PL230633B1

PL230633B1 - Kompozycja farmaceutyczna zawierajaca nystatyne oraz -escyne lub ich dopuszczalne farmaceutycznie sole oraz jej zastosowanie

Info

Publication number: PL230633B1
Application number: PL409699A
Authority: PL
Inventors: Roman FRANICZEK; Roman Franiczek; Michał Gleńsk; Michal Glensk; Barbara Krzyżanowska; Barbara Krzyzanowska; Maciej Włodarczyk; Maciej Wlodarczyk
Original assignee: Univ Medyczny Im Piastow Slaskich We Wroclawiu; Uniwersytet Medyczny Im Piastów Slaskich We Wroclawiu
Priority date: 2014-10-03
Filing date: 2014-10-03
Publication date: 2018-11-30
Also published as: PL409699A1

Description

Opis wynalazku

Niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej jako składniki czynne nystatynę oraz β-escynę lub ich dopuszczalne farmaceutycznie sole, wykazujące działanie synergistyczne w leczeniu lub zapobieganiu zakażeniom grzybiczym wywołanym szczepami Candida, zwłaszcza C. glabrata.

Częstość występowania zakażeń wywołanych przez drobnoustroje oporne na antybiotyki istotnie wzrosła w ciągu ostatnich kilku dekad. Rozwiązanie problemu wynikającego z nieskuteczności leczenia konwencjonalnego stanowi obecnie najważniejsze wyzwanie dla naukowców i przemysłu farmaceutycznego. W związku złym, istnieje potrzeba opracowania nowych leków i strategii skutecznych w leczeniu zakażeń szczepami wieloopornymi.

Wśród zakażeń znaczącą liczbę stanowią zakażenia szczepami Candida, w szczególności C. glabrata. Gatunek ten wcześniej uważano za drobnoustrój komensalny, należący do mikroflory obecnej w jamie ustnej, przewodzie pokarmowym i drogach płciowych i nie wywołujący poważnych infekcji u ludzi. Jednakże, okazało się, że w pewnych okolicznościach C. glabrata może być przyczyną różnych schorzeń, począwszy od łagodnych, niepowikłanych grzybic skórnych do zagrażających życiu grzybic układowych. W polskich szpitalach liczba przypadków grzybic wywołanych przez Candida glabrata sięga 14%. Co więcej, szczepy kliniczne Candida glabrata często wykazują wrodzoną jak również nabytą oporność na leki przeciwgrzybicze. Według niektórych autorów zakażenia wywołane C. glabrata mogą być przyczyną większej śmiertelności niż zakażenia wywoływane przez Candida albicans.

W leczeniu zakażeń grzybiczych od wielu lat, tradycyjnie stosowana jest nystatyna, o wzorze jak poniżej. Nystatyna jest środkiem grzybostatycznym oraz grzybobójczym, z grupy antybiotyków polienowych, który działa zarówno na grzyby pleśniowe (np. Aspergillus spp.), jak i na grzyby drożdżopodobne. Stosowana jest miejscowo w leczeniu grzybic jamy ustnej, nosa i gardła. Ponadto, nystatyna wskazana jest w przypadku drożdżyc błon śluzowych (pleśniawki), grzybicach przewodu pokarmowego oraz grzybicach pochwy. Do najczęstszych działań niepożądanych wywołanych przez nystatynę należą zaburzenia żołądkowo-jelitowe (nudności, wymioty) oraz odczyny alergiczne. Niektóre publikacje donoszą także o działaniu nefrotoksycznym nystatyny.

nh₃

W dziedzinie znane są kombinacje nystatyny z innymi lekami lub związkami chemicznymi. Na przykład w zgłoszeniu patentowym P.333282 ujawniono terapię przeciwgrzybiczą prowadzoną za pomocą kombinacji składającej się ze znanych środków przeciwgrzybiczych, obejmujących azole lub polieny, takie jak amfoterycyna B, nystatyna lub ich formy liposomowe, w kombinacji z pochodną pneumokandyny.

Podobnie w zgłoszeniu międzynarodowym WO 2009/136214 A1 przedstawiono korzystny wpływ nystatyny (leku przeciwgrzybiczego) w połączeniu ze statynami (lekami zmniejszającymi stężenie lipidów) na aktywność przeciwgrzybiczą.

W kolejnej publikacji CN 103040852 A ujawniono łączne stosowanie lizyny (aminokwasu) z lekami przeciwgrzybiczymi takimi jak: amfoterycyna B, nystatyna i kaspofungina. Opisano synergizm w działaniu lizyny oraz wymienionych leków przeciwgrzybiczych, sugerując możliwość zmniejszenia dawek leków przeciwgrzybiczych w obecności lizyny.

PL 230 633 Β1

Natomiast w zgłoszeniu patentowym P. 401447 A opisano kompozycję farmaceutyczną zawierającą ksylitol i nystatynę, sposób jej wytwarzania oraz zastosowanie medyczne kombinacji nystatyny i ksylitolu do leczenia grzybic z rodzaju Candida. Ksylitol spełniał w tej kompozycji rolę substancji pomocniczej.

W publikacji IN 01099DE2009 opisano tylko sposób otrzymywania escyny a nie jej właściwości przeciwgrzybicze. Nie wspomniano o synergizmie escyny z innymi związkami czy lekami przeciwgrzybiczymi.

Escyna stanowi mieszaninę saponin triterpenowych, składającą się z dwóch form a- i β o wzorze przedstawionym poniżej [Sirtori CR. Aescin: pharmacokinetics and therapeutic profile. Pharmacol Res 2001; 44:183-193], Escyna otrzymywana jest z nasion kasztanowca zwyczajnego (Aesculus hippocastanum L.). Aglikon stanowi protoescygenina lub baryngtogenol a część cukrową kwas glukuronowy, glukoza, galaktoza i ksyloza. Escyna wykazuje wiele właściwości farmakologicznych, takich jak działanie przeciwzapalne, przeciwbólowe i przeciwgorączkowe. Escyna w formie tabletek i żelu jest obecnie stosowana w Polsce jako środek przeciwzapalny i przeciwobrzękowy w leczeniu żylaków i zaburzeń krążenia żylnego kończyn dolnych. Nie ma natomiast informacji na temat stosowania escyny jako środka przeciwgrzybiczego.

Chociaż synergizm w działaniu nystatyny oraz niektórych substancji wymienionych w powyższych publikacjach jest znany, do tej pory nie zastosowano kombinacji nystatyny z escyną w leczeniu grzybic wywołanych Candida glabrata.

GIcA

I 4

R₃, R„ = Gic, Gal OT Xyl % = O O

α-metylobutyryl izobutyryl

O O i „A^ _OAJ tigloil angeloil

Struktura β-escyny

Nieoczekiwanie stwierdzono, że kombinacja powyższych substancji, znanych z ich specyficznych działań farmakologicznych, jest szczególnie wskazana do leczenia zakażeń przeciwgrzybiczych szczepami Candida, zwłaszcza C. glabrata. Kombinacja według wynalazku zawiera zasadniczo nystatynę oraz β-escynę.

Unikalna kombinacja składników kompozycji farmaceutycznej według niniejszego wynalazku wywiera zaskakujący synergistyczny wpływ przeciwgrzybiczy na zakażenia szczepami Candida, co było niemożliwe do przewidzenia na podstawie dotychczasowego stanu wiedzy o poszczególnych składnikach kombinacji. Zastosowanie kompozycji według wynalazku pozwala na osiągnięcie efektu leczniczego przy zastosowaniu znacznie niższych stężeń nystatyny, co wiąże się również z ograniczeniem efektów ubocznych wywoływanych przez ten lek.

W związku z powyższym, przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, o aktywności przeciwgrzybiczej, zawierająca kombinację składników czynnych z nystatyną, charakteryzująca się tym, że zawiera kombinację nystatyny z β-escyną lub ich dopuszczalnych farmaceutycznie soli.

Kompozycja według wynalazku zawiera korzystnie sól sodową β-escyny.

Kompozycja według wynalazku zawiera korzystnie składniki czynne w mieszaninie z co najmniej jednym dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub zaróbką.

Kompozycja według wynalazku korzystnie jest w postaci do podawania miejscowego lub doustnego.

Kompozycja według wynalazku korzystnie jest w postaci wybranej z grupy zawierającej maść, krem, puder, zasypkę, zawiesinę, tabletkę lub globulkę dopochwową.

PL 230 633 B1

Kompozycja według wynalazku zawiera korzystnie nystatynę w zakresie między 10 a 200 mg na jeden gram maści, kremu, zasypki/pudru, zawiesiny i/lub jedną tabletkę i/lub jedną globulkę dopochwową oraz sól sodową β-escyny w zakresie między 10 a 200 mg na jeden gram maści, k remu, zasypki/pudru, zawiesiny i/lub jedną tabletkę i/lub jedną globulkę dopochwową.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna do stosowania do leczenia lub zapobiegania infekcjom grzybiczym wywołanym szczepami Candida, zwłaszcza C. glabrata.

Farmaceutycznie dopuszczalnymi solami stosowanymi w kompozycji według wynalazku są sole znane i obecnie stosowane w farmacji, jak np. sól sodowa β-escyny, itp.

Kompozycja według wynalazku podawana jest zazwyczaj jako mieszanina z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, w postaci maści, kremu pudru/zasypki, tabletki lub globulki dopochwowej. Przykłady odpowiednich stałych nośników obejmują celulozę mikrokrystaliczną, laktozę, poliwinylopirolidon, skrobię modyfikowaną, wazelinę, eucerynę, żelatynę itp. Tabletki mogą być łatwo formułowane i mogą być wytwarzane tak, że są łatwe do połknięcia; inne stałe postaci leków obejmują maści, kremy, globulki dopochwowe. Postaci leków mogą zawierać odpowiednie substancje wiążące, substancje poślizgowe, czynniki dezintegrujące, środki barwiące, dodatki smakowe, dodatki zapachowe, środki konserwujące oraz czynniki korygujące temperaturę topnienia. Na przykład, do podania doustnego odpowiednie są tabletki, przy czym składniki czynne leku mogą być połączone z doustnym, nietoksycznym, farmaceutycznie dopuszczalnym, obojętnym nośnikiem, takim jak laktoza, żelatyna, agar, skrobia, sacharoza, glukoza, metyloceluloza, fosforan diwapnia, siarczan wapnia, mannitol, sorbitol, celuloza mikrokrystaliczna i podobne. Odpowiednie substancje wiążące obejmują skrobię, żelatynę, naturalne cukry, takie jak glukozę lub laktozę, skrobię kukurydzianą, naturalne i syntetyczne gumy takie jak acacia, tragakanta lub alginian sodu, powidon, karboksymetylocelulozę, glikol polietylenowy, woski i podobne. Substancje poślizgowe stosowane w tych postaciach dawki obejmują stearynian magnezu, kwas stearynowy, stearylowy fumaran sodu, talk i podobne. Substancje dezintegrujące obejmują, bez ograniczeń, skrobię, metylocelulozę, agar, bentonit, gumę ksantanową, kroskarmelozę sodową, sodowy glikolan skrobi i podobne. Jeśli sporządza się kompozycję stałą w postaci tabletek, miesza się składniki czynne z nośnikiem farmaceutycznym, takim jak celuloza mikrokrystaliczna, laktoza, stearynian magnezu, talk, krzemionka koloidalna lub podobne. Można otoczyć tabletki powłoką z sacharozy lub innych odpowiednich substancji albo można poddać je obróbce nadającej czynność przedłużoną lub opóźnioną albo zdolność uwalniania w sposób ciągły ustalonej ilości składnika czynnego.

Dokładna dawka skuteczna dla człowieka będzie zależeć od ostrości stanu chorobowego, ogólnego stanu zdrowia pacjenta, wieku, masy ciała i płci pacjenta, diety, czasu i częstości podawania, kombinacji leku, objawów nadwrażliwości oraz tolerancji/odpowiedzi na terapię. Ilość tę można ustalić w rutynowych doświadczeniach oraz w ramach oceny dokonanej przez klinicystę.

Ogólnie, w przypadku kompozycji farmaceutycznej według wynalazku stosuje się sposoby formulacji leków zawarte w podręczniku “Farmacja stosowana” Wydawnictwo Lekarskie PZWL, 2014; “Technologia kosmetyków” R. Glinka i W. Brud, Oficyna Wydawnicza MA Wydawnictwo Łódź 2003, a także w “Generic drug formulations”, V. Buhler, BASF. Również wiele firm produkujących substancje pomocnicze dla przemysłu farmaceutycznego oferuje gotowe receptury: do produkcji maści, kremów, żeli itp. Zatem, dla specjalisty w dziedzinie pozostaje jasne, że kompozycje farmaceutyczne według niniejszego wynalazku można otrzymać dowolnym, znanym w dziedzinie sposobem.

Przedmiot wynalazku w przykładach wykonania, uwidoczniono na załączonej Figurze, przedstawiającej wyniki badań uzyskanych metodą krążkowo-dyfuzyjną z użyciem soli sodowej a-escyny (aAE-Na), krystalicznej β-escyny ^AE-C), soli sodowej β-escyny ^AE-Na) oraz nystatyny (NYT) dla dwóch wybranych izolatów Candida glabrata.

P r z y k ł a d 1

Różne postacie kompozycji według wynalazku

1. Kompozycja farmaceutyczna w postaci maści:

Maść zawierająca 100.000 j. nystatyny w 1 g. nystatyna sól sodowa escyny euceryna i wazelina biała w równych ilościach do

100.000 j. (tj. około 20 mg*) mg

1000 mg

PL 230 633 B1

Wykonanie:

Należy odważyć wazelinę białą i eucerynę. Następnie, obliczoną ilość nystatyny oraz soli sodowej escyny. Nystatynę oraz escynę miesza się i uciera z niewielką ilością wazeliny, dodając porcjami całą jej ilość. Następnie, dodaje się eucerynę i wszystko dokładnie homogenizuje do uzyskania jednolitej konsystencji.

2. Kompozycja farmaceutyczna w postaci kremu

Krem zawierający 100.000 j. nystatyny w 1 g. nystatyna sól sodowa escyny alkohol cetostearylowy makrogol nipagina parafina ciekła glikol propylenowy woda w ilości do Wykonanie:

100.000 j. (tj. około 20 mg*) 40 mg 75 mg 25 mg 1 mg 115 mg 85 mg 1000 mg

Należy wymieszać odważone ilości alkoholu cetostearylowego, makrogolu, parafiny ciekłej oraz nipaginy i ogrzać do około 80°C. Do tak przygotowanej mieszaniny dodać stale mieszając sól sodową escyny rozpuszczoną uprzednio w wodzie i ogrzaną do około 80°C. (część A).

Rozpuścić nystatynę w ogrzanym glikolu propylenowym, po czym dodawać porcjami stale mieszając do wcześniej przygotowanej mieszaniny (części A). Homogenizować do uzyskania jednolitej konsystencji.

3. Kompozycja farmaceutyczna w postaci pudru:

Puder/zasypka zawierający(ca) 100.000 j. nystatyny w 1 g

nystatyna sól sodowa escyny tlenek cynku talk w ilości do Wykonanie:

100.000 j. (tj. około 20 mg*) 40 mg 50 mg 100 mg

Sproszkowane substancje (uprzednio przesiane przez sito nie większe niż 0.5 mm) należy dokładnie wymieszać dodając je w kolejności od najmniejszej dawki, aż do uzyskania jednolitej konsystencji.

4. Kompozycja farmaceutyczna w postaci zawiesiny:

Zawiesina zawierająca 100.000 j. nystatyny w 1 g. nystatyna sól sodowa escyny glicerol w ilości do Wykonanie:

100.000 j. (tj. około 20 mg*) 40 mg 1000 mg

Odważoną ilość nystatyny i soli sodowej escyny rozdrabniamy i ucieramy z niewielką ilością glicerolu, a następnie stopniowo wlewamy resztę odważonego glicerolu i dokładnie mieszamy (homogenizujemy).

5. Kompozycja farmaceutyczna w postaci tabletki:

Tabletki zawierające 500.000 j. nystatyny w 1 tabletce.

nystatyna sól sodowa escyny celuloza mikrokrystaliczna polivinylopirolidon stearynian magnezu

500.000 j, (tj. około 100 mg*) 40 mg 147 mg 9 mg 4 mg

Należy wymieszać wszystkie składniki, przesiać przez sito 0.35 pm i poddać tabletkowaniu. 6. Kompozycja farmaceutyczna w postaci globulki:

Globulki dopochwowe zawierające 100.000 j. nystatyny w 1 globulce.

nystatyna sól sodowa escyny podłoże glicerolowo-żelatynowe w ilości do

100.000 j. (tj. około 20 mg*) 40 mg 3000 mg

PL 230 633 B1

Wykonanie:

Odważoną ilość nystatyny i soli sodowej escyny rozdrabniamy i homogenizujemy na ciepło ze stopionym podłożem, po czym wylewamy do form w kształcie globulek.

(*) nystatyny charakteryzują się różną aktywnością w przeliczeniu na 1 mg substancji

P r z y k ł a d 2

Synergia działania przeciwgrzybiczego składników aktywnych kompozycji według wynalazku

Materiały i metody

Szczepy

Podczas trzyletniego okresu badań (2011 -2013 r.) zgromadzono w sumie 24 izolaty kliniczne C. glabrata pochodzące od pacjentów leczonych w Uniwersyteckim Szpitalu Klinicznym we Wrocławiu, Polska. Otrzymane izolaty uzyskano z próbek różnego rodzaju, takich jak krew, mocz, kał, wymaz z gardła, plwocina, próbka pochodząca z cewnika, izolaty z oskrzela, wymazy z pochwy. Identyczność szczepów potwierdzano stosując metodę charakteryzowania szczepów w oparciu o kolor kolonii za pomocą CHROMagar Candida (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, UK) oraz handlowo dostępnego testu paskowego ID 32C (bioMerieu Marcy- 1 'Etoile, Francja), zgodnie z zaleceniami producenta.

Odczynniki

Sól sodową α-escyny (aAE-Na) zakupiono z Roth (Karlsruhe, Niemcy), β-escyna krystaliczną ^AE-C) otrzymano z Noblius Ent (Warszawa, Polska), natomiast sól sodową β-escyny ^AE-Na) z Labor (Wrocław, Polska). Nystatyna (NYT) (151,26 mg = 10⁶ jednostek) zakupiona została z Cosmetics Pharma (Warszawa, Polska). Odczynniki chemiczne przygotowywano w postaci wyjściowego roztworu 10 mg/ml w sulfotlenku dimetylu (DMSO) (Sigma-Aldrich), a następnie dzielono na porcje, które przechowywano do dalszego użycia w -80°C.

Badanie wrażliwości na środki przeciwgrzybicze

Wrażliwość na działanie przeciwgrzybicze soli sodowej α-escyny (aAE-Na), krystalicznej β-escyny ^AE-C), soli sodowej β-escyny ^AE-Na) oraz nystatyny (NYT) oznaczano stosując metodę krążkowo-dyfuzyjną (DD) oraz metodę mikrorozcieńczeń w bulionie (BMD).

Metoda krążkowo-dyfuzyjną (DD)

Badanie wrażliwości DD in vitro wykonano zgodnie z dokumentem M44-A Instytutu Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CL SI) M44-A [Instytut Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych. Method for antifungal disk diffusion susceptibility testing of yeasts. Approved guideline, M44A. Wayne, PA: CLSI; 2004]. Jako podłoże podstawowe zastosowano agar Muellera-Hintona (Becton Dickinson, Sparks, USA), uzupełniony 2% dekstrozą oraz 0.5 mg/l błękitem metylenowym. Drożdżowe inokulum doprowadzono do poziomu gęstości optycznej 0.5 według standardu McFarlanda (w przybliżeniu 1-5x10⁶ jtk/ml) w sterylnym roztworze soli fizjologicznej (0.85%) i rozprowadzono na płytkach agarowych za pomocą sterylnych patyczków o bawełnianym końcu. Następnie, standardowe krążki z bibuły (średnica 6 mm; Becton Dickinson, Sparks, USA) zawierające badaną escynę w stężeniu 100 pg/krążek, umieszczano aseptycznie na powierzchni agaru. Jako kontrolę pozytywną i negatywną stosowano odpowiednio NYT (100 jednostek/krążek) oraz wolny rozpuszczalnik (sterylny roztwór soli fizjologicznej). W celu kontroli jakości i oceny powtarzalności badania, do każdego testu wrażliwości włączono szczep referencyjny C. glabrata ATCC 90030.

Wyniki określano na podstawie średnicy strefy zahamowania wzrostu po inkubacji w 35°C przez 24 h. Wszystkie analizy wykonano w trzech powtórzeniach. Wyniki stanowią średnią z trzech niezależnych eksperymentów.

Oznaczanie minimalnego stężenia hamującego (MIC)

Wartości MIC a- i β-escyny dla każdego badanego szczepu C. glabrata określano metodą dwukrotnego rozcieńczenia w bulionie (BMD), zgodnie z wytycznymi M27-A3, zalecanymi przez Instytut Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych [Instytut Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts: Approved guideline, M27-A3. Wayne, PA: CLSI; 2008]. Wartości MIC dla NYT określano bez i w obecności ustalonego najniższego podprogowego stężenia hamującego (0,5 xMIC) dla βAE-C lub βAE-Na. Szczep C. glabrata ATCC 90030 wykorzystano w eksperymentach jako szczep kontroli jakości. Badanie przeprowadzono na sterylnej, płaskodennej 96-studzienkowej płytce titracyjnej, stosując in okulum o stężeniu 0.5 x 10³ do 2.5 x 10³ jtk/ml oraz podłoże RPMI 1640 buforowane do pH 7.0 przy użyciu

PL 230 633 B1

0.165 M kwasu morfolinopropanosulfonowego (Sigma-Aldrich). Końcowe stężenie czynników przeciwgrzybiczych mieściło się w zakresie 512 do 0.125 pg/ml. Najniższe stężenie hamujące (MIC) określano wizualnie po upływie 24 h okresu inkubacji w 35°C i zostało ono zdefiniowane jako najniższe stężenie leku, które powoduje zahamowanie wzrostu komórek drożdżowych, na podstawie braku zm ętnienia. Do każdego eksperymentu włączono kontrole czystości nie zawierające leku oraz kontrole wzrostu. Wszystkie eksperymenty wykonano w trzech powtórzeniach.

Celem badań było określenie wrażliwości in vitro klinicznych izolatów Candida glabrata (n=24) oraz szczepu referencyjnego C. glabrata ATCC 90030 na działanie trzech preparatów escynowych: soli sodowej a-escyny, β-escyny krystalicznej i soli sodowej β-escyny. W badaniach zastosowano dwie metody: metodę krążkowo-dyfuzyjną (disk diffusion - DD) oraz metodę mikrorozcieńczeń w bulionie (broth microdilution - BMD). Zbadano ponadto wpływ podprogowych stężeń (0.5 x MlC) preparatów β-escynowych na wartość MIC dla nystatyny. Wyniki badań określonych metodą DD były skorelowane z wynikami uzyskanymi metodą BMD. Wzrostowi wartości MIC towarzyszył spadek średnicy stref zahamowania wzrostu i odwrotnie.

β-escyna krystaliczna oraz sól sodowa β-escyny skutecznie hamowały wzrost wszystkich badanych szczepów. Wartości minimalnych stężeń hamujących (MIC) zawierały się w przedziale 8-32 pg/ml dla β-escyny krystalicznej, natomiast wartości MIC oznaczone dla soli sodowej β-escyny były niższe i wynosiły od 4 do 16 pg/ml.

Sól sodowa a-escyny, w przeciwieństwie do preparatów β-escynowych, była całkowicie pozbawiona aktywności przeciwgrzybiczej.

Wartości MIC nystatyny w obecności podprogowego stężenia β-escyny krystalicznej uległy zredukowaniu w zakresie od 2 do 16 razy, natomiast sól sodowa β-escyny wpływała na 2-4-krotny spadek MIC wartości nystatyny.

Uzyskane wyniki wskazują na synergistyczne współdziałanie preparatów β-escynowych i nystatyny wobec szczepów Candida glabrata.

Działanie przeciwgrzybicze in vitro aAE-Na, βAE-C i βAE-Na wobec 25 szczepów C. glabrata, w tym 24 izolatów klinicznych i jednego referencyjnego szczepu ATCC 90030 zobrazowano wynikami przedstawionymi w Tabeli 1 i 2.

PL 230 633 Β1

Tabela 1. Wrażliwość in vitro izolatów Candida glabrata na działanie soli sodowej α-escyny (aAE-Na), krystalicznej β-escyny (βΑΕ-C) oraz soli sodowej β-escyny (βΑΕ-Na) określona metodą krążkowo-dyfuzyjną (DD) oraz metodą mikrorozcieńczeń w bulionie (BMD)

Szczep	aAE-Na	βΑΕ-C	βΑΕ-Na
IZD (mm)	MIC (pg/ml)	IZD (mm)	MIC (pg/ml)	IZD (mm)	MIC (pg/ml)
973	0	>2048	22	8	28	4
2122	0	>2048	22	8	28	4
2124	0	>2048	14	32	20	16
2129	0	>2048	18	16	24	8
2136	0	>2048	18	16	24	8
2165	0	>2048	18	16	24	8
2222	0	>2048	22	8	28	4
2228	0	>2048	14	32	20	16
2232	0	>2048	18	16	24	8
2267	0	>2048	14	32	20	16
2270	0	>2048	18	16	24	8
2272	0	>2048	18	16	24	8
2278	0	>2048	14	32	20	16
2283	0	>2048	14	32	20	16
2304	0	>2048	18	16	24	8
2306	0	>2048	22	8	28	4
2308	0	>2048	18	16	24	8
2310	0	>2048	18	16	24	8
2311	0	>2048	14	32	20	16
2313	0	>2048	18	16	24	8
2317	0	>2048	22	8	28	4
2319	0	>2048	14	32	20	16
2330	0	>2048	22	8	28	4
2445	0	>2048	18	16	24	8
ATCC	0	>2048	18	16	24	8

90030

PL 230 633 Β1 αΑΕ-Na, sól sodowa a-escyny; βΑΕ-C, krystaliczna β-escyna; βΑΕ-Na, sól sodowa β-escyny; DD, metoda krążkowo-dyfuzyjna; BMD, metoda mikrorozcieńczeń w bulionie; IZD, średnica strefy zahamowania wzrostu; MIC, najniższe stężenie hamujące.

Tabela 2. Wartości MIC dla nystatyny (NYT) oraz NYT w obecności podprogowego stężenia hamującego (0,5 x MIC) krystalicznej β-escyny (βΑΕ-C) lub soli sodowej β-escyny (βΑΕ-Na) wobec izolatów Candida glabrata

Szczep MIC (pg/ml) jedynie NYT ΝΥΤ+βΑΕ-C ΝΥΤ+βΑΕ-Na

973	2	0.5	1
2122	2	0.5	1
2124	1	0.125	0.25
2129	8	0.5	2
2136	2	0.5	0.5
2165	16	4	8
2222	2	0.5	0.5
2228	1	0.125	0.25
2232	1	0.5	0.5
2267	32	8	8
2270	4	1	2
2272	1	0.5	0.5
2278	2	l	1
2283	2	0.5	0.5
2304	4	2	1
2306	1	0.125	0.5
2308	16	8	4
2310	4	2	2
2311	2	0.5	1
2313	2	0.5	0.5
2317	1	0.125	0.5
2319	4	1	1
2330	16	4	8
2445	2	0.5	0.5
ATCC	1	0.25	0.5
90030

PL 230 633 Β1

NYT, nystatyna; βΑΕ-C, krystaliczna β-escyna; βΑΕ-Na, sól sodowa β-escyny; MIC, najniższe stężenie hamujące.

Otrzymane w wyniku przeprowadzonych eksperymentów dane wskazują, że uzyskany z użyciem kompozycji według wynalazku efekt przeciwgrzybiczy jest wyższy niż wynikałoby z prostego zsumowania pojedynczych efektów obu składników aktywnych kompozycji. Świadczy to o nieoczekiwanym efekcie synergistycznym działania przeciwgrzybiczego nystatyny oraz β-escyny.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Kompozycja farmaceutyczna, o aktywności przeciwgrzybiczej, zawierająca kombinację składników czynnych z nystatyną, znamienna tym, że zawiera kombinację nystatyny z β-escyną lub ich dopuszczalnych farmaceutycznie soli.
2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera sól sodową β-escyny.
3. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera składniki czynne w mieszaninie z co najmniej jednym dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub zaróbką.
4. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że jest w postaci do podawania miejscowego lub doustnego.
5. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 4, znamienna tym, że jest w postaci wybranej z grupy zawierającej maść, krem, puder, zasypkę, zawiesinę, tabletkę lub globulkę dopochwową.
6. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera nystatynę w zakresie między 10 a 200 mg na jeden gram maści, kremu, zasypki/pudru, zawiesiny i/lub jedną tabletkę i/lub jedną globulkę dopochwową oraz sól sodową β-escyny w zakresie między 10 a 200 mg na jeden gram maści, kremu, zasypki/pudru, zawiesiny i/lub jedną tabletkę i/lub jedną globulkę dopochwową.
7. Kompozycja farmaceutyczna określona w zastrz. 1 do stosowania do leczenia lub zapobiegania infekcjom grzybiczym wywołanym szczepami Candida, zwłaszcza C. glabrata.