CZ200523A3 - Způsob zamezení okluze v zavedeném katétru za použití fibrinolytických metalloproteinas - Google Patents

Způsob zamezení okluze v zavedeném katétru za použití fibrinolytických metalloproteinas Download PDF

Info

Publication number
CZ200523A3
CZ200523A3 CZ200523A CZ200523A CZ200523A3 CZ 200523 A3 CZ200523 A3 CZ 200523A3 CZ 200523 A CZ200523 A CZ 200523A CZ 200523 A CZ200523 A CZ 200523A CZ 200523 A3 CZ200523 A3 CZ 200523A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
vascular access
access device
fibrinolytic metalloproteinase
blood
macroglobulin
Prior art date
Application number
CZ200523A
Other languages
English (en)
Inventor
Christopher F. Toombs
Original Assignee
Amgen Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc. filed Critical Amgen Inc.
Publication of CZ200523A3 publication Critical patent/CZ200523A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L29/00—Materials for catheters, medical tubing, cannulae, or endoscopes or for coating catheters
    • A61L29/04—Macromolecular materials
    • A61L29/044—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof
    • A61L29/048—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L29/045 - A61L29/047
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L29/00—Materials for catheters, medical tubing, cannulae, or endoscopes or for coating catheters
    • A61L29/14—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. lubricating compositions
    • A61L29/16—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/42—Anti-thrombotic agents, anticoagulants, anti-platelet agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Description

Způsob iéěfey okluze (zavedenéhe katétru za použití fibrinolytických metalloproteinas
Oblast techniky
Vynález se týká terapeutického podání fibrinolytických metalloproteinas, a zejména způsobu podání těchto látek in vivo prostřednictvím lokalizované dopravy do vaskulárních zátek (trombů) ve snaze způsobit destrukci sraženiny (koagulátu). Tento vynález se rovněž týká způsobu rozpuštění krevních sraženin v zavedeném katétru, zkratu nebo jiném zařízení pro zavádění do cévy, jehož cílem je obnovit funkci zařízení pro zavádění do cévy.
Dosavadní stav techniky
Vaskulární okluze způsobené krevními sraženinami, jakými jsou například tromby a embolie, jsou vážnými zdravotními chorobami, které, pokud se včas neléčí, mohou znamenat významné nebezpečí pro končetiny nebo mohou dokonce vést k ohrožení samotného života. Pro léčbu a odstranění vaskulárních krevních sraženin byla vyvinuta různá zařízení a různé způsoby, které lze například nalézt v patentu US 4 447 236 (Quinn) , vydaném 8. května, 1984; patentu US 4 692 139 (Stiles), vydaném 8. září, 1987; patentu US 4 755 167 (Thistle et al.), vydaném 5. července, 1988; patentu US 5 167 628 (Boyles), vydaném 1. prosince, 1992; patentu US 5 222 941 (Don Michael), vydaném 29. června, 1993; patentu US 5 250 034 (Appling et al.), vydaném 5. října, 1993; patentu US 5 370 653 (Cragg), vydaném 6. prosince, 1994; patentu US 5 380 273 (Dubrul et • ···· ·· ···· ·· ···· ·· · · · · ··· • · ·· · ····· • ····· ··· · ··· ··· ·· · ····· ·· · ····· al.), vydaném 10. ledna, 1995; patentu US 5 498 236 (Dubrul et al.), vydaném 12. března, 1996; patentu US 5 626 564 (Zhan et al.), vydaném 6. května, 1997; patentu US 5 709 676 (Alt), vydaném 20. Ledna, 1998; patentu US 5 865 178 (Yock), vydaném 2. února, 1999, a WO 90/07352 (publikované 12. července, 1990). Tyto způsoby a zařízení zahrnují použití infúzních katétrů pro dopravu trombolytických nebo fibrinolytických látek do krevní sraženiny a její rozpuštění. Infúzní katétry se zpravidla používají v kombinaci s enzymaticky účinnými látkami, které jsou schopny degradovat fibrin ve sraženině a tak sraženinu účinně rozpouštět. Tyto enzymy se zpravidla označují jako „trombolytické nebo „fibrinolytické látky.
Fibrolasa je známou fibrinolytickou zinkovou metalloproteinasou, která byla prvně izolována z jedu ploskolebce amerického (Agkistrodon contortrix contortrix). Viz Guan et al. , Archives of Biochemistry and Biophysics, Volume 289, Number 2, pages 197-207 (1991); Randolph et al., Protein Science, Cambridge University Press (1992), pages 590-600; evropská patentová přihláška č. 0 323 722 (Valenzuela et al.), publikovaná 12. července, 1989; a patent US 4 610 879 (Markland et al.), vydaném 9. září, 1986. Ukázalo se, že fibrolasa působí jako fibrinolytická látka, a je zdokumentováno, že tato metalloproteinasa vykazuje proteolytickou aktivitu proti Aa-řetězci fibrinogenu, s omezenou schopností proteolyticky štěpit Bpřetězec a žádnou aktivitou proti γ-řetězec of fibrinogen; Ahmed et al., Haemostasis, Volume 20, pages 147-154 (1990).
Vzhledem k tomu, že fibrin je základní složkou krevní sraženiny, fibrinolytické vlastnosti fibrolasy naznačují její potenciál jako látky rozpouštějící sraženinu pro in vivo trombolytické použití; viz Markland et al. , • · · · • · · · · · · · · · • ····· · · · · ··· · · · ·· · ····· · · · ·····
Circulation, Volume 9, Number 5, pages 2448-2456 (1994), a
Ahmed et al., viz výše.
Nové účinné trombolytikum (NAT) je modifikovanou formou fibrolasy, která se od fibrolasy liší v tom, že NAT obsahuje 201 aminokyselin s N-koncovou sekvencí SFPQR, zatímco N-koncová sekvence nativní fibrolasy začíná EQRFPQR a má délku 203 aminokyselin. N-koncová modifikace byla navržena tak, aby bránila chemickým reakcím na aminokyselinových zbytcích, které byly schopny tvořit různá množství cyklizovaného glutaminu (kyselina pyroglutamová), jenž má schopnost vytvářet nesmírné množství variant, pokud jde o kvalitu a uniformitu produktu. Na NAT lze tedy pohlížet jako na stabilnější molekulu.
Navzdory těmto strukturním odlišnostem jsou NAT a fibrolasa podobné, pokud jde o jejich enzymatickou (fibrinolytickou) aktivitu. Tato podobnost biologické aktivity odpovídá údajům, které naznačují, že aktivní místo molekuly fibrolasy leží v rozmezí aminokyselin 139 až 159, jak popisuje Manning v Toxicon, Volume 33, pages 1189-1200 (1995), a jeho předpokládaná poloha v trojrozměrném prostoru je vzdálena od N-konce. Aktivní místo molekuly fibrolasy a NAT obsahuje atom zinku, který se nachází v komplexu se třemi histidinovými zbytky.
Publikovaná literatura zabývající se fibrolasou odvozenou z hadího jedu prokazuje její proteolytickou aktivitu proti fibrinogenu v poloze Lys413-Leu414 a proti oxidovanému β-řetězci insulinu v poloze Ala14-Leu15; Retzios and Markland, Thrombosis Research, Volume 74, pages 355-367 (1994); Pretzer et al. , Pharmaceutical Research, Volume 8, pages 1103-1112 (1991), a Pretzer et al., Pharmaceutical
Research, Volume 9, pages 870- 877 (1992) . Rovněž bylo • 4444 44 4444 44 ····
4 · ·· · 4 · · • · 4 4 · 4 4 444 • 4 4 4 4 4 4 · 4 · ··· 4 4 4 ·· · • •••4 44 4 44 444 prokázáno, že NAT vykazuje proteolytickou aktivitu na těchto látkách ve stejných místech štěpení.
Na rozdíl od fibrinolytických metalloproteinas, jakými jsou například fibrolasa a NAT, látky rozkládající sraženiny, jako například streptokinasa, urokinasa a tkáňový polypeptidový antigen (tPA), jsou aktivátory plasminogenu, které podporují trombolýzu aktivací endogenního fibrinolytického systému. Konkrétněji lze říci, že aktivátory plasminogenu katalyzují konverzi plasminogenu na plasmin, tj . serinproteasu. Plasmin je schopen štěpit fibrinogen a fibrin na arginyl-lysylových vazbách, a přes generování plasminu tedy plasminogenové aktivátory nakonec vyvolají degradaci fibrinu a rozklad sraženiny. V současnosti jsou komerčně dostupnými trombolytickými látkami aktivátory plasminogenu, například urokinasa, streptokinasa nebo tPA.
Na rozdíl od třídy trombolytických látek aktivujících plasminogen, nejsou fibrinolytické metallo-proteinasy, jakými jsou například fibrolasa a NAT, závislé na endogenním fibrinolytickém systému (konverze plasminogenu na plasmin). Tuto třídu látek rozkládajících sraženiny lze tedy odlišit od plasminogenových aktivátorů na základě jejich unikátního způsobu působení a lze ji definovat jako třídu „přímých fibrinolytických látek.
Alfa2-makroglobulin je hlavním inhibitorem proteinasy, který je přítomen v séru savců a je jedním z největších sérových proteinů (má molekulovou hmotnost 72 5 kD) . Specifičnost a2-makroglobulinu pro proteinasy je široká, a zahrnuje serinovou, cysteinovou, asparágovou a metalloproteinasovou třídu. Molekula a2-makroglobulinu je tetramerem sestávajícím z identických podjednotek, které • · · · jsou pomocí disulfidových vazeb spojeny do párů s nekovalentní asociací půlmolekul. Za redukčních podmínek se tedy nativní a2- makroglobulin může disociovat na své čtyři monomerní podjednotky.
Každá podjednotka a2-makroglobulinu má oblast, která je velmi náchylná proteolytickému štěpení („provokační oblast). Proteolýza provokační oblasti indukuje konformační změnu v a2-makroglobulinu, který potom zachytí proteinasu ve své molekulární struktuře. Tento proces je v literatuře popsán jako interakce „mucholapky. Po zachycení proteinasy, je a2-makroglobulinu stericky bráněn, a nemůže tak přijímat svůj makromolekulární substrát.
Kromě toho se může mezi a2-makroglobulinem a celou řadou proteinas, které zachytí, vytvořit kovalentní vazba. Jak již bylo zmíněno, záchyt proteinas indukuje konformační změnu v molekule a2-makroglobulinu. Dá se předpokládat, že jakmile dojde k této konformační změně, stane se thioesterová vazba uvnitř molekuly a2-makroglobulinu reaktivní a může vytvořit kovalentní vazbu s nukleofilními zbytky (například s lysinem) zachycené proteinasy. V celkovém oběhu může tedy ct2-makroglobulin účinně neutralizovat celou řadu proteinas.
Navíc konformační změna v a2-makroglobulinu, kterou způsobilo zachycení proteinasy, vede ke vzniku formy, která je rozpoznatelná retikuloendotheliálním systémem. Clearance a2-makroglobulinem zachycených proteinas je zpravidla popisována s minutovými hodnotami poločasu předpokládá se, že k ní dochází nízkohustotního lipoproteinu (LDL) exprimovaný na makrofázích, hepatocytech a fibroblastech. Více informací o a2-makroglobulinu lze nalézt v Methods in života a přes s receptorem související protein ···· • · · · · · •
I
I « • ·
Enzymology, edited by A. J. Barrett, Philadelphia, (1981), pages 737-754.
Academie Press, lne., a2-Makroglobulin je schopen tvořit makromolekulový komplex s fibrolasou, NAT a dalšími proteinasami. Na rozdíl od některých proteinas, které mohou tvořit disociovatelný komplex s a2-makroglobulinem, jsou fibrolasa a NAT dva příklady fibrinolytické metalloproteinasy, jež tvoří komplex, nelze za fyziologických podmínek odštěpit od a2makroglobulinu. Jakmile se například purifikovaný lidský a2-makroglobulin a NAT inkubují několika sekund začíná tvořit ukončena během několika minut. vitro tvorba komplexu může potenciální rychlost tvorby globulinem a NAT nebo dalšími proteinasami in vivo.
společně, potom se během komplex, jehož stavba je Tento jev ukazuje, že in být rychlá a naznačuje komplexu mezi a2-makro fibrinolytickými metalloAčkoliv je a2-makroglobulin jedním z hlavních plazmových proteinů, existuje přesto konečné množství a2makroglobulinu v oběhu, které by bylo dostupné pro navázání a neutralizaci fibrinolytické metalloproteinasy. Vazebná kapacita a2-makroglobulinu je tedy saturovatelná. Po přesažení vazebné kapacity a2-makroglobulinu se koncentrace nenavázané fibrinolytické metalloproteinasy zvýší proporcionálně s další fibrinolytickou metalloproteinasou přidanou do vzorku.
Přítomnost a2-makroglobulinu v celkovém oběhu pacient prezentuje žádost o systemické (například, intravenózní) podání fibrolasy, NAT a dalších fibrinolytických metalloproteinas, které jsou vázány a2-makroglobulinem v celkovém krevním oběhu. Dokud nebude překročena saturovatelná hladina nativního a2-makroglobulinu • · © · ·· ·©· © • · · · · ©©©·· • ····· ·©· · ··· ··· ·· · ··· ·· ·· · ·· ··· systemicky podanou dávkou takových fibrinolytických metalloproteinas, budou tyto metalloproteinasy účinně neutralizovány a budou neúčinné pro terapeutické účely.
U jedné in vivo studie prováděné na králících se testovala biologická účinnost fibrolasy odvozené z jedu po systemickém intravenózním podání. Ahmed et al., Haemostasis, viz výše. Použitou dávkou fibrolasy byla dávka 3,7 mg/kg, která byla stanovena jako dávka poskytující konečnou krevní koncentraci přibližně 60 pg/ml u králíka majícího hmotnost 3,0 kg. Toto množství bylo zvoleno na základě studií zjišťujících inaktivaci enzymu v přítomnosti krve nebo plazmy, pravděpodobně následkem a2-makroglobulinu (viz str. 336 a 339).
U další in vivo studie se hodnotil biologický účinek rekombinantní fibrolasy na rozpouštění sraženiny u psů. Markland et al. , Circulation, viz výše. Čtyři miligramy tohoto materiálu na kilogram (hmotnosti těla zvířete) se během pěti minut infundovaly blízko předem indukovaného trombu v levé krkavici přes katétrové zařízení (viz str. 2450). Zde bylo opět poznamenáno, že k inaktivaci fibrolasy dochází v celkovém krevním oběhu pravděpodobně následkem
přítomnosti a2-makroglobulinu (viz sloupec, poslední odstavec). strana 2454, druhý
Jak tyto dvě studie ukazují, deaktivační účinky
a2-makroglobulinu lze překonat buď podáním nebo
systemickými dávkami fibrinolytické metalloproteinasy, které přesáhnou saturovatelnou hladinu nativního a2makroglobulinu (studie na králících) nebo lokálním dopravením enzymu do místa sraženiny (studie na psech) a vyhnutím se systemickému podání.
·· ·· ·· ··· · ·· ····
Na druhé straně, dávky fibrinolytické metalloproteinasy převyšující saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu, pokud by byly dopravovány systemicky nebo lokálně, mohou překračovat hladiny, které jsou bezpečné a dobře tolerované léčeným subjektem. Za zmínku stojí skutečnost, že fibrinolytické metalloproteinasy jsou schopné ničit nejen fibrin, ale rovněž mohou rozkládat další strukturní proteiny a jsou tedy považovány za potenciálně toxické in vivo, pokud jsou přítomny ve velkých množstvích, která převyšují saturovatelnou hladinu a2makroglobulinu.
Tvorba krevní sraženiny nebo jiné okluze na bázi fibrinu je rovněž zvažována při použití zavedeného katétru nebo jiného zařízení určeného pro zavedení do cévy.
Existuje celá řada podmínek, které vyžadují rekurentní nebo dlouhodobé použití zařízení určeného pro zavedení do cévy, jakým je například katétr, přístupový transplantát (pištěl), objímka, jehla, arteriovenózní pištěl nebo zkrat („shunt). Různé procedury spojené s hemodialýzou, chemoterapií, krevní infúzní nebo výměnou a další procedury zahrnující rekurentní intravenózní nebo intraarteriální dopravu léčiva (nebo odběr tekutiny) mohou například zahrnovat použití vnitřního katétru nebo jiného permanentního nebo semi-permanentního implantovaného lékařského zařízení. Krevní sraženiny se mohou tvořit v nebo okolo libovolného zařízení, které bylo zavedeno do vaskulárního prostoru, nebo se k němu mnohou přichycovat, zejména pokud zařízení zůstává ve vaskulárním prostoru delší dobu nebo pokud má zařízení jeden nebo více velmi malých otvorů.
φφ φφφφ φφ φφφφ φφφφ φφ ΦΦΦ φφφφ • φ φ · · φ · ΦΦΦ • φφφφφ ΦΦΦ φ φφφφφφ φφ ·
ΦΦΦ φφ φφ φ φφ ···
Kromě toho, se k libovolné části zavedeného zařízení určeného pro zavedení do cévy mohou přichytit další okluze na bázi fibrinu, které by mohly bránit správné funkci tohoto zařízení.
Bylo by užitečné mít rychlý a účinný způsob léčby, tj. ničení, rozpouštění nebo rozkládání sraženin nebo jiných okluzí, které se tvoří v nebo okolo zavedeného zařízení pro zavádění do cévy nebo se k tomuto zařízení přichycují. Při absenci účinného způsobu léčby sraženin, které se tvoří v nebo okolo zařízení pro zavádění do cévy, by muselo být zavedené zařízení lékařem vyměněno za nové, což je spojeno s dalšími náklady a rizikem pro pacienta.
Jak z výše uvedeného vyplývá, cílem vynálezu je poskytnout bezpečný a účinný způsob léčby krevní sraženiny nebo okluze, které se nacházejí uvnitř nebo které obklopují zařízení pro zavádění do cévy.
Cílem vynálezu je rovněž poskytnout způsob obnovení průchodnosti zcela nebo částečně ucpaného zavedeného zařízení pro zavádění do cévy.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout způsob obnovy funkce zavedeného zařízení pro zavádění do cévy v případě, že byla tato funkce ovlivněna okluzí na bázi fibrinu.
Cílem vynálezu je rovněž poskytnout bezpečný a biologicky účinný způsob použití lokálně podaných fibrinolytických metalloproteinas pro rozpouštění krevní sraženiny in vivo.
···· • · ·«·· • · · • · · · • · · · 9
9 · · · • ·· ·· · • · ·· • 99 • · »·· • · · · • 9 9
999
Podstata vynálezu
U konkrétních provedení se vynález týká způsobu terapeutické léčby krevní sraženiny v zavedeném zařízení pro zavádění do cévy podáním určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy ve farmaceuticky přijatelném roztoku skrze uvedené zařízení pro zavádění do cévy, přičemž toto množství nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti léčeného lidského subjektu. U určitých provedení je zařízení pro zavádění do cévy zavedeno do tepny nebo žíly lidského subjektu. U určitých provedení je zavedeným zařízení pro zavádění do cévy katétr, zkrat, přístupový transplantát, jehla nebo plášů. U určitých provedení se zařízení pro zavádění do cévy používá pro zavádění nebo odvádění tekutin z vaskulární oblasti. U určitých provedení se zařízení pro zavádění do cévy podle vynálezu používá ve spojení s hemodialýzou, krevní transfúzí, odběrem nebo výměnou krve, chemoterapií nebo kteroukoliv další procedurou, která vyžaduje zavedení nebo odvádění tekutin ze žíly nebo z tepny.
U určitých provedení se vynález týká způsobu rozpouštění krevní sraženiny v zavedeném zařízení pro zavádění do cévy, přičemž tento způsob sestává z lokálního zavedení určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy tvořící komplex s a2-makroglobulinem ve farmaceuticky přijatelném roztoku do uvedené sraženiny, přičemž množství fibrinolytické metalloproteinasy tvořící komplex s a2makroglobulinem je dostatečné pro usnadnění rozpouštění sraženiny a současně významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu v těle uvedeného lidského subj ektu.
·« ··· · ·· ···· ·* · · · · · · » • · · · · · · ··· • · · · · · · · · · • · · ··· ·· · ····· ·· · · · ···
U určitých provedení se vynález týká způsobu obnovy průchodnosti zcela nebo částečně ucpaného zavedeného zařízení pro zavádění do cévy. U určitých provedení se vynález týká způsobu obnovy funkce zavedeného zařízení pro zavádění do cévy.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1A-1C: Obr. 1A je základní linie angiogramu krční tepny u dospělého prasete před indukcí poškození balonovým katétrem a vytvořením okluzívního trombu; obr. 1B znázorňuje angiogram zaznamenaný 4. den u stejného zvířete, před podáním NAT způsobem podle vynálezu; a obr. 1C znázorňuje angiogram 2 hodiny po podání 30 mg NAT pomocí „PRO katétru (pro ilustraci tohoto zařízení viz obr. 3).
Obr. 2 znázorňuje typ katétrového zařízení navržený pro lokalizovanou dopravu trombolytické látky do krevní cévy.
Obr. 3 příčný řez alternativním typem katétrového zařízení pro lokalizovanou dopravu trombolytické látky do krevní cévy.
Obr. 4 znázorňuje histogram stanovené maximální dávky NAT u pacientů s periferní vaskulární okluzí.
Obr. 5 znázorňuje použití NAT u in vitro modelu okluze katétru.
Obr. 6 znázorňuje celkové výsledky množství experimentů, přičemž výsledné střední hodnoty ukazují, že NAT rozpouští in vitro okluze až o 40% rychleji než ···· ·« ···· ·· ··*· • ··· • · · · · *·« ·· ·· „Abbokinases Open Cato, což je produkt pro zprůchodnění katétru.
komerční urokinasový
U určitých provedení se vynález týká způsobu léčby krevních sraženin in vivo, u lidských subjektů, fibrinolytickou metalloproteinasou, přičemž tento způsob zahrnuje lokální podání bezpečného, biologicky účinného množství fibrinolytické metalloproteinasy ke krevní sraženině, například za použití katétru nebo jiného zařízení určeného pro zavádění do cévy. Zpravidla stacionární fibrinové sraženiny se budou nacházet v krevních cévách (arteriálních nebo venózních, nativních nebo syntetických (například transplantát)) v těle lidského subjektu. U určitých provedení vynález poskytuje způsob léčby krevní sraženiny umístěné v nebo okolo zavedenému katétru, zkratu, jehle nebo jiném zařízení pro zavádění do cévy nebo krevní sraženiny, která je k těmto zařízením přichycena. U určitých provedení vynález poskytuje způsob obnovy průchodnosti zcela nebo částečně ucpaného již zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy. U určitých provedení vynález poskytuje způsob obnovy funkce zařízení určeného pro zavádění do cévy, pokud byla tato funkce ovlivněna nebo do určité míry omezena okluzí na bázi fibrinu.
Výrazem „bezpečné, biologicky účinné množství se rozumí množství dostatečné pro rozklad fibrinu a usnadnění rozpouštění sraženiny (tj . trombu), které současně nepřesahuje hladiny výrazně vyšší než je saturovatelná hladina a2-makroglobulinu v oběhovém systému léčeného pacienta (tj. hladiny, které mohou způsobit poškození stěny krevních cév). Toto množství se bude zpravidla pohybovat v ·· φφφφ φφ φφφφ • φφ φ • Φ ΦΦΦ φφφφ φ · φφ φ φφφφ φ • φφφφφ ΦΦΦ φ φφφφφφ φφ φ
ΦΦΦ φφ ΦΦΦ φφ ΦΦΦ rozmezí od 0,025 mg do 1,7 mg na kilogram tělesné hmotnosti léčeného lidského subjektu, což je množství stanovené na základě studií prováděných s krevními vzorky odebranými lidským subjektům, pro in vitro studium obsahu a vazebné kapacity ct2-makrogl obul inu. Na základě in vitro výsledků této studie bylo možné definovat saturovatelnou hladinu in vivo a2-makroglobulinu pro všechny praktické účely, což umožnilo vymezení biologicky účinného množství, za předpokladu, že se bere v potaz nejen minimální hladina fibrinolytické metalloproteinasy potřebná pro biologickou účinnost, ale rovněž maximální hladina, která je ještě dobře tolerovatelná. Tato studie je podrobně popsána v níže uvedeních příkladech provedení vynálezu.
Výrazy „lokálně nebo „lokalizované, které jsou zde použity v souvislosti s dopravou fibrinolytické metalloproteinasy, označují intraarteriální nebo intravenózní podání vedené buď přímo do krevní sraženiny (tj . intratrombotické) nebo do těsné blízkosti sraženiny (buď proximální nebo distální vztah k proudění krve), a to dostatečně blízko na to, aby mohla být většina fibrinolytické metalloproteinasy absorbována sraženinou. V případě léčby sraženiny, která se nachází v zařízení určeném pro zavádění do cévy, která toto zařízení obklopuje nebo která je k němu přichycena, nebo v případě obnovy průchodnosti nebo funkce zařízení zaváděného do cévy, se doprava fibrinolytické metalloproteinasy zpravidla realizuje skrze samotné zařízení určené pro zavádění do cévy, a je tedy inherentně lokální. U určitých provedení lze pro dopravu fibrinolytické metalloproteinasy do implantovaného lékařského zařízení, jakým je například stent, použít sekundární zařízení pro zavádění do cévy, například katétr.
···· ·« ···· ·· »··· • · • ··<
······ · · · ··· ·· ·· · ·« ···
Výraz „katétrový dopravní prostředek nebo zařízení určené pro zavádění do cévy je zde použit v běžném významu pro označení tubulárního lékařského zařízení určeného pro zavádění do kanálků, cév, průchodů nebo tělních dutin za účelem vstřikování nebo odebírání tekutin nebo pro zachování průchodnosti. Zpravidla bude takový prostředek zahrnovat podlouhlé flexibilní tělo katétru obsahující jeden nebo více vnitřních průchodů (nebo průsvitů); blízkou část, která umožní zavádění materiálu (tj . sraženinu rozpouštějícího činidla) do těla katétru a proudění průsvitem; vzdálenou část, která má případně zúžený konec; a jeden nebo více výstupních portů na konci nebo v blízkosti konce vzdálené části, které umožňují materiálu opouštět katétr v odezvě na aplikovaný tlak.
Výrazy „proteolytický rozklad, „rozpouštění, „rozrušení a „terapeutická léčba jsou zde použity pro označení rozkladu, dezintegrace, destrukce, rozpadu nebo jiného odstranění krevní sraženiny nebo další okluze na bázi fibrinu. Krevní sraženina může částečně nebo zcela ucpat průsvit cévy nebo zdravotního zařízení. Podobně potom „obnova průchodnosti označuje libovolné měřitelné zvýšení průtoku krve (například objemové nebo rychlostní) cévou nebo průsvitem nebo výstupním portem zařízení v důsledku rozpuštění krevní sraženiny v této cévě nebo zařízení.
Výraz „krevní sraženina nebo „okluze, jak je zde použit, označuje libovolnou hmotu, shluk, překážku nebo ucpávku na bázi fibrinu. Krevní sraženiny se zpravidla tvoří, pokud se krev sráží v tepně nebo žíle a brání, překáží, zabraňuje nebo blokuje, zcela nebo částečně průtok krve. Krevní sraženiny se mohou vytvořit rovněž v nebo okolo libovolného cizího objektu zavedeného do vaskulárního prostoru. Krevní sraženiny mohou být stacionární, jako ···· • · · • 9 · • 9 · 9 • 9 9 9 ·· ·· »·, ····
9··9 9 · • 999 9 9
999 například trombus (krevní sraženina, která se tvoří v cévě a zůstává tam) nebo mobilní, například embolie (krevní sraženiny, která cestuje z místa, kde se vytvořila, do další oblasti v těle). Krevní sraženiny mohou rovněž v širokém rozsahu měnit svou velikost, tvar a složení, a mohou obsahovat sférické částice, a stejně tak lalokovité nebo jiné rovinné struktury. Někdy mohou stejně jako krevní sraženina působit kousky aterosklerotického plaku, malé kousky tumoru, ploché globule, vzduch, amniotická tekutina nebo další materiály, které se nalézají v krvi. Měrou, jakou tyto hmoty obsahují fibrin nebo další látky, které podléhají rozkladu v důsledku působení fibrinolytické metalloproteinasy, lze pro jejich léčbu použít jeden ze způsobů podle vynálezu.
Další způsob podle vynálezu bude popsán dále v souvislosti s periferní arteriální okluzí (PAO). PAO nachází svůj původ v onemocnění periferních cév v důsledku aterosklerózy. Tyto symptomy se pozvolna vyvíjejí během mnoha let vývoje aterosklerózy, přičemž kritické ischemické hladiny je dosahováno přibližně u 15 % až 20 % pacientů se onemocněním dolních končetin. Lékařská terapie se omezuje a zaměřuje zejména pouze na prevenci nebo na omezení rizika pomocí léčiv, jakými jsou například látky snižující hladinu tuků nebo látky zabraňující krevní srážlivosti, dále pomocí programů zaměřených na omezení kouření a pomocí fyzického cvičení. Jackson a Clagett, Chest, svazek 114, str. 666S682S (1998).
Klinické projevy onemocnění periferních cév mohou zahrnovat akutní výskyty ischémií ohrožujících končetiny nebo přítomnost více chronických projevů vaskulárního onemocnění (tj . intermitentní klaudikace) . Kromě již zmiňovaných preventivních opatření zpravidla nedochází k •· ···· • · · • ♦ · · · léčbě chronické PAO, dokud nedojde k závažnému omezení životního stylu nebo se neobjeví ischémie ohrožující končetiny. V závislosti na typu ohroženého cévního segmentu a rozsahu okluze existují dostupné lékařské zákroky zahrnující perkutánní transluminální angioplastiku, chirurgickou revaskularizaci a trombolýzu. Studie ukázaly, že intraarteriální infúze látek rozpouštějících sraženiny může, zejména v ranných stádiích okluze, eliminovat potřebu chirurgického zákroku. Jak prokázal Rochesterův pokus, který porovnával trombolýzu aktivátoru plasminogenu urokinasou s operací při léčbě akutní PAO (Ouriel et al. , Journal of Vascular Surgery, 1994, Volume 19, pages 10211030), přibližně 33 procent pacientů, u kterých byla použita trombolýza paže bylo úspěšně léčeno, čímž se eliminoval invazivnější postup. Naopak 98 procent pacientů, kterým byla operována paže, se podrobilo endovaskulárnímu nebo chirurgickému zákroku.
Další zdravotní poruchy, které zahrnují okluzívní krevní sraženiny a které lze účinně léčit podobným způsobem, zahrnující neomezujícím způsobem akutní infarkt myokardu, ischemickou mrtvici, trombózu hlubokých žil a pulmonální embolii. U určitých provedení lze způsob podle vynálezu rovněž použít pro rozpouštění sraženin, které se nacházejí u chronicky implantovaných lékařských zařízení, jakými jsou implantované katétry a hemodialitické přístupové transplantáty. Další příklady implantovaných lékařských zařízení zahrnují zkraty, přístupové díly, jehly, pláště nebo další zařízení pro zavádění do cév.
U určitých provedení je tento vynález použitelný pro terapeutickou dopravu libovolné fibrinolytické metalloproteinasy, která je schopna vytvářet komplex s a2-makroglobulinem. Tyto fibrinolytické metalloproteinasy, pokud se • ···· ·· ···· ·· ···· • · · ·· · · · · • · ·· · ·«··· • ····· ··· · • · · · · · · · · • · β · · ·· · ·· ··· vyskytují přirozeně, lze purifikovat z jejich přirozených zdrojů, například fibrolasu z hadího jedu. Nebo jsou polypeptidové fibrinolytické metalloproteinasové látky a sekvence jejich nukleových kyselin a aminokyselin známé a lze připravit za použití běžných způsobů rekombinantní exprese a purifikace.
Obecně platí, že rekombinantní způsoby používají DNA molekulu kódující požadovanou fibrinolytickou metalloproteinasu, která se zavede do vhodného vektoru pro expresi ve vhodné hostitelské buňce. Vektor se zvolí tak, aby byl funkční v příslušné použité hostitelské buňce, tj. je kompatibilní s mechanizmem hostitelské buňky, tak ,aby mohla proběhnout exprese DNA.
Vektory mohou rovněž obsahovat 5' lemovací sekvence (rovněž označovanou jako „promotor) a další prvky regulující expresi, které jsou operativně navázány na DNA, která má být exprimována, stejně jako další známé prvky, jako například zdroj replikačního prvku, terminační prvek transkripce, kompletní intronovou sekvenci obsahující donorová a akceptorová spojová místa, signální peptidovou sekvenci, prvek místa ribosomového navázání, polyadenylační sekvenci, polylinkerovou oblast pro inzerci kódující nukleové kyseliny a volitelný markerový prvek. Vektor může rovněž případně obsahovat „tag sekvenci, tj. oligonukleotidovou sekvenci lokalizovanou na 5' nebo 3' konci polypeptid-kódující sekvence, která kóduje polyHis nebo další krátkou imunogenní sekvenci. Tento tag bude exprimován společně s požadovaným proteinem a může sloužit jako afinitní tag pro purifikaci tohoto polypeptidu z hostitelské buňky. Pokud je to žádoucí, lze tento tag z purifikovaného polypeptidu následně odstranit různými prostředky, například použitím selektivní peptidasy.
0 · 0
0 · · · · • 9 0 0 0 0 ·· · ·9· ·· ·· 0 00 ···
V těchto případech, kdy je pro polypeptid žádoucí, aby byl vyloučen z hostitelské buňky, lze signální sekvenci použít přímo pro polypeptid mimo hostitelskou buňku, ve které je syntetizován. Zpravidla se signální sekvence nachází v kódovací oblasti sekvence nukleové kyseliny nebo přímo na 5' konci kódovací oblasti. Identifikovalo se mnoho signálních sekvencí, a z nich lze použít všechny ty, které jsou funkční ve zvolené hostitelské buňce.
Potom, co je sestrojen vektor a nukleová kyselina zavedena na správné místo vektoru, lze kompletní vektor zavést do vhodné hostitelské buňky pro amplifikací a/nebo polypeptidovou expresi. Hostitelské buňky mohou být prokaryotické (jako například E. coli) nebo eukaryotické (jako například kvasinkové buňky, hmyzí buňky, nebo/a buňky obratlovce).
Vhodnými hostitelskými buňkami nebo buněčnými liniemi mohou být savčí buňky, jako například (CHO) buňky vaječníku křečka nebo 3T3 buňky. Vhodné savčí hostitelské buňky a způsoby transformace, kultivace, amplifikace, screeningu a produkce a purifikace produktu jsou v daném oboru známy. Dalšími vhodnými savčími buněčnými liniemi jsou opičí COS-1 a COS-7 buněčné linie, a CV-1 buněčná linie. Další příklady savčích hostitelských buněk zahrnují buněčné linie primátů a buněčné linie hlodavců, včetně transformovaných buněčných linií. Normální diploidní buňky, což jdou buněčné kmeny odvozené in vitro kultivací primární tkáně, stejně jako primární explantáty, jsou rovněž vhodné. Kandidátové buňky mohou být genotypicky deficitní v selekčním genu, nebo mohou obsahovat dominantně účinný selekční gen. Ještě další vhodné savčí buněčné linie zahrnují neomezujícím způsobem HeLa, myší L-92 9 buňky, 3T3 linie odvozené ze švýcarské, Balb-c nebo NIH myší, BHK nebo HaK křečci buněčné linie.
• ♦ · · ·· ···· • · · · ··· ··· · · · ··· ·· ·· · ·· ··»
Jako hostitelské buňky jsou rovněž použitelné bakteriální buňky, například různé kmeny E. coli, a různé kmeny kvasinkových buněk.
Zavedení (rovněž označované jako „transformace nebo „transfekce) vektoru do zvolené hostitelské buňky lze realizovat za použití takových způsobů, jako jsou například způsob na bázi fosforečnanu vápenatého, elektroporace, mikroinjekce, lipofekce nebo DEAE-dextranu. Zvolený způsob bude částečně funkcí typu hostitelské buňky, která má být použita. Tyto způsoby a další vhodné způsoby jsou odborníkům v daném oboru známy.
Hostitelské buňky mohou, pokud se kultivují za vodných podmínek, syntetizovat požadovanou fibrinolytickou metalloproteinasu. Hostitelské buňky lze kultivovat za použití
standardních medií, která jsou odborníkům v daném oboru
známa. Media budou l zpravidla obsahovat všechny živiny
nezbytné pro růst a přežití buněk.
Vhodná média pro kultivaci buně k E. coli j sou
například Luria Broth (LB) a/nebo Terrific Broth (TB)
Vhodná média pro kultivaci eukaryotických buněk jsou RPMI 1640, MEM, DMEM, přičemž všechna jmenovaná mohou být doplněna sérem a/nebo růstovými faktory, které vyžaduje konkrétní kultivovaná buněčná linie.
Zpravidla se jako doplněk média přidávají pouze antibiotika nebo další sloučeniny použitelné pro selektivní růst transformovaných buněk. Sloučeninu, která má být použita, bude diktovat volitelný markerový prvek přítomný na plasmidu, kterým byla hostitelská buňka transformována. Pokud je například volitelným markerovým prvkem ···· ·· ···· kanamycinová rezistence, potom bude sloučeninou přidanou do kultivačního media kanamycin.
Množství proteinu produkovaného v hostitelské buňce lze stanovit za použití standardních v daném oboru známých způsobů, včetně analýzy Western blot, elektrofořezy na SDSpolyakrylamidovém gelu, elektroforézy na nedenaturovaném gelu, HPLC separace, imunoprecipitace a/nebo testu aktivity, jakými jsou například testy „DNA binding gel shift assays.
Pokud je protein sekretován jinou hostitelskou buňkou, než je gram-negativní bakterie, většina se bude pravděpodobně nacházet v buněčném kultivačním mediu. Pokud není sekretován, potom bude přítomen v cytoplasmě.
V případě intracelulárního proteinu, se hostitelské buňky zpravidla nejprve naruší mechanicky. V případě proteinu majícího periplasmickou lokaci, lze pro uvolnění periplasmického obsahu do pufrovaného roztoku použít buď mechanické rozrušení nebo osmotické zpracování a následnou izolaci polypeptidu z tohoto roztoku.
Následně lze za použití různých technik provést purifikaci z roztoku.
Pokud se syntetizoval protein tak, že obsahuje buď na karboxylovém nebo aminovém konci tag, jakým je například hexahistidin nebo jiný malý peptid, potom může být v podstatě purifikován v jednostupňovém procesu vedením roztoku skrze afinitní kolonu, jejíž matrice má vysokou afinitu pro tag nebo přímo pro polypeptid (tj. monoklonální protilátka). Pokud polypeptid nemá tag a žádné protilátky nejsou dostupné, potom lze použít další vhodný purifikační postup, například iontoměničovou chromatografií, • * • · · · ·· ···· chromatografií molekulárních sít, chromatografií s reverzní fází, HPLC, nativní gelovou elektroforézu v kombinaci s gelovou elucí a preparativní isoelektrickou fokusací („Isoprime přístroj/technika, Hoefer Scientific). V některých případech lze kombinovat dvě nebo více těchto technik, a dosáhnout tak zvýšené čistoty.
Nový účinný trombolytický (NAT) polypeptid, který je zde použit pro ilustraci realizace vynálezu, je obecně označen jako fibrinolyticky účinná metalloproteinasa SEQ ID NO: 1. Tento NAT polypeptid je kódován cDNA molekulou SEQ ID NO: 2, ačkoliv lze pro expresi a výrobu níže popsanými specifickými způsoby použít libovolnou DNA molekulu, která má variantní sekvenci kódující stejný polypeptid.
Fibrolasa je popsána ve vědecké i patentové literatuře; viz výše zmiňované odkazy. Při realizaci vynálezu bude zpravidla použita forma fibrolasy mající SEQ ID NO: 3, kódovaná cDNA molekulou SEQ ID NO: 4 nebo její variantou kódující stejnou aminokyselinovou sekvenci.
Výhodně se pro rekombinantní expresi NAT použije kvasinkový expresní systém. Jako nejvýhodnější a nejvhodnější pro použití jsou speciálně zmiňovány kmeny Pichia, například Pichia pastoris.
Podrobný popis takového systému lze nalézt v patentu US 4 855 231 (Stroman et al.) , patentu US 4 812 405 (Lair et al.), patentu US 4 818 700 (Cregg et al.), patentu US 4 885 242 (Cregg) a patentu US 4 837 148 (Cregg) , jejíchž obsahy jsou zde zabudovány formou odkazů. Exprese fibrolasy v takovém systém bude zpravidla zahrnovat DNA molekulu SEQ ID NO: 5, která kóduje „prepro sekvenci (nukleotidy 1 až 783) kromě „zralého polypeptidu ·· ···· ·· ··· (nukleotidy 784 až 1392). Exprese NAT v takovém systém bude zpravidla zahrnovat DNA molekulu SEQ ID NO: 6, která kóduje „prepro sekvenci (nukleotidy 1 až 783) kromě „zralého polypeptidu (nukleotidy 784 až 1386).
Fibrinolytická metalloproteinasa použitá podle vynálezu, bez ohledu na to, zda se jedná o NAT, fibrolasu, nebo některou další fibrinolytickou metalloproteinasu, se podává ve formě farmaceuticky přijatelného roztoku, samotná nebo obsahující další farmaceuticky přijatelné složky. Pokud je to žádoucí, potom mohou tyto roztoky obsahovat kromě fibrinolytické metalloproteinasy a rozpouštědla (t j . destilované vody nebo fyziologického solného roztoku), standardní přísady, jako jsou například stabilizátory (které brání agregaci proteinu nebo fyzikálnímu nebo chemickému rozkladu ve vodných mediích), objemové látky (které poskytují kompozici objem), ředidla, antibakteriální látky, látky regulující viskozitu, antioxidanty atd., v běžných množstvích. Známé excipienty, které mohou být obsaženy ve formulaci zahrnují polyoly (včetně mannitolu, sorbitolu a glycerolu); cukry (včetně glukózy a sacharózy); a aminokyseliny (včetně alaninu, glycinu a kyseliny glutamové). Viz například Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania. Viz rovněž WO 01/24817 A2 (jejíž obsah je zde zahrnut formou odkazu), která popisuje různé kompozice fibrinolytických látek použitelných v rámci vynálezu.
Pokud je to žádoucí, bude farmaceutická kompozice před podáním pufrována (biologicky kompatibilním pufrem, například kyselinou citrónovou nebo solí kyseliny citrónové) na pH hodnotu, která je neutrální nebo leží v její blízkosti (7,0) a zpravidla na hodnotu pH ležící v rozmezí od 6,5 do 8,0 pH (0,5).
• · ··· ·
Pokud je kovovým iontem fibrinolytické metalloproteinasy zinek, například u fibrolasy nebo NAT, potom může být jako stabilizátor výhodně zahrnuta ve vodě rozpustná zinečnatá sůl (například síran zinečnatý nebo octan zinečnatý). Pro další posílení dlouhodobé stability a skladovatelnosti kompozice, může být rovněž výhodné roztok zmrazit nebo jej převést na lyofylizovaný (sušený vymražením) produkt, který se před použitím nechá roztát nebo obnoví.
Pro ilustraci lze uvést, že zamrazitelná kapalná farmaceutická kompozice, kterou lze použít v rámci způsobu podle vynálezu, zahrnuje fibrolasu nebo NAT, ve vodě rozpustnou sůl zinku, kyselinu citrónovou, pufr, případně další stabilizátor zvolený z množiny sestávající z ve vodě rozpustných vápenatých solí, a případně objemové činidlo (například mannitol) . Pro zvýšení stability při zamrazeníroztátí lze rovněž přidat povrchově aktivní činidlo, jakým je například Tween 80 (BASF, Gurnee, Illinois).
Pufr Tris (Sigma, St. Louis, Missouri) nebo další pufr s pufrovací kapacitou vyšší než pH 7.0 lze přidat pro stabilizaci pH na hodnotě pH 7,4 nebo vyšší. Většina těchto složek bude přítomna v minimálních množstvích, která se budou pohybovat v rozmezí od 0,001 mmol do 2,0 mmol (mM) nebo menším než deset procent (hmotn./obj.). Pufrovací činidlo se přidá v množství dostatečném pro dosažení požadované pH hodnoty, a toto množství se může významně lišit v závislostí na specifické formulaci.
Jako další ilustrativní příklad lze zmínit lyofilizovatelnou nebo lyofilizovanou farmaceutickou kompozice, kterou lze použít v rámci způsobu podle vynálezu a která zahrnuje fibrolasu nebo NAT, zinečnatý stabilizátor ©· · © · ··!· • · © · © · * ··♦ © · · · · · ©·© · •Z© *·.* *··* ♦ ’··* ··· (například ve vodě rozpustnou sůl zinku, viz výše), a kyselin citrónovou jako pufr, s nebo bez dalších excipientů (například objemové činidlo, jakým je například mannitol, glycin apod.). Lyofilizovaná kompozice může rovněž obsahovat dvoj sacharidový cukr, jakým je například sacharóza nebo trehalóza, jako látku chránící lyofilizaci. Lze přidat povrchově aktivní činidlo, jako například Tween 80, jako ochranu proti lyofilizačním stressům vyvíjeným na fibrinolytickou metalloproteinasu (například fibrolasa nebo NAT). Hodnota pH se bude v ideálním případě udržovat na pH 8,0 ± 0,5 za použití vhodného pufru s pKa v tomto rozmezí (například Tris). Množství jednotlivých složek se bude řídit již zmiňovanými vztahy.
Jak již bylo uvedeno, u určitých provedení se způsob podle vynálezu použije pro lokální podání biologicky účinných množství fibrinolytické metalloproteinasy, která se pohybují v dávkovém rozmezí mezi 0,025 mg/kg a 1,7 mg/kg. Výhodně se bude toto množství pohybovat od přibližně 0,1 do přibližně 0,5 mg/kg. Tím se bude řídit i síla roztoku, přičemž k naředění roztoku podle potřeby dojde až před podáním.
Kromě léčby trombózy v přirozené tepně nebo žíle, jakou je například PAO, další výzvu představuje léčba krevní sraženiny nacházející se v implantovaném nebo zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy další výzvu. Například v případě ucpané centrální venózní dráhy definuje „mrtvý objem katétru (tj. vnitřní průměr katétru vynásobený svou délkou) maximální objem, který může katétr vyplnit. Katétr s vnitřním průměrem 1,0 mm a délkou 40,0 cm vykazuje například mrtvý objem -0,3 ml. Vzhledem k takovémuto omezení objemu je důležité definovat správnou sílu roztoku. Zvyšující se síla nebo koncentrace roztoku je • · · · ·*«« tedy účinným prostředkem pro zvyšování množství účinné látky, které je dostupné pro rozpouštění cílové krevní sraženina.
U určitých provedení se způsob podle vynálezu týká použití fibrinolytické metalloproteinasy pro léčbu okluzí spojených se zařízením určeným pro zavádění do cévy. Tyto sraženiny se mohou nacházet uvnitř zařízení určeného pro zavádění do cév, okolo tohoto zařízení nebo mohou být k tomuto zařízení přichycena. Zpravidla se budou sraženiny tvořit v průsvitu nebo ve výstupním portu zařízení, jakým je například katétr, a mohou interferovat se samotnou funkcí katétru. Sraženiny se mohou rovněž nacházet vně zařízení určeného pro zavádění do cévy, například mohou tvořit chlopeň, která může překrýt výstupní port a tak bránit v zavádění účinné látky nebo v odvádění krve. Sraženiny mohou být rovněž přichyceny k zařízení určenému pro zavádění do cévy a narušovat správnou funkci zařízení. Tato interference může být důsledkem částečné okluze nebo blokace, tj . část tekutiny může procházet, nebo celkové okluze, kdy nemůže procházet žádná tekutina.
Pro demonstraci jednoho způsobu podle vynálezu se in vitro model okluze katétru použil pro simulaci sraženiny v zavedeném zařízení katétrového typu. U tohoto modelu se kolagenem potažené Pasteurovy pipety použily k simulaci zavedené části katétru. Lidská krev vytékající v důsledku kapilárního účinku přes vpich do prstu v délce 3,0 mm se nechala vysrážet. Špička jedné z pipet se zavedla do lahvičky obsahující solný roztok a druhá do 4 mg NAT (100 μΐ, síla roztoku 40 mg/ml) roztoku NAT. Obr. 5 znázorňuje výsledky tohoto in vitro modelu okluze katétru, které naznačují, že sraženina v solném roztoku je stále
·· φ*· • φ * φ beze změny, zatímco sraženina ve 40 mg/ml je aktivní, pokud jde o rozpouštění sraženiny.
U dalšího experimentu se oddělená skupina pipet (každá mající na svém konci krevní sraženinu) zavedla do lahvičky obsahující: 100 μΐ solného roztoku, 100 μΐ urokinasového roztoku (5000 IU/ml) a 100 μΐ NAT roztoku, přičemž množství účinné látky se měnilo od 0,5 mg do 4 mg zvyšováním síly roztoku z 5 mg/ml na 4 0 mg/ml, a inkubovala. Obr. 6 ilustruje celkové výsledky celé řady experimentů, přičemž výsledné střední hodnoty ukazují, že NAT rozpouští in vitro okluze až o 40 % rychleji než „Abboknnase Open Cath, což je komerční urokinasový produkt pro clearanci katétru (druhý sloupec, UK 500 I.U.) Obr. 6 rovněž demonstruje dávkově dependentní povahu NAT ve smyslu rychlosti, kterou NAT realizuje proteolytickou degradaci krevní sraženiny.
Při léčbě relativně malé okluze zavedeného katétru, kterou lze například simulovat in vitro modelem okluze katétru, by bylo výhodné pro léčbu použít přibližně 5 mg/ml až 40 mg/ml fibrolasy, NAT nebo jiné fibrinolytické metalloproteinasy. Nicméně v závislosti na typu a velikosti vaskulárního přístupového nebo dalšího lékařského zařízení, a v závislosti na poloze, velikosti a rozsahu sraženiny nebo okluze, mohou být požadovány i mnohem menší nebo naopak mnohem větší dávky. Například sraženina v relativně velkém hemodializačním zkratu bude pravděpodobně vyžadovat vyšší koncentraci fibrinolytické metalloproteinasy než sraženina blokující výstupní port o průměru katétru 1,0 mm. Koncentrace pro tuto indikaci se tedy mohou pohybovat kdekoliv v rozmezí od 0,1 mg/ml, nebo méně, do více než 80 mg/ml.
·«··· ·» · «···.
U krevních sraženin, které se nacházejí uvnitř zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy, nebo okolo tohoto zařízení, nebo jsou k tomuto zařízení přichyceny, může být účinná dávka dopravována mnoha různými způsoby, včetně pulzatilní infúze, Kontinuální infúze, bolusového podání nebo kombinace všech tří způsobů podání. Vzhledem k problémům spojeným s omezením, které představuje tzv. mrtvý objem, je za výhodné obecně považováno bolusové podání.
V typickém případě, se způsob podle vynálezu realizuje ve spojení s trombolýzou řízenou katétrem. Takové procedury zahrnují použití předem sterilovaného zařízení pro dopravu účinné látky katétrového typu, jehož boční stěny mohou být vyrobeny z tenkého, polotuhého nebo flexibilního biologicky kompatibilního materiálu (například z polyolefinu, fluorpolymeru nebo dalšího inertního polymeru). Vhodné katétry zpravidla obsahují alespoň jednu vnitřní dutinu (neboli lumen) probíhající celou délkou zařízení. Materiál, ze kterého je katétr vyroben, je dostatečně flexibilní na to, aby se mohl pohybovat vnitřní dutinou vaskulatury bez toho, že by došlo k poškození cév, a současně je ještě dostatečně rigidní na to, aby se roztáhl přes potřebnou vzdálenost až k místu léčby, ale vnitřek dutiny zařízení aby zůstal zcela distendován (rozšířen). Tato katétrová zařízení budou mít zpravidla průměr od 2 do 2 0 v tzv. French jednotkách (1/3 mm odpovídá 1 French) a délku 0,6 m až 1,8 m nebo více.
Ilustrativní katétrová zařízení pro intravaskulární dopravu trombolytického léčiva podle vynález jsou znázorněna na obr. 2 a 3, přičemž jejich praktické aplikace budou podrobně popsány v níže uvedených příkladech provedení vynálezu. Nicméně lze použít libovolné konvenční ♦·
·« * ·
katétrové dopravní zařízení nebo zařízení určené pro zavádění do cévy, které je vhodné pro tento způsob, a neomezujícím způsobem i včetně zde specificky zmiňovaných zařízení.
Například Obr. 2 ukazuje typ katétrového zařízení navrženého pro lokalizovanou dopravu trombolytické látky do krevní cévy. Toto zařízení, znázorněné v bokorysném řezu, obsahuje „boční otvory na dopravním konci, skrze které je infusát (trombolytické činidlo) emitován v důsledku aplikovaného tlaku tekutiny. Průměry katétrových trubic na tomto a následujícím obrázku jsou vzhledem k celkové velikosti zařízení zvětšeny, aby byly lépe patrné detaily. Viz rovněž obr. 3, který znázorňuje bokorysný řez alternativním typem katétrového zařízení pro lokalizovaní dopravu trombolytické látky do krevní cévy. Toto zařízení obsahuje úzké podélné štěrbiny, označované jako „pressure response outlets ((PRO) otvory vypouštějící v odezvě na tlak), které jsou vyříznuty do stěny katétru v pravidelných intervalech, tak že infusát uniká, jakmile tlak tekutiny uvnitř katétru dosáhne kritické hodnoty, která způsobí otevření štěrbiny. Toto zařízení lze použít v kombinaci s automatizovaným, pístem řízeným, impulzivním infúzním zařízením (není znázorněno, ale bude popsáno v níže uvedených příkladech provedení), které je schopno dopravovat pulsy infúze účinné látky.
V případě krevních sraženin, které se vyskytují v žíle nebo v tepně a nemají žádnou souvislost s vaskulárním přístupovým nebo jiným lékařským zařízením, lze účinnou dávku fibrinolytické metalloproteinasy dopravovat skrze katétr do lokálního místa léčby pulzatilní infúzí, kontinuální infúzí, bolusovým podáním nebo použitím kombinace všech tří technik. Síla roztoku (tj. koncentrace)
I · · · · » ♦ 4
V » 4 <· »·» léčebném roztoku je tyto typy sraženin.
» »♦♦♦ *· · • · « · • · · « · · ·· fibrinolytické metalloproteinasy v rovněž důležitým parametrem pro
Konkrétněji by měl být zvolen rozsah mezi minimálním naředěním fibrinolytické metalloproteinasy pro účinnost na spodním konci (který je zvláště důležitý pro bolusové podání) a maximální rozpustností fibrinolytické metalloproteinasy na horním konci. Obecně se použijí síly roztoku v rozmezí přibližně od 0,1 mg/ml do přibližně 80 mg/ml. Tento objem bolusu (nebo celkový objem množiny bolusů v případě „impulzivní dopravy) se následně zvolí v závislosti na dopravě účinného množství fibrinolytické metalloproteinasy ve výše předepsaných rozmezích.
Příklady provedení vynálezu
Vynález bude dále podrobně vysvětlen na následujících příkladech provedení, které mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, jenž je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky. V těchto příkladech a v celé popisné části přihlášky vynálezu „kg označují kilogramy tělesné hmotnosti na testovaný subjekt, „mg označují miligramy, „ml označují mililitry, a „min označují minuty. Fibrinolytická metalloproteinasa použitá jako ilustrativní příklad, konkrétně Nové účinné trombolytikum (NAT), se rekombinantně odvodila a připravila výše popsanými způsoby.
Příklad 1
Trombolýza u subakutní trombózy krční tepny dospělého prasete ···♦ ·· *·*· ·· ·9·9 * · * « · ♦ · · • * * • · · ·»
ΝΑΤ se studovalo na modelu subakutní trombózy krční tepny dospělých prasat, majících průměrnou tělesnou hmotnost 75 kg, ve smluvní laboratoři (Charles River Laboratories, Southbridge, Massachusetts). Cílem této studie bylo dokázat fibrinolytickou aktivitu NAT na modelu trombózy, který odpovídá okluzi periferní artérie u lidí.
U tohoto zvířecího modelu byla krční tepna trombotická po celé své délce (přibližně 20 centimetrů od počátku v aortě po karotické rozvětvení) , přičemž tato trombóza byla způsobena kombinací balonového poranění, trombinem a městnáním. Velikost trombu se blížila velikosti trombu, se kterým se setkáváme klinicky u lidí s periferní arteriální okluzi. Po úspěšné trombóze se zvíře nechalo čtyři dny zotavovat. Čtyřdenní perioda se zvolila tak, aby mohlo dojít k extenzivnímu zesíúování fibrinu, remodelaci trombu a infiltraci buněk. Je třeba poznamenat, že jak velikost, tah stáří trombu u tohoto modelu jsou přiměřenými simulacemi velikosti a trvání ischemických symptomů zaznamenaných v nedávno publikovaném TOPAS průzkumu trombolýzy plasminogenovými aktivátory u periferní arteriální okluze u lidí. K nahlédnutí, viz Ouriel et al., New England Journal of Medicine, Svazek 338, strany 1105 až 1111 (1998).
Stručně řečeno společnou krční tepnu lze ucpat trombem po celé její délce fluoroskopicky řízeným balonovým poraněním. Balony, které se pro tyto účely použijí, jsou předimenzované a nepoddajný. Balóny se nafouknou tlakem až 12 atmosfér, a tento tlak způsobí poranění vlastní vrstvy cévy. Při nafukování je balón posouván střídavě dozadu a dopředu tak, aby odstranil z povrchu vaskulární výstelku.
• φφφφ ·· φφφφ φφ φφφφ φφ φφ*
Balónový postup, který způsobuje vysoký stupeň poškozeni a vytváří vysoce trombogenní povrch cévy, se opakuje po celé délce společné krční tepny. Jakmile je artérie zcela poškozena, vysune se balón do proximální polohy v blízkosti aorty a nafoukne tak, aby ucpáním znemožnil proudění krve skrze cévu. Při tomto zacpání se prostřednictvím distálního portu balónového katétru vstříkne 50 jednotek bovinního trombinu, který má stimulovat koagulaci.
Balón zůstane nafouklý po dobu 3 0 min, což vede ke vzniku trombotické okluze cévy. Po třiceti minutách se balón vyfoukne a pořídí se angiogram, který má potvrdit ucpání cévy. Při použití těchto postupů se okluze cévy dosáhne u více než devadesáti procent případů.
Obr. 1A znázorňuje základní angiogram krční tepny u dospělého prasete před způsobením poškození indukovaného balónovým katétrem a před vytvořením okluzívního trombu. Šipka označuje pozici a přítomnost kontrastního media v levé společné krční tepně, což naznačuje, že krevní proud v artérii není blokován (tj. krevní céva je patent nebo má „„), Obr. 1B znázorňuje angiogram pořízený u stejného zvíře v den 4, tj. ještě před podáním NAT způsobem podle vynálezu. Šipka označuje pozici levé společné krční tepny, nicméně kontrastní médium neproudí v artérii v důsledku přítomnosti okluzívního trombu. Obr. 1C znázorňuje angiogram 2 hodiny po podání 30 mg NAT pomocí „PRO katétru (viz obr. 3, který znázorňuje toto zařízení) . Šipka označuje přítomnost kontrastního média v cévě, což demonstruje obnovení průchodnosti v levé krční tepně.
Minimální artérie.
reziduální tromhus je viditelný v průsvitu • *··« ·· ·♦♦· ·· ·*··
Po ucpání trombem se balónový katétr, vodící katétr a přístupový plášť, odstranily a zvířeti se nechaly čtyři dny na zotavení. Čtvrtý den se zvířata opět podrobila anestézii, okluze se rekonfirmovala a katétr pro dopravu účinné látky s množinou bočních otvorů (viz obr. 2 a 3) se posunul za fluoroskopického vedení vpřed a umístil tak, že se boční otvory nacházeli uvnitř trombu. Trombolýza NAT se angiograficky sledovala za použití pevných NAT dávek, které se pohybovaly v rozmezí od 10 mg do 3 0 mg (nebo přibližně od 0,1 mg/kg do 0,4 mg/kg hmotnosti nastavené báze), jak ukazují obr. 1A-1C.
Jak ukazuje Obr. 1B NAT je účinný při regeneraci antegrádního proudu, stanoveno pomocí angiografie. Pokud jde o kvantitativnější hodnocení, proud v cílové cévě je kvantitativně hodnocen podle čtyřbodové stupnice (rozmezí od 0 do 3), kde:
= žádné proudění = proud představující méně než 30 % proudění v kontralaterální (bez trombu) krční tepně = proud představující 30 až 80 % proudění v kontralaterální krční tepně = proud, který je neodlišitelný od proudu v kontralaterální krční tepně
Obrázek 1B znázorňuje proudění, které bylo vyhodnoceno jako proudění odpovídající stupni 3, což je častý výsledek u trombem ucpaných cév ošetřených pevnou 30mg dávkou NAT (přibližně 0,4 mg/kg u prasete s tělesnou hmotností 75 kg). Tabulky 1 až 3 v následujících příkladech ilustrují léčebný režim a hodnocení průměrného proudu získané na základě zprůměrování řady angiogramů. Ve všech studiích se kontinuálně monitorovalo dýchání, tělesná teplota, srdeční frekvence a arteriální krevní tlaky a tyto hodnoty zůstaly po podání NAT ve fyziologických rozmezích bez jakýchkoliv pozorovaných změn.
Příklad 2
Volba PRO katétrů a impulzivně rozprašovací dopravy
Při klinické léčbě periferní arteriální okluze jsou trombolytické látky dopravovány skrze katétry, které jsou umístěny v blízkosti trombu nebo jsou zavedeny přímo do trombu. Jak ukazují obr. 2 a 3, existují dva typy běžně používaných katétrů.
Jedna varianta, katétr s „bočními otvory (obr. 2) má malé kulaté boční otvory 2 vyříznuté v katétrů 4 v blízkosti uzavřeného distálního konce 6 a vstupní port <3 (pro roztok fibrinolytické metalloproteinasy) ve spojovacím kroužku 10 fixovaném k proximálnímu konci 12. Katétr 4 je konstruován z flexibilní, podlouhlé trubice vyrobené z biologicky kompatibilního polymemího materiálu, přičemž tato trubice je dutá a tenkostěnné a má rovnoměrný průměr 2 až 20 French, a výhodně 3 až 5 French. Katétr obsahuje dvě pro záření nepropustné značky 14 na vnějším povrchu v blízkosti distálního konce 6, které ohraničují část katétrů obsahující boční otvory 2. V praxi se katétr zavede do chirurgického otvoru v ucpané artérii nebo žíle a, za současného sledování pomocí fluoroskopie, které se provádí za použití standardních schválených procedur, se opatrně posunuje krevní cévou tak, že se distální konec 6 dostane do trombu nebo do jeho blízkosti. Značky 14, které se jasně zobrazí na fluoroskopickém obraze, mohou sloužit jako vodič pro umístění této části katétrů, takže infusát vytékající z ·< ···♦
9999 • · to ··· bočních otvorů 2 bude v přímém kontaktu s trombem. Farmaceutický roztok fibrinolytické metalloproteinasy se následně vstříkne pod mírným tlakem ze stříkačce podobného zásobníku 16 do vstupního portu 8: a je hnán směrem k distálnímu konci 6 a uniká skrze otvory 2 do trombu, kde způsobuje rozklad fibrinového materiálu.
Pokud se infúze fibrinolytické metalloproteinasy realizují za použití tohoto typu katétru, potom má většina roztoku obsahujícího fibrinolytickou látku tendenci unikat skrze proximální boční otvory (tj. otvory, které se nacházejí nejblíže vstupnímu portu 8), což má negativní dopad na rovnoměrnost dopravy účinné látky v místě léčby. Rovněž existuje možnost, že v případě podtlaku bude krev proudit skrze boční otvory 2_ zpět do katétru.
Další varianta katétru, která je rovněž tvořena dutým, tenkostěnným, biologicky kompatibilním polymerním materiálem, která je znázorněna na obr. 3, má extrémně tenké štěrbiny 2_, které jsou pomocí laseru vyříznuty do flexibilního katétru 4 v pravidelných intervalech v blízkosti uzavřeného distálního konce 6.. Štěrbiny, které jsou označovány jako otvory vypouštějící v odezvě na tlak („PRO), jsou dostatečně těsné na to, aby infusát neunikal, pokud tlak tekutiny v katétru nedosáhne kritické hodnoty a způsobí současné rozšíření štěrbin a tedy jejich dočasné otevření. Katétr může rovněž obsahovat vnější pro záření neprůchodné značky 8_, které napomáhají správnému umístění zařízení v místě trombu.
V ideálním případě se PRO infúzní katétry používají v kombinaci s automatizovaným pístem poháněným impulzivním infúzním zařízením (není znázorněno), které je schopno dopravovat nízkoobjemové regulované pulsy infúze účinné ·: / ϊ : · · Γ···.
látky do vstupního portu 10 ve spojovacím kroužku 12, který je fixován k proximálnímu konci 14 katétru 4. Jakmile je puls dopraven, dojde k momentálnímu zvýšení tlaku uvnitř katétru. V odezvě na toto zvýšení tlaku se tyto otvory (štěrbiny 2_) momentálně otevřou a nechají infusát (například farmaceutický roztok fibrinolytické metalloproteinasy) unikat. Teoretickou výhodou impulzivní dopravy infusátu a katétru PRO-typu je skutečnost, že je infusát dopravován rovnoměrně skrze štěrbiny po celé délce katétru, zatímco infusát dopravovaný skrze katétr s „bočními otvory (Obr. 2) sleduje dráhu nejmenšího odporu a vytéká proximálními bočními otvory nerovnoměrným již popisovaným způsobem.
Prasečí model čtyři dny staré karotické trombózy se použil pro testování výkonu výše zmíněných dvou typů katétru, při kterém se použily pevné dávky 30 mg NAT (přibližně 0,4 mg/kg u prasete s tělesnou hmotností 75 kg). Výsledky jsou shrnuty v tabulce 1.
Tabulka 1
Srovnání angiografického hodnocení proudu získaného při použití NAT zaváděného pomocí infúzního katétru s bočními otvory a PRO infúzního katétru
Angiografického hodnocení proudu
Účinná látka Dávka Kat. Dopravní čas (doprava) 0 3 0 min 1 h 2 h 4 h
NAT n=5 3 0 mg CM 60 min (infúze) 0,0 ± 0,0 1/2 ± 0,4 1,6 ± 0,5 1/8 ± 0,4 2,0 + 0,7
NAT n=4 3 0 mg PS 60 min (0,1 ml puls) 0,0 ± 0,0 1/5 ± 0,6 1,5 ± 0,6 2,3 + 0,5 2,5 ± 0,6
• 999r9
9999
9 9 <
I · · «
99
9998
9 9 • A · 99
9 9 9
9 · • 9 998
CM: Cragg-McNamara ventilový difúzní typ katétru s „bočními otvory (Micro Therapeutics, lne., San elemente, California). PS: impulzivní-rozprašovací dopravní, definovaný použitím otvoru vypouštějícího v odezve na tlak. (PRO) katétr (Uni*Fuse Catheter, AngioDynamics, lne. , Queensbury, New York) použitý v kombinaci s automatizovaným, impulzivním infuzním zařízením (PULSE*SPRAY INJECTOR Model PSI-1, AngioDynamics, lne., Queensbury, New York).
Jak ukazuje tabulka 1, angíografické hodnocení proudu ve skupině ošetřované impulzivně-rozprašující modalitou vykazuje mírně vyšší počáteční hodnocení proudu na třicetiminutovém angiogramu, které, jak se zdá, přetrvává po dobu čtyř hodin. Ačkoliv se nezískaly statistické diference, byly angíografické výsledky obecně vyhodnoceny jako vynikající. PRO-Typ katétru v kombinaci s impulzivněrozprašuj ící dopravou je výhodným režimem dopravy fibrinolytické metalloproteinasy podle vynálezu.
Příklad 3
Stanovení doby dopravy účinné látky
Akutní periferní arteriální okluze se zpravidla léčí plasminogenovými aktivátory, jakým je například urokinasa, dopravenými formou infúze, která má často dvacetičtyřhodinové trvání a případně čtyřicetiosmihodinové. Předpokládá se, že dlouhá infúze udrží nízkou hladinu tvorby plasminu po prodlouženou časovou periodu, což je potřebné pro účinné rozpuštění okluzivního trombu. Jak NAT, tak fibrolasa jsou fibrinolytické metalloproteinasy, u kterých nemusí být prolongované infúze nutné. Při určování, zda dopravní rychlost ovlivňuje angíografické rozpouštění
4444
4« *444
444 ·4
A 444 • 4 4
4· *
444 sraženiny, se za použití PRO katétrů a impulzivněrozprašovacího zařízení zavedla 3 0mg dávka NAT (zhruba 0,4 mg/kg u prasete s tělesnou hmotností 75 kg). Za použití 0,lml pulžních objemů se 5 mg/ml NAT roztoku dopravilo během šesti minut (deset pulsů za minutu) nebo během šedesáti minut (jeden puls za minutu). Výsledky jsou znázorněny v tabulce 2.
Tabulka 2
Srovnání časů dopravy účinné látky NAT pomocí PRO katětru a impulzivně-rozprašovacího injektoru
Angiografického hodnoceni proudu
Účinná látka Dávka Kat. Dopravní čas (doprava) 0 30 min 1 h 2 h 4 h
NAT n=3 3 0 mg PS 6 min (0,1 ml) 0,0 + 0,0 2,7 + 0,6 2,7 + 0,6 2,7 + 0,6 2,7 ± 0,6
NAT n=3 3 0 mg PS 6 0 min (0,1 ml) 0,0 ± 0,0 0,0 + 0,0 1,0 ± 1,0 1,3 ± 1,2 1,7 ± 0,6
Jak ukazuje tabulka 2, doprava 3 0 mg NAT během šesti minut poskytlo průměrné hodnocení proudu 2,7, hodnoceno u tří zvířat na třiceti minutovém angiogramu, které přetrvává po dobu čtyř hodin. Naopak doprava 3 0 mg NAT impulzivní infúzí během šedesátí minut byla ještě mnohem méně významná.
Ačkoliv tato data nebyla statisticky porovnána, zdá se, že výsledky podporují jako rychlejší dopravu NAT dopravu v impulzivním režimu.
·· ·♦··
··«* • · · * · *·♦ • * ♦
999
Příklad 4
Optimalizace objemu pulsu
Impulzivně-rozprašovací infúzní zařízení lze naprogramovat tak, aby dopravovalo pulzní objemy 0,1 ml až 0,5 ml na puls. Při určování toho, zda má objem pulsu nějaký vliv na angiografických výsledcích u prasečího modelu, se pulzní objemy 0,2 ml porovnávaly s objemy 0,4 ml. NAT se dopravoval v pevných dávkách 10 mg (ekvivalent k 0,15 mg/kg u 75kg prasete). Výsledky jsou znázorněny v tabulce 3.
Tabulka 3
Porovnání angiografických výsledku za použití NAT dopravovaného v pulžních objemech 0,2 ml nebo 0,4 ml
Angiografického hodnocení proudu
Účinná látka Dávka Kat. Dopravní čas (doprava) 0 3 0 min 1 h 2 h 4 h
NAT n=7 10 mg 2,5 mg/ml PS 5 min (0,2 ml ql5 s) 0,0 + 0,0 1,0 + 0,6 1,1 + 0,7 1,6 + 1,0 1,4 + 1,1
NAT n=6 10 mg 2,5 mg/ml PS 5 min (0,4 ml q30 s) 0,0 + 0,0 1,2 + 0,4 1,0 + 0,6 0,8 + 0,8 1,0 + 0,6
Jak ukazuje tabulka 3, po třiceti minutách bylo průměrné angiografické hodnocení mírně vyšší u skupiny s pulzními objemy 0,4 ml. Nicméně po čtyřech hodinách bylo průměrné hodnocení mírně vyšší u skupiny s pulzními objemy 0,2 ml. Žádný závěr, z něhož by vyplývalo, že jeden pulzní objem je lepší než druhý, vyvozen nebyl.
·· »··· υ· ···* • 9 9 . . ,.. 9 9999
9 9 9 9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9 » · ·
999 99 99 9 99 999
Z výsledků uvedených v předcházejícím textu a z tabulek vyplývá, že v podstatě všechny tyto NAT léčebné režimy jsou účinné při léčbě periferních arteriálních okluzí způsobem dopravy podle vynálezu, a že tyto výsledky jsou alespoň srovnatelné s výsledky léčby plasminogenovými aktivátory, jako je například urokinasa, která je současnou léčbou volby trombolytickými látkami.
Výsledky demonstrují, že PRO katétr s impulzivněrozprašovací dopravou poskytuje vynikající angiografické výsledky. Pokud se uvažuje v těchto studiích tělesná hmotnost zvířat (70 kg až 100 kg) , potom pevná dávka 3 0 mg zhruba odpovídá 0,3 mg/kg až 0,4 mg/kg, vztaženo ke hmotnosti nastavené báze.
Snížení pevné dávky NAT na 10 mg vede k redukci průměrných angiografických hodnocení skupiny po čtyřech hodinách a u některých zvířat nebylo dosaženo průchodnosti.
To naznačuje, že dávka 10 mg NAT je limitní dávkou pro biologickou aktivitu u tohoto modelu, vezmeme-li tělesnou hmotnost zvířat při těchto studiích (70 kg až 100 kg) , potom pevná dávka 10 mg zhruba odpovídá 0,1 mg/kg až 0,15 mg/kg, vztaženo ke hmotnosti nastavené báze. Nezdá se, že by objem pulsu měniči se od 0,2 ml do 0,4 ml významněji ovlivňoval angiografické hodnocení průchodnosti.
Příklad 5
Stanovení bezpečného, dobře tolerovaného, biologicky účinného dávkového rozmezí u lidí
Neexistuje žádná uspokojivá literatura týkající se sérové koncentrace nebo biochemické aktivity a2-makro···· ·· *
• · • ·· ···· ···* • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· globulinu u starších pacientů trpících onemocněním periferních cév (PVD). Protože jsou koncentrace a2-makroglobulinu klíčovým determinantem bezpečnosti a pravděpodobně mají vztah k tolerovatelnosti fibrinolytické metalloproteinasy in vivo, prováděla se u pacientů trpících PVD průřezová epidemiologická studie, jejímž cílem bylo hodnotit sérovou koncentraci a2-makroglobulinu a vazebnou kapacitu fibrinolytické metalloproteinasy (za použití NAT jako testovacího činidla).
216 Pacientů se přihlásilo ve dvou centrech (Cleveland Clinic Foundation, Cleveland, OH a Rochester General Hospital, Rochester, NY) . Zde se shromáždily demografické informace a další charakteristiky týkající se pacientů a odebralo se sérum pro měření a2-makroglobulinu, NAT vazebné kapacity (titrací vzorků séra odebraných jednotlivým pacientům za použití HPLC analýzy, která detekuje nenavázané NAT) a pro zjištění dalších chemických parametrů séra. Primárním cílem bylo určit vztah mezi sérovou koncentrací ct2-makroglobulinu a množstvím NAT (v mikrogramech na mililitr séra), které by mohlo být neutralizováno in vitro (NAT vazebná kapacita).
Porovnání charakteristik pacienta v této studii s charakteristikami dvou největších publikovaných studií týkajících se trombolýzy u PAO (tj . STILE a TOPAS studie) naznačilo, že populace pacientů v této studii byla reprezentantem předchozích studií trombolýzy u PAO; Další podrobnosti týkající se předchozích studií viz Annals of Surgery, svazek 220, strany 251 až 266 (1994), resp. Ouriel et al., New England Journal of Medicine, svazek 338, strany 1105 až 1111 (1998).
Stanovení maximální dávky (EMD) pro NAT se vypočetlo pro každého pacienta na základě NAT vazebné kapacity a stanovení objemu plazmy každého pacienta. Studie vedla k předpokladu, že průměrný pacient může přijmout dávku 1,7 mg/kg (dopravenou buď lokálně nebo systemicky) bez toho, že by byla překročena kapacita a2-makroglobulinu pro navázání a neutralizaci NAT. Výsledky této studie jsou shrnuty na obr. 4.
Pokud jde o obr. 4, stanovená maximální dávka NAT se vypočetla pro každou z 216 osob, které se účastnily studie. Výsledky studie jsou znázorněny formou histogram, na kterém lze vizuální kontrolou zaznamenat zvoncovitou distribuci. Předpokládá se, že průměrný pacient účastnící se této studie je schopen tolerovat dávku 1,7 mg/kg NAT (vrchol zvoncovité distribuce). Dávky podané při studiích zvířat jsou zahrnuty pro srovnání (pravá strana) a jak je patrné, překračují stanovenou maximální dávkou NAT pro 99 % studované populace.
Předepsaný rozsah 0,025 mg/kg až 1,7 mg/kg podle vynálezu tedy reprezentuje rozumné stanovení dávky, kterou mohou pacienti bezpečně přijmout (na základě objemu plazmy a NAT vazebné kapacity pro a2-makroglobulin) bez výskytu volného NAT v krevním oběhu.
Závěrem lze říci, že výsledky exemplárních farmakologických studií, víz výše uvedené příklady 1 až 4, naznačují biologickou účinnost fibrinolytické metalloproteinasy jako činidla rozpouštějícího sraženinu u zvířecího modelu trombózy, kde je trombus svou velikostí a stářím srovnatelný s trombem často se vyskytujícím při periferní arteriální okluzi u lidí. Dávky identifikované u zvířecích modelů se získaly bez ohledu na potenciální ···· ·· ···· ·· ···· • · · · · · · • ·· · · · · · · toxicitu u zvíře nebo bez zjištění této potenciální toxicity. Účinné dávky u králíků a psů (3,7 mg/kg, resp. 4,0 mg/kg) jak popsal Ahmed et al. a Markland et al. (výše) by mohly umožnit veterinární využití fibrinolytické metalloproteinasy. Nicméně při posuzování v přítomnosti hodnot získaných pro člověka by podání dávek 3,7 mg/kg a 4,0 mg/kg předávkovalo 99 procent studované populace. Takže publikované zvířecí studie neumožňují terapeutické využití fibrinolytické metalloproteinasy u lidí způsobem, který by byl bezpečný a současně biologicky účinný. Na druhé straně hodnoty, které poskytuje příklad 5, takové využití u lidí umožňují.

Claims (55)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob rozpouštění krevní sraženiny, která se nachází v zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy, okolo tohoto zařízení nebo je k tomuto zařízení přichycena, použitelný v humánní medicíně, vyznačující se tím, že zahrnuje podání určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy skrze uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy, přičemž toto množství nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti člověka.
  2. 2. Způsob proteolytického rozpouštění krevní sraženiny, která se nachází v zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy, okolo tohoto zařízení nebo je k tomuto zařízení přichycena, použitelný v humánní medicíně, vyznačující se tím, že zahrnuje podání určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy, která tvoří komplex s a2makroglobulinem, skrze uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy, přičemž toto množství je dostatečné pro usnadnění rozpouštění sraženiny a současně významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu ct2-makroglobulinu v lidském těle.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zahrnuje 0,1 mg/ml až 80 mg/ml fibrinolytické metalloproteinasy.
    • · · · ·· · * · · · · · • · · · · · » *·» ·····♦ ·· · ··· ·· ·· · ·· ···
  4. 4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zahrnuje 0,1 mg/ml až 50 mg/ml fibrinolytické metalloproteinasy.
  5. 5. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy je katétr.
  6. 6. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy je zkrat.
  7. 7. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným zařízením určeným pro zaváděni do cévy je přístupový transplantát.
  8. 8. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy je jehla.
  9. 9. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije k zavádění kapalné kompozice do lidské tepny nebo žíly.
    • ···· ·· ···· ·· ···« • · · · · · ··· • · · 9 · · · · · · • ····· ··· ··· ··· · · ····· ·· · · · ···
  10. 10. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije k odběru krve z lidské tepny nebo žíly.
  11. 11. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije ve spojení s hemodialýzou.
  12. 12. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije ve spojení s krevní transfúzí.
  13. 13. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije ve spojení s chemoterapií.
  14. 14. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se použije k léčbě periferních arteriálních okluzí.
  15. 15. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se použije ve spojení s odběrem krve.
  16. 16. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se uvedená krevní sraženina nachází na vnitřním povrchu zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy.
    • ···· ·· ···· ·· ··«· ·· ··· · » » · • · · * · · · ··· • · · · · · ··· · ······ ·· · ····· ·· · ·····
  17. 17. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se uvedená krevní sraženina nachází na vnějším povrchu zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy.
  18. 18. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že je uvedená krevní sraženina přichycena k zavedenému zařízení určenému pro zavádění do cévy.
  19. 19. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy se nachází v tepně.
  20. 20. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zařízení určené pro zavádění do cévy se nachází v žíle.
  21. 21. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy zahrnuje katétrové zařízení s „bočními otvory.
  22. 22. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy zahrnuje „katétrové dopravní zařízení s otvory vypouštějícími v odezvě na tlak (PRO).
    Φ φφφφ φφ ΦΦΦ· ·· ··· • · · φ · φ · · · • φ φφφ φ · φφφ φφφφφ φ · φ Φ·ΦΦΦ
  23. 23. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že roztok fibrinolytické metalloproteinasy se podává ve formě bolusu.
  24. 24. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že fibrinolytická metalloproteinasa zahrnuje Nové účinné trombolytikum (NAT).
  25. 25. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že fibrinolytická metalloproteinasa zahrnuje fibrolasu.
  26. 26. Způsob obnovy průchodnosti zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy a určeného pro humánní medicínu, které obsahuje okluzi na bázi fibrinu, vyznačující se tím, že zahrnuje zavedení určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy, která tvoří komplex s a2-makroglobulinem, skrze zařízení určené pro zavádění do cévy, přičemž toto určité množství je dostatečné pro usnadnění rozpouštění sraženiny a současně významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu u člověka a nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti člověka.
  27. 27. Způsob obnovy funkce zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy , a to pro humánní medicínu, s okluzi na bázi fibrinu vyznačující se tím, že zahrnuje zavedení určitého množství fibrinolytické metalloproteinasy, která tvoří komplex s a2-makroglobulinem, skrze zařízení určené ·* ···· • · • · · · pro zavádění do cévy, přičemž toto určité množství je dostatečné pro usnadnění rozpouštění sraženiny a současně významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu u Člověka a nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti člověka.
  28. 28. Použití fibrinolytické metalloproteinasy v množství, které nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti lidského subjektu, ve farmaceuticky přijatelném roztoku při výrobě léčiva určeného pro terapeutickou léčbu krevní sraženiny, která se nachází v zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy, okolo tohoto zařízení nebo je k tomuto zařízení přichycena.
  29. 29. Použití fibrinolytické metalloproteinasy, která tvoří komplex s a2-makroglobulinem, v množství dostatečném pro usnadnění rozpouštění sraženiny a současně významně nepřekračujícím saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu v zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy, okolo tohoto zařízení nebo přichyceného k tomuto zařízení, ve farmaceuticky přijatelném roztoku při výrobě léčiva určeného pro proteolytické rozpouštění krevní sraženiny, která se nachází v zavedeném zařízení určeném pro zavádění do cévy, okolo tohoto zařízení nebo je k tomuto zařízení přichycena.
  30. 30. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde je koncentrace fibrinolytické metalloproteinasy 0,1 mg/ml až 80 mg/ml.
  31. 31. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde je koncentrace fibrinolytické metalloproteinasy 0,1 mg/ml až 50 mg/ml.
  32. 32. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde je uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy katétr.
  33. 33. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde je uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy zkrat.
  34. 34. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde je uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy přístupový transplantát.
  35. 35. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde je uvedeným zařízením určeným pro zavádění do cévy jehla.
  36. 36. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde se zařízení určené pro zavádění do cévy použije pro zavádění kapalné kompozice do lidské tepny nebo žíly.
    * · · ♦
  37. 37. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde se zařízení určené pro zavádění do cévy použije pro odběr krve z lidské tepny nebo žíly.
  38. 38. Použití podle nároku 28 nebo 29, určené pro zavádění do cévy použije hemodialýzou.
    kde se zařízení ve spoj ení s
  39. 39. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde se určené pro zavádění do cévy použije ve spojení transfuzí.
    zařízení s krevní
  40. 40. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde se zařízení určené pro zavádění chemoterapií.
    do cévy použije ve spojení
  41. 41. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde určené pro zavádění do cévy použije při léčbě arteriálních okluzí.
    se zařízení periferních
  42. 42. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde se zařízení určené pro zavádění do cévy použije v souvislosti s odběrem krve.
    ·<··
  43. 43. Použití podle nároku 28 nebo 29 kde se uvedená krevní sraženina nachází na vnitřním povrchu zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy.
  44. 44. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde se uvedená krevní sraženina nachází na vnějším povrchu zavedeného zařízení určeného pro zavádění do cévy.
  45. 45. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde je uvedená krevní sraženina přichycena k zavedenému zařízení určenému pro zavádění do cévy.
    46 . Použití podle nároku 28 nebo 29, kde uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy je umístěno v tepně. 47. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy je umístěno v žíle. 48. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde uvedené zařízení určené pro zavádění do cévy zahrnuje katétrové zařízení s „bočními otvory. 49. Použití podle nároku 28 nebo 29, kde uvedené
    zařízení určené pro zavádění do cévy zahrnuje „katétrové dopravní zařízení s otvory vypouštějícími v odezvě na tlak (PRO).
    * ··*· ·· *♦·· ·· ·«·· *· < t * « · « · • · »· · · · · · ·
  46. 50. Použití podle nároku 2 8 nebo 29, kde je uvedené léčivo připraveno pro bolusové podání.
    51. Použití podle nároku 28 nebo 2 9, kde fibrinolytická metalloproteinasa zahrnuje nové účinné trombolytikum (NAT). 52. Použití podle nároku 28 nebo 2 9, kde fibrinolytická metalloproteinasa zahrnuje fibrolasu.
  47. 53. Použití fibrinolytické metalloproteinasy v množství, které tvoří komplex s a2-makroglobulinem, a v množství dostatečném pro usnadnění rozpouštění sraženiny, které současně významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu ct2-makrog lobu linu v lidském těle, ve farmaceuticky přijatelném roztoku, přičemž uvedené množství nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné hmotnosti lidského subjektu při výrobě léčiva pro obnovu průchodnosti implantovaného zařízení určeného pro zavádění do cévy, které obsahuje okluzi na bázi fibrinu.
  48. 54. Použití fibrinolytické metalloproteinasy v množství, které tvoří komplex s a2-makroglobulinem, a v množství dostatečném pro usnadnění rozpouštění sraženiny významně nepřekračuje saturovatelnou hladinu a2-makroglobulinu v lidském těle, ve farmaceuticky přijatelném roztoku, přičemž uvedené množství nepřesahuje 1,7 mg fibrinolytické metalloproteinasy na kilogram tělesné * ···· • * · · »·· · ♦ · ··»·
    9 9 9 · · « 9 9 99
    9 9 9 9 9 9 » · · ·
    9 9 9 9 9 9 9 9 9
    999 99 9βΛ 99 999 hmotnosti lidského subjektu při výrobě léčiva pro obnovu funkce implantovaného zařízení určeného pro zavádění do cévy, obsahujícího okluzi na bázi fibrinu.
  49. 55. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1, 2, 26, 27,
    28, 29, 53 a 54, vyznačující se tím, že se koncentrace fibrinolytické metalloproteinasy pohybuje v rozmezí od 0,5 mg/ml do 40 mg/ml.
  50. 56. Dávka fibrinolytické metalloproteinasy, která tvoří komplex s alfa-2-makroglobulinem, vyznačující se tím, že koncentrace fibrinolytické metalloproteinasy pohybuje v rozmezí od 0,5 mg do 40 mg.
  51. 57. Dávka podle nároku 56, vyznačující se tím, že se zvolí z množiny sestávající z 0,5 mg, 1,0 mg, 2,0 mg, 3,0 mg a 4,0 mg.
  52. 58. Dávka podle nároku 56, vyznačující se tím, že fibrinolytickou metalloproteinasou je Nové účinné trombotikům (NAT).
  53. 59. Dávka podle nároku 56, vyznačující se tím, že fibrinolytickou metalloproteinasou je fibrolasa.
    • ··· ·« ♦··· ·· ···· • · « « · » · > 9* · · ♦ · »· ····· » · · ♦
  54. 60. Způsob obnovy průchodnosti zavedeného zařízení určené pro zavádění do cévy, vyznačující se tím, že zahrnuje uvedení tohoto zařízení do kontaktu s dávkou podle kteréhokoliv z nároků 56 až 59.
  55. 61. Způsob podle nároku 60, vyznačující se tím, že fibrinolytická metalloproteinasa se kovalentně váže na alfa-2-makroglobulin.
CZ200523A 2002-06-21 2003-06-23 Způsob zamezení okluze v zavedeném katétru za použití fibrinolytických metalloproteinas CZ200523A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10/177,916 US7033776B2 (en) 1999-12-17 2002-06-21 Method for treatment of indwelling catheter occlusion using fibrinolytic metalloproteinases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ200523A3 true CZ200523A3 (cs) 2005-09-14

Family

ID=29999111

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ200523A CZ200523A3 (cs) 2002-06-21 2003-06-23 Způsob zamezení okluze v zavedeném katétru za použití fibrinolytických metalloproteinas

Country Status (17)

Country Link
US (4) US7033776B2 (cs)
EP (1) EP1531856A4 (cs)
JP (1) JP2005530846A (cs)
KR (1) KR20050047506A (cs)
CN (1) CN1674928A (cs)
AU (1) AU2003279258A1 (cs)
BR (1) BR0312149A (cs)
CA (1) CA2489997A1 (cs)
CZ (1) CZ200523A3 (cs)
IL (1) IL165834A0 (cs)
MX (1) MXPA04012847A (cs)
NO (1) NO20050328L (cs)
NZ (1) NZ537454A (cs)
PL (1) PL377634A1 (cs)
SK (1) SK50032005A3 (cs)
WO (1) WO2004000348A1 (cs)
ZA (1) ZA200500610B (cs)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9586023B2 (en) 1998-02-06 2017-03-07 Boston Scientific Limited Direct stream hydrodynamic catheter system
US7033776B2 (en) * 1999-12-17 2006-04-25 Amgen Inc. Method for treatment of indwelling catheter occlusion using fibrinolytic metalloproteinases
US20080275393A1 (en) * 2004-08-24 2008-11-06 Bonnette Michael J Isolation thrombectomy catheter system
US8162878B2 (en) 2005-12-05 2012-04-24 Medrad, Inc. Exhaust-pressure-operated balloon catheter system
EP1986568B1 (en) 2006-02-03 2017-04-05 Covidien LP Methods and devices for restoring blood flow within blocked vasculature
US8303538B2 (en) 2007-12-17 2012-11-06 Medrad, Inc. Rheolytic thrombectomy catheter with self-inflating distal balloon
US9717896B2 (en) 2007-12-18 2017-08-01 Gearbox, Llc Treatment indications informed by a priori implant information
US20090287120A1 (en) 2007-12-18 2009-11-19 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Circulatory monitoring systems and methods
US8636670B2 (en) 2008-05-13 2014-01-28 The Invention Science Fund I, Llc Circulatory monitoring systems and methods
EP2227285A4 (en) * 2007-12-26 2013-07-31 Medrad Inc RHEOMYTIC THROMBECTOMY CATHETER WITH SELF-CONTAINING PROXIMAL BALLOON HAVING INFUSION CAPACITY OF MEDICAMENT
DE112009000700T5 (de) 2008-03-20 2011-02-10 Medrad, Inc. Hydrodynamisches Direktstrom-Kathetersystem
WO2010102307A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Lazarus Effect, Inc. Retrieval systems and methods for use thereof
WO2011081859A2 (en) * 2009-12-14 2011-07-07 Tal Michael G Intravascular catheter with positioning markers and method of placement
PL3242608T3 (pl) * 2015-01-09 2021-10-04 Accurate Medical Therapeutics Ltd. Mikrocewnik embolizacyjny
WO2016130647A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Lazarus Effect, Inc. Expandable tip medical devices and methods
CA2978394C (en) 2015-03-02 2023-10-03 Accurate Medical Therapeutics Ltd. Catheters with side openings for modifying and delivering suspensions to a subject
CN105561463A (zh) * 2015-12-17 2016-05-11 邓朝胜 一种Swan-Ganz漂浮导管引导鞘管导入选择性目标器官的方法
CN109414266B (zh) 2016-05-04 2021-07-23 阿克瑞特医学治疗有限公司 具有狭缝状图案的栓塞微导管头部
RU2662145C2 (ru) * 2017-01-23 2018-07-23 Ильдар Наилевич Нурмеев Способ профилактики тромбоза у пациентов с центральным венозным катетером
CN107233342A (zh) * 2017-06-12 2017-10-10 揭阳市润达肠衣有限公司 一种含甲氧苄啶的固体分散体及其制备方法
EP3703583A4 (en) 2017-11-02 2020-12-30 Accurate Medical Therapeutics Ltd. EMBOLIZATION CATHETER WITH INTEGRATED FILTER
WO2021086543A1 (en) * 2019-10-29 2021-05-06 Bard Access Systems, Inc. Systems, devices, and methods for thrombolysis
CN111141902A (zh) * 2020-01-21 2020-05-12 佘钊炜 凝血检测装置

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US81685A (en) * 1868-09-01 Improvement in harvester-rakes
FR2310133A2 (fr) * 1975-05-05 1976-12-03 Fabre Sa Pierre Nouveau medicament comportant un activateur du plasminogene perfectionne
US4447236A (en) * 1982-02-05 1984-05-08 Cordis Corporation Infusion catheter system
US4610879A (en) * 1984-01-06 1986-09-09 University Of Southern California Fibrinolytic enzyme from snake vernom
CA1237482A (en) * 1984-03-09 1988-05-31 Frank B. Stiles Catheter for effecting removal of obstructions from a biological duct
US4755167A (en) * 1984-04-10 1988-07-05 Research Corporation In vivo method for distribution and stirring of therapeutic agents
US4837148A (en) * 1984-10-30 1989-06-06 Phillips Petroleum Company Autonomous replication sequences for yeast strains of the genus pichia
US4855231A (en) * 1984-10-30 1989-08-08 Phillips Petroleum Company Regulatory region for heterologous gene expression in yeast
US4885242A (en) * 1984-10-30 1989-12-05 Phillips Petroleum Company Genes from pichia histidine pathway and uses thereof
US4818700A (en) * 1985-10-25 1989-04-04 Phillips Petroleum Company Pichia pastoris argininosuccinate lyase gene and uses thereof
US4812405A (en) * 1986-02-18 1989-03-14 Phillips Petroleum Company Double auxotrophic mutants of Pichia pastoris and methods for preparation
US5000185A (en) * 1986-02-28 1991-03-19 Cardiovascular Imaging Systems, Inc. Method for intravascular two-dimensional ultrasonography and recanalization
ZA889415B (en) 1987-12-18 1989-09-27 Chiron Corp Compositions and method for recombinant production of crotalidus venum fibrolase
WO1990007352A1 (en) 1989-01-04 1990-07-12 Boston Scientific Corporation Angioplasty catheter
US5222941A (en) * 1990-01-12 1993-06-29 Don Michael T Anthony Method of dissolving an obstruction in a vessel
DE69133066T2 (de) 1990-01-16 2003-03-06 Ct Ingenieria Genetica Biotech Verfahren zur Expression heterologischer Gene in der Hefe Pichia Pastoris, Expressionsverfahren und transformierte Mikroorganismen
US5709676A (en) * 1990-02-14 1998-01-20 Alt; Eckhard Synergistic treatment of stenosed blood vessels using shock waves and dissolving medication
US5250034A (en) * 1990-09-17 1993-10-05 E-Z-Em, Inc. Pressure responsive valve catheter
US5167628A (en) * 1991-05-02 1992-12-01 Boyles Paul W Aortic balloon catheter assembly for indirect infusion of the coronary arteries
US5380273A (en) * 1992-05-19 1995-01-10 Dubrul; Will R. Vibrating catheter
EP0624642B1 (en) 1993-05-12 1999-01-20 Indian Council For Medical Research Novel thrombolytic agent, process for preparing same and its use for the preparation of a thrombi dissolving medicament
US5370653A (en) * 1993-07-22 1994-12-06 Micro Therapeutics, Inc. Thrombectomy method and apparatus
AU692497B2 (en) 1993-12-17 1998-06-11 Asahi Kasei Pharma Corporation Soluble thrombomodulin-containing pharmaceutical composition
FR2730579B1 (fr) 1995-02-10 1997-05-09 2B Technology Sarl Appareil portatif destine a l'exercice de diction de stimuli vocaux
GB9504657D0 (en) 1995-03-08 1995-04-26 Neil Michael J O An improved artificial airway device
US5626564A (en) * 1995-03-31 1997-05-06 Creighton University Adjustable sideholes catheter
US5830468A (en) 1995-05-17 1998-11-03 The New York Blood Center, Inc. Fibrin(ogen) degradation by fibrinolytic matrix metalloproteinase
US6020181A (en) * 1995-05-17 2000-02-01 New York Blood, Inc. Inhibition of thrombus formation by medical related apparatus comprising treating with fibrinolytic matrix metalloproteinase
US5741779A (en) * 1996-05-10 1998-04-21 Xoma Corporation Antithrombotic materials and methods
ES2248847T3 (es) * 1996-05-24 2006-03-16 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Composiciones y metodos para tratar o prevenir enfermedades de las vias de conduccion del cuerpo.
US5951981A (en) 1996-12-02 1999-09-14 Diatide, Inc. Thrombolytic agents with antithrombotic activity
US6413760B1 (en) 1997-04-15 2002-07-02 Genetics Institute, Inc. Highly purified mocarhagin cobra venom protease polynucleotides endcoding same and related proteases and therapeutic uses thereof
US6440414B1 (en) 1999-10-01 2002-08-27 Amgen Inc. Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent
US6261820B1 (en) * 1999-10-01 2001-07-17 Amgen Inc. Fibronolytically active polypeptide
US6455269B1 (en) * 1999-12-17 2002-09-24 Amgen, Inc. Method for localized administration of fibrinolytic metalloproteinases
US7033776B2 (en) * 1999-12-17 2006-04-25 Amgen Inc. Method for treatment of indwelling catheter occlusion using fibrinolytic metalloproteinases
WO2002012283A2 (en) 2000-08-03 2002-02-14 Zymogenetics, Inc. Disintegrin homologs, zsnk10, zsnk11, and zsnk12
US20050085769A1 (en) * 2001-07-17 2005-04-21 Kerberos Proximal Solutions Fluid exchange system for controlled and localized irrigation and aspiration
US20060095121A1 (en) * 2004-10-28 2006-05-04 Medtronic Vascular, Inc. Autologous platelet gel on a stent graft

Also Published As

Publication number Publication date
IL165834A0 (en) 2006-01-15
KR20050047506A (ko) 2005-05-20
EP1531856A1 (en) 2005-05-25
US20020197246A1 (en) 2002-12-26
AU2003279258A1 (en) 2004-01-06
JP2005530846A (ja) 2005-10-13
NO20050328L (no) 2005-03-17
US20060035299A1 (en) 2006-02-16
ZA200500610B (en) 2005-09-28
US7314728B2 (en) 2008-01-01
US20080095760A1 (en) 2008-04-24
NZ537454A (en) 2008-05-30
PL377634A1 (pl) 2006-02-06
SK50032005A3 (sk) 2005-12-01
BR0312149A (pt) 2005-03-29
MXPA04012847A (es) 2005-02-24
CN1674928A (zh) 2005-09-28
CA2489997A1 (en) 2003-12-31
US7316911B2 (en) 2008-01-08
US20060029592A1 (en) 2006-02-09
US7033776B2 (en) 2006-04-25
WO2004000348A1 (en) 2003-12-31
EP1531856A4 (en) 2008-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7314728B2 (en) Methods of treating peripheral arterial occlusions
Klement et al. The effect of thrombin inhibitors on tissue plasminogen activator induced thrombolysis in a rat model
US20090028907A1 (en) Botulinum toxin treatment
US7172760B2 (en) Compositions and methods for prevention and treatment of uncontrolled formation of intravascular fibrin clots
EP1239873B1 (en) Use of fibrinolytic metalloproteinases for the therapeutic treatment of a blood clot
JP2688603B2 (ja) 血栓溶解剤
US9211317B2 (en) Method of using prourokinase in facilitated percutaneous coronary intervention in patients with acute myocardial infarction
Goodman et al. Thrombolytic therapy in an isolated limb
AU2006202029A1 (en) Method for localized administration of fibrinolytic metalloproteinases
EA007654B1 (ru) Способ лечения закупорки стационарного катетера с использованием фибринолитических металлопротеиназ
US20220195072A1 (en) Targeted anticoagulant
JPH0769921A (ja) 網膜血管閉塞症予防治療剤
JPH049334A (ja) 線溶活性増強剤