Polysubstituované pyrimidiny
Oblast techniky
Vynález se týká polysubstituovaných pyrimidinů a jejich použití jako inhibitorů produkce prostaglandinu E2.
Dosavadní stav techniky
Prostaglandin E2 (PGE2) je prostanoid lipidní povahy, vznikající kaskádou enzymatických reakcí z kyseliny arachidonové (Park, J. Y., Clin. Immunol. 2006, 119, 229-240). Za běžného stavu organismu má PGE2 homeostatické účinky, za patologického stavuje jeho produkce indukována prozánětlivými cytokiny jako interleukin- 1β (IL-1 β), faktor nekrózy nádorů (TNF-α) a interferon-γ (IFN-γ) (Dinarello, C. A., Chest 2000, 118, 503-508) a PGE2 posléze působí zánětlivě.
Kyselina arachidonová je substrátem pro enzym cyklooxygenázu (konstitutivní cyklooxygenázu COX-1 a inducibilní COX-2), která je tímto enzymem v dalším kroku biosyntézy PGE2 transformována na prostaglandin H2 (PGH2). Terminálním enzymem, který se účastní celého procesu, je mikrosomální prostaglandin E syntáza-1 (mPGES-1), která transformuje substrát PGH2 na PGE2. Podobně jako COX-2 je i mPGES-1 enzymem indukovatelným, a to stejnými stimuly, kterými je indukován COX-2.
Inhibicí produkce indukovaného PGE2 se prokazatelně snižují prozánětlivé faktory jako bolest, edém, horečka a zarudnutí. Běžně používanými inhibitory produkce PGE2 jsou glukokortikoidy, nesteroidní protizánětlivé látky (neselektivní inhibitory COX-1 a COX-2) a v poslední době takzvané coxiby (selektivní inhibitory COX-2). Všechny dosavadní strategie boje proti zánětu však vykazují vedlejší účinky. V případě glukokortikoidů je to imunosuprese, nesteroidní protizánětlivé látky způsobují poškození gastrointestinálního traktu a coxiby způsobují kardiovaskulární potíže. Z uvedeného vyplývá, že je žádoucí vývoj nových inhibitorů PGE2 bez vedlejších účinků, případně s novým mechanismem účinku.
Substituované pyrimidiny vykazují širokou škálu biologických aktivit (Sáhu, M., lni. J. Pharm. Pharm. Sci. 2016, 8, 5, 8-21). Z literatury je známo také několik příkladů polysubstituovaných pyrimidinů použitých jako protizánětlivé látky. Pyrimidinem substituované močoviny byly použity jako inhibitory prozánětlivých cytokinů TNF- a a interleukinu-6 (Keche, A. P., Bioorg. Med. Chem. Letu 2012, 22, 3445-3448). 2,4-Diamino-5-cyklopropylpyrimidiny byly publikovány jako inhibitory TBK1/IKBG kináz regulujících transkripční procesy související s produkcí prozánětlivých cytokinů (McIver, Bioorg. Med. Chem. Lett 2012, 22, 7169-7173). Vhodně substituované dihydropyrimidiny byly popsány jako inhibitory mikrosomální PGE2 syntázy (mPGE2S), klíčového enzymu v syntéze PGE2 (Lauro, G., Eur. J. Med. Chem 2014, 80, 407-415). Deriváty kyseliny pirinixové vykázaly aktivitu jako duální inhibitory mikrosomální PGE2 syntázy a 5-lipoxygenázy (5-LO) (Hanke, T., J. Med. Chem. 2013, 56, 9031-9044).
V naší laboratoři byly objeveny, patentovány a posléze publikovány polysubstituované pyrimidiny s duální inhibicí produkce PGE2 a oxidu dusnatého (NO) (Jansa, P. WO2012116666 2012, AI; US 8883798); Jansa, P. Med. Chem. Res. 2014, 23, 4482-4490; Jansa, P. Med. Chem. Res. 2015, 24, 2154-2166).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou následující polysubstituované pyrimidiny:
- 1 CZ 308052 B6
5-butyl-4-(4-ethoxyfenyl)-6-fenylpyriinidin-2-amin 5-butyl-4-(4-isopropoxyfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin 5-butyl-4-fenyl-6-(3,4,5-trimethoxyfenyl)pyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
4- (4-(benzyloxyfenyl)-5-butyl-6-fenylpyrimidin-2-amin
5- butyl-4-(4-(naftalen-l-ylmethoxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
4- (4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
5- butyl-4-(4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
4- (4-((4-chlorbenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
5- butyl-4-(4-((4-chlorbenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)-2-methylfenyl)-5-butyl-6-fenylpyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin
4- (4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenyl)-5-butyl-6-fenylpyrimidin-2-amin
5- butyl-4-(4-((2-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethylfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin 5-butyl-4-(4-((3-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethylfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(3-methoxyfenyl)pyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(4-methoxyfenyl)pyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(3-chlorfenyl)pyrimidin-2-amin 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(4-chlorfenyl)pyrimidin-2-amin a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Výraz farmaceuticky přijatelná sůl, jak je zde použit, zahrnuje soli, které jsou v rámci rozumného lékařského úsudku vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí a nižších živočichů bez nežádoucí toxicity, podráždění, alergické reakce a podobně a vykazují přijatelný poměr prospěchu a rizika. Farmaceuticky přijatelné soli jsou dobře známé v oboru, například P. H. Stahl a spoluautoři popsali farmaceuticky přijatelné soli podrobně v Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use (Wiley VCH, Zunch, Switzerland: 2002). Příklady takových solí zahrnují, nikoli výlučně, acetát, adipát, alginát, citrát, aspartát, benzoát, benzensulfonát, bisulfát, butyrát, kafrát, kafirsulfonát, diglukonát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, flimarát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethansulfonát (isethionát), laktát, maleát, methansulfonát, nikotinát, 2-naftalensulfonát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, tartrát, thiokyanát, fosfát, glutamát, bikarbonát, p-toluensulfonát a undekanoát. Rovněž skupiny obsahující dusíkový atom mohou být kvartemizovány činidly, jakými jsou nižší alkylhalogenidy jako methyl-, ethyl-, propyl- a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty jako dimethyl-, diethyl-, dibutyl- a diamylsulfáty, halogenidy s dlouhým řetězcem jako jsou decyl-, lauryl-, myristyl- a stearyl- chloridy, bromidy a jodidy; arylalkylovými halogenidy jako benzyl a fenethylbromidy, a dalšími.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou dále i zmíněné polysubstituované pyrimidiny pro použití jako léčiva.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také zmíněné polysubstituované pyrimidiny pro použití jako léčiva, inhibující nadprodukci prostaglandinu E2.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou i zmíněné polysubstituované pyrimidiny pro použití jako léčiva k léčbě onemocnění, která jsou indukována, nebo jejich závažnost je zvyšována, nadprodukci prostaglandinu E2, zvláště pak k léčbě zánětlivých, a/nebo nádorových onemocnění, nebo jako anti-angiogenní, imunomodulační, antiproliferativní či protinádorová léčiva.
Předmětem předkládaného vynálezu je dále i použití zmíněného polysubstituováného pyrimidinů jako další účinné složky farmaceutického prostředku, určeného k léčbě onemocnění, která jsou indukována, nebo jejich závažnost je zvyšována, nadprodukci prostaglandinu E2, zvláště pak k léčbě zánětlivých, a/nebo nádorových onemocnění.
-2CZ 308052 B6
Předmětem předkládaného vynálezu je také farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství zmíněného polysubstituovaného pyrimidinů a případně alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo a/nebo ředidlo a/nebo pomocnou látku.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž výše zmíněný farmaceutický prostředek pro použití k léčbě onemocnění, která jsou indukována, nebo jejich závažnost je zvyšována, nadprodukcí prostaglandinu E2, zvláště pak k léčbě zánětlivých, a/nebo nádorových onemocnění.
Termín terapeuticky účinné množství, jak se zde používá, se týká takového množství sloučeniny nebo léčiva, které je účinné při léčení onemocnění nebo poruchy u člověka, popřípadě savce. V případě léčby rakoviny může terapeuticky účinné množství léčiva snížit počet rakovinných buněk; snížit velikost nádoru; inhibovat (tj. do určité míry zpomalit a s výhodou zastavit) infiltraci rakovinných buněk do periferních orgánů; inhibovat (tj. zpomalit do určité míry a s výhodou zastavit) tvorbu metastází nádoru, inhibovat, do určité míry, růst nádoru a/nebo zmírnit do určité míry jeden nebo více symptomů spojených s rakovinou. Vzhledem k tomu, léčivo může zabránit růstu a/nebo zabíjet existující rakovinné buňky, může být cytostatické a/nebo cytotoxické.
Výraz farmaceutický prostředek označuje formulaci sloučeniny a média obecně uznávanou v oboru pro dodání biologicky účinné látky savci, např. člověku. Takové médium zahrnuje všechny farmaceuticky přijatelné nosiče, ředidla nebo pomocné látky.
Výraz farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo nebo plnivo, jak se zde používá, zahrnuje bez omezení jakoukoliv pomocnou látku, nosič, kluznou látku, sladidlo, konzervant, barvivo, látku zvýrazňující chuť, povrchově aktivní činidlo, dispergační činidlo, suspendační činidlo, stabilizátor, izotonický prostředek, rozpouštědlo, nebo emulgátor, které byly schválené pro použití u lidí nebo domácích zvířat.
Vynález dále zahrnuje zmíněné polysubstituované pyrimidiny pro podání ve formě jediné účinné látky farmaceuticky přijatelného prostředku, který může být vyroben pomocí obvyklých postupů, známých v oboru, například tak, že se účinná látka naváže na farmaceuticky přijatelný, terapeuticky inertní organický a/nebo anorganický nosič či excipient, nebo se s ním smíchá.
Další možností je použití zmíněného polysubstituovaného pyrimidinů jako druhé či další aktivní složky, mající synergický účinek s jinými účinnými látkami ve známých léčivech či podávání zmíněného polysubstituovaného pyrimidinů společně s takovými léčivy.
Zmíněné polysubstituované pyrimidiny podle tohoto vynálezu lze rovněž používat ve formě prekurzoru (proléčiva) nebo v jiné vhodně upravené formě, která uvolňuje aktivní látku in vivo.
Zde předkládané polysubstituované pyrimidiny se od dříve zveřejněné skupiny polysubstituovaných pyrimidinů (Jansa, P. WO 2012116666 2012, AI; US 8883798), působících jako duální inhibitory PGE2 a NO, odlišují substitucí kyslíku v poloze 4 C4-fenylového jádra. Tato strukturní změna se fúnkčně projevuje výrazně zvýšenou (a značně selektivní) inhibicí PGE2. Kromě toho vykazují také nejednoznačnou a překvapivě nízkou míru inhibice NO. Nyní uváděné sloučeniny proto nelze označit za duálně působící.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 znázorňuje průměrné hodnoty (s vyznačením 95% mezí spolehlivosti) inhibice biosyntézy PGE2 a produkce oxidu dusnatého sloučeninami podle tohoto vynálezu, uvedenými v příkladech.
-3CZ 308052 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Seznam použitých zkratek
DMSO NMR HRMS EtOAc LPS
LDH kit dimethylsulf oxid jaderná magnetická rezonance hmotnostní spektrometrie ve vysokém rozlišení ethylacetát lipopolysacharid sada pro stanovení aktivity laktát dehydrogenázy
Vynález bude dále ozřejměn příklady provedení, které ho však žádným způsobem nelimitují.
Tabulka 1: Přehled sloučenin připravených v následujících příkladech
Příklad |
látka |
Struktura |
Systematický název |
1 |
la |
A A |
S-butyM-iA-ethoxyfenyips-fenylpyrimidin-Z-amtn |
2 |
|
9 |
5-butvl4-(4dSGpropoxyfenyl)-6-fenylpyrimidin-2’
-amin |
|
|
'u Λ
w f A i
A..A0A, |
|
3 |
1c |
9
T9 ^0 |
5-^υΐγΧ4ΧεηνΧ6-(3.4,5ΧΓίΓΓ:ΘϊΗα.χνίΘπνΠργ{ΊΓηϊόίη'ζ-
-amm |
4 |
Id |
X
;l |
4-(44beniyloxy)fenyi)-6-fenylpyrimidtn-2-amir> |
5 |
le |
Q
...............rrp ..... |
4'{4-(benzyloxy)fe8yΠ-S-butyl·6“fenylpyπmidin*2-
-armn |
-4CZ 308052 B6 if is ih
ÍSSfi^ipVSisWiďÍn-Ž-SCTliíl
-:ř-amsn
Xi ΐ 4^4-íí4‘‘C^:ÍCTftenJYÍ}í^}fert¥ÍMi'feS¥ÍB^fÍsv:>din'K i-amSn ‘CT :Ht
ÍB i In
4-(4-4 b®’í¥4ci«yJ'2i3'<áifiuorf®nyPs-S-fSíí¥ÍP'ř‘ris^clšn
S-Í4-(fasanz.v<ís3Uíy)-XJ:3'-di'f!sisí*’řHes^>· S^usyl· ři ienyip,' t 'J r > Λ!'1
5·ίιι4¥Η4-^4Ι4<ΐ:ΐ5Γ&?πτ$45πχ^ί·,4.5·4ϊΜ4!λ>·ΧΙ·4ίΓ1>4,··
-5CZ 308052 B6
15 |
io |
|
5”bijt¥ÍA44<lí31htórbieriiyIÍpxyJ-3>“*^l,T)el^yifer,Vfl’'
EMenylpyriiishSin-l-amirs |
5 |
ža |
'•i
x::·- |
lAdbeftzyloxyJfenyh’SVbty!-®?.?··
-methoxyfeny! ipyt imid ín-2-arnin |
17 |
2b |
V
A |
-methoxyfeAipyoraitiin-l-amiB |
18 |
2ε |
|
4-{d-fhenzyioxv)fenyi}-5-biity: 6·(3
1 órfeny I Jpy ε i ns id! n- 2-am in |
3$· |
24 |
N-V''-·'“'·-
......1; Λ
' JS' Aj'· '^i'· |
4-(44benzyipxy)fenyi)-5-butyI-6“(4·-chiórfenyíjpyrínátfín-ž^amiř! |
Příklad 1
5-butyl-4-(4-ethoxyfenyl)-6-fenylpyriinidin-2-ainin (1 a)
Směs voda - dioxan 1:4 byla probublávána argonem po dobu 5 minut. Výchozí látka 5-butyl-4— chlor-6-fenylpyrimidin-2-amin (100 mg, 0,38 mmol, 1 ekvivalent, připravena dle Jansa, P. WO2012116666 2012, AI) byla smíchána s 4-ethoxyfenylboronovou kyselinou (88 mg, 0,53 mmol, 1,4 ekvivalentu), Pd[P(Ph)s]4 (11 mg, 9,50 mmol, 0,025 ekvivalentu) a CS2CO3 (310 mg, 0,95 mmol, 2,5 ekvivalentu) a reakční směs byla míchána při 110 °C po dobu 16 hodin. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku a odparek byl dvakrát kodestilován s ethanolem a následně purifikován sloupcovou chromatografií na S1O2 (eluční směs cyklohexan - EtOAc, eluční gradient 0 až 60 %). Produkt la byl získán jako bílá, amorfní látka (83 mg, výtěžek 63 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,50 - 7,42 (m, 7H, ArH); 7,03 - 6,98 (m, 2H, ArH); 6,47 (s, 2H, NH2); 4,08 (q, J = 7,0 Hz, 2H, O-CH2-CH3); 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 3H, O-CH2-CH3); 1,02 0,92 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,90 - 0,79 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,47 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,04; 167,60; 161,48; 158,97; 140,25; 132,30; 130,20; 128,65; 128,42; 118,57; 114,23; 63,53; 32,18; 27,02; 22,02; 15,11; 13,63.
HRMS (ESI) m/z [M+H]+ vypočteno: C22H26N3O 348,2070; nalezeno: 348,2071.
Příklad 2
5-butyl-4-(4-isopropoxyfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1b)
-6CZ 308052 B6
Látka 1b byla připravena dle postupu uvedeného v Příkladu 1 z 5-bulyl—4-chlor-6fenylpyrimidin-2-aminu (100 mg, 0,38 mmol, 1 ekvivalent) a 4-isopropoxyfenylboronové kyseliny (95 mg, 0,53 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (114 mg, výtěžek 83 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,50 - 7,40 (m, 7H, ArH); 7,02 - 6,96 (m, 2H, ArH); 6,46 (s, 2H, NH2); 4,69 (p, J = 6,0 Hz, 1H, OCH-(CH3)2); 1,30 (d, J = 6,0 Hz, 6H, OCH-(CH3)2); 1,03 0,92 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,90 - 0,80 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,47 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,02; 167,61; 161,48; 157,91; 140,26; 132,17; 130,23; 128,64; 128,42; 118,57; 115,41; 69,66; 32,18; 27,00; 22,26; 22,02; 13,59. HRMS (ESI) m/z [M+H]+vypočteno: C23II2XN3() 362,2227; nalezeno: 362,2227.
Příklad 3
5-butyl-4-fenyl-6-(3,4,5-trimethoxyfenyl)pyrimidin-2-amin (1 c)
Látka 1c byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (300 mg, 1,15 mmol, 1 ekvivalent) a 3,4,5-trimethoxyfenylboronové kyseliny (341 mg, 1,61 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (336 mg, výtěžek 74 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,51 - 7,39 (m, 5H, ArH); 6,77 (s, 2H, ArH); 6,51 (s, 2H, NH2); 3,80 (s, 6H, m-OCH3); 3,71 (s, 3H, p-OCH3); 2,49 - 2,45 (m, 2H, HetAr-CH2-CH2); 1,08 - 0,97 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,94 - 0,83 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,49 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3); 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,10; 167,85; 161,41; 152,94; 140,16; 137,89; 135,60; 128,69; 128,58; 128,43; 118,64; 106,19; 60,63; 56,47; 32,37; 27,19; 22,17; 13,62. HRMS (ESI) m/z [M+H]+ vypočteno: C23H28N3O3 394,2125; nalezeno: 394,2126.
Příklad 4
4-(4-(benzyloxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (Id)
Látka Id byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (100 mg, 0,49 mmol, 1 ekvivalent) a 4-benzyloxyfenylboronové kyseliny (157 mg, 0,69 mmol,
1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (97 mg, výtěžek 56 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 8,25 - 8,18 (m, 4H, ArH); 7,66 (s, 1H, IIclArH); 7,55 -7,47 (m, 5H, ArH); 7,45 - 7,33 (m, 3H, ArH); 7,18 - 7,13 (m, 2H, ArH); 6,67 (s, 2H, NH2); 5,21 (s, 2H, O-CH2-Ar). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 165,00; 164,82; 164,37; 160,78; 137,94; 137,30; 130,78; 130,29; 129,02; 128,93; 128,39; 128,25; 127,39; 115,24; 101,54; 69,82. HRMS (El) m/z vypočteno: C23HigN3O 353.1528; nalezeno: 353,1526.
Příklad 5
4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-fenylpyrimidin-2-amin (le)
Látka le byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (300 mg, 1,15 mmol, 1 ekvivalent) a 4-benzyloxyfenylboronové kyseliny (367 mg, 1,61 mmol,
1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (97 mg, výtěžek 56 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,51 - 7,31 (m, 12H, ArH); 7,13 - 7,07 (m, 2H, ArH); 6,47 (s, 2H, NH2); 5,17 (s, 2H, O-CH2-Ar); 1,02 - 0,92 (m, 2H, CH2-CH2-CH2), 0,90 - 0,78 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,47 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,06; 167,54; 161,48; 158,78; 140,24; 137,40; 132,67; 130,20; 128,90; 128,64; 128,42; 128,32; 128,21; 118,59; 114,71; 69,71; 32,20; 27,03; 22,03; 13,63. HRMS (ESI) m/z [M+H]+ vypočteno: C27H28N3O 410,2227; nalezeno: 410,2229.
-7 CZ 308052 B6
Příklad 6
5-butyl-4-(4-(naftjřaIen-l-yImethoxy)fenyI)-6-fenylpyrimidin-2-amin (If)
Látka If byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,76 mmol, 1 ekvivalent) a 4-(naftalen-l-ylmethoxy)fenylboronové kyseliny (295 mg, 1,06 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (125 mg, výtěžek 36 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 - 8,23 (m, 1H, ArH); 7,92 - 7,87 (m, 1H, ArH); 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 2H, ArH); 7,58 - 7,40 (m, 11H, ArH); 7,10 (dd, J = Ί,Ί, 1,0 Hz, 1H, ArH); 6,53 (s, 2H, N%); 5,41 (s, 2H, O-CH2-Naft); 1,03 - 0,93 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,89 - 0,79 (m, 2H, CH2CH2-CH3); 0,45 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-í/6) δ 168,12; 167,79; 161,49; 154,08; 140,08; 139,61; 137,65; 134,54; 128,89; 128,72; 128,63; 128,46; 127,98; 127,48; 126,95; 126,60; 125,89; 125,52; 121,99; 120,68; 118,66; 106,41; 69,66; 32,25; 26,92; 22,02; 13,55. HRMS (ESI) [M+H]+ m/z vypočteno: C3iH3oN30 460,2383; nalezeno: 460,2383.
Příklad 7
4- (4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 g)
Látka Ig byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,98 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenylboronové kyseliny (354 mg, 1,37 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (165 mg, výtěžek 44 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 8,30 - 8,15 (m, 2H, ArH); 7,85 (t, J = 2,7, 1,6 Hz, 1H, ArH); 7,81 (d, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H, ArH); 7,71 (s, 1H, Hel ArH); 7,56 - 7,50 (m, 3H, ArH); Ί,Μ - 7,40 (m, 3H, ArH); 7,16 (dd, J = 8,1, 2,6, 0,9 Hz, 1H, ArH); 7,01 - 6,94 (m, 2H, ArH); 6,75 (s, 2H, NH2); 5,13 (s, 2H„ CH2); 3,77 (s, 3H, CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 165,34; 165,05; 164,41; 159,21; 139,29; 137,79; 130,90; 130,12; 129,32; 129,05; 127,47; 119,90; 117,31; 114,30; 113,74; 102,41; 69,64; 55,57. HRMS (El) m/z vypočteno: C24H22ON3 384,17065; nalezeno: 384,17077.
Příklad 8
5- butyl-4-(4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenyI)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 h)
Látka Ih byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,76 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((4-methoxybenzyl)oxy)fenylboronové kyseliny (274 mg, 1,06 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (261 mg, výtěžek 78 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,50 - 7,38 (m, 9H, ArH); 7,11 - 7,06 (m, 2H, ArH); 6,98 6,94 (m, 2H, ArH); 6ΑΊ (s, 2H, NH2); 5,08 (s, 2H, 0-CH2-Ar); 3,77 (s, 3H, OCW3); 1,02 - 0,91 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,90 - 0,79 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,47 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2CH3). 13CNMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,05; 167,55; 161,46; 159,48; 158,84; 140,24; 132,54; 130,17; 130,05; 129,23; 128,64; 128,42; 118,58; 114,73; 114,28; 69,50; 55,57; 32,19; 27,03; 22,03; 13,63. HRMS (El) m/z vypočteno: CH2sH29N3O2 439,2260; nalezeno: 439,2266.
Příklad 9
4-(4-((4-chlorbenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (li)
-8CZ 308052 B6
Látka li byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,98 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((4-chlorbenzyl)oxy) fenylboronové kyseliny (360 mg, 1,37 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (123 mg, výtěžek 32 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-íL) δ 8,28 - 8,04 (m, 4H, ArH); 7,66 (s, 1H, IIclArH); 7,58 -7,37 (m, 7H, ArH); 7,15 (d, J = 9,0 Hz, 2H, ArH); 6,67 (s, 2H, N%); 5,21 (s, 2H, CH2). II * 13C NMR (100 MHz, DMSO-í/6) δ 165,02; 164,78; 164,37; 160,58; 137,93; 136,38; 130,78; 130,06; 129,03; 128,93; 127,39; 125,80; 124,63; 115,26; 101,56; 68,96. HRMS (El) m/z vypočteno: C23H19ON3CI 388,12112; nalezeno: 388,12121.
Příklad 10
5-butyl-4-(4-((4-chlorbenzyl)oxy)fenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 j)
Látka Ij byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,76 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((4-chlorbenzyl)oxy) fenylboronové kyseliny (278 mg, 1,06 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (241 mg, výtěžek 71 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-íL) δ 7,53 - 7,41 (m, 11H, ArH); 7,12 - 7,07 (m, 2H, ArH); 6,47 (s, 2H, N%); 5,18 (s, 2H, O-CH2-Ar); 1,01-0,91 (m, 2H, CII2-CH2-CII2); 0,89 - 0,78 (m, 2H, CH2-C%-CH3; 0,46 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-íL) δ 168,06; 167,51; 161,47; 158,55; 140,22; 136,47; 132,89; 132,80; 130,21; 130,03; 128,90; 128,64; 128,43; 118,59; 114,77; 68,85; 32,18; 27,01; 22,03; 13,61. HRMS (El) m/z vypočteno: CH27H26N3OC1 443,1764; nalezeno: 443,1768.
Příklad 11
4-(4-(benzyloxy)-2-methylfenyl)-5-butyl-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 k)
Látka Ik byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (100 mg, 0,38 mmol, 1 ekvivalent) a 4-(4-(benzyloxy)-2-methylfenylboronové kyseliny (129 mg, 0,53 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (137 mg, výtěžek 85 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,50 - 7,31 (m, 10H, ArH); 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H, ArH); 6,97 (d, J = 2,5 Hz, 1H, ArH); 6,90 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H, ArH); 6,47 (s, 2H, N%); 5,14 (s, 2H, O-CH2-Ar); 2,13 (s, 3H, CH3-Ar); 1,00 - 0,89 (m, 2H, CIL-CH2-CII2); 0,86 - 0,76 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,44 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,51; 167,68; 161,58; 158,25; 140,08; 137,55; 136,68; 132,29; 129,70; 128,87; 128,70; 128,62; 128,45; 128,25; 128,13; 119,42; 116,57; 112,06; 69,57; 32,04; 27,01; 22,02; 19,96; 13,59. HRMS (El) m/z vypočteno: C^H^NsO 423,2311; nalezeno: 423,2314.
Příklad 12
4-(4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (11)
Látka 11 byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (21 mg, 0,1 mmol, 1 ekvivalent) a 4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenylboronové kyseliny (36 mg, 0,14 mmol,
1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (38 mg, výtěžek 97 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 8,13 - 8,08 (m, 2H, ArH); 7,79 (td, J = 8,7, 2,3 Hz, 1H, ArH);
7,56 - 7,49 (m, 5H, ArH); 7,47 - 7,35 (m, 4H, ArH+HetArfl); 7,34 - 7,27 (m, 1H, ArH; 6,84 (s, 2H, N%); 5,32 (s, 2H, O-CH2-Ar). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 165,26; 164,36; 161,10;
137,55; 136,38; 131,05; 129,21; 129,05; 128,78; 128,48; 127,31; 124,82; 110,91; 105,53; 105,45; 71,29. HRMS (El) m/z vypočteno: C23Hi7N3OF2 389,1340; nalezeno: 389,1345.
-9CZ 308052 B6
Příklad 13
4- (4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenyl)-5-butyI-6-fenylpyriinidin-2-amin (lni)
Látka lni byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2aminu (100 mg, 0,38 mmol, 1 ekvivalent) a 4-(benzyloxy)-2,3-difluorfenylboronové kyseliny (140 mg, 0,53 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (42 mg, výtěžek 25 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,52 - 7,34 (m, 10H, ArH); 7,24 - 7,20 (m, 2H, ArH); 6,64 (s, 2H, NH2); 5,30 (s, 2H, O-CH2-Ar); 1,01-0,91 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,90 - 0,79 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,45 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2-CH2-CH3). II * 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,10; 162,16; 162,13; 161,69; 139,68; 136,48; 129,01; 128,90; 128,70; 128,57; 128,53; 128,41; 124,97; 124,92; 121,59; 121,45; 119,90; 111,12; 71,27; 32,12; 27,00; 21,92; 13,54. HRMS (El) m/z vypočteno: C2?H25N3OF2 445,1966; nalezeno: 445,1964.
Příklad 14
5- butyl-4-(4-((2-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethylfenyl)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 n)
Látka Im byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2aminu (200 mg, 0,76 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((2-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethylfenylboronové kyseliny (308 mg, 1,06 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (349 mg, výtěžek 97 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,69 - 7,65 (m, 1H, ArH); 7,56 - 7,51 (m, 1H, ArH); 7,50 7,41 (m, 7H, ArH); 7,19 (s, 2H, ArH); 6,48 (s, 2H, NH2); 4,96 (s, 2H, O-CH2-Ar); 2,27 (s, 6H, Ar-CH3); 1,05 - 0,94 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,94 - 0,81 (m, 2H, CH2-CH2-CH3), 0,50 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,04; 167,66; 161,44; 155,50; 140,21; 135,85; 135,28; 133,12; 131,06; 130,69; 130,45; 129,80; 129,27; 128,66; 128,62; 128,44; 127,88; 118,57; 71,16; 32,23; 26,96; 22,02; 16,57; 13,56. HRMS (ESI) [M+H]+ m/z vypočteno: C29H3iN3OC1 472,2150; nalezeno: 472,2150.
Příklad 15
5-butyl-4-(4-((3-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethyIfenyI)-6-fenylpyrimidin-2-amin (1 o)
Látka lo byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 5-butyl-4-chlor-6-fenylpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,76 mmol, 1 ekvivalent) a 4-((3-chlorbenzyl)oxy)-3,5-dimethyl-fenylboronové kyseliny (308 mg, 1,06 mmol, 1,4 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (336 mg, výtěžek 94 %).
II NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,52 - 7,41 (m, 9H, ArH); 7,20 (s, 2H, ArH); 6,48 (s, 2H, NH2); 4,89 (s, 2H, O-CH2-Ar); 2,28 (s, 6H, Ar-CH3); 1,06 - 0,95 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,94 - 0,82 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,50 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 168,05; 167,65; 161,44; 155,50; 140,48; 140,21; 135,82; 133,48; 130,81; 130,63; 129,29; 128,67; 128,61; 128,44; 128,30; 128,02; 126,93; 118,56; 72,88; 32,22; 26.96, 22;01, 16,63; 13,57. HRMS (ESI) [M+H]+ m/z vypočteno: C29H3iN3OC1 472,2150; nalezeno: 472,2150.
Příklad 16
4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(3-methoxyfenyI)pyrimidin-2-amin (2a)
Látka 2a byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6chlorpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,54 mmol, 1 ekvivalent) a 3-methoxyfenylboronové kyseliny (148 mg, 0,97 mmol, 1,8 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (132 mg, výtěžek 56 %).
- 10CZ 308052 B6
II NMR (400 MHz, DMSO-í/6) δ 7,53 - 7,30 (m, 8H, ArH); 7,14 - 7,07 (m, 2H, ArH); 7,06 -
6.96 (m, 3H, ArH); 6,47 (s, 2H, NH2); 5,17 (s, 2H, (W2); 3,79 (s, 3H, CH3); 1,07 - 0,93 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,92 - 0,79 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,49 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13CNMR (100 MHz, DMSO-í/6) δ 167,84; 167,55; 161,44; 159,30; 158,77; 141,59; 137,40; 132,67; 130,19; 129,59; 128,90; 128,32; 128,21; 120,93; 118,58; 114,71; 69,71; 55,65; 32,24; 27,08; 22,07; 13,66. HRMS (El) m/z vypočteno: C2sH3o02N3 440,23325; nalezeno: 440,23321.
Příklad 17
4-(4-(benzyloxy)fenyI)-5-butyl-6-(4-methoxyfenyl)pyriinidin-2-amin (2b)
Látka 2b byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6chlorpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,54 mmol, 1 ekvivalent) a 4-methoxyfenylboronové kyseliny (148 mg, 0,97 mmol, 1,8 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (161 mg, výtěžek 68 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,52 - 7,30 (m, 9H, ArH); 7,14 - 7,07 (m, 2H, ArH); 7,06 -
6.97 (m, 2H, ArH); 6,41 (s, 2H, N%); 5,17 (s, 2H, CH2); 3,81 (s, 3H, CH3); 2,60 - 2,53 (m, 2H, HetAr-CH2-CH2); 1,02 - 0,92 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,91 - 0,80 (m, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,49 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ώ) δ 167,56; 161,47; 159,66; 158,73; 137,41; 132,83; 130,22; 128,89; 128,32; 128,21; 118,57; 114,69; 113,77; 69,70; 55,61; 32,13; 27,13; 22,02; 13,70. HRMS (El) m/z vypočteno: C2sH3o02N3 440,23325; nalezeno: 440,23322.
Příklad 18
4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(3-chlorfenyl)pyrimidin-2-amin (2c)
Látka 2c byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6chlorpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,54 mmol, 1 ekvivalent) a 3-chlorfenylboronové kyseliny (152 mg, 0,97 mmol, 1,8 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (145 mg, výtěžek 61 %).
3H NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,59 - 7,28 (m, 8H, ArH); 7,10 (d, J = 8,7 Hz, 2H, ArH); 6,55 (s, 2H, NH2); 5,17 (s, 2H, CH2), 0,97 (d, J = 7.9 Hz, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,87 (q, J = 7,1 Hz, 2H, CH2-CH2-CH3); 0,49 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 167,85; 166,36; 161,51; 158,86; 142,23; 137,38; 133,21; 132,49; 130,45; 130,22; 128,90; 128,65; 128,58; 128,33; 128,22; 127,44; 118,56; 114,74; 69,72; 32,14; 26,96; 21,99; 13,60. HRMS (El) m/z vypočteno: CMLtONA’I 444,18372; nalezeno: 444,18375.
Příklad 19
4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6-(4-chlorfenyl)pyrimidin-2-amin (2d)
Látka 2c byla připravena dle postupu v Příkladu 1 z 4-(4-(benzyloxy)fenyl)-5-butyl-6chlorpyrimidin-2-aminu (200 mg, 0,54 mmol, 1 ekvivalent) a 4-chlorfenylboronové kyseliny (152 mg, 0,97 mmol, 1,8 ekvivalentu) jako bílá, amorfní látka (148 mg, výtěžek 62 %).
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ífc) δ 7,66 - 7,20 (m, 12H, ArH); 7,17 - 7,04 (m, 2H, ArH); 6,53 (s, 2H, N%); 5,17 (s, 2H, CH3); 1,02 - 0,91 (m, 2H, CH2-CH2-CH2); 0,91 - 0,79 (m, 2H, CH2CH2-CH3); 0,49 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-ífc) δ 167,78; 166,74; 161,50; 158,83; 139,05; 137,39; 133,44; 132,54; 130,66; 130,21; 128,90; 128,54; 128,33; 128,22; 118,57; 114;73; 69,72; 32,16; 26.99; 22,00; 13,64. HRMS (El) m/z vypočteno: C27H27ON3C1 444,18372; nalezeno: 444,18367.
- 11 CZ 308052 B6
Výsledky biologických testů
Produkce PGE2 byla stanovena in vitro, v kulturách peritoneálních buněk myší. Buňky (2 x 106/ml) byly kultivovány v přítomnosti stimulátoru, tj. bakteriálního lipopolysacharidu (LPS, 10 ng/ml), se kterým byly současně aplikovány pyrimidinové deriváty, a to v koncentraci 50 pmol.l-1. Hladiny PGE2 v supematantech byly stanoveny 5 hodin po stimulaci. Pro tyto účely byl použit komerční kit (R&D Systems). Vliv látek na produkci PGE2 byl vyhodnocen v procentech vzhledem ke kontrolním hodnotám, tj. hodnotám dosaženým působením samotného LPS (100 %). Čísla v tabulce tedy udávají zbytkovou aktivitu. Menší číselná hodnota znamená vyšší stupeň inhibičního působení látek.
Výpočet koncentrace látek snižující produkci PGE2 o 50 % (tzv. IC50) byl proveden analýzou závislosti účinku na koncentraci látky. Pro tyto účely byly látky podány v osmi koncentracích, a to v rozmezí 0,0004 pmol.L1 až 25 pmol.l-1.
Životnost buněk byla provedena pomocí standartního křtu LDH (Sigma). Hodnoty životnosti buněk bez přidání testované sloučeniny (kontrolní hodnoty) byly pro účely srovnání považovány za 100%. Vliv látek na životnost buněk byl pak vyhodnocen v procentech kontrolní hodnoty, tedy hodnoty zjištěné u buněk bez současné aplikace LPS. K poklesu životnosti došlo pouze u látky 16 (2a), a to na 43 % kontrolní hodnoty. Ostatní látky nebyly cytotoxické, viz Tabulka 1.
Tabulka 1: Účinek testovaných látek v 50 pmol.L1 koncentraci na biosyntézu PGE2 a životnost buněk
- 12CZ 308052 B6
Ik .0,8 (η 4} nestanoven*
102.6*3.7 {n ==-4}
Η (η-
13 |
I01 |
0,03*0.2 |
(0===4) |
0,006 (0,003 -G,011) |
103,7*0,4 (»=== 8) |
14 |
ln |
7 Iři 9 |
(n~4) |
1 tíestánovíítio |
103.6*0,3 (n===8) |
|
|
|
|
|
|
15 |
1 |
6,51-0,4 |
(n===4) |
§ nestanoveno |
102,8*0,4 |
16 |
2a |
ít ’.0*2.0 |
A; - 3 > V* |
1 nestanoveno |
43,1*8,4 (ň=4) |
17 |
2h 1 |
10t5±M |
|
1 nestanoveno |
100,3*1,2 tn -41 |
18 |
12®, 1 |
12,6*1,7 |
(n===2) |
s nestanoveno |
101.31-.2,0 (n===4 |
19 |
2d 1 |
41*0,7 |
(n=2) |
§ nestanoveno |
96.7*2.2 (sv==4) |
Produkce oxidu dusnatého (NO) byla rovněž stanovena v podmínkách in vitro, v kulturách peritoneálních buněk myší. Buňky (2 x 101 * * * * 6/ml) byly kultivovány v přítomnosti kombinace lipopolysacharidu (LPS, 0,1 ng/ml) a rekombinantního myšího interferonu-γ (IFN-γ, 5 ng/ml), se kterými byly současně aplikovány pyrimidinové deriváty, a to v koncentraci 50 pmol.l-1. Koncentrace nitritů v supematantech, která je mírou biosyntézy NO, byla stanovena spektrofotometricky za 24 hodin po stimulaci buněk. Pro tyto účely bylo použito Grisseovo reagens. Vliv látek na produkci NO byl vyhodnocen v procentech vzhledem ke kontrolním hodnotám, tj. hodnotám dosaženým působením samotných stimulátorů (Obr. 1). Menší číselné hodnoty znamenají vyšší stupeň inhibiční aktivity látek.
Předkládané pyrimidinové deriváty vykazují výrazně zvýšenou selektivitu inhibičního zásahu do biosyntézy PGE2, viz Tabulka 1. Účinky pyrimidinových derivátů na tvorbu NO byly (v relevantní koncentraci pyrimidinů, tj. 50 pmol.l-1) zdaleka méně významné. Největší rozdíl byl zjištěn u látky Im (13), která inhibuje produkci PGE2 absolutně, zatímco produkce NO je zanedbatelně snížena, jen na 84 % kontrolních hodnot.
Průmyslová využitelnost
Vzhledem k tomu, že uvažované polysubstituované pyrimidinové deriváty jsou výraznými netoxickými inhibitory produkce PGE2, lze je považovat za vhodné látky pro vývoj nových léčiv, využitelných při léčbě zánětlivých a nádorových onemocnění.