-4,6-dichlor-5-pentylpyrimidin, 2-formylamino-5-hexyl-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-isopropylpyrimidin, 5-(sec-butyl)-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 5-(ter/-butyl)-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 5-fenyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-nitrofenyl)pyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-chlorfenyl)pyrimidin, 5-(4-fluorfenyI)-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 5-allyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)pyrimidin, 5-benzyl-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-chlorbenzyl)pyrimidin, 5-(4-fluorbenzyl)-2-formylamino-4,6-dichlorpyrimidin,
    2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-methylbenzyl)pyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-methoxybenzyl)pyrimidin, 2-formylamino-4,6-dichlor-5-(4-nitrobenzyl)pyrimidin, 2-formy lamino -4,6-dichlor- 5 - (3,4,5 -trimethoxy benzy l)pyrimidin, 5 - (4-brombenzyl)-2 -formylamino -4,6-di chlorpyrimidin,
    4,6-dichlor-5-methyl-2- {[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 5-ethyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 4,6-dichIor-2- {[(dimethy lamino)methy len] amino} -5 -propy Ipyrimidin, 5 -butyl -4,6-dichlor-2- {[(dimethy lamino)methylen] amino } pyrimidin, 4,6-dichlor-2 - {[(dimethy lamino)methy len] amino} -5 -penty Ipyrimidin, 5-hexyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamÍno)methylen]amino}pyrimidin, 4,6-dichlor-5-isopropyl-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidinJ 5-(.sec-butyl)-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 5-(ter/-buty l)-4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methylen] amino } pyrimidin, 5-fenyl-4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methylen] amino} pyrimidin, 4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methylen]amino} -5-(4-nitrofenyl)pyrimidin, 4,6-dichlor-5-(4-chlorfenyl)-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 5 -(4 -fluorfenyl )-4,6-dichlor-2- {[(dimethylamino)methy len] amino } pyrimidin, 5-allyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin,
    4,6-dichlor-2-{[(dimethyIamino)methylen]amino}-5-(prop-2-ynyl)pyrimidin, 4,6-dichlor-5-(2-chlorallyl)-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 5-benzyl-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 4,6-dichlor- 5 -(4-chlorbenzy l)-2 - {[(dimethy lamino)methy len] amino} pyrimidin, 5-(4-fluorbenzyl)-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5-(4-methylbenzyl)pyrimidin, 4,6-dichlor-5-(4-methoxybenzyl)-2-{[(dimethylamino)methyIen]amino}pyrimidin, 4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}-5-(4-nitrobenzyl)pyrimidin, 4,6-dichlor-5-(3,4,5-trimethoxybenzyl)-2-{[(dimethylamino)methylen]amino}pyrimidin, 5-(4-brombenzyl)-4,6-dichlor-2-{[(dimethylamino)methylen]amino} pyrimidin, 5-butyl-4,6-dichlorpyrimidin,
    5-butyl-4,6-dichlor-2-methylpyrimidin, 5-butyl-4,6-dichlor-2-(dimethylamino)pyrimidin, 5-butyl-4,6-dichlor-2-methoxypyrimidin, 5-butyl-2-hydroxy-4,6-dichlorpyrimidin, ~74~ ·...:.. .:.
    5-butyl-4,6-dichlor-2-(methylthio)pyrimidin,
    5-benzyl-4,6-dichlorpyrimidin,
    5-benzyl-4,6-dichlor-2-methylpyrimÍdin,
    5-benzyl-4,6-dichlor-2-(dimethylamino)pyrimidin,
    5-benzyl-4,6-dichlor-2-methoxypyrimidin,
    5-benzyl-2-hydroxy-4,6-dichlorpyrimidin,
    5-benzyl-4,6-dichlor-2-(methylthio)pyrimidin.
  5. 5. Způsob výroby pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) podle nároku 1, které nesou 2formylaminovou skupinu, vyznačující se tím, že se jejich příslušné 2-[(dimethyl-amino)methylen]ové deriváty selektivně hydrolyzují v organickém rozpouštědle za přítomnosti vody, silikagelu a kyseliny octové při teplotě místnosti.
  6. 6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceutické nosiče, excipienty a diluenty.
  8. 8. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 6 nebo 7 pro použití k léčbě onemocnění, která jsou vyvolána čí je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, zejména zánětlivá a nádorová onemocnění.
  9. 9. Použití pyrimidinových sloučenin obecného vzorce (I) podle nároku 1, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro přípravu léčiva pro použití k léčbě onemocnění, která jsou vyvolána či je jejich závažnost umocňována nadprodukcí NO a/nebo prostaglandinu E2, zejména zánětlivá a nádorová onemocnění.
  10. 10. Pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1
    kde
    a) pro X[ = X2 = Cl a Ri = NH2je R2 zvolen ze skupiny, zahrnující: propyl, pentyl, hexyl, isopropyl, sec-butyl, řerř-butyl, 2-chlorallyl, 4-fluorbenzyi, 4chlorbenzyl, 4-methylbenzyl;
    b) pro Xi = X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    c) pro Xi = X2 = Br a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    d) pro X] - Cl, X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    e) pro Xi = Cl, X2 = Br a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    f) pro Xi = Br, X2 = I a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    g) pro Xi = Br, X2 = aryl či heteroaryl a Ri = NH2 je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    h) pro Xi = I, X2 = aryl či heteroaryl a Ri = NH2 je R2 = alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    i) pro R[ = formylamino, X] = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl a X2 = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    j) pro Ri = alky Ikarbony lamino, arylkarbonylamino, heteroarylkarbonylamino, Xj = Br, I, aryl či heteroaryl, X2 = Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    k) Pro Ri = AUV-dialkylaminomethylenamino, Xi = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl, X2 = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    ~ 76 ~
    1) pro Ri = JVW-dialkylamino-l-alkylmethylenamino, AýV-dialkylamino-l-arylmethylenamino, AUV-dialkylamino-l-heteroarylmethylenamino, X; = Cl, Br, I, aryl či heteroaryl, X2 - Cl, Br, I, aryl či heteroaryl je R2 alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heteroaryl;
    kde jednotlivé substituenty mají významy uvedené v nároku 1,
    Xi či X2 je aryl Či heteroaryl, jak je popsáno výše, kromě libovolně nesubstituovaného či substituovaného indolu, který je polohou 3 indolového kruhu přímo připojen kpyrimidinovému kruhu;
    R2 je substituent, jak je popsáno výše, s výjimkou libovolně substituovaného fenylu připojeného přímo k pyrimidinovému kruhu, dále s výjimkou skupin -C(O)NRaRb, C(S)NRaRb, -NRaC(O)Rb a -NRaC(S)Rb, kde Ra a Rb jsou libovolné substituenty a s výjimkou skupiny --CN i následujících skupin:
    kde
    R$ a R7 je libovolný substituent;
    Ri je substituent, jak je popsán výše, s výjimkou struktury -Q-T-C-R5, kde R5 je pouze halogen či -OSO2R; Q je libovolný linker; T je pouze -CO-, -CS-, -SO2- a C je libovolně substituovaný uhlík a dále s výjimkou libovolně substituované fenyaminokarbonylamino skupiny;
    nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
CZ2011-103A 2011-02-28 2011-02-28 Pyrimidinové sloučeniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, způsob výroby a použití CZ305457B6 (cs)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2011-103A CZ305457B6 (cs) 2011-02-28 2011-02-28 Pyrimidinové sloučeniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, způsob výroby a použití
EP12710650.8A EP2680847A1 (en) 2011-02-28 2012-02-27 Pyrimidine compounds inhibiting the formation of nitric oxide and prostaglandin e2, method of production thereof and use thereof
EP17158250.5A EP3195867B1 (en) 2011-02-28 2012-02-27 Pyrimidine compounds inhibiting the formation of nitric oxide and prostaglandin e2, method of production thereof and use thereof
US14/000,461 US8883798B2 (en) 2011-02-28 2012-02-27 Pyrimidine compounds inhibiting the formation of nitric oxide and prostaglandin E2, method of production thereof and use thereof
PCT/CZ2012/000020 WO2012116666A1 (en) 2011-02-28 2012-02-27 Pyrimidine compounds inhibiting the formation of nitric oxide and prostaglandin e2, method of production thereof and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2011-103A CZ305457B6 (cs) 2011-02-28 2011-02-28 Pyrimidinové sloučeniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, způsob výroby a použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2011103A3 true CZ2011103A3 (cs) 2012-09-12
CZ305457B6 CZ305457B6 (cs) 2015-09-30

Family

ID=45887852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2011-103A CZ305457B6 (cs) 2011-02-28 2011-02-28 Pyrimidinové sloučeniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, způsob výroby a použití

Country Status (4)

Country Link
US (1) US8883798B2 (cs)
EP (2) EP2680847A1 (cs)
CZ (1) CZ305457B6 (cs)
WO (1) WO2012116666A1 (cs)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ308052B6 (cs) * 2017-05-24 2019-11-20 Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v. v. i. Polysubstituované pyrimidiny
CN110563709B (zh) * 2018-06-06 2023-01-24 中国科学院上海药物研究所 一类嘧啶类化合物及其作为trpv2抑制剂的用途
CN117915918A (zh) * 2021-04-28 2024-04-19 康奈尔大学 可溶性腺苷酸环化酶(sAC)抑制剂及其用途

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1986004583A1 (en) * 1985-02-05 1986-08-14 The Upjohn Company 4-substituted-6-aryl pyrimidine compounds
AU651630B2 (en) 1990-11-14 1994-07-28 Pharmacia & Upjohn Company 5-fluoro-2,4,6-pyrimidinetriamine compounds
TW225528B (cs) 1992-04-03 1994-06-21 Ciba Geigy Ag
GB9309573D0 (en) * 1993-05-10 1993-06-23 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
EP0728130A1 (en) * 1993-11-12 1996-08-28 PHARMACIA &amp; UPJOHN COMPANY Pyrimidine-thioalkyl and alkylether compounds
GB9402161D0 (en) * 1994-02-04 1994-03-30 Wellcome Found Chloropyrimidine intermediates
CA2145928C (en) 1994-04-27 2007-10-09 Gerhard Stucky N-(2-amino-4,6-dichloropyrimidin-5-yl)formamide, and a process for its preparation
DE59606057D1 (de) 1995-08-31 2000-11-30 Lonza Ag Verfahren zur herstellung von dihydroxypyrimidin-derivaten
US5811428A (en) 1995-12-18 1998-09-22 Signal Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine carboxamides and related compounds and methods for treating inflammatory conditions
EP0888335A4 (en) 1996-03-13 2002-01-02 Smithkline Beecham Corp NEW PYRIMIDINE COMPOUNDS AND THEIR USE IN THE TREATMENT OF CYTOKININ MEDIATOR DISEASES
US6440965B1 (en) 1997-10-15 2002-08-27 Krenitsky Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrimidine derivatives, their preparation and their use in the treatment of neurodegenerative or neurological disorders of the central nervous system
US7045519B2 (en) * 1998-06-19 2006-05-16 Chiron Corporation Inhibitors of glycogen synthase kinase 3
DE19834044A1 (de) * 1998-07-29 2000-02-03 Bayer Ag Neue substituierte Pyrazolderivate
AU1199600A (en) * 1998-10-02 2000-04-26 Board Of Trustees Of The University Of Illinois, The Estrogen receptor ligands
DE59907401D1 (de) * 1998-12-21 2003-11-20 Lonza Ag Verfahren zur Herstellung von 2,5-Diamino-4,6-dihalogenpyrimidinen
PL203805B1 (pl) * 2000-02-25 2009-11-30 Hoffmann La Roche Zastosowanie cyklicznych związków heteroaromatycznych, lek i cykliczne związki heteroaromatyczne
TWI330183B (cs) * 2001-10-22 2010-09-11 Eisai R&D Man Co Ltd
WO2003057689A1 (en) * 2002-01-02 2003-07-17 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Aminopyrimidine compounds, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
PE20040079A1 (es) 2002-04-03 2004-04-19 Novartis Ag Derivados de indolilmaleimida
CA2492342C (en) 2002-07-22 2011-03-22 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Novel bio-active pyrimidine derivatives
US7419984B2 (en) 2002-10-17 2008-09-02 Cell Therapeutics, Inc. Pyrimidines and uses thereof
EP1594438B1 (fr) * 2003-02-12 2013-07-17 L'Oréal Utilisation d'un inhibiteur de 15-hydroxy prostaglandine déshydrogénase pour favoriser la pigmentation de la peau ou des phanères
US7371759B2 (en) 2003-09-25 2008-05-13 Bristol-Myers Squibb Company HMG-CoA reductase inhibitors and method
WO2005054239A1 (en) * 2003-12-05 2005-06-16 Bayer Healthcare Ag 2-aminopyrimidine derivatives
GB0512324D0 (en) 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
US7589088B2 (en) 2004-12-29 2009-09-15 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidine-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and methods
GB0500492D0 (en) 2005-01-11 2005-02-16 Cyclacel Ltd Compound
TW200637556A (en) 2005-01-31 2006-11-01 Basf Ag Substituted 5-phenyl pyrimidines I in therapy
US20060217390A1 (en) 2005-02-24 2006-09-28 Esmir Gunic Cycloalkl, aryl and heteroaryl amino isothiazoles for the treatment of Hepatitis C virus
US20070135437A1 (en) * 2005-03-04 2007-06-14 Alsgen, Inc. Modulation of neurodegenerative diseases
GB0512844D0 (en) 2005-06-23 2005-08-03 Novartis Ag Organic compounds
WO2007031829A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Orchid Research Laboratories Limited Novel pyrimidine carboxamides
AR058073A1 (es) 2005-10-03 2008-01-23 Astrazeneca Ab Derivados de imidazol 5-il-pirimidina, procesos de obtencion, composiciones farmaceuticas y usos
JO2660B1 (en) * 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
DE102006008880A1 (de) * 2006-02-27 2007-09-06 Merck Patent Gmbh Aminopyrimidinderivate
CA2668811A1 (en) * 2006-11-07 2008-06-05 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cognitive impairment and dementia
WO2008074445A1 (en) * 2006-12-18 2008-06-26 Ucb Pharma, S.A. Novel tricyclic and heterotricyclic derivatives, processes for preparing them, pharmaceutical compositions thereof
US8288371B2 (en) * 2007-10-05 2012-10-16 Pharmacopeia, Llc Ortho pyrrolidine, benzyl-substituted heterocycle CCR1 antagonists for autoimmune diseases and inflammation
WO2009064388A2 (en) * 2007-11-09 2009-05-22 Liu Jun O Inhibitors of human methionine aminopeptidase 1 and methods of treating disorders
PE20091236A1 (es) 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
RU2572616C2 (ru) * 2008-02-01 2016-01-20 Оркид Рисерч Лабораториз Лимитед Новые гетероциклы
AU2009224738A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Neurosearch A/S Novel triaryl derivatives useful as modulators of nicotinic acetylcholine receptors
JP2011515462A (ja) 2008-03-27 2011-05-19 アウククランド ウニセルビセス リミテッド 置換されたピリミジン、及びトリアジン、並びに癌療法におけるこれらの使用
EP2221053A1 (de) 2009-02-20 2010-08-25 Albert-Ludwigs-Universität Freiburg Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend Hemmstoffe der Proteinmethyltransferase I und deren Verwendung zur Behandlung von Tumorerkrankungen
KR20110131190A (ko) * 2009-02-25 2011-12-06 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 3 고리성 피라졸로피리미딘 유도체
GB0913636D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
AR077999A1 (es) 2009-09-02 2011-10-05 Vifor Int Ag Antagonistas de pirimidin y triazin-hepcidina
US9208705B2 (en) 2012-11-21 2015-12-08 Shenzhen China Star Optoelectronics Technology Co., Ltd Heat sink and backlight module using same

Also Published As

Publication number Publication date
CZ305457B6 (cs) 2015-09-30
WO2012116666A1 (en) 2012-09-07
US8883798B2 (en) 2014-11-11
US20130324566A1 (en) 2013-12-05
EP3195867B1 (en) 2019-09-04
EP3195867A1 (en) 2017-07-26
EP2680847A1 (en) 2014-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5970537B2 (ja) キナーゼ阻害薬として活性な置換ピリミジニル−ピロール
JP4688498B2 (ja) Ｊａｋインヒビターとしてのヘテロアリール−ピリミジン誘導体
US20190382416A1 (en) Substituted tetrahydrocarbazole and carbazole carboxamide compounds
GB2432834A (en) Selective Kinase Inhibitors
TW201113272A (en) Novel pyrimidine-and triazine hepcidine antagonists
WO2010035727A1 (ja) 新規ピロリノン誘導体およびそれを含有する医薬組成物
CA2723209C (en) Process for the preparation of 5-(2-amino-pyrimidin-4-yl)-2-aryl-1h-pyrrole-3-carboxamides
AU2006267454A1 (en) Benzoimidazole compound capable of inhibiting prostaglandin D synthetase
JP2019507787A (ja) ピリジニルアミノピリミジン誘導体の塩、その製造方法及びその使用
KR20050120711A (ko) 알레르기 및 세포 과다증식 질병의 치료를 위한 이미다졸유도체
KR20240006641A (ko) Tyk2 억제제로서의 헤테로아릴 화합물, 이의 조성물 및 용도
AU2018337138B2 (en) 2-substituted pyrazole amino-4-substituted amino-5-pyrimidine formamide compound, composition, and application thereof
CA3180058A1 (en) Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives having multimodal activity against pain
EP4460492A1 (en) Compounds containing a hydroxyphenyl moiety and their use
CZ2011103A3 (cs) Pyrimiddinové slouceniny inhibující tvorbu oxidu dusnatého a prostaglandinu E2, zpusob výroby a použití
CN113372364B (zh) 一类jak激酶抑制剂及其制备和应用
EP2642987A1 (en) Diphenyl-amine derivatives: uses, process of synthesis and pharmaceutical compositions
JP2022516922A (ja) フッ素含有置換ベンゾチオフェン化合物ならびにその医薬組成物および応用
AU2016304331A1 (en) Method of treating cancer with a combination of benzylideneguanidine derivatives and chemotherapeutic agent.
JP2023545452A (ja) クリプトスポリジウム症の治療のための化合物及び組成物
AU2016341259A1 (en) Pyridone derivatives and their use as kinase inhibitors
TWI820414B (zh) 喹唑啉類化合物、製備方法及其應用
JP2023535346A (ja) Ｄｈｏｄｈ阻害剤としての化合物
HK1187905B (en) Substituted pyrimidinyl-pyrroles active as kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20220228