CZ200471A3

CZ200471A3 - Způsob purifikace N-[3-(3-kyanopyrazol[1,5-a]pyrimidin-7-yl)fenyl]-N-ethylacetamidu (zaleplon) a krystalické formy zaleplonu připravitelné tímto způsobem

Info

Publication number: CZ200471A3
Application number: CZ200471A
Authority: CZ
Inventors: Erika Feher; Ferenc Korodi; Claude Singer; Erika Magyar
Original assignee: Biogal Gyogyszergyar Rt
Priority date: 2001-08-01
Filing date: 2002-08-01
Publication date: 2004-11-10
Also published as: US20030130291A1; NO20040887L; IS7128A; US6852858B2; WO2003011228A3; SK472004A3; CA2453751A1; US7348429B2; PL374176A1; HUP0402253A2; HUP0402253A3; EP1430054A4; MXPA04001035A; WO2003011228A2; JP2005523874A; IL160076A0; EP1430054A2; HRP20040180A2; US20050065168A1

Description

Odkazy na příbuzné přihlášky

Tato přihláška nárokuje prospěch US patentové přihlášky č. 10/170 673, podané 12. června 2002. Tato přihláška také nárokuje prospěch US patentové přihlášky č. 60/309 391, podané 1. srpna 2001; 60/317 907, podané 6. září 2001 a 60/388 199, podané 12. června 2002. Všechny tyto přihlášky jsou zde uvedeny jako odkaz.

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká anxiolytického, antiepileptického, sedativního, hypnotického činidla a činidla relaxujícího kosterní svaly, zaleplonu. Zejména se předkládaný vynález týká posledního stupně zpracování zaleplonu a zejména krystalických forem léčiva dostupného úpravami v posledním stupni zpracování. Vynález se dále týká N-[3-(3-kyanopyrazolo[1,5-aJpyrimidin-5-yl) fenylj-N-ethylacetamidu (4), regioizomeru zaleplonu. Vynález se také týká HPLC metod pro analýzu a zkoušení zaleplonu.

Dosavadní stav techniky

Zaleplon vykazuje anxiolytické, antipepileptické, sedativní a hypnotické vlastnosti. Byl schválen U. S. Food and Drug Administration pro krátkodobou léčbu insomnie a je dostupný na předpis pod obchodní značkou Sonata®. Molekulární struktura zeleplonu je známá a může být znázorněna následovně:

• · • · • ·

Název zaloplenu podle IUPAC je N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5a]pyrimidin-7-yl) f enyl]-N-ethylacetamid.

US patent č. 4 626 538 („patent '538) poskytuje obecnou metodologii pro přípravu zaleplonu a strukturně příbuzných sloučenin. V příkladu 2 patentu '538, reaguje N-(3-acetylfenyl)ethanamid 1 s dimethylacetalem dimethylformamidu za vzniku N-[3-[3- (dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl) ]fenyl-N-acetamidu 2 .

V příkladu 7 patentu '538 se primární amid acetamidu 2 alkyluje s ethyljodidem za vzniku N-[3-]3-(dimethylamino)-1-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamidu 3. Zaleplon se připraví v příkladu 14 kondenzací ethylacetamidu 3 a 3-amino-4-kyanopyrazolu 4 v refluxující ledové kyselině octové. Zaleplon se zpracuje rozdělením netěkavých částí mezi nasycený hydrogenuhličitan sodný a dichlormethan, sušením organické fáze, převedením organické fáze přes adsorbent (křemičitan hořečnatý) , přidáním hexanu k organické fázi, ochlazením organické fáze a sebráním pevných částí, které vznikly v organické fázi. Uvádí se, že produkt má teplotu tání 186 až 187 °C. Celková syntéza je znázorněna ve schématu 1. Patent '538 neindikuje vznik vedlejších produktů v kterékoliv reakci, ani neuvádí, jak by se vedlejší produkty měly separovat ze zaleplonu, pokud by vznikly.

• · · · · · · · * • · · · · · · · · · · · • ·«··· ·· ··· ····

Zaleplon (a) dimethylacetal dimethylformamidu, refl.; (b) ethyljodid, hydrid sodný, DMF; (c) ledová kyselina octová, refl.

U.S. patent č. 5 714 607 („patent '607) popisuje zlepšený postup přípravy zaleplonu. Podle patentu '607 se zaleplon může získat ve zlepšeném výtěžku a čistotě, jestliže se finální stupeň patentu '538 modifikuje přidáním vody do rozpouštědla kyseliny octové v množství od okolo 10 % do okolo 85 % (objem/objem). Jak se uvádí v patentu '607, zlepšené podmínky zkrátí reakční dobu od okolo 3-3,5 hodiny na okolo 1-3,5 hodiny. Podle tabulky 1 patentu '605, zaleplon se získá ve výtěžcích v rozsahu od okolo 81,7-90 % a čistota (HPLC) je od 98,77 do 99,4 %. V každém z příkladů se zaleplon získá krystalizaci z reakčních směsí, což byly směsi vody a kyseliny octové. Patent '538 neindikuje, že vznikají v tomto postupu vedlejší produkty nebo neuvádí, jak by měly být vedlejší produkte separovány, pokud by vznikly.

Obecně, U.S. patentová přihláška č. 10/170 673, nacházející se v řízení, popisuje způsob přípravy zaleplonu kondenzací N-ethylacetamidu 3 a pyrazolu 4 nebo jejich kyselých adičních solí v reakčním prostředí, obsahující vodu a s vodou mísitelné organické rozpouštědlo.

U.S. patentová přihláška č. 10/170 673, podaná 12. června 2002 je zde uváděna jako odkaz.

• * • · · » · · •· ·« 6« ·

Aby se získalo nové léčivo schválené pro trh,výrobci musí prokázat příslušným úřadům důkaz, že léčivo je přijatelné pro podání lidem. Takové podání musí zahrnovat, mezi jiným, analytická data, která uvádějí profil nečistot produktu .a která demonstrují, že produkt neobsahuje žádné nečistoty nebo že nečistoty jsou přítomné pouze v zanedbatelném množství. Pro takovou demonstraci jsou nutné analytické metody schopné detekovat nečistoty a referenční standardy pro jejich identifikaci a zkoušení. Existuje také potřeba referenčních standardů pro takové analytické metody.

U.S. Food and Drug Administration's Center for Drug Evaluation and Research (CDER) vydalo směrnice doporučující, aby přihlašovatelé nových a generických léčiv identifikovali organické nečistoty v množství 0,1% nebo větším v aktivní složce léčiva. „Guideline on Impurities in New Drug

Substances 61 Fed. Reg. 371 (1996), „Guidance for Industry ANDAs: Impurities in Drug Substances 64 Fed. Reg. 67917 (1999). Pokud není nečistota lidský metabolit, nebyla testována na bezpečnost nebo nebyla přítomná v kompozici, která byla prokázána jako bezpečná v klinických zkouškách,

CDER dále doporučuje, aby žadatelé o léčivo snížili množství nečistot v aktivní složce pod 0,1 %. Proto existuje potřeba izolovat nečistoty v léčivých substancích, aby mohla být studována jejich farmakologie a toxikologie.

Krystalické formy, které zahrnují polymorfy a pseudopolymorfy, jsou zřetelné pevné látky, sdílející stejný strukturní vzorec, mající různé fyzikální vlastnosti v důsledku různých konformaci a/nebo orientací molekuly v jednotkové buňce. Jedna fyzikální vlastnost, která se velmi, liší mezi krystalickými formami je rozpustnost, která může ovlivňovat biologickou dostupnost. Krystalické formy sloučeniny mohou být rozlišeny v laboratoři práškovou rentgenovou difrakční spektroskopií. Obecný přehled krystalických forem (t.j. polymorfů a pseudopolymorfů) a « » • · • »···« » ··«··· ·· A · ·· farmaceutické aplikace polymorfů viz. G. M. Wall, Pharin Manuf. 3, 33 (1986); . K. Haleblian a W. McCrone, J. Pharm. Sci., 58, 911 (1969); a J. K. Haleblian, J. Pharm. Sci., 64, 1269 (1975).

Objevení nových krystalických forem farmaceuticky užitečných sloučenin poskytuje novou možnost pro zlepšení výkonnostních charakteristik farmaceutického produktu. Rozšiřuje repertoár materiálů, které mají formulační pracovníci k dispozici pro návrh, například farmaceutických dávkových forem léčiva s cílovým profilem uvolňování nebo o jiné požadované charakteristiky. Předkládaný vynález poskytuje nové krystalické formy zaleplonu.

Stručný popis obrázků

Obrázek 1 představuje 13C NMR spektrum pro regioizomer zaleplonu.

Obrázek 2 představuje hmotnostní spektrum regioizomeru zaleplonu.

Obrázek 3 představuje 1H NMR spektrum regioizomeru zaleplonu. Obrázek 4 zobrazuje práškový rentgenový difraktogram formy I zaleplonu.

Obrázek 5 zobrazuje práškový rentgenový difraktogram formy II zaleplonu.

Obrázek 6 zobrazuje práškový rentgenový difraktogram formy III zaleplonu.

Obrázek 7 zobrazuje práškový rentgenový difraktogram formy IV zaleplonu.

Obrázek 8 zobrazuje práškový rentgenový difraktogram formy V zaleplonu.

Obrázek 9 představuje HPLC chromatogram zaleplonu získaný za použití HPLC metody podle předkládaného vynálezu.

Obrázek 10 představuje HPLC chromatogram regioizomeru získaného za použití metod podle předkládaného vynálezu.

• · • ft · · ·

Podstata vynálezu

N-[3- (3-Kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamid 5 mající strukturní vzorec

(5) vzniká jako hlavní vedlejší produkt v kondenzačním stupni reakce popsané v U.S. patentové přihlášce č. 10/170 673. Tato sloučenina, dříve neznámá v chemické literatuře a diskutovaná dále, může sloužit jako referenční standard při analýze zaleplonu. Sloučenina 5 je regioizomer zaleplonu, který se liší od zaleplonu v poloze N-ethyl-N-acetylaminofenylové skupiny na kondenzovaném heterocyklickém systému. Tvorba regioizomeru 5 může být objasněna buď (1) 1,2-adici 3-aminoskupiny kyanopyrazolu 4 s eliminaci vody a Michaelovou adici atomu dusíku 2 pyrazolu na konjugovanou dvojnou vazbu C=C nebo (2) Michaelovou adicí atomu dusíku 2 pyrazolu a cyklizaci 3-aminoskupiny na ketoskupinu. Ať regioizomer 5 vzniká jakýmkoli mechanismem, hlavní fakt spočívá v tom, že se jedná o nežádoucí hlavní vedlejší produkt v životaschopných komerčních preparátech zaleplonu.

Za podmínek uvedených v patentové přihlášce 10/170 673, regioizomer 5 typicky tvoří okolo 0,2 až 0,5 % vzhledem k žádanému izomeru.

Tak v jednom aspektu se předkládaný vynález týká N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu, uváděném jako zaleplonový regioizomer nebo regioizomer zaleplonu.

• · · · ···* · · · · • «···· · · ··· · · · · · • «······· ··«> ·· ·· ·· · · ·

V dalším aspektu se předkládaný vynález týká metody přípravy N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu, zahrnující stupně reakce směsi N-[3-[3-(dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamidu, 3-amino-4-kyanopyrazolu a silné kyseliny, v kapalném reakčním prostředí vody a alespoň jednoho s vodou se mísitelného organického rozpouštědla prostého volných skupin karboxylové kyseliny, neutralizaci reakční směsi za vzniku surového produktu a separaci N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu od ostatních složek surového produktu chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi chloroformu a acetonu jako elučního činidla, kde množství silné kyseliny je na molové bázi alespoň 10 x větší než množství jak N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu tak 3-amino-4-kyanpyrazolu, bez ohledu na to, který jev přebytku nebo kterýkoliv z nich, pokud se použijí v přibližně ekvimolárním množství.

V dalším aspektu se předkládaný vynález týká metody přípravy N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu, zahrnující stupně reakce směsi N-[3-[3-(dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamidu, 3-amino-4-kyanopyrazolu a silné kyseliny, v kapalném reakčním prostředí vody a alespoň jednoho s vodou se mísitelného organického rozpouštědla prostého volných skupin karboxylové kyseliny, neutralizaci reakční směsi za vzniku surového produktu a separaci N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu od ostatních složek surového produktu chromatografii na sloupci silikagelu za použití směsi chloroformu a acetonu jako elučního činidla, kde množství silné kyseliny je na molové bázi alespoň 20 x větší než množství jak N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu tak 3-amino-4-kyanpyrazolu, bez ohledu na to, který je v přebytku nebo kterýkoliv z nich, pokud se použijí v přibližně ekvimolárním množství.

Zaleplon a regioizomer 5 se obtížně oddělují, vzhledem ke své strukturní podobnosti. Existuje proto potřeba ve farmacii pro postup čištění zaleplonu, který je ve směsi s regioizomerem. Předkládaný vynález splňuje tuto potřebu s postupem srážení, který je účinný pro separaci dvou sloučenin. Je třeba vzít v úvahu, že předkládaná metoda čištění zaleplonu je rovněž účinná ve snížení nebo eliminaci dalších nečistot.

Tak v dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, například surového zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok může být tvořen rozpuštěním surového zaleplonu získaného z jakéhokoliv zdroje v organickém rozpouštědle za zvýšené teploty. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením. V jednom postupu se přidá antirozpouštědlo k roztoku za zvýšené teploty. Za použití prostředků k čištění se může získat zaleplon v podstatě prostý regioizomerů.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok může být tvořen rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle za zvýšené teploty, kde organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří alkoholy, ketony, ethery, karboxylové kyseliny, estery karboxylových kyselin, nitrily, aromatické uhlovodíky a halogenované uhlovodíky, směsi kterýchkoliv z nich a směsi jednoho nebo více z nich s vodou. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, • a « · aa aaa aaaa a aaaa aa a < a a a a* · a a použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením. V jednom postupu se přidá antirozpouštědlo k roztoku za zvýšené teploty. Za použití prostředků k čištění se může získat zaleplon v podstatě prostý regioizomerů a ostatních nečistot.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok může být tvořen rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle za zvýšené teploty, kde organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří methanol, ethanol, 2-propanol, aceton, methylethylketon, methylizobutylketon, tetrahydrofuran, diethylether, methyl-terc-butylether, kyselina octová, kyselina propionová, ethylacetát, izobutylacetát, acetonitril, akrylonitril, benzen, toluen, xyleny, dichlormethan a chloroform. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením. V jednom postupu se přidá antirozpouštědlo k roztoku za zvýšené teploty. Za použití prostředků k čištění se může získat zaleplon v podstatě prostý regioizomerů a ostatních nečistot.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu. Roztok se může získat rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle při zvýšené teplotě a může mít koncentraci mezi okolo 100 mM a okolo 1 M. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem • a « · β · « · zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok se může získat rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle (zejména kyselině octové, methanolu, ethanolu, 2-propanolu, tetrahydrofuranu, acetonitrilu nebo acetonu) při zvýšené teplotě. Přidá se antirozpouštědlo (zejména voda), přičemž se roztok udržuje při zvýšené teplotě. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením. V jednom provedení postupu se přidá k roztoku antirozpouštědlo při zvýšené teplotě.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok se může získat rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle při zvýšené teplotě. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty, použitím antirozpouštědla nebo použitím antirozpouštědla a chlazením. V jednom provedení postupu se přidá k roztoku antirozpouštědlo při zvýšené teplotě. Podle čistícího postupu se získá zaleplon obsahující alespoň o okolo 50 %, stejně jako o okolo 70 % méně regiomeru zaleplonu ve srovnání se surovým zaleplonem použitým jako výchozí materiál v postupu.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob čištění zaleplonu, který může být ve směsi s regioizomerem zaleplonu a dalších nečistot srážením pevné fáze obohacené o zaleplon z roztoku tvořeném ze surového zaleplonu z jakéhokoliv zdroje. Roztok se může získat rozpuštěním surového zaleplonu v organickém rozpouštědle, vybraném acetonitrilu a ethanolu při zvýšené teplotě. Přidá se antirozpouštědlo, přičemž se roztok udržuje při zvýšené teplotě. Pokud se použije jako rozpouštědlo acetonitril, antirozpouštědlem je voda. Pokud se použije jako rozpouštědlo ethanol, antirozpouštědlem je hexan. Čištěný zaleplon může být vysrážen z roztoku ochlazením roztoku ze zvýšené teploty.

V dalším aspektu se předkládaný vynález týká postupu čištění zaleplonu, který zahrnuje následující stupně: formování roztoku tuhé látky obsahující zaleplon v ethanolu, srážení pevné látky obohacené o zaleplon, vzhledem k pevné látce obsahující zaleplon použitý k přípravě roztoku za použití antirozpouštědla, kterým je voda, izolaci vysrážené pevné látky, která je obohacena o zaleplon, formování roztoku vysrážené pevné látky obohacené o zaleplon stupně v ethanolu, vysrážení pevné látky z roztoku bezprostředního předchozího stupně bez použití antirozpouštědla, izolace pevné látky dále obohacené o zaleplon.

Charakterizace v podstatě čistého zaleplonu získaného z procesu čištění vede k zjištění, že určitý proces provedení produkuje nové krystalické formy zaleplonu a proto předkládaný vynález dále poskytuje nové krystalické formy zaleplonu, které jsou přístupné dílčími kroky čištění vhodným výběrem rozpouštědla, antirozpouštědla a/nebo dalších podmínek.

Tak v jednom aspektu, předkládaný vynález poskytuje krystalickou formu II zaleplonu, charakterizovanou práškovým rentgenovým difraktogramem mající píky při 7,9, 10,7, 12,5,

14, 9, 16, 9, 17, 9, 21,3, 24, 0, 25,2, 25, 9, 27,0 a 27,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

V dalším aspektu, předkládaný vynález poskytuje krystalickou formu III zaleplonu, charakterizovanou práškovým rentgenovým difraktogramem mající píky při 15,4, 18,1, 21,1, 26,8 a 27,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

Ještě v dalším aspektu, předkládaný vynález poskytuje krystalickou formu III zaleplonu, charakterizovanou práškovým rentgenovým difraktogramem mající píky při 15,4, 18,1, 21,1, 26,8 a 27,5± 0,2 stupňů dvě-theta a dále charakterizovanou « β rentgenovými difrakčními píky (reflexe) při 11,6, 17,6, 19,0, 20,0 a 22,2 stupňů dvě-theta.

Ještě dalším aspektu, předkládaný vynález poskytuje krystalickou formu IV zaleplonu, charakterizovanou práškovým rentgenovým difraktogramem mající píky při 8,1, 14,5, 17,3,

21,3 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

Ještě v dalším aspektu, předkládaný vynález poskytuje krystalickou formu IV zaleplonu, charakterizovanou práškovým rentgenovým difraktogramem mající píky při 8,1, 14,5, 17,3,

21,3 ±0,2 stupňů dvě-theta a dále charakterizovanou rentgenovými difrakčními píky při 10,6, 11,1, 14,1, 15,6,

18,0, 18,2, 20, 1, 20, 3, 24,3, 25, 0, 25, 9, 26, 7, 27,9 a 29,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

Ještě v dalším aspektu se předkládaný vynález týká krystalického zaleplonu ve formě V, charakterizovaný rentgenovými difrakčními píky při 8,0, 14,8 a 17,0 ±0,2 stupňů dvě-theta.

Ještě v dalším aspektu se předkládaný vynález týká krystalické formy V zaleplonu, charakterizovanou rentgenovými difrakčními píky při 8,0, 14,8 a 17,0 ±0,2 stupňů dvě-theta a dále charakterizovanou rentgenovými difrakčními píky při 10,7, 11,0, 12,5, 15,4, 16,5, 17,7, 21,3, 25,7 a 26,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy zaleplonu v krystalické formě II, zahrnující následující stupně: formování roztoku zaleplonu v organickém rozpouštědle, které je mísitelné nebo znatelně rozpustné ve vodě; kontakt roztoku s vodou k vyvolání krystalizace zaleplonu a separaci formy II zaleplonu z organického rozpouštědla a vody.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy zaleplonu v krystalické formě II, zahrnující následující stupně: formování roztoku zaleplonu v organickém rozpouštědle, které je mísitelné nebo znatelně rozpustné ve • · vodě; kontakt roztoku s trojnásobným objemem vody, případně ochlazení na teplotu okolo 0 °C k vyvolání krystalizace zaleplonu a separaci formy II zaleplonu z organického rozpouštědla a vody.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy formy III zaleplonu, zahrnující následující stupně: formování roztoku zaleplonu v acetonitrilu, přidání vody k roztoku za zvýšené teploty, vysrážení zaleplonu z roztoku ochlazením a separaci zaleplonu III z acetonitrilu a vody.

Ještě v dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy krystalické formy IV zaleplonu, zahrnující následující stupně: formování roztoku zaleplonu v rozpouštědlovém systému vybraném ze skupiny, kterou tvoří 2-propanol a směsi tetrahydrofuranu a vody, vysrážení zaleplonu z roztoku a separaci formy IV zaleplonu z rozpouštědlového systému.

Předkládaný vynález dále poskytuje nové způsoby přípravy známých krystalických forem zaleplonu.

Tak v jednom aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy formy I zaleplonu zahrnující následující stupně: formování suspenze zaleplonu v kapalině při zvýšené teplotě, kde kapalina může být vroucí voda nebo vysoce vroucí uhlovodík, pokud zmíníme pouze dvě, ochlazení suspenze a separaci formy I zaleplonu z kapaliny.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy formy I zaleplonu, zahrnující následující stupně: tavení zaleplonu, ztuhnutí zaleplonu ochlazením a mletí tuhé formy zaleplonu za získání formy I zaleplonu.

Ještě v dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy krystalické formy I zaleplonu, zahrnující následující stupně: rozpuštění zaleplonu v organickém rozpouštědle za zahřívání, případně přidání apolárního organického antirozpouštědla k vzniklému roztoku, vyvolání srážení zaleplonu ochlazení a separaci formy I zaleplonu.

• · · · ·· · · · ··· • ····· · · · · · ···· • · · · · · · · · ··«· ·· ·· · · · · ·

Ještě v dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy formy I zaleplonu, zahrnující následující stupně: rozpuštění zaleplonu v organickém rozpouštědle za zahřívání, přidání apolárního organického antirozpouštědla k roztoku, vyvolání srážení zaleplonu ochlazením a separaci formy I zaleplonu.

Jsou rovněž poskytovány farmaceutické kompozice, obsahující krystalové formy zaleplonu popsané v tomto dokumentu - samotné nebo v kombinaci - ,metody léčby, například insomnie, za použití kterékoliv z těchto farmaceutických kompozic.

Ještě dalším aspektem předkládaného vynálezu je poskytnutí HPLC metod pro analýzu a zkoušení zaleplonu.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje HPLC metodu pro zkoušení zaleplonu, zahrnující následující stupně: rozpuštění vzorku zaleplonu ve směsi ředidla tvořeného acetonitrilem a vodou 1:1, injektování vzorku roztoku (cca 10 μΐ) do 100 mm x 4 mm, 3 μπι RP-18 HPLC kolony, eluováni vzorku z kolony při 1 ml/min. za použití směsi acetonitrilu (28 objem. %) a pufru na bázi formiátu amonného (72 objem. %,

0,005 M, pH = 4) jako eluentu a měření obsahu zaleplonu v relevantním vzorku při vlnové délce 245 nm s UV detektorem.

Popis výhodného provedení

Předkládaný vynález poskytuje způsob, který je zejména použitelný pro zvýšení čistoty surového zaleplonu, který může být směsí zaleplonového regioizomeru a ostatních nečistot. Předkládaný vynález také poskytuje způsob obohacení takových směsí o regioizomer (5) a tím usnadnění izolace regioizomeru představuje další provedení předkládaného vynálezu.

Surový zaleplon užitečný v několika provedeních předkládaného vynálezu může být poskytován jako kondenzovaný, nečištěný nebo částečně čištěný konečný produkt chemických • · • · · · • · e syntéz, jako jsou syntézy popsané v U.S. patentech č. 4 626 538, 5 714 607 a U.S. patentové přihlášce č. 10/170 673 nebo z jakéhokoliv zdroje.

Sloučenina N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamid (5), regioizomer zaleplonu byl popsán jako hlavní nečistota při syntéze zaleplonu, vycházeje z 3-amino-4-kyanpyrazolu a N-[3-]3- (dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl]fenyl]N-ethylacetamidu. Při reakčních podmínkách popsaných v U.S. prozatímní patentové přihlášce 60/297 635 je množství nečistoty regioizomeru v surovém produktu okolo 0,2 - 0,5 % (HPLC). Množství této nečistoty je silně závislé na reakčních podmínkách a, jak je popsáno dále, a reakční podmínky mohou být měněny tak, aby se tvořilo maximální množství regioizomeru a tím byla usnadněna jeho izolace a charakterizace.

Tak v dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy nového N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu (5), vycházeje z 3-amino-4-kyanopyrazolu a N-[3-[3- (dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamidu, jejich reakcí v přítomnosti kyseliny ve vodě nebo ve směsi vody a s vodou se mísitelného organického rozpouštědla v přítomnosti kyseliny. Množství regioizomeru (5) může být zvýšeno do 5 % (HPLC) použitím vysoké koncentrace silné kyseliny při syntéze. Toto usnadňuje izolaci a charakterizaci této nové sloučeniny.

Reakce se může provádět při 20 ° až 30 °C nebo vyšší teplotě až do teploty varu vody. Výhodná je teplota 20 ° až 30 °C. Jako rozpouštědla mísitelná s vodou se mohou použít jak polární protická (například kyselina octová, methanol, ethanol, izopropanol) nebo polární aprotická (například acetonitril, tetrahydrofuran, dimethylformamid) rozpouštědla. Jako kyselina se může použít jak minerální (například chlorovodíková, sírová, fosforečná), tak organická (například octová, trifluoroctová, methansulfonová) kyselina. Výhodná je kyselina chlorovodíková.

Ve výhodném provedení se reakce provede ve vodě v přítomnosti kyseliny chlorovodíkové a při teplotě okolo 25 °C. Izolace směsi zaleplonu a jeho regioizomeru (5) se může provést odpařením, filtrací, extrakcí nebo kombinací těchto metod.

Ve zvlášť výhodném provedení se po skončení reakce, reakční směs zředí s vodou a vysrážený zaleplon se odstraní filtrací. Poté následuje neutralizace k vysrážení směsi zaleplonu a regioizomeru 5. Další množství směsi se může získat extrakcí vodné fáze s vodou nemísitelnými organickými rozpouštědly, jako jsou ethylacetát, dichlormethan, chloroform a podobně.

Izolace sloučeniny 5 se může provést chromatografií. Mohou se použít sloupcová chromatografie, preparativní TLC nebo HPLC. Výhodná je sloupcová chromatografie. Jako náplň se může použít silikagel nebo oxid hlinitý. Výhodná náplň je silikagel. Jako eluční činidlo se mohou použít různá organická rozpouštědla nebo jejich směsi. Výhodné jsou směsi dichlormethanu a acetonu jako eluční činidla. Zvlášť výhodným elučním činidlem je směs dichlormethanu a acetonu v poměru 3:1 (objemově).

Izolovaná sloučenina 5 se charakterizuje a jeho struktura se prokáže ¹H-NMR a ¹³C-NMR spektroskopií a rovněž hmotnostní spektroskopií.

Obrázek 1 ukazuje ¹³C NMR spektrum sloučeniny 5.

Hmotnostní spektrum s nízkým rozlišením El regioizomeru 5 je uvedeno na obrázku 2. ¹H NMR regioizomeru 5 je ukázáno na obrázku 3. ¹H a ¹³C NMR specifikace plků pro sloučeninu 5 jsou uvedeny dále.

Tabulka 1 Rezonanční specifikace ¹H NMR

chemický posun (ppm)	multiplicita	intenzita	specifikace
1,143	triplet	3H	4-CH₃(Et)
1,876	singlet	3H	1 -CH₃
3,804	kvadruplet	2H	3-CH₂(Et)
7,361	dublet	1H	4'-CH
7,532	dublet	1H	6-CH
7,613	triplet	1H	5'-CH
8,018	singlet	1H	2'-CH
8,159	dublet	1H	6'-CH
8,375	singlet	1H	2-CH
8,805	dublet	1H	7-CH

Tabulka 2 Rezonanční specifikace ¹³C

chemický posun (ppm)	specifikace
12,89	4-CH₃
22,68	1-CH₃
43,84	3-CH₂
83,17	3-C
107,71	6-CH
112,84	CN
127,17	6'-CH
127,48	2'-CH
130,62	5'-CH
131,63	4'-CH
136,67	7-CH
137,46	1'-C
144,1	3'-C

148,31	2-CH
149,99	9-C
158,6	5-C
169,9	2-CO

V souladu s dalším provedením vynálezu, zaleplon se čistí srážením za regulovaných podmínek z roztoku připraveném ze surového zaleplonu. Nečistý a surový zalepon se může podrobit jednoduchému postupu zpracování za získání čistšího zaleplonu nebo postup může být opakován za získání zaleplonu v jakékoliv žádané dosažitelné úrovně čistoty, včetně zaleplonu v podstatě prostého regioizomeru.

Při postupu čištění podle předkládaného vynálezu se pevná látka obohacená o zaleplon vysráží z roztoku obsahující organické rozpouštědlo. Jako organická rozpouštědla se používají alkoholy, jako je methanol, ethanol a 2-propanol; ketony, jako je aceton, methylethylketon a methylizobutylketon; ethery, jako je tetrahydrofuran (THF), diethylether a methylterc-butylether; karboxylové kyseliny, jako je kyselina octová a kyselina propionová; estery karboxylových kyselin, jako je ethylacetát a izobutylacetát; nitrily, jako je acetonitril a akrylonitril; aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xyleny a halogenované uhlovodíky, jako je dichlormethan a chloroform a jejich směsi. Voda se případně může spojit s organickým rozpouštědlem. Je třeba vzít v úvahu, že organické rozpouštědlo se vybere s ohledem na jeho bod mrazu a teploty, při kterých se proces provede budou takové, aby rozpouštědlo nemrzlo. Obecně, výhodná organická rozpouštědla jsou kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofura (THF), acetonitril, aceton, ethylacetát, toluen a dichlormethan.

Optimální koncentrace zaleplonu v roztoku je obecně v rozsahu od okolo 100 mM do okolo 1M, výhodněji od okolo 100 mM do okolo 700 mM. Organické rozpouštědlo se může zahřívat na vyšší teplotu, aby se získal homogenní roztok surové směsi ·««· ··· *·« • · » · · · · · · ·»· • *···· · » ··· ···· • ···«·«·« ·«·· ·· ·· ·· · · * zaleplonu. Výraz „zvýšená teplota jak se zde používá, znamená teplotu nad okolo 25 °C. Použití organického rozpouštědla které vře při požadované teplotě se vybere podle preference. Roztoky nasycené zaleplonem při teplotě, při které se tvoří roztok vedou k separaci zaleplonu od regioizomeru 5 tím účinněji, čím jsou roztoky nenasycenější. Výhodná je tvorba nasyceného roztoku.

Poté, co se surový zaleplon zcela rozpustí, vyvolá se srážení pevných látek obohacených o zaleplon z roztoku chlazením. Chlazení může být jak aktivní chlazení, vložením do vnější chladící lázně, kde dochází k výměně tepla mezi roztokem a chladící lázní nebo pasivní chlazení zastavením zahřívání. Výhodně se roztok ochladí na sníženou teplotu, výhodněji na teplotu okolo 5 až 10 °C. Srážení se také může indukovat pomoc antirozpouštědla, případně za chlazení. Výraz „snížená teplota, jak se zde používá, znamená teplotu pod okolo 20 °C.

Chlazení způsobuje srážení pevných látek obohacených o zaleplon ve vztahu k surové směsi zaleplon/regioizomer.

Po vysrážení pevných látek obohacených o zaleplon z roztoku se pevné látky oddělí z roztoku ochuzeného o zaleplon a získá se čistý zaleplon. Separace se může provést jakoukoli konvenční technikou pro odstranění pevných látek z kapalin, jako je filtrace nebo dekantace. Dále, separace případně zahrnuje obvyklé promývání a sušení pevných látek, jak je uvedeno v příkladech.

V jednom provedení postupu čištění se přidá k roztoku antirozpouštědlo. Výraz antirozpouštědlo, jak se používá v tomto dokumentu znamená jakoukoliv kapalinu, ve které je zaleplon málo rozpustný a která netvoří oddělenou kapalnou fázi během postupu. Výhodná antirozpouštědla zahrnují alifatické uhlovodíky a vodu, přičemž pentan, hexan, heptan, oktan, petrolether a voda jsou výhodnější a hexan a voda jsou nejvýhodnější. Poměr antirozpouštědla k organickému • · · « rozpouštědlu je výhodně od okolo 1:1 do okolo 4:1, výhodněji od okolo 1:1 do okolo 2:1.

Pokud se použije jako antirozpouštědlo alifatický uhlovodík, výhodná organická rozpouštědla jsou kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, THF, acetonitril, aceton, ethylacetát, toluen a dichlormethan. Výhodná organická rozpouštědla, když se použije voda jako antirozpouštědlo jsou kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, THF, acetonitril a aceton.

Pokud se použije antirozpouštědlo, je výhodné pracovat v nižším koncentarčním rozsahu. Výhodný koncentrační rozsah zaleplonu v organickém rozpouštědle, když se přidá antirozpouštědlo je od okolo 100 mM do okolo 400 mM. Antirozpouštědlo se výhodně přidá k roztoku před výskytem zákalu nebo sraženiny, výhodně se antirozpouštědlo přidá při zvýšené teplotě.

Antirozpouštědlo se může použít za účelem pomoci formovat nasycený nebo téměř nenasycený roztok, aby nebylo nutné odstraňovat přebytek nerozpuštěných pevných látek. Nenasycený roztok zaleplonu a regioizomeru se tvoří v organickém rozpouštědle. Antirozpouštědlo se přidává k roztoku, dokud se zaleplon nezačne srážet. Poté se teplota zvýší a/nebo se přidá další organické rozpouštědlo, dokud sraženina zaleplonu nepřejde opět do roztoku a postup čištění pokračuje srážením zaleplonu z takto vytvořeného roztoku.

Ve zvlášť výhodných provedeních může jednoduchá iterace postupu čištění snižovat obsah regioizomeru v surovém zaleplonu o 50 % nebo více, dokonce o 70 % nebo více. Takové snížení je velmi účinné, vezmeme-li v úvahu strukturní podobnost mezi zaleplonem a regioizomerem 5. Jednoduchá iterace postupu čištění může snížit poměr regioizomeru od hodnoty okolo 0,2 % v surovém zaleplonu do okolo 0,03 % v pevných látkách obohacených o zaleplon, což činí odstranění • · · · · · · * « * ' · • ····· ·« · · · · * · · • ······*· ····»· · · ·« ·· · % regioizomeru. Další snížení v množství regioizomeru může být dosaženo opakováním postupu čištění.

Použití antirozpouštědla může zvýšit získání zaleplonu bez podstatného snížení stupně separace. Jak je demonstrováno v příkladech, použití antirozpouštědla v kombinaci s reprezentativním výběrem organických rozpouštědel jednoznačně zvyšuje získání zaleplonu.

Postupem čištění podle vynálezu se může získat zaleplon s méně než 0,033 % regioizomeru (podle metody HPLC podle vynálezu).

Tak v dalším provedení předkládaný vynález poskytuje zaleplon mající čistotu alespoň okolo 98,5 % a nejvýhodněji alespoň okolo 99 %. Výraz čistotu jak se zde používá znamená procentovou oblast čistoty stanovenou HPLC metodou popsanou v tomto dokumentu. Tak zaleplon 99% čistoty (nebo 99% čistý zaleplon) znamená, že poměr oblasti píku pro zaleplon k součtu všech oblastí píků HPLC krát 100 je 99.

Bylo zjištěno, že při některém procesu čištění byly získány nové krystalické formy zaleplonu. Postup čištění po krocích se může použít k přípravě nových forem z čistého nebo znečištěného zaleplonu. Tyto nové formy mohou být také přístupné jakoukoli z dalších technik dosaženou empiricky.

Tyto nové formy jsou odlišitelné od zaleplonu, který je dostupný v Sonata® charakteristikami jejich rentgenových difraktogramů. Zaleplon, který je v Sonata® je v tomto popisu označen jako forma I. Zaleplon formy I má charakteristické píky v rentgenovém práškovém difraktogramů (obrázek 4) při 10,5, 14,5, 18,8, 17,3, 18,0 (silný), 19, 0, 20, 1, 21, 3, 24,4,

25, 9, 26, 7, 29, 4, 30, 7 ± 0,2 stupně dvě-theta.

Zaleplon formy II se může připravit podle následujícího postupu čištění po krocích za použití ledové vody jako antirozpouštědla a ve vodě mísitelného nebo v podstatě ve vodě rozpustného rozpouštědla. Zejména se zaleplon formy II může připravit rozpuštěním zaleplonu v podstatě ve vodě rozpustném nebo s vodou mísitelném organickém rozpouštědle, vybraném z těch, které jsou popsány shora. Výhodná organická rozpouštědla pro získání zaleplonu formy II jsou kyselina octová, ethanol, 2-propanol, THF, acetonitril a aceton.

Zaleplon formy II se může srážet při kterékoliv teplotě, ale teplota je obvykle teplota okolí nebo zvýšená. K optimalizaci získání zaleplonu je výhodné nasytit organické rozpouštědlo zaleplonem při zvýšené teplotě. Poté se přidá ke směsi ledová voda. Poměr organického rozpouštědla a ledové vody může být od okolo 1:2 do okolo 1:5 (objemově), přičemž výhodný poměr je okolo 1:3 (objemově). Ačkoliv přidání ledové vody ochladí směs, směs organické rozpouštědlo/voda se výhodně dále ochladí, je-li to nezbytné na teplotu okolo 5 až 10 °C. Směs by se měla při přidávání vody a chlazení míchat. Za výhodných podmínek je krystalizace formy II v podstatě kompletní během okolo jedné hodiny nebo kratší doby, načež se může separovat, včetně případného promytí a sušení a získá se krystalický zaleplon formy II.

Zaleplon formy II je charakterizován práškovým rentgenovým difraktogramem (obrázek 5), mající charakteristické píky při 7,9 (silný), 110, 7, 12,5, 14,9, 16, 9, 17,9, 21,3, 24,0, 25,2, 25,9, 27,0 a 27,5 ±0,2 stupňů dvě-theta. Tento a další práškové rentgenové difraktogramy v obrazcích byly získány na práškovém rentgenovém difraktometru Scintag model X'TRA opatřeném měděnou anodovou elektronkou a detektorem v pevném stavu. Vzorky se připravovaly opatrně a roztíráním v achátové třecí misce, aby se snížila preferenční orientace. Nebyla pozorována žádná ztráta krystalinity během tření. Práškový vzorek se nasypal do kruhové dutiny držáku vzorku a lisoval se hladkou deskou, aby se získal hladký povrch. Kontinuální skeny se provedly od 2 do 40 ⁰ při 3 °/minutu. Zapsané polohy píků se uvažovaly s přesností ±0,05 °. Pro odborníka v rentgenové krystalografii je zřejmé, že polohy stanovené na různých zařízeních se mohou lišit o ± 1 °.

• 4 4 4 · * · · 4*4 • 444 4 4* 4 · 4 «4 4 4 4444 · 4 » *

4444· * * 4 4 · » « * 4 • · · 4 ♦ 4 «4«

44*4 44 44 44 44 4

Zaleplon formy III se může připravit rozpuštěním zaleplonu v refluxujícím acetonitrilu, přidáním vody k refluxujícímu roztoku v množství od okolo 2:1 (objemově) do okolo 4:1 (objemově), výhodně okolo 3:1 (objemově) vzhledem k acetonitrilu a chlazením směsi na okolo 5 až 10 °C bez míchání.

Zaleplon formy III je charakterizován práškovou rentgenovou difrakční spektroskopií a bylo zjištěno, že má charakteristické píky v difraktogramu (obrázek 6) při 15,4,

18,1, 19,0, 21,1, 26,8 a 27,5 ± 0,2 stupňů dvě theta.

Zaleplon formy III je dále charakterizován píky v difrakci rentgenového záření při 11,6, 17,6, 19,0, 20,0 a 22,2 ±0,2 stupně dvě theta.

Nová krystalická forma zaleplonu označená jako forma IV se může připravit formováním roztoku zaleplonu ve směsi 1:1 (objemově) vody a THF při zpětném toku a ochlazením roztoku na teplotu místnosti bez míchání. Oddělením vysrážené pevné látky se získá zaleplon formy IV. Forma IV se také může připravit formováním roztoku zaleplonu v 2-propanolu při zpětném toku, ochlazením roztoku na 5 až 10 °C bez míchání a oddělením vysrážené pevné látky.

Zaleplon formy IV je charakterizován práškovou rentgenovou difrakční spektroskopií a bylo zjištěno, že má charakteristické píky v difraktogramu (obrázek 7) při 8,1, 14,5, 17,3,

21,3, 24,3, 25, 0, 25, 9, 26, 7, 27,9, 29, 5 ± 0,2 stupňů dvětheta.

Zaleplon formy IV může být dále charakterizován píky v diagramu difrakce rentgenového záření při 10,6, 11,1, 14,1,

15, 6, 18,0, 18,2, 20, 1, 20, 3, 24,3, 25, 0, 25, 9, 26, 7, 27, 9 a 29,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.

Ještě další nová krystalická forma zaleplonu, forma V, se získá podle příkladů U.S. patentové přihlášky č. 10/170 673, uváděné zde jako odkaz.

Zaleplon formy V je charakterizován práškovou rentgenovou difrakční spektroskopií a bylo zjištěno, že má charakteristické píky v difraktogramu (obrázek 8) při 8,0, 14,8 a 17,0 ±0,2 stupňů dvě theta.

Zaleplon formy V je dále charakterizován píky v difrakci rentgenového záření při 10,7, 11,0, 12,5, 15,4, 16,5, 17,7, 21,3, 25,7 a 26,5 ± 0,2 stupně dvě theta.

Předkládaný vynález dále poskytuje nové způsoby přípravy známé formy I zaleplonu. V jednom postupu přípravy krystalické formy I zaleplonu se zaleplon suspenduje ve vodě a zahřívá se při zpětném toku. Suspenze se poté ochladí na teplotu místnosti. Krystaly se filtrují a suší a získá se krystalická forma I zaleplonu.

Podle dalšího způsobu přípravy formy I zaleplonu se zaleplon smíchá na kaši ve vysokovroucích uhlovodících. Uhlovodíky se vyberou z toluenu, xylenů, tetrahydronaftalenu a podobně. Vhodná teplota může být teplota od okolo 100 °C do teploty tání zaleplonu. Po zpracování při vysoké teplotě se suspenze poté ochladí na teplotu místnosti. Krystaly se odfiltrují a po vysušení se získá krystalický zaleplon formy I.

Podle dalšího provedení postupu pro přípravu zaleplonu formy I se zaleplon roztaví a roztavený zaleplon se ochladí na teplotu místnosti a mele se za získání krystalického zaleplonu formy I.

Nové formy zaleplonu II, III, IV a V jsou výhodné pro dodávání zaleplonu do gastrointestinálního traktu, mukusních membrán a oběhového systému pacienta, který trpí insomnií.

Mohou být formulovány do farmaceutického produktu jako Sonata® nebo jiné dávkové formy.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují zaleplon formy II, III, IV a V, případně ve směsi s jinými formami nebo amorfním zaleplonem a/nebo ostatními aktivními složkami. Vedle aktivních složek, farmaceutické prostředky podle vynálezu ·

• · • · · ·»· · · ř «·»····» ···· ·· ·· ·· ·· · mohou obsahovat jednu nebo více pomocných látek. Pomocné látky se přidávají k prostředku pro různé účely.

Ředidla zvyšují objem pevných farmaceutických prostředků a mohou činit farmaceutickou dávkovou formu obsahující prostředek snazší při manipulaci pro pacienta a pečovatele. Ředidla pro pevné prostředky zahrnují například mikrokrystalickou celulózu (například Avicel®) , mikrojemnou celulózu, laktózu, škrob, předželatinovaný škrob, uhličitan vápenatý, síran vápenatý, cukr, dextráty, dextrin, dextrózu, dihydrát hydrogenfosforečnanu vápenatého, fosforečnan vápenatý, kaolin, uhličitan hořečnatý, oxid hořečnatý, maltodextrin, manitol, polymethakryláty (například Eudragit®), chlorid draselný, práškovou celulózu, chlorid sodný, sorbitol a mastek.

Pevné farmaceutické prostředky, které jsou lisované do dávkové formy jako je tableta, mohou obsahovat pomocné látky, jejichž funkce spočívá v napomáhání vázání aktivní složky a ostatní pomocné látky spolu po lisování. Pojivá pro pevné farmaceutické prostředky zahrnují akacii, kyselinu alginovou, karbomer (například karbopol), sodnou karboxymethylcelulózu, dextrin, ethylcelulózu, želatinu, guarovou gumu, hydrogenovaný rostlinný olej, hydroxyethylcelulózu, hydroxypropylcelulózu (například Klucel ) , hydroxypropylmethylcelulózu (například Methocel , kapalnou glukózu, křemičitan hlinitohořečnatý, maltodextrin, methylcelulózu, polymethakryláty, povidon (například Kollidon®, Plasdon®), předželaitinovaný škrob, alginát sodný a škrob.

Rychlost rozpouštění lisovaného farmaceutického prostředku v žaludku pacienta může být zvýšena přidáním dezintegračního činidla k prostředku. Dezintegrační činidla zahrnují kyselinu alginovou, karboxymethylcelulózu vápenatou, sodnou karboxymethylcelulózu (například Ac-Di-Sol®, Primellose®) , koloidní.oxid křemičitý, kroskarmelóza sodná, króspovidon • · (například Kollidin, Polyplasdone®), guarovou gumu, křemičitan hořečnatohlinitý, methylcelulózu, mikrokrystalickou celulózu, polacrillín vápenatý, práškovou celulózu, předželatinovaný škrob, alginát sodný, glykolát sodného škrobu (například Explotab®) a škrob.

Za účelem zlepšení tokových vlastností nelisovaných pevných prostředků a ke zlepšení přesnosti dávkování se přidávají kluzná činidla. Pomocné látky, které mohou působit jako kluzná činidla zahrnují koloidní oxid křemičitý, trisilikát hořečnatý, práškovou celulózu, škrob, mastek a fosforečnan vápenatý.

Pokud se dávková forma, jako je tableta připravuje lisováním práškové kompozice, kompozice se podrobí lisování z lisovadla. Některé pomocné látky a aktivní složky mají tendenci ulpívat na povrchu lisovadla, což může být příčinou, že produkt má různé povrchové nepravidelnosti. Za účelem snížení přilnavosti usnadnění uvolňování produktu z formy se může přidat ke kompozici mazadlo. Mazadla zahrnují stearát hořečnatý, stearát vápenatý, glycerolmonostearát, glycerolpalmitostearát, hydrogenovaný ricinový olej, hydrogenovaný rostlinný olej, minerální olej, polyethylenglykol, benzoát sodný, laurylsulfát sodný, stearylfumarát sodný, kyselina stearová, mastek a stearát zinečnatý.

Aromáty a činidla zvyšující aroma činí dávkovou formu pro pacienta chutnější. Obecné aromáty a činidla zvyšující aroma u farmaceutických produktů, která mohou být zahrnuta do prostředku podle vynálezu zahrnují maltol, vanilin, ethylvanilín, menthol, kyselinu citrónovou, kyselinu fumarovou, ethylmantol a kyselinu vinnou.

Pevné a kapalné prostředky mohou být také barveny za použití farmaceuticky přijatelných barviv, s cílem zlepšit jejich vzhled a/nebo usnadnit identifikaci produktu pacientem nebo jednotkovou dávku.

V kapalných farmaceutických prostředcích podle předkládaného vynálezu se formy II, III, IV a V a kterákoliv jiná pevná pomocná látka rozpustí nebo suspenduje v kapalném nosiči, jako je voda, rostlinný olej, alkohol, polytehylenglykol, propylenglykol nebo glycerin.

Kapalné farmaceutické prostředky mohou obsahovat emulgační činidla za účelem jednotné disperze aktivní složky nebo další pomocné látky, která není rozpustná v kapalném nosiči.

Emulgační činidla, která se mohou použít v kapalných prostředcích podle vynálezu zahrnují například želatinu, vaječný žloutek, kasein, cholesterol, akacii, tragakant, chondrus, pektin, methylcelulózu, karbomer, cetostearylalkohol a cetylakohol.

Kapalné farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou také obsahovat činidlo zvyšující viskozitu, za účelem zlepšení pocitu v ústech a/nebo povlečení vedení gastrointestinálního traktu. Taková činidla zahrnují akácii, kyselinu alginovou, bentonit, carbomer, vápenatou nebo sodnou karboxymethylcelulózu, cetostearylalkohol, methylcelulózu, ethylcelulózu, želatinovou guarovou gumu, hydroxyethylcelulózu, hydroxypropylcelulózu, hydroxypropylmethylcelulózu, maltodextrin, polyvinylalkohol, povidon, propylenkarbonát, propylenglykolalginát, alginát sodný, glykolát sodného škrobu, tragakant škrobu a xatanovou gumu.

Za účelem zlepšení chuti se mohou přidat sladidla, jako je sorbitol, sacharin, sacharin sodný, sacharóza, aspartam, fruktótza, manitol a invertní cukr.

Konzervační látky a chelatační činidla, jako alkohol, benzoát sodný, butylovaný hydroxytoluen, butylovaný hydroxyanisol a ethylendiamintetraoctová kyselina se mohou přidávat v úrovních, které jsou bezpečné pro požití a s cílem zlepšení stability při skladování.

Kapalné prostředky podle předkládaného vynálezu mohou také obsahovat pufr, jako je kyselina gukonová, kyselina mléčná, kyselina citrónová nebo kyselina octová, gukonát sodný, laktát sodný, citrát sodný nebo octan sodný.

Výběr pomocných látek a jejich množství může být snadno stanoveno odborníkem na základě zkušeností a zvážení standardních postupů a referencí v oboru.

Pevný prostředek podle předkládaného vynálezu zahrnuje prášky, granule, agregáty a lisované prostředky. Dávky zahrnují dávky vhodné pro orální, bukální, rektální, parenterální (včetně subkutánního, intramuskulárního a intravenózního), inhalační a oftalmické podání. Ačkoliv většina vhodných cest v každém případě bude závislá na povaze a vážnosti stavu, který se má léčit, nejvýhodnější cesta podle předkládaného vynálezu je orální podání. Dávky mohou být obvykle prezentovány v jednotkové dávkové formě a jsou připraveny jakoukoli metodou, dobře známou ve farmaceutických oborech.

Dávkové formy zahrnují pevné dávkové formy, jako jsou tablety, prášky, kapsle, čípky, sáčky a pastilky, pilulky a rovněž kapalné sirupy, suspenze a elixíry.

Aktivní složka a pomocné látky mohou být formulovány do prostředků a dávkových forem podle metod známých v oboru.

Kapsle, tablety a pilulky a ostatní pevné jednotkové dávkové formy výhodně obsahují dávkovou úroveň od okolo 5 do okolo 20 mg, výhodněji od okolo 5 mg do okolo 10 mg zaleplonu.

Ještě v dalším provedení předkládaný vynález poskytuje novou gradientovou eluční HPLC metodu pro stanovení profilu znečištění zaleplonu, který je kvantifikován procentovou oblastí, jako množství nečistot nacházejících se v zaleplonu.

V tomto provedení, vhodné pro kompletní rozlišení (separaci) píku zaleplonu (1) od píku strukturně velmi podobné sloučeniny (5) a rovněž od ostatních nečistot, předkládaný vynález poskytuje HPLC metodu zahrnující následující stupně:

a, rozpuštění vzorku zaleplonu v ředidle ve směsi aceton!trii:voda (1:1), b, injektování vzorku roztoku (cca 10 μΐ) do kolony 250 mm x 4,6 mm, 5 μη RP-18 pro HPLC, c, gradientovou eluci při 1 ml/min směsí acetonitriiu (A) a pufru formiátu amonného (B, 0,005 M, pH = 4) podle následujícího profilu:

HPLC gradient

Doba (min.)	Eluent A (%)	Eluent B (%)
0		20	80
11		32	68
17		40	60
30		40	60
31		20	80
35		20	80

d, měření množství každé nečistoty při vlnové délce 245 nm s UV detektorem a vhodným zapisovacím zařízením.

Ve shora uvedené metodě má zaleplon retenční čas okolo 17 minut. Typický chromatogram HPLC za použití této metody je ukázán na obrázku 9.

V dalším provedení, adaptovaném ke zkoušení zaleplonu a jeho hlavní nečistoty 5 v léčivé substanci a farmaceutických kompozicích obsahující zaleplon, předkládaný vynález poskytuje izokratíckou zkušební metodu, zahrnující následující stupně:

a, rozpuštění vzorku zaleplonu v ředidle ve směsi acetonitril:voda (1:1), b, injektování vzorku roztoku (cca 10 μΐ) do kolony 100 mm x 4,mm, 3 μπι RP-18 pro HPLC, c, eluování vzorku z kolony při 1 ml/min směsí acetonitriiu (29 % objemově) a pufru formiátu amonného (72 % objemově,

0,005 M, pH = 4) jako eluentu, a • · · · • · d, měření obsahu zaleplonu ve vzorku při vlnové délce 245 nm s UV detektorem a vhodným zapisovacím zařízením.

Při této metodě má zaleplon retenční čas okolo 5 minut.

Spektra ¹³C NMR a protonová NMR spektra se získala při 125 MHz a 500 MHZ, za použití spektrometru Brucker Model DRX. Teplota při měření byla 27 °C.

Nízkorozlišovací El hmotnostní spektra se získala s hmotnostním spektrometrem VG-7035 (VG Analytical,

Manchester, Anglie). Ionizační energie byla 70 eV, iontový tok byl 200 μΑ. Teplotní zdroj byl 150 °C. Teoretická MW = 305,127; m/z nalezeno = 305,128.

Následující příklady jsou uvedeny pouze k ilustraci předkládaného vynálezu a v žádném případě neomezují rozsah předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Obecně

Použitý ethylacetamid 3 byl získán od Precise Chemipharma PVT.Ltd. Použitý 3-amino-4-kyanopyrazol 4 byl získán od Precise Chemipharma PVT.Ltd. Použitá kyselina fosforečná (85%) byla získána od Aldrich Chemical Co. Organická rozpouštědla a antirozpouštědla byla použita jak byla získána.

Zaleplon a regioizomer 5 v surovém zaleplonu (tj. výchozí směs) a vysrážené produkty byly kvantifikovány HPLC za použití UV detekce při vlnové délce 254 nm, při níž je faktor odezvy zaleplonu a jeho regioizomeru 5 stejný..

Příprava 1

Příprava směsi zaleplonu a regioizomeru 5

Ethylacetamid 3 (260 g, 1 mol) a 3-amino-4-pyrazol 4 (108 g, 1 mol) se rozpustí ve směsi vody (7 1) a ethanolu (4 1).

Přidá se osmdesátipěti procentní vodná kyselina fosforečná (67 ml, 1 mol) a směs se míchá při teplotě místnosti 8 hodin. Reakční směs se poté ochladí na 5 °C a vzniklý krystalický produkt se sebere, promyje se vodou a suší se při 60 °C a získá se zaleplon (275 g, 90,2 %), který má 99,36 čistotu, HPLC, a obsahuje 0,21 % regioizomeru 5.

Příklady 1-8

Čištění zaleplonu srážením

Směs zaleplonu a regioizomeru 5, připravená v přípravě 1 (4 g) se rozpustí v refluxujícím. organickém rozpouštědle. Poté co se zaleplon zcela rozpustí, roztok se ochladí na teplotu místnosti a dále se ochladí na 6 °C a při této teplotě se udržuje po dobu 1 dne. Vzniklá krystalická látka se sebere filtrací, promyje se čerstvě ochlazeným organickým rozpouštědlem, z něhož se poté vysráží a suší se ve vakuu při 60 °C. Separace dosažená za použití různých organických rozpouštědel je uvedena v tabulce 3.

Tabulka 3

Objem Složení vysráženého produktu (HPLC % oblasti) % regioizomeru 5

Př. Rozp. ----------------------------------

	Rozp.	(ml)	Výtěžek (%)	Zaleplon	Regioizomer 5	Odstraněno
1	Methanol	40	81,3	99,790	0,077	63
2	Ethanol	40	88,3	99,706	0,122	42
3	2-Propanol	40	86,3	99,661	0,108	49
4	Acetonitril	20	55,8	99,881	0,033	84
5	Aceton	20	52,0	99,871	0,042	80
6	THF	20	54,8	99,833	0,085	60
7	Ethylacetát	60	71,5	99,802	0,079	62
8	Toluen	35	87,5	99,552	0,13	38

« * • · • «

Příklady 9-21

Vysrážení zaleplonu za použití antirozpouštědla

Směs zaleplonu a regioizomeru 5 připravené v přípravě 1 (4 g) se rozpustí v refluxujícím organickém rozpouštědle. Poté co se zaleplon zcela rozpustí se přidá k refluxujícímu roztoku antirozpouštědlo. Po úplném přidání antirozpouštědla se směs ochladí na 5 °C. Vzniklá krystalická pevná látka se oddělí filtrací, promyje se čerstvě ochlazeným organickým rozpouštědlem z něhož se poté vysráží a suší se ve vakuu při 60 °C. Separace dosažená za použití kombinací různých organických rozpouštědel a antirozpouštědel je uvedena v tabulce 4.

Tabulka 4

Objem	Objem	Výtěžek	Složení vysráženého
				produktu (HPLC % oblasti)	% odstraněného
	rozp.	Antirozp. antirozp	(%)
Př. Rozp.	(ml)	(ml)		Zaleplon Regioizomer 5	regioizomeru 5

9 Ethyl	60	hexan	120	94,3	99,533	0,138	34
10 Ethanol	50	hexan	80	87,5	99,737	0,111	47
11 Acetonitril	20	hexan	40	62,5	99,672	0,091	57
12 Aceton	20	hexan	40	91,8	99,668	0,094	55
13 THF	20	hexan	40	91,5	99,503	0,152	28
14 2-Propanol	40	hexan	80	91,5	99,645	0,136	35
15 Kys. octová	20	voda	40	83,8	99,719	0,054	74
16 Methanol	40	voda	80	95,8	99,702	0,080	62
17 Ethanol	40	voda	80	93,5	99,690	0,084	60
18 Acetonitril	20	voda	40	90,0	99,752	0,040	81
19 2-Propanol	40	voda	80	87,8	99,747	0,056	73
20 Aceton	20	voda	40	89,9	99,683	0,080	62
21 THF	20	voda	40	83,0	99,731	0,051	76

Příklad 22 • * • · • ·

Příprava krystalického zaleplonu formy I

Zaleplon (10 mg) se rozpustí za míchání v refluxujícím ethanolu (100 ml). K refluxujícímu roztoku se přidá po kapkách hexan (200 ml) . Poté se směs ochladí na 5 °C za míchání během okolo 4 hodin. Sraženina se sebere filtrací a získá se krystalický zaleplon formy I (8,9 g, 89 %).

Příklad 23

Příprava krystalického zaleplonu formy II

Zaleplon (10 g) se rozpustí za míchání při 50 °C v kyselině octové (50 ml). Vzniklý roztok se vlije do směsi ledu a vody (150 ml) k vyvolání bezprostředního srážení. Sraženina se sebere filtrací a získá se krystalický zaleplon formy II (8,5 g, 85 %) .

Příklad 24

Příprava krystalického zaleplonu formy III

Zaleplon (10 g) se rozpustí za míchání v refluxujícím acetonitrilu (50 ml). K refluxujícímu roztoku se přidá po kapkách voda (150 ml). Poté se čirý roztok ochladí za míchání na 5 °C. Sraženina se sebere filtrací a získá se krystalický zaleplon formy III (9,1 g, 91 %).

Příklad 25

Příprava krystalického zaleplonu formy IV • · • ·

Zaleplon (10 g) se rozpustí za míchání v refluxujícím 2-propanolu (150 ml). Čirý roztok se ochladí na 5 °C za míchání. Sraženina se sebere filtrací a získá se krystalický zaleplon formy IV (8,6 g, 86 %) .

Příklad 26

Příprava krystalického zaleplonu formy I

Zaleplon (26,8 g) se rozpustí ve směsi ethanolu a vody (210 a 210 cm³) při teplotě zpětného toku a poté se zpracuje aktivním uhlím (2,7 g, 10 hmotn./hmotn. %). Roztok se míchá 30 minut při teplotě zpětného toku a poté se filtruje. Aktivní uhlí se promyje horkou směsí ethanolu a vody (30:30 cm³). Roztok se ochladí během 6 hodin na 25 °C a při této teplotě se udržuje po dobu 2 hodin. Krystaly se filtrují a promyjí se směsí ethanolu a vody (20:20 cm³) a suší se ve vakuu při 60 °C po dobu 8 hodin a získá se krystalický zaleplon formy I (22,8 g, 85 %) .

Příklad 27

Příprava krystalického zaleplonu formy I

Zaleplon (22,8 g) se rozpustí v ethanolu (230 cm³) při teplotě zpětného toku a poté se zpracuje aktivním uhlím (2,3 g, 10 hmotn./hmotn. %). Roztok se míchá 10 minut a poté se filtruje. Aktivní uhlí se promyje horkým ethanolem (20 cm³) . Roztok se ochladí během 6 hodin na 25 °C a při této teplotě se udržuje po dobu 2 hodin. Krystaly se filtrují a promyjí se ethanolem (30 cm³) a suší se ve vakuu při 60 °C po dobu 8 hodin a získá se krystalický zaleplon formy I (18,7 g, 82 %) .

Příklad 28 • · · ·

Příprava N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu

N-[3-[3- (Dimethylamino) -l-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamid (5,2 g, 0,02 mol) a 3-amino-4-kyanopyrazol (2,16 g, 0,02 mol) se rozpustí ve směsi vody (50 ml) a koncentrované kyseliny chlorovodíkové (40 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 8 hodin. Reakční směs se ochladí na 5 °C a sraženina se odstraní filtrací. Filtrát se neutralizuje roztokem koncentrovaného vodného amoniaku k vysrážení 380 mg směsi zaleplonu a jeho regioizomeru 5, který se sebere filtrací. Filtrát se extrahuje 100 ml ethylacetátu a po odpaření se získá 100 mg směsi shora uvedených sloučenin. Oba podíly se spojí a přenesou se do silikagelové kolony (100 g) a eluují se rozpouštědlovou směsí chloroformu a acetonu 3:1 (objemově) a získá se jako druhá část 240 mg (4 %) 5; t.t. 194 až 196 °C; ¹H-NMR (CDC1₃) δ (ppm) 1,143 (t, 3H) , 1, 876 (s, 3H) , 3, 804 (q, 2H) , 7,361 (d, IH) , 7,532 (d, IH) , 7,613 (t, IH) ,

8,018 (s, IH) , 8,159 (d, IH) , 8,375 (s, IH) , 8, 805 (d, IH) ;

¹³C-NMR (CDCI3) δ (ppm) 12, 89, 22, 68, 43, 84, 83, 17, 107,71, 112,84, 127, 17, 127,48, 130, 62, 131, 63, 136, 67, 137,46,

144,10, 148,31, 149,99, 158,60, 169,90; MS (El, 70 EV) m/z (%)

305 (M⁺, 18) , 248 (59) .

Příklad 20

Čistý zaleplon, v podstatě prostý regioizomeru zaleplonu

Surový zaleplon připravený v přípravě 1 (4 g) se rozpustí v refluxujícím acetonitrilu (20 ml). Jakmile se zaleplon zcela rozpustí, roztok se nechá ochladit na teplotu mezi okolo 20 °C a okolo 25 °C. Vzniklá směs se poté ochladí na teplotu okolo 6 • · °C a při této teplotě se udržuje po dobu 24 hodin. Sraženina, která je pevná látka obohacená zaleplonem se filtruje a promyje se čerstvě chlazeným acetonitrilem.

Získaná sraženina, pevná látka obohacená zaleplonem (cca 2,3 g) se rozpustí v refluxujícím acetonitrilu (cca 10 ml). Roztok se nechá ochladit na teplotu mezi okolo 20 °C a okolo 25 °C. Vzniklá směs se poté ochladí na okolo 6 °C a udržuje se při teplotě okolo 24 hodin. Sraženina se odstraní filtrací, promyje se čerstvě chlazeným acetonitrilem a suší se při 60 °C ve vakuu.

Získaná sraženina dále čištěného zaleplonu se analyzuje gradientovou HPLC podle vynálezu a bylo zjištěno, že je >99% čistoty. Za použití gradientově HPLC podle vynálezu nebyl zjištěn žádný regioizomer. Zaleplon je v podstatě prostý regioizomeru.

Claims

Patentové nároky

1. Způsob čištění zaleplonu, vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) formování roztoku pevné látky obsahující zaleplon v alespoň jednom organickém rozpouštědle nebo ve směsi alespoň jednoho organického rozpouštědla a vody, (b) srážení pevné látky obohacené zaleplonem vzhledem k pevné látce obsahující zaleplon použitý k přípravě roztoku, a (c) izolaci pevné látky, která je obohacená zaleplonem.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že pevná látka obsahující zaleplon použitý k přípravě roztoku dále obsahuje regioizomer.
3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří alkoholy, ketony, ethery, karboxylové kyseliny, estery karboxylových kyselin, nitrily, aromatické uhlovodíky, halogenované uhlovodíky, a směsi kterýchkoli z těchto rozpouštědel.
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří methanol, ethanol, 2-propanol, aceton, methylethylketon, methylizobutylketon, tetrahydrofuran, diethylether, methyl terc-butylether, kyselina octová, kyselina propionová, ethylacetát, izobutylacetát, acetonitril, akrylonitril, benzen, toluen, xyleny, dichlormethan, chloroform a směsi kterýchkoli těchto rozpouštědel.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačuj ící tím, že organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, acetonitril, aceton, ethylacetát, toluen a dichlormethan.
6. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že koncentrace vzniklého roztoku je mezi okolo 100 mM do okolo 1 M.
7. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že roztok se tvoří za zvýšené teploty.
8. Způsob podle nároku 7,vyznačující se tím, že srážení se vyvolá ochlazením roztoku ze zvýšené teploty.
9. Způsob podle nároku 8,vyznačující se tím, že chlazení probíhá ke snížené teplotě.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo je 2-propanol a separovaná sraženina je krystalická forma IV zaleplonu.
11. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že se přidá při zvýšené teplotě k roztoku antirozpouštědlo.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že antirozpouštědlo je alifatický uhlovodík.
13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že alifatický uhlovodík je hexan a organické rozpouštědlo je ethanol.

• · • 9 ·· ·· 9 9 9 • 9 9 9 9
14. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, acetonitril·, aceton, ethylacetát, toluen a dichlormethan.
15. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že alifatický uhlovodík je hexan.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující' se tím, že organické rozpouštědlo je ethanol a separovaná sraženina je krystalický zaleplon forma I.
17. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že antirozpouštědlo je voda.
18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se vybere ze skupiny, kterou tvoří kyselina octová, methanol, ethanol, 2-propanol, tetrahydrofuran, acetonitril a aceton.
19. Způsob podle nároku 18,vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo je acetonitril.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že antirozpouštědlo se přidá v množství od okolo jednonásobku do okolo trojnásobku organického rozpouštědla.
21. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že vysrážená pevná látka obohacená zaleplonem má alespoň o okolo 50 % méně zaleplonového regioizomeru vzhledem k pevné látce obsahující zaleplon použité k přípravě roztoku.

• ·
22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, vysrážená pevná látka obohacená zaleplonem má o okolo 70 % méně regioizomeru vzhledem k pevné látce obsahující zaleplon použité k přípravě roztoku.
23. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále zahrnuje opakující se stupně (a), (b) a (c) .

Způsob podle nároku 1,vyznačující s tím, že dále zahrnuje opakující se stupně (a), (c) alespoň jednou, kde organické rozpouštědlo je e

(b) a ethanol.
25. Způsob čištění zaleplonu, vyznačující se tím, že zahrnuje následující stupně:

(a) tvorbu roztoku pevné látky, obsahující zaleplon v ethanolu, (b) vysrážení pevné látky obohacené zaleplonem, vzhledem k pevné látce, obsahující zaleplon použitý k přípravě roztoku, za použití antirozpouštědla, kterým je voda, (c) izolaci vysrážené pevné látky, která je obohacena zaleplonem, (d) tvorba roztoku vysrážené pevné látky obohacené zaleplonem stupně (c) v ethanolu, (e) vysrážení z roztoku stupně (d) bez použití rozpouštědla, kde pevná látka dále obohacená zaleplonem je příbuzná pevné látce obohacené zaleplonem stupně (c), (f) izolace pevné látky dále obohacené zaleplonem stupně (e) .
26. Krystalický zaleplon formy II, charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 7,9, 10,7,

12,5, 14, 9, 16, 9, 17,9, 21,3, 24, 0, 25,2, 25, 9, 27,0 a 27,5 ±0,2 stupňů dvě-theta.
27. Způsob přípravy zaleplonu podle nároku 26, vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) tvorbu roztoku zaleplonu v organickém rozpouštědle, které je mísitelné nebo znatelně rozpustné ve vodě.

(b) kontaktování roztoku s vodou k vyvolání krystalizace zaleplonu, a (c) separaci zaleplonu formy II z organického rozpouštědla a vody.
28. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje zaleplon podle nároku 26.
29. Způsob přípravy podle nároku 27, vyznačuj ící se t í m, že objem roztoku zaleplonu k objemu vody, se kterou je v kontaktu je 1:3.
30. Způsob podle nároku 29, vyznačující se tím, že teplota vody, se kterou se roztok zaleplonu uvádí v kontakt je okolo 0 °C.
31. Způsob léčení insomnie, vyznačující se t í m, že se podá farmaceutický prostředek podle nároku 28.
32. Krystalický zaleplon formy III, charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 15,4, 18,1, 21,1, 26,8 a 27,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.
33. Krystalický zaleplon formy III, charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 11,6, 17,6, 19,0, 20,0 a 22,2 stupňů dvě-theta.

·· .·· ·.·

.. · . ..·· · ··· • * · · · · ·· · » · »·»· . . .·.····
34. Způsob přípravy zaleplonu podle nároku 32, vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) tvorbu roztoku zaleplonu v acetonitrilu, (b) přidání vody k roztoku při zvýšené teplotě, (c) srážení zaleplonu v roztoku ochlazením, a (d) separaci zaleplonu formy III z acetonitrilu a vody.
35. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje zaleplon podle nároku 32.
36. Způsob léčení insomnie, vyznačující se tím, že se podá farmaceutický prostředek podle nároku 35.
37. Krystalický zaleplon formy IV, charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 8,1, 14,5,

17.3, 21,3 ±0,2 stupňů dvě-theta.
38. Krystalický zaleplon formy IV, podle nároku 37, dále charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 10,6, 11,1, 14,1, 15,6, 18,0, 18,2, 20,1,

20.3, 24,3, 25,0, 25,9, 26,7, 27,9 a 29,5 ± 0,2 stupňů dvě-theta.
39. Způsob přípravy zaleplonu podle nároku 37, vyznačující se tím, že zahrnuje následující stupně:

(a) tvorbu roztoku zaleplonu v rozpouštědlovém systému vybraném ze skupiny, kterou tvoří 2-propanol a směsi tetrahydrofuranu a vody, (b) srážení zaleplonu z roztoku, a (c) separaci zaleplonu formy IV z rozpouštědlového systému.
40. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje zaleplon podle nároku 37.
41. Způsob léčení insomnie, vyznačující se tím, že se podá farmaceutický prostředek podle nároku 40.
42. Krystalický zaleplon formy V, charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 8,0, 14,8,

17,0 ± 0,2 stupňů dvě-theta.
43. Krystalický zaleplon formy V, podle nároku 42, dále charakterizovaný práškovým rentgenovým difraktogramem majícím píky při 10,7, 11,0, 12,5, 15,4, 16,5, 17,7, 18,2,

21,3, 25,7, 26,5 ±0,2 stupňů dvě-theta.
44. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje zaleplon podle nároku 43.
45. Způsob léčení insomnie, vyznačující se tím, že se podá farmaceutický prostředek podle nároku 44 .
46. Způsob přípravy zaleplonu formy I, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje následující stupně:

(a) tvorbu suspenze zaleplonu v kapalině při zvýšené teplotě, (b) ochlazení suspenze, a (c) separaci zaleplonu formy I z kapaliny.
47. Způsob přípravy zaleplonu formy I podle nároku 46, vyznačující se tím, že kapalina je vroucí voda.

· φ Φ φ φ Φ * «-*>>

9 φ Φ Φ Φ * Φ« Φ * Φ ΦΦΦ* « ΦΦΦΦΦΦ*·

ΦΦΦΦΦΦ ·Φ ·· * · *
48. Způsob přípravy zaleplonu formy I podle nároku 46, vyznačující se tím, že kapalina je vysoko vroucí uhlovodík.
49. Způsob přípravy zaleplonu formy I, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje následující stupně:

(a) roztavení zaleplonu, (b) ztuhnutí zaleplonu ochlazením, a (c) mletí ztuhlého zaleplonu za získání zaleplonu formy I.
50. Způsob přípravy zaleplonu formy I, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje následující stupně:

(a) rozpuštění zaleplonu v organickém rozpouštědle zahříváním, (b) vyvolání srážení zaleplonu ochlazením, a (c) separaci zaleplonu formy I.
51. Způsob přípravy zaleplonu formy I, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje následující stupně:

(a) rozpuštění zaleplonu v organickém rozpouštědle zahříváním, (b) přidání apolárního aprotického rozpouštědla k roztoku, (c) vyvolání srážení zaleplonu ochlazením, a (d) separaci zaleplonu formy I.
52. Způsob přípravy zaleplonu formy I, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje následující stupně:

(a) rozpuštění zaleplonu v organickém rozpouštědle misitelném s vodou, (b) přidání vody k tomuto roztoku, dokud je roztok čirý, (c) vyvolání srážení zaleplonu pomalým ochlazením, a (d) separaci zaleplonu formy I.

·» φ • » · · · · · · β ·

9 ··« ·· » » · r · * ··♦ * ······»· ····«· ·· ·· ·< ·
53. Čirý zaleplon mající čistotu alespoň 98,5 %.
54. Čirý zaleplon podle nároku 53, kde čistota je stanovena

HPLC za použití 3 μπι PR-18 kolony a za použití elučního činidla obsahující acetonitril a jako pufr formiát amonný.
55. Čirý zaleplon mající čistotu alespoň 99 %.
56. Čirý zaleplon podle nároku 55, kde čistota je stanovena » HPLC za použití 3 μπι PR-18 kolony a za použití elučního činidla obsahující acetonitril a jako pufr formiát amonný.
57. Čirý zaleplon podle nároku 56, v podstatě prostý regioizomeru.
58 . N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamid.
59. Způsob přípravy N-[3- (3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu, vyznačující se tím, že zahrnuje následující stupně:

a) reakci směsi N-[3-[3-(dimethylamino)-l-oxo-2-propenyl]fenyl]-N-ethylacetamidu, 3-amino-4-kyanopyrazolu a silné kyseliny, v kapalném reakčním prostředí vody a alespoň jednoho s vodou se mísitelného organického rozpouštědla prostého volných skupin karboxylové kyseliny,

b) neutralizaci reakční směsi za vzniku surového produktu, a

c) separaci N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl)fenyl]-N-ethylacetamidu od ostatních složek surového produktu chromatografii na sloupci silikagelu za použití směsi chloroformu a acetonu jako elučního činidla, ···· · · · ··· • · · · ···· · · · · • ····· ·· · · · ···· • · ···· · · · ······ · * ·· ·· · kde množství silné kyseliny je na molové bázi alespoň 10 x větší než množství N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5yl) fenyl]-N-ethylacetamidu nebo 3-amino-4-kyanopyrazolu, bez ohledu na to, který je v přebytku nebo za použití kteréhokoliv z nich, pokud se použijí v přibližně ekvimolárním množství.
60. Způsob podle nároku 59, vyznačující se tím, že množství silné kyseliny na molové bázi je alespoň 20 x větší než množství jak N-[3-(3-kyanopyrazolo[l, 5-a]pyrimidin-5-yl) fenyl]-N-ethylacetamidu tak 3-amino-4-kyanpyrazolu, bez ohledu na to, který je v přebytku nebo za použití kteréhokoliv z nich, pokud se použijí v přibližně ekvimolárním množství.
61. HPLC metoda pro zkoušení zaleplonu, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje:

a) rozpuštění vzorku zaleplonu v ředidle ve směsi acetonitril:voda (1:1),

b) injektování vzorku roztoku (cca 10 μΐ) do kolony 100 mm x 4,mm, 3 μη RP-18 pro HPLC,

c) eluování vzorku z kolony při 1 ml/min směsí acetonitrilu (29 % objemově) a pufru formiátu amonného (72 % objemově, 0,005 M, pH = 4) jako eluentu, a

d) měření obsahu zaleplonu ve vzorku při vlnové délce 245 nm s UV detektorem a vhodným zapisovacím zařízením.
62. HPLC metoda pro zkoušení zaleplonu, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje:

a) rozpuštění vzorku zaleplonu v ředidle ve směsi acetonitril:voda (1:1),

b) injektování vzorku roztoku (cca 10 μΐ) do kolony 250 mm x 4, 6 mm, 5 μιη RP-18 pro HPLC ···· · ♦ · ··· ·· · · ···· · ··· • ····· ·· · · · ···· to to ···· ··· ······ ·· ·· ·· ·

c) gradientovou eluci při 1 ml/min směsí acetonitrilu (A) a pufru formiátu amonného (B, 0,005 M. pH = 4) podle následujícího profilu:

HPLC gradient

Doba (min.) Eluent A (%) Eluent B (%) 0 20 80 11 32 68 17 40 60 30 40 60 31 20 80 35 20 80

d) měření množství každé nečistoty při vlnové délce 245 nm s UV detektorem a vhodným zapisovacím zařízením.