CZ2009359A3

CZ2009359A3 - Substituované deriváty 6-(2-hydroxybenzylamino)purinu, jejich použití jako léciva a farmaceutické prípravky tyto slouceniny obsahující

Info

Publication number: CZ2009359A3
Application number: CZ20090359A
Authority: CZ
Inventors: Zatloukal@Marek; Kryštof@Vladimír; Havlícek@Libor; Popa@Igor; Doležal@Karel; Strnad@Miroslav
Original assignee: Univerzita Palackého v Olomouci; Biopatterns, S. R. O.
Priority date: 2009-06-03
Filing date: 2009-06-03
Publication date: 2010-12-15
Also published as: US20120070512A1; CZ302711B6; WO2010139289A1; ZA201107883B; US8492391B2; EP2438068A1; EP2438068B1

Abstract

Rešení se týká nových substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamino)purinu obecného vzorce I jako polyspecifických inhibitoru cyklin-dependentních kinas 2, 5, 7 a 9 a jejich použití jako léciv pri lécbe onemocnení, zejména takových, která kombinují bunecnou hyperproliferaci se zánetlivými onemocneními. Rešení dále zahrnuje farmaceutické prípravky obsahující substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny.

Description

Substituované deriváty 6-(2-hydroxybenzylamino)purinu, jejich použití jako léčiva a farmaceutické přípravky tyto sloučeniny obsahující

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamino)purinů, majících účinky polyspecifických inhibitorů cyklin-dependentních kinas 2, 5, 7 a 9 a jejich použití jako léčiv.

Dosavadní stav techniky

Cyklin-dependentní kinasy jsou heterodimerické komplexy skládající se z katalytické kinasové subjednotky a regulační cyklinové subjednotky, a zahrnují rodinu kinas rozdělených do dvou skupin podle jejich role v progresi buněčného cyklu a transkripční regulaci (Meyerson M.et al.: EMBO J. 11:2909-2917, 1992). Členové první skupiny obsahují klíčové komponenty buněčného cyklu a zahrnují cyklin D-dependentní kinasy 4 a 6 společně s cyklin E-CDK2 komplexem, který sekvečně fosforyluje retinoblastomový protein (Rb) a napomáhá tak Gl-S přechodu (Sherr, C.J.: Cell 79: 551-555,1994.). Cyklin A-dependentní kinasa2 a 1 a cyklin B-CDK1 komplexy jsou potřebné pro řádnou progresi S-fází a pro G2-M přechod. CDKs jsou regulovány pozitivní fosfory lácí řízenou CDK-aktivační kinasou (CAK; cyclin H/cdk7/MATl, Harper, J.W. et al.: Genes Dev. 12: 285-289, 1998), stejně jako negativními fosforylačními kroky (Morgan, D.O.: Nature 374: 131-134, 1995), a rovněž jejich asociací s cykliny a endogenními Cip/Kip nebo INK4 inhibitory (Sherr, C.J. and Roberts, J.M.: Genes Dev. 9: 1149-1163, 1995). V maligních buňkách je pozměněna exprese cdk a jejich modulátorů, včetně overexprese cyklinů a ztráty exprese CDK inhibitorů, což vede k deregulaci cdk aktivity, která dává buňkám selektivní růstové výhody. Na rozdíl od cdk zodpovědných za přechody mezi jednotlivými fázemi buněčného cyklu existují transkripční cdk zahrnující cyklin H-CDK7 a cyklin T-CDK9 (pTEFb), které podporují iniciaci a elongaci tvořících se RNA transkriptů, a to fosforylací terminální karboxy-domény (CTD) RNA polymerasy II (Meinhart, A. et al.: Gens. Dev. 19: 1401-1415,2005). Vzhledem ke kritické úloze v progresi buněčného cyklu a buněčné transkripci a díky asociaci jejich aktivit s apoptotickými drahami tvoří tyto cdk atraktivní cíle pro vývoj nových protinádorových látek.

První popsané farmakologické inhibitory CDK (6-dimethylaminopurin a isopentenyladenin) nebyly ani účinné ani selektivní. Nicméně daly základ inhibičním strukturám a zahájily epizodu screeningu mnohem účinnějších a selektivnějších inhibitorů. Dnes je známo více než 50 inhibitorů, z nichž některé jsou aktivní v nanomolámích koncentracích. Jejich struktury byly nedávno shrnuty v přehledném článku (Fischer, P.M., Gianella-Borradori, A.: Expert Opin. Investic. Drugs 14: 457-469, 2005). Navzdory značné chemické diversitě vykazují všechny inhibitory určitě společné vlastnosti: (1) mají malou molekulovou hmotnost (<600); (2) jsou to ploché, hydrofóbní heterocykly; (3) funguji jako kompetitory ATP pro vazbu v kinasovém ATP-vazebném místě; (4) jsou vázány především hydrofobními interakcemi a vodíkovými můstky ke kinase; a (5) páteřní karbonyl a amino postranní řetězec Leu83 funguje jako akceptor H-vazby a inhibitory jako donor H-vazby, kdežto páteřní karbonyl GluSl většinou fuguje jako akceptor H-vazby. Atomární interakce mezi inhibitory a CDK je extenzivně popsána (Hardcastle, I.R. et al.: Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 42: 325-348, 2002). Inhibitory CDK, které fungují jinými mechanismy než vazbou ATP, nebyly dosud popsány, navzdory intenzivnímu screeningu a navzdory dalším zřejmým možnostem inhibice kinas (např. kompetice se substrátem, interference vazbou cyklinu a simulace přirozených proteinových inhibitorů).

V rámci skupiny CDK kinas se dají CDK inhibitory rozdělit do tří CDK kategorií, pan-cdk inhibitory (např. deschlorflavopiridol, flavopiridol, oxindol 16 a oxindol 91) a ty, které inhibují CDK1/2/5 (a pravděpodobně CDK9) (např. olomoucin, (φ-roskovitin, purvalanol B, aminopurvalanol (NG97), hymenialdisine, indirubin-3'-monoxim, indirubin-5-sulfonát, SU9516 a alsterpaulon) a dále ty, které jsou selektivní pro CDK4/6 (např. fascaplysin, PD0183812 a CINK4). Existuje pouze velmi limitovaný soubor inhibitorů specifických pro jednotlivé CDK. To je zřejmě způsobeno zachováním aminokyselin lemujících CDK ATPvazebné místo (Shapiro, G.I. J. Clin. Oncol. 24:1770-1783,2006).

Terminální karboxy-doména (CTD) RNA polymerasy II je regulována fosforylací zprostředkovanou cdk. CTD lidské RNA polymerasy II obsahuje 52 tandemových opakujících se souhlasných heptapeptidových sekvencí. Cyklin T-CDK9 (rovněž nazývaný PTEFp) přednostně fosforyluje Ser2 místo této sekvence za účelem podpory transkripční elongace. Je pravděpodobné, že cyklin T-CDK9 může fosforylovat rovněž posici Ser5 (Palancade, B., Bensaude, O.: Eur. J. Biochem. 270: 3859-3870, 2003). Cyklin HCDK7/MAT1, v komplexu s transkripčním faktorem TFIIH, přednostně fosforyluje Ser5, která napomáhá aktivaci promotoru a iniciaci transkripce (Meinhart, A. et al.: Gens. Dev. 19:

1401-1415,2005). Cyklin H-CDK7 proto hraje dvojí úlohu, a to jako CDK buněčného cyklu i transkripční; funguje tedy jako CAK i CTD kinasa.

Flavopiridol je nejúčinnější známý inhibitor CDK.9 (Chao, S.H., Price, D.H.: J. Biol. Chem. 276: 31793-31799, 2001). Zatímco hodnoty ICjopro ostatní cdks se pohybují v rozmezí 100 až 400 nmol/1 s hodnotami Kj mezi 40 a 70 nmol/1, vazba flavopiridolu do ATP vazebného místa CDK9 je významně těsnější (K, = 3 nmol/1). Z těchto důvodů má inhibice CDK9 flavopiridolem, stejně jako CDK7, významný vliv na buněčnou transkripci (Lu, X. Et al. Mol. Cancer ther. 3:861-872, 2004). Seliciclib® (R-roskovitin) rovněž inhibuje cyklin T-CDK9 a cyklin H-CDK7 vedle inhibice cyklin E-CDK2 (McClue, S.J. et al. Int. J. Cancer 102: 463468, 2002) a ovlivňuje fosforylaci RNA polymerasy II CTD, která je asociována s poklesem Mcl-1 spolu s dalšími antiapoptotickými proteiny v CLL buňkách (Alvi, A.J. et al. Blood 105: 4484-4491, 2005). Proapoptotická aktivita flavopiridolu i seliciclibu v buněčné linii mnohočetného myelomu fuguje podobným mechanismem (Ráje, N. et al. Blood 106: 10421047, 2005).

Naše současná práce je zaměřena na vývoj nové třídy sloučenin zacílených s vysokou účinností do buněčného cyklu a s rozdílnými účinky na transkripční CDK7 a 9. Některé tyto inhibitory již byly popsány a pochází z rozdílných skupin sloučenin, např. puriny (Olomoucin II, KryštofV. et al. Cell. Mol. Life Sci. 62, 1763-1771, 2005) a arylazopyrazoly (Kryštof. V. et al. J. Med. Chem. 49: 6500-6509, 2006). Na základě našich znalostí interakcí inhbitor/CDK7/9 jsme vyvinuli další řadu inhibitorů, která je účinná při koncentracích blízkých buněčným koncentracím kinas.

Série substituovaných derivátů 6-(2-hydroxybenzylamino)purinu podle tohoto vynálezu je použitelná jako inhibitory cyklin-dependentní k inasy 2, 5, 7 a 9. Tato skupina nových purinových derivátů je charakteristická nejen neobvyklou CDK inhibiční aktivitou doprovázenou silnými protinádorovými vlastnostmi, ale i velmi silními protizánětlivými účinky. Proto mohou být tyto látky použity jako antimitotická, apoptotická a protizánětlivá léčiva, s výhodou zejména u nádorů doprovázených záněty. Předmětem tohoto vynálezu je poskytnout sloučeniny s protinádorovou a protizánětlivou (antiinflamatomí) aktivitou, látky mající vysoký index selektivity a účinnosti, tedy jsou méně toxické a přitom efektivnější než doposud známá analoga.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou substituované 6-(2-hydroxybenzylaniino)puriny obecného vzorce

I (R)n

a jejich farmaceuticky přijatelné soli, kde (R)_n znamená 1 až 4 substituenty (n je 1-4), které mohou být stejné nebo rozdílné, přičemž tyto substituenty mohou být vybrané ze skupiny zahrnující alkyl, alkoxy, amino, halogen, hydroxy, merkapto a nitro skupinu, a

R2 je R2’-NH-, ve kterém

R2’ znamená substituent vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkyl alkyl, aryl a arylalkyl, ve kterém každá z těchto skupin případně může být substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, merkapto, a alkoxy skupinu, a

R9 znamená substituent vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkyl alkyl, aryl a arylalkyl skupinu, ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adičních solí s kyselinami.

Předmětem vynálezu jsou substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce I pro použití jako léčiva.

Předmětem vynálezu jsou rovněž substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce I pro použití jako inhibitory cyklin-dependentních kinas (CDK), s výhodou CDK 2, 5, 7 a/nebo 9.

Předmětem vynálezu rovněž substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce I pro použití pro inhibici buněčné proliferace a/nebo indukci apoptózy.

Předmětem vynálezu jsou dále substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce I pro použití pro výrobu léčiv pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, jakými jsou nádory, restenóza, rev matická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami a/nebo prvoky, polycystickém onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu (host versus graft disease) a dny.

Předmětem vynálezu je dále způsob inhibice CDK, zejména selektivní inhibice CDK 2, 5, 7 a/nebo 9, inhibice buněčné proliferace a/nebo indukce apoptózy u savců, která zahrnuje podání terapeuticky účinného množství kompozice obsahující látku obecného vzorce I savcům. Tyto CDK inhibiční molekuly jsou vhodné pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, jakými jsou nádory, restenóza, revmatická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami nebo prvoky, polycystickém onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu (host versus graft disease) a dny, a při léčení onemocnění, která kombinují buněčnou hyperproliferaci se zánětlivými onemocněními.

Kromě ostatních CDK-příbuzných kinas, CDK 2, 5, 7 a 9 kinasy kontrolují určité kroky cyklu buněčného dělení, zejména přechod z Gi fáze do S fáze a dále pak přechod z G₂ fáze do M fáze. V rámci tohoto zjištění lze předpokládat, že sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být použity jako antimitotické látky a pro léčbu proliferativních onemocnění. Při velmi nízkých koncentracích (mikromolámí a nižší) jsou schopné inhibovat přechody buněčného cyklu (Gi/S, G₂/M, M-fáze/metafáze), které probíhají v živočišných tělech a v embryích. Kromě toho jsou tyto sloučeniny použitelné při léčbě autoimunitních onemocnění, např. revmatoidní artritidy, lupenky, diabetů I. typu, roztroušené sklerózy; při léčení Alzheimerovy a Parkinsonovy choroby, kardiovaskulárních onemocnění jakými jsou restenóza, odmítnutí transplantátu (host versus graft disease), dny a při léčení nádorů, polycystického onemocnění ledvin a ostatních proliferativních onemocnění, jejichž pathogenese zahrnuje abnormální buněčnou proliferaci.

Kromě terapeutických aplikací (pro lidské a veterinární použití) mohou být sloučeniny obecného vzorce I použity jako aditiva ve tkáňových kulturách pro kontrolu stavů proliferace anebo diferenciace buněk in vitro, například cestou kontroly hladin aktivace CDK 2, 5, 7 a/nebo 9.

Látky podle vynálezu inhibují katalytickou aktivitu cyklin-dependentních kinas prostřednictvím interakce těchto sloučenin s ATP-vazebným místem těchto enzymů. Takovéto sloučeniny jsou zejména žádoucí pro redukci nadměrného buněčného růstu, neboť umožňují inhibici kinasové aktivity bez ohledu na příčinu nadměrné kinasové aktivity vedoucí k hyperproliferaci. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy aktivní v situacích, ve kterých je mutovaná kinasa hyperaktivní, a situacích, ve kterých je kinasa přítomná ve zvýšených hladinách. Sloučeniny podle vynálezu mohou rovněž blokovat nadbytečnou kinasovou aktivitu v situacích, kdy cyklin regulující danou kinasu je přítomen v nadbytečných hladinách, nebo je mutován či je jeho vazba k CDK zvýšená. Konečně, sloučeniny podle tohoto vynálezu, které blokují kinasovou aktivitu prostřednictvím interakce s ATP vazebným místem enzymu, jsou rovněž vhodné pro inhibici kinasové aktivity v situacích, kdy přirozený proteinový inhibitor CDK-cyklin komplexů je mutován.

Předmětem vynálezu je rovněž použití substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamino)purinů obecného vzorce I pro léčení onemocnění zahrnující zapojení CDK5. Angiostatinemindukovaná inhibice proliferace/apoptózy endotheliálních buněk je asociovaná s downregulací regulačními proteiny buněčného cyklu - CDK5. CDK5, p35, a p25 proteiny byly všechny exprimovány v invazivních nádorových buňkách, ale rovněž se ukázalo, že exprese CDK5 reguluje proliferaci nádorových buněk. Kromě toho, účinný mitogen pFGF upreguluje expresi CDK5. Nové deriváty specificky inhibují dávkově-závislou expresi/aktivitu CDK5 s doprovodnou inhibici proliferace invazivních nádorových buňkách a indukcí apoptózy.

Cyklin-dependentní kinasa-5 (CDK5) je rovněž exprimována v neuronálních buňkách a hraje důležitou úlohu v růstu neuronů, migraci neuronů a neurogenezi, její funkce v neneuronálních buňkách je nejasná. CDK5 je exprimována ve vysokých hladinách v bovinních aortálních buňkách (BAE), na rozdíl od nevýznamně nízkých hladin exprese CDK5 v klidových BAE buňkách. Kromě toho, PFGF up-reguluje expresi CDK5 v dávkově-závislém modelu. Angiostatin (AS) inhibuje proliferaci EC v dávkově-závislém modelu s doprovodnou down-regulací exprese CDK5. Úloha CDK5 v proliferaci a apoptóze EC byla potvrzena selektivní inhibici CDK5 novými purinovými deriváty, které inhibují pFGF-stimulovanou proliferaci BAE buněk a indukují dávkově-závislou apoptosu.

Předmětem vynálezu jsou rovněž substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce 1 pro použití pro aktivaci nádorového supresoru p53, který je vlastní všem savčím buňkám, kde působí jako přirozený supresorický gen zastavující nekontrolované buněčné dělení (nádory) a je schopen vypnout nádorový vývoj buněk. p53 stejně jako retinoblastomový protein (pRb) jsou dobře charakterizované nádorové supresory, jejichž inaktivace může vést k nekontrolované proliferaci a malignitě. Fosforylace těchto dvou proteinů, které jsou zapojeny do regulačních mechanizmů buněčného cyklu, moduluje významně jejich funkci a aktivitu. Z toho vyplývá, že silně aktivní regulátory p53 představují vhodný nástroj pro terapii nádorových onemocnění a to cestou indukce wild typu p53 proteinu ve vybraných typech nádorů.

Studie probíhající s deriváty podle tohoto vynálezu prokázaly, kromě jiného, silný účinek na apoptózu v řadě nádorových buněčných linií. Bylo pozorováno, že apoptóza může byl indukována ve fázi Gi nebo G₂ a v souvislosti s poškozením DNA; některé buňky zastaví v Gi fázi a p53-dependentní apoptotická dráha je poté indukována. V jiných situacích dochází k tomu, že buňky zastavují v G?/M přechodu jako reakce na poškození DNA a pak je pozorována aktivace p53-nezávislé apoptotické dráhy. Tato dráha je zejména významná v terapii nádorů, u kterých je pozorován nedostatek aktivního p53. Je proto důležitá i aplikace nových derivátů, které stimulují p53-nezávislou apoptózu v buňkách, které se zastavily v Gj fázi vlivem poškození DNA při použití léčiv jakými jsou mitoxantron nebo cis-platina. CDK inhibitory z tohoto vynálezu tak mohou zvýšit terapeutický potenciál současně používaných proti nádorových látek.

Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický přípravek obsahující alespoň jeden substituovaný 6-(2-hydroxybenzylamino)purin obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

Nové sloučeniny mohou být podle tohoto vynálezu použity jako takové a nebo jako intermediáty při přípravě nových sloučenin majících řadu diagnostických, terapeutických a průmyslových použití.

Výše uvedené generické skupiny mají významy uvedené v následující legendě: alkoxy znamená skupinu -O-R_a, kde R_a je alkyl nebo cykloalkyl, amino znamená skupinu -NH2, halogen je vybrán ze skupiny zahrnující atomy fluoru, bromu, chloru a iodu, hydroxy znamená skupinu -ΟΙ I, merkapto znamená skupinu -SH, alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 8 uhlíkových atomů, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, pentyl, isopentyl, hexyl, isohexyl;

alkenyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkenylovou skupinu obsahující 2 až 7 uhlíkových atomů, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující vinyl, allyl, 1-propenyl, 1methylethenyl, but-1 až 3-enyl, pent-1 až 4-enyl, isopentenyl, 3,3-dimethylallyl, hex-1 až 5enyl, hept-1 až 6-enyl, cykloalkyl znamená monocyklickou nebo polycyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 15 uhlíkových atomů, přednostně cyklopropyl, cyklohexyl nebo cyklopentyl, cycloalkyl alkyl znamená skupinu -Rb(cykloalkyl), kde cykloalkyl znamená cykloalkylovou skupinu jak definováno výše a Rb je alky lenová můstková skupina obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, aryl znamená aromatickou karbocyklickou skupinu obsahující 6 až 18 uhlíkových atomů a tvořenou alespoň jedním aromatickým kruhem nebo násobně kondenzovanými kruhy, z nichž alespoň jeden kruh je aromatický, s výhodou aryl je fenyl, arylalkyl znamená skupinu -R^Ar, kde Ar znamená arylovou skupinu a Rc je alkylenová můstková skupina obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, s výhodou methylen.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou deriváty obecného vzorce I ze skupiny zahrnující: 2-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyí, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, ^-(ž-hydroxy-Schlorbenzyi)-N²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purine-2.6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5chlorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)97/-purin-2-yl} amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-( {6- [(2-hydroxy-5 -chlorbenzyl)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl ·· ···· ·· ·· ve · · · ♦ butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7'-purίn-2-yl}amino)-2-methy^pentan-2-ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-5chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)propan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9--(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl)amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Hpurin-2-yl} amino)-2-methyl-pentan-2-o 1, 3 -({6 - [(2 -hydroxy-5 -chlorbenzy l)amino] -9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, N⁶(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)-N -(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-l-ol, N -(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)-N -(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Z/-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3chlorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Z/-purine-2,6-diamine, 1 -({6- [(2-hydroxy-3 -chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//purin-2-y 1} amino)-2-methyl-propan-2 -ol, 3 -({6- [(2-hy droxy-3 -chlorbenzy l)amino] -9 (methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-oL 4-({6-[(2-hydroxy-3chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-y 1} amino)-2-methy l-pentan-2 -ol, 3 -({6- [(2-hydroxy-3 chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Z/-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2hydroxy-5-fluorbenzyl)amíno]- -(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9// ·· ** ·· ο «· • · · · · · · · * purin-2-yl}amino)butan-1 -ol, ÝV⁶-(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)-jV²-(2-aminopropyl)-9-(me±yl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5fluorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl)amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}ammo)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(inethyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, 1 -({6- [(2-hydroxy-5 -fluorbenzyl)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methylpropan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-1 -ol, ^-(Z-hydroxy-í-jodobenzylj-jV²-^aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol. l-({6-[(2-hydroxy-5jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ř/-purm-2yl} amino)propan-2-ol, 1 N⁶-(2-hydroxy-5-j odobenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amÍno]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl11 *· ·* ·« < t · · · pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purm-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9J/-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9£řpurin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, 7^-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-7V²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, 2-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97ř-purin-2-yl}aniino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purine-2,6-diamine, l-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methylpropan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methy]-butan-2-ol, 4-( {6-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl]amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyi, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9í/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/^purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9J/-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 2-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}ammo)butan-l-ol, 2 7^-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-7V²-(2-aminopropyl)-9-(methyL ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-91/-purine-2,6-diamine, 2-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl. cyklohexyl, benzyl)-97/-purine-2,6-diamine, l-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-912 (methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl)amino)-2-methylpropan-2-ol, 3-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-((6-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9H-purin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl]amino}pcntan-2-ol, 1-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzy 1)-9/7-p ur i n-2 -y 1} amino)propan-2-ol, 2-( {6- [(2 -hydroxy-5 -methy Ibenzy l)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, N⁶(2-hydroxy-5-methylbenzyl)-jV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, 2-( {6-[(2-hydroxy-5-methy Ibenzy l)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5-methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ž/-purine-2,6-dÍamine, N⁶-(2-hydroxy-5methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9 H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97Z-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-((6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5 methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, A^-(2-hydroxy-3-methylbenzyl)-jV²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N^é-(2-hydroxy-3methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3-methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl} amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-( {6-[(2-hydroxy-3methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9FLpurin-2-yl}amino)butan-l-ol, A(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)-A²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-92Z-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9žApurin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-3 -methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Ff-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3methoxybenzyl)-N²-(4-amÍnocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl. 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl} amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-( {6- [(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino] -9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl)amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethylbutan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl} amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3 -({ 6- [(2-hydroxy-3 methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9F/-purin2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl} amino)propan-2-ol, 2 -({6- [(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-oL N⁶(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)-jV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-5 -methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purinc-2.6-diaminc, N⁶-(2-hydroxy-5methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyi, cyklohexyl, benzyl)-9í/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl)amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol,

4-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5methoxybenzyl)amÍno]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9/f-purin2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purÍn-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9methy l-9//-purin-2-yl} amino)-2-methy l-pentan-2 -ol, 3 -({6- [(2-hydroxy-5 mercaptobenzyl)amino]-9-ethyl-9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-isopropyl-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-benzyl-9H-purm-2-yl}amino)-2methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-methyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-ethyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 H-purin2-yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-benzyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyr)amino]-9-cyklopropyl-9//purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9cyklohexyl-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-5mercaptobenzy l)amino] -9-benzy l-9//-purin-2 -y 1} amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3 -({6- [(2 hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-methyl-9J7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-ethyl-9H-purÍn-2-yl)amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-5-nitrobcnzyl)amino]-9-isopropyl-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl-9#-purin-2-yl}amino)-2methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-methyl-9ř/-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-ethyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklopropyl-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 H purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 1-( {6-((2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, A'⁶(2-hydroxy-5-aminobenzyl)-A²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-5-aminobenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl )-9//-purin-2yl} amino)-2-methy l-propan-2-o 1, 3-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2yI}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 4-({6-[(2hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)977-purin-2-yl} amino)-2,3 -dimethyl-butan-2-ol, 3-( {6-[(2-hydroxy-5 -aminobenzyl)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl|amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({ 6-((2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)bulan-l-ol, A⁶(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-A²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purinc-2,6-diamine. 2-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)aminoJ9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9A-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3 -({6- [(2,3 -dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9f/-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3 pentyl, cyklohexyl, henzyl)-9W-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-oL 4-({6-[(2,3dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, l-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin2-yl}amino)propan-2-ol, 4-( {6-((2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-diniethyl-butan-2-ol, 3({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl]amino}pentan-2-ol, 1 -({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]’9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, ^-(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-jV²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzy!)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin-2-yl}amino)propan-2-ol, 4-({6-[(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9W-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyi)-9/7-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benz.yl)-9H-purin-2-yl}amino)butan-l-oL ^-(2,5dihydroxy-4-chlorbenzyl)-jV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurine-2,6-diamine, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-l-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl} amino)-2-methy l-propan-2-ol.

Farmaceutické přípravky

Terapeutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90% aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačnímí procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofílizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, βkarotenu nebo 3,5-di-/er/-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cg až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejně.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, mannitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylen glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylen glykolů, tj. lipofílní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.

Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.

Seznam vyobrazení

Obr. 1 ukazuje inhibici CDK2/cyclin E kinasové aktivity purinovým derivátem 128 a roskovitinem.

Obr. 2. ukazuje dávkově závislou antiproliferativní aktivitu purinového derivátu 128 pro lidskou nádorovou buněčnou MCF7, s roskovitinem použitým jako standardem. Buňky byly ošetřeny po dobu 72 h vzrůstajícími koncentracemi sloučenin a poté byl počet živých buněk stanovém Calcein AM testem. Výsledky představují průměr ± SD (směrodatných odchylek) ze tří nezávislých experimentů. Sloučenina 128 významně redukuje počet živých buněk.

Obr. 3 ukazuje jak sloučenina 128 a roskovitin modulují expresi RNA polymerasy II a její fosforylační status. Buň ky byly inkubovány s testovanými sloučeninami ve vyznačených časových bodech, poté sklizeny a celkový buněčný lyzát byl analyzován imunoblotigem. Fosforylace šeřinu 2 a šeřinu 5 na C-terminální doméně RNA polymerasy II je po ošetření testovanými sloučeninami inhibována.

Obr. 4 ukazuje aktivaci p53-závislé transkripce v Am8 buňkách (buněčná linie transfekovaná stabilně β-galaktosidasovým reportérovým genem). Buňky byly inkubovány se sloučeninou 128 a roskovitinem a transkripční aktivita p53 byla detekována fluorimetricky jako βgalaktosidasová reporterová aktivita na fluorogenní substrát (a). Formaldehydem-fixované Am8 buňky oš etřené sloučeninou 128 vykazují modrý signál díky štěpení X-gal,jak je ukázáno na mikrofotografii (b), kdežto neošetřené buňky zůstaly neoznačené (c). Obě sloučeniny prokázaly aktivaci p53-závislé transkripce v Am8 reportérové buněčné linii.

Obr. 5 ukazuje akumulaci nádorového supresorového proteinu p53, expresi p53-regulovaného inhibitoru CDK p21^Wafl a downregulaci antiapoptotického proteinu Mcl-1 v buněčné linii prsního karcinomu MCF7 po ošetření sloučeninou sloučeninou 128 a roskovitinem. Buňky byly ošetřeny po dobou 24 h testovanými sloučeninami v koncentračně závislé škále, sklizeny a byl připraven celkový buněčný lyzát. Exprese regulátorů buněčného cyklu a proteinů zapojených v apoptóze byla detekována imunoblotingem.

Příklady provedení vynálezu

Vynález je dále popsán v následujících příklad, aniž by příklady jakkoliv omezovaly jeho rozsah.

Výchozí suroviny pro sloučeniny obecného vzorce I jsou dostupné z komerčních zdrojů (Sigma-Aldrich, Fluka, atd.). Body tání byly stanoveny na Kofflerově bloku a nebyly korigovány. Odpařování rozpouštědel bylo prováděno na rotační vakuové odparce při teplotách pod 80 °C. 1H NMR. spektra (σ, ppm; J, Hz) byla měřena na přístroji Varian VXR400 (400 MHz) nebo na přístroji Varian Unity 300 (300 MHz). Všechna spektra byla změřena při 25 °C za použití tetramethylsilanu coby vnitřního standardu. ES+MS spektra m/z (rel. %, složení, odchylka) byla měřena na VG 7070E spektrometru (70 eV, 200 °C, přímý nástřik). Quad MS spektra byla měřena na přístroji Micromass ZMD detektoru s ionizací elektrosprayem. Merck silikagel Kieselgel 60 (zrnitost 230-400) byl použit na sloupcovou chromatografii. Všechny sloučeniny vykázaly uspokojivé elementární analýzy (± 0,4 %). Výchozí 9-hydrokarbyl-2,6-dichlorpuriny byly připraveny podle postupů popsaných v literatuře.

2,6- dichlor-9-methylpurin

1) Parker et al. Phytochemistry 25, 1986: 303 - 310

2) Brik et al. Bioorg. Med. Chem. 13, 2005: 4622 - 4626;

2,6- dichlor-9-ethylpurÍn

Pitts et al. Bioorg. Med. Chem. Let. 14, 2004: 2955 - 2958

2,6- dichlor-9-isopropylpurin

1) Rypka et al. Xenobiotica 32,2002: 1017 - 1032

2) Lu et al. J. Org. Chem. 72,2007: 5012-5015

2,6-dichlor-9-ben2ylpurin

1) Kelley etal. J. Med. Chem. 31; 1988:2001 -2004

2) Naito et al. Chem. Pharm. Bul. 30,1982: 2011 - 2019

3) Dalby et al. Angew. Chem. German 105,1993:1822 - 1823

4) Brik, et al. Bioorg. Med. Chem. 13, 2005; 4622 - 4626

5) Weterings et al. Bioorg. Med. Chem. Let. 16,2006: 3258 - 3261

6)Toyota et al. Synth. Commun. 23,1993: 1295 - 1305

7) Gundersen et al. Tetrahedron Let. 36,1995: 1945 - 1948

8) Luet al. J. Organ. Chem. 72, 2007: 5012 - 5015

2,6-dichlor-9-cyklopropylpurin

2,6-Dichlorpurin (1 mmol), trifenylfosfin (1,3 mmol), tetrahydrofuran (5 ml) a cyklopropanol (5 mmol) byly míchány v dusíkové atmosféře při pokojové teplotě za vzniku čirého žlutého roztoku, který byl poté ochlazen na 0 °C a byl přidán stříkačkou diisopropyldiazadikarboxylát (DIAD, 1,3 mmol). Reakční směs pak byla míchána po dobu 12 h. Po odpaření rozpouštědel byl produkt extrahován diethyletherem a vyčištěn sloupcovou chromatografií (silikagel, 1 % MeOH v chloroformu). Rekrystalizace z methanolu poskytla výtěžek 35 %, b.t. 121-124 °C.

2, 6-dichlor-9-cyklopentylpurin

I) Shum et al. Nucleos. Nucleot. 20, 2001: 1067 - 1078

2) Drezér et al. J. Med. Chem. 44, 2001: 524 - 530

2, 6-dichlor-9-cyklohexylpurin

2,6- Dichlorpurin (1 mmol), práškový uhličitan draselný (1 mmol) a cyklohexyljodid (4 mmol) byly přes noc prudce míchány v 5 ml DMSO. Po odpaření rozpouštědla byl produkt extrahován (mezi vodu a diethylether) a čištěn kolonovou chromatografií (silikagel/ 1% MeOH v CHCI3). Rekrystalizace z methanolu poskytla produkt ve výtěžku 41 %, b.t. 116-121 °C.

Příklad 1

Obecná metoda přípravy prekurzoru 2-chlor-6-[(2-hydroxyfR)_n-benzyl)amino]-9hydrokarbyl-purinu ,6-dichlor-9-hydrokarbylpurin (2 mmol), 2-hydroxy-R_n-benzylamin (2,5 mmol) and triethylamin (0,4 mL) byly zahřívány v 5 ml 1-butanolu (110 °C, 1,5 h). Produkt krystaloval během reakce z reační směsi a tato krystalizace pokračovala při chlazení v lednici. Produkt byl zfiltrován a promyt 1-butanolem.

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-methylpurin: Výtěžek 91 %; b,t. 202-205 °C;

* H NMR (CDC1₃): 3.14 (3H, s), 3.28 (3H, s), 4.79 (2H, s(br)), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 7.86 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.15 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor~9-ethylpurin: Výtěžek 90 %; b.t. 195-198 °C; 'H NMR (CDCI3): 1.24 (3H, t, >6.0), 3.23 (2H, q, >6.0), 3.65 (3H, s), 4.80 (2H, s(br)), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 7.95 (1H, s), 8.05 (1H, s(br)), 10.40 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-isopropylpurin: Výtěžek 93 %; b.t. 190192 °C;

'H NMR (CDCI3): 1.38 (6H, d, >6.0), 3.25 (1H, sept, >6.0), 3.62 (3H, s), 4.75 (2H, s(br)), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 8.05 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.25 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-cycklopropylpurin: Výtěžek 88 %; b.t. 217-220 °C;

'Η NMR (CDCI3): 0.63 (2H, q, >4.5), 0.69 (2H, q, >4.5), 3.59 (1H, m), 3.65 (3H, s), 4.80 (2H, s(br)), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 7.94 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.25 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-melhoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-cyklopentylpurm: Výtěžek 89%; b.t. 174176 °C ‘HNMRtCDCh): 1.38-1.67(4H, m), 1.74-1.82 (4H, m), 2.03 (1H, qui, J7.5), 3.62 (3H, s), 4.75 (2H, s(br)), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 8.05 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.25 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-cyklohexylpurin: Výtěžek 89 %; b.t. 169172 °C;

* H NMR (CDC1₃): 1.33-1.42 (4H, m), 1.53-1.58 (1H, m), 1.70-1.80 (4H, m), 1.92-1.99 (1H, m), 3.62 (3H, s), 4.62 (2H, s(br)), 4.96 (1H, qui, J= 5.7), 6.49 (1H, d, >7.5), 6.65-6.72 (2H, m), 8.05 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.25 (1H, s(br))

6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-2-chlor-9-benzylpurin: Výtěžek 94 %; b.t. 208-211 °C;

'H NMR (CDC1₃): 3.63 (3H, s), 4.43 (2H, s), 4.63 (2H, s(br)), 6.45 (1H, d, >7.5), 6.65-6.80 (2H, m), 7.14 (1H, t, >7.50), 7.26 (2H, t, >7.5), 7.39 (2H, d, >7.5), 7.89 (1H, s), 8.25 (1H, s(br)), 10.25 (1H, s(br))

Příklad 2

Obecná metoda přípravy (substituovaných) 2-hydrokarbylamino-6-[(2-hydroxy-R_nbenzyl)amino]-9-hydrokarbyl purinů

2-Chlor-6-[(2-hydroxy-R_n-benzyI)amino]-9-hydrocarbylpurin (1 mmol), odpovídající amin (3 mmol) a diisopropylethylamin (2 mmol) byly zahřívány (teplota a reakční doba jsou specifikovány pro každou z níže uvedených substancí) v N-methylpyrolidonu (5 ml, zatavená ab.t.ule). Reakční směs byla poté vytřepána mezi vodu a chloroform. Kolonová chromatografie (silikagel, chloroform/methanol) poskytla čistý produkt.

(R)-i-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2ol Reakční podmínky: 160 ^ŮC, 3 h. Kapalinová chromatografie 1,5% MeOH v CHCI3;

krystalizace z absolutního CHC1₃; b.t. 100-103 °C.

'H NMR (CDCI3): 0.86 (3H, t, >9,0), 1.46 (6H, dd, >12,0, J'=3,0), 1.63 (1H, sep, >12,0), 2.54 (1H, s), 3.38-3.56 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.82 (1H, m), 4.58 (2H, qui, >9,0), 4.62 (2H, s(br)), 5.85 (1H, d, >15,0), 6.67 (1H, t, >12,0), 6.76-6.87 (2H, m), 7.50 (1H, s(br)), 7.78 (1H, s),9.32(lH, s(br)).

^I3C NMR(CDC1₃): 10.56,21.95, 23.82,54.01,55.75,62.92, 64.83,110.73,113.55,118.43, 120.65,126.78, 135.21, 144.01, 147.57, 150.55, 154.42, 158.74 (S)-l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]~9-Ísopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2ol

Reační podmínky: 160 °C, 3 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH in CHCh; krystalizace z abs. CHCI3; b.t. 100-102 °C.

'H NMR (CDO3): 0.86 (3H, t, J=9,0), 1.46 (6H, dd, >12,0, J'=3,0), 1.63 (1H, sep, >12,0), 2.54 (1H, s), 3.38-3.56 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.82 (1H, m), 4.58 (2H, qui, >9,0), 4.62 (2H, s(br)), 5.85 (1H, d, >15,0), 6.67 (1H, t, >12,0), 6.76-6.87 (2H, m), 7.50 (1H, s(br)), 7.78 (1H, s), 9.32 (1H, s(br)).

¹³C NMR (CDCI3): 10.56,21.95,23.82, 54.01,55.75, 62.92,64.83,110.73,113.55, 118.43, 120.65,126.78,135.21,144.01,147.57,150.55,154.42,158.74 (RS)-2-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)aminoJ-9-isopropyl-9-H-purin-2-yl}atnino)butan-lol Reakční podmínky: 160 °C, 6 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHCI3;

krystalizace z abs. CHCI3/ abs. Et₂O; b.t. 120-122 °C.

‘HNMR (CDCI3): 0.86 (3H, t, >9,0), 1.46 (6H, dd, >12,0, J'=3,0), 1.63 (1H, sep, >12,0), 2.54 (1H, s), 3.38-3.56 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.82 (1H, m), 4.58 (2H, qui, >9,0), 4.62 (2H, s(br)), 5.85 (1H, d, >15,0), 6.67 (1H, t, >12,0), 6.76-6.87 (2H, m), 7.50 (1H, s(br))> 7.78 (1H, s), 9.32 (1H, s(br)).

¹³CNMR (CDC1₃): 10.56,21.95,23.82, 54.01, 55.75,62.92, 64.83,110.73, 113.55,118.43, 120.65,126.78,135.21,144.01, 147.57,150.55,154.42,158.74 (R)-l-({6-[(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)ammo]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2ol Reakční podmínky: 160 °C, 3 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHC1₃;

krystalizace z abs. CHCh; b.t. 106-108 °C.

‘H NMR (CDCI3): 0.88 (3H, t, >9.0), 1.45 (6H, dd, >12.0, J =3.0), 1.66 (1H, sep, >12.0), 3.38-3.56 (2H, m), 3.64 (3H, s), 3.82 (1H, m, >9.0), 4.57 (2H, qui, >9.0), 4.64 (2H, s(br)), 5.80 (1H, d, >15.0), 6.34 (1H, s), 6.41 (1H, d, >7.5), 6.92 (1H, d, >7.5), 7.50 (1H, s(br)), 7.79 (1H, s), 8.95 (1H, s(br)).

* H NMR (CDCI3): 10.9, 22.5, 25.0, 42.6, 46.4, 55.6, 56.3, 68.5, 100.7, 103.9, 114.7,120.0, 130.3,134.6, 152.0, 155.8, 158.9, 160.0 (R)-l-({6-[(2,3-dihydroxybenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol Reakční podmínky: 155 °C, 2 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHC1₃;

krystalizace z abs. diethyletheru; b.t. 182-183 °C.

'HNMR(CDCh): 0.86 (3H, t, >9.0), 1.46 (6H, dd, >12.0, J'=3.0), 1.63 (1H, sep, 1=12.0), 3.38-3.56 (2H, m), 3.82 (1H, m, >9.0), 4.57 (2H, qui, J=9.0), 4.64 (2H, s(br)), 5.80 (1H, d, >15.0), 6.55 (1H, t, >11.0), 6.62-6.70 (2H, m), 7.50 (1H, s(br)), 7.79 (1H, s), 8.95 (1H, s(br)), 9.40 (1H, s(br)).

‘HNMR (CDCh): 10.55,21.84,21.93, 23.78,45.75,53.97, 62.84,114.08,118.59,119.31, 126.92,135.27, 142.93,145.30,154.28, 158.61 (R)-l-({6-[(2,4-dihydroxybenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol Reační podmínky: 155 °C, 2 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH in CHCI3; krystalizace za abs. diethyletheru; b.t. 189-191 °C.

‘HNMR (CDCh): 0.90 (3H, t, 1=9.0), 1.43 (6H, dd, 1=12.0,1=3.0), 1.82 (1H, sep, 1=12.0), 3.38-3.56 (2H, mt), 3.78 (1H, m, >9.0), 4.59 (2H, qui, 1=9.0), 4.58 (2H, s(br)), 5.80 (1H, d, >15.0), 6.28 (1H, s), 6.32 (1H, d, >7.5), 6.85 (1H, d, >7.5), 7.52 (1H, s(br)), 7.79 (1H, s), 8.95 (1H, s(br)), 10.50 (1H, s(br)).

'HNMR (CDCI3): 10.9,22.5,25.0,42.6,46.4, 56.3,68.5,102.6,108.2,114.7, 118.3,130.5, 134.6, 152.0, 155.7,155.8, 158.4, 160.0 (R)-l-({6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol Reakční podmínky: 155 °C, 2 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHCI3;

krystalizace z abs diethyletheru; b.t. 162,4-163,6 °C.

’HNMRfCDCh): 0.86 (3H, t, >9.0), 1.45 (6H, dd, >12.0,1=0.8), 1.82 (1H, sep, >12.0), 3.38-3.56 (2H, mt), 3.76 (1H, m, >9.0), 4.59 (2H, qui, >9.0), 4.58 (2H, s(br)), 5.80 (1H, d, >15.0), 6.28 (1H, s), 6.32 (1H, d, >7.5), 6.85 (1H, d, >7.5), 7.52 (1H, s(br)), 7.79 (1H, s), 8.95 (1H, s(br)), 10.50 (1H, s(br)).

'H NMR (CDCI3): 10.9, 22.5,25.0, 39.4,46.4, 56.3, 68.5,114.7,116.0,116.9,117.2,127.8, 134.6,149.5,151.3,152.0, 155.8, 160.0 (R)-l-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol Reakční podmínky: 160 °C, 3 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHCI3;

krystalizace z abs. diethyletheru; b.t. 145-147 °C.

‘Η NMR (CDCI3): 0.89 (3H, t, >9,0), 1.46 (6H, dd, >12,0, J=3,0), 1.63 (1H, sep, >12,0), 2.32 (3H, s), 2.54 (1H, s), 3.38-3.56 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.82 (1H, m), 4.58 (2H, qui, >9,0), 4.62 (2H, s(br)), 6.76-6.83 (3H, m), 7.50 (1H, s(br)), 7.78 (1H, s), 9.32 (1H, s(br)).

‘HNMR(CDC1₃): 10.9, 16.6,22.5,25.0,38.3,46.4, 56.3, 68.5, 114.7, 119.2, 125.1, 125.8, 126.4,129.4,134.6,152.0,154.1,155.8 (R)-l-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)aminoJ-9-isopropyl-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol Reakční podmínky: 160 °C, 3 h. Kapalinová chromatografie 1,5 % MeOH v CHC1₃;

krystalizace z abs. diethyletheru; b.t. 160.0-161.3 °C.

'H NMR (CDCb): 0.89 (3H, t, >9,0), 1.46 (6H, dd, >12,0, 1=3,0), 1.63 (1H, sep, >12,0), 2.32 (3H, s), 2.54 (1H, s), 3.38-3.56 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.82 (1H, m), 4.58 (2H, qui, J=9,0), 4.62 (2H, s(br)), 6.72 (1H, d, >7.50), 6.77-6.80 (2H, m), 7.50 (1H, s(br)), 7.78 (1H, s), 9.50 (1H, s(br)).

‘H NMR (CDCI3): 10.9, 20.5,22.5,25.0,39.4,46.4, 56.3,68.5,114.7, 118.3,124.1,127.4, 129.1, 133.2, 134.6,152.0,152.3,155.8,160.0 (E/Z)-N²-(4-aminocyklohexyI)-N⁶-(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)-9-isopropyl-9H-purin-2,6diamin

Reakční podmínky 160 °C, 4 h. Kapalinová chromatografie gradient 1,2, 3,4, 5 % MeOH v CHCI3 se stopou koncentrovaného NH4OH.; b.t. 136.2-137.5 °C.

'H NMR (CDCI3): 1.42 (6H, d, >6.0), 1.57-1.62 (4H,m), 1.65 (1H, sep, >6.0), 1.82-1.87 (4H, tn), 2.25 (2H, s(br)), 3.71 (3H, s), 4.68 (2H, s(br)), 6.54 (1H, d, >7.5), 6.69 (1H, d, >7.5), 6.84(1H, t, >7.5), 7.50(lH, s(br)), 7.72 (1H, s), 10.2 (1H, s(br)).

*H NMR (CDCI3): 22.5, 30.8, 33.6, 38.3,46.4,48.9,55.9,109.5, 114.7,119.0,123.1,127.0, 134.6,146.6, 148.9,152.0,153.2,155.8

N²-(N~piperazinyl)'N⁶-(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)-9-isopropyl-9H-purin-2,6-diamin Reakční podmínky: 160 °C, 4 h. Kapalinová chromatografie s gradientem 1,2,3,4, 5 % MeOH v CHCI3 se stopami koncentrovaného NH4OH.; b.t. 157.7-160.6 °C.

'H NMR (CDCI3): 1.49 (6H, d, >9.0), 2.75 (4H, m), 3.65 (4H, m), 3.78 (3H, s), 4.55 (1H, sep, >9.0), 4.70 (2H, s(br)), 6.66 (1H, t, >6.5), 6.73-6.88 (2H, m), 7.59 (1H, s(br)), 7.82 (1H, s),9.52(lH, s(br)).

^I3C NMR (CDCI3): 13.98,21.93,45.41,55.69, 59.69,110.41, 113.47,118.31, 118.31,120.56, 126.77, 135.71,143.99, 147.41, 150.54,154.23,158.40, 170.24

Tabulka 1: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+H]* b)
1	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	methyl	56,8/6,0/24,4	400,9	402,9
2	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)atnino	methyl	56,8/6,0/24,4	400,9	402,9
3	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	methyl	54,2/5,6/22,3	375,8	377,8
4	(l-hydroxymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	methyl	55,3/5,9/21,5	389,9	391,9
5	4-hydroxy-4-methylpent-2ylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzy lamino	methyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
6	2-hydroxypent-3-yl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	methyl	55,3/5,9/21,5	389,9	391,9
7	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	methyl	59,2/6,3/25,4	384,4	386,4
8	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	methyl	59,2/6,3/25,4	384,4	386,4
9	(1 -hydroxymethyl)propylamÍTio	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	methyl	56,6/5,9/23,3	359,4	361,4
10	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	methyl	56,8/6,0/24,4	400,9	402,9
11	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	methyl	56,8/6,0/24,4	400,9	402,9
12	2-hydroxypetit-3-ylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	methyl	55,3/5,9/21,5	389,9	391,9
13	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	methyl	63,0/7,1/25,7	380,5	382,5
14	4-aminocyklchexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	methyl	63,0/7,1/25,7	380,5	382,5
15	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl )amino	methyl	59,6/6,5/24,5	341,4	343,4
16	2-hydroxy-2-methylpent-3ylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyi)amiňů	methyl	62,5/7,3/21,9	383,5	385,5
17	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzy1)amino	methyl	63,0/7,1/25,7	380,5	382,5
18	(1 -hydroxy methyl)propylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amtno	methyl	60,6/6,8/23,6	355,4	357,4
19	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-5-mcthylbenzyl)amino	methyl	61,6/7,1/22,7	369,4	371,4
20	2-aminocyklohexylamino	(2,3 -dihydroxybenzyl )amino	methyl	59,5/6,6/25,6	382,4	384,4
21	4-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	methyl	59,5/6,6/25,6	382,4	384,4
22	(l-hydroxymethyl)propyl amino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	methyl	57,0/6,2/23,5	357,4	359,4
23	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
24	2-hydroxypent-3-ylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
25	2-aminocyk lohexyl amino	(2,4-dihydroxyben?yl)amino	methyl	59,5/6,6/25,6	382,4	384,4
26	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2,4-dihydroxybcnzyl)amino	methyl	57,0/6,2/23,5	357,4	359,4
27	(1 -hydro xymethy 1-2methyl)propylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
28	2-aminocyklohcxylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	methyl	59,5/6,6/25,6	382,4	384,4
29	4-hydroxy cyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzy!)aniino	methyl	59,4/6,3/21,9	383,4	385,4
30	(1 -hydroxy me thy 1 Jpropy 1 am i no	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	methyl	57,0/6,2/23,5	357,4	359,4
31	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	methyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
32	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	methyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
33	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	methyl	57,0/6,2/23,5	357,4	359,4
34	(1 -hydroxymethyl)propylam ino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
35	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyllamino	methyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
36	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	methyl	60,3/6,6/21,1	397,5	399,5
37	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyi)amino	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4

38	(l-hydroxymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	methyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,5
39	2-hydroxy pent-3-ylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	methyl	59,/6,8/21,8	385,4	387,4
40	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	methyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
41	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	methyl	60,3/6,6/21,1	397,5	399,5
42	(l-hydroxymethyljpropylaniino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amirio	methyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
43	2-hydroxypent-3-ylamino	(2,3-dihydroxy-4-mcthoxybenzyl)aniino	methyl	56,7/6,5/20,9	401,4	403,4
44	2-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxy-5-methoxybenzyl)amino	methyl	58,1/6,6/23,7	412,5	414,5
45	4-hydroxycyklohexylamino	(2,3-díhydroxy-5-methoxybenzyl)amino	methyl	58,0/6,3/20,3	413,5	415,5
46	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino	methyl	52,0/5,4/21,4	391,8	393,8

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + H₂O + NH₃

Tabulka 2: Sloučeniny připravené způsobem podle přikladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+HJ* b)
47	2-aminocyklohcxylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	ethyl	57,8/6.3/23,6	414,9	416,9
48	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	ethyl	57,8/6,3/23,6	414,9	416,9
49	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	ethyl	54,2/5,6/22,3	375,8	377,8
50	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)antino	ethyl	55,3/5,9/21,5	389,9	391,9
51	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	ethyl	60,1/6,6/24,5	398,5	400,5
52	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	ethyl	57,7/6,2/22,5	373,4	375,4
53	2-aminocyklohcxylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	ethyl	57,8/6,3/23,6	414,9	416,9
54	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyI)amino	ethyl	57,8/6,3/23,6	414,9	416,9
55	2-hydroxy pen t-3-ylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	ethyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
56	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	ethyl	63,8/7,4/24,8	394,5	396,5
57	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	ethyl	63,8/7,4/24,8	394,5	396,5
58	2-hydroxy-2-methylpent-3ylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	ethyl	63,3/7,6/21,1	397,5	399,5
59	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5 -methylbenzyl lamino	ethyl	63,8/7,4/24,8	394,5	396,5
60	4-aminocyklohexylaminú	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	ethyl	63,8/7,4/24,8	394,5	396,5
61	(1 -hydroxymethyl )propyl amino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	ethyl	61,6/7,1/22,7	369.4	371,4
62	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	ethyl	62,5/7,3/21,9	383,5	385,5
63	4-aminocyklohexyl amino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	ethyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
64	(l-hydroxymcthyl)propylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	ethyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
65	2-aminocyklohexylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	ethyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
66	(l -hydroxymethyl)propy]aniino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	ethyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
67	2-aminocyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	ethyl	60,4/6,9/24,7	396,5	398,5
68	4-hydroxycyklohe?tylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)arnino	ethyl	60,3/6,6/21,09	397,5	399,5
69	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2,5-dihydroxybcnzyl)amino	ethyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
70	4-aminocyklohexylanuno	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	ethyl	61,3/7,1/23,8	410,5	412,5
71	2-hydroxypropylamitio	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	ethyl	58,1/6,5/22,6	371,4	373,4
72	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-4-mcthoxybenzyl)amino	ethyl	61,3/7,1/23,8	410,5	412,5
73	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	ethyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4

74	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	ethyl	61,2/6,8/20,4	411,5	413,5
75	(I-hydroxy me thyl)propylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenxyl)amino	ethyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a, + H₂O + NH₃

Tabulka 3: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURJNU	CHN ANALÝZY	MS(ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+H]⁴b)
76	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	58,7/6,6/22,8	428,9	430,9
77	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	58,7/6,6/22,8	428,9	430,9
78	2-hydroxypropyl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	55,3/5,9/21,5	389,9	391,9
79	(l-hydroxymethyl)propyiamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
80	(1 -hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2-hydroxy-5*chlorbenzyl)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
81	2-hydroxy-2-methylpropyl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
82	3-hydroxy-3-methylbut-2-yiamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyI)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
83	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
84	4-hydroxy-4-methyIpent-2ylamino	(2-hydroxy-5-chIorbenzyl)amino	isopropyl	58,3/6,8/19,4	431,9	433,9
85	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
86	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopropyl	61,0/6,8/23,7	412,5	414,5
87	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbcnzyl)amino	isopropyl	61,0/6,8/23,7	412,5	414,5
88	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopropyl	57,7/6,2/22,5	373,4	375,4
89	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopropyl	58,8/6,5/21,6	387,4	389,4
90	2-hydroxy-2-methylpent-3ylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopropyl	60,6/7,0/20,2	415,5	417,5
91	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopropyl	59,7/6,8/20,1	401,5	403,5
92	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	isopropyl	58,7/6,6/22,8	428,9	430,9
93	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)atnino	isopropyl	58,7/6,6/22,8	428,9	430,9
94	(1 -hydroxymcthyl)propyiamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	isopropyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
95	(1 -hydrůxymethyl-2methyl)propylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
9«	2-hydroxy-2-methyl propyl amino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	isopropyl	56,4/6,2/20,8	403,9	405,9
97	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	isopropyl	57,3/6,5/20,1	417,9	419,9
98	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-niethylbenzyl)amino	isopropyl	64,5/7,6/23,9	408,5	410,5
99	4-aminocykiohcxylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	isopropyl	64,5/7,6/23,9	408,5	410,5
100	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	isopropyl	61,6/7,1/22,7	369,4	371,4
101	(1-hydro xymethyllpropylamino	(2-hydroxy-3-mcthylbenzyl)amino	isopropyl	62,5/7,3/21,9	383,5	385,5
102	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-3-methyIbenzyl)amino	isopropyl	63,3/7,6/21,1	397,5	399,5
103	2-hydroxy-2-methylpent-3ylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	isopropyl	64,1/7,8/20,4	411,5	413,5
104	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-3-mcthylbenzyl)amino	isopropyl	63,3/7,6/21,1	397,5	399,5
105	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)anrino	isopropyl	64,5/7,6/23,9	408,5	410,5
106	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	isopropyl	64,5/7,6/23,9	408,5	410,5
107	(1-hydroxymethyl jpropylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	isopropyl	62,5/7,3/21,9	383,5	385,5

108	3-hydroxy-3-methyibutylamino	(2-hydroxy-5-methyl benzyljamino	isopropyl	63,3/7,6/21,1	397,5	399,5
109	2-hydroxy-2-mcthylpent-3ylamino	(2-hydroxy-5-methylbcnzyl)amino	isopropyl	64,1/7,8/20,4	411,5	413,5
no	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-5-methyl benzyljamino	isopropyl	63,3/7,6/21,1	397,5	399,5
111	2-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	isopropyl	61,3/7,1/23,8	410,5	412,5
112	4-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)ammo	isopropyl	61,3/7,1/23,8	410,5	410,5
113	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2,3-d ihydroxybenzyljamino	isopropyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4
114	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
115	4-hydroxy-4-methylpent-2ylamino	(2,3 -dihydroxy benzyljamino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
11«	2-hydroxy-2-methylpent-3ylamino	(2,3-d ihydroxybenzyljamino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
117	2-hydroxypent-3-ylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
118	2-aminocyklohexylamino	(2,4-dihydroxy benzyljamino	isopropyl	61,3/7,1/23,8	410,5	412,5
119	(l-hydroxymcthyl)propylamino	(2,4-dihydroxy benzyljamino	isopropyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4
120	(1 -hydroxymethyl-2methyljpropylam ino	(2,4-dihydroxybenzylJamino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
121	2-aminocyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	isopropyl	61,3/7,1/23,8	410,5	412,5
122	4-hydroxycyklohexylamino	(,5-dihydroxybenzylJamino	isopropyl	61,2/6,8/20,4	411,5	413,5
123	(1 -hydroxy methyl Jpropylamino	(3,5-dihydroxybenzyl)amino	isopropyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4
124	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,5-d ihydroxybenzyljamino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
125	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amiiio	isopropyl	62,1/7,3/23,0	424,5	426,5
12«	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-melhoxy benzyljamino	isopropyl	62,1/7,3/23,0	424,5	426,5
127	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopropyl	59,1/6,8/21,8	385,4	387,4
128	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hy droxy-3-methoxy benzyljamino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
129	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
130	2-hydroxy-2-methylpropylamino	(2-hydroxy-3 -methoxybenzyljamino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
131	3-hydroxy-3-methylbut-2-ylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
132	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
133	4-hydroxy4-methylpent-2ylamino	(2-hydroxy-3-meihoxybenzyl)amino	isopropyl	61,6/7,5/19,6	427,5	429,5
134	2-hy drox y p en t-3-y 1 atn Í η o	(2-hydroxy-3-mcthoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
135	2-aminoethylamino	(2-hy droxy-3-methoxy benzyljamino	isopropyl	58,2/6,8/26,4	370,4	372,4
13«	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopropyl	61,9/6,8/19,7	425,5	427,5
137	2-aminocyklohexylainino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	isopropyl	62,1/7,3/23,0	424,5	426,5
138	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-4-melhoxy benzyl Jamino	isopropyl	62,0/7,1/19,7	425,5	427,5
139	(I -hydroxymethyljpropylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
140	(1-hydro xymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
141	2-hydroxy-2-methylpropyl amino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
142	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	isopropyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
143	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methOXybenzylJamino	isopropyl	62,1/7,3/23,0	424,5	426,5
144	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino	isopropyl	58,9/6,6/19,6	427,5	429,5 ----J-T-
145	(1 -hydroxymethyljpropylamino	(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino	isopropyl	54,9/6,1/23,6	414,4	416,4

146

(1-hydroxy methyl-2methyljpropylamino

(2-hydroxy-5-nítrobenzyl)amino

isopropyl

55,9/6,3/22,8

428,5

430,5

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + H?O + NHj

Tabulka 4: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBST1TUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZY	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-Η]’ a)	[M+H]⁺b)
147	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	propyl	58,7/6,6/22,8	428,9	430,9
148	4-hydroxycyklohexy lamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	propyl	58,5/6,3/19,5	429,9	431,9
149	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	propyl	57,7/6,2/22,5	373,4	375,4
150	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	propyl	62,5/7,3/21,9	383,5	385,5
151	heptylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	propyl	67,6/7,9/20,6	407,5	409,5
152	(l-hydroxymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	propyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
153	2-hydroxy-2-methylpropylam ino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	propyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
154	3-hydroxy-3-mcthylbat-2-ylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	propyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5
155	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	propyl	60,0/7,1/21,0	399,5	401,5
156	4-hydroxy-4-methylpent-2ylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)aniino	propyl	60,9/7,3/20,3	413,5	415,5

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + H₂O + NH₃

Tabulka 5: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZY	MS (ZMD). ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+H]* b)
157	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	cyklohexyl	61,3/6,9/20,9	469,0	471,0
158	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	cyklohexyl	59,4/6,6/18,9	444,0	446,0
159	(l-hydroxymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	cyklohexyl	60,2/6,8/18,3	458,0	460,0
160	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	cyklohexyl	63,6/7,1/21,6	452,6	454,6
161	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-flutirbenzyl)amino	cyklohexyl	63,6/7,1/21,6	452,6	454,6
162	(l-hydroxymethyl)propyl amino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	cyklohexyl	61,7/6,8/19,6	427,5	429,5
163	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	cyklohexyl	61,3/6,9/20,9	469,0	471,0
164	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino	cyklohexyl	66,8/7,9/21,8	448,6	450,6
165	2-hydroxy-2-methylpent-3y lamino	(2-hydroxy-3-mcthylbenzyl)amino	cyklohexyl	66,3/8,0/18,6	451,6	453,6
166	4-aminocyklohexyl amino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amiiio	cyklohexyl	66,8/7,9/21,9	448,6	450,6
167	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	cyklohexyl	65,1/7,6/19,8	423,5	425,5
168	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-5-mcthylbcnzyl)amino	cyklohexyl	65,7/7,8/19,2	437,6	439,6
169	2-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	cyklohexyl	63,8/7,4/21,7	450,6	452,6
170	4-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzy1)amino	cyklohexyl	63,8/7,4/21,7	450,6	452,6

171	(1 -hydroxymetliyl)propylami no	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	cyklohexyl	62,0/7,1/19,7	425,5	427,5
172	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	cyklohexyl	62,7/7,3/19,1	439,5	441,5
173	2-aminocyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amitiú	cyklohexyl	63,8/7,4/21,7	450,6	452,6
174	2-hydroxypropyl amino	(2-hydroxy-3methoxybemyl)amino	cyklohexyl	62,0/7,1/19,7	425,5	427,5
175	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-3methoxybenzy l)ami no	cyklohexyl	62,7/7,3/19,1	439,5	441,5
176	2-hydroxy pent-3-y lamino	(2-hydroxy-3methoxyben2yl)amino	cyklohexyl	63.4/7,5/18,5	453,6	455,6
177	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-4methoxybenzyljamino	Cyklohexyl	64,5/7,6/21,1	464,6	466,6
17»	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5mcthoxybenzyl)amino	cyklohexyl	62,7/7,3/19,1	439,5	441,5

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + H₂O + NHj

Tabulka 6: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PUR1NU	CBN ANALÝZY	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+H]⁴b)
179	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	benzyl	62,8/5,9/20,5	477,0	479.0
180	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	benzyl	62,8/5,9/20,5	477,0	479,0
181	2-hydroxypropyl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	benzyl	60,2/5,3/19,2	437,9	439,9
182	(1-hydroxymethyl )p to pyl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	benzyl	61,0/5,6/18,6	451,9	453,9
183	(l-hydroxymethy1-2methyl)propyl amino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	benzyl	61,7/5,8/18,0	466,0	468,0
184	4-hydroxy-4-methylpent-2ylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amíno	benzyl	62,4/6,1/17,5	480,0	482,0
185	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-5-chlorbcnzyl)amino	benzyl	61,7/5,8/18,0	466,0	468,0
186	2-aminocyklohexylatnino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	benzyl	65,1/6,1/21,2	460,5	462,5
187	4-aminocyklohexylamino	(2-liydroxy-5-fluorbenzyl)amino	benzyl	65,1/6,1/21,2	460,5	462,5
188	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	benzyl	63,3/5,8/19,3	435,5	437,5
189	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	benzyl	62,8/5,9/20,5	477,0	479,0
190	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	benzyl	62,8/5,9/20,5	477,0	479,0
191	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino	benzyl	61,7/5,8/18,0	466,0	468,0
192	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-mcthylbcnzyl lamino	benzyl	68,3/6,8/21,4	456,6	458,6
193	4-aminocyklohcxylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amiiio	benzyl	68,3/6,8/21,4	456,6	458,6
194	2-hydroxy'2'metliylpent-3ylamino	(2-hydroxy-3-methylbenzyllamino	benzyl	67,8/7,0/18,3	459,6	461,6
195	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methylbcnzyl lamino	benzyl	68,3/6,8/21,4	456,6	458,6
196	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-tnethylbenzyl)amino	benzyl	68,3/6,8/21,4	456,6	458,6
197	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-mcthylbenzyl)amino	benzyl	66,7/6,5/19,4	431,5	433,5
198	3-hydroxy-3-methylbutylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	benzyl	67,2/6,8/18,8	445,5	447,6
199	2-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	65,3/6,4/21,3	458,5	450,5

200	4-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	65,3/6,4/21,3	458,5	460,5
201	(1 -hydroxy me thy l)propyl amino	(2.3-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	63,6/6,0/19,3	433,5	435,5
202	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	64,3/6,3/18,7	447,5	449,5
203	2-hydroxypent-3-ylamino	(2,3-dihydroxybenzyl )amino	benzyl	64,3/6,3/18,7	447,5	449,5
204	2-aminocyklohexylainino	(2,4-dihydroxy benzyl )antino	benzyl	65,3/6,4/21,3	458,5	460,5
205	(l-hydtoxymethyl)propyl amino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	63,6/6,0/19,3	433,5	435,5
20«	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	64,3/6,3/18,7	447,5	449,5
207	2-aminocyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	65,3/6,4/21,3	458,5	460,5
208	4-hydroxycyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	65,2/6,1/18,3	459,5	461,5
209	(1 -hydroxymethy Ijpropylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	benzyl	63,6/6,0/19,3	433,5	435,5
210	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3 -methoxybenzyl)amino	benzyl	65,9/6,6/20,7	472,6	474,6
211	4-aminocyklohexylainino	(2-hydroxy-3 -methoxy benzyl)amino	benzyl	65,9/6,6/20,7	472,6	474,6
212	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-3 -methoxybenzyl)amino	benzyl	64,3/6,3/18,7	447,5	449,5
213	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	benzyl	64,9/6,5/18,2	461,5	463,5
214	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-4-methoxybcnzyl)amino	benzyl	65,9/6,6/20,7	472,6	474,6
215	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	benzyl	65,8/6,4/17,7	473,6	475,6
216	(1-hydroxy methy))propylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	benzyl	64,3/6,3/18,7	447,5	449,5
217	(l-hydroxymethyl-2methyl)propylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	benzyl	64,9/6,5/18,2	461,5	463,5
218	2-hydroxypent-3-ylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)amino	benzyl	64,9/6,5/18,2	461,5	463,5
219	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	benzyl	65,9/6,6/20,7	472,6	474,6
220	2-hydroxypropylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	benzyl	63,6/6,0/19,3	433,5	435,5
221	4-hydroxycyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino	benzyl	65,8/6,4/17,7	473,6	475,6
222	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino	benzyl	59,6/5,4/21,2	462,5	464,5

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok; MeOH p.a. + H₂O + NH₃

Tabulka 7: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURINU	CUN ANALÝZY	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[%]	[M-H]’ a)	[M+Hf b)
223	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	3-pentyl	60,3/7,0/21,4	456,3	458,3
224	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	3-pentyl	58,3/6,8/19,4	431,0	433,0
225	(l-hydroxymethyl-2methyljpropylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	3-pentyl	59,1/7,0/18,8	445,0	447,0
226	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	3-pentyl	62,6/7.3/22,2	440,6	442,6
227	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-fluorbcnzyl)amino	3-pentyl	62,6/7,3/22,2	440,6	442,6
228	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	3-pentyl	60,6/7,0/20,2	415,5	417,5
229	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-methyl benzyl)amino	3-pentyl	65,9/8,1/22,4	436,6	438,6
230	4-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methyl benzyl)amino	3-pentyl	65,9/8,1/22,4	436,6	438,6
231	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	3-pentyl	64,1/7,8/20,4	411,5	413,5
232	2-aminocyklohexylamino	(2,3-dihydroxybenzyl)amino	3-pentyl	62,9/7,6/22,3	438,6	440,6
233	(1 -hydroxymethyl)propy lamino	(2,4-dihydroxybcnzyl)amino	3-pentyl	60,8/7,3/20,3	413,5	415,5

234	(1 -hydroxymethyl-Zmethyl)propylamino	(2,4-dihydroxybenzyl)amino	3-pentyl	61,7/7,5/19,6	427,5	429,5
235	2-aminocyklohexylamino	(2,5-dihydroxybenzyl)amino	3-pentyl	62,9/7,6/22,3	438,6	440,6
236	2-hydroxypropyl amino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	3-pentyl	60,8/7,3/20,3	413,5	415,5
237	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	3-pentyl	61,7/7,5/19,6	427,5	429,5
238	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3-mcthoxybenzyl)amino	3-pentyl	63,6/7,8/21,6	453,6	455,6
239	2-aniinocyklohexylamino	(2-hydroxy-4-methoxybenzyl)am ino	3-pentyl	63,6/7,8/21,6	453,6	455,6
240	(l-hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)ainino	3-pentyl	61,7/7,5/19,6	427,5	429,5

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + HjO + NHj

Tabulka 8: Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 2

	SUBSTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZY	MS (ZMD)ANALÝZA
	R2	R6	R9	[°/«]	[M-H] a)	[M+H]* b)
241	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopentenyl	60,3/7,0/21,4	456,3	458,3
242	(1 -hydroxymethyl)propylamino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino	isopentenyl	58,3/6,8/19,4	431,0	433,0
243	(l-liydroxymethyl-2· methyl)propylatnino	(2-hydroxy-5-chlorbenzyl}amino	isopenteny)	59,1/7,0/18,8	445,0	447,0
244	2-aminocyklohexyl amino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopentenyl	62,6/7,3/22,2	440,6	442,6
245	4-aminocyklohexyl amino	(2-hydroxy-5-tluorbenzyl)amino	isopentenyl	62,6/7,3/22,2	440,6	442,6
246	(1-hydroxy methyl)propy lamino	(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino	isopentenyl	60,6/7,0/20,2	415,5	417,5
247	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino	isopentenyl	65,9/8,1/22,4	436,6	438,6
248	(l-hydroxymcthyl)propylamino	(2-hydroxy-5 -methylbcnzyl)amino	isopenteny]	64,1/7,8/20,4	411,5	413,5
249	(l-hydroxymethyl}propylamino	(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino	isopentenyl	61,7/7,5/19,6	427,5	429,5
250	2-aminocyklohexylamino	(2-hydroxy-3 -methoxybenzyl)atnino	isopentenyl	63,6/7,8/21,6	453,6	455,6

a) roztok: MeOH p.a. + HCOOH

b) roztok: MeOH p.a. + H2O + NH3

Příklad 3

Testování inhibice CDK

Vybrané sloučeniny byly podrobeny měření jejich inhibičních schopností vůči purifikovaným rekombinantním kinasam cdkl/cyklin B, cdk2/cyklin E, cdk5/p25, cdk7/cyklin H a cdk9/cyclin T z důvodu určení základních vztahů mezi strukturou těchto sloučenin a jejich aktivitou.

Cdk/cyklin komplexy byly exprimovány vSí9 buňkách koinfikovaných odpovídajícími bakulovirálními vektory. Buňky byly sklizeny 70 h po infekci v lyzačním pufru (50 mM Tris pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 20 mM NaF, 1% Tween 20, inhibitory proteas) po dobu 30 min na ledu a rozpustná frakce byla získána centrifugací při 14 000 g po dobu 10 min. Proteinový extrakt byl před použitím uskladněn při -80 °C. Měření aktivity kinas bylo prováděno analýzou koncového bodu reakce a enzym byl použit v dávce, která se nachází v lineární části závislosti množství produktu na jeho koncentraci. Reakční směs obsahovala 1 mg/ml histonu coby substrátu pro cdkl, cdk2 a cdk5 (Sigma-Aldrich, typ III-S), (YSPTSPSh peptidu coby substrátu pro cdk7 a cdk9, 15 μΜ ATP, 0,2 pCi [γ-³³Ρ] ATP a testovanou sloučeninu v konečném objemu 20 μΐ, vše v reakčním pufru: 50 mM Hepes pH 7,4, 10 mM MgCh, 5 mM EGTA, 10 mM 2-glycerolfosfátu, 1 mM NaF, 1 mM DTT a inhibitory proteas. Po 30 min byla inkubace zastavena přídavkem 5% H3PO4 a pak byly bazické proteiny od nízkomolekulámích látek odděleny vazbou na fosfocelose. Měření inhibice CDK bylo prováděno bezfílmovým digitálním radiografíckým systémem BAS 1800. Aktivita CDK byla vyjádřena jako procento maximální aktivity (tedy reakce bez jakéhokoliv inhibitoru), Síla inhibitoru byla vyjádřena hodnotou IC50, která byla určena grafickou analýzou závislosti aktivity CDK na koncentraci daného inhibitoru (Obr. 1).

Tabulka 9: Inhibice CDK vybranými deriváty substituovaných 6-(2hydroxybenzylamino)purinů

	SUBSTITUENTY NA PURINU	IC₃₀(rM)
	R6	R2	R9	CDK2	CDK9
oc	benzyl	hydroxyethylamino	methyl	7	19
1	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	methyl	0,29	0,18
2	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	methyl	0,27	0,15
3	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	methyl	0,3	0,12
4	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethyl-2methyl)propylamino	methyl	0,25	0,08
7	2-hydroxy-5-fluort>enzylamino	2-aminocyklohexylamino	methyl	0,26	0,15
8	2-hydroxy-5-tluorbenzyiamino	4-aminocyklohcxylammo	methyl	0,25	0,12
9	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	methyl	0,3	0,17
31	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	2-aminocyklohexylam ino	methyl	0,26	0,19
32	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	4-aminocyklohexylamino	methyl	0,22	0,18
34	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	(1-hydroxymethylpropyljamino	methyl	0,27	0,16
48	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	ethyl	0,14	0,09
50	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	ethyl	0,13	0,12
51	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	ethyl	0,16	0,1
59	2-hydroxy-5-methylbcnzylamino	2-aminocyklohexylamino	ethyl	0,12	0,05
70	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	4-aminouyklQhexylamino	ethyl	0,11	0,07
73	2-hydroxy4-methoxybenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	ethyl	0,17	0,09
ROSC	benzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	0,1	0,7
OCII	2-hydroxy benzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	0,1	0,06
76	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	0,05	0,03
77	2-hydroxy-5-chlorbenzy lamino	4-aminocyklohexylamino	isopropyl	0,04	0,01

79	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethy!propyl)amino	isopropyl	0,07	0,04
80	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(l-hydroxymethyl-2methyljpropy lamino	isopropyl	0,06	0,05
81	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-hydroxy-2-methylpropyl amino	isopropyl	0,03	0,02
82	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	3-hydroxy-3-methylbut-2enyl amino	isopropyl	0,04	0,01
83	2-hydroxy-5-chlorbcnzylamino	3-hydroxy-3-methylbuty lamino	isopropyl	0,02	0,007
86	2-hydroxy-5-fluorbenzyl amino	2-aminocyklohexylaminc	isopropyl	0,04	0,02
87	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	isopropyl	0,02	0,008
89	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl )amino	isopropyl	0,05	0,02
101	2-hydroxy-3-methylbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl lamino	isopropyl	0,1	0,04
107	2-hydroxy-5-methyl benzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	0,02	0,006
113	2,3-dihydroxybenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	isopropyl	0,07	0,04
119	2,4-dihydroxybcnzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	0,08	0,05
121	2,5-dihydroxybenzylamino	2-aminocykiohexylamino	isopropyl	0,08	0,07
125	2-hydroxy-3-methoxy benzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	0,02	0,007
126	2-hydroxy-3-methoxy benzylamino	4-aminocyklohexylamino	isopropyl	0,02	0,009
128	2-hydroxy-3-methoxy benzyl amino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	isopropyl	0,07	0,04
127	2-hydroxy-3-methoxybenzyl amino	2-hydroxypropylamino	isopropyl	0,08	0,06
136	2-hydroxy-3-methoxybenzyl amino	4-hydroxycyklohcxylamino	isopropyl	0,05	0,03
139	2-hydroxy-4-methoxy benzyl amino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	isopropyl	0,09	0,04
223	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	3-pentyl	0,08	0,05
224	2-hydroxy-5-chlorbenzyl amino	(I -hydroxymethylpropyljamino	3-pentyl	0,09	0,06
227	2-hydroxy-5-fluorbenzyl amino	4-aminocyklohexylamino	3-pentyl	0,06	0,01
228	2-hydroxy-5-fluorbenzyl amino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	3-pentyl	0,07	0,04
237	2-hydroxy-3-methoxy benzylamine	(1 -hydroxymethylpropyljamino	3-pentyl	0,04	0,02
238	2-hydroxy-3-methoxy benzylamine	2-aminocyklohexylamino	3-pentyl	0,06	0,04
240	2-hydroxy-5-methoxy benzylamine	(1 -hydroxymethylpropyljamino	3-pentyl	0,1	0,07

OČ - Olomoucin, OCII - Olomoucin Π, Rose - Roskovitin, známé z předchozího stavu techniky

Tabulka 9 shrnuje inhibiční schopnosti nově připravených sloučenin vůči CDK9 a CDK2. Pro srovnání jsou uvedena i data prototypových sloučenin jakou jsou Olomoucin II a Roskovitin. Většina nových derivátů vykazuje významný nárůst inhibiční aktivity v enzymových testech s CDK. Modifikace benzylového kruhu hydroxylovou skupinou v ortho-poloze zpravidla vedla ke zvýšení inhibiční aktivity testovaných sloučenin vůči CDK9.

Příklad 4

Modulace aktivity andrenergních receptorů

Linie gliálních potkaních buněk C6 (ATCC CCL107) byla kultivována jako monovrstva ve směsi média Ham F10 a minimálního esenciálního média (poměr 1:1) bez fetálního séra, doplněném 2mM L-glutaminem, 1% (vol/vol) vitamíny minimálního esenciálního média (lOOx), 1% (vol/vol) neesenciálními aminokyselinami minimálního esenciálního média (lOOx), penicilinem (100 U/ml), streptomycinem (100 μg/ml) a seleničitanem sodným (30 nM). Buňky byly inkubovány při 37 °C ve vlhčené atmosféře. Vliv sloučenin na buňky byl sledován v logaritmické fázi jejich růstu při hustotě 2,5 x 10 buněk/cm . Produkce cytoplasmatického cAMP byla indukována přídavkem 5 μΜ (-)Ísoproterenolu. Po 30 min inkubaci při 37 °C bylo médium odstraněno a množství cAMP v buňkách bylo stanoveno pomocí imunochemického kitu (Amersham). Hodnoty IC50 pro testované sloučeniny byly určeny z křivek závislosti koncentrace cAMP na koncentraci testovaných sloučenin (provedeno v duplikátech). Vliv nově připravených derivátů substituovaných 6-(2hydroxybenzylaminojpurinů byl měřen po současné aplikaci s isoproterenolem.

Tabulka 9: Modulace aktivity β-adrenergních receptorů vybranými novými deriváty substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamino)purinů

	SUBSTITUENTY NA PURINU
	R6	R2	R9	ÚČINEK	1C_S, (μΜ)
oc	benzyl	hydroxyethylamino	methyl	neaktivní	neaktivní
ROSC	benzyl	(I -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	neaktivní	inactive
86	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	inhibice	8 ±2
105	2-hy droxy-3-methylbcnzy 1 amino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	inhibice	12±4
106	2-hydroxy-5-methy1benzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	inhibice	7+2
125	2-hydroxy-3-methoxy benzyl amino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	inhibice	2±0
126	2-hydroxy-3-methoxy benzylamino	4-aminocyklohexylam ino	isopropyl	inhibice	4±1
79	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	isopropyl	l.5-násobná aktivace
80	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethyl-2methyl)propylamino	isopropyl	1.8-násobná aktivace
81	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-hydroxy-2methylpropylamino	isopropyl	1 7-násobná aktivace
89	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	1.9-násobná aktivace
113	2,3-dihydroxybenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	2.3-násobná aktivace
119	2,4-dihydroxy benzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	1.6-násobná aktivace
123	2,5-dihydroxy benzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	17-násobná aktivace
124	2,5-dihydroxybenzylamino	(1 -hy droxy me Ihy 1 -2 -me th y 1propyl)amino	isopropyl	2.1-násobná aktivace

Příklad 5

Cytotoxická aktivita nových sloučenin in vitro

Cytotoxicita sloučenin je jednou zjejich klíčových vlastností a určují jejich protinádorový účinek in vivo. Jednou z možností, jak cytotoxickou aktivitu sloučenin zjišťovat, je měření poklesu metabolické aktivity živých buněk. Jedna z metod kvantifikace buněčné proliferace a cytotoxicity je založena na využití fluoresceinového derivátu Calcein AM, aplikovaného mj. při hledání nových léčiv nebo zjišťování chemosensitivity. Principem využití je metabolizace Calceinu AM živými buňkami na intenzivně fluoreskující derivát, akumulovaný v cytoplasmě. Specifická fluorescence produktu v buňkách je přímo-úměmá množství živých buněk v kultuře.

Pro studium cytotoxicity nových sloučenin byla použita řada nádorových buněčných linií: MCF7 (adenokarcinom prsu), K562 (chronická myelogenní leukemie), HOS (osteosarkom), HeLa (cervikální karcinom), HL 60 (promyelocytámí leukemie), G 361 (maligní melanom), CEM (lymfoblastická leukemie). Všechny linie byly udržovány v mediu DMEM (Gibco BRL) doplněném 10% (v/v) fetálního telecího séra a L-glutaminem při 37 °C v atmosféře obohacené 5% CO2. Pro měření cytotoxicity byly buňky v médiu vysety do mikrotitrační desky (10⁴ na jamku) a po minimálně 2 hod byly knim přidány testované sloučeniny v různých koncentracích v rozmezí 0,1 - 100 μΜ. Po třech dnech kultivace byl přidán detekční roztok Calceinu AM (Molecular Probes) a po 1 hod byla pomocí mikrodestičkového fluormetru Fluorskan Ascent (Microsystems) měřena fluorescence. Z grafu závislosti fluorescence, úměrné počtu živých buněk, na koncentraci testované látky, byly odečteny hodnoty GI50, které představují koncentraci látek způsobující pokles počtu živých buněk na 50% (Obr. 2).

Cytotoxický potenciál nových sloučenin byl studován na souboru buněčných linií s různým histologickým původem. Všechny testované sloučeniny vykazovaly výrazný cytotoxický účinek na většinu buněčných linií (např. Tab. 10). Nové sloučeniny měly účinek zejména na liniích s prokázanými mutacemi v genech regulujících buněčný cyklus, jako jsou HL-60, BT549, Hela, U2OS, MDA-MB231, a další. Tyto výsledky naznačují, že nové sloučeniny mohou mít výrazný účinek také na nádory in vivo, a to nezávisle na funkčnosti či mutacích genů regulujících cyklus (např. nádorové supresory p53, Rb, atd.).

Tabulka 10: Cytotoxické schopnosti vybraných nově připravených derivátů substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamíno)purinů.

	SUBSTITUENTY NA PURINU	IC_S0(pM)
	R6	R2	R9	MCF7	K562	HOS
oc	benzyl	2-hydroxy ethylamino	methyl	133	163	144
1	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	methyl	43	78	65
2	2-hydroxy-5-chlorbenzyl amino	4-aminocyklohexylamino	methyl	46	82	64
3	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxy methylpropyljamino	methyl	55	84	71
7	2-hydroxy-5-fluorbenzyl amino	2-aminocyklohexylamino	methyl	35	61	47
8	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	methyl	39	64	50
9	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(1 -hydroxy me thylpropyljamino	methyl	42	67	53
31	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	2-aminocyklohexylamino	methyl	36	60	45
47	2-hydroxy-5-chlorbcnzylamino	2-aminocyklohexylamino	ethyl	32	55	41
50	2-hydroxy-5-chlorbenzy)amino	(1-hydroxy methylpropyljamino	ethyl	38	58	44
51	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	4-aminocyklohexylamino	ethyl	32	52	40
ROSC	benzyl	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	12,3	45,5	24,3
76	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	2,8	9,9	4,1
79	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	3,5	11,9	5,3
86	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	1,8	7,6	3,2
89	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	3,2	14,7	5,3
113	2,3-dihydroxy benzylamino	(l-hydroxymethylpropyi)amino	isopropyl	4,5	7,8	8,4
119	2,4-dihydroxy benzylamino	(l-hydroxymethylpropy1)amino	isopropyl	4,3	13	8,1
107	2-hydroxy-5-methylbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropy Lamino	isopropyl	6,6	24,9	18
123	2,5-dihydroxybenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	3,2	5,3	3,7
125	2-hydroxy-3-metlioxy benzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	3,2	10,9	n.t.
128	2-hydroxy-3-methoxy benzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)ammo	isopropyl	5,0	15,5	5,9
143	2-hydroxy-5-methoxybenzy lamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	5,0	13,1	n.t.
179	2-hydroxy-5-chlorbenzy lamino	2-amínocyklohexy lamino	benzyl	8,7	19,5	10,2
186	2-hydtoxy-5-fluorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	benzyl	6,9	15,4	9,3
223	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	2-aminocyklohexylamino	3-pentyl	4,8	17,6	6,8
224	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	3-pcntyl	5,5	15,6	7,2
226	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	2-aminocyklohexylammo	3-pentyl	4,1	12,4	4,3
228	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	3-pentyl	4,6	13,2	6,8

Příklad 6

Inhibice CDK9 a inaktivace RNA polymerasy II

Vliv nových sloučenin na aktivitu CDK.9 v buňkách byl monitorován mimo jiné také specifickou fosforylací jejich substrátů jako je RNA polymerasa II, a to metodou imunoblottingu. Pro tuto analýzu byly buňky ovlivněné studovanými sloučeninami sklizeny škrabkou, opláchnuty 3x vychlazeným PBS a homogenizovány v lyzačním pufru (50 mM Tris, pH 7,4, 250 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM NaF, 1 mM Na₃VO₄, 1% Nonidet P40) doplněném o inhibitory' proteas a fosfatas (Sigma-Aldrich, USA). Homogenáty obsahující 20 μg proteinů byly rozděleny SDS-polyakrylamidovou elektroforézou (SDS-PAGE) a přeneseny na nitrocelulosovou membránu. Membrány byly blokovány v 5% nízkotučném mléku v PBS s 0,1% Tween 20 a proteiny na nich byly detekovány specifickými protilátkami. Primární protilátky specifické pro RNA polymerasu II zahrnovaly (Santa Cruz Biotechnology, California, USA): (i) N-20 použitá v koncentraci 1 pg/ml, (ii) H14, specifická pro fosforylovanou formu serinu-5, použitá v koncentraci 6 pg/ml a (iii) H5, specifická pro fosforylovanou formu serínu-2 použitá v koncentraci 4 μg/ml. Další primární protilátky zahrnovaly (iv) anti-p53 (klon DO-1) použitá v koncentraci 1 pg/ml, (v) anti-p21^WAF1 (klon 118), použitá v koncentraci 1 pg/ml), (vi) anti-actin (A-2066, Sigma-Aldrich St Louis, Missouri, USA) použitá v koncentraci 1 pg/ml, (vii) anti-T-antigen (419, in house), použitá v koncentraci 1 pg/ml. Všechny primární protilátky byly ředěny v blokovacím médiu. Sekundární protilátky, králičí imunoglobuliny proti myším imunoglobulinům a prasečí imunoglobuliny proti králičím imunoglobulinům (DAKO, Denmark), byly značeny křenovou peroxidasou a jejich aktivita byla vizualizována chemiluminiscenčním kitem ECL (Amersham-Pharmacia, Little Chalfont, UK).

C-terminální doména největší podjednotky RNA polymerasy II je důležitou regulační doménou, často označovanou jako CTD (C-terminal domain), a je fosforylována specificky CDK9 na serinech 2. Sledovali jsme proto vliv nových sloučenin na fosforylaci CTD serinů 2 a 5. Úroveň fosforylace obou serinových zbytků v buňkách MCF-7 vystavených vlivu nových sloučenin výrazně klesala, jak je doloženo na příkladu sloučeniny 128 (Obr. 3). Tyto experimenty jasně dokazují inhibiční vliv nových sloučenin na CDK a RNA polymerasu II a navíc dokládají, že mechanismus cytotoxického působení těchto sloučenin je závislý na jejich vlivu na transkripci.

Příklad 7

Indukce nádorového supresoru p53 v nádorových buňkách

Silná protinádorová účinnost nově připravených sloučenin může být dána také jejich pozitivním vlivem na stabilitu a aktivitu nádorového supresoru p53, která je pravděpodobně dána inhibicí CDK2, CDK7 a CDK9. Protein p53, akumulovaný v jádrech buněk vystavených vlivu nových sloučenin, totiž stimuluje expresi přirozeného inhibitoru CDK, proteinu p21^WAFI, který dále zesiluje inhibiční vliv sloučenin na buněčný cyklus. Pro kvantifikaci vlivu sloučenin na transkripční aktivitu proteinu p53 byla měřena enzymatická aktivita produktu reporterového genu (β-galaktosidasy) v buněčné linii Arn8. Linie Am8 byla získána stabilní trasfekcí linie A375 konstruktem pRGCAfoslacZ obsahujícím p53-responzivní reporter (Frebung et al., Cancer Res., 52, 1992-6976). Tento systém umožňuje kvaltativní i kvantitativní zhodnocení vlivu nově připravených sloučenin na transkripční aktivitu závislou na p53 v buňkách. Měření je paralelně verifikováno nezávislými metodami, jako je např. immunoblotting proteinu p53 a proteinů jím kontrolovaných.

Aktivita β-gaíaktosidasy v buněčné linii Am8 byla měřena podle publikované metody. Pro měření aktivity je nutné buňky zlyzovat a enzymovou aktivitu kvantifikovat kolorimetricky dle metody popsané Sambrookem et al. (Mol. Cloning, New York, 1989). Novějším způsobem je měřeni aktivity fluorimetricky, a to specifickou fluorescencí hydrolytického produktu získaného z methylumbelliferyl-p-D-galaktopyranosidu. Buněčné linie použité pro tyto experimenty (Am8 a MCF-7) byly kultivovány v mediu DMEM doplněném supplemented 10% fetálniho telecího séra za standardních podmínek.

Pro analýzu immunoblottingem byly buňky ošetřené studovanými sloučeninami sklizeny škrabkou, opláchnuty 3x vychlazeným PBS a homogenizovány v lyzačním pufru (50 mM Tris, pH 7,4, 250 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM NaF, 1 mM Na₃VO₄, 1% Nonidet P40) doplněném o inhibitory proteas a fosfatas (Sigma-Aldrich, USA). Homogenáty obsahující 20 pg proteinů byly rozděleny SDS-polyakrylamidovou elektroforézou (SDS-PAGE) a přeneseny na nitrocelulosovou membránu. Membrány byly blokovány v 5% nízkotučném mléku v PBS s 0,1% Tween 20 a proteiny na nich byly detekovány specifickými protilátkami. Byly využity protilátky specifické pro p53 (klon DO-1), p21^WAF1 (klon 118), PARP-1 (2C10, Sigma-Aldrich St Louis, Missouri, USA), Mcl-1 (S-19, Santa Cruz, USA), všechny aplikované v koncentraci 1 pg/ml v blokovacím médiu. Sekundární protilátky, králičí imunoglobuliny proti myším imunoglobulinům a prasečí imunoglobuliny proti králičím imunoglobulinům (DAKO, Denmark), byty značeny křenovou peroxidasou a jejich aktivita byla vizualizována chemiluminiscenčním kitem ECL (Amersham-Pharmacia, Little Chalfont, UK).

Měření proapoptotického potenciálu nových sloučenin bylo založeno na analýze enzymové activity kaspas. Pro tuto analýzu byly buňky vystavené vlivu nových sloučenin sklizeny a homogenizovány v extrakčním pufru (10 mM KC1, 5 mM Hepes, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2% CHAPS, inhibitory proteas, pH 7.4) na ledu po dobu 20 min. Homogenáty byly zbaveny nerozpustného podílu centrifugací při 10,000 g po dobu 20 min při 4 °C. Koncentrace proteinů byla stanovena metodou dle Bradfordové a lyzáty byly naředěny na stejnou koncetraci. Enzymová aktivita kaspas byla detekována po 1 hod inkubaci lyzátu se 100 μΜ Ac-DEVD-AMC použitým jako substrát (Sigma-Aldrich) ve vhodném pufru (25 mM

PIPES, 2 mM EGTA, 2 mM MgC12, 5 mM DTT, pH 7.3), Fluorescence produktu štěpení byla měřena mikrodestičkovým fluorimetrem Fluorskan Ascent (Labsystems, Helsinki, Finland) při 346 nm/442 nm (ex/em).

Vliv nově připravených sloučenin na aktivaci proteinu p53 byl prokázán měřením v buněčné linii Am8. Akumulace a aktivace p53 v těchto buňkách vystavených např. vlivu sloučeniny 128 v koncentraci 5 μΜ způsobuje aktivaci p53-responzivního promotoru a expresi genu pro β-galaktosidasu. Celková aktivita β-galaktosidasy v lyzátu buněk Am8 byla měřena fluorimetricky. Výsledky dokládají výrazný nárůst aktivity tohoto enzymu v buňkách po 12 a 24 hod ve srovnání s kontrolními neovlivněnými buňkami (typická křivka závislosti aktivity β-galaktosidasy na koncentraci testované sloučeniny je uvedena na Obr. 4). Pokles fluorescence (aktivity β-galaktosidasy) při vyšších koncentracích testované sloučeniny může být vysvětlen kompletním blokem transkripce, což způsobilo pokles exprese měřeného enzymu. Aktivita p53-závislé transkripce v buňkách Am8 byla také ověřena kolorimetricky. Typický zeleno-modrý signal chromogenního produktu enzymové reakce rozkládající substrát X-gal v ovlivněných zafixovaných buňkách in je dokumentován na mikrofotografiích na Obr. 4.

Schopnost aktivovat p53 byla dale ověřována analýzou proteinových hladin p53 a p21^WAFI v buňkách MCF-7. Akumulace proteinu p53 byla evidentní již po 4 hod působení sloučenin, ale výrazné zesílení exprese proteinu p21^WAFI bylo pozorováno teprve po 12 hod působení sloučeniny 128 (Obr. 5). Doby působení 12 a 24 hod byly vybrány pro sledováni vlivu na tyto vybrané proteiny, neboť předchozí analýzy ukázaly, že po této době jsou již proteinové hladiny ustáleny.

Většina nově připravených sloučenin vykazovala kvalitativně srovnatelné účinky, ale koncentrace indukující maximum aktivity β-galaktosidasy se lišily. Výsledky kvantitativního měření aktivity β-galaktosidasy pro některé z nových sloučenin jsou proto uvedeny v Tabulce 15, a to jako koncentrace indukující maximum enzymové aktivity. Tyto výsledky jednoznačně dokazují, že nově připravené sloučeniny jsou silnými induktory proteinu p53 a exprese jím řízené v buňkách se standardní (funkční) formou jeho genu.

Provedli jsme rovněž analýzu exprese proteinu p53 v dalších buněčných liniích, včetně nádorových linicí odvozených z nádorů prsu BT549 (mutace p53) a BT474 (mutace p53), linii kolorektálního karcinomu HT29 (mutace p53), linie osteosarkomu HOS (mutace p53) a linie mnohočetného myelomu RPMI8226 (mutace p53). V žádné z uvedených linií se exprese p53 neměnila. Dalším důležitým zjištěním bylo, že tyto linie s mutovaným p53 nejsou méně citlivé na studované látky než linie s funkčním p53.

V dalších pokusech byl sledován vliv nově připravených sloučenin na buněčné linie exprimující některé teplotně-senzítivní formy proteinu p53. Například v buněčných liniích BT474 a RPMI-8226 je exprimována teplotně-senzitivní forma p53 (substituce E285K), jehož konformace se v závislosti na teplotě mění. Při restriktivní teplotě 37 °C je exprimovaný protein p53 nefunkční, avšak při kultivaci buněk při permisivní teplotě (30 °C) je p53 konformován správně a je aktivní. Pro posouzení vlivu funkčního zapojení p53 do protinádorového účinku připravených sloučenin byly buňky RPMI-8226 kultivovány při dvou různých teplotách (restriktivní i permisivní) se vzrůstajícími koncentracemi sloučenin. Po kultivaci byly z buněk připraveny lyzáty a v nich byly imunoblottingem analyzovány hladiny některých proteinů buněčného cyklu. Sloučenina 128 podporovala akumulaci funkčního p53 v buňkách kultivovaných při permisivní teplotě, ale nijak neovlivnila hladinu p53 v buňkách při restriktivní teplotě. Tento experiment vede k závěru, že sloučenina 128 podporuje stabilizaci funkční formy p53. Funkčnost p53 při permisivní teplotě byla navíc potvrzena sledováním některých proteinů, jejichž geny jsou řízeny p53, jako jsou p21^wafl a MDM2, jejichž buněčné koncentrace působením nově připravených látek vzrostly. Při restriktivní teplotě nebyly tyto proteiny vůbec detekovány.

Pozoruhodný vliv sloučeniny 128 i roskovitinu byl také pozorován na zesílení indukci apoptózy, pokud byly tyto buňky kultivovány při permisivní teplotě. Fragmentace proteinu PARP-1 byla pozorována po aplikaci dvakrát nižších koncentrací nově připravených sloučenin než v buňkách držených při restriktivní teplotě. Podobně reagoval také antiapoptotický protein Mcl-1, jehož hladina klesala rychleji v buňkách po působení obou látek při 30 °C. Také aktivity kaspas-3/7 extrahovaných v buňkách držených v obou teplotních režimech se signifikantně lišily; byly vyšší v lyzátech připravených z buněk držených při teplotě 30 °C. Tato data dokazují, že standardní typ proteinu p53 exprimovaný v buňkách RPMI-8226 za permisivních podmínek usnanuje indukci apoptózy vyvolanou působením nových sloučenin.

Tabulka 11: Vliv vybraných derivátů substituovaných 6-(2-hydroxybenzylamino)purinů na indukci proteinu p53 v buněčné linii Am8 stabilně transfekované reportérovým genem kódujícím β-galaktosidasu (++ velmi silný, + slabý, - žádný vliv).

No	SUBSTITUENTY NA PURINU	p53 (vliv/ koncertrace maxima píku v μΜ)
	C6	C2	N9
ROSC	benzylamino	(1 -hydroxymethyl propyl)amino	isopropyl	++/23,0
OCII	2-hydtoxybenzylamino	(l-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	++/12,0
79	2-hydroxy-5-chlorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	+-/8,0
89	2-hydroxy-5-fluorbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)am ino	isopropyl	++/6,0
107	2-hydroxy-5-methylbenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyljamino	isopropyl	++ / 6_?0
114	2,3-dihydroxy benzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	++/12,0
119	2,4-dihydroxybenzy lamino	(1-hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	+ / 12,0
123	2,5-dihydroxybenzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl )amino	isopropyl	+ /11,0
125	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	2-aminocyklohexylamino	isopropyl	++/10,0
126	2-hydroxy-3-nnethoxybenzylamino	4-aminocyklohexylamino	isopropyl	++/11,0
128	2-hydroxy-3-methoxy benzylamino	(1 -hydroxymethylpropyl)amino	isopropyl	++/8,0

Příklad 8

Suché tobolky

5000 tobolek, každá obsahující jako aktivní složku 0,25 g jedné ze sloučenin zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

Složení

Aktivní složka 1250 g

Talek180 g

Pšeničný škrob120 g

Magnesium stearát 80 g

Laktosa20 g

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou protlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 9

Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g jedné z látek zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

Složení

Aktivní složka 250 g

Lauroglykol 2 litry

Postup přípravy: Prášková aktivní látka je suspendována v Lauroglykolu® (propylenglykol laurát, Gattefoseé S. A., Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých žeiatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 10

Měkké tobolky

5000 měkkých žeiatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g jedné ze sloučenin obecného vzorce I, tab. 1 a 2, zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

Složeni

Aktivní složka 250 g

PEG 400 1 litr

Tween 80 1 litr

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o Mr mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween® 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem. Ind., Inc., USA, dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na částice o velikosti 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých žeiatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)puriny obecného vzorce I

I a jejich farmaceuticky přijatelné soli, kde (R)_n znamená 1 až 4 substituenty, které mohou být stejné nebo rozdílné, přičemž tyto substituenty mohou být vybrané ze skupiny zahrnující alkyl, alkoxy, amino, halogen, hydroxy, merkapto a nitro skupinu, a

R2je R2’-NH-, ve kterém

R2’ znamená substituent vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkyl alkyl, aryl a arylalkyl, ve kterém každá z těchto skupin případně může být substituována jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, merkapto, a alkoxy skupinu, a

R9 znamená substituent vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkyl alkyl, aryl a arylalkyl skupinu, ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adičních solí s kyselinami.
2. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1 ve formě (R) nebo (S) isomerů v případě chirality v pozici R2.
3. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1 vybrané ze skupiny zahrnující 2-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ř/-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, 1^-(2hydroxy-5-chlorbenzyl)-JV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Z/-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9íř-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-mcthylpentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9--(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-91/-purin-2-yl }amino)propan-2-ol, 4-( {6-[(2-hydroxy-5- chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amÍno]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)-2-methylpropan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, A^-(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)-_JV²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9J/-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-3chlorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9 (methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Hpurin-2-yl}amino)propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-Yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9i7-purin-2-yl} amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-( {6-[(2-hydroxy-3chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Jf-purin-2-yl}ammo)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-chlorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9 £ř-purin-2-yl}amino)-2-methylpropan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]- -(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97Y-purin-2-yl}amino)butan-l -ol, 7^-(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)-7V²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-917-purine-2,6diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-91Apurin-2-yl}amino)propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9J7-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-

fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9í/-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amÍno)-2-tnethyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Hpurin-2-yl}amino)butan-l-ol, #-(2-hydroxy-5-jodobcnzyl)-A^r2-(2-aminopropyl)-9-(tnethyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-3 -methy 1-butan-1 -ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 1 N⁶-(2-hydroxy5-jodobenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ZZ-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9A-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ff-purin-2yl}amino)-2,3-dÍmethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9jF7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9/7-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-jodobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//purin-2-yl}amino)butan-l-ol, 7^-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-A²-(2-aminopropyl)-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, 2-({6-(2,5dihydroxybenzyi)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-N²-(4-aminocyklohexyl)9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//52 purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9žApurin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9J/purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, 1-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9žř-purin-2-yl} amino)propan-2-ol, 2-( {6-(2,5 -dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, 2 7^-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-/V²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purine-2,6-diamine, 2-((6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, 1-( {6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino] -9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}ammo)-2-methylpropan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-(2,5dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9íApurin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9žfpurin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, jV⁶(2-hydroxy-5-methylbenzyl)-IV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6-diamine, 2-((6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9 (methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-5-methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl )-9//-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-5methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9 //-purine-2,6-diaminc, l-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-2-methyI-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Žf-purin-2-yl}amino)-2-methyi-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2yl]amino} pentan-2-ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino] -9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, JV⁶-(2-hydroxy-3-methylbenzyl)-.V²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-927-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-3methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3-methylbenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9(methyi, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-l(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9f/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3methylbenzyl)arnino]-9-(rnethyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9H-punn-2 yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}aniino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2,3-dÍmethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-3-methylbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, M(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)-jV²-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-1 -ol, N⁶-(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl )-9H-purine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-3methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl} amino)propan-2-ol, 3-( {6-[(2-hydroxy-3 methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ZTpurin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9žf-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethylbutan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl] amino} pentan-2-ol, 1 -({6-[(2-hydroxy-3 -methoxybenzy l)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 1 -({6

[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9#-purin-2-yl} amino)propan-2-ol, 2 -({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, M(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)-A^r2-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-fluorbenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurine-2,6-diamine, N⁶-(2-hydroxy-5methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin-2-yl} amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-( {6-[(2-hydroxy-5methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97Apurin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2,3-diniethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ř/-purin2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ř/-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2hydroxy-5-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9methyl-97Apurin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5mercaptobenzyl)amino]-9-ethyl-9/Apurin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-isopropyl-9Z/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-benzyl-9Z/-purin-2-yl}amino)-2methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobcnzyl)amino]-9-methyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-ethyl-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-isopropyl-9//-purin-2yí]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)aniino]-9-cyklohexyl-9 ZApurin2-yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-bcnzyl-9H-purin-2 yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9-cyklopropyl-9í/purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-mercaptobenzyl)amino]-9cyklohexyl-9 //-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5mercaptobenzyl)amino]-9-benzyl-9H-purm-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-methyl-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-ethyl-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-isopropyl-9//-purin-2-yl}aniino)-2-niethyl-pentan-2ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 H-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl-9řf-purin-2-yl}amino)-2methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)aminoj-9-methyl-9/f-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-ethyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-isopropyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl-9//-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklopropyl-9//-purin-2yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-cyklohexyl-9 Hpurin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)amino]-9-benzyl9ž/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin-2-yl}amino)butan-l-ol, A^-(2-hydroxy-5-aminobenzyl)-JV²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9f/-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ř/-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2-hydroxy-5aminobenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ZZ-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5aminobenzyl)amÍno]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, l-({6[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/f-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 4-({6-[(2-hydroxy-5-ammobenzyl)amino]-957 (methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-927-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethylbutan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2-hydroxy-5aminobenzyl)amino]-9-(methyi, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2-hydroxy-5-aminobenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2,3dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, 7^-(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-jV² -(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)ammo]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, N⁶-(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, l-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2-yl}amino)propan-2-ol, 4-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methylpentan-2-ol, 3-({6-[(2,3-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9if-purin-2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({6-[(2,3-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, A'⁶(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-A^r2-(2-aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-97/-purine-2,6-diamine, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-3-methylbutan-l-ol, N⁶-(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)-N²-(4-aminocyklohexyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9i/-purine-2,6-diamine, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 3-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purin-2-yl}aminoj-2-methylbutan-2-ol, 4-({6-[(2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2-methyl-butan-2-ol, 4-({6-[(2,5dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9Z/-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, l-({6-[(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin2-y 1}amino)propan-2-ol, 4-({6-((2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9H-purin-2-yl}amino)-2,3-dimethyl-butan-2-ol, 3({6-((2,5-dihydroxy-4-methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin-2-yl}amino)-2-methyl-pentan-2-ol, 3-({6-[(2,5-dihydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-977-purin2-yl]amino}pentan-2-ol, l-({ 6-((2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/Apurin-2-yl}amino)-2-methyl-propan-2-ol, 2-({6[(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9ff-purin-2-yl}amino)butan-l-ol, ^-(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)-?/²-(2aminopropyl)-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9//-purine-2,6diamine, 2-({6-[(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, bcnzyl)-9H-punn-2-yl}amino)-3-methyl-butan-l-ol, 1-( {6-((2,5-dihydroxy-4chlorbenzyl)amino]-9-(methyl, ethyl, isopropyl, 3-pentyl, cyklohexyl, benzyl)-9/7-purin-2y 1} amino)-2-methyl-propan-2-ol.
4. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití jako léčiva.
5. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití jako inhibitory cyklin-dependentních kinas vybraných ze skupiny zahrnující cyklin-dependentní kinasy 2, 5, 7, a 9.
6. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití při léčbě onemocnění zahrnujících buněčnou proliferaci.
7. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití pro indukci apoptosy v živočišných buňlách.
8. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití při léčbě onemocnění zahrnujících buněčnou proliferaci, s výhodou onemocnění vybraných z onemocnění zahrnujících nádorový supresor p53 a onemocnění zahrnujících cyklin-dependentní kinasy vybrané ze skupiny zahrnující cyklin-dependentní kinasy 2, 5, 7 a 9.
9. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití při léčbě onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující nádory, asthma, kardiovaskulární, neurodegenerativní a zánětlivá onemocnění.
10. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití při léčbě onemocněnívybraných ze skupiny zahrnující nádory, restenózu, psoriázu, revmatickou artritis, lupenku, diabetes I. typu, odmítnutí transplantátu (host versus graft disease), dnu, roztroušenou sklerózu, Parkinsonovu a Alzheimerovu chorobu.
11. Substituované 6-(2-hydroxybenzylamino)purinové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití při potlačení zánětů.
12. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden substituovaný 6(2-hydroxybenzylamino)purinový derivát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 a farmaceuticky přijatelný nosič.