CZ20023940A3

CZ20023940A3 - Lékařské směsi zahrnující propenonové deriváty

Info

Publication number: CZ20023940A3
Application number: CZ20023940A
Authority: CZ
Inventors: Akihiko Sato
Original assignee: Shionogi & Co., Ltd.
Priority date: 2000-06-13
Filing date: 2001-06-11
Publication date: 2003-05-14
Also published as: US20030171406A1; AU2001262733A1; RU2002135640A; PL359364A1; AP2003002716A0; HUP0301713A3; CA2410763A1; IL153363A0; CN1446213A; ZA200209673B; EP1295879A1; NO20026013D0; WO2001096329A1; NO20026013L; MXPA02012160A; EP1295879A4; HUP0301713A2; KR20030019423A; BR0111678A

Description

Lékařské směsi zahrnující propenonové deriváty

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká lékařských činidel zahrnujících dvě nebo více anti-retrovirové aktivní složky, podrobněji se týká lékařských činidel zahrnujících propenonové deriváty.

Dosavadní stav techniky

AIDS (získaný syndrom nedostatečné imunity) je do současné doby nepřekonananá nemoc způsobená lidským virem nedostatečné imunity (HIV). Proto je vyžadován vývoj použitelných ošetřujících činidel a vhodná terapie. Jako ošetřovací činidla pro AIDS byly schváleny reverzní inhibitory transkriptáz a inhibitory proteáz a v klinické oblasti je obvykle raději použita jako standardní metoda kombinace terapií než jejich jednotlivé podání kvůli výskytu resistentního viru nebo snížení vedlejších efektů atd.

V kombinované terapii je použití léčiv, které mají různé působící mechanismy více upřednostněno než použití léčiv stejného typu. Kombinace různých typů léčiv může silně inhibovat replikaci retroviru díky jejich synergickému efektu. Například je výhodná kombinace nukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru a nenukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru nebo kombinace reverzního transkriptázového inhibitoru (nukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru nebo nenukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru) a proteázového inhibitoru apod.

• · • ·

Příklady synergického efektu vykazovaného kombinací aktivních složek lidských imunodeficitních virů, například kombinací lamivudinu (3TC) jako nukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru a {[(benzoxazol-2-yl)methyl]- ami -no}-5-alkyl-6-alkyl-2-(1H)-pyridinonu jako nenukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru je uvedeno ve známost v JP7-508 997 a kombinace lamivudinu (3TC) jako nukleosidového typu transkriptázového inhibitoru a ll-cyklopropyl-5,ll-dihydro-4-methyl-6H-dipyrido[3,3-b;21,31e][1,4]diazepin-6-onu jako nenukleosidového typu reverzního transkriptázového inhibitoru je uvedeno ve známost v JP mezinárodní publikaci (TOKUHYO) 7-508 998. Ostatní příklady kombinací silně reagujících aktivních složek imunodeficitních vírů s lidskými antigeny jsou uvedeny v JP mezinárodní publikaci (TOKUHYO) 2000-503 986, WO 98/20 888, JP mezinárodní publikaci (TOKUHYO) 11-507632, JP mezinárodní publikaci (TOKUHYO) 11-508 884 a JP mezinárodní publikaci (TOKUHYO)

9-507 859 apod.

V současné době je prodáván Combivir jako lékařská směs pro jednu z kombinačních terapií. Combivir je směs zidovudinu (AZT) a lamivudinu (3TC). Proto je požadováno vyvinout kombinaci léčiv (například integrázových inhibitorů), která obsahuje různé typy působících mechanismů od reverzního transkriptázového inhibitoru s antiretrovirovou aktivní složkou, stejně tak jako lékařské činidlo obsahující jejich léčiva jako aktivní složky.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález ukazuje synergický efekt, který vzniká kombinovaným podáním sloučeniny obecného chemického vzorce I

A-C-C=O-B ¹¹ Η ¹

O OH (I) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek, přičemž tyto léčiva zvyšují jejich anti-retrovirovou aktivitu.

V jednom provedení zahrnuje předkládaný vynález anti-retrovirové činidlo, které obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného chemického vzorce I

A-C-C=C-B μ Μ ¹

O OH (i) přičemž A a B jsou popsány výše a zahrnují také tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.

Předkládaný vynález dále poskytuje způsob pro ošetření nebo prevenci retrovirové infekce, která obsahuje simultánní nebo kontinuální podání sloučeniny obecného chemického vzorce I, tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.

V dalším provedení ukazuje předkládaný vynález použití sloučeniny obecného chemického vzorce I, tautomeru, proléčíva, • · · · farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího solvátu a jednoho nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek pro přípravu léčiv pro prevenci nebo ošetření retrovirové infekce.

se předkládaný vynález týká způsobu inhibice která obsahuje kontakt sloučeniny obecného vzorce I, tautomeru, proléčiva, farmaceuticky soli nebo jejího solvátu a jednoho nebo více anti-retrovirových aktivních složek s retrovirem.

Dále retroviru, chemického přijatelné různých typů

Dále se předkládaný vynález týká kombinace sloučenin obecného chemického vzorce I, tautomeru, proléčiva, farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího solvátu a jednoho nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.

Předkládaný vynález týká:

1) Anti-retrovirového činidla, které obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného chemického vzorce I

A-C-OC-B ¹¹ H ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů antiretrovirových aktivních složek.

2) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v 1) přičemž anti-retrovirová aktivní substance vykazuje synergický efekt v kombinaci se sloučeninou obecného chemického vzorce I, abacavir, delavirdin, tenofovir, emivirin, nevirapm, trovirdin, tautomeru, proléčiva, farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího solvátu.

3) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v 1) nebo 2), přičemž anti-retrovirová aktivní substance je jedna s výjimkou integrázového inhibitoru.

4) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 3), přičemž anti-retrovirová aktivní substance je reverzní transkriptázový inhibitor nukleosidového typu, nenukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru a/nebo proteázový inhibitor.

5) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 4), přičemž anti-retrovirová aktivní substance je zidovudin, didanosin, zalcitabin, stavudin, lamivudin, tenofovir disoproxil, lovirid, efavirenz, capravirin, TIBO, talviralin, UC781, saquinavir, nelfinavir, ritonavir, indinavir, KNI-272, lopinavir, VX-478, VB-19026,

BILA-2011-BS, A-77003, A-80987, DMP-323 a/nebo XM-450.

6) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 5), přičemž anti-retrovirová složka je zidovudin, lamivudin, stavudin, nevirapin, capravirin a/nebo nelfinavir.

7) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 6) , přičemž A je sloučenina obecného chemického vzorce I případně substituovaná furylem a thienylem nebo je případně substituovaná pyridylem; a B je sloučenina obecného chemického vzorce I případně substituovaná thiazolylem, tetrazolylem, pyridylem nebo oxazolinem.

8) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 7), přičemž A je sloučenina obecného chemického vzorce I 5-(4-fluorbenzyl)furan-2-yl; a B je sloučenina obecného chemického vzorce I je ltf-l,2,4-triazol-3-yl.

9) Anti-retrovirové činidlo jak je popsáno v kterémkoliv z 1) až 8), přičemž retřovirus je lidský imunodeficitní virus.

• ·

10) Farmaceutické činidlo obsahující sloučeninu, která vykazuje aktivitu, aktivitu anti-virové chemického vzorce I která podporuje anti-retrovirovou aktivní substance a je obecného

A-C-C=C-B ¹¹ H ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát.

11) Způsob obsahuj e obecného prevence nebo ošetření rerovirové infekce, který podání sloučeniny simultánní nebo kontinuální chemického vzorce I

A-C-C=C-B ir h ¹

O OH (i)

A je případně substituovaný heteroaryl; B je substituovaný heteroaryl nebo případně přičemž případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny,·tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.

12) Použití sloučeniny obecného chemického vzorce I

ACC=CB ¹¹ Η ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek pro přípravu medikamentu pro ošetření nebo prevenci retrovirové infekce.

Krátký popis obrázků

Obr. 1 je graf ukazující synergický efekt mezi sloučeninou 1-16 a zidovudinem. Osy X a Y ukazují koncentraci léčiva (ng/ml) a osa Z ukazuje synergický efekt (μΜ²%).

Nejlepší provedení vynálezu

Sloučenina obecného chemického vzorce I

ACC-CB ¹¹ H ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny, vykazuje inhibiční aktivitu proti retrovirové integráze (například HIV, HTLV,

SIV, FIV).

• Φ · Φ ΦΦ · 9

Konkrétně jsou upřednostněny případy, kde je A ve sloučenině obecného chemického vzorce I případně substituovaný furyl, thienyl nebo pyridyl a B je sloučenina obecného chemického vzorce I případně substituovaný tetrazolyl, pyridyl nebo oxazolyl.

Dále je upřednostněna sloučenina obecného chemického vzorce I, kde A je 5-(4-fluorbenzyl)furan-2-yl a B je 1H1,2,4-triazol-3-yl.

Termín „heteroaryl zahrnuje monocyklický heteroaryl a kondenzovaný heteroaryl jak je definováno níže.

Termín „monocyklický heteroaryl znamená 5-ti až 8-mi člennou heteroaromatickou skupinu obsahující 1 až 4 atomy kyslíku, síry a/nebo dusíku v kruhu, který může obsahovat radikály v jakékoliv substítuovatelné pozici jako je uhlík nebo dusík.

Termín „monocyklický heteroaryl zahrnuje furyl (například furan-2-yl, furan-3-yl), thienyl (například thiofen-2-yl, thiofen-3-yl), pyrrolyl (pyrrol-l-yl, pyrrol-2yl, pyrrol-3-yl), imidazolyl (například imidazol-l-yl, imidazol-2-yl, imidazol-4-yl) , pyrazolyl (například pyrazol-1yl, pyrazol-3-yl, pyrazol-4-yl) , triazolyl (například 1H1,2,4-triazol-l-yl, 4H-1,2,4-triazol-l-yl, lJí-1,2,4-triazol-3yl), tetrazolyl (například lH-tetrazol-l-yl, 2H-tetrazol-2-yl, lH-tetrazol-5-yl, 2H-tetrazol-5-yl) , oxazolyl (například oxazol-2-yl, oxazol-4-yl, oxazol-5-yl) , isoxazolyl (například isoxazol-3-yl, isoxazol-4-yl, isoxazol-5-yl), thiazolyl (například thiazol-2-yl, thiazol-4-yl, thiazol-5-yl), « « * · * · · · · · · » • · · · · · 9 • · · ♦ » · · · • « · «· ·«·« ♦ · · · isothiazolyl (například isothiazol-3-yl, isothiazol-4-yl, isothiazol-5-yl), pyridyl (například pyridín-2-yl, pyridin-3yl, pyridin-4-yl), pyridazinyl (například pyridazin-3-yl, pyridazin-4-yl), pyrimidinyl (například pyrimidin-2-yl, pyrimidin-4-yl, pyrimidin-5-yl), furazanyl (například furazan3-yl), pyrazinyl (například pyrazin-2-yl), thiadiazolyl (například 1,3,4-thiadiazolyl-2-yl), oxadiazolyl (například 1, 3, 4-oxadiazol-2-yl) apod.

Termín „kondenzovaný heteroaryl označuje heteroaromatickou skupinu, přičemž 5-ti až 8-mi členný aromatický kruh zahrnuje 1 až 4 atomy kyslíku, síry a/nebo dusíku v kruhu, který je kondenzován k jednomu až čtyřem 5-ti až 8-mi členným aromatickým uhlíkovým kruhům nebo jinému 5-ti až 8-mi člennému heteroaromatickému kruhu, který má radikál v jakékoliv substituovatelné pozici jako je atom uhlíku nebo dusíku stejně tak jako monocyklický heteroaryl. Radikálová skupina může být na heteroaromatickém kruhu nebo na aromatickém uhlíkovém kruhu.

Termín „kondenzovaný heteroaryl zahrnuje benzofuryl benzo[b]furan-3-yl, benzo[b]furan-6-yl, (například benzo[b]furan-2-yl, benzo[b]furan-4-yl, benzo[b]furan-5-yl, benzo[b]furan-7-yl), benzothienyl (například benzo[b]thiofen2-yl, benzo[b]thiofen-3-yl, benzo[b]thiofen-4-yl, benzo[b]thiofen-5-yl, benzo[b]thiofen-6-yl, benzo[b]thiofen-7yl), benzimidazolyl (například benzimidazol-l-yl, benzimidazol-2-yl, benzimidazol-4-yl, benzimidazol-5-yl), benzothiazolyl (například benzothiazol-2-yl, benzothiazol-3yl, benzothiazol-4-yl, benzothiazol-5-yl, benzothiazol-6-yl, benzothiazol-7-yl), indolyl (například indol-l-yl, indol-2-yl, indol-4-yl, indol-5-yl, indol-6-yl, indol-7-yl), dibenzofuryl, chinolinyl (například chinolin-2-yl, chinolin-3-yl, chinolin4-yl, chinolin-5-yl, chinolin-6-yl, chinolin-7-yl, chinolin-8» · » · · *

• e · * • · * * « * « · · < · * «·« « · 9 * · • · · · · · β

9> ···« · » · · yl), isochinolin (například isochinolin-l-yl, isochinolin-3yl, isochinolin-4-yl, isochinolín-5-yl, isochinolin-6-yl, isochinolin-7-yl, isochinolin-8-yl), cinnolinyl (například cinnolin-3-yl, cinnolin-4-yl, cinnolin-5-yl, cinnolin-6-yl, cinnolin-7-yl, cinnolin-8-yl), chinazolinyl (například chinazolin-2-yl, chinazolin-4-yl, chinazolin-5-yl, chinazolin6-yl, chinazolin-7-yl, chinazolin-8-yl), chinoxalinyl (například chinoxalin-2-yl, chinoxalin-5-yl, chinoxalin-6-yl), ftalazinyl (například ftalazin-l-yl, ftalazin-5-yl, ftalazin6-yl), purinyl (například purin-2-yl, purin-6-yl, purin-7-yl, purin-8-yl, purin-9-yl), pteridinyl, karbazolyl, fenanthridinyl, akridinyl, fenazinyl, 1,10-fenantrolinyl, isoindolyl, ΙΗ-indazolyl, indolidinyl (například indolidin-1yl) nebo pod.

Termín „aryl označuje aromatickou uhlíkovou skupinu jako je fenyl nebo polycyklická aromatická uhlíková skupina jako je naftyl, fenantryl apod. Upřednostněný je fenyl nebo naftyl.

Pokud „aryl a „heteroaryl mají jeden až čtyři substituenty, stejné nebo různé, jsou v jakýchkoliv substituovatelných pozicích.

Příklady substituentů zahrnují hydroxy, karboxy, halogen (F, Cl, Br, I), nižší haloalkyly (například CF₃, CH₂CF₃) , nižší alkyly (například methyl, ethyl, isopropyl, tert-butyl), nižší alkenyly (například vinyl, allyl), nižší alkynyly (například ethynyl), cykloalkyly (například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklohexyl), cykloalkenyly (například

1-cyklohexenyl), nižší alkyloxy (například methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy) , nižší alkyloxykarbonyly (například methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, tert-butoxykarbonyl), nitro, nitroso, amino, amin substituovaný nižšími alkyly (například • · methy lamino, ethylamino, dimethylamino) , azid, amidin, guanidin, případně substituovaný aryl (například fenyl, pyridyl, pikolyl), (například furyl), případně benzyl, aryl(nižší)alkyloxy p-tolyl), hetroaryl (například heteroaryl(nižší)alkyly (například substituovaný aryl(nižší)alkyl

4-methylbenzyl, 4-fluorobenzyl), (například benzyoxy), aryl(nižší)alkylthio (například benzylthio), kyano, isokyano, hydroxylamino, merkapto, nižší alkylthio (například methylthio), karbamoyl, karbamoyl substituovaný nižším alkylem (například N-methylkarbamoyl), nižší alkylsulfonyl (například mesyl, ethansulfonyl), případně substituovaný arylsulfonyl (například benzensulfonyl,

2-toluensulfonyl, 4-toluensulfonyl), sulfamoyl, sulfoamino, formyl, nižší alkylkarbonyl (například acetyl, benzoyl, p-toluoyl, cyklohexylkarbonyl) alkylkarbonyloxy (například acetyloxy, benzyloxy) propionyl, nižší hydrazino, arylamino (například • v v ✓ mzsi anilino, xylidino) , alkylkarbonylamino (například acetylamido), arylkarbonylamino (například benzamido) , případně substituovaný arylthio (například fenylthio), morfolino, morfolinyl (například 2— morfolinyl, 3-morfolinyl) , skupina obecného vzorce: -Z¹-Z²-Z³R¹, přičemž Z¹ a Z³ jsou každé nezávisle jednoduchá vazba, nižší alkylen, nebo nižší alkynylen; Z³ je jednoduchá vazba, nižší alkylen, nižší alkenylen, -CH(OH)-, -S-, -S0-, -SO2-/ —

SO2NH-, -NHSO2-, -0-, -NH- -NHCO-, -CONH-, -C(=0)-0-, -0-0(=0)nebo -CO-R¹; R¹ je případně substituovaný aryl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkenyl nebo heterocykloická skupina apod.

Termín „nižší alkylen označuje Ci až Ce rovnou nebo větvenou alkylenovou skupinu, například methylen, ethylen, trimethylen, propylen, tetramethylen, ethylethylen, hexamethylen nebo pod. Upřednostněné jsou Ci až C₄ rovné nebo větvené alkylenové skupiny jako je methylen, ethylen, trimethylen nebo tetramethylen.

• · • · • · • ·

Termín „nižší alkylen označuje C₂ až C6 rovný nebo větvený alkenylen, který je výše uvedeným „nižším alkylenem s jednou nebo více dvojnými vazbami, například vinylen, propenylen, butenylen nebo pod. Upřednostněné jsou C₂ až C3 rovné alkenyleny jako je vinylen nebo propylen.

Termín „cykloalkyl označuje C₃ až Cs cyklickou alkylovou skupinu, například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl nebo pod. Upřednostněná je C₃ až C₆ cyklická alkylová skupina jako je cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl.

Termín „cykloalkenyl označuje C₃ až Cé cyklickou alkenylovou skupinu, která je výše označená „cykloalkyl s jednou nebo dvěma dvojnými vazbami, například 1-cyklopropenl-yl, 2-cyklopropen-l-yl, 1-cyklobuten-l-yl, 2-cyklobuten-lyl, 1-cyklopenten-l-yl, 2-cyklopenten-l-yl, 3-cyklopenten-lyl, 1-cyklopenten-l-yl, 1-cyklohexen-l-yl, 2-cyklohexen-1-yl,

3-cyklohexen-1-yl, 1-cyklohepten-l-yl, 2-cyklohepten-l-yl,

3-cyklopenten-l-yl, 4-cyklohepten-l-yl nebo pod. Upřednostněné cyklické alkenylové skupiny například

2-cyklopropen-l-yl,

1-cyklopenten-l-yl, jsou C₃ az C6

1- cyklopropen-l-yl,

2- cyklobuten-l-yl,

3- cyklopenten-l-yl., 3-cyklohexen-l-yl.

1-cyklobuten-l-yl, 2-cyklopenten-l-yl,

1-cyklohexen-l-yl, 2-cyklohexen-1-yl nebo

Termín „heterocyklus označuje nearomatickou skupinu, která je výše označená jako „cykloalkyl nebo „cykloalkenyl s 1 až 3 atomy kyslíku, síry a/nebo dusíku v kruhu, například aziridinyl (například aziridin-l-yl, aziridin-2-yl) , piperidin, piperidyl (například 2-piperidyl, 3-piperidyl,

4-piperidyl), morfolin, morfolinyl (například 2-morfolinyl,

3-morfolinyl), pyrrolinyl (například 1-pyrrolinyl, • · · · · ·

13.

2- pyrrolinyl, pyrrolidinyl

3- pyrrolidinyl)

3-pyrrolinyl, 4-pyrrolinyl, 5-pyrrolínyl) , (například 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, imidazolidinyl (například 1-imidazolidinyl,

2-imidazolidinyl, 4-imidazolidinyl), piperazino, piperazinyl (například 2-piperazinyl), thiolanyl (například thiolan-2-yl, thiolan-3-yl), tetrahydrofuranyl (například tetrahydrofuran-2yl, tetrahydrofuran-3-yl), dioxanyl (například 1,4-dioxan-2oxathianyl (například 1,4-oxathian-2-yl, 1,4-oxathian-3(například tetrahydropyran-2-yl, tetrahydropyran-4-yl) nebo pod.

5-ti nebo 6-ti členné N-obsahující je piperidin, piperidyl (například

2-piperidyl, 3-piperidyl, 4-piperidyl), morfolin, morfolinyl (například 2-morfolinyl, 3-morfolinyl), pyrrolinyl (například 1-pyrrolinyl, 2-pyrrolinyl, 3-pyrrolinyl, 4-pyrrolinyl, pyrrolidinyl (například 1-pyrrolidinyl,

3-pyrrolidinyl), imidazolidinyl (například

2-imidazolidinyl, 4-imidazolidinyl), y!) yl) , tetrahydropyranyl tetrahydropyran-3-yl, Upřednostněné jsou heterocykly jako

5-pyrrolinyl), 2-pyrrolidinyl, 1-imidazolidinyl piperazino, piperazinyl (například 2-piperazinyl) apod.

Například sloučenina obecného chemického vzorce I

A-C-OC-B ¹¹ H ¹

O OH (i) kde A a B je definováno výše je sloučenina popsaná v PCT/JP99/07101. Upřednostněny jsou tyto sloučeniny.

(1-1) 1-[1H-1-(4-Fluorbenzyl)pyrazol-4-yl]-3-hydroxy-3-(líf-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-2 ) 1- (4 - (4-Fluorbenzyl) furan-2-yl] -3-hydroxy-3- (177-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, • · · · (1-3) l-[5-(4-Fluorbenzyl)furan-2-yl]-3-hydroxy-3-(1Htetrazol-3-yl)propenon, (1-4) 3-Hydroxy-l- (5-fenylthiofuran-2-yl) -3- (1/f-l, 2,4-triazol -3-yl)propenon, (1-5) 1-(5-Benzensulfonylfuran-2-yl)-3-hydroxy-3-(lfí-1,2,4triazol-3-yl)propenon, (1-6) 1-(5-n-Butylfuran-2-yl)-3-hydroxy-3-(lfí-1,2,4-triazol-3

-yl)propenon, (1-7) 1-[5-(4-Fluorbenzyl)thiofen-2-yl]-3-hydroxy-3-lH-l,2,4triazol-3-yl)propenon, (1-8) 1-(5-n-Butylfuran-2-yl)-3-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5yl)propenon, (1-9) 1- [5 - (4-Fluorbenzyl) furan-3-yl] -3-hydroxy-3- (lfí-1,2,4triazol-3-yl)propenon, (1-10) 1-[5-(4-Fluorbenzyl)pyrrol-2-yl]-3-hydroxy-3-(1H-1,2,4

-triazol-3-yl)propenon, (1-11) 1-[5-(4-Fluorbenzyl)furan-2-yl]-3-hydroxy-3-(2Htetrazol-5-yl)propenon, (1-12) 1- [3 - (4-Fluorbenzyl) furan-2-yl] -3-hydroxy-3- (lfí-1, 2,4triazol-3-yl)propenon, (1-13) 1-[4-(4-Fluorbenzyl)furan-3-yl]-3-hydroxy-3-(lfí-1,2,4triazol-3-yl)propenon, (1-14) 1-[2H-2-(4-Fluorbenzyl)pyrazol-3-yl]-3-hydroxy-3-(2Htetrazol-5-yl)propenon, (1-15) 1-[[4-(4-Fluorbenzyl)-l-methoxymethyl]pyrrol-3-yl]-3hydroxy-3-(lfí-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-16) 1- [5- (4-Fluorbenzyl) furan-2-yl] -3-hydroxy-3- (lfí-1, 2,4triazol-3-yl)propenon, (1-17) 1-[[4-(4-Fluorbenzyl)-1-propyl]pyrrol-3-yl]-3-hydroxy3-(lfí-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-18) 1-[1,4-Di-(4-fluorbenzyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(1H1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-19) 1- [4- (4-Fluorbenzyl)pyrrol-3-yl] -3-hydroxy-3- (lfí-1,2,4

-triazol-3-yl)propenon,

(1-20) 1-[2-(4-Fluorbenzyl)furan-3-yl]-3-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenem, (1-21) 1-[[1-Benzensulfonyl-4-(2-fenylethyl)]pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, (1-22) 3-Hydroxy-l-[(4-(2-fenylethyl)]pyrrol-3-yl]-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, (1-23) 1-[[l-Benzyl-4-(2-karboxyvinyl)]pyrrol-2-yl]-3-hydroxy-3 - (1/í-l, 2,4-triazol-3-yl) propenon, (1-24) 1-[[l-Benzyl-4-(2-karboxyvinyl)Ipyrrol-2-yl]-3-hydroxy-3-(1/í-l,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-25) 1- [2- (4-Fluorbenzyl) furan-3-yl] -3-hydroxy-3- (1/í-l, 2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-26) 1- [1- (4-Fluorbenzyl)pyrrol-3-yl] -3-hydroxy-3- (2/í-tetrazol-5-yl)propenon, (1-27) 1-[2-(4-Fluorbenzyl)benzothiofen-3-yl]-3-hydroxy-3-(1/í-l,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-28) .1-[2-(4-Fluorbenzyl)benzofuran-3-yl]-3-hydroxy-3-(1H-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-29) 1- [ (l-Benzyl-4 - (2-karboxy)pyrrol-3-yl] -3-hydroxy-3- (1/í-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-30) 1-[(l-Benzyl-5-ethoxykarbonyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(ltf-1,2,4-triazol-3-yl)propenon, (1-31) 1-[[l-Benzyl-5-(2-karboxyvinyl)]pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3- (1/í-l, 2,4-triazol-4-yl) propenon, (1-32) 1- [1- (4-Fluorbenzyl)pyrrol-2-yl] -3-hydroxy-3 - (1/í-l, 2,4triazol-3-yl)propenon, (1-33) 1- [1- (4-Fluorbenzyl)pyrrol-2-yl] -3-hydroxy-3- (2/í-tetrazol-5-yl)propenon, (1-34) 1- (1-Benzensulf ony Ipyrrol-3-yl) -3-hydroxy-3- (1/í-l ,2,4triazol-3-yl)propenon, (1-35) 1-[2-(4-Fluorbenzyl)benzofuran-3-yl]-3-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, (1-36) 1-(2-Benzylbenzofuran-3-yl)-3-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, • ·

(1-37) 1-[(l-Benzensulfonyl-4-ethyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3(2#-tetrazol-3-yl)propenon, (1-3 8) 1-(l-Benzylpyrrol-3-yl)-3-hydroxy-3-(1H-1,2,4-triazol3-yl)propenon, (1-39) 1-[[l-Benzyl-5-(2-methoxykarbonylethyl)]pyrrol-3-yl]-3

-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, (1-40) 1-[[l-Benzyl-5-(2-methoxykarbonylvinyl)]pyrrol-3-yl]-3

-hydroxy-3-(2H-tetrazol-5-yl)propenon, (1-41) 1-[(l-Benzyl-5-ethoxykarbonyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3

-(2tf-tetrazol-5-yl)propenon, (1-42) 1-[(l-Benzyl-5-n-butyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(2Htetrazol-5-yl)propenon, (1-43) 1-[(l-Benzyl-5-n-propyl)pyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(2Htetrazol-5-yl)propenon, (1-44) 1- [ (l-Benzylpyrrol-3-yl) -3-hydroxy-3- (21ř-tetrazol-5yl)propenon, (1-45) 1-(l-Benzensulfonylpyrrol-3-yl]-3-hydroxy-3-(2Htetrazol-5-yl)propenon, (1-46) 1—[5 —(4-Fluorbenzyl)furan-2-yl]-3-hydroxy-3-(pyridin2-yl)propenon, (1-47) 1-[5-(4-Fluorbenzyl)furan-2-yl]-3-hydroxy-3(pyrimidin-2-y1)propenon, (1-48) 3-(5-Karboxypyridin-2-yl)-1-(5-(4-fluorbenzyl)furan-2yl]-3-hydroxypropenon, (1-49) 3-(4-Karboxypyridín-2-yl)-1-[5-(4-fluorbenzyl)furan-2yl]-3-hydroxypropenon, (1-50) 1-[2-(4-Fluorbenzyl)oxazol-5-yl]-3-hydroxy-3-(pyridin2-yl)propenon, (1-51) 1-[2-(4-Fluorbenzyl)oxazol-5-yl]-3-hydroxy-3(pyrimidin-2-yl)propenon.

Obzvláště upřednostněná je sloučenina (1-16) 1-(5-(4Fluorbenzyl)furan-2-yl]-3-hydroxy-3-(1H-1,2,4-triazol-3yl)propenon.

• · ·· · · · · · · • · · · · · • · · · · · · • · · · · · · • · ···· · · · ·

Sloučenina obecného chemického vzorce I může mít jakoukoliv chemickou strukturu E nebo Z, tvořenou substituentem obecného vzorce -CH=C(OH)~, obě formy jsou zahrnuty do sloučeniny obecného chemického vzorce I. Tautomery sloučeniny obecného chemického vzorce I mohou být také použity. To znamená, že kterákoliv sloučenina chemické struktury znázorněné níže může být použita v předkládaném vynálezu.

Proléčivo označuje sloučeninu, která může být převedena na sloučeninu obecného chemického vzorce I in vivo. Například pokud sloučenina obecného chemického vzorce I obsahuje amino skupinu nebo hydroxyskupinu, proléčivo označuje sloučeninu chráněnou acylovou skupinou (formylem, acetylem, butyrylem, isobutyrylem, valerylem, isovalerylem,. hexanoylem, oktanoylem, lauroylem, palmitolylem, stearylem, oleoylem, akryolylem, metaakryloylem, chloroformylem, pyruvoylem, oxalylem, methoxalylem, ethoxalylem, cyklohexankarbonylem, benzoylem, benzoylem, o-toluloylem, m-toluloylem, p-toluloylem, cinamátem, 1-naftoylem, 2-naftoylem, salicyloylem, anisoylem atd) . A pokud obsahuje sloučenina obecného chemického vzorce I t» ·· · · · · ···· • · · · · · · ···· ···» · • · · · · · * · ··· · · ···· · · ·» karboxylovou skupinu, proléčivo označuje sloučeninu přeměněnou na její esterový derivát (methylester, ethylester, benzylester, například) nebo amidový derivát (například methylaminolarbonyl, benzylaminokarbonyl).

Příklady farmaceuticky přijatelných solí sloučeniny obecného chemického vzorce I jsou soli minerálních kyselin jako je chlorovodíková, sírová, dusičná, fosforečná, fluorovodíková, bromovodíková a soli organických kyselin jako je mravenčí, octová, vinná, mléčná, citrónová, fumarová, maleinová, šťavelová, methansulfonová, ethansulfonová, benzensulfonová, toluensulfonová, naftalensulfonová, kafrsulfonová, soli alkalických kovů jako jsou sodík, draslík, vápník nebo soli kovů alkalických zemin.

Příkladem solvátů sloučeniny obecného vzorce I jsou hydráty (monohydrát, dihydrát).

„Anti-retrovirová aktivní složka použitá vynálezu označuje jakékoliv léčivo, které je k prevenci nebo ošetření retrovirové infekce, zahrnujíce také případ, kdy nepůsobí přímo na retrovirus. Tyto příklady zahrnují inhibitor proti enzymu odvozenému od hostitele (například DNA, polymerázový inhibitor), inhibitor proti vstupu viru do hostitelských analoga jako je gpl20, gp41), virem v hostiteli (například CCR5 antagonist), chemoterapeutická činidla, imunomodulační činidla apod. Dále pro prevenci nebo ošetření a ošetřující amphiblestristis, který efekt a reverzní v tomto použito buněk (například peptidová antagonist receptoru vázaný jsou zahrnuta oportunistic kých cytomegalovirus polymerázový inhibiční inhibiční efekt.

léčiva infekcí činidla proti vykazuje DNA transkriptázový «· ·» · · ····♦· • · * · · « · ···· · · · · · • · · · · · · » ·«· ·» ···· *» ··

Konkrétně jsou upřednostněné sloučeniny, které vykazují anti-retrovírovou aktivitu jako „anti-retrovirová aktivní složka a mnohem více jsou upřednostněny sloučeniny, které přímo působí na retrovirus. Příklady anti-retrovirových aktivních složek zahrnují CCR5 antagonist, nukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru, integrázový inhibitor a proteázový inhibitor apod. a příklady sloučenin přímo působících na retrovirus zahrnují nukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru, nukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru, integrázový inhibitor a proteázový inhibitor.

V neposlední řadě jsou upřednostněny jako anti-retrovirové složky použité v předkládaném vynálezu složky s různými typy působících mechanismů od sloučenin obecného chemického vzorce I, jako je CCR5 antagonist, nukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru a proteázový inhibitor.

Anti-retrovirové složky použité v předkládaném vynálezu nejsou omezeny jakoukoliv složkou, která může být kvantitativním rozborem zhodnocena jako vykazující anti-retrovirovou aktivitu. Například aktivní složky lidského imunodeficitního viru mohou být zhodnoceny MTT kvantitativním rozborem jak je popsáno ve Srovnávacím příkladu 2 v předkládaném vynálezu. Obzvláště upřednostněny jsou aktivní složky imunodeficitního viru silně reagujícího s lidskými antigeny, který vykazuje hodnoty EC50 10 nebo méně pmol/ml stanoveno MTT kvantitativní metodou.

Upřednostněné anti-retrovirové aktivní sloučeniny jsou konkrétně popsány níže, ale předkládaný vynález není těmito sloučeninami nijak limitován.

*

Μ 0*00 « 00 0* »»«» »»0» « · * • «00 «♦·· • 0*0« · · 0 > ·

0 · 0 · » · · 000 0000 0« 0000 »· ··

Příklad CCR5 antagonisty je TAK-779. TAK-779 je sloučenina obecného chemického vzorce II

a je uvedena ve známost v WO 99/33976.

Příklady nukleosidového typu reverzních transkriptázových inhibitorů jsou zidovudin (AZT), didanosin (ddl), zelcitabin (ddC), stavudin (d4T), lamivudin (3TC) , abacavir (ABC), tenofovir, tenofovir disoproxil apod.

Zidovudin je sloučenina obecného chemického vzorce III

(III) její chemický název je 3'-azid-3'-deoxycitimidin. Zidovudin může být připraven a použit způsobem popsaným v US 4 724 232.

Didanosin je sloučenina obecného chemického vzorce IV • · · *

HN (IV) a její chemický název je 2',3'-dideoxyinosin. Didanosín je uveden ve známost v US 4 861 759 a WO 87/01283) .

Zalcitabin je sloučenina obecného chemického vzorce V

NH,

HO·

(V) a její chemický název je 2', 3'-dideoxycytidín. Zalcatibin je uveden ve známost v US 4 879 277 a WO 87/012383.

Stavudin je sloučenina obecného chemického vzorce VI

(VI)

Stavudin je uveden ve známost v EP 398 230.

Lamivudin je sloučenina obecného chemického vzorce VII

a jeho chemický název je (-)-23'-dideoxy-3'-thiacytidin. Lamivudin je uveden ve známost v EP 0 382 526.

Abacavir je sloučenina obecného chemického vzorce VIII • · · · · ·

• · · · · • « · · · ♦ * • · · · · ··· · · ···· (VIII)

Abacavir byl vyvinut jako jeho sulfát. V předkládaném vynálezu může být Abacavir použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně ve formě různých solí kyselin a výhodně jako sůl kyseliny sírové. Abacavir je uveden ve známost v EP 434 450.

Tenofovir je sloučenina obecného chemického vzorce IX

a její chemický název je (R)-9-(2-fosfonylmethoxypropyl)adenin. Tenofovir je uveden ve známost v US 5 733 788 a WO 94/03467.

Tenofovir disoproxil je sloučenina obecného chemického vzorce X

její chemický název je bis(isopropoxykarbonyloxymethyl)ester kyseliny (R)-[[2-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1-methylethoxy]methyl]fosfonové. Tenofovir disoproxil byl vyvinut jako sůl kyseliny fumarové. V předkládaném vynálezu je tenofovir disoproxil použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně jako sůl kyselin, výhodně kyseliny fumarové. Tenofovir je uveden ve známost v US 5 922 695.

Příklady nenukleosidového typu reverzních transkriptázových inhibitorů jsou nevirapin, delavirdin, emivirin, lovirid, efavirenz, trovirdin, capravirdin, TIBO, talviralin, UC781 apod.

Nevirapin je sloučenina obecného chemického vzorce XI

(XI) «· ·· · · ···· • · · · · ·

Nevirapin je uveden ve známost v EP 429 987.

Delavírdin je sloučenina obecného chemického vzorce XII

(XII) její chemický název je 1-[5-methansulfonairiidindolyl-2karbonyl]-4-[3-(1-methylethylamino)-2-pyridyl]piperidin. Delavirin je použit jako nenukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru s obchodním názvem „RESCRIPTOR, který je prodáván společností Upjohn. V předkládaném vynálezu může být delavírdin použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně ve formě soli kyselin a výhodně methansulfonové kyseliny.

Emivirin je sloučenina obecného chemického vzorce XIII

(XIII) • · · · · · její chemický název je 6-benzyl-l-(ethoxymethyl)-5isopropyluracil. Emívirin je uveden ve známost v EP 420 763.

Loviridin je sloučenina obecného chemického vzorce XIV

(XIV) její chemický název je ( + )-a-[(2-acetyl-5-methylfenyl)amino]— 2,6-dichlorbenzacetamid. Lovirid je uveden ve. známost v EP 0 538 301.

Efavirenz je sloučenina obecného chemického vzorce XV

(XV) její chemický název je (S)-(-)-6-chlor-4-(chlorpropylethynyl)-1,4-dihydro-4-(trifluormethyl)-2H-3,l-benzoxazin-2-on.

Efavirenz je uveden ve známost v WO 94/03440 a EP 582 455.

Trovirdin je sloučenina obecného chemického vzorce XVI

Br (XVI)

A její chemický název je 1-(5-brom)pyridyl)-3-[2-(2— pyridyl)ethyl]-2-thiomočovina. V předkládaném vynálezu je trovirdin použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně ve formě různých solí kyselin a výhodně kyseliny chlorovodíkové. Trovirdin je uveden ve známost v WO 93/03022.

Capravirdin je sloučenina obecného chemického vzorce

XVII

(XVII)

0 ·· 0 0 ·· · · · · • · « · · · ·

000 ·00· 000 00 0000 0· ·· její chemický název je 5-[(3,5-dichlorfenyl)thio]-4-(1methylethyl)-1-(4-pyridynylmethyl)-lH-imidazol-2-methanolkar bamát. V předkládaném vynálezu je Capravirdin použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně ve formě různých solí kyselin a výhodně kyseliny chlorovodíkové. Trovirdin je uveden ve známost v WO 96/100 19.

TIBO je sloučenina obecného chemického vzorce XVIII

(XVIII) její chemický název je (+)-S-4,5,6,7-tetrahydro-S-methyl-6-(3methyl-2-butenyl)-imidazo(4,5,1-jk)(1,4)-benzodiazepin-2(1H)thion. TIBO je uveden ve známost v EP 384 522.

Talviralin (HBY097) je sloučenina obecného chemického vzorce XIX

Talviralin (HBY097) je uveden ve známost v EP 509 398.

UC781 je sloučenina obecného chemického vzorce XX •o

(XX)

UC781 je uvedena ve známost v WO 97/19940.

Příklady HIV proteázových inhibitorů jsou saquinavir, nelfinavir, ritonavir, indinavir, KNI-272, lopinavir, VX-478, VB-19026, BILA-2011-BS, A-77003, A-80907, DMP-323, XM-450 apod.

Saquinavir je sloučenina obecného chemického vzorce XXI • · · ·

(XXI) její chemický název je N-tert-butyl-dekahydro-2-[2(R)-hydroxy4-fenyl-3(S)-{[N-(2-chinolylkarbonyl)-L-asparginyl]amino}bu tyl]-(4aS, 8aS)-isochinolin-3(S)-karboxamid. Methansulfonová sůl Saquinaviru C30H50NSO5 CH4O3S (molekulová váha 766,96) je prodávána firmou Roche jako HIV proteázový inhibitor s názvem „INVIRASW pro orální podání. V předkládaném vynálezu je Saquinavir použit jako farmakologicky přijatelná sůl, hlavně ve formě solí kyselin, výhodně methansulfonové kyseliny. Saquinavir je uveden ve známost v US 5 196 438.

Nelfinavir je sloučenina obecného chemického vzorce

XXII

(XXII) • · * · • · * · její chemický název je [3S-[2(2S*,3S*), 3a,4 αβ, 8αβ]]-N-(1,1dimethylethyl)-dodekahydro-2-[2-hydroxy-3-[(3-hydroxy-2methylbenzoyl)amino]-4-(fenylthio)butyl]-3-isochinolinkarboxamid. Methansulfonová sůl Nelfinaviru (molekulová váha 663,90) je prodávána společností Agron jako HIV proteázový inhibitor pod názvem „VIRACEPT pro orální podání. V předkládaném vynálezu mohou být použity farmakologicky přijatelné soli, hlavně soli kyselin, výhodně methansulfonové kyseliny. Nelfinavir je uveden ve známost v WO 95/09843 a US 5 484 926.

Ritonavir je sloučenina obecného chemického vzorce

XXIII

(XXIII) její chemický název je 5-thiazolylmethylester kyseliny [5S(5R*,8R*,10R*,11R*)]-10-hydroxy-2-methyl-5-(1-methylethyl)—ΙΕ 2 — (1-methylethyl)-4-thiazolyl]-3,6-dioxo-8,10-bis(fenylmethyl)-2,4,7,12-tetraazatridekan-13-hydroxylové a (chemický vzorec C37H48N6O5S2, molekulová váha 720,95). Citrónová sůl Ritonaviru je prodávána společností Abott, jako HIV proteázový ·· ·* ·· · · ··»· • · · · · · · · inhibitor s názvem „NORVIR pro orální podání. V předkládaném vynálezu mohou být použity farmakologický přijatelné soli, hlavně soli kyselin, výhodně kyseliny citrónové. Ritonavir je syntetizován způsobem uvedeným v WO 94/14436.

Indinavir je sloučenina obecného chemického vzorce XXIV « · · · · 9 9 ·· ···· · · ··

(XXIV) její chemický název je [1(1S, 2R) , 5(s)]-2,3,5-trideoxy-N-(2,3dihydro-2-hydroxy-lH-inden-l-yl)-5-(2-([(1,1-dimethy1ethyl)amino]karbonyl)-4-(3-pyridinylmethy1)-1-piperadinyl]-2-(fenylmethyl)-D-erythro-pentaamid. Sírová sůl Indinaviru (C36H47N5O4 H2SO4, molekulová váha 711,88) je prodávána společností Merck jako HIV proteázový inhibitor s názvem „CRIXIVAN pro orální podání. V předkládaném vynálezu mohou být použity farmakologický přijatelné soli, hlavně soli kyselin, výhodně kyseliny sírové. Indinavir je uveden ve známost v EP 541 168 a US 5 413 999.

KNI-272 je sloučenina obecného chemického vzorce XXV • ·· • · · · · *

(XXV) její chemický název je (R)-N-tert-2,3,5-butyl-3-[(2S,3S)-2hydroxy-3-[(R)-2-(5-isochinolyloxyacetyl)amino-3-methylthiopropanoyl]amino-4-fenylbutanoyl]-1,3-thiazolidin-4-karboxamid.

V předkládaném vynálezu může být KNI-272 použit ve formě farmakologicky přijatelné soli, hlavně různých solí kyselin. KNI-272 je uveden ve známost v EP 574 135.

Lopinavir (ABT-378) vzorce XXVI je sloučenina obecného chemického

(XXVI) • φ ·· ♦♦»· ♦ · φ φ

Φ 9

V předkládaném vynálezu je Lopinavir použit jako farmakologicky přijatelná sůl, ve formě různých solí kyselin.

Lopinavir je uveden ve známost v WO 97/21685.

* ·· • · φ · • · φ » φ ·

Φ·« · ·*·

VX-478 je sloučenina obecného chemického vzorce XXVII

(XXVII) a je uvedena ve známost vWO 94/05639. V předkládaném vynálezu může být sloučenina VX-478 použita ve formě farmakologicky přijatelné soli, hlavně různých solí kyselin.

VB-19026 je sloučenina obecného chemického vzorce

XXVIII

(XXVIII) • · · · · ·

Sloučenina VB-19026 je uvedena ve známost v WO 97/27180.

BILA-2011-BS je sloučenina obecného chemického vzorce

XXIX

a je uvedena ve známost v EP 560 268.

A-77003 je (2S,3R,4S,5S)-2,5-di-(N-(N-methyl)-N-(2pyrídyl)-methyl)amino)-karbonylvalinylamino)-3,4-dihydroxy1,6-difenyl-hexan. V předkládaném vynálezu může být sloučenina A-77003 použita ve formě farmakologicky přijatelné soli, hlavně různých solí kyselin. Sloučenina A-77003 je uvedena ve známost v US 5 142 056.

A-80987 je (2S,3R,5S)-2-(W-(N-((2-pyridiny1)methoxykarbonyl )valiny1)amino)-5-(N-(3-pyridiny1)methoxykarbonyl)-amino)-1,6-difenyl-3-hydroxyhexan. V předkládaném vynálezu může být sloučenina A-80987 použita ve formě farmakologicky přijatelné soli, hlavně různých solí kyselin. Sloučenina A80987 je uvedena ve známost v US 5 354 866.

DMP-323 je sloučenina obecného chemického vzorce XXX • · · ·

(XXX) a je uvedena ve známost v WO 93/07128.

XM-450 je sloučenina obecného chemického vzorce XXXI

a je uvedena ve známost v WO 93/07128.

Obzvláště výhodné z výše vypsaných sloučenin jsou zidovudin, lamivudin, stavudin, nevirapin, capravirin a nelfinavirin.

Tyto anti-retrovirové aktivní složky vykazují synergický efekt anti-retrovirové aktivity, obzvláště anti-HIV • · · · · ♦ aktivitu v kombinaci se sloučeninami obecného chemického vzorce I.

Retrovirus označuje virus, který obsahuje reverzní transkriptázu, která zahrnuje lidský imunodeficitní virus (například HIV-1, HIV-2), lidský T buněčný leukemický virus (například HTLV-I, HTLV-II), kočičí imunodeficitní virus (například FIV), opičí imunodeficitní virus (například SIV) apod.

Viry tohoto typu obsahují reverzní transkriptázu, integrázu a proteázu a každá z jejich reverzní transkriptázy, integrázy nebo proteázy má vysokou homologii, protože jejich funkce jsou stejné.

Anti-retrovirové směsi předkládaného vynálezu mohou inhibovat produkci různých retrovirů a mohou být použity pro ošetření nebo pro prevenci retrovirové infekce.

Například sloučenina obecného chemického vzorce I může inhibovat integrázu nejen lidského imunodeficitního viru (HIV), ale také ostatní retroviry.

Anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu mohou účinně ošetřit nebo předejít retrovirové infekci,, protože činidlo vykazuje synergický efekt ve srovnání se samostatně podanou jakoukoliv antí-retrovirovou složkou.

Efekt anti-retroviru může být plně dosažen pouze malou dávkou každé anti-retrovirové složky činidla než samostatnou dávkou a to konkrétně bez vedlejších efektů jako je toxicita, díky synergickému efektu těchto složek jak je uvedeno níže v Příkladech.

• · · ·

Stejné množství každé anti-retrovirové aktivní složky činidla jako samostatné dávky, může výborně předejít vzniku resistentního retroviru a dovolí účinné a použitelné ošetření.

Jak je výše uvedeno, anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu jsou vysoce použitelná farmaceutická činidla pro retrovirové infekce, obzvláště jako preventivní nebo ošetřovací činidla pro AIDS.

Je známo, že symptomy nejsou okamžitě pozorovatelné po infikování. Anti-retrovirová směs předkládaného vynálezu je použitelná jako činidlo k zabránění objevení retrovirové infekce jako skryté infekce v pacientovi.

Předkládaný vynález je charakterizován synergickým efektem, získaným kombinací sloučenin obecného chemického vzorce I

ACC=CB ¹¹ H ¹

O OH (i) kde A a B jsou definovány výše a jedné nebo více různých typů anti-HIV aktivních složek.

Každá aktivní složka by měla být podána jako samostatný preparát tyto složky obsahující nebo by měly být aktivní složky podány simultánně jako každý samostatný preparát. Stejný synergický efekt může být získán úspěšným a odděleným podáním každé aktivní složky ve vhodném intervalu, který nesnižuje synergický efekt.

Jako příklad retrovirové předkládaným vynálezem, je infekce, zahrnuta infekce která má být ošetřena infekce lidského • · · · imunodeficitního viru (například AIDS), infekce lidského T buněčného leukemického viru (lidská T buněčná leukémie apod.

retrovirové infekce u zvířat zahrnují infekci imunideficitního viru (například kočičí AIDS), infekci opičího imunodeficitního viru (například opičí AIDS) apod.

Příklady kočičího

Anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu jsou použitelná pro ošetření nebo prevenci nejen retrovirové infekce (například AIDS), ale i symptomů týkajících se retrovirové infekce (například spojené lékařské symptomy jako jsou AIDS-spojený komplex (ARC) a trvalé všeobecné zvětšení lymfatických uzlin (PGL), AIDS spojené neuropatické symptomy jako je násobná skleróza). Dále AIDS týkající se spojené komplexy jako je Kaposisův sarkom, Pneumocytis Carinii Pneumonia, HIV encefalopatie apod.

Anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu mohou být použita pro ošetření asymptomatických infekcí, vznikajících infekcí nebo onemocnění zapříčiněných nebo objevujících se díky retroviru.

/int i-retrovirové činidla předkládaného vynálezu mohou být podána orálně nebo mimostřevně. Pro orální podání mohou být použita anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu v jakékoliv formě obvyklých provedení, například pevná provedení jako jsou tablety, prášky, granule, kapsle, tabletky, roztoky, sirupy a ústní nebo podjazyková provedení. Pro mimostřevní podání mohou být použita anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu v jakékoliv formě v obvyklých provedeních, například jako injekce pro podání do svalu, čípky, kůží pronikající absorbenty a inhalační činidla. Orální podání je upřednostněno.

• · · · • · · ·

Anti-retrovirová činidla předkládaného vynálezu mohou být připravena vhodnou kombinací účinných množství aktivních složek a různých farmaceutických přísad, jako jsou interní substance k přenosu léčebné látky, pojivá, zvlhčovadla, disintegranty, lubrikanty a tlumiče, které jsou vhodné pro konečné podání. V případě injekcí je vhodné provedení připraveno sterilizací s vhodným nosičem.

Konkrétně jsou jako excipienty zahrnuty laktóza, sacharóza, dextróza, škrob, karbonát vápenatý, krystalická celulóza, apod., jako pojivá jsou zahrnuty methylcelulóza, karboxymethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, želatina, polyvinylpyrrolidin, apod., jako disintegranty jsou zahrnuty karboxymethylcelulóza, karboxymethylcelulóza sodná, škrob, alginát sodný, agar, sodiumlauryl-sulfát sodný, a pod, jako lubrikanty jsou zahrnuty mastek, stearát hořečnatý, makrogol, apod. Jako základ pro čípky můžou být použity kakaové boby, makrogol, methylcelulóza a pod. Pokud jsou připravovány emulze nebo injekce, mohou být obvykle přidány k jejich štěpitelným adjuvantům, suspenzím, emulgantům, stabilizačním činidlům, konzervačním činidlům, homotonickým činidlům apod., které jsou obvykle použity apod., a v případě orálního podání mohou být přidány korigenty a ochucovadla apod.

Aktivní složky anti-retrovirových směsí předkládaného vynálezu mohou být složeny ze sloučeniny obecného chemického vzorce I a jedné nebo více různých typů retro-virových aktivních složek.

Při jednotlivém podání sloučeniny obecného chemického vzorce I nebo jiné anti-retrovirové aktivní složky je denní dávka každé jednotlivé složky mezi 0,05 až 3000 mg, výhodně 0,1 až 1000 mg pro orální podání a mezi 0,01 až 1000 mg výhodně 0,05 až 500 mg pro mimostřevní podání. Výše uvedená • ·

dávka může být stanovena měřením CD4 pozitivních buněčných hodnot množství viru DNA, tj. v krvi (nebo krevní plasmě) po podání. Dávka může být určena závislostí pacientovy odezvy proti danému ošetření.

Pokud je anti-retrovirové činidlo předkládaného vynálezu podáno, je žádoucí stanovit každé množství aktivní složky v závislostí na věku, tělesné váze, vlastnostech pacienta a cestě podání. Činidlo může být připraveno vhodnou kombinací anti-retrovirové aktivní složky výše popsané. Takže podání anti-retrovirové směsi předkládaného vynálezu zahrnuje sloučeniny obecného chemického vzorce I a další aktivní anti-retrovirovou složku. Denní dávka každé aktivní složky může být mezi 0,005 až 3000 mg, 0,01 až 1000 mg pro orální podání a mezi 0,001 až 1000 mg, výhodně 0,005 až 500 mg pro mimostřevní podání.

Pokud je každá aktivní složka podána simultánně nebo kontinuálně a nebo odděleně, mohou být podány ve stejných množstvích výše uvedených.

Příklady provedení vynálezu

Srovnávací příklady, jako jsou příklady syntézy sloučeniny obecného chemického vzorce I a imunodeficitní virové aktivity a ostatní příklady níže popsané ilustruji blíže předkládaný vynález, ale neslouží jako omezení vynálezu.

Sloučenina obecného chemického vzorce I byla syntetizována způsobem popsaným v PCT/JP99/07101.

• · • · « ·

Syntetický příklad 1: 1-[5-(4-fluorbenzyl)furan-2-yl]-3hydroxy-3-(lff-1,2,4-triazol-3-yl-propenon, sloučenina 1-16

(1) 2-Furankarboxylová kyselina (5,6 g, 50 mmol) byla ponechána reagovat s 4-fluorbenzaldehydem (6,8 g, 55 mmol) podle způsobu popsaného v Tetrahedron Letters, 1979, 5, strana

469. Po zpracování byly získané krystaly promyty isopropyletherem. Byla získána 5-[[l-(4-fluorfenyl)-l-hydroxy]methyl]furan-2-karboxylová kyselina (8,1 g, výtěžek 69 %). b.t.; 139 až 140 °C.

NMR (CDC1₃) δ: 5,88 (1H, s), 6,28 (1H, d, J=3,6 Hz), 7,07 (2H, d, J=8,7 Hz). 7,25 (1H, d, J=3,6 Hz), 7,39 až 7,44 (2H, m).

(2) Výše uvedená sloučenina (4,72 g, 20 mmol) byla redukována trimethylchlorsilanem (10,8 g, 100 mmol) a jodidem sodným (15 g, 100 mmol) podle způsobu popsaného v Tetrahedron 1995, 51, strana 11043. Jako krystalická látka byla získána 5- (fluorbenzyl)-furan-2-karboxylová kyselina (3,52 g, výtěžek 80 %) .

NMR (CDCI3) δ: 4,05 (2H, s) , 6,31 (1H, d, J=3,3 Hz), 7,12 až 7,18 (3H, m), 7,27 až 7,32 (2H, m), 12,9 (1H, brs).

• · · · • · • · · 9 9·· (3) Výše uvedená sloučenina (3,52 g, 16 mmol) byla ponechána reagovat s dipyridyldisulfidem (4,2 g, 19,2 mmol) a trifenylfosfinem (5,04 g, 19,2 mmol) podle způsobu popsaného v Bull. Chem. Soc. Japan., 1974, 47, strana 1777. Byl získán 2-pyridylthioester kyseliny 5-(4-fluorbenzyl)furan-2-karboxylové (3,7 g, výtěžek 77 %).

b.t.: 88 až 89 °C.

NMR (CDCI3) δ: 4,04	(2H, s), 6,15	(IH,	d, J=3,3	Hz), 7,03(2H,
t, J=8,7 Hz) , 7,22	(IH, d, J=3,3	Hz) ,	7,22 až	7,26 (2H, m) ,
7,29 až 7,34 (2H, m)	, 8,63 až 8,66	(IH,	m) .

(4) Výše uvedená sloučenina (3,7 g, 12,4 mmol) byla ponechána reagovat s methylmagnesium bromidem v roztoku THF (1 M, 14 ml) podle způsobu popsaného v Bull. Chem. Soc. Japan. 1974, 47, strana 1777. Byl získán 2-acetyl-5-(4-fluorbenzyl)furan (2,7 g) jako olej.

NMR (CDC1₃) δ: 2,43 (3H, s), 6,1 (IH, d, J=3,6 Hz), 7,01 (2H, t, J=9,0 Hz), 7,10 (IH, d, J=3,6 Hz), 7,18 až 7,23 (2H, m).

(5) Roztok výše uvedené sloučeniny (1,31 g, 6 mmol) v THF (18 ml) byl ochlazen a k reakční směsi byl po kapkách přidán 1 roztok lithium bistrimethylsilylamidu v THF (7,8 ml, 7,8 mmol) a teplota byla udržována při -7 0 až -60 °C. Poté byla reakční směs ohřátá na -10 °C a znovu ochlazena na -70 °C a po kapkách byl k reakční směsi přidán roztok ethylesteru kyseliny 1-trityl-lH-l,2,4-triazol-3-karboxylové (2,99 g, 7,8 mmol) v THF (30 ml) . Reakční směs byla ohřátá na teplotu místnosti a míchána 15 h. Reakční směs byla přidána k vodnému roztoku s přebytkem chloridu amonného, extrahována ethyl-acetátem, promyta solankou a sušena. Rozpouštědlo bylo odpařeno a k residuu byl přidán dioxan (75 ml) a 1 mol/dm³ HCI (20 ml) , reakční směs byla zahřáta za míchání na 80 °C na 0,5 h. Poté byl dioxan odpařen za sníženého tlaku a residuum • · • · · · bylo rozděleno mezi ethyl-acetát a vodu. Ethyl-acetátová vrstva byla promyta vodou a sušena. Rozpouštědlo bylo odstraněno a residuum bylo rozpuštěno v etheru. Etherický roztok byl třikrát extrahován 1 mol/dm³ NaOH (6 ml) . Alkalický extrakt byl promyt dvakrát etherem, neutralizován 1 mol/dm³ HC1 a extrahován ethyl-acetátem. Extrakt byl promyt vodou, solankou a sušen. Rozpouštědlo bylo odstraněno a byly získány surové krystaly, které byly promyty malým množstvím ethyl-acetátu, rekrystalizovány z ethyl-acetátu. Byla získána titulní sloučenina (1,15 g, výtěžek 61 %).

b.t.: 183 až 185 °C.

Analytický výpočet pro Ci6Hi₂FN3O₃: C, 61	,34;	H,	3,86;,	N,
13,41; F, 6,06. Nalezeno: 6,03 .	C, 61,22, H,	3,72;	N,	13,41;	F,
NMR (dg-DMSO) δ: 4,15 (2H,	s), 6,47 (1H,	d, J:	= 3,3	Hz) ,	6,93
(1H, s) , 7,17 (2H, t, J=9,	0 Hz), 7,31 až	7,37	(2H,	m), 7,50

(1H, d, J-3,3 Hz), 8,70 (1H, brs).

Syntetický příklad 2 až 51

Sloučeniny (1-1) až (1-15), (1-17) až (1-51) byly syntetizovány ve stejném množství jako výše. Fyzikální data každé sloučeniny jsou vypsány níže.

Sloučenina (1-1)

b.t.: 203 až 206 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro C15H3.2FN5O2: C, 57,51; H, 3,86; N, 22,35; F, 6,06. Nalezeno: C, 57,10, H, 3,89; N, 22,23; F, 5,79.

NMR (d₅-DMSO) δ: 5,39 (2H, s), 6,92 (1H, s), 7,17 až 7,41 (4H, m) , 8,14 (1H, s), 8,66 (1H, brs), 8,76 (1H, s) , 14,3 (1H, brs) .

• « • · • «

Sloučenina (1-2)

b.t.: 187 až 191 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro C15H12FN3O3: C, 61,31; H, 3,86; N, 13,41; F, 6,06. Nalezeno: C, 61,08, H, 3,87; N, 13,72; F, 6,08.

NMR (d₆-DMSO) δ: 3,81 (2H, s), 6,97 (1H, s), 7,14 (2H, t, J=9,0 Hz), 7,30 až 7,35 (2H, m) , '7,45 (1H, s) , 7,92 (1H, s) , 8,75 (1H, brs).

Sloučenina (1-3)

b.t.: 121 až 123 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací: ether) Analytický výpočet pro C15H11FN4O3: C, 57,33; H, 3,53; N, 17,83; F, 6,04. Nalezeno: C, 57,25, H, 3,58; N, 17,53; F, 5,81.

NMR (ds-DMSO) δ: 4,16 (2H, s) , 6,51 (lH, d, J=3, 6 Hz), 7,05 (1H, s), 7,18 (2H, t, J=8,7 Hz), 7,32 až 7,38 (2H, m) , 7,65 (1H, d, J=3,6 Hz).

Sloučenina (1-4)

b.t.: 144 až 147 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro C15H11N3O3S x 0,3 H₂O: C, 56,52; H, 3,67; N, 13,18; S, 10,06. Nalezeno: C, 56,85, H, 3,71; N, 13,56; S, 9,48.

NMR (d₅-DMSO) δ: 6,97 (1H, s), 7,12 (lH, d, J=3,6 Hz), 7,30 až 7,44 (5H, m), 7,65 (1H, d, J=3,6 Hz), 8,74 (1H, brs).

Sloučenina (1-5)

b.t.: 207 až 210 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro CxsHnNjOsS x 1,2 H₂O: C, 49,10; H, 3,68; N, 11,45; S, 8,74. Nalezeno: C, 48,84, H, 3,68; N, 11,67; S, 9,05.

NMR (ds-DMSO) δ: 7,02 (1H, s), 7,62 až 7,86 (5H, m) , 8,02 až

8,08 (2H, m), 8,82 (1H, brs).

• · · ·

• · • · · · · ·

Sloučenina (1-6)

b.t.: 72 až 73 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether)

Analytický výpočet pro C₁₃Hi₅N₃O₃ x 0,25 H₂O: C,	58,75;	H, 5,88;
N, 15,81. Nalezeno:	c,	58,10, H, 5	, 65; N, 15,81.
NMR (CDCI3) δ: 0,96	(3H, t, J=7,5	Hz) , 1,35 až	1,42	(2H, m) ,
1,65 až 1,75 (2H,	m) ,	2,74 (2H,	t, J=7,5 Hz)	, 6,25	(1H, d,
J=3,6 Hz), 7,12 (1H	, s)	, 7,29 (1H,	d, J=3,6 Hz),	8,44	(1H, s) .

Sloučenina (1-7)

b.t.: 185 až 187 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro- Ci6Hi₂FN₃O₂S x 0,3 H₂O: C, 57,41; H, 3,79; N, 12,55; F, 5,68; S, 9,58. Nalezeno: C, 57,58, H, 3,82; N, 12,77; F, 5,49; S, 9,31.

NMR (dg-DMSO) δ: 4,25 (2H, s), 7,04 až 7,40 (6H, m), 7,98 (1H, d, J=3,8 Hz), 8,77 (1H, brs), 13,8 (1H, brs).

Sloučenina (1-8)

b.t.: 124 až 125 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ether-hexan)

Analytický výpočet pro C12H14N4O3: C, 54,96; H, 5,38; N, 21,36. Nalezeno: C, 55,02, H, 5,43; N, 21,09.

NMR (CDCI3) δ: 0,95 (3H, t, J=7,8 Hz), 1,37 až 1,45 (2H, m) ,

1,65 až 1,73 (2H, m) , 2,76 (2H, t, J=7,8 Hz), 6,30 (1H, d,

J=3,6 Hz), 7,23 (1H, s), 7,39 (1H, d, J=3,6 Hz).

Sloučenina (1-9)

b.t.: 176 až 179 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát)

Analytický výpočet pro C₁₆Hi₂FN₃O₃ : C, 61,34; H, 3,86; N, 13,41; F, 6,06. Nalezeno: C, 61,19, H, 3,81; N, 13,52; F, 6,19.

NMR (d₆-DMSO) δ: 4,03 (2H, s), 6,62 (1H, d, J=0,9 Hz), 6,90 (1H, s), 7,15 (2H, t, J=9,0 Hz), 7,29 až 7,34 (2H, m) , 8,60 (1H, d, J=0,9 Hz), 8,67 (1H, brs).

• · · ·

Sloučenina (1-10)

b.t.: 180 až 183 °C

Analytický	výpočet	pro CigHi3FN.}02	X	0,2	H₂O:	C, 60,83;	H, 4,28;
N, 17,74;	F, 6,91.	Nalezeno:	c,	60	,61,	H,	4,24; N,	17,61; F,
5,82.
NMR (d₆-DMSO) δ: 3,	97 (2H, s),	, 6,	04	(1H,	s) ,	6,89 (1H,	s) , 7,01

až 7,18 (6H, m), 8,72 (1H, brs).

Sloučenina (1-11)

b.t.: 171 až 174 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether) Analytický výpočet pro C15H11FN4O3: C, 57,33; H, 3,53; N, 17,86; F, 6,05. Nalezeno: C, 57,05, H, 3,61; N, 17,74; F, 5,82.

NMR (d₆-DMSO) δ: 4,24 (2H, s), 6,70 (lH, d, J=l,8 Hz), 7,09 (1H, s), 7,10 až 7,17 (2H, xn) , 7,32 až 7,37 (2H, m) , 8,04 (1H, d, J=l,8 Hz).

Sloučenina (1-12)

b.t.: 221 až 223 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether) Analytický výpočet pro C16H12FN3O3: C, 61,34; H, 3,86; N, 13,41; F, 6,06. Nalezeno: C, 61,04, H, 3,98; N, 13,28; F, 5,87.

NMR (d₆-DMSO) δ: 4,23 (2H, s) , 6,65 (1H, d, J=l,8 Hz), 7,03 (1H, s), 7,10 až 7,16 (2H, m), 7,31 až 7,36 (2H, m), 7,97 (1H, d, J=l,8 Hz), 8,74 (1H, brs), 14,7 (1H, brs).

Sloučenina (1-13)

b.t.: 217 až 220 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ethylacetát) .

Analytický výpočet pro C16H12FN3O3: C, 61,34; H, 3,86; N, 13,41; F, 6,06. Nalezeno: C, 61,19, H, 4,04; N, 13,16; F, 5,90.

NMR (dg-DMSO) δ: 4,02 (2H, s), 6,93 (lH, s), 7,09 (2H, t, J=9,0 Hz), 7,25 až 7,31 (2H, m), 7,56 (1H, s), 8,66 (1H, brs), 8,80 (1H, s) .

• · • · · ·

Sloučenina (1-14)

b.t.: 195 až 197 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací: ether).

Analytický výpočet pro C14HU.FN6O2 C, 53,50; H, 3,53; N, 26,74;

F, 6,04. Nalezeno: C, 53,65, H, 3,53; N, 26,71; F, 5,92.

NMR (d₆-DMSO) δ: 5,79 (2H,	S), 7,12	až 7,26 (5H,	m) ,	7,47 (ÍH,
d, J=2,1 Hz), 7,74 (1H, d,	J-2,1 Hz),
Sloučenina (1-15)
b.t.: 189 až 191 °C
Analytický výpočet pro C18H17FN4O3 x	0,2 C₄H₈O₂:	c,	60,38; H,
5,01; N, 14,98; F, 5,04.	Nalezeno	: C, 60,53,	H,	4,79; N,
14,71; F, 5,05.
NMR (dg-DMSO) δ: 3,20 (2H,	s), 6,68	(ÍH, s), 7,02	až	7,25 (2H,

m) , 7,32 až 7,42 (2H, m), 8,05 (1H, brs), 8,75 (ÍH, brs).

Sloučenina (1-17)

b.t.: 210 až 211 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

chloroform).

Analytický výpočet pro C19H19FN4O2: C, 64,40; H, 5,40; N, 15,81; F, 5,36. Nalezeno: C, 64,28, H, 5,37; N, 15,61; F, 5,23.

NMR (dg-DMSO) δ: 0,81 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,60 až 1,82 (2H, m), 3,68 až 3,96 (2H, m) , 4,05 (2H, s) , 6,57 (ÍH, d, J=l,8 Hz),

6,80 až 7,36 (4H, m), 7,91 (ÍH, d, J=l,8 Hz), 8,57 (ÍH, brs).

Sloučenina (1-18)

b.t.

166 až 168 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát).

Analytický výpočet pro C23H18F2N4O2: C, 65,71;

F, 9,04. Nalezeno:	c,	65,82,	H, 4,33; N,	13
NMR (dg-DMSO) δ: 4,	03	(2H, s)	, 5,10 (2H,	s)
(ÍH, s), 7,00 až 7,	40	(8H, m)	, 8,04 (ÍH,	s)

H, 4,32; N, 13,33;

03; F, 8,78.

6,65 (ÍH, s), 6,84

8,58 (ÍH, brs).

Sloučenina (1-19) • ·

b.t.: 210 až 213 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát:hexan).

Analytický výpočet pro Ci6H₁₃FN4O2 x 0,2 C2H₆O: C, 60,59; H,

4,53; N, 17,23; F, 5,84. Nalezeno: C, 60,62, H, 4,45; N,

16,95; F, 5,69.

NMR (dg-DMSO) δ: 4,07 (2H, s), 6,59 (1H, s), 6,87 (1H, s), 7,02 až 7,11 (2H, m) , 7,16 až 7,30 (2H, m), 7,83 (1H, s), 8,70 (1H, brs), 11,5 (1H, s), 14,6 (1H, brs).

Sloučenina (1-20)

b.t.: 150 až 153 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether). Analytický výpočet pro C15H11FN4O3: C, 57,33; H, 3,53; N, 17,83; F, 6,04. Nalezeno: C, 57,29, H, 3,72; N, 17,74; F, 5,84.

NMR (CDCI3) δ: 4,40 (2H, s), 6,75 (1H, d, J=2,l Hz), 6,99 (2H, t, J=8,7 Hz), 7,01 (1H, s), 7,24 až 7,29 (2H, m), 7,39 (1H, d, J=2,1 Hz).

Sloučenina (1-21)

b.t.: 178 až 181 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether). Analytický výpočet pro C22H19N5O4S: C, 58,79; H, 4,26; N, 15,88;

S, 7,13. Nalezeno: C,	59,	24, H,	4,37	; N,	15,75; S, 6,61.
NMR (dg-DMSO)	δ: 2,81	až	2,98	(4H,	m) ,	7,11 až 7,30 (7H,	m) ,
7,68 až 7,73	(2H, m) ,	7,	80 až	7,86	(2H,	m), 8,07 až 8,10	(2H,
m), 8,64 (1H,	d, J-2,4	Hz	) ·

Sloučenina (1-22)

b.t.: 228 až 230 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci: ether). Analytický výpočet pro C16H15N5O2 x 0,16 C2H4O2: C, 61,46; H, 4,94; N, 21,96. Nalezeno: C, 61,74, H, 4,88; N, 21,67.

NMR (d₆-DMSO) δ: 2,84 až 3,02 (4H, m), 6,74 (1H, m), 7,04 (lH, s), 7,17 až 7,32 (5H, m) , 7,96 (1H, m), 11,6 (1H, brs).

• · · · *

Sloučenina (1-23)

b.t.: 215 až 218 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

chloroform).

Analytický výpočet pro C19H16N4O4: C, 62,63; H, 4,43; N, 15,38. Nalezeno: C, 62,29, H, 4,69; N, 15,11.

NMR (dg-DMSO) δ: 5,19 (2H, s) , 6,25 (1H, d, J=16,5 Hz), 6,90 (1H, s), 7,30 až 7,43 (5H, m), 7,72 (1H, s), 8,12 až 8,22 (2H, m) , 8,62 (1H, brs).

Sloučenina (1-24)

b.t.: 226 až 228 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát:hexan).

Analytický výpočet pro C19H16N4O4 x 0,1 C4HgO₂: C, 62,44; H, 4,54; N, 15,01. Nalezeno: C, 62,06, H, 4,61; N, 14,82.

NMR (dg-DMSO) δ: 5,19 (2H, s) , 6,25 (1H, d, J=16,2 Hz), 6,90 (1H, s), 7,28 až 7,44 (5H, m), 7,72 (1H, s), 8,12 až 8,22 (2H, m) , 8,63 (1H, brs) . ·

Sloučenina (1-25)

b.t.: 144 až 147 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát).

Analytický výpočet pro C16H12FN3O3 x 0,1 H₂O: C, 60,99; H, 3,90; N, 13,34; F, 6,03. Nalezeno: C, 61,01, H, 4,07; N, 13,47; F, 5,99.

NMR (dg-DMSO) δ: 4,41 (2H, s) , 6,92 (1H, s), 7,04 (1H, d, J=l,8 Hz), 7,14 (2H, t, J=9,3 Hz), 7,28 až 7,33 (2H, m) , 7,72 (1H, d, J=l,8 Hz), 8,70 (1H, brs).

Sloučenina (1-26)

b.t.: 168 až 170 °C

Analytický výpočet pro C15H12FN5O2 x 0,6 H₂O: C, 53,75; H, 3,79; N, 20,90; F, 5,67. Nalezeno: C, 53,83, H, 3,73; N, 21,20; F, 5,50.

NMR (dg-DMSO) δ: 5,20 (2H, s) , 6,68 (1H, dd, J=3,0, 1,8 Hz),

6,96 (1H, s), 7,02 až 7,08 (1H, s), 7,16 až 7,26 (2H, m), 7,34 až 7,44 (2H, m), 8,02 až 8,08 (1H, m).

Sloučenina (1-27)

b.t.: 190 až 195 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací: ether). Analytický výpočet pro C20H14FN3O2S: C, 63,31; H, 3,72; N,

11,08; F, 5,01; S, 8,45. Nalezeno: C, 63,08, H, 3,82; N,

11,28; F, 4,84; S, 8,46.

NMR (d₆-DMSO) δ: 4,53 (2H, s) , 7,01 (1H, t, J-8,7 Hz), 7,11 (1H, s), 7,26 až 7,48 (1H, d, J=7,8 Hz), 8,10 (1H, d, J=7,5

Hz), 8,43 (1H, brs).

Sloučenina (1-28)

b.t.: 122 až 124 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ether:hexan).

Analytický výpočet pro C20H14FN3O2 x 0,25 H2O: C, 65,30; H, 3,97; N, 11,42; F, 5,16. Nalezeno: C, 65,50, H, 3,99; N, 11,24; F, 4,99.

NMR (CDCI3) δ: 4,54 (2	H,	s) , 6,	98	až	7,04 (2H, m) , 7,26	(1H,
s), 7,34 až 7,41 (4H,	m)	, 7,47	až	7,	50 (1H, m), 7,96 až	7,99
(1H, m), 8,38 (1H, s).
Sloučenina (1-29)
b.t.: 264 až 265 °C
Analytický výpočet pro	C_r	7H14N4O4	X	0,3	H₂O: C, 59,40; H,	4,28;
N, 16,30. Nalezeno: C,	59,	21, H,	4,	30;	N, 16,20.

NMR (dg-DMSO) δ: 5,63 (2H, s), 6,95 (1H, s), 7,16 až 7,40 (6H, m), 8,27 (1H, d, J=l,8 Hz), 8,69 (1H, brs), 12,8 (1H, brs).

Sloučenina (1-30)

b.t.: 204 až 206 °C

Analytický výpočet pro Ci9H₁₈N₄O₄: C, 62,29; H, 4,95; N, 15,29.

Nalezeno: C, 61,94, H, 5,03; N, 15,02.

♦ φ • Φ •β*'··

NMR	(dg-DMSO) δ: 1,24	(3H, t, J=7,2 Hz),	4,20	(2H,	q, J=7,2
Hz) ,	5,61 (2H, s) , 6,	97 (1H, s), 7,12 až	7,42	(6H,	m) , 8,32
(1H,	s), 8,77 (1H, s).

Sloučenina (1-31)

b.t.: 238 až 240 °C

Analytický výpočet pro C20H18N4O4 x 0,4 H2O: C, 62,30; H, 4,91; N, 14,53. Nalezeno; C, 62,18, H, 4,74; N, 14,53.

NMR (d₆-DMSO) δ: 3,64 (3H, s) , 5,42 (2H, s), 6,36 (1H, d, J=15,9 Hz), 6,95 (1H, s), 7,02 až 7,58 (7H, m) , 8,17 (1H, s), 8,76 (1H, s).

Sloučenina (1-32)

b.t.; 170 až 173 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát).

Analytický výpočet pro C16H13FN4O2 x 0,2 HCI: C, 60,13; H, 4,16; N, 17,53; F, 5,94. Nalezeno: C, 60,21, H, 4,12; N, 17,41; F, 5,62.

NMR (ds-DMSO) δ: 5,65 (2H, s), 6,30 až 6,36 (1H, m) , 6,94 (1H, m) , 7,04 až 7,50 (6H, m), 8,65 (1H, brs).

Sloučenina (1-33)

b.t.: 147 až 150 °C

Analytický výpočet pro C15H12FN5O2 x 0,2 H₂0: C, 56,85; H, 3,94; N, 22,10; F, 6,00. Nalezeno: C, 56,68, H, 4,02; N, 22,47; F, 5,72.

NMR (d_e-DMSO) δ: 5,65 (2H, s), 6,37 (1H, dd, J=3,0, 2,7 Hz),

7,05 až 7,20 (5H, m) , 7,47 až 7,57 (2H, m) .

Sloučenina (1-34)

b.t.: 258 až 264 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

chloroform).

Analytický výpočet pro C15H12N4O4S: C, 52,32; H, 3,51; N, 16,27;

S, 9,31. Nalezeno: C, 52,26, H, 3,60; N, 16,05; S, 9,22.

φ ·

s), 7,53 (1H, m) , 7,67

8,08 až 8,15 (2H, m) , ·»

NMR (d₆-DMSO) δ: 6,85 (1H, m), 7,03 (1H, až 7,74 (2H, m), 7,78 až 7,84 (1H, m) ,

8,37 (1H, m), 8,65 (1H, brs).

Sloučenina (1-35)

b.t.: 164 až 168 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ether-.hexan).

Analytický výpočet pro C19H13FN4O3 x 0,2 C4H10O: C, 62,72; H,

3,99; N, 14,78; F, 5,01. Nalezeno: C, 62,43, H, 3,74; N, 14,74; F, 4,76.

NMR (CDCI3) δ: 4,53 (2H, s), 6,98 až 7,04 (2H, m) , 7,26 (1H, s), 7,34 až 7,41 (4H, m) , 7,49 až 7,52 (1H, m) , 7,95 až 7,98 (1H, m) .

Sloučenina (1-36)

b.t.: 181 až 183 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

chloroform).

Analytický výpočet pro Ci9H₁₄N₄O3 x 0,25 H₂0: C, 65,04; H, 4,17; N, 15,97. Nalezeno: C, 65,02, H, 3,96; N, 16,10.

NMR (dg-DMSO) δ: 4,61 (2H, s), 7,17 (1H, s), 7,26 až 7,47 (7H, m) , 7,68 až 7,70 (1H, m), 7,95 až 7,98 (1H, m) .

Sloučenina (1-37)

b.t.: 178 až 180 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát) .

NMR (dg-DMSO) δ: 1,19 (3H, t, J=7,6 Hz), 2,73 (2H, qd, J=7,6,

1,2 Hz), 6,96 až 7,04 (2H, m) , 7,48 až 7,78 (3H, m) , 7,90 až

8,02 (3H, m).

Sloučenina (1-38)

b.t.: 216 až 217 °C

Analytický výpočet pro Ci6Hi₄N₄O2 x 0,05 CHCI3 x 0,2 H2O: C, 63,44; H, 4,79; N, 18,44. Nalezeno: C, 63,47, H, 4,79; N, 18,39.

*· ·· · · • · · · · • · ·

NMR (d₆-DMSO) δ: 5,20 (2H, s), 6,60 až 6,62 (ÍH, m), 6,84 (7H,

s), 7,00 až 7,02 (1H, m) , 7,92 až 7,93 (ÍH, m) , 8,69 (ÍH, brs), 14,6 (ÍH, brs).

Sloučenina (1-39)

b.t.: 178 až 180 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát:hexan:ether).

Analytický výpočet pro C19H19N5O4: C, 59,84; H, 5,02; N, 18,36. Nalezeno: C, 59,38, H, 5,07; N, 18,03.

NMR (CDCI3) δ: 2,50 až 2,70 (2H, m) , 2,75 až 2,88 (2H, m) , 3,72 (3H, s), 5,10 (2H, s), 6,95 (1H, s) , 7,02 až 7,10 (2H, m) , 7,28 až 7,48 (4H, s) .

Sloučenina (1-40)

b.t.: 223 až 225 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát:hexan).

Analytický výpočet pro C19H17N5O4 x 0,1 C4H8O2: C, 60,03; H, 4,62; N, 18,04. Nalezeno: C, 60,26, H, 4,57; N, 17,91.

NMR (d₆-DMSO) δ: 3,66 (3H, s), 5,48 (2H, s) , 6,49 (ÍH, d, J=15,6 Hz), 7,08 (1H, s), 7,10 až 7,60 (7H, m), 8,30 (ÍH, s).

Sloučenina (1-41)

b.t.: 85 až 90 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát).

NMR (d₆-DMSO) δ: 1,36 (3H, t, J=6,9 Hz), 4,30 (2H, q, J=6,9 Hz), 5,62 (2H, s) , 7,04 (ÍH, s), 7,10 až 7,60 (7H, m) , 8,30 (ÍH, s).

Sloučenina (1-42)

b.t.: 118 až 120 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát .-hexan-.ether) .

Analytický výpočet pro C19H21N5O2 x 0,2 C₄H₈O2: C, 64,14; H, 6,17; N, 18,98. Nalezeno: C, 64,60, H, 6,02; N, 18,97.

• · · · • · · · · ·

	55	• · · • • ·	• · • · •	• · · • · • ·	• · • · « ·
NMR (CDC1₃) δ: 0,91	(3H, t, J=7,2 Hz),	1,30 až	1,44	(2H,	m) ,
1,52 až 1,68 (2H, m)	, 2,46 (2H, t, J=7	,2 Hz),	5,09	(2H,	s) ,
6,50 (1H, s), 7,04 až	7,10 (2H, m), 7,30	až 7,50	(3H,	ΙΏ) .

Sloučenina (1-43)

b.t.: 156 až 158 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací: ethylacetát :hexan).

Analytický výpočet pro Ci8Hi₉N₅0₂ x 0,1 C₄H₈O₂: C, 63,84; H, 5,77; N, 20,23. Nalezeno: C, 63,93, H, 5,76; N, 20,23.

NMR (dg-DMSO) δ: 0,89 (3H, t, J=7,8 Hz), 1,42 až 1,60 (2H, m), 2,42 (2H, t, J=7,8 Hz), 5,23 (2H, s) , 6,47 (1H, s), 6,95 (1H, s), 7,10 až 7,18 (2H, m), 7,26 až 7,40 (3H, m), 7,99 (1H, s).

Sloučenina (1-44)

b.t.: 188 až 189 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát).

Analytický výpočet pro Ci5Hi₃N₅O₂ x 0,2 H₂O: C, 60,27; H, 4,52; N, 23,43. Nalezeno: C, 60,39, H, 4,51; N, 23,39.

NMR (dg-DMSO) δ: 5,22 (2H, s) , 6,68 až 6,69 (1H, m), 6,97 (1H, s), 7,05 (1H, m) , 7,31 až 7,40 (5H, m), 8,06 (lH, m) .

Sloučenina (1-45)

b.t.: 203 až 204 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát).

Analytický výpočet pro Ci₄HhFN5O₄ x 0,75 H₂0: C, 46,86; H, 3,51; N, 19,52; F 8,94. Nalezeno: C, 47,22, H, 3,48; N, 19,32; F, 8,95.

NMR (dg-DMSO) δ: 6,89 až 6,92 (1H, m) , 7,56 až 7,57 (1H, m) , 7,68 až 7,73 (2H, m) , 7,80 až 7,84 (1H, m), 8,12 až 8,15 (2H, m) , 8,52 až 8,53 (lH, m) .

Sloučenina (1-46)

b.t.: 84 až 85 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ether:hexan).

Analytický výpočet pro C19H14FNO3 x 0,2 H2O: C, 69,80,- H, 4,44; N, 4,28; F 5,81. Nalezeno: C, 69,76, H, 4,34; N, 4,34; F, 5,73.

NMR (CDC1₃> δ: 4,06 (2H, s), 6,16 (1H, d, J=3,3 Hz), 7,03 (2H, t, J=8,4 Hz), 7,20 až 7,30 (3H, m), 7,32 (1H, s), 7,40 až 7,48 (1H, dt, J=l,5, 7,5 Hz), 8,11 (1H, d, J=7,5 Hz), 8,68 až 8,74 (1H, m) .

Sloučenina (1-47)

b.t.: 77 až 80 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ethyl-acetát:chloroform).

Analytický výpočet pro C18H13FNO3 x 0,2 H2O x 0,3 CHCI3: C, 64,78; H, 4,34; N, 8,02; F 5,44. Nalezeno: C, 65,04, H, 4,04; N, 7,77; F, 5,56.

NMR (CDCI3) δ: 4,07 (2H, s) , 6,18 (1H, d, J=3,2 Hz), 7,03 (2H, t, J=8,8 Hz), 7,18 až 7,22 (3H, m), 7,39 (1H, s), 7,39 (1H, t, J=4,8 Hz), 8,92 (2H, d, J=4,8 Hz).

Sloučenina (1-48)

b.t.: 196 až 198 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizaci:

ísopropylether).

Analytický výpočet pro C20H14FNO5 x 0,2 H2O: C, 64,76; H, 3,91; N, 3,78; F 5,12. Nalezeno: C, 64,95, H, 3,73; N, 3,73; F, 4,99 .

NMR (CDCI3) δ: 4,08 (2H, s) , 6,18 (1H, d, J=3,6 Hz), 7,03 (2H, t, J=9,0 Hz), 7,20 až 7,32 (3H, m), 7,37 (1H, s), 8,20 (1H, t, J=8,4 Hz), 8,51 (1H, dd, J=8,4, 1,8 Hz), 9,34 (1H, brs).

Sloučenina (1-49)

b.t.: 208 až 209 °C (rozpouštědlo pro

Ísopropylether).

Analytický výpočet pro C20H14FNO5: C, 65,40; H, 5,17. Nalezeno: C, 65,14, H, 3,79; N, 3,90; F, rekrystalizaci:

3,81; N, 3,81; F 4,95.

• ·

NMR (CDC1₃) δ t, J=8,4 Hz) , (IH, m), 8,56 : 4,09 (2H, s) , 6,25 (IH, d, J=3,6 Hz), 7,03 (2H, 7,21 až 7,32 (3H, m), 7,65 (IH, s), 7,96 až 8,02 (IH, brs), 8,85 (IH, d, J=5,l Hz).

Sloučenina (1-50)

b.t.: 108 až 109 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát:isopropylether).

Analytický výpočet pro C18H13FN2O3: C, 66,66; H, 4,04; N, 8,64;

F 5,86. Nalezeno: C,	66,64, H, 3,	96;	N, 8,66; F, 5,59.
NMR (CDCl₃) δ: 4,19	(2H, s), 7,02	až	7,07 (2H, m), 7,45	až 7,48
(IH, m) , 7,80 (IH,	s), 7,86 až	7,	91 (IH, m) , 8,12	(IH, d,
J=7,8 Hz), 8,72 (IH,	d, J=4,5 Hz)

Sloučenina (1-51)

b.t.: 97 až 100 °C (rozpouštědlo pro rekrystalizací:

ethyl-acetát:isopropylether).

Analytický výpočet pro Ci7H₁₂FN₃O₃ x 0,4 H₂O: C, 61,41; H, 3,88; N, 12,64; F 5,71. Nalezeno: C, 61,76, H, 3,58; N, 12,21; F, 5,84.

NMR (d₆-DMSO) δ: 4,28 (2H, s) , 7,15 až 7,21 (3H, m) , 7,36 až 7,40 (2H, m) , 7,64 (IH, brs), 8,11 (IH, brs), 8,98 až 9,02 (2H, m) .

Srovnávací příklad 1

Byla stanovena chemického vzorce inhibiční aktivita sloučeniny obecného

A-C~C=C-B ¹¹ H ¹

O OH (i) proti integráze každého retroviru.

• · · ·

Inhibiční efekt sloučenin předkládaného vynálezu pro

HIV-1 integrázu byl stanoven pomocí testů popsaných níže.

(1) Příprava DNA roztoků

Substrátová DNA a cílová DNA, jejichž sekvence jsou uvedeny níže, byly syntetizovány společností Amersham Pharmacia Biotech a byly rozpuštěny v KTE tlumícím roztoku (složení: 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl (pH 7,6) při koncentraci 2 pmol/pl. DNA roztoky byly temperovány s každou složkou ochlazením a opětovným zahřátím.

(Substrátová DNA)

5'-Biotin ACC CTT TTA GTC AGT GTG GAA AAT CTC TAG CAG T-3' 3'- GAA AAT CAG TCA CAC CTT TTA GAG ATC GTC A-5' (Cílová DNA)

5'- TGA CCA AGG GCT AAT TCA CT-Dig-3'

3'-Dig- ACT GGT TCC CGA TTA AGT G -5' (2) Výpočet procentuelní inhibice (IC₅₀ hodnoty testovaných sloučenin)

Streptavidin, získaný od Vector Laboratories, byl rozpuštěn v 0,1 M karbonátovém tlumícím roztoku (složení: 90 mM Na₂CO₃) , 10 mM NaHC0₃) s koncentrací 40 pg/mL. Po naplnění každého otvoru mikrotitrační destičky (získané od NUNC) 50 pL výše uvedeného roztoku při 4 °C přes noc byl každý otvor dvakrát promyt PBS (složení: 13,7 mM NaCl, 0,27 mM KCl, 0,43 mM Na₂HPO₄, 0,14 mM KH₂PO₄) a uzavřen 3 00 pl 1% odpěněného mléka v PBS po 30 min. Každý otvor byl dvakrát promyt PBS a ke každému otvoru bylo přidáno 50 pl substrátového roztoku DNA (2 pmol/pl). Mikrotitrační destička byla udržována při teplotě místnosti 30 minut. Poté byl každý otvor promyt PBS a jedenkrát vodou.

• · · ·

J.**···* .·« ······· · · · · · · ··

Následovně bylo ke každému otvoru připravenému výše přidáno 45 μΐ reakčního tlumícího roztoku připraveného z 12 μΐ tlumícího roztoku (složení: 150 mM MOPS (pH 7,2), 75 mM MnCl2, 50 mM 2-merkaptoethanolu, 25% glycerolu, 500 pg/ml hovězího séra albuminové frakce V), 1 pL cílové DNA (5 pmol/μΙ) a 32 μΐ destilované vody. K tomu bylo přidáno 6 μΐ testované sloučeniny v DMSO nebo v DMSO s pozitivní kontrolou (PC) a smíšeno s výše uvedených tlumícím roztokem, poté bylo přidáno 9 μΐ integrázového roztoku (30 pmol) a otvory byly promíchány. K otvorům negativní kontroly bylo přidáno 9 μΐ integrázového tlumícího zředěného roztoku (složení: 20 mM MOPS (pH 7,2), 400 mM glutamátu draselnatého, 1 mM EDTA, 0,1% NP-40, 20% glycerol, 1 mM DTT, 4 M močovina).

Mikrotitrační destičky byly inkubovány při 30 °C 1 h. Reakční roztok byl odstraněn a každý otvor byl dvakrát promyt PBS. Následovně byl každý otvor mikrotitrační destičky naplněn 100 μΐ anti-digoxidenin antihmotou označenou alkalickou fosfatázou (Sheep Fab fragment: získanou od společnosti Boehringer) a desky byly inkubovány při 30 °C 1 h. Poté byl každý otvor dvakrát promyt 0,05% Tween20 v PBS a jednou PBS. Poté bylo do každého otvoru přidáno 150 μΐ alkalického tlumícího fosfatázového roztoku (složení: 10 mM p-Nitrofenylfosfátu (získaného od Vector Laboratories, 5 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 9,5)). Mikrotitrační destička byla inkubována při 3 0 °C 2 h a reakce byla ukončena přidáním 50 μΐ 1 M roztoku NaOH. Poté byla změřena optická hustota v každém otvoru a procentuelní inhibice byla stanovena z následujícího vyjádření.

Procentuelní inhibice (%) = 100 [1—{ (C abs. - NC abs.)/(PC abs. - NC abs.)}]

C abs.; NC abs.

PC abs.

OD sondy sloučenin OD negativní kontroly OD pozitivní kontroly (NC) (PC)

Pokud je procentuelní inhibice (%) X% při koncentraci x pg/ml a procentuelní inhibice (%) Y% při koncentraci y pg/ml, je jedna z nich více než 50 % a druhá méně než 50 %. IC50 může být stanoveno z následujícího vyjádření.

IC₅₀ (pg/ml) = x - {(X-50)(x-y)/(X-Y)}

IC50 hodnoty, koncentrace sloučenin při procentuelní inhibici 50% jsou uvedeny v Tabulce 1. Sloučenina číslo X je v Tabulce 1 označena stejně jako sloučenina číslo X v Příkladech výše.

Tabulka 1

Sloučenina číslo	IC₅₀ (pg/ml)
1-3	0,40
1-11	0,42
1-12	0,43
1-16	0,53
1-17	1,6
1-19	0, 63
1-20	0,32
1-21	0,54
1-22	0,59
1-25	0,48
1-29	1,0
1-46	0,44
1-47	0,35
1-50	0,40
1-51	0,48

Inhibiční efekt sloučenin a retro-virové aktivní substance předkládaného vynálezu pro HIV-1, HIV-2, SIVagm integrázy byly stanoveny testem popsaným níže.

• · « · • · · · · · • · · · · (1) Molt-4 buňky (2 χ 10⁶ buněk) byly infikovány HIV-1 NL432 (4 χ 10⁶ jedn./min), HIV-2 Rod (8 χ 10⁶ jedn./min), SIVmac

MA239 (8 χ 10⁸ jedn./min) a SIVagm SA212 (8 χ 10⁶ jedn./min) a byly inkubovány 1 h při teplotě místnosti.

Příprava virů

1) Příprava HIV-1 viru:

SW 480 buňky byly kultivovány v DMEM médiu doplněném o

10% plodné hovězí sérum za použití 25 cm² baňky. HIV-1 infikovaná molekulární DNA (40 pg) , pNL432 byla umístěna do otvorů způsobem přesrážení fosfátu draselnatého a kapalina (2 ml) byla infekována po 2 až 3 dnech do M1866 buněk (1 χ 10^{3 * * 6}buněk). Buňky byly inkubovány v 10 ml RPMI média doplněném o 10% plodné hovězí sérum v C0₂ inkubátoru při 37 °C. Poté co bylo pozorováno objevení velkých buněk, byly buňky odstraněny centrifugaci a poté byla kapalina filtrována skrz 0,45 pm filtr, byla změřena RT aktivita a virus byl skladován při -80 °C jako HIV-1 kompletní virus.

2) Příprava HIV-2 viru:

HIV-2 Rod virus byl infekován do M8166 buněk (1 χ 10⁶buněk). Tyto buňky byly kultivovány v 10 ml RPMI médiu doplněném o 10% plodné hovězí sérum v CO₂ inkubátoru při 37 °C. Poté co bylo pozorováno objevení velkých buněk, byly buňky odstraněny centrifugaci a poté byla kapalina byla filtrována skrz 0,45 pm filtr, byla změřena RT aktivita a virus byl skladován při -80 °C jako HIV-2 kompletní virus.

3) Příprava SIVmac víru:

SW480 buňky byly kultivovány v DMEM médiu doplněném o

10% plodné hovězí sérum s použitím 25 cm² baňky. SIVmac MA239 infikovaná molekulární DNA (40 pg) , pMA239 byla zavedena do buněk způsobem přesrážení fosfátu draselnatého a kapalina (2 ml) byla infekována po 2 až 3 dnech do CEMX174 buněk (1 χ 10⁶ • · · • · · · · · · · · · buněk) . Buňky byly kultivovány v 10 ml RMPI média doplněném o 10% plodné hovězí sérum v CO2 inkubátoru při 37 °C. Poté co bylo pozorováno objevení velkých buněk, byly buňky odstraněny centrifugací a poté byla kapalina byla filtrována skrz 0,45 pm filtr, byla změřena RT aktivita a virus byl skladován při -80 °C jako SICmac kompletní virus.

4) Příprava SIVagm viru:

SW480 buňky byly kultivovány v DMEM médiu doplněném o

10% plodné hovězí sérum s použitím 25 cm² baňky. SIVagm SA212 infikovaná molekulární DNA (40 pg) , pMA239 byla zavedena do buněk způsobem přesrážení fosfátu draselnatého a kapalina (2 ml) byla infekována po 2 až 3 dnech do M8166 buněk (1 χ 10⁶buněk) . Buňky byly kultivovány v 10 ml RMPI média doplněném o 10% plodné hovězí sérum v C0₂ inkubátoru při 37 °C. Každé tři dny byly buňky od roztoku separovány centrifugací a kultivace pokračovala v novém médiu. Každá kapalina byla filtrována skrz 0,45 pm filtr, byla změřena RT aktivita a virus byl skladován při -80 °C jako SICagm kompletní virus.

(2) Buňky byly dvakrát promyty k odstranění virů a suspendovány v 10 ml RPMI média doplněného o 10% plodné hovězí sérum. Infikované buňky (100 pl) byly umístěny do mikrotitrační desky s 96 otvory, které obsahovaly zředěné sloučeniny (100 pl) v sérii 5 záhybů a byly kultivovány v CO2 inkubátoru při 37 °C.

(3) Supernatant byl po pěti dnech po infikování sklizen a bylo změřeno množství viru RT aktivitou.

• 9 · *

Příprava roztoku pro RT stanovení:

Reakční směs (90 pl) obsahovala 50 mM Tris-HCl, pH 8,3,

150 mM KCl, 10 mM MgCl₂, 0,1 % Nonidet P-40, 10 mM DDT (dithiothreitol), 5 pg/ml poly(rA) , 5 pg/ml (dT)i₂ až ₁₈ a pCi [³H] dTTP s konečnou koncentrací po smísení se vzorkem (10 pl).

Provedení RT analýzy:

1. 10 pl vzorku bylo umístěno do tří otvorů na mikrotitrační desce s 96 otvory (trojitá analýza).

2. Reakční směs (90 pl) ochlazená na 4 °C byla přidána do každého otvoru, smíšena a poté inkubována při 37 °C 3 h.

3. Po inkubaci byla deska ochlazena ledem a propuštěna skrz DEAD-Filtermat s použitím buňkového sklízecího stroje. Filtr byl promyt 4,5 % Na₂HPO₄ (20 sekund) a H₂0 (10 sekund) .

4. Filtr byl sušen při 95 °C 15 minut.

5. 10 ml scintilátoru bylo' přidáno a hermeticky uzavřeno.

6. Radioaktivita byla změřena LKB Beta Plate scintilační spektroskopií.

7. RT aktivita (jedn./min/ml) byla vypočtena jako průměrná hodnota tří otvorů.

(4) RT aktivita bez přítomnosti léčiva byla -vypočtena jako 100% virová replikace a poté byla stanovena 50% inhibiční koncentrace (EC50) vzorku z RT aktivity každého otvoru jak je uvedeno v Tabulce 2.

Tabulka 2

Výsledky EC₅₀ jednotka ng/ml

	HIV-1 NL432	HIV-2 ROD	SIVmac	SIVagm
1-16	57	35	57	44
Zidovudin	0,51	0,28	0,35	0,36
Stavudin	6,1	4,1	3,4	4,5
Lamivudin	8,4	22	9,1	22

H φ < t ♦ • t

Jak vyplývá z Tabulky 2, sloučenina 1-16, zidovudin, stavudin a lamivudin vykazují antivirovou aktivitu proti

HIV-1, HIV-2, SIVmac a SIVagm. Anti-retrovirové činidlo, které obsahuje sloučeninu obecného vzorce I je účinné léčivo nejen pro HIV-1, ale i HIV-2 a SIV infekce.

• * · · fr » · *

Inhibiční efekt sloučenin a anti-retrovirových aktivních složek předkládaného vynálezu pro FIV integrázu byla stanovena analýzou popsanou níže.

(1) 5 sériových záhybů se zředěným vzorkem bylo umístěno na mikrotitrační desku s 24 otvory Feline T-cell lineš (MYA-1 buňky: 4 χ 10⁵ buněk/otvor) a kočičí imunodeficitní virus (FIV (tm)-2 kmen: 3000 jedn./min/otvor) byl přidán do každého otvoru. Buňky byly kultivovány s 1,5 ml RPMI média doplněného o 10% plodné hovězí sérum, 2 pg/ml polybrenu, 100 jednotek/ml lidské rekombinované IL-2 a 50 μΜ 2-merkaptoethanolu v CO₂ inkubátoru při 37 °C

1. Příprava FIV (tm)-2 viru:

FIV (tm)-2 byl infekován MYA-1 buňkami (1 χ 10⁶ buněk). Buňky byly kultivovány s 10 ml RPMI média doplněného o 10% plodného hovězího séra, 2 pg/ml polybrenu, 100 jednotek/ml lidské rekombinované IL-2 a 50 μΜ 2-merkaptoethanolu v CO₂inkubátoru při 37 °C. Každý 1 až 2 den byly buňky odděleny od kapaliny centrifugaci a kultivace pokračovala v novém kultivačním médiu. Každý supernatant byl filtrován skrz 0,45 μιη filtr, byla změřena RT aktivita a virus byl uložen při -80 °C jako kompletní virus.

. Každý 1 nebo 2 den bylo v supernatantu změřeno množství viru RT aktivitou (stejným jako v experimentálním Příkladu 2.

• · · · · · • · • · · • · · • · · » · « . · · · ·· · · · · ·· · ·

3. Byla použita data 10 dní po infikování. RT aktivita bez přítomnosti léčiva byla vypočtena jako 100% virová replikace a poté byla stanovena50% inhibiční koncentrace (EC50) vzorku z RT aktivity každého otvoru jak je uvedeno v Tabulce 3.

Tabulka 3

Výsledky EC₅₀ jednotka ng/ml

	EC50
1-16	300
Zidovudin	48

Jak vyplývá z Tabulky 3, sloučenina 1-16 vykazuje antivirovou aktivitu nejenom proti HIV-1 a SIV, ale i FIV. Anti-retrovirové činidlo, které obsahuje sloučeninu obecného vzorce I je účinné léčivo pro FIV infekce.

Srovnávací příklad 2

Inhibiční efekt aktivní složky každého lidského imunodeficitního viru proti lidskému imunodeficitnímu viru byl stanoven pomocí MTT analýzy popsané níže.

(1) Lidský T-kmen buněk Molt-4 klon 8 byl infikován HIV (HTLV-IIIBkmen) a byl kultivován v RPMI-1640 médiu doplněném o 10% plodné hovězí sérum, byla změřena RT aktivita a poté byl virus uložen při -80 °C. Každá lidská aktivní složka anti-imunodeficitního viru byla zředěna na konstantní koncentraci v kultivačním médiu. Poté byly buňky umístěny do mikrotitrační desky s 96 otvory. Následovně bylo do mikrotitrační desky s 96 otvory umístěno 100 μΐ (3,5 χ 10⁴buněk) MT-4 buněčné suspenze a poté byl výše zmíněný supernatant obsahující HIV (50 μΐ, 60 pfu (povlak tvořící jednotka)) zředěn kultivačním médiem byl přidán do otvorů mikrotitrační desky.

• · (2) Po kultivaci při 37 °C během 5 dní v CO2 inkubátoru bylo do všech otvorů přidáno 30 pl 3-(4,5-dimethylthiazol-3-yl)-~

2,5-difenyltetrazolidinium bromidu (MTT) (5 mg/ml) a PBS a poté byly buňky inkubovány 1 h.

Živé buňky redukovány MTT a formazan byl vysrážen. 150 μΐ buněčného supernatantu bylo odstraněno ze všech otvorů a poté bylo 150 μΐ lysátu (10% triton X-100 a 0,4% (objemově) HCI obsahující isopropanol) přidáno a formazan byl eluován na deskovítý šejkr. Formazan byl změřen při OD 560 nm a 690 nm (srovnávací vlnová délka) pomocí Microplate reader. Výsledky byly porovnány s referenčními. EC50 byla koncentrace sloučenin, která inhibovala 50 % buněk poškozených virem. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 4.

Tabulka 4

Inhibiční aktivita proti lidskému viru

Aktivní složka anti-lidského viru	EC₅₀ (ng/ml)
Zidovudin	1,8
Didanosine	640
Zalcitabin	17
Lamivudin	38
Stavudin	50
Abakavir	630
Capravirin	1,4
Nevirapin	20
Lovirid	11
Delavirdin	12
Emívirin	4,5
Efavirenz	0,58
Saquinavir	3,7
Indinavir	14
Ritonavir	26
Nelfinavir	10

• · • · • · « «

Příklad experimentu

Testovaný vzorek (léčivo 1 a léčivo 2) byl zředěn kultivačním médiem (10% FCS obsahující RPMI 1640 médium) k přípravě odpovídající konečné koncentrace testovaných vzorků. Zředěné léčivo 1 bylo umístěno do mikrotitrační desky s 96 otvory. Poté bylo zředěné léčivo 2 (50 μΐ) pipetováno do otvorů. Celkový objem byl 100 μΐ. V otvorech pro buněčnou kontrolu (CC) bylo umístěno 100 μΐ kultivačního média a do otvorů virové kontroly (VC) bylo přidáno 50 μΐ kultivačního média. Byly připraveny tři desky ve smyslu změřit synergický efekt (trojitý experiment).

MT-4 buňky (50 μΐ) byly zředěny na vhodnou koncentraci (4 x 10⁵/ml) a výše zmíněné kultivační médium bylo přidáno do každého otvoru mikrotitrační desky s 96 otvory, obsahujícími výše zmíněné testované vzorky a deska byla mixována šejkrem. Poté byly buňky inkubovány v CO₂ inkubátoru 1 h.

HIV-1 (50 μΐ) zředěný na vhodnou koncentraci (moi=0,01) výše zmíněným kultivačním médiem byl přidán do každého otvoru mikrotitrační desky obsahující výše zmíněné testovací vzorky a MZ-4 buňky, deska byla mixována šejkrem a poté kultivována v C0₂ inkubátoru 5 dní.

Po 5 dnech bylo 30 μΐ MTT roztoku (MTT byl rozpuštěn s PBS na 5 mg/ml a filtrován skrz 0,22 pm filtr a sterilizován) přidáno do každého otvoru mikrotitrační desky a poté byly buňky kultivovány v C0₂ inkubátoru 1 h. 150 μΐ supernatantu bylo odstraněno z každého otvoru bez odstranění buněk. 150 μΐ lysátu (500 ml 2-propanolu, 50 ml Triton X a 2 ml HCI byly řádně smíšeny) bylo přidáno do všech otvorů a poté byla deska mixována šejkrem dokud nebyly buňky rozpuštěny. Absorbance mixované mikrotitrační desky s 96 otvory byly měřena při dvou vlnových délkách, 560 nm a 690 nm

pomocí Mikrotiter plate reader. Pomocí MacSynergy II soft Synergy Volume (μΜ2%, 99,9% důvěryhodnost) byl u dvou druhů léčiv stanoven synergický efekt. Způsob stanovení synergického efektu za použití MacSynergy II soft Synergy Volume je popsáno v 1. Antiviral Research, 14, (1990), 181 až 206, 2. Antimicrob. Agents. Chemother, (1997), 2165 až 2172 apod.

Obzvláště je upřednostněno, pokud je synergický efekt větší než 100 μΜ2%.

Tabulka 5

	Synergický objem (99,9¾ důvěryhodnost)
Kombinace(léčivo 1/léčivo 2)	Příklad 1	Příklad 2	Příklad 3	Příklad 4
Sloučenina 1-16/Didanosin	234	214	159	254
Sloučenina I-16/Lamivudin	200	193	365	181
Sloučenina I-16/Nevirapin	68	245	257	243
Sloučenina I-16/Capravirin	138	221	166	142
Sloučenina I-16/Nelfinavir	129	283	136	243
Sloučenina 1-16/Sloučenina 1-16	nebylo stan.	nebylo stan.	43	62

Dále, například graf synergického efektu mezi sloučeninou 1-16 a zidovudinem je uveden na Obr. 1.

Průmyslová využitelnost

Kombinace propenonových derivátů a anti-retrovirových aktivních složek může účinně inhibovat vzrůst replikace retroviru každým léčivem, které vykazuje synergický efekt proti retroviru. Lékařská činidla obsahující propenonové deriváty a anti-retrovirové aktivní složky předkládaného vynálezu jsou vynikajícími anti-retrovirovými činidly.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Anti-retrovirové činidlo, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce I

A-C-C=C-B ¹¹ H ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny,tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.
2. Anti-retrovirové činidlo podle nároku 1, vyznačující s e t í m, že anti-retrovirová aktivní složka vykazuje synergický efekt v kombinaci se sloučeninou obecného chemického vzorce I, tautomerem, proléčivem, farmaceuticky přijatelnou solí nebo jejím solvátem.
3. Anti-retrovirové činidlo podle nároku 1 nebo 2, vyznačující s e t í m, že anti-retrovirová aktivní složka je jedna s výjimkou integrázového inhibitoru.
4. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že anti-retrovirová aktivní složka je reverzní transkriptázový inhibitor nukleosidového typu, nenukleosidový typ reverzního transkriptázového inhibitoru a/nebo proteázový inhibitor.
5. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že anti-retrovirová aktivní složka je zidovudin, didanosin, zalcitabin, stavudin, lamivudin, abacavir, tenofovir, tenofovir disoproxil, nevirapin, delavirdin, emivirin, lovirid, efavirenz, trovirdin, capravirin, TIBO, talviralin, UC781, saquinavir, nelfinavir, ritonavir, indinavir, KNI-272, lopinavir, VX-478, VB-19026, BILA-2011-BS, A-77003, A-80987, DMP-323 a/nebo XM-450.
6. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že anti-retrovirová složka je zidovudin, lamivudin, stavudin, nevirapin, capravirin a/nebo nelfinavir.
7. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že A ze sloučeniny obecného vzorce I je případně substituovaný furyl, thienyl nebo případně substituovaný pyridyl; a B ze sloučeniny obecného vzorce I je případně substituovaný thiazolyl, tetrazolyl, pyridyl nebo oxazolyl.
8. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že A ze sloučeniny obecného vzorce I je 5-(4-fluorbenzyl)furan-2-yl; a B ze sloučeniny obecného vzorce I je líT-1,2,4-triazol-3-yl.
9. Anti-retrovirové činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, význačující se tím, že retrovirus je lidský imunodeficitní virus.
10. Farmaceutické činidlo vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu, obecného chemického vzorce I

4 4 4 · · ·

A-C-C=C~B ¹¹ Η ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát, která vykazuje aktivitu, která podporuje antiretrovirovou aktivitu anti-retrovirové aktivní složky.
11. Způsob prevence nebo ošetření rerovirové infekce, vyznačují cí se tím, že obsahuje simultánní nebo kontinuální podání sloučeniny obecného chemického vzorce I

ACCCB ¹¹ H ¹

O OH (i) přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek.
12. Použití sloučeniny obecného chemického vzorce I

A-C-OC-B ¹¹ H ¹

O OH (i) • * · β přičemž A je případně substituovaný heteroaryl; B je případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaný aryl; za předpokladu, že případy, kdy A a/nebo B jsou případně substituované indol-3-yly jsou vyloučeny; tautomer, proléčivo, farmaceuticky přijatelná sůl nebo její solvát a jeden nebo více různých typů anti-retrovirových aktivních složek pro přípravu léčiva pro ošetření nebo prevenci retrovirové infekce.